JP5490343B2 - Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター - Google Patents
Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター Download PDFInfo
- Publication number
- JP5490343B2 JP5490343B2 JP2001530472A JP2001530472A JP5490343B2 JP 5490343 B2 JP5490343 B2 JP 5490343B2 JP 2001530472 A JP2001530472 A JP 2001530472A JP 2001530472 A JP2001530472 A JP 2001530472A JP 5490343 B2 JP5490343 B2 JP 5490343B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- jnk
- tat
- sequence
- peptides
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/16—Central respiratory analeptics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/10—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a tag for extracellular membrane crossing, e.g. TAT or VP22
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Obesity (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
Description
本発明は、概して、プロテインキナーゼインヒビター、そしてより詳細には、プロテインキナーゼc−Junアミノ末端キナーゼのインヒビターに関する。
c−Junアミノ末端キナーゼ(JNK)は、マイトゲン活性化タンパク質(MAP)キナーゼのストレス活性化グループのメンバーである。これらのキナーゼは細胞の増殖および細胞の分化の制御、そしてより一般的には、環境刺激への細胞の応答に関連している。JNKシグナルの伝達経路は、細胞表面のレセプターのいくつかの分類における約束により、環境ストレスに応答して活性化される。これらのレセプターとして、サイトカインレセプター、セルペンチンレセプター、およびレセプターチロシンキナーゼが挙げられ得る。哺乳動物細胞において、JNKは、オンコジーンの形質転換として、このような生物学的プロセスおよび環境ストレスに対する適応応答を媒介することに関係している。JNKはまた、免疫細胞の成熟および分化を含む免疫反応を調節すること、同様に免疫系による破壊として同定される細胞におけるプログラムされた細胞死をもたらすことに関連している。
本発明は、JNKタンパク質の有効なインヒビターであるペプチドの発見に部分的に基いている。JNKペプチドインヒビターとして本明細書中で言及されるこのペプチドは、c−Junアミノ末端キナーゼ(JNK)の下流の細胞増殖の効果を減少する。
本発明は、細胞透過性のペプチドの発見に一部基き、このペプチドは、c−Junアミノ末端キナーゼ(JNK)の活性化されたシグナル伝達経路を阻害する。これらのペプチドは、JNKインヒビターペプチドとして本明細書中でいわれる。さらに、本発見は、JNKシグナルと関連する病態生理学を処置するための方法および薬学的組成物を提供する。
ひとつの局面において、本発明は、JNKインヒビターペプチドを提供する。用語「ペプチド」は、特定の長さを意味しない。いくつかの実施形態において、JNKインヒビターペプチドは、280個アミノ酸未満であり、例えば、150、100、75、50、35または25個アミノ酸長以下である。種々の実施形態において、JNK結合インヒビターペプチドは配列番号1〜6の1以上のアミノ酸配列を含む。ひとつの実施形態において、JNKインヒビターペプチドは、JNKに結合する。別の実施形態において、このペプチドは、少なくとも1つのJNK活性化転写因子(例えば、c−Jun、ATF2またはElk1)の活性化を阻害する。
Stockton Press、NY.を参照のこと。
別の局面において、本発明は、第1のドメインおよび第2のドメインを含むキメラペプチドを提供する。第1のドメインは、輸送配列を含むが、第2のドメインは、第1のドメインに共有結合(例えば、ペプチド結合)で連結されたJNKインヒビター配列を含む。第1のドメインおよび第2のドメインは、ペプチドにおいて任意の順序で生じ得、そしてこのペプチドは、各ドメインを1つ以上含み得る。
JNKインヒビターペプチド(JNKインヒビターペプチド(例えば、表1に示されるアミノ酸配列を含むペプチド)を含むキメラペプチドを含む)は、ペプチドまたはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログと同様に、免疫原として利用されて、これらのペプチド成分を免疫特異的に結合する抗体が生成され得る。そのような抗体としては、例えば、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、単鎖、FabフラグメントおよびFab発現ライブラリーが挙げられる。特定の実施形態において、ヒトペプチドに対する抗体が開示される。別の特定の実施形態において、JNKインヒビターペプチドのフラグメントは、抗体産生の免疫原として使用され得る。当該分野において公知の種々の手順は、JNKインヒビターペプチド、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログに対するポリクローナルまたはモノクローナル抗体の生成のために使用され得る。
本発明において含まれるのはまた、被験体に、生物学的に活性な治療化合物(本明細書において「治療剤」(「Therapeutics」)と以下で呼ぶ)を投与することによって、被験体におけるJNK活性に伴う細胞増殖障害を処置する方法である。その被験体は、例えば、任意の哺乳動物(例えば、ヒト、霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ)であり得る。
本発明のペプチドおよび抗体は、アッセイ(例えば、免疫アッセイ)において利用されて、JNKもしくはJNKインヒビターペプチドの異常レベルによって特徴付けられる状態、疾患および障害を診断(prognose)、診断(diagnose)、またはモニターをし得るか、またはそれらの処置をモニターし得る。「異常レベル」とは、身体の罹患していない部分から、またはその障害を有しない被験体からの類似のサンプルにおいて存在するレベルに比較してサンプルにおいて増加または減少したレベルを意味する。免疫アッセイは、免疫特異的な結合が生じ得る条件で抗体と患者に由来するサンプルとを接触させる工程、、およびついでその抗体による任意の免疫特異的結合の量を検出または測定する工程を包含する方法によって行われ得る。特定の実施形態において、JNKインヒビターペプチドに対して特異的な抗体を使用して、JNKまたはJNKインヒビターの存在について、患者からの組織または血清のサンプルを分析し得る。ここで、異常レベルのJNKまたはJNKインヒビターペプチドは、罹患した状態の指標である。利用され得る免疫アッセイとしては、以下が挙げられるがそれらに限定されない:ウェスタンブロット、放射免疫アッセイ(RIA)、酵素結合イムノソルベントアッセイ(ELISA)、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集素アッセイ、蛍光免疫アッセイ、補体固定アッセイ、免疫放射測定アッセイ、およびプロテインA免疫アッセイなどのような競合アッセイ系および非競合アッセイ系。
本発明は、抗JNKインヒビターペプチド抗体、および必要に応じて標識された、抗体に対する結合パートナーを含む1つ以上の容器を備える、診断用途または治療用途のキットをさらに提供する。抗体に取り込まれた標識としては、以下が挙げられるがそれらに限定されない:化学発光部分、酵素部分、蛍光部分、呈色部分、または放射性部分。別の特定の実施形態において、JNKインヒビターペプチドをコードするかまたは代替的に相補的である改変されたかまたは改変されていない核酸、および必要に応じてその標識された、その核酸に対する結合パートナーを含む、1つ以上の容器を含む、診断用途のためのキットもまた提供される。代替の特定の実施形態において、そのキットは、1つ以上の容器中に、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR;例えば、以下を参照のこと:Innis,et al.,1990.PCR PROTOCOLS,Academic Press,Inc.,San Diego,CA)、リガーゼ連鎖反応、サイクリックプローブ反応など、または当該分野で公知の他の方法のための増幅プライマーとして働き得る、一対のオリゴヌクレオチドプライマー(例えば、各々は6−30ヌクレオチド長)を含み得る。このキットは、必要に応じて、診断標準またはアッセイにおけるコントロールとして使用するために、精製されたJNKインヒビターペプチドまたはその核酸の所定の量をさらに含み得る。
(実施例1:JNKインヒビターペプチドの同定)
JNKとの効率的な相互作用のために重要なアミノ酸配列を、公知のJBD間の配列アラインメントにより同定した。IB1(配列番号17)、IB2(配列番号18)、c−Jun(配列番号19)、およびATF2(配列番号20)のJBD間の配列比較は、弱く保存された8アミノ酸配列を規定した(図1A)。IB1およびIB2のJBDは、JNKとの結合においてc−JunもしくはATF2より約100倍効率的であるので(Dickensら、Science 277:693(1997)、IB1とIB2との間で保存された残基が、最大結合を付与するために重要でなければならないことが推論された。IB1とIB2のJBD間の比較は、2つの配列間で高度に保存されている7および3つのアミノ酸の2つのブロックを規定した。これらの2つのブロックは、IB1(配列番号1)内の23アミノ酸およびIB2(配列番号2)内の21アミノ酸のペプチド配列内に含まれている。これらの配列は、図1Bに示され、IB2配列内のダッシュは、保存された残基をアラインするための配列内のギャップを示す。
JNKインヒビター融合タンパク質を、JBD23のC末端またはIB2(JBD21)のJBD由来の21アミノ酸配列を、HIV−TAT48-57(Vivesら、J.Biol.Chem.272:16010(1997))由来のN末端10アミノ酸長キャリアペプチドへ、2つのプロリン残基からなるスペーサーを介して、共有結合することにより合成した。このスペーサーを、可撓性を最大とするために、そして所望でない二次構造の変化を防止するために、使用した。図1Cに示されるように、これらの調製物を、L−TAT(配列番号7)、L−TAT−IB1(配列番号11)、およびL−TAT−IB2(配列番号2)と、それぞれ命名した。全てのDレトロインベルソペプチドTAT融合ペプチドもまた合成し、そしてD−TAT(配列番号8)およびD−TAT−IB1(配列番号14)と、それぞれ命名した。全てのDおよびLペプチドを古典的なFモック合成により生成し、そして質量分析によりさらに分析した。それらを、HPLCにより最終的に精製した。プロリンスペーサーの効果を決定するために、2つのプロリンを有するもの、2つのプロリンを有さないものという2つのタイプのTATペプチドを生成した。その2つのプロリンの付加は、TATペプチドの細胞内への侵入または細胞内での局在化を改変するようではなかった。
次いで、JNKの生物学的活性に対するIB1の23アミノ酸長のJBD配列の効果を研究した。23アミノ酸の配列を、グリーン蛍光タンパク質(GFP−JBD23構築物)のN末端に結合し、そしてこの構築物の、IL−1βにより誘導される膵臓β細胞アポトーシスに対する効果を評価した。図3を参照のこと。アポトーシスのこの態様は、以前にJBD1-280でのトランスフェクションによってブロックされることが示されたのに対して、ERK1/2またはp38の特異的インヒビターは、保護しなかった。Ammendrupら(前出)を参照のこと。
TAT、TAT−IB1、およびTAT−IB2ペプチド(「TAT−IBペプチド」)のLおよびD立体異性体形態の細胞へ侵入する能力を評価した。
その標的転写因子のJNK媒介リン酸化に対するペプチドの効果を、インビトロで研究した。組換えおよび非活性化JNK1、JNK2、およびJNK3を、転写および翻訳ウサギ網状赤血球溶解物キット(Promega)を使用して生成し、そしてc−JUN、ATF2、およびElk1を単独または基質としてのグルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)に融合させて用いた固相キナーゼアッセイにおいて使用した。用量応答研究を、L−TAT、L−TAT−IB1、またはL−TAT−IB2ペプチド(0〜25μM)を、反応緩衝液(20mMTris酢酸、1mM EGTA、10mM p−ニトロフェニルホスフェート(pNPP)、5mM ピロリン酸ナトリウム、10mM p−グリセロホスフェート、1mM ジチオスレイトール)において20分間、組換えJNK1、JNK2、またはJNK3キナーゼと混合した。次いで、そのキナーゼ反応物を10mM MgCl2および5μCi33P−γ−dATPおよび1μgのGST−Jun(アミノ酸1〜89)、GST−AFT2(アミノ酸1〜96)またはGST−ELK1(アミノ酸307〜428)の添加により開始した。GST融合タンパク質を、Stratagene(LaJolla,CA)から購入した。10μLのグルタチオンアガロースビーズもまた、その混合物に添加した。次いで、反応生成物を、変性10%ポリアクリルアミドゲル上で、SDS−PAGEによって分離した。ゲルを乾燥し、そして引き続いてX線フィルム(Kodak)に暴露した。JNKによるc−Jun、ATF2、およびElk1リン酸化のほとんど完全な阻害が、2.5μM程度のTAT−IBペプチドの用量で観察された。しかし、顕著な例外は、Elk1のJNK3リン酸化のTAT−IB阻害が存在しないことであった。全体として、TAT−IB1ペプチドは、それらの標的転写因子のElk1のJNKファミリーのリン酸化を阻害するにおいて、わずかにTAT−IB2に対して優れているようであった(図4Aを参照のこと)。
ストレス性刺激によって活性化されるJNKに対するL−TAT、L−TAT−IB1、またはL−TAT−IB2ペプチドの効果を、JNKをUV光照射したHeLa細胞またはIL−1β処理したβTC細胞から引きおろすために、GST−Junを使用して評価した。βTC細胞を、以下に記載のように培養した。HeLaを、10%ウシ胎仔血清、100μg/mLのストレプトマイシン、100ユニット/mlのペニシリン、および2mM グルタミンを補充したDMEM培地において培養した。細胞抽出調製物のために使用する1時間前に、βTC細胞を、上記のようにIL−1βで活性化した一方、HeLa細胞を、UV光(20J/m2)によって活性化した。細胞抽出物を、コントロール、UV光照射HeLa細胞、およびIL−1β処置βTC−3細胞から、溶解緩衝液(20mM Tris酢酸、1mM EGTA、1%TritonX−100、10mM p−ニトロフェニルホスフェート、5mM ピロリン酸ナトリウム、10mM βグリセロホスフェート、1mM ジチオスレイトール)中の細胞培養物を引っかき取ることによって調製した。細片を、SS34 Beckmanローター中での15,000rpmで5分間の遠心分離によって除去した。100μgの抽出物を、1時間、室温で1μgのGST−jun(アミノ酸1-89)および10μLのグルタチオンアガロースビーズ(Sigma)とともにインキュベートした。引っかき用緩衝液での4回の洗浄の後、そのビーズをL−TAT、L−TAT−IB1またはL−TAT−IB2ペプチド(25μM)を補充した同じ緩衝液中で20分間再懸濁した。次いで、キナーゼ反応を10mM MgCl2および5μCiの33P−γ−dATPの添加により開始し、そして30℃で30分間インキュベートした。次いで、反応生成物をSDS−PAGEによって変性10%ポリアクリルアミドゲル上で分離した。ゲルを乾燥し、そして引き続いてX線フィルム(Kodak)に暴露した。TAT−IBペプチドは、効率的に、これらの実験において、活性化JNKによるc−Junのリン酸化を防止した(図6を参照のこと)
(実施例7:TAT−IBペプチドによるc−JUNリン酸化のインビボ阻害)
細胞透過性ペプチドがインビボでJNKシグナリングをブロックし得るかどうかを決定するため、本発明者らは異種GAL4系を使用した。HeLa細胞(上記のように培養)を、GAL4 DNA結合ドメインに連結したc−Jun(アミノ酸1−89)の活性化ドメインを含むGAL−Jun発現構築物(Stratagene)と共に5×GAL−LUCレセプターベクターで同時トランスフェクトした。JNKの活性化を、直ぐ上流のキナーゼMKK4およびMKK7(Whitmarshら、Science 285:1573(1999)を参照)を発現するベクターの同時トランスフェクションにより達成した。簡潔には、3×105細胞を、製品の指示書に従ってDOTAP(Boehringer Mannheim)を使用して、3.5cmディッシュにおいて、プラスミドでトランスフェクトした。GAL−Jうnを含む実験には、20ngのプラスミドを、1μgのレセプタープラスミドpFR−Luc(Stratagene)および0.5μgのMKK4発現プラスミドもしくはMKK7発現プラスミドのいずれかでトランスフェクトした。トランスフェクションの3時間後、細胞培地を交換し、そしてTAT、TAT−IB1およびTAT−IB2ペプチド(1μM)を加えた。ルシフェラーゼ活性を、16時間後に、タンパク質含量に対して正規化した後でPromegaの「Dual Reporter System」を使用して測定した。図5に示されるように、TAT−IB1ペプチドおよびTAT−IB2ペプチドの添加が、共に、JNKのMKK4媒介活性化後およびMKK7媒介活性化後のc−Jun活性化をブロックした。HeLa細胞はJNK1イソフォームおよびJNK2イソフォームの両方を発現するがJNK3は発現しないので、本発明者らは細胞をJNK3でトランスフェクトした。再び、2つのTAT−IBペプチドはc−JunのJNK2媒介活性化を阻害した。
本発明者らは、IL−1βにより誘発される膵臓β細胞アポトーシスの促進に対するL−TAT−IBペプチドの効果を調べた。βTC−3細胞培養物を、30分間1μMのL−TAT−IB1ペプチドまたはL−TAT−IB2ペプチドのいずれかと共に、続いて10ng/mlのIL−1βと共にインキュベートした。ペプチド(1μM)の第2の添加を24時間後に行った。アポトーシス細胞を、IL−1βとの2日間のインキュベーション後に、Propidium Iodide(赤く染色された細胞が死細胞である)およびHoechst33342(青く染色された細胞が、インタクトな形質膜を有する細胞である)核染色を使用して計数した。図5に示されるように、TAT−IBペプチドの添加により、IL−1βの存在下で2日間培養されたβTC−3細胞のIL−1β誘導アポトーシスが阻害された。
本発明のペプチドは、天然のタンパク質分解を妨げるために逆に合成された全D体アミノ酸ペプチド(すなわち、全Dレトロ−インベルソペプチド)であり得る。本発明の全Dレトロ−インベルソペプチドは、ネイティブのペプチドと同様な機能的特性を有するペプチドを提供する。ここで、成分アミノ酸の側鎖はネイティブペプチドのアラインメントに対応するが、プロテアーゼ耐性骨格を保持する。
ペプチドヘテロ結合体を含むD−TAT−IBレトロ−インベルソについて、ネイティブのL体アミノ酸アナログと比較する場合、実施例5に示すように、ネイティブなプロテアーゼによる破壊からのD−TAT−IBペプチドの保護に起因して、長期生物学的活性が予測される。
JNKはまた電離放射線による活性化される。TAT−IBペプチドが照射誘導JNK損傷に対して保護を提供するかどうかを決定するため、図10に示されるように、「WiDr」細胞に、D−TAT、L−TAT−IB1またはD−TAT−IB1ペプチド(照射の30分前に1μMを添加)の存在下または非存在下で照射した(30Gy)。コントロール細胞(CTRL)は照射しなかった。細胞を、48時間後に、上記のように、PIおよびHoechst33342染色により分析した。SEMを示す(n=3)。L−TAT−IB1ペプチドおよびD−TAT−IB1ペプチドは共に、このヒト結腸ガン細胞株において照射誘導アポトーシスを妨げ得た。
TAT−IBペプチドの放射線防護効果を決定するため、C57 Bl/6マウス(2〜3ヶ月齢)に、Phillips RT250 R線を、0.74Gy/分の線量率(17mA、0.5mm Cuフィルター)で照射した。照射の30分前に、動物に、TAT、L−TAT−IB1およびD−TAT−IB1ペプチドのいずれか(1mM溶液30μl)をi.p.注射した。簡潔には、マウスに以下のとおり照射した:マウスを小さなプラスチック箱に、頭が外に出るように横たえて入れる。動物を背中が照射装置の下になるように置き、首を小さなプラスチックトンネル中に固定して頭部を正確な位置に維持した。体部を鉛で保護した。照射前は、マウスを標準的なペレットマウス飼料で飼育したが、照射後は、マウスを、毎日新しくした半液状飼料で飼育した。
Parkinsら(Parkinsら、Radiotherapy & Oncology,1:165−173,1983)により開発されたスコア付けシステムに従って、2人の独立した観察者によりスコア付けした。ここで、紅斑の状態ならびに浮腫、剥離および滲出の存在について値を見積もった。さらに、紅斑/浮腫の状態の各記録の前に動物の体重を測定した。
AP−1二重化標識プローブ(5’−CGC TTG ATG AGT CAG CCG GAA−3’)を用いてゲルシフト法を行った。HeLa細胞核抽出物を、示されるように、5ng/mlのTNF−αで1時間処理したかまたは処理しなかった。TATペプチドおよびL−TAT−IB1ペプチドを、TNF−αの30分前に添加した。特定のAP−1 DNA複合体ゲルの部分(非標識特異的および非特異的競合物との競合実験により示される)のみを示す。L−TAT−IB1ペプチドは、TNF−αの存在下でAP−1 DNA結合複合体の形成を減少させる(図11を参照)。
本発明の特定の実施形態の上記詳細な説明から、独特な細胞透過生物活性ペプチドが記載されていることが明らかであるはずである。特定の実施形態が本明細書で詳細に開示されているが、これは、例示を目的としただけで、本願発明の範囲を限定す意図はない。特に、種々の置換、変更、および改変が、本発明に対して、本発明の精神および範囲を逸脱することなくなされ得ることは、本発明者らにより企図されている。
Claims (11)
- 共有結合によって連結された第1のドメインおよび第2のドメインを含むキメラペプチドであって、ここで、該第1のドメインが輸送配列を含み、該第2のドメインがJNKインヒビター配列を含み、そして、該輸送配列は配列番号8のアミノ酸配列に従うD−レトロ−インベルソ−鏡像異性アミノ酸配列であり、該JNKインヒビター配列は、配列番号3のアミノ酸配列に従うD−レトロ−インベルソ−鏡像異性アミノ酸配列である、キメラペプチド。
- 前記輸送配列が、前記ペプチドの細胞性取り込みを増大させる、請求項1に記載のペプチド。
- 前記輸送配列が、前記ペプチドの核局在化を指向する、請求項1に記載のペプチド。
- 前記JNKインヒビター配列が、JNKに結合する、請求項1に記載のペプチド。
- 前記JNKインヒビター配列が、少なくとも1つのJNK標的化転写因子の活性化を阻害する、請求項1に記載のペプチド。
- JNK標的化転写因子が、c−Jun、ATF2、およびElk1からなる群より選択される、請求項5に記載のペプチド。
- 前記JNKインヒビター配列が、JNK発現細胞中に導入される場合、JNK誘導効果を変える、請求項1に記載のペプチド。
- 請求項7に記載のペプチドであって、ここで、前記JNK誘導効果が、再狭窄、腫瘍形成形質転換、免疫細胞の成熟および分化、炎症誘発性サイトカイン、放射線治療において使用されるイオン化放射、紫外線光、フリーラジカル、DNA損傷因子、化学療法薬剤、虚血、再灌流、低酸素症、低体温症、過温症、アポトーシスならびにストレス性刺激に対する応答からなる群より選択される、ペプチド。
- 配列番号14のアミノ酸配列に従うD−レトロ−インベルソ−鏡像異性アミノ酸配列からなるペプチド。
- 請求項1〜9のいずれかに記載のペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
- 被験体でのJNKの活性化に関連する病態生理学的状態を処置するための医薬の製造における、請求項1〜9のいずれかに記載のキメラペプチドの使用であって、ここで、該病態生理学的状態が、再狭窄、腫瘍形成形質転換、免疫細胞の成熟および分化、炎症誘発性サイトカイン、放射線治療において使用されるイオン化放射、紫外線光、フリーラジカル、DNA損傷因子、化学療法薬剤、虚血、再灌流、低酸素症、低体温症、過温症、アポトーシスならびにストレス性刺激に対する応答からなる群より選択される、使用。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US15877499P | 1999-10-12 | 1999-10-12 | |
US60/158,774 | 1999-10-12 | ||
US09/503,954 US6610820B1 (en) | 1999-10-12 | 2000-02-14 | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway |
US09/503,954 | 2000-02-14 | ||
PCT/IB2000/001538 WO2001027268A2 (en) | 1999-10-12 | 2000-10-12 | Cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway |
Related Child Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007227135A Division JP2008024710A (ja) | 1999-10-12 | 2007-08-31 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
JP2011116398A Division JP2011155990A (ja) | 1999-10-12 | 2011-05-24 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2003511071A JP2003511071A (ja) | 2003-03-25 |
JP2003511071A5 JP2003511071A5 (ja) | 2007-10-18 |
JP5490343B2 true JP5490343B2 (ja) | 2014-05-14 |
Family
ID=26855384
Family Applications (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001530472A Expired - Lifetime JP5490343B2 (ja) | 1999-10-12 | 2000-10-12 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
JP2007227135A Pending JP2008024710A (ja) | 1999-10-12 | 2007-08-31 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
JP2011116398A Withdrawn JP2011155990A (ja) | 1999-10-12 | 2011-05-24 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
JP2013015111A Withdrawn JP2013081479A (ja) | 1999-10-12 | 2013-01-30 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
JP2015168555A Withdrawn JP2015221833A (ja) | 1999-10-12 | 2015-08-28 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
Family Applications After (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007227135A Pending JP2008024710A (ja) | 1999-10-12 | 2007-08-31 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
JP2011116398A Withdrawn JP2011155990A (ja) | 1999-10-12 | 2011-05-24 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
JP2013015111A Withdrawn JP2013081479A (ja) | 1999-10-12 | 2013-01-30 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
JP2015168555A Withdrawn JP2015221833A (ja) | 1999-10-12 | 2015-08-28 | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US6610820B1 (ja) |
EP (5) | EP1895005B1 (ja) |
JP (5) | JP5490343B2 (ja) |
AT (3) | ATE411388T1 (ja) |
AU (1) | AU784845B2 (ja) |
CA (1) | CA2387184C (ja) |
CY (2) | CY1110422T1 (ja) |
DE (1) | DE60040564D1 (ja) |
DK (3) | DK1303600T3 (ja) |
ES (3) | ES2313906T3 (ja) |
HK (2) | HK1100958A1 (ja) |
PT (2) | PT1303600E (ja) |
WO (1) | WO2001027268A2 (ja) |
Families Citing this family (50)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6043083A (en) * | 1997-04-28 | 2000-03-28 | Davis; Roger J. | Inhibitors of the JNK signal transduction pathway and methods of use |
US20040082509A1 (en) * | 1999-10-12 | 2004-04-29 | Christophe Bonny | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway |
US8183339B1 (en) | 1999-10-12 | 2012-05-22 | Xigen S.A. | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway |
US20030108539A1 (en) * | 2000-02-14 | 2003-06-12 | Christophe Bonny | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway |
US20040220100A1 (en) * | 2000-07-21 | 2004-11-04 | Essentia Biosystems, Inc. | Multi-component biological transport systems |
ES2617692T3 (es) * | 2000-07-21 | 2017-06-19 | Revance Therapeutics, Inc. | Sistemas de transporte de agentes biológicos de múltiples componentes |
NZ529314A (en) * | 2001-05-11 | 2007-01-26 | Res Dev Foundation | Inhibitors of receptor activator of NF-kappaB and uses thereof |
WO2003057725A2 (en) * | 2002-01-09 | 2003-07-17 | University Of Lausanne | Cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway |
WO2004110360A2 (en) * | 2003-05-16 | 2004-12-23 | Acorda Therapeutics, Inc. | Proteoglycan degrading mutants for treatment of cns |
US20050234002A1 (en) * | 2004-01-23 | 2005-10-20 | Mourich Dan V | Antisense oligomers and methods for inducing immune tolerance and immunosuppression |
CA3031270A1 (en) * | 2004-03-03 | 2005-12-22 | Revance Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for topical diagnostic and therapeutic transport |
EP1729821B1 (en) | 2004-03-03 | 2013-07-17 | ReVance Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for topical application and transdermal delivery of botulinum toxins |
US9211248B2 (en) | 2004-03-03 | 2015-12-15 | Revance Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for topical application and transdermal delivery of botulinum toxins |
EP1769802A1 (en) * | 2004-06-29 | 2007-04-04 | St. Marianna University School of Medicine | NFκB ACTION INHIBITOR AND ANTIINFLAMMATORY AGENT, AND STEROID ACTION FORTIFIER |
US20100256041A1 (en) * | 2004-11-12 | 2010-10-07 | Christophe Bonny | Conjugate Molecule Compounds With Enhanced Cell Uptake Activity |
EP1656951A1 (en) * | 2004-11-12 | 2006-05-17 | Xigen S.A. | Conjugates with enhanced cell uptake activity |
NZ560799A (en) | 2005-03-03 | 2009-10-30 | Revance Therapeutics Inc | Compositions and methods for topical application and transdermal delivery of an oligopeptide |
EP1861112A4 (en) | 2005-03-03 | 2009-07-22 | Revance Therapeutics Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR TOPICAL APPLICATION AND TRANSDERMAL DELIVERY OF BOTULINUM TOXINS |
US20060223807A1 (en) * | 2005-03-29 | 2006-10-05 | University Of Massachusetts Medical School, A Massachusetts Corporation | Therapeutic methods for type I diabetes |
US8080517B2 (en) * | 2005-09-12 | 2011-12-20 | Xigen Sa | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway |
AU2012203529B2 (en) * | 2005-09-12 | 2016-01-07 | Xigen Inflammation Ltd. | Cell-Permeable Peptide Inhibitors of the JNK Signal Transduction Pathway |
WO2007031098A1 (en) * | 2005-09-12 | 2007-03-22 | Xigen S.A. | Cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway |
US8114581B2 (en) * | 2005-09-15 | 2012-02-14 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for detecting neoplastic cells |
CN101355962A (zh) * | 2005-11-17 | 2009-01-28 | 雷文斯治疗公司 | 减少非毒素蛋白质的肉毒杆菌毒素组合物和其局部施用及透皮递送方法 |
JPWO2008015841A1 (ja) * | 2006-08-02 | 2009-12-17 | 梅澤 喜夫 | キナーゼ阻害性融合タンパク質と医薬組成物 |
US8063012B2 (en) * | 2006-09-19 | 2011-11-22 | Phylogica Limited | Neuroprotective peptide inhibitors of AP-1 signaling and uses therefor |
US20100021502A1 (en) * | 2006-12-28 | 2010-01-28 | Waugh Jacob M | Compositions and Methods of Topical Application and Transdermal Delivery of Botulinum Toxins Stabililzed with Polypeptide Fragments Derived from HIV-TAT |
AU2007340162B2 (en) * | 2006-12-29 | 2013-08-01 | Revance Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of topical application and transdermal delivery of botulinum toxins stabilized with polypeptide fragments derived from HIV-TAT |
AU2007340158A1 (en) * | 2006-12-29 | 2008-07-10 | Revance Therapeutics, Inc. | Transport molecules using reverse sequence HIV-TAT polypeptides |
US8822409B2 (en) | 2007-06-20 | 2014-09-02 | Phylogica Limited | Compositions and uses thereof for the treatment of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and clinical disorders associated with therewith |
WO2009143864A1 (en) * | 2008-05-30 | 2009-12-03 | Xigen S.A. | Use of cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway for the treatment of chronic or non-chronic inflammatory digestive diseases |
WO2009143865A1 (en) * | 2008-05-30 | 2009-12-03 | Xigen S.A. | Use of cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway for the treatment of various diseases |
WO2010072228A1 (en) | 2008-12-22 | 2010-07-01 | Xigen S.A. | Novel transporter constructs and transporter cargo conjugate molecules |
EP2415478A4 (en) * | 2009-03-30 | 2013-01-16 | Santen Pharmaceutical Co Ltd | PROPHYLAXIS OR THERAPY AGENTS FOR KIDNEY DISEASES AND METHODS OF PREVENTING OR TREATING NURSE DISEASES, EACH OF THEM WITH A JNK (C-JUN-N-TERMINAL KINASE) -IMBING PEPTIDE, AND USE OF THE PEPTIDE |
US20120077753A1 (en) | 2009-06-25 | 2012-03-29 | Laxman Gangwani | Jnk inhibitors for use in treating spinal muscular atrophy |
JP5457813B2 (ja) * | 2009-12-16 | 2014-04-02 | ルネサスエレクトロニクス株式会社 | Adpll回路、半導体装置及び携帯情報機器 |
WO2011160653A1 (en) | 2010-06-21 | 2011-12-29 | Xigen S.A. | Novel jnk inhibitor molecules |
WO2012048721A1 (en) | 2010-10-14 | 2012-04-19 | Xigen S.A. | Use of cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway for the treatment of chronic or non-chronic inflammatory eye diseases |
AU2012344299A1 (en) * | 2011-11-30 | 2014-05-29 | Xigen Inflammation Ltd. | Use of cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway for the treatment of dry eye syndrome |
WO2013091670A1 (en) | 2011-12-21 | 2013-06-27 | Xigen S.A. | Novel jnk inhibitor molecules for treatment of various diseases |
WO2015197098A1 (en) | 2014-06-26 | 2015-12-30 | Xigen Inflammation Ltd. | New use of cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway for the treatment of various diseases |
WO2015197097A1 (en) | 2014-06-26 | 2015-12-30 | Xigen Inflammation Ltd. | New use for jnk inhibitor molecules for treatment of various diseases |
WO2014206427A1 (en) | 2013-06-26 | 2014-12-31 | Xigen Inflammation Ltd. | New use of cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway for the treatment of various diseases |
AU2014301631A1 (en) * | 2013-06-26 | 2015-08-27 | Xigen Inflammation Ltd. | New use of cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway for the treatment of various diseases |
EP3204031A2 (en) | 2014-10-08 | 2017-08-16 | Xigen Inflammation Ltd. | New use of cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway for the treatment of various diseases |
EP3234110B1 (en) | 2014-12-18 | 2024-02-28 | President and Fellows of Harvard College | METHODS FOR GENERATING STEM CELL-DERIVED ß CELLS AND USES THEREOF |
WO2018029336A1 (en) | 2016-08-12 | 2018-02-15 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for determining whether a subject was administered with an activator of the ppar beta/delta pathway. |
CA3040348A1 (en) | 2016-10-19 | 2018-04-26 | United States Government As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Compositions and methods for treating cancer |
CN113730548B (zh) * | 2020-05-14 | 2023-06-30 | 山东省科学院生物研究所 | 一种活性十肽在保护听觉毛细胞方面的应用 |
WO2023248846A1 (ja) * | 2022-06-22 | 2023-12-28 | 東亞合成株式会社 | キャリアペプチドフラグメント及びその利用 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IT1195304B (it) * | 1981-12-22 | 1988-10-12 | Anic Spa | Metodo per la preparazione di gem-diammino derivati n-monoacilati |
IT1190389B (it) * | 1985-09-19 | 1988-02-16 | Eniricerche Spa | Esapeptidi ad attivita' ipotensiva |
US5169933A (en) * | 1988-08-15 | 1992-12-08 | Neorx Corporation | Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging |
IT1227907B (it) * | 1988-12-23 | 1991-05-14 | Eniricerche S P A Milano Sclav | Procedimento per la sintesi di peptidi retro-inversi e nuovi intermediin tale procedimento |
US5674980A (en) | 1989-12-21 | 1997-10-07 | Biogen Inc | Fusion protein comprising tat-derived transport moiety |
US5804604A (en) | 1989-12-21 | 1998-09-08 | Biogen, Inc. | Tat-derived transport polypeptides and fusion proteins |
DE656950T1 (de) * | 1992-08-21 | 1996-03-14 | Biogen Inc | Tat-derivate transport polypeptide. |
US5880261A (en) | 1997-04-03 | 1999-03-09 | Waeber; Gerard | Transcription factor Islet-Brain 1 (IB1) |
US6043083A (en) * | 1997-04-28 | 2000-03-28 | Davis; Roger J. | Inhibitors of the JNK signal transduction pathway and methods of use |
EP0897002A3 (en) | 1997-08-14 | 2001-10-04 | Smithkline Beecham Plc | U62317, a protein having a JNK-binding domain |
US6348185B1 (en) * | 1998-06-20 | 2002-02-19 | Washington University School Of Medicine | Membrane-permeant peptide complexes for medical imaging, diagnostics, and pharmaceutical therapy |
-
2000
- 2000-02-14 US US09/503,954 patent/US6610820B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 AT AT00969730T patent/ATE411388T1/de active
- 2000-10-12 AT AT07003426T patent/ATE541929T1/de active
- 2000-10-12 AU AU79382/00A patent/AU784845B2/en not_active Ceased
- 2000-10-12 AT AT07021046T patent/ATE548455T1/de active
- 2000-10-12 ES ES00969730T patent/ES2313906T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 DK DK00969730T patent/DK1303600T3/da active
- 2000-10-12 EP EP07021047.1A patent/EP1895005B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 EP EP07021046A patent/EP1905830B8/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 JP JP2001530472A patent/JP5490343B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 ES ES07003426T patent/ES2381206T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 PT PT00969730T patent/PT1303600E/pt unknown
- 2000-10-12 EP EP00969730A patent/EP1303600B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 DK DK07021046.3T patent/DK1905830T3/da active
- 2000-10-12 ES ES07021046T patent/ES2383824T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 CA CA2387184A patent/CA2387184C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-10-12 DK DK07003426.9T patent/DK1811033T3/da active
- 2000-10-12 PT PT07003426T patent/PT1811033E/pt unknown
- 2000-10-12 EP EP07021048A patent/EP1914310A3/en not_active Withdrawn
- 2000-10-12 EP EP07003426A patent/EP1811033B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 WO PCT/IB2000/001538 patent/WO2001027268A2/en active Application Filing
- 2000-10-12 DE DE60040564T patent/DE60040564D1/de not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-10-03 US US09/970,515 patent/US6780970B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-01-15 US US10/342,683 patent/US20030220480A1/en not_active Abandoned
-
2004
- 2004-08-23 US US10/924,028 patent/US20050043241A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-08-16 HK HK07108928.3A patent/HK1100958A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2007-08-31 JP JP2007227135A patent/JP2008024710A/ja active Pending
-
2008
- 2008-06-07 HK HK08106343.3A patent/HK1111732A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-12-16 CY CY20081101452T patent/CY1110422T1/el unknown
-
2010
- 2010-02-16 US US12/706,436 patent/US20100216716A1/en not_active Abandoned
-
2011
- 2011-05-24 JP JP2011116398A patent/JP2011155990A/ja not_active Withdrawn
-
2012
- 2012-03-28 CY CY20121100321T patent/CY1112587T1/el unknown
-
2013
- 2013-01-30 JP JP2013015111A patent/JP2013081479A/ja not_active Withdrawn
-
2015
- 2015-08-28 JP JP2015168555A patent/JP2015221833A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5490343B2 (ja) | Jnkシグナル導入経路の細胞透過性ペプチドインヒビター | |
US8278413B2 (en) | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway | |
KR101305533B1 (ko) | Jnk 신호 전달 경로의 세포 투과성 펩티드 억제제 | |
US8080517B2 (en) | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway | |
AU2003274820B2 (en) | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway | |
AU2012203529B2 (en) | Cell-Permeable Peptide Inhibitors of the JNK Signal Transduction Pathway |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20070209 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20070209 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070831 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070831 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100625 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100924 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20101001 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101025 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20110125 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110524 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20110707 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20110801 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20110909 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20121204 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20121207 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131017 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131022 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131114 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131119 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20131206 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131217 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20131206 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140106 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140120 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140226 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5490343 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D04 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |