JP5486744B2 - ムユヨの花、トゲバンレイシの葉、及びウコンの根の抽出物を含む、肝炎を治療するための組成物 - Google Patents

Description

本出願は、２００７年１０月３日に出願された米国仮出願第６０／９７７，２５６号に対して優先権を主張するものである。

本出願は、新規ハーブ組成物、及び肝疾患の予防及び／若しくは治療におけるそれらの使用に関するものである。特に、本出願のハーブ組成物は、Ｃｏｒｄｉａ（イヌヂシャ属）、Ａｎｎｏｎａ（バンレイシ属）或いはＣｕｒｃｕｍａ（ウコン属）の少なくとも一種、或いはそれらの抽出物、若しくはそれらの組み合わせを有するものである。

酸素ラジカル種（ＯＲＳ）の形成は、炎症性−免疫疾患から心筋梗塞及び癌を含む、多くの急性及び慢性疾患の病因に関連している。ＯＲＳの過剰形成による有害効果のいくつかには、膜脂質の脂質過酸化、核酸及び糖に体する酸化障害、さらにはスルフヒドリルタンパク質及び他の感受性基の酸化が含まれる。抗酸化システムによって提供される防御は、生存に対して重要である。細胞内でのＯＲＳの解毒作用は、抗酸化防御システムを構成する、酵素的及び非酵素的システムで実行される（Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ Ｊｒ．Ｅ．，Ｃｈｉｔｈａｎ Ｋ．，ａｎｄ Ｈｅｏｈａｒｉｄｅｓ Ｔ．Ｃ．Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｏｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ｈｅａｒｔ Ｄｉｓｅａｓｅ，ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ５２：６７３−７５１，２０００）。

脂質過酸化は、過酸化の結果生じる最終産物の潜在的細胞毒性のせいで、組織病変の増悪において生物学的に重要である。例えば、細胞の脂質過酸化の産物は発癌性である。最近、脂質過酸化が動脈硬化、脳卒中、心筋梗塞、虚血を患った後の脳及び脊髄への障害、癌、炎症、鉄毒性、及び化学及び生物学的因子によって誘導された肝毒性の発症に重要な役割を担っているということが強調されていた（Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ Ｊｒ．Ｅ．，Ｃｈｉｔｈａｎ Ｋ．，ａｎｄ Ｈｅｏｈａｒｉｄｅｓ Ｔ．Ｃ．Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｏｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ｈｅａｒｔ Ｄｉｓｅａｓｅ，ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ５２：６７３−７５１，２０００）。

慢性肝疾患は、毎年多数の死を引き起こしており、米国での死因第１０位である。最近、肝疾患、特にウイルス感染によって引き起こされる肝疾患は重篤な健康問題であり、それらの治療の成功は、大きな挑戦となる。肝障害の多くは有効な治療法がない。最近、ウイルス肝炎を患った何人かの患者は、インターフェロン（ＩＦＮ）で治療されているが；ＩＦＮ療法は、症例の約２５％のみで成功している。

ＩＦＮは、全ての患者に利用可能である訳ではなく、必要とされる６ヶ月の治療は高価である。加えて、この治療は、インフルエンザ様症状、傾眠、脱毛、及び口内の不快な味などのいくつかの二次的効果を有している。ＩＦＮは、免疫システムを介してウイルスを攻撃するが、肝硬変或いは脾臓の機能減少など感染によって引き起こされた障害は回復しない。

リバビリン療法などの他の治療は、特にＩＦＮとの組み合わせにおいて、医学及び組織学的検査における結果を改善する。しかしながら、治療の費用も高価で、副作用によって治療を中止する大きなリスクもある（Ｍｃ Ｈｕｔｃｈｉｓｏｎ，Ｊ．Ｇ．ａｎｄ Ｐｏｙｎａｒｄ Ｔ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｐｌｕｓ Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ．Ｓｅｍｉｎ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓ １９９９；１９（ｓｕｐｐｌ １）：５７−６５；Ｄａｖｉｌ Ｇ．Ｌ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ ａｎｄ Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ ａｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｒｅｌａｐｓｅ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ．Ｓｅｍｉｎ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓ １９９９；１９（ｓｕｐｐｌ １）：４９−５５）。

世界保健機構（ＷＨＯ）は、世界の人口の３％がＣ型肝炎に感染しており、肝硬変及び／若しくは肝癌を発症するリスクを有した約１億７０００万人の慢性キャリアが存在すると推測している。ＷＨＯは、彼らの治療には１ヶ月に２，０００米国ドルが６〜１２ヶ月掛かり；加えてそれら治療は、薬剤によって引き起こされた重篤な作用を管理するための高価な医療サポートを必要とするため、リバビリン及びインターフェロンアルファ２Ｂからなるレベトロン（Ｒｅｂｅｔｒｏｎ）のような薬剤を用いて、世界中の１億７０００万人の患者を治療する費用を負担することができない。

肝障害を治療するのに十分有効的で安全な治療法或いは合成薬剤が存在しないので、多くの患者は、天然成分に基づいた代替療法に頼っていた。最近の薬剤における著しい進歩に関わらず、肝疾患に対する正確で安全で有効的な治療を開発することに関して、薬用植物は必要な因子として残っている。ここ数年、肝臓疾患を治療するためのハーブ産物の治療評価へシフトしており、それらのいくつかは安全で中程度な有効性を提供する。

いくつかの科学文献では、野菜由来の代謝産物の多くの群は抗酸化作用及び肝保護的作用を示したという事実を指摘している。これは、特にフェノール群、特にベンゼノイド基に属するものにおいて観察され、ここにおいて、その地上部、すなわちＴｏｕｒｎｅｆｏｒｔｉａ ｓａｒｍｅｎｔｏｓａ（ハマムラサキノキ属冷飯藤）の幹、葉、花及び果実から単離された、トウルネホラール、トウルネホリン酸Ａ及びＢ、及びトウルネホリン酸からのエチルエステルは、抗酸化作用を示し、低密度リポタンパク質の過酸化を阻害すると示された（Ｌｉｎ Ｙ．Ｌ．，Ｃｈａｎｇ Ｙ．Ｙ．，Ｋｕｏ Ｙ．Ｈ．，Ｓｈｉａｏ Ｍ．Ｓ．Ａｎｔｉ−ｌｉｐｉｄ−ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｒｏｍ Ｔｏｕｎｅｆｏｒｔｉａ ｓａｍｅｎｔｏｓａ．Ｊ Ｎａｔ Ｐｒｏｄ．２００２ Ｍａｙ；６５（５）：７４５−７）。ベンゼノイドであるウコンも、ラット肝臓における脂質過酸化の阻害を示す実験モデル（Ｓｒｅｅｊａｙａｎ Ｎ．，Ｒａｏ Ｍ．Ｎ．Ａ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４９：１０５−１０７（１９９７））においてスーパーオキシド陰イオン（Ｋｕｎｃｈａｎｄｙ Ｅ．，Ｒａｏ Ｍ．Ｎ．Ａ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．，５７：１７３−１７６（１９８９））及び硝酸（Ｓｒｅｅｊａｙａｎ Ｎ．，Ｒａｏ Ｍ．Ｎ．Ａ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４９：１０５−１０７（１９９７））に対する捕獲作用を示した。

タンニン群などの他のフェノール成分は、肝臓ミクロソーム及びミトコンドリアにおける脂質過酸化を阻害する（Ｏｋｕｄａ Ｔ．，Ｋｉｍｕａｒ Ｙ．，Ｙｏｓｈｉｄａ Ｔ．，Ｈａｔａｎｏ Ｔ．，Ｏｋｕｎｄａ Ｈ．，Ａｒｉｃｈｉ Ｓ．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔａｎｎｉｎｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｒｏｍ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ｄｒｕｇｓ．Ｉ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３１：１６２５−１６３１（１９８３））、抗酸化作用（Ｓａｔｏｈ， Ｋ．，Ｓａｋａｇａｍｉ，Ｈ．，１９９６．Ａｓｃｏｒｂｙｌ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６：２８８５−２８９０）及び肝保護的作用（Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｋ．Ｉ．，Ｎｏｍｕｒａ，Ｍ．，Ｍｕｒａｙａｍａ，Ｔ．，Ｆｕｒｕｋａｗａ，Ｔ．，Ｈａｔａｎｏ，Ｔ．，Ｙａｓｈｉｄａ，Ｔ．，Ｋｏｓｈｉｕｒａ，Ｒ．，Ｏｋｕｄａ，Ｔ．，１９９３．Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｔａｎｎｉｎｓ ａｇａｉｎｓｔ ｓａｒｃｏｍａ−１８０ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１６：３７９−３８７）を示す。タンニン酸は、マウスにおける肝腫瘍の発生率を減少させる（Ｈｉｒｏｓｅ Ｍ．，Ｏｚａｋｉ Ｋ．，Ｔａｋａｂａ Ｋ．，Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ Ｓ．，Ｓｈｉｒａｉ Ｔ．，Ｉｔｏ Ｎｏ．Ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｇａｍｍａ−ｏｒｙｚａｎｏｌ，ｐｈｙｔｉｃ ａｃｉｄ，ｔａｎｎｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｎ−ｔｒｉｔｒｉａｃｏｎｔａｎｅ−１６，１８−ｄｉｏｎｅ ｉｎ ａ ｒａｔ ｗｉｄｅ−ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｒｇａｎ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｍｏｄｅｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ １２：１９７１−１９２１（１９９１））。大規模臨床研究からの結果では、膨満感、食欲不振、悪心及び腹部痛などの肝胆道機能障害及び消化障害を治療することに関して、ポリフェノールの有効性及び安全性が示された。加えて、これらの成分は、非ステロイド性抗炎症薬によって誘導された胃疾患に対して予防的で肝保護的効果を有することが見出された（Ｒｕｉｙｃ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｓｉｌｙｍａｒｉｎ．Ｍｅｍ Ｉｎｓｔ Ｏｓｗａｌｄｏ Ｃｒｕｚ １９９１；８６：７９−８５；Ｓｃｅｖｏｌａ Ｄ，Ｂａｒｂａｃｉｎｉ Ｇ，Ｇｒｏｓｓｏ Ａ，Ｂｏｎａ Ｓ，Ｐｅｒｉｓｓｏｕｄ Ｄ．Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｈｅｐａｔｉｃ ｃｙｃｌｉｃ ｍｏｎｏｐｈａｓｐｈａｔｅｓ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ．Ｂｏｌｌ Ｉｎｓ Ｓｉｅｒｏｔｅｒ Ｍｉｌａｎ １９８４；６３：７７−８２）。

【００１２】
クマリンは、植物界に豊富に見出すことができる別の種類のポリフェノール化合物である。それらの多くは、例えば４−メトキシクマリンは利胆特性を有しているなどの、興味深い生物学的活性を有している（Ｔａｋｅｄａ，Ｓ．；Ａｂｕｒａｄａ，Ｍ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎ．４：７２４（１９８１））。７，８ジヒドロキシ−４−メチルクマリン及び７，８−ジアセトキシ−４−メチルクマリンは、抗酸化特性を有しており、従って酸素ラジカルの有効なスカベンジャーと考えられる（Ｒａｊ，Ｈ．Ｇ．；Ｐａｒｍａｒ，Ｖ．Ｓ．；Ｊａｉｎ，Ｓ．Ｃ．；Ｐｒｉｙａｄａｒｓｉｎｉ，Ｋ．Ｉ．；Ｍｉｔｔａｌ，Ｊ．Ｐ．；Ｇｏｅｌ，Ｓ．；Ｐｏｏｎａｍ；Ｈｉｍａｎｓｈｕ；Ｍａｌｈｏｔｒａ，Ｓ．；Ｓｉｎｇｈ，Ａ．；Ｏｌｓｅｎ，Ｃ．Ｅ．；Ｗｎｇｅｌ，Ｊ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６：８３３（１９９８））。加えて、この群の分子は、ＨｅｐＧ２細胞及び初代ヒト肝細胞培養において既知酸化剤（ｔ−ブチルヒドロペルオキシド）によって誘導された毒性に対して保護的効果を示す（Ｂｅｒｎａｒｄ Ｒｅｆｏｕｖｅｌｅｔ，Ｃａｔｈｅｒｉｎｅ Ｇｕｙｏｎ，Ｙｖｅｓ Ｊａｃｑｕｏｔ，Ｃｏｒｉｎｎｅ Ｇｉｒａｒｄ，Ｈｅｒｖｅ Ｆｅｉｎ，Ｆｒａｎｃｏｉｓｅ Ｂｅｖａｌｏｔｂ，Ｊｅａｎ−Ｆｒａｎｃｏｉｓ Ｒｏｂｅｒｔ ａ，Ｂｒｕｎｏ Ｈｅｙｄ，Ｇｅｏｒｇｅｓ Ｍａｎｔｉｏｎ，Ｌｙｓｉａｎｅ Ｒｉｃｈｅｒｔ，Ａｌａｉｎ Ｘｉｃｌｕｎａ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ４−ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｎｍａｒｉｎ ａｎｄ ２，４−ｑｕｉｎｏｌｉｎｅｄｉｏｌ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３９：９３１−９３７（２００４））。
テルペノイドは、抗酸化作用（Ｚｈｕ Ｍ，Ｃｈａｎｇ Ｑ，Ｗｏｎｇ ＬＫ，Ｃｈｏｎｇ ＦＳ，Ｌｉ ＲＣ．Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｆｒｏｍ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ．Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １３：５２９−３１（１９９９））、及び肝保護作用（Ｊａｍｅｓ，Ｌ．Ｐ．，Ｍａｙｅｕｘ，Ｐ．Ｒ．，Ｈｏｎｓｏｎ，Ｊ．Ａ．Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ３１：４９９−５０６（２００３））も示す別の群の植物由来の代謝物である。トリテルペンセラストロールは、肝臓ミトコンドリアにおける脂質過酸化に対して強力な阻害効果を示す。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ実験において、他の臨床テストと同様に、オレイン酸、ウルソール酸、アルファ−ヘデリン、グリチルリジン及びルペオールなどのいくつかのテルペノイドは、胃保護の効果（Ｚｈｕ Ｍ，Ｃｈａｎｇ Ｑ，Ｗｏｎｇ ＬＫ，Ｃｈｏｎｇ ＦＳ，Ｌｉ ＲＣ．Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｆｒｏｍ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ．Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １３：５２９−３１（１９９９））、及び肝保護作用（Ｌｉｕ，Ｊ．，Ｌｉｕ，Ｙ．，Ｍａｏ，Ｑ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ １０ ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ ２２：３４−４０（１９９４））（Ｓｕｎｉｔｈａ Ｓ．，Ｎａｇａｒａｊ Ｍ．，Ｖａｒａｌａｋｓｈｍｉ Ｐ．Ｈｅｐａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｕｐｅｏｌ ａｎｄ ｌｕｐｅｏｌ ｌｉｎｏｌｅａｔｅ ｏｎ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｄｅｆｅｎｃｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｃａｄｍｉｕｍ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ ７２：５１６−５２３（２００１））を示した。
現在の治療法のいくつかの不都合に立ち向かうウイルス性及び非ウイルス性肝障害に対
する安全で有効な治療の必要性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】

【００１３】
【特許文献１】 米国特許第５４０１７７７号
【特許文献２】 米国特許第５８６１４１５号
【特許文献３】 米国特許第６４２６０９８号
【特許文献４】 米国特許第６８４１１７７号
【特許文献５】 欧州公開第１０３２４０８号
【特許文献６】 国際公開第ＷＯ０３０５１３８０号
【特許文献７】 国際公開第ＷＯ０４０４８３５８号
【非特許文献】

【００１４】
【非特許文献１】 ＡＦＺＡＬ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｒｄｉａ Ｍｙｘｘａ Ｌ． ａｎｄ ｉｔｓ Ｈｅｐａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ． ２００７． Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ， Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ． Ｖｏｌ．６（６）， ｐｐ． ２１０９−１８．
【非特許文献２】 ＡＬ−ＡＷＡＤＩ， Ｆ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｏｒｄｉａ ｍｙｘａ Ｆｒｕｉｔ ｏｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｃｏｌｉｔｉｓ ｉｎ Ｒａｔｓ． ２００１． Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ． Ｖｏｌ． １７， ｐｐ． ３９１−６．
【非特許文献３】 ＢＡＳＫＡＲ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ａｎｎｏｎａ Ｓｐｅｃｉｅｓ． ２００７． Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ． Ｖｏｌ ４５（５）， ｐｐ． ４８０−５．
【非特許文献４】 ＢＡＹＥＵＸ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｅｄｅｍａｔｏｇｅｎｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ａｒｔｅｍｅｔｉｎ Ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｆｒｏｍ Ｃｏｒｄｉａ ｃｕｒａｓｓａｖｉｃａ ＤＣ． ２００２． Ｂｒａｚｉｌｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ． Ｖｏｌ． ３５， ｐｐ． １２２９−３２．
【非特許文献５】 ＢＥＲＲＹ， Ｍ．Ｎ． ａｎｄ ＦＲＩＥＮＤ， Ｄ．Ｓ． Ｈｉｇｈ Ｙｉｅｌｄ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｒａｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐａｒｅｎｃｈｙｍａｌ Ｃｅｌｌｓ． １９６９． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． Ｖｏｌ． ４３， ｐｐ． ５０６−２０．
【非特許文献６】 ＢＯＯＴＳ， Ａ．Ｗ．， ｅｔ ａｌ． Ｎｏ Ｒｏｌｅ ｏｆ ＤＴ−Ｄｉａｐｈｏｒａｓｅ （ＮｑＯ１） ｉｎ ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ａｇａｉｎｓｔ Ｏｘｉｄｉｚｅｄ Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ． ２００５． ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． Ｖｏｌ． ５７９， ｐｐ． ６７７−８２．
【非特許文献７】 ＢＵＳＳＭＡＮＮ Ｒ．Ｗ．， ｅｔ ａｌ． Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｌａｎｔ Ｕｓｅ ｉｎ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｐｅｒｕ： Ｔｒａｃｋｉｎｇ Ｔｗｏ Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｙｅａｒｓ ｏｆ Ｈｅａｌｉｎｇ Ｃｕｌｔｕｒｅ． ２００６． Ｊ Ｅｔｈｎｏｂｉｏｌ Ｅｔｈｎｏｍｅｄ． Ｖｏｌ ２， ｐ． ４７． ｗｗｗ．ｅｔｈｎｏｂｉｏｍｅｄ．ｃｏｍ／ｃｏｎｔｅｎｔ／２／１／４７．
【非特許文献８】 ＣＨＨＡＢＲＡ， Ｓ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ． Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｔａｎｚａｎｉａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｌａｎｔｓ． １９８４． Ｊ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｖｏｌ． １１（２）， ｐｐ． １５７−７９．
【非特許文献９】 ＤＡＶＩＳ， Ｇ．Ｌ． Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｐｈａ ａｎｄ Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ ａｓ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｌａｐｓｅ ｉｎ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ． １９９９． Ｓｅｍｉｎ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓ． Ｖｏｌ． １９（Ｓｕｐｐｌ １）， ｐｐ． ４９−５５．
【非特許文献１０】 ＤＥ ＳＯＵＺＡ， Ｇ．， ｅｔ ａｌ． Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｓｏｕｔｈ ｏｆ Ｂｒａｚｉｌ． ２００４． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． Ｖｏｌ． ９０， ｐｐ． １３５−４３．
【非特許文献１１】 ＤＥＳＨＰＡＮＤＥ， Ｕ．Ｒ．， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔｕｍｅｒｉｃ （Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ Ｌ．） Ｅｘｔｒａｃｔ ｏｎ Ｃａｒｂｏｎ Ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｌｉｖｅｒ Ｄａｍａｇｅ ｉｎ Ｒａｔｓ． １９９８． Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ． Ｖｏｌ． ３６（６）， ｐｐ． ５７３−７．
【非特許文献１２】 ＦＩＣＡＲＲＡ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ． Ｌｅａｆ Ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ Ｓｏｍｅ Ｃｏｒｄｉａ Ｓｐｅｃｉｅｓ： Ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｎｄ Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｓ Ｗｅｌｌ ａｓ Ｔｈｅｉｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ． １９９５． Ｉｌ Ｆａｒｍａｃｏ． Ｖｏｌ． ５０（４）， ｐｐ． ２４５−５６．
【非特許文献１３】 ＨＥＲＮＡＮＤＥＺ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． Ｅｔｈｎｏｂｏｔａｎｙ ａｎｄ Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｓｏｍｅ Ｐｌａｎｔｓ Ｕｓｅｄ ｉｎ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｆ Ｚａｐｏｔｉｔｌａｎ ｄｅ ｌａｓ Ｓａｌｉｎａｓ， Ｐｕｅｂｌａ （Ｍｅｘｉｃｏ）． ２００３． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． Ｖｏｌ． ８８， ｐｐ． １８１−８．
【非特許文献１４】 ＨＥＲＮＡＮＤＥＺ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｏｉｌ ａｎｄ Ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ Ｃｏｒｄｉａ ｃｕｒａｓｓａｖｉｃａ （Ｂｏｒａｇｉｎａｃｅａｅ）． ２００７． Ｊｏｕｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． Ｖｏｌ． １１１， ｐｐ． １３７−４１．
【非特許文献１５】 ＨＩＲＯＳＥ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． Ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｕｒａｌｌｙ Ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ Ｇａｍｍａ−ｏｒｙｚａｎｏｌ， Ｐｈｙｔｉｃ Ａｃｉｄ， Ｔａｎｎｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ ｎ−Ｔｒｉｔｒｉａｃｏｎｔａｎｅ−１６，１８−ｄｉｏｎｅ ｉｎ ａ Ｒａｔ Ｗｉｄｅ−Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｏｒｇａｎ Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｍｏｄｅｌ． １９９１． Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｖｏｌ． １２， ｐｐ． １９１７−２１．
【非特許文献１６】 ＪＡＭＥＳ， Ｌ．Ｐ．， ｅｔ ａｌ． Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ． ２００３． Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ． Ｖｏｌ． ３１， ｐｐ． ４９９−５０６．
【非特許文献１７】 ＫＬＯＵＣＥＫ， Ｐ． Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｓｏｍｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｂａｒｋｓ Ｕｓｅｄ ｉｎ Ｐｅｒｕｖｉａｎ Ａｍａｚｏｎ． ２００７． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． Ｖｏｌ． １１１， ｐｐ． ４２７−９．
【非特許文献１８】 ＫＵＮＣＨＡＮＤＹ， Ｅ．， ａｎｄ ＲＡＯ， Ｍ．Ｎ．Ａ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｕｒｃｕｍｉｎ ｏｎ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｆｅｎｔｏｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ． １９８９． Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ． Ｖｏｌ． ５７， ｐｐ． １７３−６．
【非特許文献１９】 ＬＡＮＳ， Ｃ． Ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ｕｓｅｄ ｉｎ Ｔｒｉｎｉｄａｄ ａｎｄ Ｔｏｂａｇｏ ｆｏｒ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｂｌｅｍｓ． ２００７． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｖｏｌ． ３（１３）， ｐｐ． １−１２．
【非特許文献２０】 ＬＡＵＴＲＡＩＴＥ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． Ｏｐｔｉｍｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ−Ｂａｓｅｄ Ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｕｍ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ Ｓｔｒｅｓｓ． ２００３． Ｔｏｘｉｃｏｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． Ｖｏｌ． １７， ｐｐ． ２０７−２２０．
【非特許文献２１】 ＬＩＮ， Ｙ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉ−ｌｉｐｉｄ−ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｖｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｒｏｍ Ｔｏｕｎｅｆｏｒｔｉａ ｓａｍｅｎｔｏｓａ． ２００２． Ｊ Ｎａｔ Ｐｒｏｄ． Ｖｏｌ． ６５（５）， ｐｐ． ７４５−７．
【非特許文献２２】 ＬＩＵ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ １０ Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｌｉｖｅｒ Ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ Ｍｉｃｅ． １９９４． Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ． Ｖｏｌ． ２２， ｐｐ． ３４−４０．
【非特許文献２３】 ＬＵＰＥＲ， Ｓ． Ａ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｌａｎｔｓ Ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ： Ｐａｒｔ Ｔｗｏ． １９９９． Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗ． Ｖｏｌ． ４（３）， ｐｐ． １７８−８８．
【非特許文献２４】 ＭＣＨＵＴＣＨＩＳＯＮ， Ｊ．Ｇ．， ａｎｄ ＰＯＹＮＡＲＤ， Ｔ． Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｐｌｕｓ Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｉｎｉｔｉａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ． １９９９． Ｓｅｍｉｎ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓ． Ｖｏｌ． １９（Ｓｕｐｐｌ １）， ｐｐ． ５７−６５．．
【非特許文献２５】 ＭＥＤＥＩＲＯＳ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔｗｏ Ａｃｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ Ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｏｉｌ ｏｆ Ｃｏｒｄｉａ ｖｅｒｂｅｎａｃｅａ ｏｎ ｔｈｅ Ａｃｕｔｅ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ Ｅｌｉｃｉｔｅｄ ｂｙ ＬＰＳ ｉｎ ｔｈｅ Ｒａｔ Ｐａｗ． ２００７． Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． Ｐｐ． １−１０．
【非特許文献２６】 ＭＩＤＤＬＥＴＯＮ Ｊｒ．， Ｅ．， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｏｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ： Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ， Ｈｅａｒｔ Ｄｉｓｅａｓｅ， ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ． ２０００． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ． Ｖｏｌ． ５２， ｐｐ． ６７３−７５１．
【非特許文献２７】 ＭＩＹＡＭＯＴＯ， Ｋ．Ｉ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｅｌｌａｇｉｔａｎｎｉｎｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ｓａｒｃｏｍａ−１８０ ｉｎ Ｍｉｃｅ． １９９３． Ｂｉｏｌ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ． Ｖｏｌ． １６， ｐｐ． ３７９−８７．
【非特許文献２８】 ＭＯＬＩＮＡ−ＳＡＬＩＮＡＳ， Ｇ．， ｅｔ ａｌ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｌｏｒａ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｍｅｘｉｃｏ ｆｏｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎｄ Ａｎｔｉｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ａｃｔｉｖｉｔｙ． ２００７． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． Ｖｏｌ． １０９， ｐｐ． ４３５−４１．
【非特許文献２９】 ＭＯＲＡ Ｓ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｘｉｏｌｙｔｉｃ ａｎｄ Ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ−ｌｉｋｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｙｄｒｏａｌｃｏｈｏｌ Ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Ａｌｏｙｓｉａ ｐｏｌｙｓｔａｃｈｙａ ｉｎ Ｒａｔｓ． ２００５． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｅｈａｖ． Ｖｏｌ． ８２（２）， ｐｐ． ３７３−８．
【非特許文献３０】 ＯＫＵＤＡ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｔａｎｎｉｎｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｒｏｍ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇｓ． Ｉ． Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｌｉｐｉｄ Ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ ｏｆ Ｌｉｖｅｒ． １９８３． Ｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ． Ｖｏｌ． ３１， ｐｐ． １６２５−３１．
【非特許文献３１】 ＰＡＳＳＯＳ， Ｇ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ Ａｎｔｉ−Ａｌｌｅｒｇｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｏｉｌ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｏｒｄｉａ ｖｅｒｂｅｎａｃｅａ． ２００７． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． Ｖｏｌ． １１０， ｐｐ． ３２３−３３．
【非特許文献３２】 Ｒａｉｎｔｒｅｅ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ． ２００４． ｐｐ． １−１０． ｗｗｗ．ｒａｉｎ−ｔｒｅｅ．ｃｏｍ／Ｇｒａｖｉｏｌａ−Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ．ｐｄｆ
【非特許文献３３】 ＲＡＪ， Ｈ．Ｇ．， ｅｔ ａｌ． Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ４−Ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏｐｙｒａｎ−２−ｏｎｅｓ． Ｐａｒｔ Ｉ： Ｄｉｏｘｙｇｅｎａｔｅｄ ４−ｍｅｔｈｙｌ Ｃｏｕｍａｒｉｎｓ ａｓ Ｓｕｐｅｒｂ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｎｄ Ｒａｄｉｃａｌ Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ． １９９８． Ｊ Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ． Ｖｏｌ． ６， ｐ． ８３３．
【非特許文献３４】 ＲＥＤＤＹ， Ａ．Ｃ．， ａｎｄ ＬＯＫＥＳＨ， Ｂ．Ｒ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｄｉｅｔａｒｙ Ｔｕｍｅｒｉｃ （Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ） ｏｎ Ｉｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ Ｌｉｐｉｄ Ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｒａｔ Ｌｉｖｅｒ． １９９４． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ Ｔｏｘｉｃｏｌ． Ｖｏｌ． ３２， ｐｐ． ２７９−２８３．
【非特許文献３５】 ＲＥＦＯＵＶＥＬＥＴ， Ｂ．， ｅｔ ａｌ． Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ４−Ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ ａｎｄ ２，４−ｑｕｉｎｏｌｉｎｅｄｉｏｌ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｉｒ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＨｅｐＧ２ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ Ｃｕｌｔｕｒｅ． ２００４． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ． Ｖｏｌ． ３９， ｐｐ． ９３１−７．
【非特許文献３６】 ＲＵＩ， Ｙ．Ｃ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ． １９９１． Ｍｅｍ Ｉｎｓｔ Ｏｓｗａｌｄｏ Ｃｒｕｚ．Ｖｏｌ． ８６， ｐｐ． ７９−８５．
【非特許文献３７】 ＳＡＴＯＨ， Ｋ．， ａｎｄ ＳＡＫＡＧＡＭＩ， Ｈ． Ａｓｃｏｒｂｙｌ Ｒａｄｉｃａｌ Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ． １９９６． Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． Ｖｏｌ． １６， ｐｐ． ２８８５−９０．
【非特許文献３８】 ＳＣＥＶＯＬＡ， Ｄ．， ｅｔ ａｌ． Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ Ｈｅｐａｔｉｃ Ｃｙｃｌｉｃ Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ ｉｎ Ｌｉｖｅｒ Ｉｎｊｕｒｙ． １９８４． Ｂｏｌｌ Ｉｎｓ Ｓｉｅｒｏｔｅｒ Ｍｉｌａｎ． Ｖｏｌ． ６３， ｐｐ． ７７−８２．
【非特許文献３９】 ＳＥＲＴＩＥ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｓａｙ ｏｆ Ｃｏｒｄｉａ ｖｅｒｂｅｎａｃｅａ ＩＩＩ： Ｏｒａｌ ａｎｄ Ｔｏｐｉｃａｌ Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ Ｇａｓｔｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａ Ｃｒｕｄｅ Ｌｅａｆ Ｅｘｔｒａｃｔ． １９９１． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． Ｖｏｌ． ３１， ｐｐ． ２３９−４７．
【非特許文献４０】 ＳＩＤＤＩＱＵＩ， Ｂ．， ｅｔ ａｌ． Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｒｕｉｔｓ ｏｆ Ｃｏｒｄｉａ ｌａｔｉｆｏｌｉａ． ２００６． Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ． Ｖｏｌ． ２０（２）， ｐｐ． １３１−７．
【非特許文献４１】 ＳＲＥＥＪＡＹＡＮ， Ｎ．， ａｎｄ ＲＡＯ， Ｍ．Ｎ．Ａ． Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｂｙ Ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄｓ． １９９７． Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｖｏｌ． ４９， ｐｐ． １０５−７．
【非特許文献４２】 ＳＵＮＩＴＨＡ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． Ｈｅｐａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｌｕｐｅｏｌ ａｎｄ Ｌｕｐｅｏｌ Ｌｉｎｏｌｅａｔｅ ｏｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ｄｅｆｅｎｃｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｃａｄｍｉｕｍ−ｉｎｄｕｃｅｄ Ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ Ｒａｔｓ． ２００１． Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ． Ｖｏｌ． ７２， ｐｐ． ５１６−２３．
【非特許文献４３】 ＴＡＫＥＤＡ， Ｓ． ａｎｄ ＡＢＵＲＡＤＡ， Ｍ．Ｊ． Ｔｈｅ Ｃｈｏｌｅｒｅｔｉｃ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｃｏｕｍａｒｉｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｎｄ Ｐｈｅｎｏｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ． １９８１． Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏｄｙｎ． Ｖｏｌ． ４， ｐ． ７２４−３４．
【非特許文献４４】 ＴＩＣＬＩ， Ｆ．， ｅｔ ａｌ． Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ Ａｃｉｄ， Ａ Ｎｅｗ Ｓｎａｋｅ Ｖｅｎｏｍ Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｃｏｒｄｉａ ｖｅｒｂｅｎａｃｅａ （Ｂｏｒａｇｉｎａｃｅａ）： Ａｎｔｉｓｅｒｕｍ Ａｃｔｉｏｎ Ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ． ２００５． Ｔｏｘｉｃｏｎ． Ｖｏｌ． ４６， ｐｐ． ３１８−２７．
【非特許文献４５】 ＺＨＵ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｆｒｏｍ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ． １９９９． Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ． Ｖｏｌ． １３， ｐｐ． ５２９−３１．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】

本発明の広範囲の観点に従って、Ｃｏｒｄｉａ（イヌヂシャ属）、Ａｎｎｏｎａ（バンレイシ属）或いはＣｕｒｃｕｍａ（ウコン属）の少なくとも１種、若しくはそれらの組み合わせを有するハーブ組成物が提供される。１実施形態において、少なくとも１種は、イヌヂシャ族で、例えばＣｏｒｄｉａ ｌｕｔｅａ（ムユヨ）である。別の実施形態において、前記ハーブ組成物は、イヌヂシャ属、バンレイシ属及びウコン属のそれぞれの種を有するものである。

別の実施形態において、イヌヂシャ属の花、バンレイシ属の葉、或いはウコン属の根、若しくはそれらの組み合わせを有するハーブ組成物が提供される。さらなる実施形態において、Ｃｏｒｄｉａ ｌｕｔｅａ（ムユヨ）の花、Ａｎｎｏｎａ ｍｕｒｉｃａｔａ（トゲバンレイシ）の葉及びＣｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ（ウコン）の根を有するハーブ組成物が提供される。本発明のハーブ組成物は、肝疾患を予防及び／治療するのに有効である。

別の広い観点において、本発明は、Ｃｏｒｄｉａ（イヌヂシャ属）、Ａｎｎｏｎａ（バンレイシ属）及びＣｕｒｃｕｍａ（ウコン属）の少なくとも１つの抽出物、或いはそれらの組み合わせを有するハーブ組成物に関連している。１実施形態において、イヌヂシャ属で、例えばＣｏｒｄｉａ ｌｕｔｅａ（ムユヨ）からの抽出物を有するハーブ組成物が提供される。１実施形態において、前記ハーブ組成物は、バンレイシ属或いはウコン属若しくは両者との組み合わせでイヌヂシャ属の抽出物を有する。別の実施形態において、前記ハーブ組成物は、イヌヂシャ属、バンレイシ属及びウコン属の各種からの抽出物を有するものである。

別の実施形態において、肝疾患の予防及び治療に有用な、イヌヂシャ属の花、バンレイシ属の葉、或いはウコン属の根の抽出物、若しくはそれらの組み合わせを有するハーブ組成物が提供される。さらなる実施形態において、前記ハーブ組成物は、例えばムユヨの花、トゲバンレイシの葉、或いはウコンの根の少なくとも１つの含水アルコール抽出物、或いはそれらの組み合わせなどの抽出物を有する。水、ヘキサン、クロロホルム及びそれらと同等物などの含水アルコール以外の溶媒も使用され得ることが理解される。さらなる実施形態において、前記ハーブ組成物は、ムユヨの花、トゲバンレイシの葉及びウコンの根の含水アルコール抽出物を有する。

イヌヂシャ属、バンレイシ属及びウコン属のそれぞれ、或いはそれらの抽出物は、著しい肝保護特性を示し、肝障害の予防及び／若しくは治療において有効である。イヌヂシャ属及びそれらの抽出物は、特に有効であった。しかしながら驚いたことに、イヌヂシャ属、バンレイシ属及びウコン属、或いはそれらの抽出物の様々な組み合わせ、特にイヌヂシャ属、バンレイシ属及びウコン属、或いはそれらの組み合わせの組み合わせは、付加的な相乗効果を示すことが発見され、これは各植物の有効性及び／若しくは特性が一緒に作用していることを示唆するものである。それぞれ１：１：１の、より好ましくは５：１：１、さらに好ましくは８：１：１の重量比のイヌヂシャ属、バンレイシ属及びウコン属、若しくはそれらの抽出物の組み合わせが特に有効であった。別の実施形態において、イヌヂシャ属：バンレイシ属：ウコン属、若しくはそれらの抽出物の重量比は、１：０．０５〜１：０．０５〜１である。１観点において、混合物におけるウコン属の濃度は、イヌヂシャ属或いはバンレイシ属の濃度を越えるべきではない。

本発明のハーブ組成物の少なくとも１つの利点は、それらの安全性と有効性である。例えば、対象の植物属の抽出物を有するハーブ組成物は、細胞及び組織レベルで非毒性であり、マウス及びラットの急性毒性研究において非毒性であり、ヒトでの使用に安全であると見出された。

本発明のハーブ組成物は、ウイルス感染或いは肝疾患を引き起こす他の因子の予防を介して予防的に作用することもできる。従って、それらはウイルス感染、自己免疫反応、生体異物の消費及び肝機能を損なうそれらの疾患全てによって引き起こされた肝疾患を治療するために使用され得る。治療は、治療的及び／若しくは予防的であり得る。

本発明のハーブ組成物は、経口的に或いは非経口的（局所的、直腸、静脈内、筋肉内或いは皮下組織）に投与され得る。治療は、１投与量、複数投与量、若しくは徐放或いは堆積法を介して、液体或いは固体形態（例えば錠剤）で経口的に投与され得る。別の方法では、ハーブ組成物は、ホット或いはコールドドリンクを作るために熱湯が添加されるようなお茶様物質の形態である。

本発明の別の広い観点において、本発明のハーブ組成物の調合において使用される、選択された植物種からの含水アルコール抽出物を得るための方法が提供され、この方法は、前記選択された植物種を乾燥させ、約０．３５ｍｍ〜約０．１ｍｍの範囲の粒子サイズを有する粉末を得るために前記乾燥させた植物種を粉砕する工程と、室温で約６〜約８日間、含水アルコール溶液に前記粉末を漬け込む工程であって、これにより前記植物種の抽出物を得るものである、前記漬け込む工程と、ロートエバポレータにおける蒸発によって前記抽出物を濃縮させる工程と、前記抽出物を凍結乾燥させ滅菌させる工程と、を有するものである。本分野で既知の他の濃縮方法も使用され得ることが理解される。

本発明のハーブ組成物は、例えば肝細胞が脂質過酸化の誘導因子に曝露された場合のマロニルジアルデヒド（ＭＤＡ）レベルの減少、傷害誘導に対するグルタチオン（ＧＳＨ）レベルの回復などのラットの単離肝細胞において抗酸化作用を有している。従って、本発明のハーブ組成物の肝保護特性は、一部分において、それらの抗酸化特性及びフリーラジカルの拡散の阻害の結果である。

本発明のハーブ組成物はさらに、再生或いは増殖特性も有する。従って本発明の１観点において、本発明のハーブ組成物は、患者における肝細胞の再生に有用である。

対象の属及び種の選択された植物におけるフェノール、タンニン、テルペノイド、ラクトン及びクマリン群などの二次的代謝物の化学基の存在は、少なくとも一部は、観察された生物学的作用のいくつかを説明する。

別の広い観点において、本発明は、患者における肝傷害の治療或いは予防する方法に関するものであり、この方法は、治療上有効な量の本発明のハーブ組成物を患者へ投与する工程を有するものである。肝傷害は、Ｂ型及び／若しくはＣ型肝炎などのウイルス感染、若しくは線維症、肝硬変及び非ウイルス性肝炎などの非ウイルス性肝疾患によって引き起こされる。

本発明及び先行技術によって達成された利点を要約する目的で、本発明の特定の目的及び利点は上記された。もちろん、本発明のあらゆる特定の実施形態に従って、そのような目的及び利点の全てが達成される必要はないことが理解される。従って、例えば本分野の当業者は、本明細書で教示される或いは示唆された他の目的或いは利点を達成する必要がなく、本発明は、本明細書で教示されたような１つの利点或いは一群の利点を達成する或いは最適化するようなやり方で具体化される或いは実行されるということを理解するであろう。

本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、詳細な説明及び特異的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示す一方、実例方法のみを与えるものであり、本発明の目的及び観点の範囲内の様々な変化及び修正は、この詳細な説明から本分野の当業者によって明らかであろうことは理解されるべきである。

本発明の目的に対して、「抽出物」という用語は、水−可溶性及び／若しくはアルコール−可溶性及び／若しくはヘキサン−可溶性及びクロロホルム−可溶性などの他の適切な溶媒−可溶性の、一部の抽出植物からの植物成分の濃縮物を意味し、液体或いは固体（例えば粉末）形態であり得る。

本発明は、以下の実施例の観点から記載される。

イヌヂシャ属の含水アルコール抽出物：２５０ｇのムユヨ花を脱水によって乾燥させ、次に１〜１．５リットルの含水アルコール溶液（約６５：３５〜約７５：２５の比率のエタノール−水）に６〜８日間室温で漬け込んだ。エタノール中に漬け込まれた花は次に標準ロートエバポレータを用いて低圧で濃縮させた。形成された残留物は次に凍結乾燥させ、滅菌した。１４〜２２ｇの塊が生抽出物で得られ、収率はサンプル塊の６〜９％であった。０．７％エタノール／蒸留水に５ｍｇ溶解することによって、５ｍｇ／ｍｌの貯蔵溶液をテスト用に調合した。

バンレイシ属の含水アルコール抽出物：２５０ｇのトゲバンレイシ葉を摂氏約４５〜５５度の温度のオーブンを用いて乾燥させた。乾燥させた葉は次に標準ブレイドグラインダーを用いて粉砕工程へ供した。得られた粉末は、粒子サイズ分画が約０．３５〜約０．１０ミリメートルに測定させるまでふるい分けした。次に前記粉末は１〜１．５リットルの含水アルコール溶液（約６５：３５〜約７５：２５の比率のエタノール−水）に６〜８日間室温で漬け込んだ。エタノール中に漬け込まれた粉末は次に標準ロートエバポレータを用いて低圧で濃縮させた。残留物は次に凍結乾燥させ、滅菌した。１４〜２２ｇの塊が生抽出物で得られ、収率はサンプル塊の５〜８％であった。０．７％エタノール／蒸留水に５ｍｇ溶解することによって、５ｍｇ／ｍｌの貯蔵溶液をテスト用に調合した。

ウコン属の含水アルコール抽出物：２５０ｇのウコン根を摂氏約４５〜５５度の温度のオーブンを用いて乾燥させた。乾燥させた根は次に標準ブレイドグラインダーを用いて粉砕工程へ供した。得られた粉末は、粒子サイズ分画が約０．３５〜約０．１０ミリメートルに測定されるまでふるい分けした。次に前記粉末は１〜１．５リットルの含水アルコール溶液（約６５：３５〜約７５：２５の比率のエタノール−水）に６〜８日間室温で漬け込んだ。これは次に標準ロートエバポレータを用いて低圧で濃縮させた。残留物は次に凍結乾燥させ、滅菌した。１０〜１６ｇの塊が生抽出物で得られ、収率はサンプル塊の４〜７％であった。０．７％エタノール／蒸留水に５ｍｇ溶解することによって、５ｍｇ／ｍｌの貯蔵溶液をテスト用に調合した。

ムユヨ花、トゲバンレイシ葉及びウコン根の抽出物を有するハーブ組成物は、以下のように調合した。実施例１、２及び３で得られた凍結乾燥させた生抽出物は、以下の割合；それぞれ重量比で８：１：１（１：０．１２５：０．１２５）となるように８ｍｇ：１ｍｇ：１ｍｇで混合し、０．７％エタノール／蒸留水に５ｍｇの前記凍結乾燥させた混合物を溶解することによって、５ｍｇ／ｍｌ貯蔵溶液を調合した。

肝細胞の調合
本発明のハーブ組成物の抽出物は、それらのｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗酸化作用を決定するために、初代ラット肝細胞培養を用いてテストした。一般的に、テストは、肝細胞の単離が実行されるまでｔｈｅ Ｆｅ ｄｅ Ｖａｌｅｎｃｉａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒで飼育されていた、ＣＲＩＦＦＡ（Ｓａｎｔａ Ｐｅｒｐｅｔｕａ ｄｅ Ｌａ Ｍｏｇｏｄａ、バルセロナ）によって提供された雄ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）を用いて実行した。動物の取扱い及び屠殺は、国家規制、欧州連合の規定６０９／８６、及びＵＳ国立衛生研究所（ＮＩＨ）によって刊行された実験動物の取扱い及び使用に従って実行した。

ラット肝細胞の単離は、この参照によって本明細書に組込まれるものである、Ｂｅｒｒｙ ａｎｄ Ｆｒｉｅｎｄ法（Ｍ．Ｎ．Ｂｅｒｒｙ，Ｄ．Ｓ．Ｆｒｉｅｎｄ．Ｈｉｇｈ ｙｉｅｌｄ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ ｐａｒｅｎｃｈｙｍａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．４３：５０６−５２０，１９６９）に基づいており、これは分解酵素として働くコラゲナーゼを含有する溶液のｉｎ ｓｉｔｕ肝臓注入から成る。腹腔内チオバルビタール注射での動物への麻酔投与の直後に、腹腔開腹術を行い、大動脈を１ｍｍ直径カニューレでカニューレ処置をした。最初に、臓器を清掃するために、１８〜２０ｍｌ／分の流速に調節した蠕動ポンプを用いて生理食塩水で灌流した。一度この工程が終了したら、肝臓を分解するためにコラゲナーゼ溶液を添加した。この工程の間に得られた細胞懸濁液は濾過し遠心分離し、コラゲナーゼを除去後培養液に再懸濁し、前記細胞は適切な細胞外マトリックス中で培養した。

異なる単離で得られた細胞の懸濁液は、フリーラジカルの形成及び細胞毒性を観察するために、９６ウェルプレート中で８×１０^４生細胞／ｃｍ^２の密度で培養した。グルタチオン定量化及び脂質過酸化は、２４ウェルプレート中に培養された細胞で評価した。肝細胞を培養する前に、プレートはフィブロネクチン（３．５μｇ／ｃｍ^２）でコーティングした。細胞は、亜セレン酸ナトリウム（１７０μｇ／ｍｌ）、２％の新生仔ウシ血清、ペニシリン（５０ｍＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（５０μｇ／ｍｌ）、０．２％の血清ウシアルブミン、及びインスリン（１０ｎＭ）を補完した、Ｈａｍ’ｓ Ｆ−１２／Ｌｅｂｏｖｉｔｓ Ｌ−１５（１：１）培養液中で培養した。再懸濁後一定量を取り、細胞カウントを行い、トリパンブルー除去法を用いて細胞の生存率を決定した。細胞内へのトリパンブルーの取り込みの程度は、細胞膜の完全性に依存しており、従ってそれは細胞死の指標として使用され得る。従って、０．４％のトリパンブルーを細胞懸濁液一定量へ添加し、顕微鏡及びＮｅｕｂａｕｅｒチャンバーを用いて５カ所の異なる領域において青色に染色されなかった細胞をカウントした。パーセント生存率は、以下のように：％生存率＝非青色細胞ｘ１００／細胞の総数、で計算した。

ジメチル−テトラゾリウム（ＭＴＴ）を用いた細胞生存率
細胞生存率は、淡黄色物質であるジメチル−テトラゾリウム（ＭＴＴ）の取り込み及び青色不溶性代謝産物であるホルマザンへの還元を測定することによって決定した。この細胞還元反応は、ミトコンドリア脱水素酵素活性を測定しており、この活性は細胞内小器官の完全性の程度に依存しており、従って培養中の生存細胞の数の明確な指標となる。この場合において、ＭＴＴは黄色を示すテトラゾリウム塩物質として使用され、ミトコンドリア脱水素酵素コハク酸活性によって青色不溶性代謝産物（ホルマザン）を産生し、これは、４０５〜６３０ｎｍの範囲の吸光度を測定するＥＬＩＳＡリーダーを用いて吸光度を測定することによって定量化され得る。

例えばフリーラジカルの産生において曝露が短すぎるなどのテストの例外はあるが、脂質過酸化及びグルタチオンテストの残りの間、細胞生存率研究は平行して行った。９６ウェルプレート中に培養されたラット肝細胞は、他の実験と同じ条件でインキュベートした。インキュベーション期間が完了したら、ＭＴＴを培養液へ添加し、２時間インキュベートした。産生されたホルマザンはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解され、最終的にＥＬＩＳＡリーダーによって５５０ｎｍでその吸光度を評価した。ハーブ組成物で処理しなかった細胞は、ポジティブ生存率コントロールとして使用した（Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｘ−Ｌｅｃｈｏｎ ａｎｄ Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ．Ｉｎ：Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ．Ｅｄ．Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ａ．Ｄｏｙｌｅ ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ．ＩＳＢＮ：０４７１９２８５２６．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ&Ｓｏｎｓ Ｌｔｄ．Ｂａｆｆｉｎｓ Ｌａｎｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９９８；１２Ｂ：５．６；Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ，Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ，Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓ ｔｏ ａｎｉｍａｌ ｐｈａｒｍａｃｏ−ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．Ｆａｒｍａｉｎｄｕｓｔｒｉａ Ｅｄ．ＪＶ Ｃａｓｔｅｌｌ ａｎｄ ＭＪ Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ．Ｍａｄｒｉｄ，１９９２；Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ，Ｔ．Ｄｏｎａｔｏ，Ｘ．Ｐｏｎｓｏｄａ，Ｒ．Ｆａｂｒａ，Ｒ．Ｔｒｕｌｌｅｎｑｕｅ ａｎｄ Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ．ＩＮ ＶＩＴＲＯ ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ．ＩＳＢＮ ０−１２−１６３３９０−Ｘ．Ｅｄｓ．；Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ ｅｄｓ．ｐｐ．１２９−１５４．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｌｏｎｄｏｎ（１９９７）、これらはこの参照によって本明細書に組込まれるものである）。

フリーラジカルの産生
フリーラジカルの産生を定量化するために、９６ウェルプレートに培養されたラット肝細胞の初代培養は、その無極性及びその非イオン性構造のおかげで細胞膜を通じてよく拡散し、酸素が存在すると蛍光を発する蛍光剤である５−クロロメチル−２’，７’−ジクロロヒドロフルオレセイン（ＤＣＦＨ−ＤＡ）と共に、以下の濃度：４、２０、１００及び５００μｇ／ｍｌでの本発明のハーブ組成物とインキュベートした（Ｌａｕｔｒａｉｔｅ Ｓ，Ｂｉｇｏｔ−Ｌａｓｓｅｒｒｅ Ｄ，Ｂａｒｓ Ｒ ａｎｄ Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ Ｎ．Ｏｐｔｉｍｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｍｅｄｉｕｍ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ １７：２０７−２２０（２００３）、これはこの参照によって本明細書に組込まれるものである）。インキュベーション期間が完了したら、細胞を本発明のハーブ組成物と共にｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ｔ−ＢＯＯＨ）に曝露し、その後すぐ蛍光発光を４８５ｎｍ（刺激）及び５２７ｎｍ（発光）で判読した（ｔ_０）。最終的に前記細胞は３７℃でインキュベートし、蛍光は３０分間隔で２時間判読した。ケルセチン（抗酸化作用を有することが知られているフラボノイド）で処理した細胞はテストのポジティブコントロールとして使用した（Ｂｏｏｔｓ Ａ．Ｗ．，Ｂａｓｔ Ａ．ａｎｄ Ｈａｅｎｅｎ Ｇ．Ｒ．Ｎｏ ｒｏｌｅ ｏｆ ＤＴ−ｄｉａｐｈｏｒａｓｅ（ＮｑＯ１）ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｏｘｉｄｉｚｅｄ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５７９：６７７−６８２、これはこの参照によって本明細書に組込まれるものである）。定量化は、コントロール（ハーブ組成物の非存在下で酸化的刺激によって誘導された細胞）に対するフリーラジカルの％で示した。フリーラジカルを定量化するために、ハーブ組成物は０．５〜１％の範囲でエタノール−水溶液中に第一に溶解した。

脂質過酸化及びグルタチオン還元
脂質過酸化及びグルタチオン還元を測定するために、単離ラット肝細胞を８０，０００生細胞／ｃｍ^２の密度で２４ウェルプレートに培養した。１時間培養の安定化期間の後、細胞は４、２０、１００及び５００μｇ／ｍｌのハーブ組成物と共に２４時間プレインキュベートした。プレインキュベーションが終了したら、細胞は、上述した濃度を用いて本発明の処方対象の有効成分と共に２５０μＭのｔ−ＢＯＯＨへ曝露した。２４時間が経過したら、細胞を回収し、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し；次にマロニルジアルデヒド（ＭＤＡ）の産生を測定するために液体を回収した。単層を洗浄し、タンパク質及びグルタチオンレベル（ＧＳＨ）を評価するために凍結させた。未処理細胞は、基礎酸化のコントロールとして使用し、ｔ−ブチルヒドロペルオキシドで排他的に処理した細胞は、誘導酸化のコントロールとして使用した。

脂質過酸化は、培養液中のＭＤＡの産生を定量化することによって決定した（Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｘ−Ｌｅｃｈｏｎ ａｎｄ Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ．Ｉｎ：Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ．Ｅｄ．Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ａ．Ｄｏｙｌｅ ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ．ＩＳＢＮ：０４７１９２８５２６．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ & Ｓｏｎｓ Ｌｔｄ．Ｂａｆｆｉｎｓ Ｌａｎｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９９８；１２Ｂ：５．６；Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ，Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓ ｔｏ ａｎｉｍａｌ ｐｈａｒｍａｃｏ−ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．Ｆａｒｍａｉｎｄｕｓｔｒｉａ Ｅｄ．ＪＶ Ｃａｓｔｅｌｌ ａｎｄ ＭＪ Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ．Ｍａｄｒｉｄ，１９９２；Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ，Ｔ．Ｄｏｎａｔｏ，Ｘ．Ｐｏｎｓｏｄａ，Ｒ．Ｆａｂｒａ，Ｒ．Ｔｒｕｌｌｅｎｑｕｅ ａｎｄ Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ．ＩＮ ＶＩＴＲＯ ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ．ＩＳＢＮ ０−１２−１６３３９０−Ｘ．Ｅｄｓ．Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ ｅｄｓ．ｐｐ．１２９−１５４．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｌｏｎｄｏｎ（１９９７）、これら全てはこの参照によって本明細書に組込まれるものである）。この定量化を実行するために、細胞をインキュベートし、次に細胞残骸を取り除くために１，２００ｒｐｍで５分間遠心分離をした。回収した液体は、７％のＳＤＳ、０．１ＮのＨＣｌ、１％のリンタングステン酸及び０．６７％のチオバルビツール酸を含有するバッファーと共に、暗所において１００℃、６０分インキュベートした。サンプルは抽出に供し、１ｍｌのブタノールを添加し、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。５３０ｎｍ（刺激）及び５９５（発光）での有機層（上清）の判定によって、テストした前記ハーブ組成物のインキュベーション条件下でのＭＤＡ形成を決定した。培養液中で希釈されたＭＤＡは、標準として使用した。未処理細胞は、基礎酸化のネガティブコントロールとして使用し、ｔ−ＢＯＯＨで排他的に処理した細胞は、誘導酸化のポジティブコントロールとして使用した。細胞単層におけるタンパク質濃度は、データを規準化するために使用した。

グルタチオン（ＧＳＨ）レベル定量化は、ｏ−フタルアルデヒド（ＯＰＴ）を用いた蛍光定量的反応を通じて実行した（Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｘ−Ｌｅｃｈｏｎ ａｎｄ Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ．Ｉｎ：Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ．Ｅｄ．Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ａ．Ｄｏｙｌｅ ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ．ＩＳＢＮ：０４７１９２８５２６．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ & Ｓｏｎｓ Ｌｔｄ．Ｂａｆｆｉｎｓ Ｌａｎｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９９８；１２Ｂ：５．６；Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ，Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ，Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓ ｔｏ ａｎｉｍａｌ ｐｈａｒｍａｃｏ−ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．Ｆａｒｍａｉｎｄｕｓｔｒｉａ Ｅｄ．ＪＶ Ｃａｓｔｅｌｌ ａｎｄ ＭＪ Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ．Ｍａｄｒｉｄ，１９９２；Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ，Ｔ．Ｄｏｎａｔｏ，Ｘ．Ｐｏｎｓｏｄａ，Ｒ．Ｆａｂｒａ，Ｒ．Ｔｒｕｌｌｅｎｑｕｅ ａｎｄ Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ．ＩＮ ＶＩＴＲＯ ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ．ＩＳＢＮ ０−１２−１６３３９０−Ｘ．Ｅｄｓ．Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ ｅｄｓ．ｐｐ．１２９−１５４．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｌｏｎｄｏｎ（１９９７）、これらの全てはこの参照によって本明細書に組込まれるものである）。上述した濃度のハーブ組成物と共に２４時間インキュベートした細胞は、バッファー（５％のトリクロロ酢酸及びＥＤＴＡ）中で１〜２秒間超音波処理した。前記プレートを３，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した後得られた液体一定量へ、リン酸ナトリウム（０．１Ｍ）、ＮａＯＨ（１Ｍ）及びＯＰＴ溶解液を添加した。１〜２秒超音波処理したサンプルは暗所に３０分間保存し、３６０（刺激）及び４５０ｎｍ（発光）で蛍光を判読した。均質化バッファーで希釈された１０ｍＭのＧＳＨは標準として使用した。基礎グルタチオンレベルは未処理細胞から得られ、ｔ−ＢＯＯＨはＧＳＨレベル減少に対するポジティブコントロールとして使用した。細胞単層におけるタンパク質評価はデータを規準化するために使用した。

実施例１、２、３及び４のハーブ組成物の増加性濃度を用いて、単離ラット肝細胞を用いて、上述したように、フリーラジカル、脂質過酸化及びグルタチオンレベルの産生をテストした。得られた結果は以下の表１に示した。

表１に示されたように、実施例４の８：１：１重量比の３種の抽出物、すなわち実施例１（ムユヨ）、実施例２（トゲバンレイシ）及び実施例３（ウコン）は一貫して、特に１００μｇ／ｍＬ及び５００μｇ／ｍＬのより高濃度において、同量の個々の実施例より優れた効果を示した。これは、３種の抽出物全てを上述の比率で組み合わせた場合の相乗効果を示唆するものである。テストした３種の個々の抽出物に関して、実施例１では実施例２及び３より優れた結果を示し、これは単独或いは組み合わせでの実施例１は肝臓の肝保護作用において重要であることを示唆している。

実施例４のハーブ組成物の増加性濃度を用いて、２つの独立した単離ラット肝細胞を用いて、上述したように、フリーラジカル及び脂質過酸化の産生をテストした。得られた組み合わせ結果は以下の表２に示した。

表２に示されたように、ｔ−ＢＯＯＨとの実施例４のハーブ組成物のインキュベーションは、フリーラジカルの形成を減少した。実施例４のハーブ組成物のこの保護作用は用量依存的であり、既知抗酸化剤であるケルセチンとインキュベーションした細胞中で生じたフリーラジカルの減少に匹敵した。１００及び５００μｇ／ｍｌ濃度ではｔ−ＢＯＯＨの酸化に対してほとんど全ての阻止作用を示した一方、２０μｇ／ｍｌのより低濃度でも約３４％の実質的な減少が観察された。

表２に示されたように、実施例４のハーブ組成物の濃度が増加するにつれてＭＤＡレベルが減少したことより、実施例４のハーブ組成物を用いたＭＤＡ定量化を通じた脂質過酸化評価の結果は同様な挙動を示した。

表２はさらに、２つの独立したラット肝細胞培養を用いたＧＳＨに対する実施例４のハーブ組成物での肝細胞のプレインキュベートの効果を示している。これらの値は、ｔ−ＢＯＯＨ酸化剤によって誘導された減少と比較した。実施例４のハーブ組成物の濃度が増加するにつれてＧＳＨレベルは増加し；ＧＳＨレベルは１００及び５００μｇ／ｍｌ濃度での未処理細胞と基本的に同じであり、これは実施例４の高濃度は基本的に正常ＧＳＨタンパク質レベルを回復することを示している。

脂質過酸化及びグルタチオンテストに対して、平行して細胞生存率研究を実行した。プレインキュベート期間及び実施例４のハーブ組成物での処理が完了した時、単離ラット肝細胞において毒性は見られず、すなわち、最高濃度でさえも基本的に１００％生存率が観察され、これによって、実施例４の組成物は単離ラット肝細胞に対して最高レベルにおいて基本的に非毒性であったことが示唆される。

上記の結果より、実施例４のハーブ組成物はフリーラジカルを阻止する抗酸化剤として作用し、従って脂質過酸化を減少することが見出された。加えて、特に実施例４の１００μｇ／ｍＬ或いはより高い濃度を使用した場合、ＧＳＨレベルが保存された。従って、実施例４のハーブ組成物はさらに、肝臓に対する肝保護組成物としても作用する。

実施例４のハーブ組成物はさらに、より優れた臨床的改善（以下参照）も示し、Ｃ型肝炎感染の結果としての肝傷害によって引き起こされた様々な症状を軽減するのにより効果的であった。特に、個々の抽出物を別々に摂取した患者とは対照的に、３種のハーブ抽出物全ての混合物を摂取した患者において悪心及び胃の灼熱感がより少なかった。これはさらに、実施例４の場合と同様に、３種の抽出物全ての混合物を摂取すると付加的な利点があることを示唆している。

末梢血からのヒトリンパ球に対する実施例５の組成物の遺伝毒性の影響は、個々の細胞に対するアルカリ性電気泳動テスト（コメットテスト（Ｔｈｅ Ｃｏｍｅｔ Ｔｅｓｔ））を用いて評価し、これは本発明の有効成分によって引き起こされる遺伝子障害の可能性を評価するためにヒトリンパ球の初代培養に対して行うものである（Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ，Ｔ．Ｄｏｎａｔｏ，Ｘ．Ｐｏｎｓｏｄａ，Ｒ．Ｆａｂｒａ，Ｒ．Ｔｒｕｌｌｅｎｑｕｅ ａｎｄ Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ．ＩＮ ＶＩＴＲＯ ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ．ＩＳＢＮ ０−１２−１６３３９０−Ｘ．Ｅｄｓ．Ｊ．Ｖ．Ｃａｓｔｅｌｌｙ Ｍ．Ｊ．Ｇｏｍｅｚ−Ｌｅｃｈｏｎ ｅｄｓ．ｐｐ．１２９−１５４．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｌｏｎｄｏｎ（１９９７）、これはこの参照によって本明細書に組込まれる）。

使用するリンパ球の細胞培養は、健康なドナーからの２０ｍＬの全血から得た；リンパ球は分画遠心法及び２０ｍＬのＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｓｉｇｍａ）の使用を介して単離した。遠心法の後、リンパ球の細胞リングは、ピペットで抽出した。後に細胞をＰＢＳで洗浄し、１，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。最終的に、細胞ボタンは、実行する別の実験で使用するまで、６ｍＬの凍結培養液に再懸濁した。リンパ球は、実施例４の組成物の以下の濃度：１００、２００及び５００μｇ／ｍＬに、１時間３７℃に曝露した。

１００コの細胞を各処理における、障害の指標として状態の変化の瞬間を解析した。コメット５解析プログラムをこの解析のために使用し、これは細胞におけるＤＮＡへの初期障害を検出する遺伝毒性テストである（Ｇｏｍｅｔ．Ｍｏｌ．Ｒｅｓ．２（４）：４１０−４１７（２００３）、これはこの参照によって本明細書に組込まれる）。得られた結果に対する統計解析は、ノンパラメトリックテストＫｒｕｓｋａｌ Ｗａｌｌｉｓ、ｐ<０．０５を用いて実行した。

これらのテスト条件下で末梢血リンパ球において５００μｇ／ｍＬまで適用した場合、実施例４の活性成分は、（単鎖における断裂及びアルカリに対して不安定なスポットとして検出される）ＤＮＡに対してどんな障害も引き起こさなかった。

実施例４抽出物の急性毒性は、以下のような、アルビノマウス（Ｂａｌｂ／Ｃ／ＣＮＰＢ）における限界用量テスト（ｔｈｅ Ｌｉｍｉｔ Ｄｏｓｅ Ｔｅｓｔ）、及びアルビノラット（Ｈｏｌｔｘｍａｎｎ）における急性毒性クラステスト（ｔｈｅ Ａｃｕｔｅ Ｔｏｘｉｃ Ｃｌａｓｓ Ｔｅｓｔ）を用いてテストした。

限界用量テスト
実施例４の抽出物及びコントロール物質（生理食塩水）は、以下の条件：
種：アルビノマウス（ハツカネズミ）
近交系：Ｂａｌｂ／Ｃ／ＣＮＰＢ
動物の数：実験群当たり１０匹の動物
性別：雄及び雌
体重：２０〜２５ｇ
グループＩ（処理群）：これらの動物には、２，０００ｍｇ／ｋｇの実施例４の抽出物の用量を投与
グループＩＩ（コントロール）：これらの動物には、溶媒或いは生理食塩水（抽出物容積と同量）を投与
で、胃内カテーテルを用いて経口的に投与した。

マウスは、実験前４時間に絶食させた；次に前記産物をそれに応じて投与し、動物は４時間連続観察下に置いた。死亡はなく、観察期間は抽出物を投与後１４日に延長し、次に動物の回復及び効果の可逆性の観察を実行するために２１日まで続けた。

体重増減があるかどうか確証するために、動物の体重は実験の開始で記録し、同様に前記物質を投与した後可能であれば７日目、１４日目及び２１日目にも記録した。

実験の終了時、動物は、頭蓋骨を頭蓋骨の底部及び脊椎管に圧力を適用することによって脊椎から分離するものである頸椎脱臼によって屠殺した。この方法では、脊髄が脳から分離されるので、痛みの感覚はない。

実験の終了まで生存していた全ての動物に対して剖検を行った。実験中に死亡した動物の場合、それらの臓器の色、サイズ及び重量を評価した。

臓器の顕微鏡的解析では、前記抽出物（実施例４）を２，０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与したグループＩマウスにおいて目に見える変化は発見されなかった。得られた結果より、死亡及び臨床的徴候もなく、顕微鏡的変化も観察されず、臓器における毒性の証拠も発見されなかったので、２，０００ｍｇ／ｋｇ．ｐ．ｃ．の用量での前記抽出物の無毒が示された。

要約すると、限界用量法は、凍結乾燥させた水性抽出物実施例４は、経口的に投与された２，０００ｍｇ／ｋｇの用量では死亡を引き起こさなかったことが示された。従って、凍結乾燥させた水性抽出物実施例４は、非毒性（ＮＯＮ−ＴＯＸＩＣ）ＡＴＣ_０として分類され、これは限界用量法を通じて分類不能という意味である。

急性毒性クラス（ＡＴＣ）テスト
実施例４の抽出物及びコントロール物質（生理食塩水）は、以下の条件：
種：アルビノラット（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｖｅｒｇｉｃｕｓ）
近交系：Ｈｏｌｔｚｍａｎｎ
動物の数：実験群当たり３匹の動物
性別：雄及び雌
体重：１２０〜１６０ｇ
グループＩ（処理群）：これらの動物には、２，０００ｍｇ／ｋｇの用量の実施例４の抽出物を投与
グループＩＩ（コントロール）：これらの動物には、溶媒或いは生理食塩水（抽出物容積と同量）を投与
に従って、胃内カテーテルを用いて経口的に投与した。

この実験は、１週間に亘る隔離を受けた雄及び雌ラットを用いて実行し、各性別の３匹の動物で構成される２つのグループへ分け、重量を測定し、識別目的でマーキングした。評価前に、動物は１２時間絶食させ；次に実施例４の抽出物及びコントロール物質を用量表に従って両グループに投与した。前記物質が投与された後すぐに、全身／臓器レベルでの毒性徴候を見るために：自律性、行動、感覚、神経筋、呼吸、視覚、胃腸、泌尿器、及び体重などの他の項目を前記動物で観察した。動物の体重は、前記物質が投与された後７日目及び１４日目に記録した。

１４日後、前記動物は、動物実験の倫理原則に従って屠殺し；その後以下の臓器：心臓、腎臓、肝臓、脾臓、胃、肺、脳、卵巣及び精巣のサイズ、色及び一貫性を解析するために顕微鏡的研究を行った。前記臓器の顕微鏡的解析では、前記抽出物を２，０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与された場合、目に見える変化は発見されなかった。

得られた結果より、死亡及び臨床的徴候もなく、顕微鏡的変化も観察されず、臓器における毒性の証拠が発見されなかったので、２，０００ｍｇ／ｋｇ実施例４の用量での前記抽出物の無毒が示された。従って、急性毒性クラス法に従うと、凍結乾燥させた水性抽出物実施例４は、経口的に投与された２，０００ｍｇ／ｋｇの用量では死亡を引き起こさなかった。従って、凍結乾燥させた水性抽出物実施例４は、急性毒性クラス法を通じて分類不能であることを意味する非毒性（ＮＯＮ−ＴＯＸＩＣ）ＡＴＣ_０として分類される。

非管理臨床研究を１０人の成人白人患者（５人の男性及び５人の女性、年齢は３７歳〜５８歳の間）、彼ら全員は慢性Ｃ型肝炎と診断されており、その内３人はＣ型に加えてＢ型肝炎も患っている、に対して行った。彼ら全員は慢性肝炎の症状を示しており、数人は以前抗ウイルス療法を受けており、結果は良くなかった。病歴より、ウイルス感染の推測される時間は、４〜３０年の間で異なっていた。

病歴に従って、症候性疾患の期間は１〜１２年の範囲であった。各患者の状態の評価は、彼らの病歴（症状及び徴候を含む）、さらに実施例４で使用された前記組成物での治療の開始時及び２８日後に行った血清学的研究、生化学的研究及び超音波研究を通じて実行した。

Ｃ型肝炎の存在は、第２世代Ｅｌｉｓａシステムを用いて、抗−ＨＣＶの検出を介して同定した。Ｂ型肝炎の存在は、表面抗原（ＨＢｓ Ａｇ）及びコア抗原（ＨＢｃ Ａｇ）の解析を介して確認した。肝臓病学的障害は、ＨＣＶ ＦＩＢＲＯＳＵＲＥ（５５０１２３）を介して評価した。研究は３次元超音波を用いて行い、肝臓の容積、その辺縁の特徴、及び肝実質の超音波変化を決定した。門脈の特徴、脾臓、及び腹水の存在の判定も、本研究内に含まれていた。

慢性Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎によってもたらされた変化の生化学的研究は、４つの基準：（１）肝臓の合成能を測定するテスト；（２）肝内閉塞を引き起こす線維化によって引き起こされた変化を測定するテスト（ビリルビン及びホスファターゼレベルの評価）；（３）肝細胞癌を評価するためのテスト（グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ）、グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ）、ガンマ−グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）、及びアルファ−フェトプロテイン（ＡＦＴ））を含む肝細胞における壊死−炎症活性を測定するテスト；及び（４）肝臓の解毒機能を測定するテスト（アンモニアの測定）、に基づいている。

治療の前に、全身違和感、疲労、及び関節疼痛及び痛みなどの症状は１０人の患者の全員（１００％）に観察された；うつは９０％で観察され、筋肉痛は患者の８０％が感じており、集中力の欠如及び睡眠障害はそれぞれ患者の６０％及び５０％に見られた。頭痛は患者の３０％で観察された。消化不良（腹部不快感及び／若しくは胃液酸性）などの胃腸症状は、全例の６０％で観察された；嘔気は患者の５０％で見られ、腸管機能不全は４０％に達した；一方、胃腸障害、膨満感、及び腹部痛は、全例の３０％で報告された。臨床研究によって、最も頻繁な所見は触診に対する腹部痛、特に右季肋部及び上胃部の腹部痛であり、これは全例の７０％に観察され、黄疸及び触知可能な肝臓は患者の２０％に見られた一方、腹水、触知可能な脾臓、出血斑、及び下肢浮腫は１０％で発現した。

Ｃ型肝炎を患った１０人の患者のクオリティーオブライフ（つまり健康）に対する実施例４での治療の成功のレベルを決定するために、治療の心理学的、生物学的及び臨床効果も記録した。健康クオリティーオブライフアンケート（ＨＱＬＱ）は、ＳＦ−３６レポートの一般的指標グループに基づいたクオリティーオブライフを測定する有効手段であり、これは８つのパラメータのセットから成る。これらのパラメータは、持久力（ＲＰ）、身体的疼痛（ＢＰ）、全般的な健康の認知（ＧＨ）、バイタリティー（ＶＴ）、社会生活機能（ＳＦ）、感情的要素による制限（ＲＥ）及びメンタルヘルス（ＭＨ）を測定し、身体的構成要素サマリー（ＰＣＳ）及び精神的構成要素サマリー（ＭＣＳ）を開発するためのパラメータとして収集し使用した。

治療前の評価では、一般人口における２９％と比較して、全ての患者は１マイル以上のウォーキングが困難であり、一般人口における７．１％と比較して、５０％の患者は階段上りが困難であり、一般人口における１４．１％と比較して、５５．５％の患者が１００ヤードのウォーキングに限界を示したことが示され：一般人口の４５％と比較して、１００％の患者が仕事において困難を有していると言っており；一般人口の９．５％と比較して、実験された患者の３０％は痛みが仕事の能力を妨げていると述べており；一般人口の１３．１％と比較して、９０％の患者は健康状態が「普通」或いは「不良」と報告していた。全体的に、慢性Ｃ型肝炎を患った１０人の患者の健康に関連したクオリティーオブライフは実質的に損なわれていた。

１０人全ての患者は、１４０ｍｇの実施例４の組成物で、１日３用量で２８日間治療した。患者の食事は変更された；しかし過剰な脂肪消費は避け、アルコール摂取もなかった。実施例４の組成物での治療２８日後に、以下の変化が観察された。

超音波検査において９０％の患者で著しい変化が見られた。６人において、治療前に行った解読と比較して拡散エコー輝度における減少、及び肝臓及び脾臓のサイズの減少が見られた。３人において、最初のコントロール解読と比較した場合、エコー輝度は安定した徴候を示しており、１人の患者はエコー輝度及び腹水の増加が見られ悪化した。

実施例４の組成物での治療後の臨床的評価によって、平均で６０％〜８０％の全身症状の減少が見られ、全身違和感は７０％減少し、骨−関節痛、重度疲労は６０％減少し、うつ及び骨−筋肉痛はそれぞれ６０％及び５０％減少し、集中力の欠如及び睡眠障害は４０％及び２０％に減少した。これらの全身症状をまだ患っている患者は、その強度の減少を経験していた。この研究ではさらに、胃腸症状の減少も示された。消化不良及び腸管機能不全は３０％減少し；胃腸障害は２０％減少し、嘔気は１０％減少した一方、腹痛はあらゆる例で存在しなかった。胃腸不快感を患い続けた患者は、強度が減少したと報告した。実施例４の組成物での治療が完了した場合、右季肋部を触知した時の痛みが２０％減少した。黄疸、直値可能な肝臓、腹水、下肢浮腫、出血斑及び触知可能な肝臓などの他の徴候は、それぞれ２０％及び１０％で変化せずに残った。

健康に関連したクオリティーオブライフに対する研究は、健康クオリティーオブライフアンケート（ＨＱＬＱ）を通じて集められた情報の基づいており、これはＳＦ−３６レポートからの遺伝的パラメータのセットを使用している。このレポートは、米国における一般人口から集められたデータから得られた標準のセットを使用している。これらの標準は平均して１０の標準偏差で５０ポイントである；高スコアは健康の良い状態を示唆している。クオリティーオブライフ研究によって、治療前、１０人の患者のクオリティーオブライフは実質的に損なわれていたことが示された。しかしながら、実施例４の組成物での２８日間の治療後に実行した評価では、６人のＨＱＬが正常或いは正常より高いレベル（５０以上）と報告され；３人の患者ではＨＱＬがほぼ正常レベル（ＳＦ−３６スケールにおけるいくつかのポイントはほぼ５０以上であり、他のいくつかはわずかに５０以下であった）に回復したことが示された。わずか１例で低い健康クオリティーオブライフスコアを保持した。

治療前（初期コントロール記録）及び実施例４の組成物での治療２８日後に実行した肝機能の生化学的テストでは、治療後、３人の患者がコリンエステラーゼレベルの実質的な増加（７１．１％〜８１．１％の間）を経験したことが示され；２例において中程度の増加（６２．１。％〜５４．９％の間）が見られ；４例において３４％〜４０％の増加が見られ；１例で１５．７％の最小増加が示された。従って、患者の９０％がこの酵素を合成する正常能力を有し、これは肝細胞の機能的回復を示唆するものである。プロトロンビン濃度は、治療後４例で（２４．８％〜３３．３％の間）増加し、別の４例では中程度増加（８．８％〜１９．２％の間）が見られた；１人の患者では０．５％のわずかな減少であり、他の例では９．０％の減少が見られた。全体として、７０％の患者は正常レベルに到達し、肝細胞における機能的回復の証拠が示された。

初期コントロール（治療前）時及び最終コントロール（実施例４の組成物での治療後２８日）時のプレ−アルブミン測定値の比較によって、３人の患者で１９．５％〜２６．９％の間の有意な増加が見られ、他の３人の患者において０．０％〜５．０％のわずかな差異が見られた一方、他の４例では１８．０％〜２８．２％の間の減少を経験したことが示された。従って、１０人の患者の内７人は正常レベルに到達した一方、治療の開始時に４人の患者のみに肝細胞機能の回復を示唆する正常測定値が見られた。

肝内閉塞（胆汁うっ滞）を測定するためのテスト；初期コントロール時及び実施例４の組成物での治療の最終コントロール時の間でのビリルビン測定値の比較も実行し、これによって最初に正常レベルより高いビリルビン値を有していた３人の患者においてそれぞれ３６．９％、１５．４％及び４．６％の減少が見られた。最初に正常レベルより高値を有していた１人の患者では、２３．３％の増加が報告された。他の６例では、最初正常レベルより高い値を有しておらず、治療によって変化が見られなかった。初期コントロール時及び実施例４の組成物での治療の最終コントロール時の間でのアルカリホスファターゼ測定値の比較において、治療前に正常レベルより高い値を示した１人の患者で２３．９％の増加が見られた。他の９人の患者は正常レベルのままであった。

炎症及び肝障害の指標と関連して、初期コントロール時及び実施例４の組成物での治療の最終コントロール時の間でのＧＰＴ測定値の比較において、この要素の正常レベルより高い値を示していた６人の患者において６．２％〜８４．７％の間の減少が見られた。最初正常レベルより高い値を示していた他の２人の患者は、１６．１％及び５７．５％の増加を報告し、他の２例では正常レベルを保持していた。初期コントロール時及び実施例４の組成物での治療の最終コントロール時のＧＯＴ測定値の間での比較において、最初正常レベルより高い値を示していた５人の患者において３．８％〜７４．３％の間の減少が見られた。他の３例は、治療前後で正常レベルを示していた。

初期コントロール時及び実施例４の組成物での治療の最終コントロール時のＧＧＴ測定値の間での比較において、最初この要素の正常レベルより高い値を示していた３人の患者において１１．３％〜４８．６％の間の減少が見られた；２人の他の患者はそれぞれ２．１％及び５．７％の増加を報告し、他の５例は正常レベル内を維持した。初期コントロール時及び実施例４の組成物での治療の最終コントロール時のＡＦＴ測定値において、９人の患者は正常値で治療を開始し；８人は治療終了時でも正常であり、１人はわずかな増加（８．５％）を経験した；この物質の高レベルの状態で治療を開始した残りの患者は、高レベルを維持した。

肝細胞の解毒能力を評価するために、アンモニアレベルも記録した。初期コントロール時及び実施例４の組成物での治療の最終コントロール時のアンモニア測定値において、９人の患者は正常レベルで開始し終了したが、本研究の開始時に正常レベルより高い値を示した他の１人は正常レベル以上の値で終了した。

初期コントロール時及び実施例４の組成物での治療の最終コントロール時のトランスフェリン測定値において、最初正常レベルより高い値を示していた１人の患者は、正常レベルで治療を終了した；最初正常レベルより高い値を示していた２人の患者は、正常レベル以上の値を継続し、正常レベルで開始した患者は正常限界値内を維持した。

要約すると、実施例４の組成物での２８日間治療後に実行した評価において、患者において観察された症状の有意な減少が見られ、肝疾病指標における中程度の改善が見られ、肝細胞障害を測定する酵素における有意な改善が見られた。肝障害の証拠を有した患者群において、エコー超音波検査によってと同様に障害の指標における減少が見られた。患者（彼／彼女）の症候、血液学的変化或いは他の合併症の増加を示した患者はいなかった。活動性肝炎の証拠を有していた患者の増悪は、進行性線維症（肝硬変）を有する患者より改善された。

臨床試験より得られた結果より、本発明のハーブ組成物は肝機能を改善し、さらに肝細胞の再生及び増殖特性も改善することが示された。これらの組成物は、それらはウイルス感染によって引き起こされる有害な効果、或いは肝臓機能不全を誘導する他の薬剤の作用を予防する或いは最小化するので、予防的に使用される。従って、本発明のハーブ組成物は、ウイルス感染、自己免疫反応、薬剤の摂取、異物或いは毒素によって引き起こされる肝障害の治療に有用である。

実施例４の組成物は、抗ウイルス治療を行っていない、４年のウイルス摂取期間及び１年の疾病期間を有する、非線維化状態の慢性Ｂ型及びＣ型肝炎を患った４６歳女性患者に対してテストした。実施例４の組成物は、１日１４０ｍｇ用量で３回、２８日間経口的に投与した。患者の臨床症候はコントロールされており、超音波検査及び生化学的解析は治療前及び治療後２８日で行った。

２８日間の実施例４の組成物での治療によって、治療開始前に前記患者に見られた全身症状（全身違和感、重度の疲労、睡眠障害、うつ、関節及び筋肉痛）を除去することに成功した。加えて、治療によって、消化不良及び触診による痛みのような胃腸症状が消失した。

２８日目に行った超音波コントロールでは、治療前に患者が示していた拡散エコー輝度の減少において好ましい進展が見られた。

生化学的解析は表３に示した。

実施例４の組成物での治療は、総ビリルビン、直接ビリルビン、間接ビリルビン、ＡＦＰ、アンモニア、ＴＮＦアルファ及び血小板測定の正常レベルに影響を与えなかった。

この実施例における結果において、実施例４の組成物はＢ型及びＣ型肝炎同時感染によって引き起こされた肝障害を軽減できることが示された。

実施例４の組成物は、抗ウイルス治療を行っていない、１５年のウイルス接種期間及び５年の疾病期間を有する、非線維化状態の慢性Ｃ型肝炎を患った４７歳女性の患者に対してテストした。実施例４の組成物は、１日１４０ｍｇ用量で３回、２８日間経口的に投与した。患者の臨床症候はコントロールされており、超音波検査及び生化学的解析は治療前及び治療後２８日で行った。

２８日間の実施例４の組成物での治療によって、治療開始前に前記患者に見られた全身症状（全身違和感、睡眠障害、関節痛）を除去することに成功した。加えて、実施例４の組成物での治療は、筋肉痛及び頭痛のような全身症状、さらには嘔気、腸管機能不全及び触診による痛みのような胃腸症状も減少或いは除去した。

２８日目で行った超音波検査では、治療前に患者が示していた拡散エコー輝度の減少を示した。

生化学的解析は表４に示した。

実施例４の組成物での治療は、治療前に正常であった、総ビリルビン、直接ビリルビン、間接ビリルビン、アルカリホスファターゼ、ＧＧＴ、ＡＦＰ、アンモニア、ＴＮＦアルファ及び血小板測定のレベルに影響を与えなかった。

この実施例の結果より、実施例４の組成物は、Ｃ型肝炎感染によって誘導された肝障害を軽減できることが示された。

本発明の前記属のヘキサン及び含水アルコール抽出物の植物化学的特性は、次の通りに得られた。各関連種の選択された器官（ｏｒｇａｎｓ）のそれぞれ１２５ｇのサンプルを採取した。ヘキサン（無極性溶媒）は、室温での完全抽出を実行するために使用し、４８時間毎に溶媒を新しくした。ヘキサン抽出物は、低圧ロートエバポレータ過程において前記溶媒を除去することによって得た。次にヘキサン抽出物の残留物をエタノール−水（７０：３０）で処理し、完全抽出を実行した。その後、産物が完全に乾燥するまで、エタノール−水溶媒を除去した。

前記種に存在する二次代謝物の化学基を決定するために、植物化学的特性は、Ｃｈｈａｂｒａ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｔａｎｚａｎｉａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｌａｎｔｓ．Ｊ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９８４）１１（２）：１５７−７９（これはこの参照によって本明細書に組込まれる）によって記載された方法論に従って得た。アルカロイドのみが塩基性培養液での抽出を必要とした。イヌヂシャ属の花、バンレイシ属の葉、及びウコン属の根の植物化学的特性は、それぞれ表５、６及び７に示した。

表５におけるイヌヂシャ属の花から得られた結果より、この種の花サンプルからの含水アルコール抽出物におけるフェノール、タンニン、ラクトン及びクマリンの強い存在が示された。

上記の患者研究において使用された実施例４の組成物の錠剤は、１４０ｍｇの実施例４の組成物と共に３００−ｍｇコーティング錠剤を与えるように処方した。

錠剤組成物は表８に示した。

本実施例の組成物はさらに、表９に示したようなカプセル（３００ｍｇ）としても処方され得る。

最終的に、本発明の組成物の懸濁液も以下のように処方され得る。風味付けされた懸濁液は、１５ｍｌ用量（１スプーン）当たり１４０ｍｇのハーブ組成物を提供するように、１％の本発明のハーブ組成物で製造した。懸濁液の組成物は表１０に示した。

処方は、Ｇｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ（ＢＰＬ）ガイドラインに従って製造した。

好ましくは、上述した３つの処方は、１日３回、食事の３０〜６０分前に投与される。

薬学的処方は、その中の有効成分が素早く或いはゆっくりと放出され得るように、液体、固形及び半固形形態で本発明のハーブ組成物を含むことができる。本発明の薬学的処方の投与は、徐放或いは急速放出方法若しくは堆積を通じて、単回、複数回で、経口、直腸、静脈内、筋肉内、皮下組織、局所的或いは他の方法を通じてなされ得る。本発明は、本分野の当業者によって理解される様々な他の形態で具体化される。

本発明は、好ましい実施例となると現在考えられることを参照しながら記載した一方、本発明は開示された実施例に限定されるものではないことが理解される。それとは反対に、本発明は、添付された請求項の観点及び範囲内に含まれる様々な修飾及び同等なアレンジをカバーすることを意図される。

全ての刊行物、特許及び特許明細書は、各それぞれの刊行物、特許或いは特許明細書がその全体が参照によって取り込まれることを特別に及び個別に意図されたかのように、その全体がこの参照によって同程度に本明細書に組込まれる。本明細書における用語が、参照によって本明細書に組込まれた文書において異なって定義されると見出された場合、本明細書で提供された定義は、その用語に対する定義の代わりになるものである。

Claims (16)

1. 肝障害を治療するためのハーブ組成物であって、肝保護作用の性質を有するＣｏｒｄｉａ ｌｕｔｅａ（ムユヨ）を有するものである、ハーブ組成物。
2. 請求項１記載のハーブ組成物において、さらに、Ａｎｎｏｎａ ｍｕｒｉｃａｔａ（トゲバンレイシ）、或いはＣｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ（ウコン）の少なくとも１つ、若しくはその両方を有するものである、ハーブ組成物。
3. 請求項１記載のハーブ組成物において、前記Ｃｏｒｄｉａ ｌｕｔｅａ（ムユヨ）の花が使用されるものである、ハーブ組成物。
4. 請求項３記載のハーブ組成物において、さらにＡｎｎｏｎａ ｍｕｒｉｃａｔａ（トゲバンレイシ）の葉或いはＣｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ（ウコン）の根、若しくはその両方を有するものである、ハーブ組成物。
5. 肝障害を治療するためのハーブ組成物であって、肝保護作用の性質を有するＣｏｒｄｉａ ｌｕｔｅａ（ムユヨ）の抽出物を有するものである、ハーブ組成物。
6. 請求項５記載のハーブ組成物において、さらに、Ａｎｎｏｎａ ｍｕｒｉｃａｔａ（トゲバンレイシ）の抽出物、或いはＣｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ（ウコン）の抽出物、若しくはその両方を有するものである、ハーブ組成物。
7. 請求項６記載の組成物において、前記Ｃｏｒｄｉａ ｌｕｔｅａ（ムユヨ）の抽出物はその花からによるものであり、前記Ａｎｎｏｎａ ｍｕｒｉｃａｔａ（トゲバンレイシ）抽出物はその葉からによるものであり、及び前記Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ（ウコン）の抽出物はその根からによるものである、ハーブ組成物。
8. 請求項７記載のハーブ組成物において、ムユヨの花、トゲバンレイシの葉、及びウコンの根の抽出物が全て、それぞれ１：１：１〜８：１：１の重量比で前記組成物に存在するものである、ハーブ組成物。
9. 請求項７記載のハーブ組成物において、ムユヨの花、トゲバンレイシの葉、及びウコンの根の抽出物が全て、それぞれ１：０．０２５〜１：０．０２５〜１の重量比で前記組成物に存在するものである、ハーブ組成物。
10. 請求項７記載のハーブ組成物において、ムユヨの花、トゲバンレイシの葉、及びウコンの根の抽出物は全て、それぞれ８：１：１の重量比で前記組成物に存在するものである、ハーブ組成物。
11. 請求項５〜１０いずれか一つに記載のハーブ組成物において、前記抽出物は含水アルコール抽出物である、ハーブ組成物。
12. 患者における肝障害の治療或いは予防のための薬剤の調製における、治療上有効な量の請求項１〜１１に記載されたハーブ組成物の使用。
13. 請求項１２記載の使用において、前記肝障害は、ウイルス感染によって引き起こされるものである、使用。
14. 請求項１３記載の使用において、前記ウイルス感染は、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、或いはその両者の組み合わせによって引き起こされるものである、使用。
15. 請求項１２記載の使用において、前記肝障害は、非ウイルス性肝炎である、使用。
16. 請求項１２記載の使用において、前記肝障害は、肝臓の線維化或いは肝硬変である、使用。