JP5463075B2

JP5463075B2 - Method for producing tyrosinase activity inhibitor

Info

Publication number: JP5463075B2
Application number: JP2009128842A
Authority: JP
Inventors: 健二尾関
Original assignee: Kanazawa Institute of Technology (KIT)
Current assignee: Kanazawa Institute of Technology (KIT)
Priority date: 2009-05-28
Filing date: 2009-05-28
Publication date: 2014-04-09
Anticipated expiration: 2029-05-28
Also published as: JP2010273598A

Description

本発明は、ヘミセルロース含有材料を酵素または麹菌を用いて処理することを特徴とするチロシナーゼ活性阻害剤の製造方法、該方法により得ることができるチロシナーゼ活性阻害剤、それを含むメラニン色素生成抑制剤、美白用化粧料および食品の褐変防止剤に関する。 The present invention relates to a method for producing a tyrosinase activity inhibitor characterized by treating a hemicellulose-containing material with an enzyme or koji mold, a tyrosinase activity inhibitor obtainable by the method, a melanin pigment production inhibitor comprising the same, The present invention relates to whitening cosmetics and food browning inhibitors.

チロシナーゼは、アミノ酸であるチロシンの酸化酵素である。チロシンは、チロシナーゼにより、チロシン→ドーパ（Ｌ−ＤＯＰＡ）→ドーパキノンへと酸化される。ここで生成したドーパキノンは、化学的に反応性が高く、何段階かの自動酸化過程で、赤色色素であるドーパクロムを経て、黒褐色のポリマーであるメラニン色素となる。メラニンはシミ、ソバカスおよびアザの原因物質である沈着色素である。このため、チロシナーゼ反応を特異的に阻害することができれば、シミやソバカスの原因である、異常なメラニン産生を阻止することが可能と考えられる（非特許文献１）。また、チロシナーゼは果実や野菜などの食品の褐変現象の原因の１つでもある。したがって、チロシナーゼ反応を抑制することにより食品の褐変を抑制することが可能と考えられる。 Tyrosinase is an oxidase of tyrosine, which is an amino acid. Tyrosine is oxidized by tyrosinase from tyrosine → dopa (L-DOPA) → dopaquinone. The dopaquinone produced here is chemically highly reactive, and in several stages of auto-oxidation, it passes through the red pigment, dopachrome, to become a melanin pigment, which is a dark brown polymer. Melanin is a deposited pigment that is the causative agent of stains, buckwheat and aza. For this reason, if the tyrosinase reaction can be specifically inhibited, it is considered possible to prevent abnormal melanin production, which is the cause of spots and freckles (Non-patent Document 1). Tyrosinase is also one of the causes of browning in foods such as fruits and vegetables. Therefore, it is considered possible to suppress browning of food by suppressing the tyrosinase reaction.

一方、穀物などの食品を加工・製造した際、副産物として排出される、米ヌカ、小麦フスマは食物繊維質などの豊富な栄養成分を多く含んでいる。しかし、家畜等への飼料や土壌の改良剤などへの使用のみに留まっており、現状として十分な有効活用がなされていない（非特許文献２）。米ヌカ、小麦フスマの食物繊維は、主に植物細胞壁の構成成分であるセルロース、ヘミセルロース、リグニンの３つの成分から構成されている。なかでも、ヘミセルロースは、米ヌカ、小麦フスマ中の食物繊維の主要成分であり、セルロース以外の糖を総称する。これらの糖は多様な構成をしており、結合様式も複雑になっている。細胞壁の主要成分であるセルロースと水素結合、リグニンと共有結合などを形成しており、細胞壁を補強する働きをしている。骨格となる主鎖の糖に側鎖の糖などが結合した構造をしており、それを分解する酵素のヘミセルラーゼは種類が非常に多い。これまでに、ヘミセルラーゼにより分解されて生じたアラビノースとキシロースが血糖値を抑制する効果や抗酸化能を有することは知られていたが、チロシナーゼ活性の阻害に関与することは知られていない。 On the other hand, rice bran and wheat bran, which are discharged as by-products when foods such as grains are processed and manufactured, contain abundant nutrients such as dietary fiber. However, it is only used for feeds for livestock and the like, soil improvers, etc., and has not been effectively utilized as it is (Non-patent Document 2). The dietary fiber of rice bran and wheat bran is mainly composed of three components of cellulose, hemicellulose, and lignin, which are constituents of plant cell walls. Among them, hemicellulose is a main component of dietary fiber in rice bran and wheat bran, and is a generic term for sugars other than cellulose. These sugars have various configurations, and the binding mode is also complicated. It forms hydrogen bonds with cellulose, which is the main component of the cell wall, and covalent bonds with lignin, and functions to reinforce the cell wall. It has a structure in which sugars in the side chain are bound to sugars in the main chain that is the backbone, and there are many types of hemicellulases that are enzymes that decompose them. So far, it has been known that arabinose and xylose produced by degradation by hemicellulase have an effect of suppressing blood glucose level and an antioxidant ability, but are not known to be involved in inhibition of tyrosinase activity.

青森県工業総合研究センター研究成果発表会要旨集：おから有用利用への取り組み,3,(2005)Aomori Prefectural Industrial Research Center Abstract of Research Results: Okara Useful Use, 3, (2005) 尾関健二,抜刷：発酵・醸造食品の最新技術と機能性,シーエムシー出版刊,4,248,(2006)Kenji Ozeki, reprint: The latest technology and functionality of fermented and brewed foods, published by CMC Publishing, 4,248, (2006)

したがって、本発明の解決課題は、食品廃棄物とされ、使用が限られていた米ヌカ、小麦フスマなどのヘミセルロース含有材料を利用して、チロシナーゼ活性を阻害する方法ならびにメラニン生成を抑制する薬剤を提供することである。 Therefore, the problem to be solved by the present invention is to use a hemicellulose-containing material such as rice bran and wheat bran that has been used as food waste and limited use, and a method for inhibiting tyrosinase activity and a drug that suppresses melanin production. Is to provide.

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った。そして、驚くべきことに、ヘミセルロースを多く含む米ヌカ、小麦フスマなどの原料を、ヘミセルロース分解活性を有する酵素や麹菌を用いて処理した処理物がチロシナーゼ活性を阻害することを見出し、チロシナーゼ活性の阻害方法およびチロシナーゼ活性阻害剤を完成させた。 The inventors of the present invention have intensively studied to solve the above problems. Surprisingly, it was found that a processed product of raw materials such as rice bran and wheat bran containing a lot of hemicellulose using hemicellulose-degrading enzyme or koji mold inhibits tyrosinase activity, and inhibits tyrosinase activity. The method and tyrosinase activity inhibitor were completed.

すなわち、本発明は
（１）ヘミセルロース含有材料を酵素または麹菌を用いて処理することを特徴とする、チロシナーゼ活性阻害剤の製造方法、
（２）ヘミセルロース含有材料が小麦フスマまたは米ヌカである、（１）記載の方法、
（３）ヘミセルロース含有材料が小麦フスマであり、酵素がスミチームＡＲＳ、マセロチームＡおよびＯＰＴＩＭＡＳＥＣＸ７２Ｌからなる群より選択されるものである、（２）記載の方法、
（４）ヘミセルロース含有材料が米ヌカであり、酵素がペクチナーゼＧ「アマノ」、ヘミセルラーゼ「アマノ」９０およびマセロチームＡからなる群より選択されるものである、（２）記載の方法、
（５）麹菌がβ−グルコシダーゼまたはキシラナーゼ高生産麹菌である、（１）または（２）記載の方法、
（６）ヘミセルロース含有材料を酵素または麹菌を用いて処理する前に加熱処理するものである、（１）〜（５）のいずれか１つ記載の方法、
（７）加熱処理がマイクロ波を用いて行われる、（６）記載の方法、
（８）（１）〜（７）のいずれか１つ記載の方法により得ることができるチロシナーゼ活性阻害剤、
（９）（８）記載のチロシナーゼ活性阻害剤を含有するメラニン色素生成抑制剤、
（１０）（８）記載のチロシナーゼ活性阻害剤を含有する美白用化粧料、
（１１）（８）記載のチロシナーゼ活性阻害剤を含有する食品の褐変防止剤、
を提供する。 That is, the present invention is (1) a method for producing a tyrosinase activity inhibitor, characterized by treating a hemicellulose-containing material with an enzyme or koji mold,
(2) The method according to (1), wherein the hemicellulose-containing material is wheat bran or rice bran,
(3) The method according to (2), wherein the hemicellulose-containing material is wheat bran and the enzyme is selected from the group consisting of Sumiteam ARS, Maceroteam A, and OPTIMASE CX 72L.
(4) The method according to (2), wherein the hemicellulose-containing material is rice bran, and the enzyme is selected from the group consisting of pectinase G “Amano”, hemicellulase “Amano” 90, and maceroteam A.
(5) The method according to (1) or (2), wherein the koji mold is a β-glucosidase or xylanase high-producing koji mold,
(6) The method according to any one of (1) to (5), wherein the hemicellulose-containing material is heat-treated before being treated with an enzyme or koji mold.
(7) The method according to (6), wherein the heat treatment is performed using microwaves,
(8) A tyrosinase activity inhibitor obtainable by the method according to any one of (1) to (7),
(9) A melanin pigment production inhibitor containing the tyrosinase activity inhibitor according to (8),
(10) A whitening cosmetic comprising the tyrosinase activity inhibitor according to (8),
(11) A food browning inhibitor comprising the tyrosinase activity inhibitor according to (8),
I will provide a.

本発明によれば、効果的なチロシナーゼ活性抑制剤の製造方法ならびにそれにより得ることができるチロシナーゼ活性阻害剤が提供される。本発明の阻害剤を用いてメラニンの生成を抑制できるので、例えば、肌のシミ、ソバカスおよびアザ、歯茎・歯肉のメラニン色素沈着、食品の褐変などを防止することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the manufacturing method of an effective tyrosinase activity inhibitor and the tyrosinase activity inhibitor obtained by it are provided. Since the production of melanin can be suppressed by using the inhibitor of the present invention, for example, skin spots, buckwheat and aza, melanin pigmentation of gums and gums, browning of foods and the like can be prevented.

図１は、米ヌカ（マイクロ波未処理）を酵素剤または麹菌抽出液で処理した処理物におけるチロシナーゼ活性阻害測定を示す。縦軸は、チロシナーゼ活性の阻害率（％）を表す。横軸は、米ヌカを処理した酵素剤および麹菌抽出液の種類を表す。表中、「β−ｇｌｕ」はβ−グルコシダーゼ高生産麹菌抽出液、「キシラ」はキシラナーゼ高生産麹菌抽出液、「ペクチＧ」はペクチナーゼＧ「アマノ」、「ヘミセル」はヘミセルラーゼ「アマノ」９０、「スミチＰＸ」はスミチームＰＸ、「スミチＡＲＳ」はスミチームＡＲＳ、「スミチＡＣＨ−Ｌ」はスミチームＡＣＨ−Ｌ、「７２Ｌ」はＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）ＣＸ７２Ｌ、「マセロＡ」はマセロチームＡ、「ペクチＳＳ」はペクチナーゼＳＳを表す（以下、略記は同じものを意味する）。FIG. 1 shows tyrosinase activity inhibition measurement in a treated product of rice bran (untreated microwave) with an enzyme agent or a koji mold extract. The vertical axis represents the inhibition rate (%) of tyrosinase activity. The horizontal axis represents the type of enzyme agent and koji mold extract treated with rice bran. In the table, “β-glu” is β-glucosidase high-producing gonococcal extract, “xyla” is xylanase high-producing gonococcal extract, “Pecti G” is pectinase G “Amano”, “Hemicell” is hemicellulase “Amano” 90 , “Sumichi PX” is Sumi Team PX, “Sumichi ARS” is Sumi Team ARS, “Sumichi ACH-L” is Sumi Team ACH-L, “72L” is OPTIMASE® CX 72L, “Macero A” is Macero Team A, “ "Pecti SS" represents pectinase SS (hereinafter abbreviations mean the same). 図２は、米ヌカ（マイクロ波処理済）を酵素剤または麹菌抽出液で処理した処理物におけるチロシナーゼ活性阻害測定を示す。縦軸は、チロシナーゼ活性の阻害率（％）を表す。横軸は、米ヌカを処理した酵素剤および麹菌抽出液の種類を表す。FIG. 2 shows tyrosinase activity inhibition measurement in a treated product of rice bran (microwave-treated) with an enzyme agent or a koji mold extract. The vertical axis represents the inhibition rate (%) of tyrosinase activity. The horizontal axis represents the type of enzyme agent and koji mold extract treated with rice bran. 図３は、小麦フスマ（マイクロ波未処理）を酵素剤または麹菌抽出液で処理した処理物におけるチロシナーゼ活性阻害測定を示す。縦軸は、チロシナーゼ活性の阻害率（％）を表す。横軸は、小麦フスマを処理した酵素剤および麹菌抽出液の種類を表す。FIG. 3 shows tyrosinase activity inhibition measurement in a processed product obtained by treating wheat bran (untreated with microwave) with an enzyme agent or koji mold extract. The vertical axis represents the inhibition rate (%) of tyrosinase activity. The horizontal axis represents the type of enzyme agent and koji mold extract treated with wheat bran. 図４は、小麦フスマ（マイクロ波処理済）を酵素剤または麹菌抽出液で処理した処理物におけるチロシナーゼ活性阻害測定を示す。縦軸は、チロシナーゼ活性の阻害率（％）を表す。横軸は、小麦フスマを処理した酵素剤および麹菌抽出液の種類を表す。FIG. 4 shows tyrosinase activity inhibition measurement in a processed product obtained by treating wheat bran (microwave-treated) with an enzyme agent or a koji mold extract. The vertical axis represents the inhibition rate (%) of tyrosinase activity. The horizontal axis represents the type of enzyme agent and koji mold extract treated with wheat bran. 図５は、米ヌカ（マイクロ波未処理）を酵素剤で処理した処理物における抗酸化能測定を示す。縦軸は消去率（％）を表し、横軸は米ヌカを処理した酵素剤の種類を表す。左端の「米ヌカ」は、酵素剤で処理していないコントロールを表す。FIG. 5 shows the measurement of antioxidant ability in a treated product of rice bran (untreated microwave) with an enzyme agent. The vertical axis represents the erasure rate (%), and the horizontal axis represents the type of enzyme agent treated with rice bran. The leftmost “rice bran” represents a control not treated with an enzyme agent. 図６は、小麦フスマ（マイクロ波未処理）を酵素剤で処理した処理物における抗酸化能測定を示す。縦軸は消去率（％）を表し、横軸は小麦フスマを処理した酵素剤の種類を表す。左端の「小麦フスマ」は、酵素剤で処理していないコントロールを表す。FIG. 6 shows the antioxidant ability measurement in the processed material which processed wheat bran (microwave unprocessed) with the enzyme agent. The vertical axis represents the elimination rate (%), and the horizontal axis represents the type of enzyme agent treated with wheat bran. The “wheat bran” at the left end represents a control not treated with an enzyme agent. 図７は、米ヌカ（マイクロ波処理済）を酵素剤の組み合わせで処理した処理物におけるＳＯＤ活性測定を示す。縦軸は阻害率を表し、横軸は酵素剤の組み合わせを表す。また、縦軸中、（未処理）は米ヌカをマイクロ波で前処理していないことを示し、（処理済）は米ヌカをマイクロ波で前処理したことを示す。FIG. 7 shows the measurement of SOD activity in a processed product obtained by treating rice bran (microwave-treated) with a combination of enzyme agents. The vertical axis represents the inhibition rate, and the horizontal axis represents the combination of enzyme agents. In the vertical axis, (untreated) indicates that rice bran has not been pretreated with microwaves, and (treated) indicates that rice bran has been pretreated with microwaves. 図８は、小麦フスマ（マイクロ波処理済）を酵素剤の組み合わせで処理した処理物におけるＳＯＤ活性測定を示す。縦軸は阻害率を表し、横軸は酵素剤の組み合わせを表す。また、縦軸中、（未処理）は小麦フスマをマイクロ波で前処理していないことを示し、（処理済）は小麦フスマをマイクロ波で前処理したことを示す。FIG. 8 shows the measurement of SOD activity in a treated product obtained by treating wheat bran (microwave-treated) with a combination of enzyme agents. The vertical axis represents the inhibition rate, and the horizontal axis represents the combination of enzyme agents. In the vertical axis, (untreated) indicates that wheat bran has not been pretreated with microwave, and (treated) indicates that wheat bran has been pretreated with microwave.

本発明は、１の態様において、ヘミセルロース含有材料を酵素または麹菌を用いて処理することを特徴とする、チロシナーゼ活性阻害剤の製造方法を提供するものである。本発明の方法で用いられるヘミセルロース含有材料は、ヘミセルロースを含むものであれば、いかなる植物またはその部分であってもよい。本発明に使用するヘミセルロース含有材料はヘミセルロース含有量が多いほど好ましいことはいうまでもない。好ましいヘミセルロース含有材料としては、例えば、食品廃棄物としては、小麦フスマ、米ヌカ、大豆オカラ、バガス、エンバクフスマ、コーンフスマ、ビートファイバーなどであり、食品としては、穀物の外皮、グリーンピース、いんげんなどの豆類、きくらげ、ひじきなどの海藻類およびその加工品などが挙がられ、なかでも、小麦フスマおよび米ヌカが特に好ましい。ここで、小麦フスマとは、一般に小麦粒の皮と胚芽のことをいい、ヘミセルロース、セルロース、リグニンなどを多く含む。本発明の方法において、ヘミセルロース含有材料は固形であってもよく、可溶性のものであってもよい。一般的には、本発明の方法において、酵素や生物あるいはその抽出物を含む溶液中でヘミセルロース含有材料を処理することができるが、後述するように、固形の材料に直接生物を作用させてもよい。本発明の方法は、特に、これまで廃棄されてきた食品廃棄物を新規な用途として有効に利用することができるという利点を有する。 In one aspect, the present invention provides a method for producing a tyrosinase activity inhibitor, which comprises treating a hemicellulose-containing material with an enzyme or koji mold. The hemicellulose-containing material used in the method of the present invention may be any plant or part thereof as long as it contains hemicellulose. It goes without saying that the hemicellulose-containing material used in the present invention is preferably as the hemicellulose content increases. Preferred hemicellulose-containing materials include, for example, wheat bran, rice bran, soybean okara, bagasse, oat bran, corn bran, beet fiber and the like as food waste, and foods such as cereal hulls, green peas, and beans. Peas, seaweeds such as jellyfishes and hijiki, and processed products thereof, among which wheat bran and rice bran are particularly preferred. Here, wheat bran generally refers to the skin and germ of wheat grains, and contains a large amount of hemicellulose, cellulose, lignin and the like. In the method of the present invention, the hemicellulose-containing material may be solid or soluble. In general, in the method of the present invention, a hemicellulose-containing material can be treated in a solution containing an enzyme, a living organism, or an extract thereof. However, as described later, a living organism can be directly applied to a solid material. Good. The method of the present invention has an advantage that food waste that has been disposed of so far can be effectively used as a new application.

本発明の方法は、酵素または麹菌を用いて処理する工程を含む。本発明の処理に用いられる酵素は、ヘミセルロース分解活性を有するものであればいかなる種類のものであってもよく、典型的にはヘミセルラーゼである。本明細書において、ヘミセルラーゼとは、ヘミセルロースの構成糖間の主鎖や側鎖を切断する酵素をいう。例えば、市販されているヘミセルラーゼとして、ペクチナーゼＧ「アマノ」（アマノエンザイム（株））、ヘミセルラーゼ「アマノ」９０（アマノエンザイム（株））、スミチームＰＸ（新日本化学工業（株））、スミチームＡＲＳ（新日本化学工業（株））、スミチームＡＣＨ−Ｌ（新日本化学工業（株））、ＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）ＣＸ７２Ｌ（ＧＥＮＥＮＣＯＲ（株））、マセロチームＡ（ヤクルト薬品工業（株））およびペクチナーゼＳＳ（ヤクルト薬品工業（株））などが挙げられる。ヘミセルラーゼを生物から抽出してもよく、ヘミセルラーゼ源としての生物は公知である。これらの生物の中からヘミセルラーゼ活性の高いものをスクリーニングして用いることができる。かかるスクリーニング方法は当業者に公知である。ヘミセルラーゼ活性の高い生物としては、木材腐朽菌や麹菌などが挙げられ、特に麹菌が好ましい。さらに、本発明の方法において、ヘミセルラーゼを１種のみならず２種以上併用してもよく、ヘミセルラーゼ以外の酵素と併用してもよい。また、本発明の方法において、１種のみならず２種以上の生物を併用してもよく、これらの生物をヘミセルラーゼと併用してもよい。上記酵素剤の好ましい組み合わせは、ヘミセルラーゼ「アマノ」９０とマセロチームＡ、ＯＰＴＩＭＡＳＥＣＸ７２ＬとスミチームＰＸであるが、これらだけに限定されない。これらの酵素の組み合わせにより、ヘミセルロースの主鎖だけではなく側鎖も切断することができる等、より効果的にチロシナーゼ活性阻害剤を得ることが可能となる。 The method of the present invention includes a treatment step using an enzyme or koji mold. The enzyme used for the treatment of the present invention may be of any kind as long as it has hemicellulose-degrading activity, and is typically hemicellulase. In this specification, hemicellulase refers to an enzyme that cleaves the main chain or side chain between constituent sugars of hemicellulose. For example, as commercially available hemicellulases, pectinase G “Amano” (Amanoenzyme Co., Ltd.), hemicellulase “Amano” 90 (Amanoenzyme Co., Ltd.), Sumiteam PX (Shin Nippon Chemical Industry Co., Ltd.), Sumiteam ARS (Shin Nihon Chemical Industry Co., Ltd.), Sumiteam ACH-L (Shin Nihon Chemical Industry Co., Ltd.), OPTIMASE (registered trademark) CX 72L (GENENCOR Co., Ltd.), Macero Team A (Yakult Pharmaceutical Co., Ltd.) and Examples include pectinase SS (Yakult Pharmaceutical Co., Ltd.). Hemicellulase may be extracted from an organism, and organisms as a source of hemicellulase are known. Among these organisms, those having high hemicellulase activity can be screened and used. Such screening methods are known to those skilled in the art. Examples of organisms having high hemicellulase activity include wood-rotting fungi and koji molds, and koji molds are particularly preferred. Furthermore, in the method of the present invention, not only one hemicellulase but also two or more hemicellulases may be used in combination, or an enzyme other than hemicellulase may be used in combination. In the method of the present invention, not only one species but also two or more species may be used in combination, and these organisms may be used in combination with hemicellulase. A preferred combination of the above enzyme agents is hemicellulase “Amano” 90, Macero Team A, OPTIMASE CX 72L, and Sumi Team PX, but is not limited thereto. By combining these enzymes, it is possible to obtain a tyrosinase activity inhibitor more effectively, such as being able to cleave not only the main chain but also the side chain of hemicellulose.

本発明の方法において酵素を用いる場合、ヘミセルラーゼ含有材料と酵素の配合割合は当業者が容易に決定することができる。本発明の方法において生物をヘミセルラーゼ源として用いる場合、かかる生物の抽出液をヘミセルラーゼ含有材料に作用させてもよく、あるいはかかる生物をヘミセルラーゼ含有材料にて直接増殖させてもよい。例えば、加熱処理した小麦フスマに麹菌を増殖させ、その抽出液をチロシナーゼ活性阻害剤として用いてもよい。かかる生物の抽出液を本発明の方法に用いる場合も、ヘミセルラーゼ含有材料と抽出液の配合比率は当業者が容易に決定することができる。これらの酵素あるいは生物または抽出液とヘミセルラーゼ含有材料の割合は、用いられる原料の種類や形態、酵素や麹菌の種類、処理条件などの因子により変動しうる。また、本発明の方法における処理条件、例えば、至適ｐＨ、至適温度、処理時間、ＣＯ_２濃度などは、一般に、ｐＨ３．０〜９．５や４０℃〜７０℃の温度などを例示することができるが、当業者が適宜状況に応じて決定することができる。 When an enzyme is used in the method of the present invention, the mixing ratio of the hemicellulase-containing material and the enzyme can be easily determined by those skilled in the art. When a living organism is used as a hemicellulase source in the method of the present invention, an extract of such an organism may act on the hemicellulase-containing material, or such an organism may be directly grown on the hemicellulase-containing material. For example, koji molds may be grown on heat-treated wheat bran and the extract may be used as a tyrosinase activity inhibitor. Even when such an extract of a living organism is used in the method of the present invention, the blending ratio of the hemicellulase-containing material and the extract can be easily determined by those skilled in the art. The ratio of these enzymes or organisms or extracts and hemicellulase-containing materials can vary depending on factors such as the type and form of the raw materials used, the type of enzymes and koji molds, and processing conditions. Moreover, the treatment conditions in the method of the present invention, for example, optimum pH, optimum temperature, treatment time, CO ₂ concentration, etc. generally exemplify pH 3.0 to 9.5, 40 ° C. to 70 ° C., etc. However, it can be appropriately determined by a person skilled in the art according to the situation.

さらに、本発明の方法は、ヘミセルロース含有材料が前処理される工程を含んでいてもよい。ヘミセルロースは、植物中の細胞壁を補強するための構造をしており、多様な構成糖が主鎖や側鎖などで強固でかつ複雑な結合を形成している。したがって、前処理として、かかるヘミセルロースの結合を弛緩や切断することができれば、処理の効率を高めることができる。本発明に用いることができる前処理として、例えば、電子レンジなどのマイクロ波やオートクレーブを用いた加熱処理、酸性、アルカリ性溶液などによる酸アルカリ処理、物理的な破砕処理や粉砕処理、乾燥処理、圧力処理などが有効であるが、これらだけに限定されない。電子レンジを用いるマイクロ波による前処理は、本発明においてより利便的に行うことができる。本発明の方法におけるかかる前処理は、任意選択的なものであるが、チロシナーゼ活性の阻害効率を高めるための重要な因子である。 Furthermore, the method of the present invention may include a step in which the hemicellulose-containing material is pretreated. Hemicellulose has a structure for reinforcing cell walls in plants, and various constituent sugars form strong and complex bonds with main chains and side chains. Therefore, if the hemicellulose bond can be relaxed or cut as a pretreatment, the efficiency of the treatment can be increased. Examples of the pretreatment that can be used in the present invention include heat treatment using a microwave such as a microwave oven or an autoclave, acid-alkali treatment using an acid or alkaline solution, physical crushing treatment or pulverization treatment, drying treatment, pressure treatment, etc. Although processing etc. are effective, it is not limited only to these. Preprocessing by microwaves using a microwave oven can be performed more conveniently in the present invention. Such pretreatment in the method of the present invention is optional, but is an important factor for increasing the inhibition efficiency of tyrosinase activity.

本発明は、さらなる態様において、上記製造方法により得ることができるチロシナーゼ活性阻害剤（以下、「阻害剤」と略称することがある）を提供する。本発明の製造方法
で得られる阻害剤には、主に、ヘミセルロースから分解された分子が包含される。例えば
、グルクロノキシラン、キシラン、キシログルカン、アラビナン、グルコマンナン、マン
ナン、ガラクタンなどの多糖類分子を列挙することができる。さらに本発明の工程で得ら
れる阻害剤には、上記分子が分解されて生じるキシロース、アラビノース、グルコース、
フルクトース、イノシトールなどの単糖類やそれらが結合したオリゴ糖などが含有される
。本発明の方法で得られる阻害剤は、キシロースまたはアラビノースを多く含んでいるこ
とが好ましい。本発明の方法で得られる阻害剤は、ヘミセルロースが分解されて生じる成
分以外の成分、例えば、各種ペプチド、グルテリン、グロブリン、アルブミンなどのタン
パク質、セルロースなどの糖類、リグニンなどを含んでもよく、任意にその他の成分を添
加してもよい。本発明の方法は、上記酵素や麹菌またはこれらの組み合わせにより効果的
にヘミセルロース含有材料を分解し、得られた阻害剤におけるチロシナーゼ活性の阻害効
果を利用することを最大の技術的特徴とする。
In a further aspect, the present invention provides a tyrosinase activity inhibitor (hereinafter sometimes abbreviated as “inhibitor”) obtainable by the above production method. Inhibitors obtained by the production method of the present invention mainly include molecules decomposed from hemicellulose. For example, polysaccharide molecules such as glucuronoxylan, xylan, xyloglucan, arabinan, glucomannan, mannan and galactan can be listed. Furthermore, the inhibitor obtained in the process of the present invention includes xylose, arabinose, glucose,
It contains monosaccharides such as fructose and inositol and oligosaccharides to which they are bound. The inhibitor obtained by the method of the present invention preferably contains a large amount of xylose or arabinose. The inhibitor obtained by the method of the present invention may contain components other than components generated by the decomposition of hemicellulose, such as various peptides, proteins such as glutelin, globulin, and albumin, saccharides such as cellulose, lignin, etc. Other components may be added. The method of the present invention is characterized in that the hemicellulose-containing material is effectively decomposed by the enzyme, the koji mold or a combination thereof, and the greatest technical feature is to use the inhibitory effect of tyrosinase activity in the obtained inhibitor.

本発明の方法は、必要に応じて、上記阻害剤を精製する工程を含むことができる。精製工程は、当業者間で一般的な手法で行われてよく、例えば、順相または逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過などの方法を用いて行うことができる。 The method of this invention can include the process of refine | purifying the said inhibitor as needed. The purification step may be performed by a general method among those skilled in the art, and can be performed using a method such as normal phase or reverse phase chromatography, ion exchange chromatography, gel filtration, and the like.

本発明の阻害剤は、それ自体、あるいは担体や賦形剤と組み合わせて用いることができる。さらに、本発明の阻害剤を、他の薬剤、例えば、酸化防止剤、他の酵素阻害剤、例えば、公知のチロシナーゼ活性阻害剤などと併用することもできる。 The inhibitor of the present invention can be used by itself or in combination with a carrier or excipient. Furthermore, the inhibitor of the present invention can be used in combination with other drugs, for example, antioxidants, other enzyme inhibitors, for example, known tyrosinase activity inhibitors.

チロシナーゼは、チロシンを酸化し、ドーパを生成し、さらにドーパを酸化してドーパキノンを誘導することによりメラニン合成を促進することが知られている。本発明の方法で得られる阻害剤は、チロシナーゼの活性を阻害することによりかかるチロシンおよびドーパの酸化を阻害し、これによりメラニンの生成を抑制することができる。したがって、本発明は、さらなる態様において、上記阻害剤を含有するメラニン色素生成抑制剤を提供する。本発明のメラニン色素生成抑制剤を用いて、例えば、メラニンの過剰な合成を原因とする、皮膚のシミ、ソバカスおよびアザ、歯茎・歯肉のメラニン色素沈着などを予防、抑制、改善あるいは治療することができる。本発明のメラニン色素生成抑制剤は、例えば、ローション、乳化剤、クリーム、軟膏、栄養補助食品、ドリンク、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒などの形態として、直接患部に適用でき、あるいは経口的に摂取することができる。本発明のメラニン色素生成抑制剤は、医薬組成物であってもよく、投与経路は医師が容易に選択することができる。医薬組成物として用いる場合には、適当な賦形剤または担体を用いることができ、これらは当業者に公知のものである。医薬組成物としての典型的な投与経路は経皮投与あるいは経口投与などであるが、これらの投与経路に限定されず、疾患の種類、対象の状態、標的部位などの条件に応じて適宜選択することができる。 It is known that tyrosinase promotes melanin synthesis by oxidizing tyrosine to produce dopa and further oxidizing dopa to induce dopaquinone. The inhibitor obtained by the method of the present invention inhibits the oxidation of such tyrosine and dopa by inhibiting the activity of tyrosinase, thereby suppressing the production of melanin. Therefore, this invention provides the melanin pigment production inhibitor containing the said inhibitor in the further aspect. Using the melanin production inhibitor of the present invention, for example, preventing, suppressing, improving or treating skin spots, buckwheat and aza, gingival gingival gingival melanin, etc. caused by excessive synthesis of melanin Can do. The melanin production inhibitor of the present invention can be applied directly to the affected area, for example, in the form of a lotion, emulsifier, cream, ointment, dietary supplement, drink, tablet, capsule, powder, granule, etc., or taken orally can do. The melanin pigment production inhibitor of the present invention may be a pharmaceutical composition, and the administration route can be easily selected by a doctor. When used as a pharmaceutical composition, suitable excipients or carriers can be used and these are known to those skilled in the art. A typical administration route as a pharmaceutical composition is transdermal administration or oral administration, but is not limited to these administration routes, and is appropriately selected according to conditions such as the type of disease, the state of the subject, and the target site. be able to.

本発明は、別の態様において、上記阻害剤を含有する美白用化粧料を提供する。本発明の美白用化粧料は、皮膚に直接適用できる形態、例えば、ローション、クリーム、液剤、乳液、パスタなどの形態であってもよく、経口的に摂取できる形態、例えば、ドリンク、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒などの形態であってもよい。本発明の美白用化粧料は、一般的な方法にて調合することができ、賦形剤、香料、油脂類、界面活性剤、防腐剤、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子、増粘剤、顔料、紫外線防御剤、保湿剤、ｐＨ調整剤、洗浄剤、乾燥剤、または乳化剤などの添加剤と一緒に、化粧水、洗顔料、美白剤、ＵＶケア用品、クリーム、乳液、ローション、パック剤、皮膚洗浄料、またはゲル剤などの形態とされてもよいが、これらだけに限定されない。 In another aspect, the present invention provides a whitening cosmetic containing the inhibitor. The whitening cosmetic composition of the present invention may be in a form that can be directly applied to the skin, for example, a lotion, cream, solution, emulsion, pasta, or the like, and can be taken orally, for example, a drink, a tablet, or a capsule. It may be in the form of an agent, powder, granule or the like. The whitening cosmetic composition of the present invention can be prepared by a general method, and includes excipients, fragrances, fats and oils, surfactants, preservatives, sequestering agents, water-soluble polymers, thickeners. , Pigments, UV protection agents, moisturizers, pH adjusters, detergents, desiccants, or emulsifiers, along with lotions, facial cleansers, whitening agents, UV care products, creams, emulsions, lotions, packs It may be in the form of an agent, a skin cleanser, or a gel, but is not limited thereto.

本発明は、さらなる別の態様において、上記阻害剤を含有する食品の褐変防止剤を提供する。本発明の褐変防止剤を食品または食品素材に、噴霧、浸漬、塗布などの公知の手法にて適用することができる。 In yet another aspect, the present invention provides a food browning inhibitor containing the inhibitor. The browning inhibitor of the present invention can be applied to a food or food material by a known method such as spraying, dipping or coating.

本発明の上記メラニン色素生成抑制剤、美白用化粧料あるいは食品の褐変防止剤中の本発明の阻害剤の配合量は、目的、用途、対象などによって適宜変更することができる。 The compounding quantity of the inhibitor of this invention in the said melanin pigment production inhibitor of this invention, cosmetics for whitening, or the browning prevention agent of foodstuffs can be suitably changed according to the objective, use, object, etc.

さらに、本発明の阻害剤、あるいはこれを含有するメラニン色素生成抑制剤、美白用化粧料または食品の褐変防止剤を、他の薬剤、例えば、酸化防止剤、他の酵素阻害剤、例えば、他のチロシナーゼ活性阻害剤などと併用してもよい。 Furthermore, the inhibitor of the present invention, or a melanin pigment formation inhibitor, a whitening cosmetic or a food browning inhibitor containing the same, other agents such as antioxidants, other enzyme inhibitors such as other May be used in combination with other tyrosinase activity inhibitors.

以下に実施例を示して本発明を具体的かつ詳細に説明するが、実施例は本発明を限定するものと解してはならない。 EXAMPLES The present invention will be described specifically and in detail below with reference to examples, but the examples should not be construed as limiting the present invention.

Ａ．マイクロ波による小麦フスマおよび米ヌカの前処理
本発明では、米ヌカおよび小麦フスマをマイクロ波により前処理を施したサンプルと前処理なしのサンプルを用いた。マイクロ波による処理は、簡単に説明すると、米ヌカ（大関（株））または小麦フスマ（日清製粉（株））１０ｇを三角フラスコに入れ、電子レンジを５００Ｗに設定し、米ヌカでは５０秒、小麦フスマでは５０〜６０秒間加熱することにより行った。次いで、得られた各粉末を６０℃で乾燥させた。 A. Pretreatment of wheat bran and rice bran by microwave In the present invention, a sample of rice bran and wheat bran pretreated by microwave and a sample without pretreatment were used. Briefly, the microwave treatment is performed by putting 10 g of rice bran (Ozeki Co., Ltd.) or wheat bran (Nisshin Flour Milling Co., Ltd.) into an Erlenmeyer flask and setting the microwave oven to 500 W. In wheat bran, it was performed by heating for 50 to 60 seconds. Subsequently, each obtained powder was dried at 60 degreeC.

Ｂ．有用酵素高生産麹菌抽出液の調製
本発明では、有用酵素高生産麹菌としてβ−グルコシダーゼ高生産菌（尾関ら、第７回糸状菌分子生物学コンファレンス要旨集、ｐ．７８）およびキシラナーゼ高生産菌（高木ら、第７回糸状菌分子生物学コンファレンス要旨集、ｐ．７６）の２株を用いた。上記有用酵素高生産麹菌をフスマ培地（２００ｍＬの三角フラスコにフスマ１０ｇに対して６ｍＬの蒸留水を加えオートクレーブ滅菌）に植菌し、３０℃で３日間培養した。培養液にフスマ培地抽出液緩衝液（１０ｍＭ酢酸緩衝液、ｐＨ５．０、０．５％ＮａＣｌ）５０ｍＬを添加し、３時間放置した。その後、ナイロンメッシュフィルターを用いてろ過し、５０ｍＬファルコンチューブ中に保存した。 B. Preparation of extract with high yield of useful enzyme-producing koji mold In the present invention, β-glucosidase-producing bacteria (Ozeki et al., 7th Annual Meeting of Molecular Biology Conference, p. 78) and xylanase-producing bacteria (Takagi et al., 7th Annual Meeting of Molecular Biology Conference, p. 76) was used. The above useful enzyme-producing gonorrhea was inoculated into a bran medium (autoclave sterilized by adding 6 mL of distilled water to 10 g of bran in a 200 mL conical flask) and cultured at 30 ° C. for 3 days. To the culture broth, 50 mL of a bran medium extract buffer (10 mM acetate buffer, pH 5.0, 0.5% NaCl) was added and left for 3 hours. Then, it filtered using the nylon mesh filter and preserve | saved in a 50 mL falcon tube.

Ｃ．米ヌカおよび小麦フスマにおける酵素剤または有用酵素高生産麹菌抽出液を用いた処理
本発明では、小麦フスマおよび米ヌカを処理する酵素剤（ヘミセルラーゼ）および麹菌抽出液として以下の酵素剤８種類および有用酵素高生産麹菌抽出液２種を使用した。
・ペクチナーゼＧ「アマノ」（アマノエンザイム（株））
・ヘミセルラーゼ「アマノ」９０（アマノエンザイム（株））
・スミチームＰＸ（新日本化学工業（株））
・スミチームＡＲＳ（新日本化学工業（株））
・スミチームＡＣＨ−Ｌ（新日本化学工業（株））
・ＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）ＣＸ７２Ｌ（ＧＥＮＥＮＣＯＲ（株））
・マセロチームＡ（ヤクルト薬品工業（株））
・ペクチナーゼＳＳ（ヤクルト薬品工業（株））
・β−グルコシダーゼ高生産麹菌抽出液
・キシラナーゼ高生産麹菌抽出液 C. In the present invention, an enzyme agent (hemicellulase) for treating wheat bran and rice bran extract, and the following 8 enzyme agents as extract of koji mold and Two kinds of useful enzyme high-producing koji mold extracts were used.
・ Pectinase G “Amano” (Amanoenzyme Co., Ltd.)
・ Hemicellulase “Amano” 90 (Amanoenzyme Co., Ltd.)
・ Sumi Team PX (Nippon Chemical Industry Co., Ltd.)
・ Sumi Team ARS (Nippon Chemical Industry Co., Ltd.)
・ Sumi Team ACH-L (Shin Nihon Chemical Industry Co., Ltd.)
OPTIMASE (registered trademark) CX 72L (GENENCOR CORPORATION)
・ Macero Team A (Yakult Pharmaceutical Co., Ltd.)
・ Pectinase SS (Yakult Pharmaceutical Co., Ltd.)
・ Β-Glucosidase high production koji mold extract ・ Xylanase high production koji mold extract

まず、５０ｍＭ酢酸緩衝液・トリス塩酸緩衝液を下記の表１に記載の各酵素剤の至適ｐＨに調整した。これらの緩衝液１０ｍＬに小麦フスマまたは米ヌカ（未処理とマイクロ波による熱処理後のもの）を１ｇ添加し、さらに上記酵素剤（固形の場合には１０ｍｇ、液体の場合には１０μＬ）または有用酵素高生産麹菌抽出液３００μＬを添加した。次いで、各酵素剤の至適温度にて１日ゆっくり振とうさせながらインキュベートした。その後、ろ紙により抽出し、メンブレンフィルターを用いてろ過した。
（表１．各酵素剤の至適条件）

First, 50 mM acetate buffer / Tris-HCl buffer was adjusted to the optimum pH of each enzyme agent described in Table 1 below. 1 g of wheat bran or rice bran (untreated and heat treated with microwave) is added to 10 mL of these buffers, and the above enzyme agent (10 mg for solid, 10 μL for liquid) or useful enzyme 300 μL of high-producing koji mold extract was added. Subsequently, it incubated, making it shake gently at the optimal temperature of each enzyme agent for 1 day. Then, it extracted with the filter paper and filtered using the membrane filter.
(Table 1. Optimal conditions for each enzyme agent)

Ｄ．調製された処理物の酵素活性
（ａ）チロシナーゼ活性阻害の測定
小麦フスマおよび米ヌカを分解するのに効率の高い酵素剤または麹菌抽出液を選択するため、米ヌカおよび小麦フスマ（マイクロ波による処理なしと処理済）を表１に示す８種類の酵素剤および有用酵素高産生麹菌抽出液で処理した処理物においてチロシナーゼ活性阻害を測定した。測定方法は、実験生体分子化学（共立出版）ｐ．１５１に記載の方法に準じて行った。なお、マイクロ波処理は、米ヌカの場合、電子レンジを５００Ｗにセットし、５０〜６０秒、小麦フスマの場合、電子レンジを５００Ｗにセットし、５０秒間行った。その結果、マイクロ波で前処理していない米ヌカと小麦フスマ、およびマイクロ波で処理した米ヌカと小麦フスマともに、酵素剤または酵素高産生麹菌抽出液で処理した処理物は、高いチロシナーゼ活性阻害率を示したが、マイクロ波で前処理した処理物の方が前処理していない処理物より高い阻害率を示した（図１〜４）。特に、米ヌカを用いた場合、キシラナーゼ高生産麹菌抽出液、ペクチナーゼＧ「アマノ」、スミチームＰＸまたはマセロチームＡで処理すると高く、小麦フスマを用いた場合、キシラナーゼ高生産麹菌抽出液、ヘミセルラーゼ「アマノ」９０、スミチームＰＸまたはＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）ＣＸ７２Ｌで処理すると高いことがわかった。また、同一の酵素剤または麹菌抽出についてマイクロ波による処理の有無による相違をみると、マイクロ波で処理した処理物は、処理していないものと比べて高いチロシナーゼ活性阻害率を示した（図１〜４）。以上より、米ヌカおよび小麦フスマなどのヘミセルロースを多く含む素材をヘミセルラーゼなどの酵素剤またはキシラナーゼなどの麹菌抽出液で処理した処理物がチロシナーゼ活性の阻害効果を有することが示された。 D. Measurement of enzyme activity of prepared treatment (a) Inhibition of tyrosinase activity Rice bran and wheat bran (microwave treatment in order to select an enzyme agent or a koji mold extract that is highly efficient in degrading wheat bran and rice bran Inhibition of tyrosinase activity was measured in the treated products treated with 8 kinds of enzyme agents shown in Table 1 and extracts of high-producing gonococci with high useful enzymes shown in Table 1. The measurement method is described in Experimental Biomolecular Chemistry (Kyoritsu Shuppan) p. 151, according to the method described in 151. The microwave treatment was performed for 50 seconds with a microwave oven set to 500 W for rice bran and 50 to 60 seconds for a wheat bran, and with a microwave oven set to 500 W for wheat bran. As a result, both rice bran and wheat bran not pretreated with microwave, and rice bran and wheat bran treated with microwave, both treated with enzyme agent or high enzyme-producing gonococcus extract, have high tyrosinase activity inhibition. Although the rate was shown, the treatment pretreated with the microwave showed a higher inhibition rate than the non-pretreated treatment (FIGS. 1-4). In particular, when rice bran is used, it is high when treated with xylanase high-producing gonococcal extract, pectinase G “Amano”, Sumiteam PX or Maceroteam A, and when wheat bran is used, xylanase high-producing gonococcal extract, hemicellulase “Amano” "90, found to be high when treated with Sumiteam PX or OPTIMASE® CX 72L. Moreover, when the difference with the presence or absence of the process by a microwave was seen about the same enzyme agent or a koji mold extraction, the processed material processed with the microwave showed the high tyrosinase activity inhibition rate compared with the thing which is not processed (FIG. 1). ~ 4). From the above, it was shown that a processed product obtained by treating a material containing a large amount of hemicellulose such as rice bran and wheat bran with an enzyme agent such as hemicellulase or a koji mold extract such as xylanase has an inhibitory effect on tyrosinase activity.

（ｂ）Ｄ−キシロース測定
チロシナーゼ活性阻害の上昇とＤ−キシロースの遊離との関係を調べるため、上記（ａ）の結果よりチロシナーゼ阻害活性が高かった３種類、キシラナーゼ高生産菌抽出液、ＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）ＣＸ７２Ｌ（ＧＥＮＥＮＣＯＲ（株））、およびマセロチームＡ（ヤクルト薬品工業（株））を選択し、Ｄ−キシロース測定キット（日本バイオコン（株））によりＤ−キシロース量の測定を行った。前記キットに添付された説明書の記載に従って行い、３４０ｎｍにおける吸光度を測定した。その結果を下記の表２に示す。表中の「前処理」の列において、○はマイクロ波による処理済みを表し、×はマイクロ波で処理していないことを示す。表２中の「キシロース含有量」の列より、米ヌカをキシラナーゼ高生産菌抽出液で処理した処理物（表中、キシラナーゼフスマ抽出液と記載されている）および小麦フスマをＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）ＣＸ７２Ｌで処理した処理物（表中、ＯＰＴＩＭＡＳＥＣＸ７２Ｌと記載されている）がキシロースを多く含むことがわかった。また、試験を行った３種類ともにマイクロ波による前処理を行った処理物は、前処理を行っていないものよりキシロース含有量が高くなることが示された。
（表２．キシロース含有量の測定結果）

(B) D-xylose measurement In order to examine the relationship between the increase in tyrosinase activity inhibition and the release of D-xylose, three types of xylanase high-producing bacteria extract, OPTIMASE ( Registered trademark CX 72L (GENENCOR Co., Ltd.) and Macero Team A (Yakult Pharmaceutical Co., Ltd.) were selected, and the amount of D-xylose was measured using a D-xylose measurement kit (Nippon Biocon Co., Ltd.). Absorbance at 340 nm was measured according to the instructions in the instructions attached to the kit. The results are shown in Table 2 below. In the column of “Pretreatment” in the table, “◯” indicates that the microwave has been processed, and “X” indicates that the microwave has not been processed. From the column of “xylose content” in Table 2, treated products of rice bran with high xylanase-producing bacteria extract (described as xylanase bran extract in the table) and wheat bran are OPTIMASE (registered trademark). It was found that the treated product with CX 72L (described as OPTIMASE CX 72L in the table) contains a large amount of xylose. Moreover, it was shown that the processed material which performed the pre-processing by the microwave with all the 3 types which were tested has a higher xylose content than the thing which has not performed the pre-processing.
(Table 2. Measurement result of xylose content)

さらに、酵素剤の組み合わせがそれら単独で処理した処理物と比較してＤ−キシロースの遊離を上昇させるか調べるため、Ｄ‐キシロース量を測定した。その結果を表３〜６に示す。表５および６中、ヘミセルはヘミセルラーゼ「アマノ」９０、ペクチＧはペクチナーゼＧ「アマノ」、マセロＡはマセロチームＡ、スミチＰＸはスミチームＰＸ、スミチＡＲＳはスミチームＡＲＳ、７２ＬはＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）ＣＸ７２Ｌを意味する。表３〜６より、単独の酵素剤により処理した処理物よりキシロース含有量が特に上昇した酵素剤の組み合わせは、米ヌカ（未処理）を用いた場合、ヘミセル×マセロＡ、米ヌカ（処理済）を用いた場合、ペクチＧ×スミチＰＸ、ペクチＧ×マセロＡ、小麦フスマ（未処理）を用いた場合、スミチＡＲＳ×マセロＡ、スミチＡＲＳ×７２Ｌ、マセロＡ×７２Ｌ、小麦フスマ（処理済）を用いた場合、７２Ｌ×ヘミセル、７２Ｌ×スミチＰＸ、ヘミセル×スミチＰＸであった。
（表３．米ヌカを酵素剤で処理した処理物におけるキシロース含有量）

（表４．小麦フスマを酵素剤で処理した処理物におけるキシロース含有量）

（表５．米ヌカを酵素剤の組み合わせで処理した処理物におけるキシロース含有量）

（表６．小麦フスマを酵素剤の組み合わせで処理した処理物におけるキシロース含有量）

Furthermore, the amount of D-xylose was measured in order to examine whether the combination of enzyme agents increased the release of D-xylose as compared with the treated product treated alone. The results are shown in Tables 3-6. In Tables 5 and 6, hemicell is hemicellulase “Amano” 90, pectin G is pectinase G “Amano”, macero A is macero team A, sumi PX is sumi team PX, sumi ARS is sumi team ARS, 72L is OPTIMASE® CX 72L is meant. From Tables 3-6, the combination of the enzyme agent in which the xylose content was particularly increased compared to the processed product treated with the single enzyme agent was Hemicelle x Macero A, Rice Nuka (treated) when rice bran (untreated) was used. ), Pectin G x Sumitomo PX, pectin G x Macero A, wheat bran (untreated), Sumic ARS x Macero A, Sumichi ARS x 72L, Macero A x 72L, wheat bran (treated) ) Was 72 L × Hemicell, 72 L × Sumichi PX, Hemicell × Sumichi PX.
(Table 3. Xylose content in processed product of rice bran treated with enzyme)

(Table 4. Xylose content in processed product of wheat bran treated with enzyme)

(Table 5. Xylose content in processed product of rice bran treated with enzyme combination)

(Table 6. Xylose content in processed products obtained by treating wheat bran with a combination of enzyme agents)

（ｃ）抗酸化能（ラジカルキャッチ）の測定
次に、米ヌカおよび小麦フスマを上記の各酵素剤で処理した処理物において、抗酸化能測定キット（アロカ（株））を用いて抗酸化能を測定した。測定は、キットに添付された説明書に従って行った。本発明では、サンプリング時間を５秒、サンプリングポイントを２４ポイント、および測定時間を１２０秒とした。活性阻害率を次式から求め、消去率を算出した。
活性阻害率（％）＝１００−（Ａ）／（Ｂ）×１００
［式中、Ａはブランクのグルコース生成量であり、Ｂは抽出物のグルコース生成量である。］
次に、ＩＣ_５０値をコントロール発光量の１／２を付与するサンプル濃度または消去率（抑制率）５０％のサンプル濃度として求めた。その結果、米ヌカ（マイクロ波未処理）を酵素剤で処理した処理物において最も高い消去率を示したのはヘミセルラーゼ「アマノ」９０であり、６０％近い消去率が見られた（図５）。また、スミチームＰＸに関しても５０％以上の高い消去率が観察された。その他、ペクチナーゼＳＳに関しても５０％前後と高い消去率が見られた。一方、小麦フスマ（マイクロ波未処理）を酵素剤で処理した処理物において最も高い消去率を示したのはヘミセルラーゼ「アマノ」９０であり、９０％以上の高い消去率が観察された（図６）。また、ペクチナーゼＳＳに関しても９０％近い消去率が見られた。その他、ペクチナーゼＧ「アマノ」は８５％を超える消去率が観察され、スミチームＰＸは７０％近い消去率が示された。加えて、小麦フスマの方が全体的に米ヌカより消去率が高いことが観察された。このことから、小麦フスマおよび米ヌカなどの素材を酵素剤などで処理すると抗酸化能が上昇することがわかった。 (C) Measurement of Antioxidant Capacity (Radical Catch) Next, in a processed product obtained by treating rice bran and wheat bran with each of the above enzyme agents, the antioxidant capacity was measured using an antioxidant capacity measurement kit (Aroka Co., Ltd.). Was measured. The measurement was performed according to the instructions attached to the kit. In the present invention, the sampling time is 5 seconds, the sampling point is 24 points, and the measurement time is 120 seconds. The activity inhibition rate was calculated from the following formula, and the elimination rate was calculated.
Activity inhibition rate (%) = 100− (A) / (B) × 100
[Where A is the amount of blank glucose produced and B is the amount of glucose produced by the extract. ]
Next, the IC ₅₀ value was determined as a sample concentration giving half of the control light emission amount or a sample concentration of 50% erasure rate (suppression rate). As a result, hemicellulase “Amano” 90 showed the highest erasure rate in the treated product of rice bran (untreated microwave) with the enzyme agent, and an erasure rate close to 60% was observed (FIG. 5). ). Also, a high erasure rate of 50% or more was observed for Sumiteam PX. In addition, a high erasure rate of about 50% was also observed for pectinase SS. On the other hand, hemicellulase “Amano” 90 showed the highest elimination rate in the processed product of wheat bran (untreated with microwave) with an enzyme agent, and a high elimination rate of 90% or more was observed (FIG. 5). 6). Further, an erasure rate of nearly 90% was also observed for pectinase SS. In addition, pectinase G “Amano” showed an erasure rate exceeding 85%, and Sumiteam PX showed an erasure rate close to 70%. In addition, wheat bran was generally observed to have a higher elimination rate than rice bran. From these results, it was found that the antioxidant ability was increased when materials such as wheat bran and rice bran were treated with an enzyme agent.

（ｄ）ＳＯＤ活性測定（ＮＢＴ還元法）
米ヌカおよび小麦フスマを各種酵素剤および有用酵素高生産麹菌抽出液の組み合わせで処理した処理物が、活性酸素を抑制する作用を示すかどうかを調べるため、ＳＯＤ活性検出キット（和光純薬工業（株））を用いてＳＯＤ活性を測定した。測定はキットに添付された説明書に従って行った。次に、この方法により得られた吸光度の値を用いて、ＳＯＤ活性の阻害率を以下の式で算出した。
ＳＯＤ活性値（阻害率％）＝［（Ｅ１）−（Ｅ２）］／（Ｅ１）×１００
［式中、Ｅ１＝Ｅ_ＥＬ−Ｅ_{ＢＬ−ＢＬ}であり、Ｅ２＝Ｅ_Ｓ−Ｅ_Ｓ−ＢＬである。］ (D) SOD activity measurement (NBT reduction method)
SOD activity detection kit (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was used to investigate whether processed products of rice bran and wheat bran with various enzyme preparations and useful enzyme high-producing gonococcal extracts can suppress active oxygen. SOD activity was measured using a strain). The measurement was performed according to the instructions attached to the kit. Next, by using the absorbance value obtained by this method, the inhibition rate of SOD activity was calculated by the following formula.
SOD activity value (% inhibition) = [(E1) − (E2)] / (E1) × 100
[In the _formula, a _{E1 = E EL -E BL-BL} , is _{E2 = E S -E S-BL} . ]

その結果、前処理した米ヌカの処理物において、最も高い阻害率を示したのは、ペクチナーゼＧ「アマノ」とマセロチームＡの組み合わせで処理したものであり、８０％近い阻害率が示された（図７）。また、マイクロ波未処理の米ヌカの処理物では、ヘミセルラーゼ「アマノ」９０とペクチナーゼＧ「アマノ」、ならびにヘミセルラーゼ「アマノ」９０とマセロチームとの組み合わせで処理したものに関して５０％以上の高い阻害率が観察された（図８）。マイクロ波による前処理の影響に注目してみると、ペクチナーゼＧ「アマノ」とマセロチームＡの組み合わせでは、前処理したものの阻害率が極めて高くなることがわかった。一方、小麦フスマにおいて、最も高い阻害率を示したのは、マイクロ波で前処理した小麦フスマをＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）ＣＸ７２Ｌ×スミチームＰＸの組み合わせで処理したものであり、６０％近い阻害率が示された。また、マイクロ波未処理の小麦フスマをマセロチームＡ×ＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）ＣＸ７２Ｌの組み合わせで処理しものに関しても、５０％以上の高い阻害率が観察された。これらのことから、各素材を酵素剤により処理すると抗酸化能が上昇することが示された。 As a result, the pre-treated rice bran processed product showed the highest inhibition rate when it was treated with a combination of pectinase G “Amano” and maceroteam A, and showed an inhibition rate of nearly 80% ( FIG. 7). Moreover, in the processed product of rice bran that has not been treated with microwaves, the inhibition of hemicellulase “Amano” 90 and pectinase G “Amano”, and the combination of hemicellulase “Amano” 90 and maceroteam is 50% or more. A rate was observed (Figure 8). When attention was paid to the influence of the pretreatment by microwave, it was found that the combination of pectinase G “Amano” and Macero Team A has a very high inhibition rate of the pretreatment. On the other hand, the wheat bran showed the highest inhibition rate when the wheat bran pretreated with microwave was treated with a combination of OPTIMASE (registered trademark) CX 72L × Sumiteam PX, and the inhibition rate was close to 60%. Indicated. In addition, a high inhibition rate of 50% or more was also observed when the wheat bran not treated with microwaves was treated with a combination of maceroteam A × OPTIMASE (registered trademark) CX 72L. From these results, it was shown that when each material was treated with an enzyme agent, the antioxidant ability was increased.

本発明により、チロシナーゼ活性の阻害方法および阻害剤が提供されるので、チロシナーゼ活性を原因とするメラニン色素の沈着を防止できるので、肌の美白、歯茎や歯肉の黒ずみ、食品の褐色防止に関連する化粧品、医療、食品などの分野において利用可能である。 According to the present invention, a method and an inhibitor for tyrosinase activity are provided, so that melanin pigmentation caused by tyrosinase activity can be prevented. Therefore, the present invention is related to skin whitening, darkening of gums and gums, and prevention of food browning. It can be used in fields such as cosmetics, medicine, and food.

Claims

ヘミセルロース含有材料をヘミセルラーゼ、ペクチナーゼおよびキシラナーゼから選択
される酵素または麹菌を用いて処理することを特徴とする、チロシナーゼ活性阻害剤の製
造方法。 A method for producing a tyrosinase activity inhibitor, which comprises treating a hemicellulose-containing material with an enzyme selected from hemicellulase , pectinase and xylanase or bacilli.

ヘミセルロース含有材料が小麦フスマまたは米ヌカである、請求項１記載の方法。 The method according to claim 1, wherein the hemicellulose-containing material is wheat bran or rice bran.

ヘミセルロース含有材料が小麦フスマであり、酵素がキシラナーゼである、請求項２記
載の方法。 The method of claim 2, wherein the hemicellulose-containing material is wheat bran and the enzyme is xylanase.

ヘミセルロース含有材料が米ヌカであり、酵素がヘミセルラーゼおよびペクチナーゼか
ら選択される酵素である、請求項２記載の方法。 The method according to claim 2, wherein the hemicellulose-containing material is rice bran and the enzyme is an enzyme selected from hemicellulase and pectinase.

麹菌がβ−グルコシダーゼまたはキシラナーゼ高生産麹菌である、請求項１または２記
載の方法。 The method according to claim 1 or 2, wherein the koji mold is a β-glucosidase or xylanase high-producing koji mold.

ヘミセルロース含有材料を酵素または麹菌を用いて処理する前に加熱処理するものであ
る、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 5, wherein the hemicellulose-containing material is heat-treated before being treated with an enzyme or koji mold.

加熱処理がマイクロ波を用いて行われる、請求項６記載の方法。 The method according to claim 6, wherein the heat treatment is performed using microwaves.