JP5422670B2 - Laccase and its use at low temperatures - Google Patents

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Description

優先権
本出願は、２００８年１２月２４日に提出された米国仮特許出願第６１／１４０，７２４号、２００９年２月２４日に提出された第６１／１５４，８８２号、及び、２００９年８月２７日に提出された第６１／２３７，５３２号に対する優先権を主張する。各文献は言及することによってそっくりそのまま組み込まれている。 Priority This application is based on US Provisional Patent Application No. 61 / 140,724 filed December 24, 2008, 61 / 154,882 filed February 24, 2009, and 2009. Claim priority to 61 / 237,532 filed on August 27th. Each document is incorporated in its entirety by reference.

本発明の系、組成物及び方法は、ラッカーゼ酵素及びそのようなラッカーゼ酵素をコードする核酸配列に関する。ラッカーゼ酵素は、デニム生地の色を変性するための改善された方法において伝達物質と一緒に使用することができる。 The systems, compositions and methods of the present invention relate to laccase enzymes and nucleic acid sequences encoding such laccase enzymes. The laccase enzyme can be used with a transmitter in an improved way to modify the color of denim fabric.

ラッカーゼは、酸素の存在下において優れた酸化剤であることがわかっている銅含有フェノール酸化酵素である。ラッカーゼは、微生物、菌類及び高等生物にみられる。ラッカーゼ酵素は、パルプ及び紙の漂白、パルプ廃液の処理、脱インク、工業用の色除去、洗濯用洗剤中の漂白、口腔ケア歯白色化剤、及び、重合及び酸化反応のための触媒又は促進剤を含む多数の用途に使用される。 Laccase is a copper-containing phenol oxidase that has been found to be an excellent oxidant in the presence of oxygen. Laccase is found in microorganisms, fungi and higher organisms. Laccase enzymes are pulp or paper bleaching, pulp waste liquor treatment, deinking, industrial color removal, bleaching in laundry detergents, oral care tooth whitening agents, and catalysts or accelerators for polymerization and oxidation reactions Used in a number of applications involving agents.

ラッカーゼは、洗剤産業、紙パルプ産業、繊維産業及び食品産業を含む多数の産業における種々の用途に使用可能である。ある用途において、フェノール酸化酵素は、洗剤洗浄中に衣服から食物汚れなどの染みを除去する補助として使用される。ほとんどのラッカーゼは、中性又はアルカリ性のｐＨにおいて不活性であるが、酸性のｐＨ領域においてｐＨ最適条件を示す。 Laccase can be used in a variety of applications in a number of industries including the detergent industry, the pulp and paper industry, the textile industry and the food industry. In some applications, phenol oxidase is used as an aid to remove stains such as food stains from clothes during detergent cleaning. Most laccases are inert at neutral or alkaline pH, but exhibit pH optimum in the acidic pH region.

ラッカーゼは、ジーニイアスペルギルス(genii Aspergillus)、ニューロスポラ(Neurospora)、ポドスポラ(Podospora)、ボトリティス(Botrytis)、プルロタス(Pleurotus)、フォルネス(Fornes)、フレビア(Phlebia)、トラメテス（Trametes）、ポリポラス（Polyporus）、スタキボトリス、リゾクトニア（Rhizoctonia）、ビポラリス（Bipolaris）、クルブラリア（Curvularia）、アメロスポリウム（Amerosporium）、レンチヌス(Lentinus)、ミセリオプトラ（Myceliophtora）、コプリナス（Coprinus）、チエラビア（Thielavia）、セレナ（Cerrena）、ストレプトミセス（Streptomyces）及びメラノカルパス（Melanocarpus）の種を含む種々の菌類によって作られることがわかっている。しかしながら、各種用途において様々な性能特性を有するラッカーゼの必要性がなお存在する。 Laccases are genii Aspergillus, Neurospora, Podospora, Botrytis, Pleurotus, Fornes, Phlebia, Trametes, Polyporus , Stachybotris, Rhizoctonia, Bipolaris, Curvularia, Amerosporium, Lentinus, Myceliophtora, Coprinus, Thielavia, rena It has been found that it is made by a variety of fungi including Streptomyces and Melanocarpus species. However, there is still a need for laccases with different performance characteristics in various applications.

多数の用途のために、促進剤としても知られている伝達物質の使用によってラッカーゼの酸化能力を向上させることができる。ラッカーゼ及び伝達物質を含む系は、当業界においてラッカーゼ伝達物質系（ＬＭＳ）として知られている。ラッカーゼの作用を活性化又は開始させるために同じ化合物を使用することができる。 For many applications, the laccase's ability to oxidize can be improved by the use of a transmitter, also known as an accelerator. A system comprising a laccase and a transmitter is known in the art as a laccase transmitter system (LMS). The same compound can be used to activate or initiate the action of laccase.

ラッカーゼ伝達物質系において使用するためのいくつかの既知の伝達物質が存在する。これらには、ＨＢＴ（ｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、ＡＢＴＳ［２、２’―アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルフィン酸）］、ＮＨＡ（Ｎ−ヒドロキシアセトアニリド）、ＮＥＩＡＡ（Ｎ−アセチル−Ｎ−フェニルヒドキシルアミン）、ＨＢＴＯ（３−ヒドロキシ１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン）及びＶＩＯ（ビオルル酸）が含まれる。さらに、伝達物質として有用であることがわかっているＮＨ−ＯＨ基又はＮ−Ｏ基を含むいくつかの化合物が存在する。 There are several known transmitters for use in laccase transmitter systems. These include HBT (1-hydroxybenzotriazole), ABTS [2,2′-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfinic acid)], NHA (N-hydroxyacetanilide), NEIAA (N-acetyl-N -Phenylhydroxylamine), HBTO (3-hydroxy 1,2,3-benzotriazin-4 (3H) -one) and VIO (violuric acid). In addition, there are a number of compounds that contain NH—OH or N—O groups that have been found to be useful as transmitters.

官能基及び置換基は、伝達物質の能力に大きく影響する。同じクラスの化合物内でさえ、置換基は、基質に対するラッカーゼ特異性を変化させることができ、それによって、伝達物質の能力を大幅に上昇又は低下させる。さらに、伝達物質は、ある特定の用途に有効であるが、他の用途には適さない可能性がある。現行の伝達物質についての他の欠点は、使用中に重合する傾向があることである。したがって、特定の用途のために効率的な伝達物質を発見する必要がある。そのような用途の１つは繊維の漂白であり、伝達物質が過度に高価又は危険でないことも重要である。ラッカーゼ伝達物質系の他の用途を以下に与える。 Functional groups and substituents greatly affect the ability of the transmitter. Even within the same class of compounds, substituents can change the laccase specificity for a substrate, thereby greatly increasing or decreasing the ability of the transmitter. In addition, the mediator is effective for certain applications, but may not be suitable for other applications. Another drawback with current mediators is their tendency to polymerize during use. Therefore, there is a need to find efficient mediators for specific applications. One such application is fiber bleaching, and it is also important that the mediator is not overly expensive or dangerous. Other uses of the laccase transmitter system are given below.

低温におけるラッカーゼの使用の方法は、例えば、処理槽を加熱するためのエネルギー投入量を減らすことができる繊維処理方法において、省エネルギーの点で利益を与える。ラッカーゼ酵素を低温における酵素漂白のような用途において使用する方法を開発することが望ましい。 The method of using laccase at a low temperature is advantageous in terms of energy saving, for example, in a fiber processing method that can reduce the amount of energy input for heating the treatment tank. It would be desirable to develop methods for using laccase enzymes in applications such as enzymatic bleaching at low temperatures.

ラッカーゼを含む酵素的酸化の系、組成物及び方法を説明する。一態様において、４０℃未満の温度において、繊維の色変性を生じさせるのに充分な時間及び条件下で繊維をラッカーゼ酵素及び選択的に伝達物質と接触させるステップを含む繊維処理方法を提供する。いくつかの実施形態においては、色変性は、色の薄色化、色の変化、色合いの変化、再沈着／裏面染色の低減、及び、漂白から選択される。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃以上４０℃未満である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約３５℃である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約３０℃である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約２３℃である。いくつかの実施形態においては温度が、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃又は３５℃である。いくつかの実施形態においては温度が水道水の外界温度である。 Enzymatic oxidation systems, compositions and methods involving laccase are described. In one aspect, a fiber processing method is provided comprising contacting the fiber with a laccase enzyme and optionally a transmitter at a temperature below 40 ° C. for a time and under conditions sufficient to cause color modification of the fiber. In some embodiments, the color modification is selected from color thinning, color change, tint change, redeposition / reverse dyeing reduction, and bleaching. In some embodiments, the temperature is greater than or equal to about 20 ° C and less than 40 ° C. In some embodiments, the temperature is from about 20 ° C to about 35 ° C. In some embodiments, the temperature is from about 20 ° C to about 30 ° C. In some embodiments, the temperature is from about 20 ° C to about 23 ° C. In some embodiments, the temperature is 20 ° C, 21 ° C, 22 ° C, 23 ° C, 24 ° C, 25 ° C, 26 ° C, 27 ° C, 28 ° C, 29 ° C, 30 ° C, 31 ° C, 32 ° C, 33 ° C. ° C, 34 ° C or 35 ° C. In some embodiments, the temperature is the ambient temperature of tap water.

いくつかの実施形態においては繊維が藍染めされたデニムである。いくつかの実施形態においては繊維が硫黄染めされたデニムである。いくつかの実施形態において、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップの前に又は接触させるステップと同時に、デニムを糊抜され及び／又はストーンウォッシュする。いくつかの実施形態においては、ストーンウォッシュするステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップとを、同じ槽内で行う。 In some embodiments, the fiber is indigo dyed denim. In some embodiments, the fibers are sulfur dyed denim. In some embodiments, the denim is densified and / or stonewashed prior to or simultaneously with the step of contacting the fiber with the laccase enzyme and the transmitter. In some embodiments, the stonewashing and contacting the fiber with the laccase enzyme and the transmitter are performed in the same vessel.

いくつかの実施形態において、この方法は、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップと同時に又は連続して、繊維をセルラーゼ酵素に接触させるステップをさらに含む。いくつかの実施形態においては、繊維をセルラーゼ酵素と接触させるステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップとを連続して実行し、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップの前に、繊維をセルラーゼ酵素と接触させるステップを実行する。いくつかの実施形態においては、繊維をセルラーゼ酵素と接触させるステップ、及び、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップを、繊維をセルラーゼ酵素と接触させるステップと繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップとの間に槽を排水することなく、同じ槽内において連続して実行する。 In some embodiments, the method further comprises contacting the fiber with the cellulase enzyme simultaneously or sequentially with contacting the fiber with the laccase enzyme and the transmitter. In some embodiments, prior to the step of contacting the fiber with the cellulase enzyme and the step of contacting the fiber with the laccase enzyme and the mediator, prior to contacting the fiber with the laccase enzyme and mediator. And the step of contacting the fiber with a cellulase enzyme. In some embodiments, contacting the fiber with a cellulase enzyme and contacting the fiber with a laccase enzyme and a mediator, contacting the fiber with a cellulase enzyme and contacting the fiber with a laccase enzyme and mediator. It is continuously performed in the same tank without draining the tank between the steps.

いくつかの実施形態においては、繊維をセルラーゼ酵素と接触させるステップ、及び、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップを、４０℃未満の温度において実行する。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃以上４０℃未満である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約３５℃である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約３０℃である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約２３℃である。いくつかの実施形態においては温度が、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃又は３５℃である。いくつかの実施形態においては温度が水道水の外界温度である。 In some embodiments, the steps of contacting the fiber with a cellulase enzyme and contacting the fiber with a laccase enzyme and a transmitter are performed at a temperature of less than 40 ° C. In some embodiments, the temperature is greater than or equal to about 20 ° C and less than 40 ° C. In some embodiments, the temperature is from about 20 ° C to about 35 ° C. In some embodiments, the temperature is from about 20 ° C to about 30 ° C. In some embodiments, the temperature is from about 20 ° C to about 23 ° C. In some embodiments, the temperature is 20 ° C, 21 ° C, 22 ° C, 23 ° C, 24 ° C, 25 ° C, 26 ° C, 27 ° C, 28 ° C, 29 ° C, 30 ° C, 31 ° C, 32 ° C, 33 ° C. ° C, 34 ° C or 35 ° C. In some embodiments, the temperature is the ambient temperature of tap water.

いくつかの実施形態において、セルラーゼ酵素がラッカーゼ酵素と相乗的に作用することによって、さらに大きい程度の繊維の色の薄色化、色の変化、色合いの変化、再沈着／裏面染色の低減、及び／又は、漂白を有する繊維を生産する。いくつかの実施形態においては、セルラーゼ酵素がラッカーゼ酵素と相加的に作用することによって、セルラーゼが含まれない同じ方法と比較して、さらに大きな程度の繊維の色の薄色化、色の変化、色合いの変化、再沈着／裏面染色の低減、及び／又は、漂白を有する繊維を生産する。 In some embodiments, the cellulase enzyme acts synergistically with the laccase enzyme to provide a greater degree of fiber color thinning, color change, tint change, reduced redeposition / back dyeing, and / Or produce fibers with bleaching. In some embodiments, the cellulase enzyme acts additively with the laccase enzyme, resulting in a greater degree of fiber color thinning, color change compared to the same method without cellulase. To produce fibers having a color change, reduced redeposition / back dyeing, and / or bleaching.

いくつかの実施形態において、ラッカーゼが微生物によるラッカーゼである。いくつかの実施形態において、ラッカーゼがセレナ(Cerrena)種に由来する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼがセレナユニカラー(Cerrena unicolor)に由来する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼがセレナユニカラーに由来するラッカーゼＤである。 In some embodiments, the laccase is a microbial laccase. In some embodiments, the laccase is derived from a Cerrena species. In some embodiments, the laccase is derived from Cerrena unicolor. In some embodiments, the laccase is laccase D derived from Serena unicolor.

いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する。 In some embodiments, the laccase is SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and It has an amino acid sequence that is at least 70% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 20. In some embodiments, the laccase is SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and It has an amino acid sequence that is at least 80% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 20. In some embodiments, the laccase is SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and It has an amino acid sequence that is at least 90% or at least 95% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 20.

いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する。 In some embodiments, the laccase has an amino acid sequence that is at least 70% identical to SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20. In some embodiments, the laccase has an amino acid sequence that is at least 80% identical to SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20. In some embodiments, the laccase has an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20. In some embodiments, the laccase has an amino acid sequence that is at least 95% identical to SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20.

いくつかの実施形態において、使用準備済組成物中にラッカーゼ酵素と伝達物質とを一緒に提供する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素と伝達物質とを固体形態で提供する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素と伝達物質とを顆粒として提供する。特定の実施形態においては伝達物質がシリンゴニトリルである。 In some embodiments, a laccase enzyme and a transmitter are provided together in a ready-to-use composition. In some embodiments, the laccase enzyme and the mediator are provided in solid form. In some embodiments, the laccase enzyme and the mediator are provided as granules. In certain embodiments, the transmitter is syringonitrile.

他の一態様において、ラッカーゼ、そのようなラッカーゼをコードする核酸配列、並びに、ラッカーゼを発現するためのベクター及びホスト細胞を提供する。繊維処理のようなエネルギー投入量の低減が望まれる方法において、低温においてラッカーゼを使用することができる。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素は、配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８若しくは２０のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むか、該アミノ配列からなるか、若しくは、該アミノ配列から本質的になるものであるか、又は、配列番号：２、４、６、８、１２、１４、１６、１８、１９又は２０のいずれかに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％同一のアミノ酸配列を有するものである。特定の実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％同一のアミノ酸配列を有する。さらなる特定の実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０のアミノ酸配列を有する。そのようなポリペプチドがラッカーゼ酵素活性を有することが好ましく、その活性は、例えば、本明細書に記載されている分析を用いて測定することができる。 In another aspect, laccases, nucleic acid sequences encoding such laccases, and vectors and host cells for expressing laccases are provided. Laccases can be used at low temperatures in methods where a reduction in energy input is desired, such as fiber processing. In some embodiments, the laccase enzyme comprises or consists of the amino acid sequence set forth in any of SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 or 20. Or consist essentially of the amino sequence or at least about 60 to any of SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 12, 14, 16, 18, 19 or 20. %, 65%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 99.5% identical amino acid sequences I have it. In certain embodiments, the laccase is at least 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% relative to SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20, It has 98%, 99% or 99.5% identical amino acid sequence. In a further specific embodiment, the laccase has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20. Such polypeptides preferably have laccase enzyme activity, and the activity can be measured, for example, using the assays described herein.

他の一態様において、前述のアミノ酸配列のいずれかを含むか、該アミノ酸配列から本質的になるか、又は、該アミノ酸配列からなるラッカーゼ酵素を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、この組成物は、溶液中において組成物のｐＨを約５．５乃至約６．５に維持するための緩衝系をさらに含む。いくつかの実施形態において、この組成物は、伝達物質をさらに含む。この伝達物質は、例えば、アセトシリンゴン、シリングアルデヒド、シリングアミド、メチルシリングアミド、２−ヒドロキシエチルシリングアミド、シリンガ酸メチル、ジメチルシリングアミド、シリンガ酸(shrine acid)、４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾニトリル（シリンゴニトリル）から選択され得る。一実施形態において、伝達物質は、４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾニトリルである。いくつかの実施形態において、この組成物は固体形態である。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素と伝達物質とは、使用準備済組成物中に一緒に提供される。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素及び伝達物質が固体形態で提供される。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素及び伝達物質が顆粒として提供される。特定の実施形態においては伝達物質がシリンゴニトリルである。 In another aspect, there is provided a composition comprising a laccase enzyme comprising, consisting essentially of, or consisting of any of the aforementioned amino acid sequences. In some embodiments, the composition further comprises a buffer system for maintaining the pH of the composition in solution from about 5.5 to about 6.5. In some embodiments, the composition further comprises a transmitter. This transmitter is, for example, acetosyringone, shilling aldehyde, shilling amide, methyl silling amide, 2-hydroxyethyl syring amide, syringic acid methyl, dimethyl silling amide, shrine acid, 4-hydroxy-3,5 -May be selected from dimethoxybenzonitrile (syringonitrile). In one embodiment, the transmitter is 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzonitrile. In some embodiments, the composition is in solid form. In some embodiments, the laccase enzyme and the mediator are provided together in the ready-to-use composition. In some embodiments, the laccase enzyme and the mediator are provided in solid form. In some embodiments, the laccase enzyme and transmitter are provided as granules. In certain embodiments, the transmitter is syringonitrile.

いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素は、約５乃至約７のｐＨ、約２０℃乃至約３０℃の温度、約５：１乃至約１０：１の液比、及び、約１５分乃至約６０分の時間で使用される。 In some embodiments, the laccase enzyme has a pH of about 5 to about 7, a temperature of about 20 ° C. to about 30 ° C., a liquid ratio of about 5: 1 to about 10: 1, and about 15 minutes to about 60. Used in minutes time.

本発明の系、組成物及び方法のこれらの及び他の態様及び実施形態は、明細書及び添付図面によって明らかになる。 These and other aspects and embodiments of the systems, compositions and methods of the present invention will become apparent from the specification and the accompanying drawings.

図１は、実施例１に記載されているように、様々な温度においてラッカーゼ酵素を用いてストーンウォッシュしたデニムにおける色を変化させる効果を示している。FIG. 1 shows the effect of changing color in denim stonewashed with laccase enzyme at various temperatures, as described in Example 1.

図２は、実施例２に記載されているように、ストーンウォッシュしたデニムの色の変化に対するラッカーゼ及び伝達物質の比率の影響を示している。FIG. 2 shows the effect of the ratio of laccase and transmitter on the color change of stonewashed denim, as described in Example 2.

図３は、実施例３において記載されているように、「使用準備済」ラッカーゼ組成物を用いてストーンウォッシュしたデニムの色の変化に対する温度の影響を示している。FIG. 3 shows the effect of temperature on the color change of denim stonewashed with a “ready for use” laccase composition, as described in Example 3.

図４は、実施例３に記載されているように、ストーンウォッシュしたデニムに対するラッカーゼ酵素の色を変化させる能力に対する温度の影響を示している。FIG. 4 shows the effect of temperature on the ability to change the color of the laccase enzyme on stonewashed denim, as described in Example 3.

図５は、実施例４−６に記載されているように、ラッカーゼによって媒介される色変性と組み合わせたセルラーゼ処理の効果を示している。FIG. 5 shows the effect of cellulase treatment in combination with color modification mediated by laccase as described in Examples 4-6.

ラッカーゼを含む酵素的酸化の系、組成物及び方法を記載する。これらの系、組成物及び方法は、例えば、色変性に影響を与えるための繊維の低温処理に有用である。そのような処理は、従来の繊維処理技術より少ないエネルギーを使用し、環境によりやさしい化学試薬を含む。これらの系、組成物及び方法の様々な態様及び実施形態を記載する。 Described are systems, compositions and methods of enzymatic oxidation involving laccase. These systems, compositions and methods are useful, for example, for low temperature processing of fibers to affect color modification. Such treatment uses chemical reagents that use less energy and are more environmentally friendly than conventional fiber treatment techniques. Various aspects and embodiments of these systems, compositions and methods are described.

定義
別段の定めがない限り、ここで使用されている技術及び科学用語のすべては、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。「Singleton et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 2D ED., John Wiley and Sons, New York (1994), and Hale and Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, N.Y. (1991)」は、本明細書において使用される用語の多数の一般的な辞書を提供する。さらなる明確性のために以下の用語を定義する。 Definitions Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art. `` Singleton et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 2D ED., John Wiley and Sons, New York (1994), and Hale and Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, NY (1991) '' A number of common dictionaries of terms used herein are provided. The following terms are defined for further clarity.

本明細書において用いられているように、「酵素」という用語は、化学反応を触媒するタンパクを意味する。酵素の触媒現象の機能は、その「酵素活性」又は「活性」を構成する。酵素は、一般に、触媒する反応の種類に従って、例えば、フェノールの酸化、ペプチド結合の加水分解、ヌクレオチドの結合などに分類される。 As used herein, the term “enzyme” means a protein that catalyzes a chemical reaction. The catalytic function of an enzyme constitutes its “enzyme activity” or “activity”. Enzymes are generally classified according to the type of reaction to be catalyzed, for example, phenol oxidation, peptide bond hydrolysis, nucleotide linkage, and the like.

本明細書において用いられているように、「基質」という用語は、生成物を生成するように酵素がその触媒能力を発揮する対象となる物質（例えば化合物）を意味する。 As used herein, the term “substrate” refers to a substance (eg, a compound) for which an enzyme exerts its catalytic ability to produce a product.

本明細書において用いられているように、「ラッカーゼ」は、４個の電子の伝達プロセスにおいて酸素を水に同時に還元すると共に、１個の電子を除去することによって、フェノール、ポリフェノール及びアニリンの酸化を触媒する複数銅含有酸化酵素（ＥＣ１．１０．３．２）である。 As used herein, “laccase” is the oxidation of phenol, polyphenol, and aniline by simultaneously reducing oxygen to water and removing one electron in a four-electron transfer process. It is a multiple copper-containing oxidase (EC 1.10.3.2) that catalyzes.

本明細書において用いられているように、「変異体」タンパクは、少数のアミノ酸置換、挿入及び／又は欠失によって親／基準タンパクとは異なる関連タンパク及び誘導体タンパクを包含する。いくつかの実施形態において、異なるアミノ酸残基の数は、約１、２、３、４、５、１０、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０のいずれかである。いくつかの実施形態において、変異体は、約１個乃至約１０個のアミノ酸残基が異なる。いくつかの実施形態において、変異体タンパクは、親／基準タンパクに対して少なくとも約３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％のアミノ酸配列同一性を有する。 As used herein, “variant” proteins include related and derivative proteins that differ from the parent / reference protein by a few amino acid substitutions, insertions and / or deletions. In some embodiments, the number of different amino acid residues is any of about 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 25, 30, 35, 40, 45 or 50. In some embodiments, the variants differ by about 1 to about 10 amino acid residues. In some embodiments, the variant protein is at least about 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80% relative to the parent / reference protein. 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 99.5% amino acid sequence identity.

本明細書において用いられているように、「類似配列」という用語は、親／基準タンパク中の配列と類似した機能、三次元構造、及び／又は、保存残基を提供するタンパク中のポリペプチド配列を意味する。例えば、αヘリックス又はβシート構造を含む構造領域において、類似配列中の置換アミノ酸残基は、同じ構造的特徴を維持する。いくつかの実施形態において、類似配列は、変異体が由来した親タンパクと同様の又は向上した機能を示す変異体タンパクを与える。 As used herein, the term “similar sequence” refers to a polypeptide in a protein that provides a function, three-dimensional structure, and / or conserved residue similar to the sequence in the parent / reference protein. Means an array. For example, in structural regions that include an α helix or β sheet structure, substituted amino acid residues in similar sequences maintain the same structural characteristics. In some embodiments, a similar sequence provides a variant protein that exhibits similar or improved function as the parent protein from which the variant was derived.

本明細書において用いられているように、「相同タンパク(homologous protein)」又は「同族体(homolog)」は、基準タンパク（例えば、異なる源に由来するラッカーゼ酵素）と同様の機能（例えば、酵素活性）及び／又は構造を有するタンパク（例えば、ラッカーゼ酵素）を意味する。同族体は、進化論的に関連する種又は無関係な種に由来するものであってもよい。いくつかの実施形態において、同族体は、基準タンパクに類似した四次、三次及び／又は一次構造を有し、それによって、非相同タンパクに由来する配列による部分又は断片の置換と比較して、基準タンパクの構造及び／又は機能の破壊を低減しながら、同族体に由来する類似の部分又は断片による基準タンパク中の部分又は断片の置換を潜在的に可能にする。 As used herein, a “homologous protein” or “homolog” is a function similar to a reference protein (eg, a laccase enzyme from a different source) (eg, an enzyme Activity) and / or a protein having a structure (for example, a laccase enzyme). Homologues may be derived from evolutionarily related or unrelated species. In some embodiments, the homologue has a quaternary, tertiary and / or primary structure similar to the reference protein, thereby comparing part or fragment substitution with sequences derived from heterologous proteins, Potentially allows replacement of a portion or fragment in a reference protein by a similar portion or fragment from a homologue while reducing disruption of the structure and / or function of the reference protein.

本明細書において用いられているように、「野生型」タンパク、「天然」タンパク及び「天然に存在する」タンパクは、自然界にみられるものである。「野生型の配列」という用語は、自然界にみられる又は天然に存在するアミノ酸又は核酸配列を意味する。いくつかの実施形態において、野生型配列は、タンパクエンジニアリング事業（例えば変異体タンパクの生産）の出発点である。 As used herein, “wild type” proteins, “natural” proteins and “naturally occurring” proteins are those found in nature. The term “wild-type sequence” means an amino acid or nucleic acid sequence found in nature or naturally occurring. In some embodiments, the wild type sequence is the starting point for a protein engineering business (eg, production of a mutant protein).

本明細書において用いられているように、「シグナル配列」は、タンパクのＮ末端部分に結合したアミノ酸の配列を意味し、細胞からタンパクの成熟形態を分泌することを容易にする。細胞外タンパクの成熟形態は、分泌プロセス中に開裂されるシグナル配列を欠いている。 As used herein, “signal sequence” means a sequence of amino acids attached to the N-terminal portion of a protein, facilitating secretion of the mature form of the protein from the cell. The mature form of the extracellular protein lacks a signal sequence that is cleaved during the secretion process.

本明細書において用いられているように、「培養」という用語は、対象のポリペプチドを発現させるために、液体、半固体又は固体の培地において適切な条件下で微生物細胞の集団を培養することを意味する。当業界において知られているように、いくつかの実施形態において培養を管内又は反応器内で実行する。 As used herein, the term “culture” refers to culturing a population of microbial cells under suitable conditions in a liquid, semi-solid or solid medium in order to express the polypeptide of interest. Means. As is known in the art, in some embodiments, culturing is performed in a tube or in a reactor.

本明細書において用いられているように、「誘導体」という用語は、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか又は両方への１つ以上のアミノ酸の付加、アミノ酸配列中の１つ又は複数の異なる位置における１つ以上のアミノ酸残基の置換、タンパクの一端部若しくは両端部における又はアミノ酸配列中の１つ以上の位置における１つ以上のアミノ酸残基の欠失、及び／又は、アミノ酸配列中の１つ以上の部位における１つ以上のアミノ酸の挿入によって、親／基準タンパクに由来するタンパクを意味する。タンパク誘導体の調製は、多くの場合、天然タンパクをコードするＤＮＡ塩基配列を修飾すること、適切な宿主へのそのＤＮＡ塩基配列の導入、及び、修飾されたＤＮＡ塩基配列を発現させて誘導体タンパクを作ることによって達成される。 As used herein, the term “derivative” refers to the addition of one or more amino acids to either or both the N-terminus and the C-terminus, at one or more different positions in the amino acid sequence. Substitution of one or more amino acid residues, deletion of one or more amino acid residues at one or both ends of the protein or at one or more positions in the amino acid sequence, and / or one in the amino acid sequence By the insertion of one or more amino acids at the above sites is meant a protein derived from the parent / reference protein. In many cases, protein derivatives are prepared by modifying a DNA base sequence encoding a natural protein, introducing the DNA base sequence into an appropriate host, and expressing the modified DNA base sequence to produce a derivative protein. Achieved by making.

本明細書において用いられているように、「発現」という用語は、遺伝子の核酸配列に基づいてポリペプチドが生産されるプロセスを意味する。このプロセスは転写及び翻訳の両方を含む。 As used herein, the term “expression” refers to the process by which a polypeptide is produced based on the nucleic acid sequence of a gene. This process includes both transcription and translation.

本明細書において用いられているように、「発現ベクター」という用語は、宿主においてコード配列を発現させることができる１つ又はそれ以上の適切な制御配列に作用可能な状態で結合されたＤＮＡコード配列（例えば遺伝子配列）を含むＤＮＡ構築物を意味する。そのような制御配列は、転写を達成するためにプロモータ、そのような転写を制御するための選択的なオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに、転写及び翻訳の停止を制御する配列を含む。ベクターは、プラスミド、ファージ粒子又は単に潜在的ゲノム挿入物であってもよい。適切な宿主に導入されると、ベクターは、宿主ゲノムから独立して複製及び機能することができ、又は、いくつかの例においてはゲノム自体に統合することもできる。 As used herein, the term “expression vector” refers to a DNA code operably linked to one or more suitable control sequences capable of expressing a coding sequence in a host. It means a DNA construct comprising a sequence (eg gene sequence). Such control sequences control promoters to achieve transcription, selective operator sequences to control such transcription, sequences encoding appropriate mRNA ribosome binding sites, and termination of transcription and translation Containing sequences to The vector may be a plasmid, a phage particle or simply a potential genomic insert. When introduced into a suitable host, the vector can replicate and function independently of the host genome or, in some instances, can integrate into the genome itself.

本明細書において用いられているように、「宿主細胞」という用語は、ポリペプチド生産用の組み換え発現ベクターをトランスフェクトすることができるか、トランスフォームすることができるか、又は、ポリペプチドの発現のために他の方法で導入することができる細胞又は細胞系を意味する。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、その子孫は、天然の、偶発的な、又は、意図的な突然変異のせいで、（形態において又は全ゲノムＤＮＡ補体において）親細胞と必ずしも同一でない可能性がある。宿主細胞は細菌性又は真菌性であってもよい。宿主細胞には、発現ベクターによってインビボにおいてトランスフェクト又はトランスフォームされた細胞が含まれる。 As used herein, the term “host cell” can be transfected, transformed, or expressed in a recombinant expression vector for polypeptide production. Means a cell or cell line that can be introduced in other ways. A host cell includes the progeny of a single host cell, which progeny are either parental (in form or in whole genomic DNA complement) due to natural, incidental, or intentional mutations. It may not always be the same as the cell. The host cell may be bacterial or fungal. Host cells include cells transfected or transformed in vivo with an expression vector.

本明細書において用いられているように、細胞に核酸配列を挿入するという文脈における「導入」という用語は、「トランスフェクション」、「トランスフォーメーション」及び「トランスダクション」を包含し、真核生物又は原核細胞中への核酸配列の組み込みであって、その核酸配列が、細胞のゲノム（例えば、染色体、プラスミド、色素体又はミトコンドリアＤＮＡ）に組み込まれるか、独立したレプリコンに変換されるか、又は、一時的に発現される組み込みを意味する。 As used herein, the term “introduction” in the context of inserting a nucleic acid sequence into a cell includes “transfection”, “transformation”, and “transduction” and includes eukaryotic or Integration of a nucleic acid sequence into a prokaryotic cell, wherein the nucleic acid sequence is integrated into the cell's genome (eg, chromosome, plasmid, plastid or mitochondrial DNA), converted to an independent replicon, or Means integration that is temporarily expressed.

本明細書において用いられているように、「洗浄組成物」及び「洗浄調合物」は、生地、皿、コンタクトレンズ、毛髪（シャンプー）、肌（石鹸及びクリーム）、歯（口内洗浄液、練り歯磨き）、並びに、他の固体及び表面のような、洗浄しようとする部材から望まれない化合物を除去するために使用することができる組成物を意味する。この用語は、組成物が組成物中で使用される酵素に適合する限り、特定の種類の望ましい洗浄組成物及び生成物の形態（例えば液体、ゲル、顆粒又はスプレーの組成物）のために選択されるあらゆる物質／化合物を包含する。洗浄組成物材料の具体的選択は、洗浄しようとする表面、部材又は生地と、使用中の洗浄条件に対する組成物の望ましい形態とを考慮することによって容易になされる。 As used herein, “cleansing composition” and “cleansing formulation” include dough, dish, contact lens, hair (shampoo), skin (soap and cream), teeth (mouth cleaning solution, toothpaste). ) As well as other solids and surfaces, and compositions that can be used to remove unwanted compounds from the member to be cleaned. This term is selected for a particular type of desired cleaning composition and product form (eg, liquid, gel, granule or spray composition) as long as the composition is compatible with the enzyme used in the composition. All substances / compounds to be used are included. The specific selection of cleaning composition material is facilitated by considering the surface, member or fabric to be cleaned and the desired form of the composition for the cleaning conditions in use.

この用語は、物及び／又は表面を洗浄、漂白、消毒及び／又は殺菌するのに適したあらゆる組成物をさらに意味する。この用語は、以下に限定されるものではないが、界面活性剤組成物（例えば、液体及び／又は固体の洗濯用洗剤、並びに、きめ細かい生地の洗剤；ガラス、木材、セラミック及び金属のカウンタートップ、並びに、窓などのための硬表面洗浄調合物；カーペットクリーナー；オーブンクリーナー；生地脱臭剤；生地柔軟剤；並びに、繊維及び洗濯前染み抜き、及び、皿洗剤）を含むことが意図されている。 The term further means any composition suitable for cleaning, bleaching, disinfecting and / or disinfecting objects and / or surfaces. The term includes, but is not limited to surfactant compositions (eg, liquid and / or solid laundry detergents and fine fabric detergents; glass, wood, ceramic and metal countertops, As well as hard surface cleaning formulations for windows and the like; carpet cleaners; oven cleaners; fabric deodorants; fabric softeners; and textile and pre-wash stains and dish detergents).

実際に、「洗浄組成物」及び「洗浄調合物」という用語は、（別段の定めがない限り）粒状又は粉末形態の万能洗剤又は重質洗剤、特に洗浄洗剤；液体、ゲル又はペースト形態の万能洗剤、特にいわゆる重質液体（ＨＤＬ）タイプ；きめ細かい生地用の液体洗剤；食器洗い洗剤又は軽質食器洗い洗剤、特に高発泡タイプ；家庭及び企業の使用のための様々な錠剤、顆粒、液体、及び、洗浄補助援助のタイプを含む食器洗浄機用洗剤；抗菌性手洗いタイプ、洗浄石鹸(cleaning bar)、口内洗浄液、義歯クリーナ、自動車シャンプー又はカーペットシャンプー、浴室洗剤を含む液体の洗浄剤及び殺菌剤；ヘアシャンプー及びヘアリンス；シャワー用ジェル及び泡風呂及び金属クリーナー；並びに、漂白添加剤及び「しみ取りスティック（stain-stick）」若しくは前処理タイプのような洗浄補助剤を包含する。 Indeed, the terms “cleaning composition” and “cleaning formulation” refer to a universal or heavy detergent in particulate or powder form (especially unless otherwise specified), in particular a cleansing detergent; universal in liquid, gel or paste form Detergents, especially the so-called heavy liquid (HDL) type; fine detergent liquid detergents; dishwashing detergents or light dishwashing detergents, especially high foaming types; various tablets, granules, liquids and washings for home and business use Detergents for dishwashers including auxiliary aid types; antibacterial hand wash types, cleaning bars, mouthwashes, denture cleaners, car shampoos or carpet shampoos, liquid cleaners and disinfectants including bathroom cleaners; hair shampoos And hair rinses; shower gels and bubble baths and metal cleaners; and bleach additives and “stain-stick” Or a cleaning aid such as a pretreatment type.

本明細書において用いられているように、「界面活性剤組成物」及び「洗剤調合物」という用語は、汚染された物の洗浄のための洗浄媒体中における使用が意図された混合物について使用される。いくつかの実施形態において、この用語は、生地及び／又は衣服を洗濯するもの（例えば「洗濯用洗剤」）について使用される。代替実施形態において、この用語は、皿、刃物などを洗浄するために使用されるもの（例えば「食器用洗剤」）のような他の洗剤を意味する。酵素に加えて、「界面活性剤組成物」及び「洗浄調合物」は、界面活性剤、ビルダ、漂白剤、漂白剤促進剤、青味剤及び蛍光染料、固化防止剤、マスキング剤、酵素活性剤、酸化防止剤、並びに、可溶化剤を含む洗剤を包含する。 As used herein, the terms “surfactant composition” and “detergent formulation” are used for mixtures intended for use in cleaning media for cleaning contaminated items. The In some embodiments, the term is used for laundry and / or garment laundry (eg, “laundry detergent”). In an alternative embodiment, the term refers to other detergents such as those used to clean dishes, knives, etc. (eg, “dishwashing detergent”). In addition to enzymes, “surfactant compositions” and “cleaning formulations” include surfactants, builders, bleaches, bleach accelerators, bluing and fluorescent dyes, anti-caking agents, masking agents, enzyme activity Including detergents, antioxidants, and detergents containing solubilizers.

本明細書において用いられているように、「洗剤安定性」というフレーズは、界面活性剤組成物における酵素の安定性、並びに、選択的には、付随する基質又は伝達物質の安定性を意味する。いくつかの実施形態においてはこの安定性を洗剤の使用中に評価するが、他の実施形態において、この用語は、保存中の界面活性剤組成物の安定性を意味する。 As used herein, the phrase “detergent stability” means the stability of the enzyme in the surfactant composition, and optionally the stability of the associated substrate or transmitter. . In some embodiments, this stability is assessed during use of the detergent, while in other embodiments, the term refers to the stability of the surfactant composition during storage.

本明細書において用いられているように、「硬表面洗浄組成物」という用語は、床、壁、タイル、ステンレススチール管（例えば発酵槽）、浴槽及びキッチン据え付け設備などのような硬い表面を洗浄するための界面活性剤組成物を意味する。そのような組成物は、以下に限定されるものではないが、固体、液体、乳剤などを含む任意の形態で提供可能である。 As used herein, the term “hard surface cleaning composition” refers to cleaning hard surfaces such as floors, walls, tiles, stainless steel tubes (eg, fermenters), bathtubs and kitchen fixtures, etc. Means a surfactant composition. Such compositions can be provided in any form including, but not limited to, solids, liquids, emulsions, and the like.

本明細書において用いられているように、「皿洗浄組成物」という用語は、以下に限定されるものではないが、粒状及び液体の形態を含む、皿を洗浄するための組成物のすべての形態を意味する。 As used herein, the term “dish cleaning composition” refers to all of the compositions for cleaning dishes, including but not limited to granular and liquid forms. Means form.

本明細書において用いられているように、「消毒」という用語は、真菌、細菌、胞子などを含む微生物の除去又は致死を意味する。 As used herein, the term “disinfecting” refers to the removal or death of microorganisms including fungi, bacteria, spores and the like.

本明細書において用いられているように、「生地洗浄組成物」という用語は、以下に限定されるものではないが、顆粒、液体及び固体の形態を含む、生地を洗浄するための界面活性剤組成物の形態を意味する。 As used herein, the term “dough cleaning composition” includes, but is not limited to, surfactants for cleaning dough, including granular, liquid and solid forms. It means the form of the composition.

本明細書において用いられているように、「ポリヌクレオチド」、「核酸」及び「オリゴヌクレオチド」という用語は、一本鎖又は複数鎖（例えば、一本鎖、二本鎖、三重螺旋など）であるかに関わらず、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、並びに／又は、（修飾されたヌクレオチド若しくは塩基又はそれらの類似体を含む）デオキシリボヌクレオチド若しくはリボヌクレオチドの類似体若しくは修飾された形態を含む任意の長さ及び任意の三次元構造のヌクレオチドの重合体の形態を意味するように互いに区別なく使用される。遺伝子コードが退化しているので、特定のアミノ酸をコードするために１つよりも多いコドンを使用してもよい。使用条件下においてポリヌクレオチドが所望の機能を保持する限り、ヌクレアーゼ耐性を増大させる修飾（例えば、デオキシ、２’−Ｏ−Ｍｅ、ホスホロチオエートなど）を含む、任意の種類の修飾されたヌクレオチド又はヌクレオチド類似体を使用することができる。検出又は補足の目的のために、例えば、放射性ラベル若しくは非放射性ラベル、又は、アンカー（例えば、ビオチン）などのラベルを組み込むこともできる。ポリヌクレオチドという用語は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）も包含する。ポリヌクレオチドは、天然に存在するものであってもよいし又は天然に存在しないものであってもよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分が割り込んだものであってもよい。１つ又はそれ以上のリン酸ジエステル結合を代替連結基によって置換することができる。例えば、リン酸塩は、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオアート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオアート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ２（「ホルムアセタル」）によって置換されてもよい。ここで、Ｒ又はＲ’は、それぞれ、独立して、Ｈ、又は、選択的にエーテル（−Ｏ−）結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル若しくはアラルキル(araldyl）を含む置換された若しくは置換されていないアルキル（炭素数１乃至２０）である。ポリヌクレオチド中のすべての結合が同じである必要はない。ポリヌクレオチドは、直鎖状若しくは環状であってもよいし、又は、直鎖部分と環状部分との組み合わせで構成されていてもよい。 As used herein, the terms “polynucleotide”, “nucleic acid” and “oligonucleotide” are single stranded or multiple stranded (eg, single stranded, double stranded, triple helix, etc.). Any length, including deoxyribonucleotides, ribonucleotides, and / or analogs or modified forms of deoxyribonucleotides or ribonucleotides (including modified nucleotides or bases or analogs thereof), whether or not And are used interchangeably to mean polymer forms of nucleotides of any three-dimensional structure. Since the genetic code is degenerate, more than one codon may be used to encode a particular amino acid. Any type of modified nucleotide or nucleotide analog, including modifications that increase nuclease resistance (eg, deoxy, 2'-O-Me, phosphorothioate, etc.) so long as the polynucleotide retains the desired function under the conditions of use The body can be used. For detection or supplemental purposes, for example, radioactive or non-radioactive labels or labels such as anchors (eg biotin) can be incorporated. The term polynucleotide also encompasses peptide nucleic acids (PNA). A polynucleotide may be naturally occurring or non-naturally occurring. The sequence of nucleotides may be interrupted by non-nucleotide components. One or more phosphodiester bonds can be replaced by alternative linking groups. For example, phosphates include P (O) S (“thioate”), P (S) S (“dithioate”), (O) NR 2 (“amidate”), P (O) R, P (O ) OR ′, CO or CH 2 (“form acetal”). Where R or R ′ are each independently H or optionally substituted with an ether (—O—) bond, aryl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkenyl or araldyl. Unsubstituted alkyl (having 1 to 20 carbon atoms). Not all bonds in a polynucleotide need be the same. The polynucleotide may be linear or circular, or may be composed of a combination of a linear part and a circular part.

本明細書において用いられているように、「ポリペプチド」、「タンパク」及び「ペプチド」という用語は、アミノ酸（すなわち、アミノ酸残基）を含む成分を意味する。アミノ酸残基を表す従来の１文字又は３文字のコードを使用する。ポリペプチドは、直鎖若しくは分岐であってもよいし、修飾されたアミノ酸を含んでいてもよいし、また、アミノ酸でないものが割り込だものであってもよい。この用語は、自然に、又は、例えば、ジスルフィド結合形成、糖鎖形成、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は、ラベリング成分との結合のような他の操作若しくは修飾のような介在によって、修飾されたアミノ酸重合体も包含する。その定義には、例えば、１つ又はそれ以上のアミノ酸の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、及び、当業界において知られている他の修飾を含むポリペプチドも含まれる。 As used herein, the terms “polypeptide”, “protein” and “peptide” refer to components comprising amino acids (ie, amino acid residues). Conventional one-letter or three-letter codes representing amino acid residues are used. The polypeptide may be linear or branched, may contain modified amino acids, or may be interrupted by non-amino acids. The term is modified either naturally or by intervention, such as disulfide bond formation, glycosylation, lipidation, acetylation, phosphorylation, or other manipulations or modifications such as conjugation with a labeling moiety. Also included are amino acid polymers prepared. The definition also includes polypeptides, including, for example, analogs of one or more amino acids (including, for example, unnatural amino acids) and other modifications known in the art.

本明細書において用いられているように、「プライマー」という用語は、天然に存在するものであるか又は合成されたものであるかに関わらず、例えば、精製された制限断片のように、適切な温度及び適切なｐＨにおいて、ヌクレオチド及びポリメラーゼの存在下において相補的な核酸と共にインキュベートされたときに、核酸合成の開始点として機能することができるオリゴヌクレオチドを意味する。プライマーは、好ましくは一本鎖であるが、代替的に二本鎖であってもよい。二本鎖である場合、プライマーは、伸張生成物を調製するために使用される前に、最初にその鎖を分離するように処理される。プライマーはオリゴデオキシリボヌクレオチドであることが好ましい。プライマーの正確な長さは、温度、プライマーの由来、及び、使用する方法を含む多くの要因に応じて変わるであろう。 As used herein, the term “primer” is used regardless of whether it is naturally occurring or synthesized, eg, as a purified restriction fragment. It means an oligonucleotide that can function as a starting point for nucleic acid synthesis when incubated with complementary nucleic acids in the presence of nucleotides and polymerase at a suitable temperature and appropriate pH. The primer is preferably single stranded, but may alternatively be double stranded. If double stranded, the primer is first treated to separate its strands before being used to prepare extension products. The primer is preferably an oligodeoxyribonucleotide. The exact length of the primer will vary depending on many factors, including temperature, primer origin, and the method used.

本明細書において用いられているように、「回収された」、「分離された」、「精製された」及び「分離された」という用語は、天然状態において付随する又は異種発現の結果として付随する少なくとも１つの成分から除去された材料（例えばタンパク、核酸又は細胞）を意味する。 As used herein, the terms “recovered”, “isolated”, “purified” and “isolated” are associated with the native state or as a result of heterologous expression. Means material (eg protein, nucleic acid or cells) removed from at least one component.

本明細書において用いられているように、「繊維」という用語は、ファイバー、毛糸、生地、衣服及び不織生地の材料を意味する。この用語は、天然材料及び合成材料（例えば、製造されたもの）、並びに、天然物と合成物との混合物から作られた繊維を包含する。「繊維」という用語は、処理されていない若しくは処理されたファイバーの両方、毛糸、織った若しくは編んだ生地、不織生地、並びに、衣服を意味する。いくつかの実施形態において、繊維はセルロースを含む。 As used herein, the term “fiber” means fibers, yarns, fabrics, garments, and nonwoven fabric materials. The term includes natural and synthetic materials (eg, manufactured), as well as fibers made from a mixture of natural and synthetic materials. The term “fiber” means both untreated or treated fibers, yarns, woven or knitted fabrics, non-woven fabrics, and garments. In some embodiments, the fiber comprises cellulose.

本明細書において用いられているように、「処理を必要とする繊維」というフレーズは、所望の効果を生じさせるために、糊抜き、研磨、漂白及び／又はバイオ研磨する必要がある繊維を意味する。 As used herein, the phrase “fibers that require processing” means fibers that need to be desizing, ground, bleached and / or biopolished to produce the desired effect. To do.

本明細書において用いられているように、「色変性を必要とする繊維」というフレーズは、色に関して変化させる必要がある繊維を意味する。これらの繊維は、他の処理に既に供されたものであってもよいし、まだ供されていないものであってもよい。同様に、これらの繊維は、後処理を必要とするものであってもよいし、必要としないものであってもよい。 As used herein, the phrase “fibers that require color modification” refers to fibers that need to be changed with respect to color. These fibers may have already been provided for other treatments, or may not have been provided yet. Similarly, these fibers may or may not require post-treatment.

本明細書において用いられているように、「生地」という用語は、線維及び／又は糸の製造された集成体であって、厚さに対して相対的に大きい表面積と、該集成体に有用な機械強度を与えるのに充分な凝集力とを有する集成体を意味する。 As used herein, the term “fabric” is a manufactured assembly of fibers and / or yarns that has a relatively large surface area relative to thickness and is useful for the assembly. Means an assembly having sufficient cohesive strength to provide sufficient mechanical strength.

本明細書において用いられているように、「色変性」という用語は、まとめて繊維材料と呼ばれる線維、毛糸、生地、衣服又は不織生地の材料に付随する色の彩度、飽和度、強度、輝度、及び／又は、色調における変化を意味する。理論に拘束されるものではないが、色変性は、繊維材料に付随する発色基の変性に起因するものであり、それによってその外観を変化させることが提唱されている。発色基は、繊維を製造するために使用される材料に自然に付随するもの（例えば、綿の白色）であってもよいし、又は、染色若しくは印刷のような特殊な仕上剤に付随するものであってもよい。色変性は、発色基が付着した材料に対する化学的修飾を包含するのみでなく、発色基に対する化学的修飾も包含する。色変性の例には、退色させること、漂白すること、色合いを変えることが含まれる。藍染めされたデニムに対する特別な色変性は、「ヴィンテージ外観」に退色させることであり、それは、新たに染色されたデニムほど強くない青色／紫色の色調、及び、新たに染色されたデニムよりくすんだ灰色の外観を有する。 As used herein, the term “color modification” refers to the color saturation, saturation, strength associated with materials of fibers, yarns, fabrics, clothing or nonwoven fabrics, collectively referred to as fiber materials. , Brightness, and / or change in color tone. Without being bound by theory, it is proposed that color modification is due to the modification of the chromophoric groups associated with the fiber material, thereby changing its appearance. The chromophore may be one that naturally accompanies the material used to produce the fiber (eg, cotton white) or one that accompanies a special finish such as dyeing or printing It may be. Color modification includes not only chemical modification to the material to which the chromophore is attached, but also chemical modification to the chromophore. Examples of color modification include fading, bleaching, changing shades. A special color modification for indigo-dyed denim is to fade to a “vintage look”, which is less blue / purple shade and less dull than newly dyed denim. It has a gray appearance.

本明細書において用いられているように、「漂白」という用語は、より薄い色を作るために、線維、毛糸、生地、衣服又は不織生地の材料のような繊維材料を処理するプロセスを意味する。この用語は、例えば、繊維処理用途の文脈におけるより明るい又はより白い繊維の生産、及び、例えば、洗浄用途の文脈における汚れの色の軽減も包含する。 As used herein, the term “bleaching” refers to the process of treating fiber materials such as fibers, yarns, fabrics, garments or nonwoven fabric materials to produce a lighter color. To do. The term also encompasses, for example, the production of lighter or whiter fibers in the context of fiber treatment applications and the reduction of soil color, for example in the context of cleaning applications.

本明細書において用いられているように、「糊(size)」及び「糊付けする(sizing)」という用語は、繊維工業において糸の耐摩耗性及び強度を増大させることによって製織性能を向上させるために用いられる化合物を意味する。糊は、通常、デンプン又はデンプン用化合物から作られる。 As used herein, the terms “size” and “sizing” are used to improve weaving performance by increasing the wear resistance and strength of yarns in the textile industry. Means a compound used in The glue is usually made from starch or starch compounds.

本明細書において用いられているように、「糊抜き(desize)」及び「糊抜きする(desizing)」という用語は、通常は特殊な仕上剤、染料又は漂白剤を塗生地する前に、繊維から糊（通常はデンプン）を排除／除去するプロセスを意味する。 As used herein, the terms "desize" and "desizing" usually refer to fibers before applying a special finish, dye or bleach. Means the process of removing / removing glue (usually starch) from

本明細書において用いられているように、「糊抜き酵素(desizing enzyme)」という用語は、糊を除去するために使用される酵素を意味する。典型的な酵素は、アミラーゼ、セルラーゼ及びマンナナーゼである。 As used herein, the term “desizing enzyme” means an enzyme used to remove glue. Typical enzymes are amylases, cellulases and mannanases.

本明細書において用いられているように、「同一性％」という用語は、本明細書に記載されているようなラッカーゼをコードする核酸配列と他の核酸配列との間の核酸配列の同一性のレベル、又は、本明細書に記載されているようなラッカーゼ酵素と他のアミノ酸配列との間のアミノ酸配列の同一性のレベルを意味する。配列比較は、従来の配列比較プログラムを使用して実行することができる。核酸及びアミノ酸の配列同一性の典型的なレベルは、以下に限定されるものではないが、本明細書に記載されているように、規定の配列（例えば、ラッカーゼのためのコード配列又はラッカーゼのアミノ酸配列）に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは、少なくとも９９％、又は、それを超える配列同一性を含む。 As used herein, the term “% identity” refers to the identity of a nucleic acid sequence between a nucleic acid sequence encoding a laccase and other nucleic acid sequences as described herein. Or the level of amino acid sequence identity between a laccase enzyme and other amino acid sequences as described herein. The sequence comparison can be performed using a conventional sequence comparison program. Typical levels of nucleic acid and amino acid sequence identity include, but are not limited to, defined sequences (eg, coding sequences for laccases or laccases as described herein). Amino acid sequence) at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% , At least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%, or more.

２つの配列間の同一性を決定するために使用することができる典型的なコンピュータプログラムは、以下に限定されるものではないが、<www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST>においてインターネット上で公的に利用可能な、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ、並びに、ＴＢＬＡＳＴＸ、ＢＬＡＳＴＰ及びＴＢＬＡＳＴＮなどのＢＬＡＳＴプログラムの組み合わせを含む。また、「Altschul, et al., 1990」及び「Altschul, et al., 1997」を参照されたい。 A typical computer program that can be used to determine identity between two sequences is not limited to the following, but is available on the Internet at <www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST>. For example, BLASTN, BLASTX, and combinations of BLAST programs such as TBLASTX, BLASTP and TBLASTN. See also “Altschul, et al., 1990” and “Altschul, et al., 1997”.

配列検索は、通常、与えられた核酸配列をＧｅｎＢａｎｋ ＤＮＡ塩基配列及び他の公のデータベースの核酸配列と比較して評価するときは、ＢＬＡＳＴＮプログラムを使用して行う。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ＧｅｎＢａｎｋタンパク配列及び他の公のデータベースのアミノ酸配列に対して、すべてのリーディングフレームに翻訳される核酸配列を検索するのに好まれる。ＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＸの両方は、１１．０のオープンギャップペナルティ及び１．０の拡張ギャップペナルティのデフォルトパラメーターを使用して実行され、ＢＬＯＳＵＭ−６２マトリクスを利用する（例えば、Altschul, et al., 1997を参照されたい。） A sequence search is usually performed using the BLASTN program when evaluating a given nucleic acid sequence by comparing it with a GenBank DNA base sequence and nucleic acid sequences in other public databases. The BLASTX program is preferred for searching nucleic acid sequences that are translated into all reading frames against GenBank protein sequences and other public database amino acid sequences. Both BLASTN and BLASTX are performed using the default parameters of 11.0 open gap penalty and 1.0 extended gap penalty and utilize the BLOSUM-62 matrix (see, eg, Altschul, et al., 1997). Please refer.)

２つ以上の配列間の「同一性％」を決定するために選択した複数の配列の配列比較は、例えば、１０．０のオープンギャップペナルティ、０．１の拡張ギャップペナルティ及びＢＬＯＳＵＭ３０シミラリティマトリックスを含むデフォルトパラメーターで動作させたＭａｃＶｅｃｔｏｒバージョン６．５のＣＬＵＳＴＡＬ−Ｗプログラムを使用して実行することができる。 Sequence comparisons of multiple sequences selected to determine “% identity” between two or more sequences include, for example, an open gap penalty of 10.0, an extended gap penalty of 0.1, and a BLOSUM30 similarity matrix. It can be implemented using the MacVector version 6.5 CLUSTAL-W program operated with the included default parameters.

本明細書において用いられているように、「化学伝達物質」及び「伝達物質」という用語は、酸化酵素活性を示す酵素（例えばラッカーゼ）と第２基質又は電子供与体と間で電子を輸送するための酸化還元伝達物質として機能する化合物を意味するように互いに区別なく使用される。そのような化学伝達物質は、当業界において「エンハンサー(enhancers)」及び「アクセラレ−タ(accelerator)」としても知られている。 As used herein, the terms “chemical mediator” and “transmitter” transport electrons between an enzyme exhibiting oxidase activity (eg, laccase) and a second substrate or electron donor. Are used interchangeably to mean compounds that function as redox mediators. Such chemical mediators are also known in the art as “enhancers” and “accelerators”.

本明細書において用いられているように、繊維材料が存在する槽に関する「排水する(draining)」又は「落とす(dropping)」という用語は、槽中に存在する溶媒及び試薬を完全に又は部分的に放出すること／空にすることを意味する。槽を排水するステップは、通常、ある工程段階において存在する溶媒及び試薬が後の工程段階を妨げないようにするために、工程段階の間に実行される。脱水は、そのような溶媒及び試薬をさらに除去するための１つ又はそれ以上のすすぎステップを伴うものであってもよい。 As used herein, the terms `` draining '' or `` dropping '' with respect to a tank in which fiber material is present are used to completely or partially remove solvents and reagents present in the tank. Means emptying / empty. The step of draining the bath is usually performed during the process steps so that the solvents and reagents present in one process step do not interfere with later process steps. Dehydration may involve one or more rinsing steps to further remove such solvents and reagents.

本明細書において用いられているように、「第２基質」及び「電子供与体」という用語は、酸化酵素活性を示す酵素によって電子を与えることができる及び受け取ることができる染料、色素（例えば藍）、発色基（例えば、ポリフェノール、アントシアニン、若しくは、カロチノイド）又は他の第２基質を意味するように相互に区別なく使用される。 As used herein, the terms “second substrate” and “electron donor” refer to dyes, pigments (eg, indigo) that can donate and receive electrons by enzymes that exhibit oxidase activity. ), Chromophores (eg, polyphenols, anthocyanins, or carotenoids) or other second substrates to be used interchangeably.

以下の略語／頭字語は、別段の定めがない限り以下の意味を有する。
ＥＣ 酵素委員会
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
ｋＤａ キロダルトン
ＭＷ 分子量
ｗ／ｖ 重量／体積
ｗ／ｗ 重量／重量
ｖ／ｖ 体積／体積
ｗｔ％ 重量パーセント
℃ 摂氏温度
Ｈ２Ｏ 水
ｄＨ２０又はＤＩ 脱イオン水
ｄＩＨ２Ｏ 脱イオン水、ミリＱ濾過
ｇ又はｇｍ グラム
μｇ マイクログラム
ｍｇ ミリグラム
ｋｇ キログラム
μＬ及びμｌ マイクロリットル
ｍＬ及びｍｌ ミリリットル
ｍｍ ミリメートル
μｍ マイクロメートル
Ｍ モル
ｍＭ ミリモル
μＭ マイクロモル
Ｕ ユニット
ｓｅｃ及び” 秒
ｍｉｎ及び’ 分
ｈｒ 時間
ｅｑ． 当量
Ｎ ノーマル
ＲＴＵ 使用準備済(ready-to-use)
Ｕ 単位
ｏｗｇ 物の重量に対して(on weight of goods)
ＣＩＥ 国際照明委員会(International Commission on Illumination) The following abbreviations / acronyms have the following meanings unless otherwise specified.
EC Enzyme Committee EDTA ethylenediaminetetraacetic acid kDa kilodalton MW molecular weight w / v weight / volume w / w weight / weight v / v volume / volume wt% weight percent ° C Celsius temperature H 2 O water dH 2 0 or DI deionized water dIH 2 O deionized water, milliQ filtered g or gm gram μg microgram mg milligram kg kilogram μL and μl microliter mL and ml milliliter mm millimeter μm micrometer M mol mM mmol μM micromol U unit sec and “second min” 'Min hr time eq.equivalent N normal RTU ready-to-use
U unit owg on weight of goods
CIE International Commission on Illumination

数値範囲は、その範囲を定義する数を含む。文脈から明示的に明らかにされていない限り、単数形の冠詞「１つの(a)」、「１つの(an)」及び「その(the)」は、複数の指示対象を含む。別段の定めがない限り、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の標準的な方向で記載されており、また、ポリヌクレオチドは、５’から３’の標準的な方向で記載されている。本発明の組成物及び方法の実施又は試験において均等な方法及び材料を使用することができるので、記載されている特定の方法論、プロトコル及び試薬が限定されるように意図されていないことは理解されるに違いない。読者を助けるために明細書を複数の章に分けているが、限定するものとして章の見出しを解釈してはならず、ある章における記載を別の章に適用することができる。本明細書において引用されているすべての刊行物は、言及することによって明示的に組み込まれている。 Numeric ranges are inclusive of the numbers defining the range. Unless expressly clear from the context, the singular articles “a”, “an” and “the” include plural referents. Unless otherwise specified, polypeptides are described in a standard orientation from N-terminus to C-terminus, and polynucleotides are described in a standard orientation from 5 'to 3'. It is understood that the particular methodologies, protocols and reagents described are not intended to be limiting as equivalent methods and materials may be used in the practice or testing of the compositions and methods of the present invention. Must be. The description has been divided into chapters to assist the reader, but the chapter headings should not be construed as limiting, and descriptions in one chapter can be applied to other chapters. All publications cited in this specification are expressly incorporated by reference.

ラッカーゼ及びラッカーゼ関連酵素
酵素的酸化の系、組成物及び方法は、本明細書においてまとめて「ラッカーゼ」又は「ラッカーゼ酵素」と呼ばれるラッカーゼ又はラッカーゼ関連酵素の１つ又はそれ以上を含む。そのようなラッカーゼは、生化学及び分子生物学の国際連合の命名法委員会(Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology)(IUBMB)による、ＥＣ１．１０．３．２に包含されるあらゆるラッカーゼ酵素を包含する。微生物及び植物に由来するラッカーゼ酵素は、当業界において知られている。微生物のラッカーゼ酵素は、細菌又は真菌（糸状菌及び酵母菌を含む）に由来するものであってもよい。好適な例には、アスペルギルス(Aspergillus)、ニューロスポラ(Neurospora)(例えば、Ｎ．クラッサ(N. crassa))、ポドスポラ(Podospora)、ボトリティス(Botrytis)、コリビア(Collybia)、セレナ(Cerrena)(例えば、ユニカラー)、スタキボトリス(Stachybotrys)、パヌス(Panus)（例えばＰ．ルディス）、チエラビア(Thielavia)、フォメス(Fomes)、レンチヌス(Lentinus)、プルーロタス(Pleurotus)、トラメテス(Trametes)（例えば、Ｔ．ビロッサ(T. villosa)及びＴ．ベルシカラー(T. versicolor)）、リゾクトニア(Rhizoctonia)（例えばＲ．ソラニ(R.solani)、コプリナス（Coprinus）（例えばＣ．プリカティリス(C.plicatilis）、Ｃ．シネレウス(C. cinereus)）、ムジナタケ(Psatyrella)、ミセリオフトラ（例えばＭ．サーモンヒラ(thermonhila)）、シタリディウム(Schytalidium)、フレビア(Phlebia)（例えばＰ．ラディタ(radita)（ＷＯ92／01046）、若しくはコリオルス(Coriolus)（例えばＣ．ヒルスタス(hirsutus)（JP2238885)）、スポンジペリス(Spongipellis)、ポリポラス(Polyporus)、セリポリオプシス サブベルミスポラ(Ceriporiopsis subvermispora)、ガノデルマ ツノダエ(Ganoderma tsunodae)、並びに、トリコデルマ(Trichoderma)の種から由来する又は由来し得るラッカーゼが含まれる。 Laccase and laccase-related enzymatic enzymatic oxidation systems, compositions and methods include one or more of laccases or laccase-related enzymes, collectively referred to herein as “laccases” or “laccase enzymes”. Such laccases are any of those included in EC 1.10.3.2 by the Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (IUBMB). Includes laccase enzyme. Laccase enzymes derived from microorganisms and plants are known in the art. Microbial laccase enzymes may be derived from bacteria or fungi (including filamentous fungi and yeasts). Suitable examples include Aspergillus, Neurospora (eg, N. crassa), Podospora, Botrytis, Collybia, Cerrena (eg, Unicolor), Stachybotrys, Panus (eg P. Rudis), Thielavia, Fomes, Lentinus, Pleurotus, Trametes (eg T. et al.). T. villosa and T. versicolor), Rhizoctonia (for example R. solani), Coprinus (for example C. plicatilis, C. C. cinereus), Psatyrella, Miseriotra (for example, M. thermonhila), Cytalidium, Phlebia (for example, P. radita ( O92 / 01046), or Coriolus (eg, C. hirsutus (JP2238885)), Spongipellis, Polyporus, Ceriporiopsis subvermispora, Ganoderma tsunodae, Ganoderma tsunodae Also included are laccases derived from or derivable from Trichoderma species.

ラッカーゼは、ラッカーゼをコードするヌクレオチド配列を含む組み換えＤＮＡベクターでトランスフォームされた宿主細胞を培養することによって生産することができる。ＤＮＡベクターには、培地中におけるラッカーゼの発現を可能にし、また、その培養液からラッカーゼを選択的に回収できるようにするヌクレオチド配列がさらに含まれていてもよい。 Laccase can be produced by culturing host cells transformed with a recombinant DNA vector comprising a nucleotide sequence encoding laccase. The DNA vector may further include a nucleotide sequence that allows expression of the laccase in the medium and allows the laccase to be selectively recovered from the culture medium.

ラッカーゼ酵素をコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、適切な宿主細胞内にトランスフォームすることができる。宿主細胞は、糸状菌細胞のような真菌細胞であってもよく、その例は、以下に限定されないが、トリコデルマ［例えば、Ｔ．リーゼイ（従来、Ｔ．ロンギブラキアツム(longibrachiatum)として分類され、また、現在、ハイポクレアジェコリナ(Hypocrea jecorina)としても知られている）、Ｔ．ビリデ(Viride)、Ｔ．コニンジ(koningii)及びＴ．ハルジアヌム(harzianum)］、アスペルギルス(Aspergillus)（例えば、Ａ．ニガー(A. niger)、Ａ．ニデュランス(A. nidulans)、Ａ．オリザエ(A. oryzae)及びＡ．アワモリ(A. awamori)）、ペニシリウム(Penicillium)、フミコラ(Humicola)(例えば、Ｈ．インソレンズ(H. insolens)及びＨ．グリシー(H.grisea))、フザリウム(Fusarium)（例えばＦ．グラミナム(F. Graminum)及びＦ．ベネナツム(F.venenatum)）、ニューロスポラ(Neurospora)、ボタンタケ(Hypocrea)、並びに、ケカビ(Mucor)の種を包含する。ラッカーゼ酵素の発現用の宿主細胞は、セレナ(Cerrena)（例えば、Ｃ．ユニカラー）の一種に由来するものであってもよい。真菌細胞は、当業界において知られている技術を使用して、細胞壁の再生を後に伴う、原形質体形成及び原形質体のトランスフォーメーションを含むプロセスによってトランスフォームすることができる。 An expression vector containing a polynucleotide sequence encoding a laccase enzyme can be transformed into a suitable host cell. The host cell may be a fungal cell, such as a filamentous fungal cell, examples of which include, but are not limited to, Trichoderma [e.g. Liesei (formerly classified as T. longibrachiatum, also now known as Hypocrea jecorina), T. Viride, T. Koningii and T. Harzianum], Aspergillus (eg, A. niger, A. nidulans, A. oryzae and A. awamori) Penicillium, Humicola (eg, H. insolens and H. grisea), Fusarium (eg, F. Graminum and F. Benenatum). (F. venenatum), Neurospora, Button Bamboo (Hypocrea), and Mucor species. The host cell for expression of the laccase enzyme may be derived from a type of Cerrena (eg C. unicolor). Fungal cells can be transformed, using techniques known in the art, by processes including protoplast formation and protoplast transformation, followed by cell wall regeneration.

代替的に、宿主生物は、バチルス［例えば、Ｂ．サブチリス、Ｂ．リケニホルミス、Ｂ．レンタス、Ｂ．（ナウゲオバシラス）ステアロサーモフィラス、及び、Ｂ．ブレビス］、シュードモナスストレプトミセス（例えば、Ｓ．コエリカラー、Ｓ．リビダンス）、又は、大腸菌のような細菌の一種に由来するものであってもよい。細菌細胞のトランスフォーメーションは、例えば、「Maniatis, T. et al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual," Cold Spring Harbor, 1982」に記載されているように、従来の方法に従って実行することができる。適切なＤＮＡ塩基配列のスクリーニング及びベクターの構築もまた、標準的手順（上記参照）によって実行可能である。 Alternatively, the host organism is a Bacillus [e.g. Subtilis, B. Rikeniformis, B.M. Rentas, B.H. (Naugeobacillus) stearothermophilus and Brevis], Pseudomonas streptomyces (for example, S. coelicolor, S. lividans), or one derived from a kind of bacteria such as E. coli. Transformation of bacterial cells can be performed according to conventional methods, for example, as described in “Maniatis, T. et al.,“ Molecular Cloning: A Laboratory Manual, ”Cold Spring Harbor, 1982”. . Screening of appropriate DNA sequences and construction of vectors can also be performed by standard procedures (see above).

トランスフォームされた宿主細胞を培養するために使用される培地は、宿主細胞を培養するのに適した従来のあらゆる培地であり得る。いくつかの実施形態において、発現された酵素は、培地中に分泌され、その培地から公知の手順に従って回収することができる。ラッカーゼは、例えば、米国特許公開公報第２００８／０１９６１７３号に記載されているような培地から回収することができる。いくつかの実施形態において、酵素は、細胞内で発現され、細胞膜の破壊後に回収される。 The medium used to culture the transformed host cells can be any conventional medium suitable for culturing host cells. In some embodiments, the expressed enzyme is secreted into the medium and can be recovered from the medium according to known procedures. Laccase can be recovered from media such as described in, for example, US Patent Publication No. 2008/0196173. In some embodiments, the enzyme is expressed intracellularly and is recovered after disruption of the cell membrane.

特定の実施形態において、発現宿主は、ＣＢＨ１プロモータ及びターミネータの制御下にラッカーゼコード領域を有するトリコデルマリーゼイであってもよい（例えば、米国特許第５，８６１，２７１号参照）。発現ベクターは、例えば、米国特許第７，４１３，８８７号に開示されているような、ｐＴｒｅｘ３ｇであってもよい。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、米国特許公開公報第２００８／０１９６１７３号又は第２００９／０２２１０３０号に記載されているように発現される。 In certain embodiments, the expression host may be a Trichoderma reesei having a laccase coding region under the control of a CBH1 promoter and terminator (see, eg, US Pat. No. 5,861,271). The expression vector may be pTrex3g, for example as disclosed in US Pat. No. 7,413,887. In some embodiments, the laccase is expressed as described in US Patent Publication Nos. 2008/0196173 or 2009/0221030.

以下のラッカーゼ遺伝子及びラッカーゼは、米国公開公報第２００８／０１９６１７３号に記載されている。

Ａ．ＣＢＳ１１５．０７５株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＡ１遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号１）：
ATGAGCTCAA AGCTACTTGC TCTTATCACT GTCGCTCTCG TCTTGCCACT 50
AGGCACCGAC GCCGGCATCG GTCCTGTTAC CGACTTGCGC ATCACCAACC 100
AGGATATCGC TCCAGATGGC TTCACCCGAC CAGCGGTACT AGCTGGGGGC 150
ACATTCCCTG GAGCACTTAT TACCGGTCAG AAGGTATGGG AGATCAACTT 200
GGTTGAATAG AGAAATAAAA GTGACAACAA ATCCTTATAG GGAGACAGCT 250
TCCAAATCAA TGTCATCGAC GAGCTTACCG ATGCCAGCAT GTTGACCCAG 300
ACATCCATTG TGAGTATAAT TTAGGTCCGC TCTTCTGGCT ATCCTTTCTA 350
ACTCTTACCG TCTAGCATTG GCACGGCTTC TTTCAGAAGG GATCTGCGTG 400
GGCCGATGGT CCTGCCTTCG TTACTCAATG CCCTATCGTC ACCGGAAATT 450
CCTTCCTGTA CGACTTTGAT GTTCCCGACC AACCTGGTAC TTTCTGGTAC 500
CATAGTCACT TGTCTACTCA ATATTGCGAT GGTCTTCGTG GCCCGTTCGT 550
TGTATACGAT CCAAAGGATC CTAATAAACG GTTGTACGAC ATTGACAATG 600
GTATGTGCAT CATCATAGAG ATATAATTCA TGCAGCTACT GACCGTGACT 650
GATGCTGCCA GATCATACGG TTATTACCCT GGCAGACTGG TACCACGTTC 700
TCGCAAGAAC TGTTGTCGGA GTCGCGTAAG TACAGTCTCA CTTATAGTGG 750
TCTTCTTACT CATTTTGACA TAGGACACCC GACGCAACCT TGATCAACGG 800
TTTGGGCCGT TCTCCAGACG GGCCAGCAGA TGCTGAGTTG GCTGTCATCA 850
ACGTTAAACG CGGCAAACGG TATGTTATTG AACTCCCGAT TTCTCCATAC 900
ACAGTGAAAT GACTGTCTGG TCTAGTTATC GATTTCGTCT GGTCTCCATC 950
TCATGTGACC CTAATTACAT CTTTTCTATC GACAACCATT CTATGACTGT 1000
CATCGAAGTC GATGGTGTCA ACACCCAATC CCTGACCGTC GATTCTATTC 1050
AAATCTTCGC AGGCCAACGA TACTCGTTCG TCGTAAGTCT CTTTGCACGA 1100
TTACTGCTTC TTTGTCCATT CTCTGACCTG TTTAAACAGC TCCATGCCAA 1150
CCGTCCTGAA AACAACTATT GGATCAGGGC CAAACCTAAT ATCGGTACGG 1200
ATACTACCAC AGACAACGGC ATGAACTCTG CCATTCTGCG ATACAACGGC 1250
GCACCTGTTG CGGAACCGCA AACTGTTCAA TCTCCCAGTC TCACCCCTTT 1300
GCTCGAACAG AACCTTCGCC CTCTCGTGTA CACTCCTGTG GTATGTTTCA 1350
AAGCGTTGTA ATTTGATTGT GGTCATTCTA ACGTTACTGC GTTTGCATAG 1400
CCTGGAAACC CTACGCCTGG CGGCGCCGAT ATTGTCCATA CTCTTGACTT 1450
GAGTTTTGTG CGGAGTCAAC ATTCGTAAAG ATAAGAGTGT TTCTAATTTC 1500
TTCAATAATA GGATGCTGGT CGCTTCAGTA TCAACGGTGC CTCGTTCCTT 1550
GATCCTACCG TCCCCGTTCT CCTGCAAATT CTCAGCGGCA CGCAGAATGC 1600
ACAAGATCTA CTCCCTCCTG GAAGTGTGAT TCCTCTCGAA TTAGGCAAGG 1650
TCGTCGAATT AGTCATACCT GCAGGTGTCG TCGGTGGACC TCATCCGTTC 1700
CATCTCCATG GGGTACGTAA CCCGAACTTA TAACAGTCTT GGACTTACCC 1750
GCTGACAAGT GCATAGCATA ACTTCTGGGT CGTGCGAAGT GCCGGAACCG 1800
ACCAGTACAA CTTTAACGAT GCCATTCTCC GAGACGTCGT CAGTATAGGA 1850
GGAACCGGGG ATCAAGTCAC CATTCGTTTC GTGGTATGTT TCATTCTTGT 1900
GGATGTATGT GCTCTAGGAT ACTAACCGGC TTGCGCGTAT AGACCGATAA 1950
CCCCGGACCG TGGTTCCTCC ATTGCCATAT CGACTGGCAC TTGGAAGCGG 2000
GTCTCGCTAT CGTATTTGCA GAGGGAATTG AAAATACTGC TGCGTCTAAT 2050
TTAACCCCCC GTACGCGGTT TCCCTCACAT CCTGGAGCTA AGCAGCTTAC 2100
TAACATACAT TTGCAGAGGC TTGGGATGAG CTTTGCCCGA AGTATAACGC 2150
GCTCAGCGCA CAAAAGAAGG TTGCATCTAA GAAAGGCACT GCCATCTAAT 2200
TTTTGTAACA AACAAGGAGG GTCTCTTGTA CTTTTATTGG GATTTCTTTC 2250
TTGGGGTTTA TTGTTAAACT TGACTCTACT ATGTTTGGAA GACGAAAGGG 2300
GCTCGCGCAT TTATATACTA TCTCTCTTGG CATCACCTGC AGCTCAATCC 2350
TTCAACCACC TAA 2363

翻訳されたタンパク配列（配列番号２）：
MSSKLLALIT VALVLPLGTD AGIGPVTDLR ITNQDIAPDG FTRPAVLAGG 50
TFPGALITGQ KGDSFQINVI DELTDASMLT QTSIHWHGFF QKGSAWADGP 100
AFVTQCPIVT GNSFLYDFDV PDQPGTFWYH SHLSTQYCDG LRGPFVVYDP 150
KDPNKRLYDI DNDHTVITLA DWYHVLARTV VGVATPDATL INGLGRSPDG 200
PADAELAVIN VKRGKRYRFR LVSISCDPNY IFSIDNHSMT VIEVDGVNTQ 250
SLTVDSIQIF AGQRYSFVLH ANRPENNYWI RAKPNIGTDT TTDSGMNSAI 300
LRYNGAPVAE PQTVQSPSLT PLLEQNLRPL VYTPVPGNPT PGGADIVHTL 350
DLSFDAGRFS INGASFLDPT VPVLLQILSG TQNAQDLLPP GSVIPLELGK 400
VVELVIPAGV VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GTDQYNFNDA ILRDVVSIGG 450
TGDQVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIE NTAASNLTPQ 500
AWDELCPKYN ALSAQKKLNP STT 523

Ｂ．ＣＢＳ１５４．２９株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＡ２遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号３）：
ATGAGCTCAA AGCTACTTGC TCTTATTACT GTCGCTCTCG TCTTGCCACT 50
AGGCACTGAC GCCGGCATCG GTCCTGTTAC CGACTTGCGC ATCACCAACC 100
AGGATATCGC TCCAGATGGC TTCACCCGAC CAGCTGTACT GGCTGGGGGC 150
ACATTCCCCG GAGCACTGAT TACCGGTCAG AAGGTATGGG AGATCGATTT 200
CGTTGAATAG AGAAATACAA CTGAAAACAA ATTCTTATAG GGAGACAGCT 250
TCCAAATCAA TGTCATCGAC GAGCTTACCG ATGCCAGCAT GTTGACCCAG 300
ACATCCATTG TGAGTATAAT ATGGGTCCGC TCTTCTAGCT ATCCTTTCTA 350
ACTCTTACCC TCTAGCATTG GCACGGCTTC TTTCAGAAGG GATCTGCGTG 400
GGCCGATGGT CCTGCCTTCG TTACTCAATG TCCTATCGTC ACCGGAAATT 450
CCTTCCTGTA CGACTTTGAT GTCCCCGACC AACCTGGTAC TTTCTGGTAC 500
CATAGTCACT TGTCTACTCA ATATTGCGAT GGTCTTCGGG GCCCGTTCGT 550
TGTATACGAT CCAAAGGATC CTAATAAACG GTTGTACGAC ATTGACAATG 600
GTATGTGCAT CATCATAAAA ATATAATTCA TGCAGCTACT GACCGCGACT 650
GATGCTGCCA GATCATACGG TTATTACCCT GGCAGACTGG TACCACGTTC 700
TCGCACGAAC TGTTGTCGGA GTCGCGTAAG TACAGTCTGA CTTATAGTGG 750
TCTTCTTACT CATTTTGACA TAGGACACCC GACGCAACCT TGATCAACGG 800
TTTGGGCCGT TCTCCAGACG GGCCAGCAGA TGCTGAGTTG GCTGTCATCA 850
ACGTTAAACG CGGCAAACGG TATGTCATTG AACTCCCGAT TTCTCCATTC 900
ACATTGAAAT GACTGTCTGG TCTAGTTATC GATTCCGTCT GGTCTCCATC 950
TCATGTGACC CTAATTACAT CTTTTCTATC GACAACCATT CTATGACTGT 1000
CATCGAAGTC GATGGTGTCA ACACCCAATC CCTGACCGTC GATTCTATCC 1050
AAATCTTCGC AGGCCAACGC TACTCGTTCG TCGTAAGTCT CTTTGAATGG 1100
TTGGTGCTTT TTCTGTCCAT TCTCTAACCT GTTTATACAG CTCCATGCCA 1150
ACCGTCCTGA AAACAACTAT TGGATCAGGG CCAAACCTAA TATCGGTACG 1200
GATACTACCA CAGACAACGG CATGAACTCT GCCATTCTGC GATACAACGG 1250
CGCACCTGTT GCGGAACCGC AAACTGTTCA ATCTCCCAGT CTCACCCCTT 1300
TGCTCGAACA GAACCTTCGC CCTCTCGTGT ACACTCCTGT GGTATGTTTC 1350
AAAGCGTTGT AATTTGATTG TGGTCATTCT AACGTTACTG CCTTTGCACA 1400
GCCTGGAAAT CCTACGCCTG GCGGGGCCGA TATTGTCCAT ACTCTTGACT 1450
TGAGTTTTGT GCGGAGTCAA CATTCGTAAA GATAAGAGTG TTTCTAATTT 1500
CTTCAATAAT AGGATGCTGG TCGCTTCAGT ATCAACGGTG CCTCGTTCCT 1550
TGATCCTACC GTCCCTGTTC TCCTGCAAAT TCTCAGCGGC ACGCAGAATG 1600
CACAAGATCT ACTCCCTCCT GGAAGTGTGA TTCCTCTCGA ATTAGGCAAG 1650
GTCGTCGAAT TAGTCATACC TGCAGGTGTT GTCGGTGGAC CTCATCCGTT 1700
CCATCTCCAT GGGGTACGTA ACCCGAACTT ATAACAGTCT TGGACTTACC 1750
CGCTGACAAG TGTATAGCAT AACTTCTGGG TCGTGCGAAG TGCCGGAACC 1800
GACCAGTACA ACTTTAACGA TGCCATTCTC CGAGACGTCG TCAGTATAGG 1850
AGGAACCGAG GATCAAGTCA CCATTCGATT CGTGGTATAT ACTTCATTCT 1900
TGTGGATGTA TGTGCTCTAG GATACTAACT GGCTTGCGCG TATAGACCGA 1950
TAACCCCGGA CCGTGGTTCC TCCATTGCCA TATCGACTGG CACTTGGAAG 2000
CGGGTCTCGC TATCGTATTT GCAGAGGGAA TTGAAAATAC TGCTGCGTCT 2050
AATCCAACCC CCCGTATGCG GTTTCCCACA CATTCTGAAT CTAAGCAGCT 2100
TACTAATATA CATTTGCAGA GGCTTGGGAT GAGCTTTGCC CGAAGTATAA 2150
CGCGCTCAAC GCACAAAAGA AGGTTGCATC TAAGAAAGGC ACTGCCATCT 2200
AATCCTTGTA ACAAACAAGG AGGGTCTCTT GTACTTTTAT TGGGATTTAT 2250
TTCTTGGGGT TTATTGTTCA ACTTGATTCT ACTATGTTTG GAAGTAGCGA 2300
TTACGAAAGG GGCTTGCGCA TTTATATACC ATCTTTCTTG GCACCACCTG 2350
CAGCTCAATC CTTCAACCAC CTAA 2374

翻訳されたタンパク配列（配列番号４）：
MSSKLLALIT VALVLPLGTD AGIGPVTDLR ITNQDIAPDG FTRPAVLAGG 50
TFPGALITGQ KGDSFQINVI DELTDASMLT QTSIHWHGFF QKGSAWADGP 100
AFVTQCPIVT GNSFLYDFDV PDQPGTFWYH SHLSTQYCDG LRGPFVVYDP 150
KDPNKRLYDI DNDHTVITLA DWYHVLARTV VGVATPDATL INGLGRSPDG 200
PADAELAVIN VKRGKRYRFR LVSISCDPNY IFSIDNHSMT VIEVDGVNTQ 250
SLTVDSIQIF AGQRYSFVLH ANRPENNYWI RAKPNIGTDT TTDNGMNSAI 300
LRYNGAPVAE PQTVQSPSLT PLLEQNLRPL VYTPVPGNPT PGGADIVHTL 350
DLSFDAGRFS INGASFLDPT VPVLLQILSG TQNAQDLLPP GSVIPLELGK 400
VVELVIPAGV VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GTDQYNFNDA ILRDVVSIGG 450
TEDQVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIE NTAASNPTPQ 500
AWDELCPKYN ALNAQKKLNP STT 523

Ｃ．ＣＢＳ１１５．０７５株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＢ１遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号５）：
ATGTCTCTTC TTCGTAGCTT GACCTCCCTC ATCGTACTAG TCATTGGTGC 50
ATTTGCTGCA ATCGGTCCAG TCACTGACCT ACATATAGTG AACCAGAATC 100
TCGACCCAGA TGGTTTCAAC CGCCCCACTG TACTCGCAGG TGGTACTTTC 150
CCCGGTCCTC TGATTCGTGG TAACAAGGTA CGCTTCATAA CCGCCCTCCG 200
TAGACGTAGG CTTCGGCTGA CATGACCATC ATCTGTAGGG AGATAACTTT 250
AAAATTAATG TGATTGACGA CTTGACAGAG CACAGTATGC TCAAGGCTAC 300
GTCCATCGTA AGTCCCTGAT TAACGTTTCA CCTGGTCATA TCGCTCAACG 350
TCTCGAAGCA CTGGCATGGG TTCTTCCAGA AGGGAACCAA CTGGGCCGAT 400
GGCCCCGCCT TTGTCACCCA ATGTCCTATC ACATCAGGAA ACGCCTTCCT 450
GTATGATTTC AACGTTCCGG ACCAAGCTGG TACTTTCTGG TACCACAGCC 500
ATCTCTCTAC ACAGTATTGT GACGGTCTTC GTGGTGCCTT TGTCGTCTAT 550
GATCCTAATG ATCCCAACAA GCAACTCTAT GATGTTGATA ACGGCAAGTT 600
CCTTGCATAT TTCATTTCTA TCATATCCTC ACCTGTATTG GCACAGAAAG 650
CACCGTGATT ACCTTGGCTG ATTGGTATCA TGCCCTTGCT CAGACTGTCA 700
CTGGTGTCGC GTGAGTGACA AATGGCCCTC AATTGTTCAC ATATTTTCCT 750
GATTATCATA TGATAGAGTA TCTGATGCAA CGTTGATCAA CGGATTGGGA 800
CGTTCGGCCA CCGGCCCCGC AAATGCCCCT CTGGCGGTCA TCAGTGTCGA 850
GCGGAATAAG AGGTCAGTTC CATAATTATG ATTATTTCCC GCGTTACTTC 900
CTAACAATTA TTTTTGTATC CCTCCACAGA TATCGTTTCC GATTGGTTTC 950
TATTTCTTGC GACCCTAACT TTATTTTCTC AATTGACCAC CACCCAATGA 1000
CCGTAATTGA GATGGACGGT GTTAATACCC AATCTATGAC CGTAGATTCG 1050
ATCCAAATAT TCGCAGGTCA ACGATATTCA TTTGTCGTAG GTTATTATAA 1100
ACTGCCCACC GATCATCTCT CACGTAACTG TTATAGATGC AAGCCAACCA 1150
ACCAGTTGGA AATTATTGGA TCCGCGCTAA ACCTAATGTT GGGAACACAA 1200
CTTTCCTTGG AGGCCTGAAC TCCGCTATAT TACGATATGT GGGAGCCCCT 1250
GACCAAGAAC CGACCACTGA CCAAACACCC AACTCTACAC CGCTCGTTGA 1300
GGCGAACCTA CGACCCCTCG TCTATACTCC TGTGGTATGT TGTTCTCGTT 1350
ACATATACCA AACCTAATAT GAAGACTGAA CGGATCTACT AGCCGGGACA 1400
GCCATTCCCT GGCGGTGCTG ATATCGTCAA GAACTTAGCT TTGGGTTTCG 1450
TACGTGTATT TCACTTCCCT TTTGGCAGTA ACTGAGGTGG AATGTATATA 1500
GAATGCCGGG CGTTTCACAA TCAATGGAGC GTCCCTCACA CCTCCTACAG 1550
TCCCTGTACT ACTCCAGATC CTCAGTGGTA CTCACAATGC ACAGGATCTT 1600
CTCCCAGCAG GAAGCGTGAT CGAACTTGAA CAGAATAAAG TTGTCGAAAT 1650
CGTTTTGCCC GCTGCGGGCG CCGTTGGCGG TCCTCATCCT TTTCACTTAC 1700
ATGGTGTAAG TATCAGACGT CCTCATGCCC ATATTGCTCC GAACCTTACA 1750
CACCTGATTT CAGCACAATT TCTGGGTGGT TCGTAGCGCC GGTCAAACCA 1800
CATACAATTT CAATGATGCT CCTATCCGTG ATGTTGTCAG TATTGGCGGT 1850
GCAAACGATC AAGTCACGAT CCGATTTGTG GTATGTATCT CGTGCCTTGC 1900
ATTCATTCCA CGAGTAATGA TCCTTACACT TCGGGTTCTC AGACCGATAA 1950
CCCTGGCCCA TGGTTCCTTC ACTGTCACAT TGACTGGCAT TTGGAGGCTG 2000
GGTTCGCTGT AGTCTTTGCG GAGGGAATCA ATGGTACTGC AGCTGCTAAT 2050
CCAGTCCCAG GTAAGACTCT CGCTGCTTTG CGTAATATCT ATGAATTTAA 2100
ATCATATCAA TTTGCAGCGG CTTGGAATCA ATTGTGCCCA TTGTATGATG 2150
CCTTGAGCCC AGGTGATACA TGA 2173

翻訳されたタンパク配列（配列番号６）：
MSLLRSLTSL IVLVIGAFAA IGPVTDLHIV NQNLDPDGFN RPTVLAGGTF 50
PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF 100
VTQCPITSGN AFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND 150
PNKQLYDVDN GNTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA 200
NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM 250
TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWIRA KPNVGNTTFL GGLNSAILRY 300
VGAPDQEPTT DQTPNSTPLV EANLRPLVYT PVPGQPFPGG ADIVKNLALG 350
FNAGRFTING ASLTPPTVPV LLQILSGTHN AQDLLPAGSV IELEQNKVVE 400
IVLPAAGAVG GPHPFHLHGH NFWVVRSAGQ TTYNFNDAPI RDVVSIGGAN 450
DQVTIRFVTD NPGPWFLHCH IDWHLEAGFA VVFAEGINGT AAANPVPAAW 500
NQLCPLYDAL SPGDT 515

Ｄ．ＣＢＳ１５４．２９株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＢ２遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号７）：
CACCGCGATG TCTCTTCTTC GTAGCTTGAC CTCCCTCATC GTACTAGCCA 50
CTGGTGCATT TGCTGCAATC GGTCCAGTCA CCGACCTACA TATAGTGAAC 100
CAGAATCTCG CCCCAGATGG TTTAAACCGC CCCACTGTAC TCGCAGGTGG 150
TACTTTCCCC GGTCCTCTGA TTCGTGGTAA CAAGGTACGC TTCATAACCG 200
CCCTCCGTAG ACGTAGGCTT CGGCTGACAT GACCATCATC TGTAGGGAGA 250
TAACTTTAAA ATTAATGTGA TTGACGACTT GACAGAACAC AGTATGCTCA 300
AGGCTACGTC CATTGTAAGT CCCTGATTAA CGTTTCACCT GGTCATATCG 350
CTCAACGTCT CGAAGCACTG GCATGGGTTC TTCCAGAAGG GAACCAACTG 400
GGCCGATGGC CCCGCCTTTG TCACCCAATG TCCTATCACA TCAGGAAACG 450
CCTTCTTGTA TGATTTCAAC GTTCCGGACC AAGCTGGTAC TTTCTGGTAC 500
CACAGCCATC TCTCYACACA GTATTGTGAC GGTCTTCGTG GTGCCTTTGT 550
CGTCTATGAT CCTAATGATC CCAACAAGCA ACTCTATGAT GTTGATAACG 600
GCAAGTCCCT TGCATATTTC AGTTCTATCA TATCCTCACC TGTATTGGCA 650
CAGAAAGCAC CGTGATTACC TTGGCTGATT GGTATCATGC CCTTGCTCAG 700
ACTGTCACTG GTGTCGCGTG AGTGACAAAT GGCCCTTAAT TGTTCACATA 750
TTTTCCTGAT TATCATATGA TAGAGTATCT GATGCAACGT TGATCAACGG 800
ATTGGGACGT TCGGCCACCG GCCCCGCAAA TGCCCCTCTG GCGGTCATCA 850
GTGTCGAGCG GAATAAGAGG TCAGTTCCAT AATTATGATT ATTTCCCGCG 900
TTACTTCCTA ACGATTATTT TTGTATCCCT CCACAGATAT CGTTTCCGAT 950
TGGTTTCTAT TTCTTGCGAC CCTAACTTTA TTTTCTCAAT TGACCACCAC 1000
CCAATGACCG TAATTGAGAT GGACGGTGTT AATACCCAAT CTATGACCGT 1050
AGATTCGATC CAAATATTCG CAGGTCAACG ATATTCATTT GTCGTAGGTT 1100
ATTATAAACT GCCCACCGAT CATCTCTCAC GTAACTGTTA TAGATGCAAG 1150
CCAACCAACC AGTTGGAAAT TATTGGATCC GYGCTAAACC TAATGTTGGG 1200
AACACAACTT TCCTTGGAGG CCTGAACTCC GCTATATTAC GATATGTGGG 1250
AGCCCCTGAC CAAGAACCGA CCACTGACCA AACACCCAAC TCTACACCGC 1300
TCGTCGAGGC GAACCTACGT CCCCTCGTCT ATACTCCTGT GGTATGTTGT 1350
TCTCGTTACA TATACCAAAC CTAATATGAG GACTGAACGG ATCTACTAGC 1400
CGGGACAGCC ATTCCCTGGC GGTGCTGATA TCGTCAAGAA CTTAGCTTTG 1450
GGTTTCGTAC GTGTATTTCA CTTCCCTTTT GGCAGTAACT GAGGTGGAAT 1500
GTATATAGAA TGCCGGGCGT TTCACAATCA ATGGAACATC CTTCACACCT 1550
CCTACAGTCC CTGTACTACT CCAGATCCTC AGTGGTACTC ACAATGCACA 1600
GGATCTTCTT CCAGCAGGAA GCGTGATCGA ACTTGAACAG AATAAAGTTG 1650
TCGAAATCGT TCTGCCCGCT GCGGGCGCCG TTGGCGGTCC TCATCCTTTC 1700
CACTTACATG GTGTAAGTAT CAGACGTCCT CATGCCTATA TTGCTCCGAA 1750
CCTTACACAC CTGATTTCAG CACAATTTCT GGGTGGTTCG TAGCGCCGGT 1800
CAAACCACAT ACAATTTCAA TGATGCTCCT ATCCGTGATG TTGTCAGTAT 1850
TGGCGGTGCA AACGATCAAG TCACGATCCG ATTTGTGGTA TGTATCTCGT 1900
GCCTTGCATT CATTCCACGA GTAATGATCC TTACACTTCG GGTTCTCAGA 1950
CCGATAACCC TGGCCCATGG TTCCTTCACT GTCACATTGA CTGGCATTTG 2000
GAGGCTGGGT TCGCTGTAGT CTTTGCGGAG GGAATCAATG GCACTGCAGC 2050
TGCTAATCCA GTCCCAGGTA AGACTCTCGC TGCTTTGCGT AATATCTATG 2100
AATTTAAAGC ATATCAATTT GCAGCGGCTT GGAATCAATT GTGCCCGTTG 2150
TATGATGCCT TGAGCCCAGG TGATACATGA TTACTCGTAG CTGTGCTTTC 2200
TTATACATAT TCTATGGGTA TATCGGAGTA GCTGTACTAT AGTATGTACT 2250
ATACTAGGTG GGATATGYTG ATGTTGATTT ATATAATTTT GTTTGAAGAG 2300
TGACTTTATC GACTTGGGAT TTAGCCGAGT ACATACTGAT CTCTCACTAC 2350
AGGCTTGTTT TGTCTTTGGG CGCTTACTCA ACAGTTGACT GTTTTTGCTA 2400
TTACGCATTG AACCGCATTC CGGTCYGACT CGTGTCCTCT ACTGTGACTT 2450
GTATTGGCAT TCTAGCACAT ATGTCTCTTA CCTATAGGAA CAATATGTCT 2500
CAACACTGTT CCAAAACCTG CGTAAACCAA ATATCGTCCA TCAGATCAGA 2550
TCATTAACAG TGCCGCACTA ACCTAATACA CTGGCARGGA CTGTGGAAAT 2600
CCCTATAAAT GACCTCTAGA CCGTGAGGTC ATTGCAAGGT CGCTCTCCTT 2650
GTCAAGATGA CCC 2663

翻訳されたタンパク配列（配列番号８）：
MSLLRSLTSL IVLATGAFAA IGPVTDLHIV NQNLAPDGLN RPTVLAGGTF 50
PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF 100
VTQCPITSGN AFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND 150
PNKQLYDVDN GNTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA 200
NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM 250
TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWIRA KPNVGNTTFL GGLNSAILRY 300
VGAPDQEPTT DQTPNSTPLV EANLRPLVYT PVPGQPFPGG ADIVKNLALG 350
FNAGRFTING TSFTPPTVPV LLQILSGTHN AQDLLPAGSV IELEQNKVVE 400
IVLPAAGAVG GPHPFHLHGH NFWVVRSAGQ TTYNFNDAPI RDVVSIGGAN 450
DQVTIRFVTD NPGPWFLHCH IDWHLEAGFA VVFAEGINGT AAANPVPAAW 500
NQLCPLYDAL SPGDT 515

Ｅ．ＡＴＣＣ２００１３株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＢ３遺伝子（一部）
ポリヌクレオチド配列（配列番号：９）：
GTGGGGGCGG ATCCCTAACT GTTTCGAATC GGCACCGAAG TATGCAGGTG 50
TGACGGAGAT GAGGCGTTTT TTCATCTTCC ACTGCAGTAT AAAATGTCTC 100
AGGTAACGTC CAGCTTTTTG TACCAGAGCT ACCTCCAAAT ACCTTTACTC 150
GCAAAGGTTT CGCGATGTCT CTTCTTCGTA GCTTGACCTC CCTCATCGTA 200
CTAGCCACTG GTGCATTTGC TGCAATCGGT CCAGTCACTG ACCTACATAT 250
AGTGAACCAG AATCTCGCCC CAGATGGTTT CAACCGCCCC ACTGTACTCG 300
CAGGTGGTAC TTTCCCCGGT CCTCTGATTC GTGGTAACAA GGTACGCTTC 350
ATAACCGCCC TCCGTAGACG TAGGCTTCGG CTGACATGAC CATCATCTGT 400
AGGGAGATAA CTTTAAAATT AATGTGATTG ACGACTTGAC AGAACACAGT 450
ATGCTCAAGG CCACGTCCAT TGTAAGTCCC TGATTAACGT TTCACCTGGT 500
CATATCGCTC AACGTCTCGA AGCACTGGCA TGGGTTCTTC CAGAAGGGAA 550
CCAACTGGGC CGATGGCCCC GCCTTTGTCA CCCAATGTCC TATCACATCA 600
GGAAACTCCT TCCTGTATGA TTTCAACGTT CCGGACCAAG CTGGTACTTT 650
CTGGTACCAC AGCCATCTCT CTACACAGTA TTGTGACGGT CTTCGTGGTG 700
CCTTTGTCGT CTATGATCCT AATGATCCCA ACAAGCAACT CTATGATGTT 750
GATAACGGCA AGTCCCTTGC ATATTTCATT TCTATCATAT CCTCACCTGT 800
ATTGGCACAG AAAGCACCGT GATTACCTTG GCTGATTGGT ATCATGCCCT 850
TGCTCAGACT GTCACTGGTG TCGCGTGAGT GACAAATGGC CCTCAATTGT 900
TCACATATTT TCCTGATTAT CATATGATAG AGTATCTGAT GCAACGTTGA 950
TCAACGGATT GGGACGTTCG GCCACCGGCC CCGCAAATGC CCCTCTGGCG 1000
GTCATCAGTG TCGAGCGGAA TAAGAGGTCA GTTCCATAAT TATGATTATT 1050
TCCCGCGTTA CTTCCTAACA ATTATTCTTG TATCCCTCCA CAGATATCGC 1100
TTCCGATTGG TGTCTATTTC TTGCGACCCT AACTTTATTT TCTCAATTGA 1150
TCACCACCCA ATGACCGTAA TTGAGATGGA CGGTGTTAAT ACCCAATCTA 1200
TGACCGTAGA TTCGATCCAA ATATTCGCAG GTCAACGATA TTCATTTGTC 1250
GTAGGTTATT ATAAACTGCC CACCGATCAT CTCTCACGTA ACTGTTATAG 1300
ATGCAAGCCA ACCAACCRGT TGGAAATTAT TGGATCC 1337

翻訳されたタンパク配列（配列番号１０）：
MSLLRSLTSL IVLATGAFAA IGPVTDLHIV NQNLAPDGFN RPTVLAGGTF 50
PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF 100
VTQCPITSGN SFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND 150
PNKQLYDVDN GKTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA 200
NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM 250
TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWI 278

Ｆ．ＣＢＳ１５４．２９株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＣ遺伝子（一部）
ポリヌクレオチド配列（配列番号１１）：
TGCAATCGGA CCGGTBGCTG ACCTTCACAT TACGGACGAT ACCATTGCCC 50
CCGATGGTTT CTCTCGTCCT GCTGTTCTCG CTGGCGGGGG TTTCCCTGGC 100
CCTCTCATCA CCGGAAACAA GGTAATGCCT AATGGTTGCG TCTTTGTTGG 150
TGCTCTCATT CATCCACGAC ATTTTGTACC AGGGCGACGC CTTTAAACTC 200
AATGTCATCG ATGAACTAAC GGACGCATCC ATGCTGAAGY CGACTTCCAT 250
CGTAAGTCTC GCTGTATTGC TCCTTGAGCC ATTTCATTGA CTATAACTAC 300
AACCAGCACT GGCATGGATT CTTCCAAAAG GGTACTAATT GGGCAGATGG 350
TCCCGCTTTT GTGAACCAAT GCCCCATCAC CACGGGAAAC TCCTTCTTGT 400
ACGACTTCCA GGTTCCTGAT CAAGCTGGTA AGCATGAGAT TACACTAGGA 450
AAGTTTAATT TAATAACTAT TCAATCAGGA ACCTACTGGT ATCATAGTCA 500
TTTGTCTACG CAATACTGTG ATGGTCTCAG AGGTGCATTC GTTGTCTACG 550
ACCCTTCAGA TCCTCACAAG GATCTCTACG ACGTCGACGA CGGTGAGCTT 600
TGCTTTTTTC ATTGGTATCC ATTATCGCTC ACGTGTCATT ACTGCGCCAC 650
AGAAAGTACC GTCATCACTT TGGCTGATTG GTATCATACT TTGGCTCGTC 700
AGATTGTTGG CGTTGCGTGA GTAGTCTTGT ACCGACTGAA ACATATTCCA 750
GTTGCTGACT TCCCCACAGC ATTTCTGATA CTACCTTGAT AAACGGTTTG 800
GGCCGCAATA CCAATGGTCC GGCTGATGCT GCTCTTGCTG TGATCAATGT 850
TGACGCTGGC AAACGGTGTG TCCAGATTAC TATACTCCCC ATGACGTCTC 900
AATGCTGATG TGTACTACTT CCAGGTACCG TTTCCGTCTT GTTTCCATAT 950
CCTGTGACCC CAATTGGGTA TTCTCGATTG ACAACCATGA CTTTACGGTC 1000
ATTGAAGTCG ATGGTGTTAA CAGTCAACCT CTCAACGTCG ATTCTGTTCA 1050
GATCTTCGCC GGACAACGTT ACTCGTTCGT 1080

翻訳されたタンパク配列（配列番号１２）：
AIGPVADLHI TDDTIAPDGF SRPAVLAGGG FPGPLITGNK GDAFKLNVID 50
ELTDASMLKX TSIHWHGFFQ KGTNWADGPA FVNQCPITTG NSFLYDFQVP 100
DQAGTYWYHS HLSTQYCDGL RGAFVVYDPS DPHKDLYDVD DESTVITLAD 150
WYHTLARQIV GVAISDTTLI NGLGRNTNGP ADAALAVINV DAGKRYRFRL 200
VSISCDPNWV FSIDNHDFTV IEVDGVNSQP LNVDSVQIFA GQRYSF 246

Ｇ．ＣＢＳ１５４．２９株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＤ１遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号１３）：
GATTCTAATA GACCAGGCAT ACCAAGAGAT CTACAGGTTG ACAGACCATT 50
CTTCTAGGCG GCATTTATGC TGTAGCGTCA GAAATTATCT CTCCATTTGT 100
ATCCCACAGG TCCTGTAATA ACACGGAGAC AGTCCAAACT GGGATGCCTT 150
TTTTCTCAAC TATGGGCGCA CATAGTCTGG ACGATGGTAT ATAAGACGAT 200
GGTATGAGAC CCATGAAGTC AGAACACTTT TGCTCTCTGA CATTTCATGG 250
TTCACACTCT CGAGATGGGA TTGAACTCGG CTATTACATC GCTTGCTATC 300
TTAGCTCTGT CAGTCGGAAG CTATGCTGCA ATTGGGCCCG TGGCCGACAT 350
ACACATTGTC AACAAAGACC TTGCTCCAGA TGGCGTACAA CGTCCAACCG 400
TGCTTGCCGG AGGCACTTTT CCTGGGACGT TGATCACCGG TCAGAAAGTA 450
AGGGATATTA GTTTGCGTCA AAGAGCCAAC CAAAACTAAC CGTCCCGTAC 500
TATAGGGTGA CAACTTCCAG CTCAATGTCA TCGATGATCT TACCGACGAT 550
CGGATGTTGA CGCCAACTTC CATTGTGAGC CTATTATTGT ATGATTTATC 600
CGAATAGTTT CGCAGTCTGA TCATTGGATC TCTATCGCTA GCATTGGCAC 650
GGTTTCTTCC AGAAGGGAAC CGCTTGGGCC GACGGTCCCG CCTTCGTAAC 700
TCAGTGCCCT ATAATAGCAG ATAACTCTTT TCTGTATGAC TTCGACGTCC 750
CAGACCAAGC TGGTACTTTC TGGTATCATA GTCATCTATC CACTCAGTAC 800
TGTGACGGTT TACGTGGTGC CTTCGTTGTG TACGATCCTA ACGATCCTCA 850
CAAAGACCTA TACGATGTTG ATGACGGTGG GTTCCAAATA TTTGTTCTGC 900
AGACATTGTA TTGACGGTGT TCATTATAAT TTCAGAGAGC ACCGTGATTA 950
CCCTTGCGGA TTGGTACCAT GTTCTCGCCC AGACCGTTGT CGGCGCTGCG 1000
TGAGTAACAC ATACACGCGC TCCGGCACAC TGATACTAAT TTTTTTTTAT 1050
TGTAGCACTC CTGATTCTAC CTTGATCAAC GGGTTAGGCC GTTCACAGAC 1100
CGGACCCGCT GATGCTGAGC TGGCTGTTAT CAGCGTTGAA CATAACAAAC 1150
GGTATGTCAT CTCTACCCAG TATCTTCTCT CCTGCTCTAA TTCGCTGTTT 1200
CACCATAGAT ACCGTTTCCG TTTGGTTTCG ATTTCGTGCG ACCCCAACTT 1250
TACCTTCTCC GTTGATGGTC ATAATATGAC TGTCATCGAA GTCGATGGTG 1300
TCAACACACG ACCCCTGACC GTTGACTCTA TTCAAATCTT CGCCGGACAG 1350
AGGTATTCCT TTGTCGTAAG TTAATCGATA TATTCTCCTT ATTACCCCTG 1400
TGTAATTGAT GTCAATAGCT CAATGCTAAC CAACCCGAAG ACAATTACTG 1450
GATCCGTGCT ATGCCAAACA TCGGTAGAAA TACAACAACA CTGGACGGAA 1500
AGAATGCCGC TATCCTTCGA TACAAGAATG CTTCTGTAGA AGAGCCCAAG 1550
ACCGTTGGGG GCCCCGCTCA ATCCCCGTTG AATGAAGCGG ACCTGCGTCC 1600
ACTCGTACCT GCTCCTGTGG TATGTCTTGT CGCGCTGTTC CATCGCTATT 1650
TCATATTAAC GTTTTGTTTT TGTCAAGCCT GGAAACGCTG TTCCAGGTGG 1700
CGCAGACATC AATCACAGGC TTAACTTAAC TTTCGTACGT ACACCTGGTT 1750
GAAACATTAT ATTTCCAGTC TAACCTCTCT TGTAGAGTAA CGGCCTCTTC 1800
AGCATCAACA ACGCCTCCTT CACTAATCCT TCGGTCCCCG CCTTATTACA 1850
AATTCTGAGC GGTGCTCAGA ACGCTCAAGA TTTACTTCCA ACGGGTAGTT 1900
ACATTGGCCT TGAACTAGGC AAGGTTGTGG AGCTCGTTAT ACCTCCTCTG 1950
GCAGTTGGAG GACCGCACCC TTTCCATCTT CATGGCGTAA GCATACCACA 2000
CTCCCGCAGC CAGAATGACG CAAACTAATC ATGATATGCA GCACAATTTC 2050
TGGGTCGTCC GTAGTGCAGG TAGCGATGAG TATAACTTTG ACGATGCTAT 2100
CCTCAGGGAC GTCGTRAGCA TTGGAGCGGG GACTGATGAA GTCACAATCC 2150
GTTTCGTGGT ATGTCTCACC CCTCGCATTT TGAGACGCAA GAGCTGATAT 2200
ATTTTAACAT AGACCGACAA TCCGGGCCCG TGGTTCCTCC ATTGCCATAT 2250
TGATTGGCAT TTGGAGGCAG GCCTTGCCAT CGTCTTCGCT GAGGGCATCA 2300
ATCAGACCGC TGCAGCCAAC CCAACACCCC GTACGTGACA CTGAGGGTTT 2350
CTTTATAGTG CTGGATTACT GAATCGAGAT TTCTCCACAG AAGCATGGGA 2400
TGAGCTTTGC CCCAAATATA ACGGGTTGAG TGCGAGCCAG AAGGTCAAGC 2450
CTAAGAAAGG AACTGCTATT TAAACGTGGT CCTAGACTAC GGGCATATAA 2500
GTATTCGGGT AGCGCGTGTG AGCAATGTTC CGATACACGT AGATTCATCA 2550
CCGGACACGC TGGGACAATT TGTGTATAAT GGCTAGTAAC GTATCTGAGT 2600
TCTGGTGTGT AGTTCAAAGA GACAGCCCTT CCTGAGACAG CCCTTCCTGA 2650
GACAGCCCTT CCTGAGACGT GACCTCCGTA GTCTGCACAC GATACTYCTA 2700
AATACGTATG GCAAGATGAC AAAGAGGAGG ATGTGAGTTA CTACGAACAG 2750
AAATAGTGCC CGGCCTCGGA GAGATGTTCT TGAATATGGG ACTGGGACCA 2800
ACATCCGGA 2809

翻訳されたタンパク配列（配列番号１４）：
MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADIH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG 50
TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP 100
AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP 150
NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG 200
PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR 250
PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPEDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI 300
LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL 350
NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK 400
VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA 450
GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ 500
AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI 526

Ｈ．ＣＢＳ１１５．０７５株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＤ２遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号１５）：
GATCTGGACG ATGGTATATA AGACGATGGT ATGAGACCCA TGAAGTCTGA 50
ACACTTTTGC TCTCTGACAT TTCATGGTTC ATACTCTCGA GATGGGATTG 100
AACTCGGCTA TTACATCGCT TGCTATCTTA GCTCTGTCAG TCGGAAGCTA 150
TGCTGCAATT GGGCCCGTGG CCGACATACA CATTGTCAAC AAAGACCTTG 200
CTCCAGATGG TGTACAACGT CCAACCGTGC TCGCCGGAGG CACTTTTCCT 250
GGGACGTTGA TCACCGGTCA GAAAGTAAGG AATATTAGTT TGCGTCAAAG 300
AGCCAACCAA AATTAACCGT CCCGTCCCAT AGGGTGACAA CTTCCAGCTC 350
AATGTCATTG ATGATCTTAC CGACGATCGG ATGTTGACAC CAACTTCCAT 400
TGTGAGCCTA TTATTGTATG ATTTATCCGT ATAGTTTCTC AGTCTGATCA 450
TTGGCTCTCT ATCGCTAGCA TTGGCACGGT TTCTTCCAGA AGGGAACCGC 500
TTGGGCCGAC GGTCCCGCCT TCGTAACTCA GTGCCCTATA ATAGCAGATA 550
ACTCTTTTCT GTATGACTTC GACGTCCCCG ACCAAGCTGG TACTTTCTGG 600
TATCATAGTC ATCTATCCAC TCAGTACTGT GACGGTTTAC GTGGTGCCTT 650
CGTTGTGTAC GATCCTAACG ATCCTCACAA AGACCTATAC GATGTTGATG 700
ACGGTGGGTT CCAAATACTT GACCAAGAAA CATTATATTG ATAGTATCCA 750
CTCTGATTTT CAGAGAGCAC CGTGATTACC CTTGCGGATT GGTACCATGT 800
TCTCGCCCAG ACCGTTGTCG GCGCTGCGTG AGTAACACAT ACACGCGCTC 850
CGGCACACTG ATACTAATTT TTTATTGTAG CACTCCTGAT TCTACCTTGA 900
TCAACGGGTT AGGCCGTTCA CAGACCGGAC CCGCTGATGC TGAGCTGGCT 950
GTTATCAGCG TTGAACATAA CAAACGGTAT GTCATCTCTA CCCATTATCT 1000
TCTCTCCTGC TTTAATTCGC TGTTTCACCA TAGATACCGA TTCCGTTTGG 1050
TTTCGATTTC GTGCGACCCC AACTTTACCT TCTCCGTTGA TGGTCATAAT 1100
ATGACTGTCA TCGAAGTCGA CGGTGTCAAC ACACGACCCC TGACCGTTGA 1150
CTCTATTCAA ATCTTCGCCG GACAGAGGTA TTCCTTTGTC GTAAGTTAAT 1200
CGATATATTC TCCCTATTAC CCCTGTGTAA TTGATGTCAA CAGCTCAATG 1250
CTAACCAACC CGACGACAAT TACTGGATCC GTGCTATGCC AAACATCGGT 1300
AGAAATACAA CAACACTGGA CGGAAAGAAT GCCGCTATCC TTCGATACAA 1350
GAATGCTTCT GTAGAAGAGC CCAAGACCGT TGGGGGCCCC GCTCAATCCC 1400
CGTTGAATGA AGCGGACCTG CGTCCACTCG TACCTGCTCC TGTGGTATGT 1450
CTTGTCGTGC TGTTCCATCG CTATTTCATA TTAACGTTTT GTTTTTGTCA 1500
AGCCTGGAAA CGCTGTTCCA GGTGGCGCAG ACATCAATCA CAGGCTTAAC 1550
TTAACTTTCG TACGTACACC TGGTTGAAAC ATTATATTTC CAGTCTAACC 1600
TCTTGTAGAG TAACGGCCTT TTCAGCATCA ACAACGCCTC CTTCACTAAT 1650
CCTTCGGTCC CCGCCTTATT ACAAATTCTG AGCGGTGCTC AGAACGCTCA 1700
AGATTTACTT CCAACGGGTA GTTACATTGG CCTTGAACTA GGCAAGGTTG 1750
TGGAGCTCGT TATACCTCCT CTGGCAGTTG GAGGACCGCA CCCTTTCCAT 1800
CTTCATGGCG TAAGCATACC ACACTCCCGC AGCCAGAATG ACGCAAACTA 1850
ATCATGATAT GCAGCACAAT TTCTGGGTCG TCCGTAGTGC AGGTAGCGAT 1900
GAGTATAACT TTGACGATGC TATCCTCAGG GACGTCGTGA GCATTGGAGC 1950
GGGGACTGAT GAAGTCACAA TCCGTTTCGT GGTATGTCTC ACCCCTCGCA 2000
TTTTGAGACG CAAGAGCTGA TATATTTTAA CATAGACCGA CAATCCGGGC 2050
CCGTGGTTCC TCCATTGCCA TATTGATTGG CATTTGGAGG CAGGCCTTGC 2100
CATCGTCTTC GCTGAGGGCA TCAATCAGAC CGCTGCAGCC AACCCAACAC 2150
CCCGTACGTG ACACTGAGGG TTTCTTTATA GTGCTGGATT ACTGAATCGA 2200
GATTTCTCCA CAGAAGCATG GGATGAGCTT TGCCCCAAAT ATAACGGGTT 2250
GAGTGCGAGC CAGAAGGTCA AGCCTAAGAA AGGAACTGCT ATTTAAACG 2299

翻訳されたタンパク配列（配列番号１６）：
MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADIH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG 50
TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP 100
AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP 150
NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG 200
PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR 250
PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPDDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI 300
LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL 350
NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK 400
VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA 450
GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ 500
AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI 526

Ｉ．ＣＢＳ１５４．２９株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＥ遺伝子（一部）
ポリヌクレオチド配列（配列番号１７）：
TGCAATCGGA CCGGTGGCCG ACCTCAAGAT CGTAAACCGA GACATTGCAC 50
CTGACGGTTT TATTCGTCCC GCCGTTCTCG CTGGAGGGTC GTTCCCTGGT 100
CCTCTCATTA CAGGGCAGAA AGTACGTTAC GCTATCTCGG TGCTTTGGCT 150
TAATTAAACT ATTTGACTTT GTGTTCTCTT AGGGGAACGA GTTCAAAATC 200
AATGTAGTCA ATCAACTGAC CGATGGTTCT ATGTTAAAAT CCACCTCAAT 250
CGTAAGCAGA ATGAGCCCTT TGCATCTCGT TTTATTGTTA ATGCGCCCAC 300
TATAGCATTG GCATGGATTC TTCCAGAAGG GAACAAACTG GGCAGACGGT 350
CCTGCGTTCG TGAACCAATG TCCAATCGCC ACGAACAATT CGTTCTTGTA 400
TCAGTTTACC TCACAGGAAC AGCCAGGTGA GTATGAGATG GAGTTCATCC 450
GAGCATGAAC TGATTTATTT GGAACCTAGG CACATTTTGG TACCATAGTC 500
ATCTTTCCAC ACAATACTGC GATGGTTTGC GAGGGCCACT CGTGGTGTAT 550
GACCCACAAG ACCCGCATGC TGTTCTCTAC GACGTCGACG ATGGTTCGTA 600
CTTCGCATAT CCACGCTCGC TTTCATACAA TGTAAACTTT GTTCCTCCAG 650
AAAGTACAAT CATCACGCTC GCGGATTGGT ATCATACCTT GGCTCGGCAA 700
GTGAAAGGCC CAGCGTAAGG CACTTTAGTG TTTCCTCATA GTCCAAGAAA 750
TTCTAACACG CCTTCTTCAT CAGGGTTCCT GGTACGACCT TGATCAACGG 800
GTTGGGGCGT CACAACAATG GTCCTCTAGA TGCTGAACTA GCGGTGATCA 850
GTGTTCAAGC CGGCAAACGG CAAGTTCAAT TCACACTTTT CACTCTGTAC 900
CTTCTTCCTG ACATTCTTTT CTTGTAGTTA CCGCTTCCGC CTGATTTCAA 950
TTTCATGCGA TCCCAACTAC GTATTCTCCA TTGATGGCCA TGATATGACT 1000
GTCATCGAAG TGGATAGTGT TAACAGTCAA CCTCTCAAGG TAGATTCTAT 1050
CCAAATATTT GCAGGTCAGA GATATTCGTT CGTGGTGAGT CAGATCAGGG 1100
CATATCCTTT TGTCGATACG TCATTGACCA TATAATGCTA CAAGCTGAAT 1150
GCCAACCAAC CAG 1163

翻訳されたタンパク配列（配列番号１８）：
AIGPVADLKI VNRDIAPDGF IRPAVLAGGS FPGPLITGQK GNEFKINVVN 50
QLTDGSMLKS TSIHWHGFFQ KGTNWADGPA FVNQCPIATN NSFLYQFTSQ 100
EQPGTFWYHS HLSTQYCDGL RGPLVVYDPQ DPHAVLYDVD DESTIITLAD 150
WYHTLARQVK GPAVPGTTLI NGLGRHNNGP LDAELAVISV QAGKRQVQFT 200
LFTLYRFRLI SISCDPNYVF SIDGHDMTVI EVDSVNSQPL KVDSIQIFAG 250
QRYSFVLNAN QP 262

以下のアミノ酸配列（配列番号１９：シグナル配列はイタリック体）を有するラッカーゼＤ酵素は、本明細書に記載されている方法において使用可能である。
MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADLH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG 50
TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP 100
AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP 150
NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG 200
PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR 250
PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPEDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI 300
LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL 350
NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK 400
VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA 450
GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ 500
AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI 526

このポリペプチドの処理された成熟形態は、以下のとおりである（配列番号２０）。
AIGPVADLHIVNKDLAPDGVQRPTVLAGGTFPGTLITGQKGDNFQLNVIDDLTDDRMLTPTSIHWHGFFQKGTAWADGPAFVTQCPIIADNSFLYDFDVPDQAGTFWYHSHLSTQYCDGLRGAFVVYDPNDPHKDLYDVDDGGTVITLADWYHVLAQTVVGAATPDSTLINGLGRSQTGPADAELAVISVEHNKRYRFRLVSISCDPNFTFSVDGHNMTVIEVDGVNTRPLTVDSIQIFAGQRYSFVLNANQPEDNYWIRAMPNIGRNTTTLDGKNAAILRYKNASVEEPKTVGGPAQSPLNEADLRPLVPAPVPGNAVPGGADINHRLNLTFSNGLFSINNASFTNPSVPALLQILSGAQNAQDLLPTGSYIGLELGKVVELVIPPLAVGGPHPFHLHGHNFWVVRSAGSDEYNFDDAILRDVVSIGAGTDEVTIRFVTDNPGPWFLHCHIDWHLEAGLAIVFAEGINQTAAANPTPQAWDELCPKYNGLSASQKVKPKKGTAI The following laccase genes and laccases are described in US Publication No. 2008/0196173.

A. Cerrena laccase A1 gene polynucleotide sequence derived from strain CBS 115.075 (SEQ ID NO: 1):
ATGAGCTCAA AGCTACTTGC TCTTATCACT GTCGCTCTCG TCTTGCCACT 50
AGGCACCGAC GCCGGCATCG GTCCTGTTAC CGACTTGCGC ATCACCAACC 100
AGGATATCGC TCCAGATGGC TTCACCCGAC CAGCGGTACT AGCTGGGGGC 150
ACATTCCCTG GAGCACTTAT TACCGGTCAG AAGGTATGGG AGATCAACTT 200
GGTTGAATAG AGAAATAAAA GTGACAACAA ATCCTTATAG GGAGACAGCT 250
TCCAAATCAA TGTCATCGAC GAGCTTACCG ATGCCAGCAT GTTGACCCAG 300
ACATCCATTG TGAGTATAAT TTAGGTCCGC TCTTCTGGCT ATCCTTTCTA 350
ACTCTTACCG TCTAGCATTG GCACGGCTTC TTTCAGAAGG GATCTGCGTG 400
GGCCGATGGT CCTGCCTTCG TTACTCAATG CCCTATCGTC ACCGGAAATT 450
CCTTCCTGTA CGACTTTGAT GTTCCCGACC AACCTGGTAC TTTCTGGTAC 500
CATAGTCACT TGTCTACTCA ATATTGCGAT GGTCTTCGTG GCCCGTTCGT 550
TGTATACGAT CCAAAGGATC CTAATAAACG GTTGTACGAC ATTGACAATG 600
GTATGTGCAT CATCATAGAG ATATAATTCA TGCAGCTACT GACCGTGACT 650
GATGCTGCCA GATCATACGG TTATTACCCT GGCAGACTGG TACCACGTTC 700
TCGCAAGAAC TGTTGTCGGA GTCGCGTAAG TACAGTCTCA CTTATAGTGG 750
TCTTCTTACT CATTTTGACA TAGGACACCC GACGCAACCT TGATCAACGG 800
TTTGGGCCGT TCTCCAGACG GGCCAGCAGA TGCTGAGTTG GCTGTCATCA 850
ACGTTAAACG CGGCAAACGG TATGTTATTG AACTCCCGAT TTCTCCATAC 900
ACAGTGAAAT GACTGTCTGG TCTAGTTATC GATTTCGTCT GGTCTCCATC 950
TCATGTGACC CTAATTACAT CTTTTCTATC GACAACCATT CTATGACTGT 1000
CATCGAAGTC GATGGTGTCA ACACCCAATC CCTGACCGTC GATTCTATTC 1050
AAATCTTCGC AGGCCAACGA TACTCGTTCG TCGTAAGTCT CTTTGCACGA 1100
TTACTGCTTC TTTGTCCATT CTCTGACCTG TTTAAACAGC TCCATGCCAA 1150
CCGTCCTGAA AACAACTATT GGATCAGGGC CAAACCTAAT ATCGGTACGG 1200
ATACTACCAC AGACAACGGC ATGAACTCTG CCATTCTGCG ATACAACGGC 1250
GCACCTGTTG CGGAACCGCA AACTGTTCAA TCTCCCAGTC TCACCCCTTT 1300
GCTCGAACAG AACCTTCGCC CTCTCGTGTA CACTCCTGTG GTATGTTTCA 1350
AAGCGTTGTA ATTTGATTGT GGTCATTCTA ACGTTACTGC GTTTGCATAG 1400
CCTGGAAACC CTACGCCTGG CGGCGCCGAT ATTGTCCATA CTCTTGACTT 1450
GAGTTTTGTG CGGAGTCAAC ATTCGTAAAG ATAAGAGTGT TTCTAATTTC 1500
TTCAATAATA GGATGCTGGT CGCTTCAGTA TCAACGGTGC CTCGTTCCTT 1550
GATCCTACCG TCCCCGTTCT CCTGCAAATT CTCAGCGGCA CGCAGAATGC 1600
ACAAGATCTA CTCCCTCCTG GAAGTGTGAT TCCTCTCGAA TTAGGCAAGG 1650
TCGTCGAATT AGTCATACCT GCAGGTGTCG TCGGTGGACC TCATCCGTTC 1700
CATCTCCATG GGGTACGTAA CCCGAACTTA TAACAGTCTT GGACTTACCC 1750
GCTGACAAGT GCATAGCATA ACTTCTGGGT CGTGCGAAGT GCCGGAACCG 1800
ACCAGTACAA CTTTAACGAT GCCATTCTCC GAGACGTCGT CAGTATAGGA 1850
GGAACCGGGG ATCAAGTCAC CATTCGTTTC GTGGTATGTT TCATTCTTGT 1900
GGATGTATGT GCTCTAGGAT ACTAACCGGC TTGCGCGTAT AGACCGATAA 1950
CCCCGGACCG TGGTTCCTCC ATTGCCATAT CGACTGGCAC TTGGAAGCGG 2000
GTCTCGCTAT CGTATTTGCA GAGGGAATTG AAAATACTGC TGCGTCTAAT 2050
TTAACCCCCC GTACGCGGTT TCCCTCACAT CCTGGAGCTA AGCAGCTTAC 2100
TAACATACAT TTGCAGAGGC TTGGGATGAG CTTTGCCCGA AGTATAACGC 2150
GCTCAGCGCA CAAAAGAAGG TTGCATCTAA GAAAGGCACT GCCATCTAAT 2200
TTTTGTAACA AACAAGGAGG GTCTCTTGTA CTTTTATTGG GATTTCTTTC 2250
TTGGGGTTTA TTGTTAAACT TGACTCTACT ATGTTTGGAA GACGAAAGGG 2300
GCTCGCGCAT TTATATACTA TCTCTCTTGG CATCACCTGC AGCTCAATCC 2350
TTCAACCACC TAA 2363

Translated protein sequence (SEQ ID NO: 2):
MSSKLLALIT VALVLPLGTD AGIGPVTDLR ITNQDIAPDG FTRPAVLAGG 50
TFPGALITGQ KGDSFQINVI DELTDASMLT QTSIHWHGFF QKGSAWADGP 100
AFVTQCPIVT GNSFLYDFDV PDQPGTFWYH SHLSTQYCDG LRGPFVVYDP 150
KDPNKRLYDI DNDHTVITLA DWYHVLARTV VGVATPDATL INGLGRSPDG 200
PADAELAVIN VKRGKRYRFR LVSISCDPNY IFSIDNHSMT VIEVDGVNTQ 250
SLTVDSIQIF AGQRYSFVLH ANRPENNYWI RAKPNIGTDT TTDSGMNSAI 300
LRYNGAPVAE PQTVQSPSLT PLLEQNLRPL VYTPVPGNPT PGGADIVHTL 350
DLSFDAGRFS INGASFLDPT VPVLLQILSG TQNAQDLLPP GSVIPLELGK 400
VVELVIPAGV VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GTDQYNFNDA ILRDVVSIGG 450
TGDQVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIE NTAASNLTPQ 500
AWDELCPKYN ALSAQKKLNP STT 523

B. Cerrena laccase A2 gene polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 3) derived from strain CBS154.29:
ATGAGCTCAA AGCTACTTGC TCTTATTACT GTCGCTCTCG TCTTGCCACT 50
AGGCACTGAC GCCGGCATCG GTCCTGTTAC CGACTTGCGC ATCACCAACC 100
AGGATATCGC TCCAGATGGC TTCACCCGAC CAGCTGTACT GGCTGGGGGC 150
ACATTCCCCG GAGCACTGAT TACCGGTCAG AAGGTATGGG AGATCGATTT 200
CGTTGAATAG AGAAATACAA CTGAAAACAA ATTCTTATAG GGAGACAGCT 250
TCCAAATCAA TGTCATCGAC GAGCTTACCG ATGCCAGCAT GTTGACCCAG 300
ACATCCATTG TGAGTATAAT ATGGGTCCGC TCTTCTAGCT ATCCTTTCTA 350
ACTCTTACCC TCTAGCATTG GCACGGCTTC TTTCAGAAGG GATCTGCGTG 400
GGCCGATGGT CCTGCCTTCG TTACTCAATG TCCTATCGTC ACCGGAAATT 450
CCTTCCTGTA CGACTTTGAT GTCCCCGACC AACCTGGTAC TTTCTGGTAC 500
CATAGTCACT TGTCTACTCA ATATTGCGAT GGTCTTCGGG GCCCGTTCGT 550
TGTATACGAT CCAAAGGATC CTAATAAACG GTTGTACGAC ATTGACAATG 600
GTATGTGCAT CATCATAAAA ATATAATTCA TGCAGCTACT GACCGCGACT 650
GATGCTGCCA GATCATACGG TTATTACCCT GGCAGACTGG TACCACGTTC 700
TCGCACGAAC TGTTGTCGGA GTCGCGTAAG TACAGTCTGA CTTATAGTGG 750
TCTTCTTACT CATTTTGACA TAGGACACCC GACGCAACCT TGATCAACGG 800
TTTGGGCCGT TCTCCAGACG GGCCAGCAGA TGCTGAGTTG GCTGTCATCA 850
ACGTTAAACG CGGCAAACGG TATGTCATTG AACTCCCGAT TTCTCCATTC 900
ACATTGAAAT GACTGTCTGG TCTAGTTATC GATTCCGTCT GGTCTCCATC 950
TCATGTGACC CTAATTACAT CTTTTCTATC GACAACCATT CTATGACTGT 1000
CATCGAAGTC GATGGTGTCA ACACCCAATC CCTGACCGTC GATTCTATCC 1050
AAATCTTCGC AGGCCAACGC TACTCGTTCG TCGTAAGTCT CTTTGAATGG 1100
TTGGTGCTTT TTCTGTCCAT TCTCTAACCT GTTTATACAG CTCCATGCCA 1150
ACCGTCCTGA AAACAACTAT TGGATCAGGG CCAAACCTAA TATCGGTACG 1200
GATACTACCA CAGACAACGG CATGAACTCT GCCATTCTGC GATACAACGG 1250
CGCACCTGTT GCGGAACCGC AAACTGTTCA ATCTCCCAGT CTCACCCCTT 1300
TGCTCGAACA GAACCTTCGC CCTCTCGTGT ACACTCCTGT GGTATGTTTC 1350
AAAGCGTTGT AATTTGATTG TGGTCATTCT AACGTTACTG CCTTTGCACA 1400
GCCTGGAAAT CCTACGCCTG GCGGGGCCGA TATTGTCCAT ACTCTTGACT 1450
TGAGTTTTGT GCGGAGTCAA CATTCGTAAA GATAAGAGTG TTTCTAATTT 1500
CTTCAATAAT AGGATGCTGG TCGCTTCAGT ATCAACGGTG CCTCGTTCCT 1550
TGATCCTACC GTCCCTGTTC TCCTGCAAAT TCTCAGCGGC ACGCAGAATG 1600
CACAAGATCT ACTCCCTCCT GGAAGTGTGA TTCCTCTCGA ATTAGGCAAG 1650
GTCGTCGAAT TAGTCATACC TGCAGGTGTT GTCGGTGGAC CTCATCCGTT 1700
CCATCTCCAT GGGGTACGTA ACCCGAACTT ATAACAGTCT TGGACTTACC 1750
CGCTGACAAG TGTATAGCAT AACTTCTGGG TCGTGCGAAG TGCCGGAACC 1800
GACCAGTACA ACTTTAACGA TGCCATTCTC CGAGACGTCG TCAGTATAGG 1850
AGGAACCGAG GATCAAGTCA CCATTCGATT CGTGGTATAT ACTTCATTCT 1900
TGTGGATGTA TGTGCTCTAG GATACTAACT GGCTTGCGCG TATAGACCGA 1950
TAACCCCGGA CCGTGGTTCC TCCATTGCCA TATCGACTGG CACTTGGAAG 2000
CGGGTCTCGC TATCGTATTT GCAGAGGGAA TTGAAAATAC TGCTGCGTCT 2050
AATCCAACCC CCCGTATGCG GTTTCCCACA CATTCTGAAT CTAAGCAGCT 2100
TACTAATATA CATTTGCAGA GGCTTGGGAT GAGCTTTGCC CGAAGTATAA 2150
CGCGCTCAAC GCACAAAAGA AGGTTGCATC TAAGAAAGGC ACTGCCATCT 2200
AATCCTTGTA ACAAACAAGG AGGGTCTCTT GTACTTTTAT TGGGATTTAT 2250
TTCTTGGGGT TTATTGTTCA ACTTGATTCT ACTATGTTTG GAAGTAGCGA 2300
TTACGAAAGG GGCTTGCGCA TTTATATACC ATCTTTCTTG GCACCACCTG 2350
CAGCTCAATC CTTCAACCAC CTAA 2374

Translated protein sequence (SEQ ID NO: 4):
MSSKLLALIT VALVLPLGTD AGIGPVTDLR ITNQDIAPDG FTRPAVLAGG 50
TFPGALITGQ KGDSFQINVI DELTDASMLT QTSIHWHGFF QKGSAWADGP 100
AFVTQCPIVT GNSFLYDFDV PDQPGTFWYH SHLSTQYCDG LRGPFVVYDP 150
KDPNKRLYDI DNDHTVITLA DWYHVLARTV VGVATPDATL INGLGRSPDG 200
PADAELAVIN VKRGKRYRFR LVSISCDPNY IFSIDNHSMT VIEVDGVNTQ 250
SLTVDSIQIF AGQRYSFVLH ANRPENNYWI RAKPNIGTDT TTDNGMNSAI 300
LRYNGAPVAE PQTVQSPSLT PLLEQNLRPL VYTPVPGNPT PGGADIVHTL 350
DLSFDAGRFS INGASFLDPT VPVLLQILSG TQNAQDLLPP GSVIPLELGK 400
VVELVIPAGV VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GTDQYNFNDA ILRDVVSIGG 450
TEDQVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIE NTAASNPTPQ 500
AWDELCPKYN ALNAQKKLNP STT 523

C. Cerrena laccase B1 gene polynucleotide sequence derived from strain CBS 115.075 (SEQ ID NO: 5):
ATGTCTCTTC TTCGTAGCTT GACCTCCCTC ATCGTACTAG TCATTGGTGC 50
ATTTGCTGCA ATCGGTCCAG TCACTGACCT ACATATAGTG AACCAGAATC 100
TCGACCCAGA TGGTTTCAAC CGCCCCACTG TACTCGCAGG TGGTACTTTC 150
CCCGGTCCTC TGATTCGTGG TAACAAGGTA CGCTTCATAA CCGCCCTCCG 200
TAGACGTAGG CTTCGGCTGA CATGACCATC ATCTGTAGGG AGATAACTTT 250
AAAATTAATG TGATTGACGA CTTGACAGAG CACAGTATGC TCAAGGCTAC 300
GTCCATCGTA AGTCCCTGAT TAACGTTTCA CCTGGTCATA TCGCTCAACG 350
TCTCGAAGCA CTGGCATGGG TTCTTCCAGA AGGGAACCAA CTGGGCCGAT 400
GGCCCCGCCT TTGTCACCCA ATGTCCTATC ACATCAGGAA ACGCCTTCCT 450
GTATGATTTC AACGTTCCGG ACCAAGCTGG TACTTTCTGG TACCACAGCC 500
ATCTCTCTAC ACAGTATTGT GACGGTCTTC GTGGTGCCTT TGTCGTCTAT 550
GATCCTAATG ATCCCAACAA GCAACTCTAT GATGTTGATA ACGGCAAGTT 600
CCTTGCATAT TTCATTTCTA TCATATCCTC ACCTGTATTG GCACAGAAAG 650
CACCGTGATT ACCTTGGCTG ATTGGTATCA TGCCCTTGCT CAGACTGTCA 700
CTGGTGTCGC GTGAGTGACA AATGGCCCTC AATTGTTCAC ATATTTTCCT 750
GATTATCATA TGATAGAGTA TCTGATGCAA CGTTGATCAA CGGATTGGGA 800
CGTTCGGCCA CCGGCCCCGC AAATGCCCCT CTGGCGGTCA TCAGTGTCGA 850
GCGGAATAAG AGGTCAGTTC CATAATTATG ATTATTTCCC GCGTTACTTC 900
CTAACAATTA TTTTTGTATC CCTCCACAGA TATCGTTTCC GATTGGTTTC 950
TATTTCTTGC GACCCTAACT TTATTTTCTC AATTGACCAC CACCCAATGA 1000
CCGTAATTGA GATGGACGGT GTTAATACCC AATCTATGAC CGTAGATTCG 1050
ATCCAAATAT TCGCAGGTCA ACGATATTCA TTTGTCGTAG GTTATTATAA 1100
ACTGCCCACC GATCATCTCT CACGTAACTG TTATAGATGC AAGCCAACCA 1150
ACCAGTTGGA AATTATTGGA TCCGCGCTAA ACCTAATGTT GGGAACACAA 1200
CTTTCCTTGG AGGCCTGAAC TCCGCTATAT TACGATATGT GGGAGCCCCT 1250
GACCAAGAAC CGACCACTGA CCAAACACCC AACTCTACAC CGCTCGTTGA 1300
GGCGAACCTA CGACCCCTCG TCTATACTCC TGTGGTATGT TGTTCTCGTT 1350
ACATATACCA AACCTAATAT GAAGACTGAA CGGATCTACT AGCCGGGACA 1400
GCCATTCCCT GGCGGTGCTG ATATCGTCAA GAACTTAGCT TTGGGTTTCG 1450
TACGTGTATT TCACTTCCCT TTTGGCAGTA ACTGAGGTGG AATGTATATA 1500
GAATGCCGGG CGTTTCACAA TCAATGGAGC GTCCCTCACA CCTCCTACAG 1550
TCCCTGTACT ACTCCAGATC CTCAGTGGTA CTCACAATGC ACAGGATCTT 1600
CTCCCAGCAG GAAGCGTGAT CGAACTTGAA CAGAATAAAG TTGTCGAAAT 1650
CGTTTTGCCC GCTGCGGGCG CCGTTGGCGG TCCTCATCCT TTTCACTTAC 1700
ATGGTGTAAG TATCAGACGT CCTCATGCCC ATATTGCTCC GAACCTTACA 1750
CACCTGATTT CAGCACAATT TCTGGGTGGT TCGTAGCGCC GGTCAAACCA 1800
CATACAATTT CAATGATGCT CCTATCCGTG ATGTTGTCAG TATTGGCGGT 1850
GCAAACGATC AAGTCACGAT CCGATTTGTG GTATGTATCT CGTGCCTTGC 1900
ATTCATTCCA CGAGTAATGA TCCTTACACT TCGGGTTCTC AGACCGATAA 1950
CCCTGGCCCA TGGTTCCTTC ACTGTCACAT TGACTGGCAT TTGGAGGCTG 2000
GGTTCGCTGT AGTCTTTGCG GAGGGAATCA ATGGTACTGC AGCTGCTAAT 2050
CCAGTCCCAG GTAAGACTCT CGCTGCTTTG CGTAATATCT ATGAATTTAA 2100
ATCATATCAA TTTGCAGCGG CTTGGAATCA ATTGTGCCCA TTGTATGATG 2150
CCTTGAGCCC AGGTGATACA TGA 2173

Translated protein sequence (SEQ ID NO: 6):
MSLLRSLTSL IVLVIGAFAA IGPVTDLHIV NQNLDPDGFN RPTVLAGGTF 50
PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF 100
VTQCPITSGN AFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND 150
PNKQLYDVDN GNTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA 200
NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM 250
TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWIRA KPNVGNTTFL GGLNSAILRY 300
VGAPDQEPTT DQTPNSTPLV EANLRPLVYT PVPGQPFPGG ADIVKNLALG 350
FNAGRFTING ASLTPPTVPV LLQILSGTHN AQDLLPAGSV IELEQNKVVE 400
IVLPAAGAVG GPHPFHLHGH NFWVVRSAGQ TTYNFNDAPI RDVVSIGGAN 450
DQVTIRFVTD NPGPWFLHCH IDWHLEAGFA VVFAEGINGT AAANPVPAAW 500
NQLCPLYDAL SPGDT 515

D. Cerrena laccase B2 gene polynucleotide sequence derived from strain CBS154.29 (SEQ ID NO: 7):
CACCGCGATG TCTCTTCTTC GTAGCTTGAC CTCCCTCATC GTACTAGCCA 50
CTGGTGCATT TGCTGCAATC GGTCCAGTCA CCGACCTACA TATAGTGAAC 100
CAGAATCTCG CCCCAGATGG TTTAAACCGC CCCACTGTAC TCGCAGGTGG 150
TACTTTCCCC GGTCCTCTGA TTCGTGGTAA CAAGGTACGC TTCATAACCG 200
CCCTCCGTAG ACGTAGGCTT CGGCTGACAT GACCATCATC TGTAGGGAGA 250
TAACTTTAAA ATTAATGTGA TTGACGACTT GACAGAACAC AGTATGCTCA 300
AGGCTACGTC CATTGTAAGT CCCTGATTAA CGTTTCACCT GGTCATATCG 350
CTCAACGTCT CGAAGCACTG GCATGGGTTC TTCCAGAAGG GAACCAACTG 400
GGCCGATGGC CCCGCCTTTG TCACCCAATG TCCTATCACA TCAGGAAACG 450
CCTTCTTGTA TGATTTCAAC GTTCCGGACC AAGCTGGTAC TTTCTGGTAC 500
CACAGCCATC TCTCYACACA GTATTGTGAC GGTCTTCGTG GTGCCTTTGT 550
CGTCTATGAT CCTAATGATC CCAACAAGCA ACTCTATGAT GTTGATAACG 600
GCAAGTCCCT TGCATATTTC AGTTCTATCA TATCCTCACC TGTATTGGCA 650
CAGAAAGCAC CGTGATTACC TTGGCTGATT GGTATCATGC CCTTGCTCAG 700
ACTGTCACTG GTGTCGCGTG AGTGACAAAT GGCCCTTAAT TGTTCACATA 750
TTTTCCTGAT TATCATATGA TAGAGTATCT GATGCAACGT TGATCAACGG 800
ATTGGGACGT TCGGCCACCG GCCCCGCAAA TGCCCCTCTG GCGGTCATCA 850
GTGTCGAGCG GAATAAGAGG TCAGTTCCAT AATTATGATT ATTTCCCGCG 900
TTACTTCCTA ACGATTATTT TTGTATCCCT CCACAGATAT CGTTTCCGAT 950
TGGTTTCTAT TTCTTGCGAC CCTAACTTTA TTTTCTCAAT TGACCACCAC 1000
CCAATGACCG TAATTGAGAT GGACGGTGTT AATACCCAAT CTATGACCGT 1050
AGATTCGATC CAAATATTCG CAGGTCAACG ATATTCATTT GTCGTAGGTT 1100
ATTATAAACT GCCCACCGAT CATCTCTCAC GTAACTGTTA TAGATGCAAG 1150
CCAACCAACC AGTTGGAAAT TATTGGATCC GYGCTAAACC TAATGTTGGG 1200
AACACAACTT TCCTTGGAGG CCTGAACTCC GCTATATTAC GATATGTGGG 1250
AGCCCCTGAC CAAGAACCGA CCACTGACCA AACACCCAAC TCTACACCGC 1300
TCGTCGAGGC GAACCTACGT CCCCTCGTCT ATACTCCTGT GGTATGTTGT 1350
TCTCGTTACA TATACCAAAC CTAATATGAG GACTGAACGG ATCTACTAGC 1400
CGGGACAGCC ATTCCCTGGC GGTGCTGATA TCGTCAAGAA CTTAGCTTTG 1450
GGTTTCGTAC GTGTATTTCA CTTCCCTTTT GGCAGTAACT GAGGTGGAAT 1500
GTATATAGAA TGCCGGGCGT TTCACAATCA ATGGAACATC CTTCACACCT 1550
CCTACAGTCC CTGTACTACT CCAGATCCTC AGTGGTACTC ACAATGCACA 1600
GGATCTTCTT CCAGCAGGAA GCGTGATCGA ACTTGAACAG AATAAAGTTG 1650
TCGAAATCGT TCTGCCCGCT GCGGGCGCCG TTGGCGGTCC TCATCCTTTC 1700
CACTTACATG GTGTAAGTAT CAGACGTCCT CATGCCTATA TTGCTCCGAA 1750
CCTTACACAC CTGATTTCAG CACAATTTCT GGGTGGTTCG TAGCGCCGGT 1800
CAAACCACAT ACAATTTCAA TGATGCTCCT ATCCGTGATG TTGTCAGTAT 1850
TGGCGGTGCA AACGATCAAG TCACGATCCG ATTTGTGGTA TGTATCTCGT 1900
GCCTTGCATT CATTCCACGA GTAATGATCC TTACACTTCG GGTTCTCAGA 1950
CCGATAACCC TGGCCCATGG TTCCTTCACT GTCACATTGA CTGGCATTTG 2000
GAGGCTGGGT TCGCTGTAGT CTTTGCGGAG GGAATCAATG GCACTGCAGC 2050
TGCTAATCCA GTCCCAGGTA AGACTCTCGC TGCTTTGCGT AATATCTATG 2100
AATTTAAAGC ATATCAATTT GCAGCGGCTT GGAATCAATT GTGCCCGTTG 2150
TATGATGCCT TGAGCCCAGG TGATACATGA TTACTCGTAG CTGTGCTTTC 2200
TTATACATAT TCTATGGGTA TATCGGAGTA GCTGTACTAT AGTATGTACT 2250
ATACTAGGTG GGATATGYTG ATGTTGATTT ATATAATTTT GTTTGAAGAG 2300
TGACTTTATC GACTTGGGAT TTAGCCGAGT ACATACTGAT CTCTCACTAC 2350
AGGCTTGTTT TGTCTTTGGG CGCTTACTCA ACAGTTGACT GTTTTTGCTA 2400
TTACGCATTG AACCGCATTC CGGTCYGACT CGTGTCCTCT ACTGTGACTT 2450
GTATTGGCAT TCTAGCACAT ATGTCTCTTA CCTATAGGAA CAATATGTCT 2500
CAACACTGTT CCAAAACCTG CGTAAACCAA ATATCGTCCA TCAGATCAGA 2550
TCATTAACAG TGCCGCACTA ACCTAATACA CTGGCARGGA CTGTGGAAAT 2600
CCCTATAAAT GACCTCTAGA CCGTGAGGTC ATTGCAAGGT CGCTCTCCTT 2650
GTCAAGATGA CCC 2663

Translated protein sequence (SEQ ID NO: 8):
MSLLRSLTSL IVLATGAFAA IGPVTDLHIV NQNLAPDGLN RPTVLAGGTF 50
PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF 100
VTQCPITSGN AFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND 150
PNKQLYDVDN GNTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA 200
NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM 250
TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWIRA KPNVGNTTFL GGLNSAILRY 300
VGAPDQEPTT DQTPNSTPLV EANLRPLVYT PVPGQPFPGG ADIVKNLALG 350
FNAGRFTING TSFTPPTVPV LLQILSGTHN AQDLLPAGSV IELEQNKVVE 400
IVLPAAGAVG GPHPFHLHGH NFWVVRSAGQ TTYNFNDAPI RDVVSIGGAN 450
DQVTIRFVTD NPGPWFLHCH IDWHLEAGFA VVFAEGINGT AAANPVPAAW 500
NQLCPLYDAL SPGDT 515

E. Cerrena laccase B3 gene derived from ATCC 20013 strain (partial)
Polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 9):
GTGGGGGCGG ATCCCTAACT GTTTCGAATC GGCACCGAAG TATGCAGGTG 50
TGACGGAGAT GAGGCGTTTT TTCATCTTCC ACTGCAGTAT AAAATGTCTC 100
AGGTAACGTC CAGCTTTTTG TACCAGAGCT ACCTCCAAAT ACCTTTACTC 150
GCAAAGGTTT CGCGATGTCT CTTCTTCGTA GCTTGACCTC CCTCATCGTA 200
CTAGCCACTG GTGCATTTGC TGCAATCGGT CCAGTCACTG ACCTACATAT 250
AGTGAACCAG AATCTCGCCC CAGATGGTTT CAACCGCCCC ACTGTACTCG 300
CAGGTGGTAC TTTCCCCGGT CCTCTGATTC GTGGTAACAA GGTACGCTTC 350
ATAACCGCCC TCCGTAGACG TAGGCTTCGG CTGACATGAC CATCATCTGT 400
AGGGAGATAA CTTTAAAATT AATGTGATTG ACGACTTGAC AGAACACAGT 450
ATGCTCAAGG CCACGTCCAT TGTAAGTCCC TGATTAACGT TTCACCTGGT 500
CATATCGCTC AACGTCTCGA AGCACTGGCA TGGGTTCTTC CAGAAGGGAA 550
CCAACTGGGC CGATGGCCCC GCCTTTGTCA CCCAATGTCC TATCACATCA 600
GGAAACTCCT TCCTGTATGA TTTCAACGTT CCGGACCAAG CTGGTACTTT 650
CTGGTACCAC AGCCATCTCT CTACACAGTA TTGTGACGGT CTTCGTGGTG 700
CCTTTGTCGT CTATGATCCT AATGATCCCA ACAAGCAACT CTATGATGTT 750
GATAACGGCA AGTCCCTTGC ATATTTCATT TCTATCATAT CCTCACCTGT 800
ATTGGCACAG AAAGCACCGT GATTACCTTG GCTGATTGGT ATCATGCCCT 850
TGCTCAGACT GTCACTGGTG TCGCGTGAGT GACAAATGGC CCTCAATTGT 900
TCACATATTT TCCTGATTAT CATATGATAG AGTATCTGAT GCAACGTTGA 950
TCAACGGATT GGGACGTTCG GCCACCGGCC CCGCAAATGC CCCTCTGGCG 1000
GTCATCAGTG TCGAGCGGAA TAAGAGGTCA GTTCCATAAT TATGATTATT 1050
TCCCGCGTTA CTTCCTAACA ATTATTCTTG TATCCCTCCA CAGATATCGC 1100
TTCCGATTGG TGTCTATTTC TTGCGACCCT AACTTTATTT TCTCAATTGA 1150
TCACCACCCA ATGACCGTAA TTGAGATGGA CGGTGTTAAT ACCCAATCTA 1200
TGACCGTAGA TTCGATCCAA ATATTCGCAG GTCAACGATA TTCATTTGTC 1250
GTAGGTTATT ATAAACTGCC CACCGATCAT CTCTCACGTA ACTGTTATAG 1300
ATGCAAGCCA ACCAACCRGT TGGAAATTAT TGGATCC 1337

Translated protein sequence (SEQ ID NO: 10):
MSLLRSLTSL IVLATGAFAA IGPVTDLHIV NQNLAPDGFN RPTVLAGGTF 50
PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF 100
VTQCPITSGN SFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND 150
PNKQLYDVDN GKTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA 200
NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM 250
TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWI 278

F. Cerrena laccase C gene (part) derived from CBS154.29 strain
Polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 11):
TGCAATCGGA CCGGTBGCTG ACCTTCACAT TACGGACGAT ACCATTGCCC 50
CCGATGGTTT CTCTCGTCCT GCTGTTCTCG CTGGCGGGGG TTTCCCTGGC 100
CCTCTCATCA CCGGAAACAA GGTAATGCCT AATGGTTGCG TCTTTGTTGG 150
TGCTCTCATT CATCCACGAC ATTTTGTACC AGGGCGACGC CTTTAAACTC 200
AATGTCATCG ATGAACTAAC GGACGCATCC ATGCTGAAGY CGACTTCCAT 250
CGTAAGTCTC GCTGTATTGC TCCTTGAGCC ATTTCATTGA CTATAACTAC 300
AACCAGCACT GGCATGGATT CTTCCAAAAG GGTACTAATT GGGCAGATGG 350
TCCCGCTTTT GTGAACCAAT GCCCCATCAC CACGGGAAAC TCCTTCTTGT 400
ACGACTTCCA GGTTCCTGAT CAAGCTGGTA AGCATGAGAT TACACTAGGA 450
AAGTTTAATT TAATAACTAT TCAATCAGGA ACCTACTGGT ATCATAGTCA 500
TTTGTCTACG CAATACTGTG ATGGTCTCAG AGGTGCATTC GTTGTCTACG 550
ACCCTTCAGA TCCTCACAAG GATCTCTACG ACGTCGACGA CGGTGAGCTT 600
TGCTTTTTTC ATTGGTATCC ATTATCGCTC ACGTGTCATT ACTGCGCCAC 650
AGAAAGTACC GTCATCACTT TGGCTGATTG GTATCATACT TTGGCTCGTC 700
AGATTGTTGG CGTTGCGTGA GTAGTCTTGT ACCGACTGAA ACATATTCCA 750
GTTGCTGACT TCCCCACAGC ATTTCTGATA CTACCTTGAT AAACGGTTTG 800
GGCCGCAATA CCAATGGTCC GGCTGATGCT GCTCTTGCTG TGATCAATGT 850
TGACGCTGGC AAACGGTGTG TCCAGATTAC TATACTCCCC ATGACGTCTC 900
AATGCTGATG TGTACTACTT CCAGGTACCG TTTCCGTCTT GTTTCCATAT 950
CCTGTGACCC CAATTGGGTA TTCTCGATTG ACAACCATGA CTTTACGGTC 1000
ATTGAAGTCG ATGGTGTTAA CAGTCAACCT CTCAACGTCG ATTCTGTTCA 1050
GATCTTCGCC GGACAACGTT ACTCGTTCGT 1080

Translated protein sequence (SEQ ID NO: 12):
AIGPVADLHI TDDTIAPDGF SRPAVLAGGG FPGPLITGNK GDAFKLNVID 50
ELTDASMLKX TSIHWHGFFQ KGTNWADGPA FVNQCPITTG NSFLYDFQVP 100
DQAGTYWYHS HLSTQYCDGL RGAFVVYDPS DPHKDLYDVD DESTVITLAD 150
WYHTLARQIV GVAISDTTLI NGLGRNTNGP ADAALAVINV DAGKRYRFRL 200
VSISCDPNWV FSIDNHDFTV IEVDGVNSQP LNVDSVQIFA GQRYSF 246

G. Cerrena laccase D1 gene polynucleotide sequence from CBS154.29 strain (SEQ ID NO: 13):
GATTCTAATA GACCAGGCAT ACCAAGAGAT CTACAGGTTG ACAGACCATT 50
CTTCTAGGCG GCATTTATGC TGTAGCGTCA GAAATTATCT CTCCATTTGT 100
ATCCCACAGG TCCTGTAATA ACACGGAGAC AGTCCAAACT GGGATGCCTT 150
TTTTCTCAAC TATGGGCGCA CATAGTCTGG ACGATGGTAT ATAAGACGAT 200
GGTATGAGAC CCATGAAGTC AGAACACTTT TGCTCTCTGA CATTTCATGG 250
TTCACACTCT CGAGATGGGA TTGAACTCGG CTATTACATC GCTTGCTATC 300
TTAGCTCTGT CAGTCGGAAG CTATGCTGCA ATTGGGCCCG TGGCCGACAT 350
ACACATTGTC AACAAAGACC TTGCTCCAGA TGGCGTACAA CGTCCAACCG 400
TGCTTGCCGG AGGCACTTTT CCTGGGACGT TGATCACCGG TCAGAAAGTA 450
AGGGATATTA GTTTGCGTCA AAGAGCCAAC CAAAACTAAC CGTCCCGTAC 500
TATAGGGTGA CAACTTCCAG CTCAATGTCA TCGATGATCT TACCGACGAT 550
CGGATGTTGA CGCCAACTTC CATTGTGAGC CTATTATTGT ATGATTTATC 600
CGAATAGTTT CGCAGTCTGA TCATTGGATC TCTATCGCTA GCATTGGCAC 650
GGTTTCTTCC AGAAGGGAAC CGCTTGGGCC GACGGTCCCG CCTTCGTAAC 700
TCAGTGCCCT ATAATAGCAG ATAACTCTTT TCTGTATGAC TTCGACGTCC 750
CAGACCAAGC TGGTACTTTC TGGTATCATA GTCATCTATC CACTCAGTAC 800
TGTGACGGTT TACGTGGTGC CTTCGTTGTG TACGATCCTA ACGATCCTCA 850
CAAAGACCTA TACGATGTTG ATGACGGTGG GTTCCAAATA TTTGTTCTGC 900
AGACATTGTA TTGACGGTGT TCATTATAAT TTCAGAGAGC ACCGTGATTA 950
CCCTTGCGGA TTGGTACCAT GTTCTCGCCC AGACCGTTGT CGGCGCTGCG 1000
TGAGTAACAC ATACACGCGC TCCGGCACAC TGATACTAAT TTTTTTTTAT 1050
TGTAGCACTC CTGATTCTAC CTTGATCAAC GGGTTAGGCC GTTCACAGAC 1100
CGGACCCGCT GATGCTGAGC TGGCTGTTAT CAGCGTTGAA CATAACAAAC 1150
GGTATGTCAT CTCTACCCAG TATCTTCTCT CCTGCTCTAA TTCGCTGTTT 1200
CACCATAGAT ACCGTTTCCG TTTGGTTTCG ATTTCGTGCG ACCCCAACTT 1250
TACCTTCTCC GTTGATGGTC ATAATATGAC TGTCATCGAA GTCGATGGTG 1300
TCAACACACG ACCCCTGACC GTTGACTCTA TTCAAATCTT CGCCGGACAG 1350
AGGTATTCCT TTGTCGTAAG TTAATCGATA TATTCTCCTT ATTACCCCTG 1400
TGTAATTGAT GTCAATAGCT CAATGCTAAC CAACCCGAAG ACAATTACTG 1450
GATCCGTGCT ATGCCAAACA TCGGTAGAAA TACAACAACA CTGGACGGAA 1500
AGAATGCCGC TATCCTTCGA TACAAGAATG CTTCTGTAGA AGAGCCCAAG 1550
ACCGTTGGGG GCCCCGCTCA ATCCCCGTTG AATGAAGCGG ACCTGCGTCC 1600
ACTCGTACCT GCTCCTGTGG TATGTCTTGT CGCGCTGTTC CATCGCTATT 1650
TCATATTAAC GTTTTGTTTT TGTCAAGCCT GGAAACGCTG TTCCAGGTGG 1700
CGCAGACATC AATCACAGGC TTAACTTAAC TTTCGTACGT ACACCTGGTT 1750
GAAACATTAT ATTTCCAGTC TAACCTCTCT TGTAGAGTAA CGGCCTCTTC 1800
AGCATCAACA ACGCCTCCTT CACTAATCCT TCGGTCCCCG CCTTATTACA 1850
AATTCTGAGC GGTGCTCAGA ACGCTCAAGA TTTACTTCCA ACGGGTAGTT 1900
ACATTGGCCT TGAACTAGGC AAGGTTGTGG AGCTCGTTAT ACCTCCTCTG 1950
GCAGTTGGAG GACCGCACCC TTTCCATCTT CATGGCGTAA GCATACCACA 2000
CTCCCGCAGC CAGAATGACG CAAACTAATC ATGATATGCA GCACAATTTC 2050
TGGGTCGTCC GTAGTGCAGG TAGCGATGAG TATAACTTTG ACGATGCTAT 2100
CCTCAGGGAC GTCGTRAGCA TTGGAGCGGG GACTGATGAA GTCACAATCC 2150
GTTTCGTGGT ATGTCTCACC CCTCGCATTT TGAGACGCAA GAGCTGATAT 2200
ATTTTAACAT AGACCGACAA TCCGGGCCCG TGGTTCCTCC ATTGCCATAT 2250
TGATTGGCAT TTGGAGGCAG GCCTTGCCAT CGTCTTCGCT GAGGGCATCA 2300
ATCAGACCGC TGCAGCCAAC CCAACACCCC GTACGTGACA CTGAGGGTTT 2350
CTTTATAGTG CTGGATTACT GAATCGAGAT TTCTCCACAG AAGCATGGGA 2400
TGAGCTTTGC CCCAAATATA ACGGGTTGAG TGCGAGCCAG AAGGTCAAGC 2450
CTAAGAAAGG AACTGCTATT TAAACGTGGT CCTAGACTAC GGGCATATAA 2500
GTATTCGGGT AGCGCGTGTG AGCAATGTTC CGATACACGT AGATTCATCA 2550
CCGGACACGC TGGGACAATT TGTGTATAAT GGCTAGTAAC GTATCTGAGT 2600
TCTGGTGTGT AGTTCAAAGA GACAGCCCTT CCTGAGACAG CCCTTCCTGA 2650
GACAGCCCTT CCTGAGACGT GACCTCCGTA GTCTGCACAC GATACTYCTA 2700
AATACGTATG GCAAGATGAC AAAGAGGAGG ATGTGAGTTA CTACGAACAG 2750
AAATAGTGCC CGGCCTCGGA GAGATGTTCT TGAATATGGG ACTGGGACCA 2800
ACATCCGGA 2809

Translated protein sequence (SEQ ID NO: 14):
MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADIH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG 50
TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP 100
AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP 150
NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG 200
PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR 250
PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPEDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI 300
LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL 350
NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK 400
VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA 450
GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ 500
AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI 526

H. Cerrena laccase D2 gene polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 15) derived from strain CBS 115.075:
GATCTGGACG ATGGTATATA AGACGATGGT ATGAGACCCA TGAAGTCTGA 50
ACACTTTTGC TCTCTGACAT TTCATGGTTC ATACTCTCGA GATGGGATTG 100
AACTCGGCTA TTACATCGCT TGCTATCTTA GCTCTGTCAG TCGGAAGCTA 150
TGCTGCAATT GGGCCCGTGG CCGACATACA CATTGTCAAC AAAGACCTTG 200
CTCCAGATGG TGTACAACGT CCAACCGTGC TCGCCGGAGG CACTTTTCCT 250
GGGACGTTGA TCACCGGTCA GAAAGTAAGG AATATTAGTT TGCGTCAAAG 300
AGCCAACCAA AATTAACCGT CCCGTCCCAT AGGGTGACAA CTTCCAGCTC 350
AATGTCATTG ATGATCTTAC CGACGATCGG ATGTTGACAC CAACTTCCAT 400
TGTGAGCCTA TTATTGTATG ATTTATCCGT ATAGTTTCTC AGTCTGATCA 450
TTGGCTCTCT ATCGCTAGCA TTGGCACGGT TTCTTCCAGA AGGGAACCGC 500
TTGGGCCGAC GGTCCCGCCT TCGTAACTCA GTGCCCTATA ATAGCAGATA 550
ACTCTTTTCT GTATGACTTC GACGTCCCCG ACCAAGCTGG TACTTTCTGG 600
TATCATAGTC ATCTATCCAC TCAGTACTGT GACGGTTTAC GTGGTGCCTT 650
CGTTGTGTAC GATCCTAACG ATCCTCACAA AGACCTATAC GATGTTGATG 700
ACGGTGGGTT CCAAATACTT GACCAAGAAA CATTATATTG ATAGTATCCA 750
CTCTGATTTT CAGAGAGCAC CGTGATTACC CTTGCGGATT GGTACCATGT 800
TCTCGCCCAG ACCGTTGTCG GCGCTGCGTG AGTAACACAT ACACGCGCTC 850
CGGCACACTG ATACTAATTT TTTATTGTAG CACTCCTGAT TCTACCTTGA 900
TCAACGGGTT AGGCCGTTCA CAGACCGGAC CCGCTGATGC TGAGCTGGCT 950
GTTATCAGCG TTGAACATAA CAAACGGTAT GTCATCTCTA CCCATTATCT 1000
TCTCTCCTGC TTTAATTCGC TGTTTCACCA TAGATACCGA TTCCGTTTGG 1050
TTTCGATTTC GTGCGACCCC AACTTTACCT TCTCCGTTGA TGGTCATAAT 1100
ATGACTGTCA TCGAAGTCGA CGGTGTCAAC ACACGACCCC TGACCGTTGA 1150
CTCTATTCAA ATCTTCGCCG GACAGAGGTA TTCCTTTGTC GTAAGTTAAT 1200
CGATATATTC TCCCTATTAC CCCTGTGTAA TTGATGTCAA CAGCTCAATG 1250
CTAACCAACC CGACGACAAT TACTGGATCC GTGCTATGCC AAACATCGGT 1300
AGAAATACAA CAACACTGGA CGGAAAGAAT GCCGCTATCC TTCGATACAA 1350
GAATGCTTCT GTAGAAGAGC CCAAGACCGT TGGGGGCCCC GCTCAATCCC 1400
CGTTGAATGA AGCGGACCTG CGTCCACTCG TACCTGCTCC TGTGGTATGT 1450
CTTGTCGTGC TGTTCCATCG CTATTTCATA TTAACGTTTT GTTTTTGTCA 1500
AGCCTGGAAA CGCTGTTCCA GGTGGCGCAG ACATCAATCA CAGGCTTAAC 1550
TTAACTTTCG TACGTACACC TGGTTGAAAC ATTATATTTC CAGTCTAACC 1600
TCTTGTAGAG TAACGGCCTT TTCAGCATCA ACAACGCCTC CTTCACTAAT 1650
CCTTCGGTCC CCGCCTTATT ACAAATTCTG AGCGGTGCTC AGAACGCTCA 1700
AGATTTACTT CCAACGGGTA GTTACATTGG CCTTGAACTA GGCAAGGTTG 1750
TGGAGCTCGT TATACCTCCT CTGGCAGTTG GAGGACCGCA CCCTTTCCAT 1800
CTTCATGGCG TAAGCATACC ACACTCCCGC AGCCAGAATG ACGCAAACTA 1850
ATCATGATAT GCAGCACAAT TTCTGGGTCG TCCGTAGTGC AGGTAGCGAT 1900
GAGTATAACT TTGACGATGC TATCCTCAGG GACGTCGTGA GCATTGGAGC 1950
GGGGACTGAT GAAGTCACAA TCCGTTTCGT GGTATGTCTC ACCCCTCGCA 2000
TTTTGAGACG CAAGAGCTGA TATATTTTAA CATAGACCGA CAATCCGGGC 2050
CCGTGGTTCC TCCATTGCCA TATTGATTGG CATTTGGAGG CAGGCCTTGC 2100
CATCGTCTTC GCTGAGGGCA TCAATCAGAC CGCTGCAGCC AACCCAACAC 2150
CCCGTACGTG ACACTGAGGG TTTCTTTATA GTGCTGGATT ACTGAATCGA 2200
GATTTCTCCA CAGAAGCATG GGATGAGCTT TGCCCCAAAT ATAACGGGTT 2250
GAGTGCGAGC CAGAAGGTCA AGCCTAAGAA AGGAACTGCT ATTTAAACG 2299

Translated protein sequence (SEQ ID NO: 16):
MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADIH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG 50
TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP 100
AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP 150
NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG 200
PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR 250
PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPDDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI 300
LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL 350
NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK 400
VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA 450
GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ 500
AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI 526

I. Cerrena laccase E gene from CBS154.29 strain (partial)
Polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 17):
TGCAATCGGA CCGGTGGCCG ACCTCAAGAT CGTAAACCGA GACATTGCAC 50
CTGACGGTTT TATTCGTCCC GCCGTTCTCG CTGGAGGGTC GTTCCCTGGT 100
CCTCTCATTA CAGGGCAGAA AGTACGTTAC GCTATCTCGG TGCTTTGGCT 150
TAATTAAACT ATTTGACTTT GTGTTCTCTT AGGGGAACGA GTTCAAAATC 200
AATGTAGTCA ATCAACTGAC CGATGGTTCT ATGTTAAAAT CCACCTCAAT 250
CGTAAGCAGA ATGAGCCCTT TGCATCTCGT TTTATTGTTA ATGCGCCCAC 300
TATAGCATTG GCATGGATTC TTCCAGAAGG GAACAAACTG GGCAGACGGT 350
CCTGCGTTCG TGAACCAATG TCCAATCGCC ACGAACAATT CGTTCTTGTA 400
TCAGTTTACC TCACAGGAAC AGCCAGGTGA GTATGAGATG GAGTTCATCC 450
GAGCATGAAC TGATTTATTT GGAACCTAGG CACATTTTGG TACCATAGTC 500
ATCTTTCCAC ACAATACTGC GATGGTTTGC GAGGGCCACT CGTGGTGTAT 550
GACCCACAAG ACCCGCATGC TGTTCTCTAC GACGTCGACG ATGGTTCGTA 600
CTTCGCATAT CCACGCTCGC TTTCATACAA TGTAAACTTT GTTCCTCCAG 650
AAAGTACAAT CATCACGCTC GCGGATTGGT ATCATACCTT GGCTCGGCAA 700
GTGAAAGGCC CAGCGTAAGG CACTTTAGTG TTTCCTCATA GTCCAAGAAA 750
TTCTAACACG CCTTCTTCAT CAGGGTTCCT GGTACGACCT TGATCAACGG 800
GTTGGGGCGT CACAACAATG GTCCTCTAGA TGCTGAACTA GCGGTGATCA 850
GTGTTCAAGC CGGCAAACGG CAAGTTCAAT TCACACTTTT CACTCTGTAC 900
CTTCTTCCTG ACATTCTTTT CTTGTAGTTA CCGCTTCCGC CTGATTTCAA 950
TTTCATGCGA TCCCAACTAC GTATTCTCCA TTGATGGCCA TGATATGACT 1000
GTCATCGAAG TGGATAGTGT TAACAGTCAA CCTCTCAAGG TAGATTCTAT 1050
CCAAATATTT GCAGGTCAGA GATATTCGTT CGTGGTGAGT CAGATCAGGG 1100
CATATCCTTT TGTCGATACG TCATTGACCA TATAATGCTA CAAGCTGAAT 1150
GCCAACCAAC CAG 1163

Translated protein sequence (SEQ ID NO: 18):
AIGPVADLKI VNRDIAPDGF IRPAVLAGGS FPGPLITGQK GNEFKINVVN 50
QLTDGSMLKS TSIHWHGFFQ KGTNWADGPA FVNQCPIATN NSFLYQFTSQ 100
EQPGTFWYHS HLSTQYCDGL RGPLVVYDPQ DPHAVLYDVD DESTIITLAD 150
WYHTLARQVK GPAVPGTTLI NGLGRHNNGP LDAELAVISV QAGKRQVQFT 200
LFTLYRFRLI SISCDPNYVF SIDGHDMTVI EVDSVNSQPL KVDSIQIFAG 250
QRYSFVLNAN QP 262

A laccase D enzyme having the following amino acid sequence (SEQ ID NO: 19: signal sequence in italics) can be used in the methods described herein.
MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADLH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG 50
TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP 100
AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP 150
NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG 200
PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR 250
PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPEDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI 300
LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL 350
NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK 400
VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA 450
GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ 500
AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI 526

The processed mature form of this polypeptide is as follows (SEQ ID NO: 20).
AIGPVADLHIVNKDLAPDGVQRPTVLAGGTFPGTLITGQKGDNFQLNVIDDLTDDRMLTPTSIHWHGFFQKGTAWADGPAFVTQCPIIADNSFLYDFDVPDQAGTFWYHSHLSTQYCDGLRGAFVVYDPNDPHKDLYDVDDGGTVITLADWYHVLAQTVVGAATPDSTLINGLGRSQTGPADAELAVISVEHNKRYRFRLVSISCDPNFTFSVDGHNMTVIEVDGVNTRPLTVDSIQIFAGQRYSFVLNANQPEDNYWIRAMPNIGRNTTTLDGKNAAILRYKNASVEEPKTVGGPAQSPLNEADLRPLVPAPVPGNAVPGGADINHRLNLTFSNGLFSINNASFTNPSVPALLQILSGAQNAQDLLPTGSYIGLELGKVVELVIPPLAVGGPHPFHLHGHNFWVVRSAGSDEYNFDDAILRDVVSIGAGTDEVTIRFVTDNPGPWFLHCHIDWHLEAGLAIVFAEGINQTAAANPTPQAWDELCPKYNGLSASQKVKPKKGTAI

いくつかの実施形態において、本発明の組成物及び方法において使用するのに適したラッカーゼ酵素は、細胞からの完全長ポリペプチドの分泌を導くために使用することができるシグナル配列を欠く成熟ポリペプチドである。適切な成熟ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、及び、配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは、少なくとも９９％、又は、それを超えるアミノ酸配列同一性を有していてもよい。本明細書に記載されている分析及び手順を使用して決定したときに、そのようなポリペプチドが、酵素的ラッカーゼ活性を有することが好ましい。 In some embodiments, a laccase enzyme suitable for use in the compositions and methods of the invention is a mature polypeptide that lacks a signal sequence that can be used to direct secretion of a full-length polypeptide from a cell. It is. Suitable mature polypeptides are SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and SEQ ID NO: At least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92% with respect to the amino acid sequence selected from the group consisting of number 20 , At least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%, or more amino acid sequence identity. It is preferred that such polypeptides have enzymatic laccase activity as determined using the assays and procedures described herein.

いくつかの実施形態において、本発明の組成物及び方法において使用するのに適したラッカーゼ酵素は、完全長の又は成熟した親／基準配列に比べると切断されたものである。そのような切断されたペプチドは、完全長の又は成熟したポリペプチド配列のタンパク分解によって、又は、切断されたペプチドをコードするようにポリヌクレオチドを設計することによって生成され得る。典型的なポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列と比較して、アミノ及び／又はカルボキシル末端において切断されたものである。切断部分は、少数（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個）のアミノ酸残基であってもよいし、又は、構造ドメイン又は機能ドメインの全体であってもよい。適切な切断されたペプチドは、上記参照アミノ酸配列の１つ又はそれ以上の対応部分に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは、少なくとも９９％、又は、それを超えるアミノ酸配列の同一性を有していてもよい。好ましくは、本明細書に記載されている分析及び手順を使用して決定されるように、そのようなポリペプチドは、酵素的ラッカーゼ活性を有する。 In some embodiments, laccase enzymes suitable for use in the compositions and methods of the invention are those that have been cleaved relative to the full-length or mature parent / reference sequence. Such cleaved peptides can be generated by proteolysis of full-length or mature polypeptide sequences, or by designing a polynucleotide to encode a cleaved peptide. Exemplary polypeptides are SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 and SEQ ID NO: 20 Compared with an amino acid sequence selected from the group consisting of: those cleaved at the amino and / or carboxyl terminus. The cleavage portion may be a small number (eg, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) amino acid residues, or Or the entire structural domain or functional domain. Suitable cleaved peptides are at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least relative to one or more corresponding portions of the reference amino acid sequence 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%, or more amino acid sequence identity It may have sex. Preferably, such polypeptides have enzymatic laccase activity, as determined using the assays and procedures described herein.

伝達物質
いくつかの実施形態において、酵素的酸化の系、組成物及び方法は、ラッカーゼ酵素の活性を増強する化学伝達物質剤の１つ又はそれ以上をさらに含む。伝達物質（エンハンサ又はアクセラレータとも呼ばれる）は、酸化酵素活性を示す酵素と、染料、色素（例えば藍）、発色基（例えば、色のついた汚れの中の、例えば、ポリフェノール、アントシアニン又はカロチノイド）、又は、他の第２基質若しくは電子供与体と間で有効に電子を輸送するための酸化還元伝達物質として作用する化学物質である。 In some embodiments, the enzymatic oxidation systems, compositions and methods further comprise one or more chemical mediator agents that enhance the activity of the laccase enzyme. Transmitters (also called enhancers or accelerators) include enzymes that exhibit oxidase activity, dyes, pigments (eg, indigo), chromophores (eg, in colored soils, such as polyphenols, anthocyanins or carotenoids), Alternatively, it is a chemical substance that acts as a redox transmitter for effectively transporting electrons to and from another second substrate or electron donor.

いくつかの実施形態において、化学伝達物質は、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ９５／０１４２６及びＷＯ９６／１２８４５に記載されているように、フェノール化合物、例えば、シリンガ酸メチル、又は、関連化合物である。伝達物質は、例えば、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ビオルル酸、Ｎ−ヒドロキシアセトアニリドのようなＮ−ヒドロキシ化合物、Ｎ−オキシム化合物又はＮ−オキシド化合物であってもよい。伝達物質は、例えば、フェノチアジン−１０−プロピオネートのようなフェノキサジン／フェノチアジン化合物でもあってもよい。伝達物質は、２，２’−アジノビス−（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸でもあり得る。他の化学伝達物質は、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ９５／０１４２６に開示されている化合物（この化合物は、ラッカーゼ活性を増大させることがわかっている）のように、当業界において周知である。伝達物質は、アセトシリンゴン、シリンガ酸メチル、シリンガ酸エチル、シリンガ酸プロピル、シリンガ酸ブチル、シリンガ酸ヘキシル又はシリンガ酸オクチルであってもよい。 In some embodiments, the chemical messenger is a phenolic compound, such as methyl syringate, or related compounds, as described, for example, in PCT applications WO 95/01426 and WO 96/12845. The transmitter may be, for example, an N-hydroxy compound such as N-hydroxybenzotriazole, violuric acid, N-hydroxyacetanilide, an N-oxime compound or an N-oxide compound. The transmitter may also be a phenoxazine / phenothiazine compound such as, for example, phenothiazine-10-propionate. The mediator can also be 2,2′-azinobis- (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid. Other chemical mediators are, for example, compounds disclosed in PCT application WO 95/01426 (this compound is Are known in the art, such as acetosyringone, methyl syringate, ethyl syringate, propyl syringate, butyl syringate, hexyl syringate Or it may be octyl syringate.

いくつかの実施形態において、伝達物質は、例えば、４−（Ｎ−メチルカルボキシアミド）−２，６−ジメトキシフェノール、４−［Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）カルボキシアミド］−２，６−ジメトキシフェノール）、又は、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキシアミド）−２，６−ジメトキシフェノールのような、４−シアノ−２，６−ジメトキシフェノール、４−カルボキシアミド−２，６−ジメトキシフェノール、又は、これらのＮ置換誘導体である。 In some embodiments, the transmitter is, for example, 4- (N-methylcarboxamido) -2,6-dimethoxyphenol, 4- [N- (2-hydroxyethyl) carboxamido] -2,6-dimethoxy. Phenol), or 4-cyano-2,6-dimethoxyphenol, 4-carboxyamide-2,6-dimethoxyphenol, such as 4- (N, N-dimethylcarboxyamide) -2,6-dimethoxyphenol, Or these N substituted derivatives.

いくつかの実施形態において、伝達物質は、下記式：

Figure 0005422670
（ここで、Ａは、−Ｒ、−Ｄ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｄ、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−Ｄ、−ＣＨ＝Ｎ−Ｄ、−Ｎ＝Ｎ−Ｄ、又は、−Ｎ＝ＣＨ−Ｄなどの基であり、Ｄは、−ＣＯ−Ｅ、−ＳＯ２−Ｅ、−ＣＮ、−ＮＸＹ、及び、−Ｎ＋ＸＹＺからなる群より選択され、Ｅは、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｒ、−ＯＲ、又は、−ＮＸＹであり、Ｘ、Ｙ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ及び−Ｒから独立して選択され；Ｒは、Ｃ１−Ｃ１６アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ８アルキルであり、該アルキルは、飽和又は不飽和のいずれであってもよく、分岐又は非分岐のいずれであってもよく、また、選択的にカルボキシ基、スルフォ基又はアミノ基で置換されていてもよく；Ｂ及びＣは、ＣｍＨ２ｍ＋１（１≦ｍ≦５）から独立して選択される）によって表される。 In some embodiments, the transmitter substance has the formula:
Figure 0005422670
(Where A is -R, -D, -CH = CH-D, -CH = CH-CH = CH-D, -CH = ND, -N = ND, or -N = A group such as CH—D, wherein D is selected from the group consisting of —CO—E, —SO 2 —E, —CN, —NXY, and —N + XYZ, where E is —H, —OH; , -R, -OR, or a -NXY, X, Y and Z are, -H, -OH, is independently selected from -OR and -R; R is, C 1 -C 16 alkyl, preferably Is C 1 -C 8 alkyl, which may be either saturated or unsaturated, branched or unbranched, and optionally carboxy, sulfo or amino It may be substituted with a group; B and C, the C m H 2m + 1 are selected (1 ≦ m ≦ 5) independently from) It is.

いくつかの実施形態において、上記式中のＡは、−ＣＮ又は−ＣＯ−Ｅであり、ここで、Ｅは、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｒ、−ＯＲ、又は、−ＮＸＹであり、Ｘ及びＹは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ及び−Ｒから独立して選択され、Ｒは、Ｃ１−Ｃ１６アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ８アルキルであり、該アルキルは、飽和又は不飽和のいずれであってもよく、分岐又は非分岐のいずれであってもよく、また、選択的にカルボキシ基、スルフォ基又はアミノ基で置換されていてもよく；Ｂ及びＣは、ＣｍＨ２ｍ＋１（１≦ｍ≦５）から独立して選択される。いくつかの実施形態において、伝達物質は、４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾニトリル（「シリンゴニトリル」又は「ＳＮ」とも呼ばれる）である。 In some embodiments, A in the above formula is —CN or —CO—E, wherein E is —H, —OH, —R, —OR, or —NXY, and X and Y is -H, -OH, is independently selected from -OR and -R, R is C 1 -C 16 alkyl, preferably C 1 -C 8 alkyl, the alkyl is a saturated or unsaturated It may be any of saturated, branched or unbranched, and may be optionally substituted with a carboxy group, a sulfo group or an amino group; B and C are C m H It is independently selected from 2m + 1 (1 ≦ m ≦ 5). In some embodiments, the transmitter is 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzonitrile (also referred to as “syringonitrile” or “SN”).

上記式において、Ａは、示されているようにパラ位に位置するのに代えて、水酸基に対してメタに位置してもよいことに留意されたい。 Note that in the above formula, A may be located in the meta relative to the hydroxyl group, instead of in the para position as shown.

繊維処理のような用途のために、伝達物質は、デニム１グラム当たり約０．００５μモル乃至約１０００μモル、デニム１グラム当たり約０．０５μモル乃至約５００μモル、デニム１グラム当たり約０．１μモル乃至約１００μモル、デニム１グラム当たり約１μモル乃至約５０μモル、又は、デニム１グラム当たり約２μモル乃至約２０μモルの濃度で存在していてもよい。 For applications such as fiber processing, the transfer material is about 0.005 μmol to about 1000 μmol per gram denim, about 0.05 μmol to about 500 μmol per gram denim, and about 0.1 μm per gram denim. It may be present in a concentration from about 1 to about 100 μmol, from about 1 μmol to about 50 μmol per gram of denim, or from about 2 μmol to about 20 μmol per gram of denim.

伝達物質は、ＰＣＴ出願ＷＯ９７／１１２１７及びＷＯ９６／１２８４５並びに米国特許第５，７５２，９８０号に開示されているような当業者に知られている方法によって調製することができる。他の適切な伝達物質は、例えば、米国特許公開公報第２００８／０１８９８７１号に記載されている。 The transmitter can be prepared by methods known to those skilled in the art as disclosed in PCT applications WO 97/11217 and WO 96/12845 and US Pat. No. 5,752,980. Other suitable mediators are described, for example, in US Patent Publication No. 2008/0189871.

使用の方法
本発明の系及び組成物は、酵素的ラッカーゼ活性が有用であるか又は望ましい用途において使用することができる。これらの中でも、用途／方法は、基材の色変性であり、その基材は、繊維に関連するものであってもよい。いくつかの実施形態において、そのような方法は、例えば約４０℃以下のような低温において適切な基質と共にラッカーゼ酵素をインキュベートするステップを含む。いくつかの実施形態において、温度は、約２０℃と約４０℃との間である。いくつかの実施形態において、温度は、約２０℃と約３５℃との間である。いくつかの実施形態において、温度は、約２０℃、約２５℃、約３０℃又は約３５℃である。いくつかの実施形態において、温度は、例えば、約２０℃乃至約２３℃のような、水道水の外界温度である。温度は、狭い範囲内に維持されてもよいし、又は、系及び組成物の性能に著しく影響することなく変動するようにしてもよい。 Methods of Use The systems and compositions of the present invention can be used in applications where enzymatic laccase activity is useful or desirable. Among these, the use / method is color modification of the substrate, which may be related to fibers. In some embodiments, such methods include incubating the laccase enzyme with a suitable substrate at a low temperature, such as, for example, about 40 ° C. or less. In some embodiments, the temperature is between about 20 ° C and about 40 ° C. In some embodiments, the temperature is between about 20 ° C and about 35 ° C. In some embodiments, the temperature is about 20 ° C, about 25 ° C, about 30 ° C, or about 35 ° C. In some embodiments, the temperature is an ambient temperature of tap water, such as, for example, from about 20 ° C to about 23 ° C. The temperature may be maintained within a narrow range or may be varied without significantly affecting the performance of the system and composition.

この方法は、本明細書に記載されている１つ又はそれ以上のラッカーゼの使用を意図する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、Ｃ．ユニカラーのようなセレナ(Cerrena)種に由来する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、本明細書に記載されているＣ．ユニカラーラッカーゼ酵素のいずれかのアミノ酸配列、又は、本明細書に記載されているＣ．ユニカラーラッカーゼ酵素のいずれかに対して、少なくとも約３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は、９９．５％もの同一性を有し、かつ、ラッカーゼ酵素活性を有するアミノ酸配列を含むか、それらのアミノ酸配列からなるか、又は、それらのアミノ酸配列から本質的になる。 This method contemplates the use of one or more laccases described herein. In some embodiments, the laccase is C.I. Derived from Cerrena species such as unicolor. In some embodiments, the laccase is a C.I. The amino acid sequence of any of the unicolor laccase enzymes, or C.I. At least about 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91 for any of the unicolor laccase enzymes %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 99.5% identity and includes amino acid sequences having laccase enzyme activity Or consist essentially of their amino acid sequence or consist essentially of their amino acid sequence.

いくつかの実施形態において、例えば、この系及び方法は、例えば、線維、毛糸、生地、又は、完成品の衣服を含む繊維製品の色を変化させるための方法のような、繊維処理方法において使用される。一般に、この方法は、例えば、色の変化、着色の変化、脱色、漂白、退色、及び／又は、再沈着／裏面染色の低減から選択される少なくとも１つ（すなわち、１つ又はそれ以上）の測定可能な効果をもたらすのに充分な時間及び条件下において、繊維をラッカーゼ及び伝達物質に接触させるステップを含む。いくつかの実施形態において、この方法は、染色されたデニム製品に「ヴィンテージ外観」を与えるために使用される。藍染めされたデニムの場合において、ヴィンテージ外観は、新たに染めたデニムより弱い青色／紫色の色調、及び、新たに染めたデニムより抑制された灰色の外観を有する。硫黄染めされたデニムの場合において、ヴィンテージ外観は、次亜塩素酸塩処理によって生じ得る茶色の色合いを伴わずに、色が退色している。従って、ラッカーゼを用いて得られる色変性の態様を「漂白」作用として特徴付けることができるが、この言葉は、ラッカーゼの使用によって可能な色変性を完全に表すものではない。 In some embodiments, for example, the systems and methods are used in fiber processing methods, such as, for example, methods for changing the color of textiles, including fibers, yarns, fabrics, or finished garments. Is done. Generally, the method includes at least one (ie, one or more) selected from, for example, color change, color change, decolorization, bleaching, fading, and / or reduction of redeposition / backside dyeing. Contacting the fiber with the laccase and the transmitter for a time and under conditions sufficient to produce a measurable effect. In some embodiments, this method is used to give a “vintage look” to a dyed denim product. In the case of indigo-dyed denim, the vintage appearance has a weaker blue / purple hue than freshly dyed denim and a gray appearance that is less constrained than freshly dyed denim. In the case of sulfur dyed denim, the vintage appearance is faded in color without the brown shade that can be caused by hypochlorite treatment. Thus, although the color modification embodiment obtained with laccase can be characterized as a “bleaching” action, this term does not fully represent the color modification possible with the use of laccase.

色変性のために提供される繊維は、セルロース繊維であってもよいし、又は、セルロース繊維と合成繊維との混合物であってもよい。いくつかの実施形態において、繊維は、藍及び／又は硫黄をベースとした染料で染色されたデニムである。特定の実施形態において、繊維は、藍で染色され、また、ラッカーゼ酵素及び伝達物質は、藍をイサチンに酸化させるために使用される。デニムを、ラッカーゼ酵素による色変性の前に、選択的に糊抜き及び／又はストーンウォッシュすることができる。 The fibers provided for color modification may be cellulose fibers or a mixture of cellulose fibers and synthetic fibers. In some embodiments, the fibers are denim dyed with indigo and / or sulfur based dyes. In certain embodiments, the fibers are dyed with indigo and the laccase enzyme and transmitter are used to oxidize indigo to isatin. Denim can be selectively desizing and / or stonewashed prior to color modification by the laccase enzyme.

一般に、繊維処理方法において同じ程度の摩耗を与えると仮定すると、デニムの強度は、より低い温度と比較して、より高温度においてさらに低下する。本発明の方法は、従来の方法と比較してより低い温度において実施可能であるので、従来の方法と比較して、処理中の繊維に対するダメージを軽減するという長所を有する。さらに、ラッカーゼ酵素は、一般に、処理中にセルロース織物繊維との反応によってその強度を低下させることがない。従って、いくつかの実施形態において、本発明の方法は、従来の方法と比較してデニムの物理的強度に影響せず、また、従来の方法と比較して物理的強度の低下が小さい。デニムが伸張デニム（例えばエラステーン、スパンデックス）で構成されている場合、本発明の方法は、従来の方法と比較して生地の伸張性能に影響せず、また、伸張性能の低下を小さくする。 In general, assuming the same degree of wear in the fiber treatment method, the strength of the denim is further reduced at higher temperatures compared to lower temperatures. The method of the present invention has the advantage of reducing damage to the fiber during processing compared to the conventional method because it can be performed at a lower temperature compared to the conventional method. Furthermore, laccase enzymes generally do not reduce their strength by reaction with cellulosic fabric fibers during processing. Accordingly, in some embodiments, the method of the present invention does not affect the physical strength of the denim compared to the conventional method, and the decrease in physical strength is small compared to the conventional method. When the denim is composed of stretched denim (eg, elastane, spandex), the method of the present invention does not affect the stretch performance of the fabric as compared to the conventional method, and reduces the decrease in stretch performance.

いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、少なくとも１つの他の酵素と組み合わされて繊維処理方法において使用される。そのような処理を同時に行う場合は、本明細書に記載されているような低温において酵素処理を実行することができる。その処理が連続的である場合には、本明細書に記載されているような低温においてラッカーゼを使用することができ、また、選択的に低温において他の酵素も使用することができる。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、セルラーゼ酵素と組み合わされて同時に又は連続して使用される。一実施形態においては、繊維を、ラッカーゼ及びセルラーゼと同時に接触させる。他の一実施形態においては、繊維を、ラッカーゼ及びセルラーゼと連続的に接触させる。一実施形態において、繊維を、まず、「ストーンウォッシュ」を達成するためにセルラーゼに接触させ、次に、色変性に影響を与えるためにラッカーゼに接触させる。他の一実施形態においては、繊維を、まずラッカーゼに、その後にセルラーゼに接触させる。セルラーゼ処理とラッカーゼ処理とが連続する場合には、２つの処理ステップを同じ槽内において、かつ、２つの処理の間に槽を排水することなく実行することができる。そのような方法を「単一槽」方法と呼ぶ。 In some embodiments, laccase is used in fiber processing methods in combination with at least one other enzyme. When such treatments are performed simultaneously, the enzyme treatment can be performed at a low temperature as described herein. If the treatment is continuous, laccase can be used at low temperatures as described herein, and optionally other enzymes can be used at low temperatures. In some embodiments, the laccase is used simultaneously or sequentially in combination with the cellulase enzyme. In one embodiment, the fibers are contacted simultaneously with laccase and cellulase. In another embodiment, the fiber is continuously contacted with laccase and cellulase. In one embodiment, the fiber is first contacted with cellulase to achieve a “stone wash” and then contacted with a laccase to affect color modification. In another embodiment, the fiber is first contacted with laccase and then with cellulase. When cellulase treatment and laccase treatment are continuous, the two treatment steps can be performed in the same vessel and without draining the vessel between the two treatments. Such a method is referred to as a “single tank” method.

適切なセルラーゼは、例えば、フミコラ(Humicola)、サーモミセス(Thermomyces)、バチルス(Bacillus)、トリコデルマ(Trichoderma)、フザリウム(Fusarium)、ミセリオフトラ(Myceliophthora)、ファネロカエテ(Phanerochaete)、イルペックス(Irpex)、スキタリジウム(Scytalidium)、シゾフィラム(Schizophyllum)、ペニシリウム(Penicillium)、アスペルギルス(Aspergillus)、又は、ジオトリクム(Geotricum)の種のような、セルロース分解酵素を生産できることが知られた微生物に由来するものであってもよい。セルロース分解酵素の生産に有能な既知の種は、フミコラインソレンズ(Humicola insolens)、フザリウムオキシスポルム(Fusarium oxysporum)、又は、トリコデルマリーゼイ(Trichoderma reesei)を含む。適切なセルラーゼの非限定的な例は、米国特許第４，４３５，３０７号；欧州特許出願第０４９５２５７号；ＰＣＴ特許出願番号ＷＯ９１／１７２４４；及び、欧州特許出願番号ＥＰ−Ａ２−２７１００４に開示されており、これらのすべてはここで言及することによって組み込まれている。 Suitable cellulases include, for example, Humicola, Thermomyces, Bacillus, Trichoderma, Fusarium, Myceliophthora, Phanerochaete, Phanerochaete, Irpex, Irpex, It may be derived from microorganisms known to be able to produce cellulolytic enzymes, such as Scytalidium, Schizophyllum, Penicillium, Aspergillus, or Geotricum species . Known species capable of producing cellulolytic enzymes include Humicola insolens, Fusarium oxysporum, or Trichoderma reesei. Non-limiting examples of suitable cellulases are disclosed in US Pat. No. 4,435,307; European Patent Application No. 0495257; PCT Patent Application No. WO 91/17244; and European Patent Application No. EP-A2-271004. All of which are incorporated herein by reference.

いくつかの実施形態において、セルラーゼを使用した酵素的な「ストーンウォッシュ」、アリルエステラーゼを使用した漂白、及び、ラッカーゼを使用した色修飾は、包括的な酵素繊維処理系を提供するために、組み合わされてもよい。そのような系は、繊維処理装置によって、従来の繊維処理化学物質を使用する必要性を伴わずに、様々な仕上げ加工を有する繊維を生産することを可能にする。 In some embodiments, enzymatic “stone wash” using cellulase, bleaching using allyl esterase, and color modification using laccase are combined to provide a comprehensive enzyme fiber processing system. May be. Such a system allows the fiber processing equipment to produce fibers with various finishing processes without the need to use conventional fiber processing chemicals.

ラッカーゼは、処理の態様、処理、仕上げ、研磨、又は、線維の生産などを一般に含む繊維製造の他の態様において使用することもできる。染色されたデニムの色を変性することに加えて、染色された廃棄物（藍染めされた廃棄物を含む）の脱色において、生地染色において、汚れを繊維漂白において、線維変性において；改良された線維又は生地の特性などの実現において、ラッカーゼを使用することもできる。 Laccases can also be used in other aspects of fiber manufacturing, which generally include processing aspects, processing, finishing, polishing, or fiber production. In addition to modifying the color of the dyed denim, in the decolorization of dyed waste (including indigo dyed waste), in fabric dyeing, soil in fiber bleaching, in fiber denaturation; improved Laccases can also be used in the realization of fiber or fabric properties and the like.

さらなる実施形態においては、本発明の系及び組成物を、羊毛の色を変化させる方法において使用することもできる。例えば、欧州特許番号ＥＰ０５０４００５は、羊毛を染色するためにラッカーゼを使用することができることを開示する。ラッカーゼは、皮革工業においても使用することができる。例えば、ラッカーゼは、以下に限定されないが、皮の脱毛、石灰処理、酵解、及び／又は、なめし革法を含む動物皮の処理において使用することができる。 In a further embodiment, the systems and compositions of the present invention can also be used in methods of changing the color of wool. For example, European Patent No. EP0504005 discloses that laccase can be used to stain wool. Laccase can also be used in the leather industry. For example, laccase can be used in animal skin treatment including, but not limited to, skin hair removal, lime treatment, fermentation, and / or leather.

本発明の系及び組成物は、パルプ又は紙製作品の色を変性する方法において使用することもできる。そのような方法は、色変性を必要とするパルプ又は紙の製品を、本明細書に記載されているようなラッカーゼに、色変性が生じるのに充分な時間及び条件下において接触させるステップを含む。特定の実施形態において、色変性が漂白である。 The systems and compositions of the present invention can also be used in methods of modifying the color of pulp or paper products. Such methods include contacting a pulp or paper product in need of color modification with a laccase as described herein for a time and under conditions sufficient for color modification to occur. . In certain embodiments, the color modification is bleaching.

本発明の系及び組成物は、毛髪の色を変性するための方法において使用することもできる。ラッカーゼは、毛髪染色剤に有用であると報告されている（例えば、ＷＯ９５／３３８３６、ＷＯ９５／３３８３７参照）。そのような方法は、変性しようとする色を有する毛髪を、毛髪の色を変化させるのに適した時間及び条件下において、ラッカーゼに接触させるステップを含む。 The systems and compositions of the present invention can also be used in methods for modifying the color of hair. Laccase has been reported to be useful for hair dyes (see, for example, WO 95/33836, WO 95/33837). Such a method comprises contacting the hair having the color to be modified with laccase for a time and under conditions suitable for changing the color of the hair.

本発明の系及び組成物を廃水処理の分野において使用することもできる。例えば、ラッカーゼは、有色化合物の脱色において、フェノール成分の解毒において、抗微生物活性のために（例えば、水リサイクルにおいて）、バイオレメディエーションなどにおいて使用可能である。 The systems and compositions of the present invention can also be used in the field of wastewater treatment. For example, laccase can be used in the decolorization of colored compounds, in detoxification of phenolic components, for antimicrobial activity (eg in water recycling), in bioremediation and the like.

本発明の系及び組成物は、高分子量の凝集体の解重合、廃紙の脱インキ、芳香族化合物の重合、ラジカルによって媒介される重合及び架橋反応（例えば、ペイント、コーティング、生体材料）、染料の活性化、並びに、有機化合物の連結においても使用可能である。 The systems and compositions of the present invention include depolymerization of high molecular weight aggregates, deinking of waste paper, polymerization of aromatic compounds, radical mediated polymerization and crosslinking reactions (eg, paints, coatings, biomaterials), It can also be used in dye activation and organic compound linking.

本発明の系及び組成物は、洗浄組成物若しくはその成分として、又は、洗浄方法における使用のための洗剤としても使用可能である。例えば、ラッカーゼは、衣類又は生地のような洗濯物の洗浄、処理又は手入れにおいて、家庭用の硬表面の洗浄において；食器洗機用途を含む皿の手入れにおいて；並びに、石鹸の固体及び液体、並びに／又は、合成界面活性剤の棒及び液体として使用可能である。本明細書に示されている酵素は、例えば、汚れの除去／脱色において、及び／又は、匂いの除去、及び／又は、浄化などに有用であり得る。ラッカーゼ伝達物質は、ラッカーゼ酵素と別に又はラッカーゼ酵素と共に、浄化剤及び抗生剤（例えば、木材保護、洗剤）として使用することができる。 The systems and compositions of the present invention can also be used as cleaning compositions or components thereof, or as detergents for use in cleaning methods. For example, laccases can be used in the washing, processing or care of laundry, such as clothing or fabrics, in the cleaning of domestic hard surfaces; in the care of dishes including dishwasher applications; and the soap solids and liquids; It can also be used as a stick and liquid for synthetic surfactants. The enzymes shown herein may be useful, for example, in soil removal / decolorization and / or odor removal and / or purification. Laccase transmitters can be used as cleansing agents and antibiotics (eg, wood protection, detergents) separately from or together with the laccase enzyme.

ラッカーゼは、パーソナルケア分野の他の態様において使用することができる。例えば、ラッカーゼは、香水のような人間のための身体用製品、並びに、人間のためのスキンケア、毛髪ケア、口腔ケア、身体の洗浄及び防臭及び／又は制汗剤のための製品の調製において使用することができる。ラッカーゼは、例えば、毛髪の染色及び／又は脱色、爪の染色及び／又は漂白において；皮膚の染色及び／又は漂白；表面改質（例えばカップリング試薬として）；抗生剤として；臭気除去において；歯の白色化など；に有用であり得る。ラッカーゼは、コンタクトレンズ洗浄の分野において使用可能である。ラッカーゼは、例えば、コンタクトレンズの洗浄、保管、殺菌及び／又は保存において使用可能である。 Laccase can be used in other embodiments of the personal care field. For example, laccase is used in the preparation of human body products such as perfumes and products for human skin care, hair care, oral care, body cleaning and deodorization and / or antiperspirants. can do. Laccases are for example in hair dyeing and / or decolorization, nail dyeing and / or bleaching; skin dyeing and / or bleaching; surface modification (eg as a coupling reagent); as an antibiotic; in odor removal; It may be useful for whitening, etc. Laccase can be used in the field of contact lens cleaning. Laccases can be used, for example, in the cleaning, storage, sterilization and / or preservation of contact lenses.

ラッカーゼは、バイオ材料の分野において使用可能である。例えば、ラッカーゼは、様々な有機反応のための生体触媒として；及び／又は、生体高分子に関連して；パッケージングに関連して；接着剤に関連して；表面改質（活性化及びカップリング剤）において；第一級アルコールの生産において；バイオセンサー及び／又は有機合成に関連して；使用することができる。ラッカーゼは、酸素を電子受容体として使用して、種々の化学構造を有する多様な有色化合物を酸化することができる。 Laccase can be used in the field of biomaterials. For example, laccase as a biocatalyst for various organic reactions; and / or in connection with biopolymers; in connection with packaging; in connection with adhesives; surface modification (activation and cupping) In the production of primary alcohols; in connection with biosensors and / or organic synthesis; Laccase can oxidize a variety of colored compounds with various chemical structures using oxygen as an electron acceptor.

本発明の系及び組成物は、リグノセルロース含有材料からのリグニンの除去（例えば、パルプの脱リグニン）、リグノセルロース含有材料の漂白（すなわち、再生紙の酵素による脱インキ）、及び／又は、紙若しくはセルロースの製造から発生する廃水の処理に使用することもできる。このようなプロセスは、フェノール芳香族酸化還元化合物及び／又は非フェノール芳香族酸化還元化合物に加えて、非芳香族酸化還元剤を添加又は計量供給することに組み合わせて、ラッカーゼ酵素を使用することができ、リグニンのフェノール単位及び非フェノール単位は、これらのフェノール芳香族化合物及び／又は非フェノール芳香族化合物の作用によって直接的に酸化され、又は、リグニンは、これらの化合物の酸化作用によって生産された他のフェノール類及び／又は非フェノール類によって酸化される。 The systems and compositions of the present invention provide for removal of lignin from lignocellulose-containing materials (eg, pulp delignification), bleaching of lignocellulose-containing materials (ie, enzymatic deinking of recycled paper), and / or paper. Alternatively, it can be used for the treatment of wastewater generated from the production of cellulose. Such a process may use a laccase enzyme in combination with the addition or metering of a non-aromatic redox agent in addition to a phenol aromatic redox compound and / or a non-phenol aromatic redox compound. The phenolic and non-phenolic units of lignin were directly oxidized by the action of these phenol aromatics and / or non-phenolic aromatic compounds, or lignin was produced by the oxidizing action of these compounds Oxidized by other phenols and / or non-phenols.

ラッカーゼは、パルプ及び紙に関係する他の態様において使用することができる。例えば、ラッカーゼは、木材、竹及び穀物の稲わらのような原料からの紙パルプ及び毛羽パルプの製造；印刷及び筆記のための紙及びボードの製造、パッキング、衛生用途及び他の技術的用途；紙及びボードを作成する目的のためのアセテート繊維のリサイクル；パルプ若しくは紙の工場、並びに、紙、パルプ若しくは毛羽の製造に特に専念する他の設備によって生じて処理される廃棄物の処理において使用することができる。ラッカーゼは、例えば、木材処理において；パルプ漂白において；木材線維変性において；ＭＤＦ製作のためのバイオ接着剤（リグニン活性剤）において；紙特性を改良するために；インク除去において；紙の染色において；接着剤（例えば、削片板又は繊維板のためのリグニンをベースとした接着剤）などにおいて；有用であり得る。 Laccase can be used in other embodiments involving pulp and paper. For example, laccase is used for the production of paper and fluff pulp from raw materials such as wood, bamboo and grain rice straw; for the production of paper and board for printing and writing, packing, hygiene applications and other technical applications; Recycling of acetate fibers for the purpose of making paper and board; used in the treatment of waste generated and processed by pulp or paper factories and other equipment specially dedicated to the production of paper, pulp or fluff be able to. Laccases are, for example, in wood processing; in pulp bleaching; in wood fiber denaturation; in bioadhesives (lignin activators) for MDF production; to improve paper properties; in ink removal; in paper dyeing; In adhesives (eg, lignin-based adhesives for slab or fiberboard) and the like;

ラッカーゼは、飼料の分野において使用することができる。例えば、ラッカーゼは、ニワトリ、ウシ、ブタ、魚及びペットのようなあらゆる種類の動物用飼料の栄養的価値を高めるために飼料添加物として単独で又は飼料添加物の一部として；及び／又は、飼料原料として適切な材料／製品を生産するために植物性材料及び食品工業副産物を加工するための加工助剤として、使用することができる。 Laccase can be used in the field of feed. For example, laccase can be used alone or as part of a feed additive to enhance the nutritional value of all types of animal feed such as chickens, cows, pigs, fish and pets; and / or It can be used as a processing aid to process plant materials and food industry by-products to produce materials / products suitable as feed ingredients.

ラッカーゼは、デンプン処理の分野において使用することができる。例えば、ラッカーゼは、デンプン及び／又は穀類を含む基質を、グルコース（デキストロース）シロップ、フルクトースシロップ若しくは他のシロップ、アルコール（飲料又は燃料）又は糖に加工する際に使用することができる。そのようなデンプン処理は、基質の液化、糖化、異性化及び脱分岐のような処理ステップを含んでいてもよい。 Laccase can be used in the field of starch processing. For example, laccase can be used in processing a substrate comprising starch and / or cereal into glucose (dextrose) syrup, fructose syrup or other syrup, alcohol (drink or fuel) or sugar. Such starch processing may include processing steps such as substrate liquefaction, saccharification, isomerization and debranching.

ラッカーゼは、食品の分野において使用することができる。ラッカーゼは、例えば、その調製、処理において、又は、人間消費のための、黄色脂肪、お茶をベースとした飲料、調理用製品、パン及び冷凍食品のような食品中の有効成分として使用することができる。ラッカーゼは、例えば、パン改良剤として、食品保存において、脱酸素剤などとして使用することができる。ラッカーゼは、種々の食品（例えば、肉）又は飼料の微生物的負荷の軽減又は除去のために使用することができる。 Laccase can be used in the field of food. Laccase can be used, for example, in its preparation, processing or as an active ingredient in foods such as yellow fat, tea-based beverages, cooking products, bread and frozen foods for human consumption. it can. Laccase can be used, for example, as a bread improving agent, as a deoxidizing agent, etc. in food preservation. Laccase can be used to reduce or eliminate the microbial burden of various foods (eg, meat) or feed.

本明細書に記載されているラッカーゼのための方法又は使用のあらゆるものは、低温、例えば、約４０℃未満の温度、例えば、約４０℃未満、約３７℃未満、約３５℃未満、約３２℃未満、約３０℃未満、約２７℃未満、約２５℃未満、約２２℃未満において実施することができる。典型的な温度範囲は、約２０℃以上約４０℃未満である。典型的な温度は、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃又は３５℃である。いくつかの実施形態において、温度は、室温又は水道水の外界温度、例えば、約２０℃乃至約２３℃である。 Any of the methods or uses for laccase described herein can be performed at low temperatures, eg, temperatures below about 40 ° C., eg, below about 40 ° C., below about 37 ° C., below about 35 ° C., about 32 ° C. It can be carried out at less than 0 ° C, less than about 30 ° C, less than about 27 ° C, less than about 25 ° C, less than about 22 ° C. A typical temperature range is about 20 ° C. or more and less than about 40 ° C. Typical temperatures are 20 ° C, 21 ° C, 22 ° C, 23 ° C, 24 ° C, 25 ° C, 26 ° C, 27 ° C, 28 ° C, 29 ° C, 30 ° C, 31 ° C, 32 ° C, 33 ° C, 34 ° C. Or 35 degreeC. In some embodiments, the temperature is room temperature or ambient temperature of tap water, for example, from about 20 ° C to about 23 ° C.

本明細書に記載されているラッカーゼのための方法又は使用のあらゆるものは、本明細書に記載されているラッカーゼ酵素のいずれか、例えば、セレナユニカラー(Cerrena unicolor)に由来するラッカーゼを使用して実施することができる。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、約０．００５ｍｇ／リットル乃至約５０００ｍｇ／リットル、約０．０５ｍｇ／リットル乃至約５００ｍｇ／リットル、約０．１ｍｇ／リットル乃至約１００ｍｇ／リットル、又は、約０．５ｍｇ／リットル乃至約１０ｍｇ／リットルの濃度で使用される。いくつかのデニム処理実施形態において、ラッカーゼは、デニム１ｋｇ当たり約０．００５ｍｇ乃至約５０００ｍｇ、デニム１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ乃至約５００ｍｇ、デニム１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ乃至約１００ｍｇ、又は、デニム１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ乃至約１０ｍｇの濃度で使用される。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、約５乃至約７、約５．５乃至約６．５、約５乃至約６、又は、約６のｐＨにおいて使用される。典型的なｐＨは、おおよそ、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９及び７．０である。 Any of the methods or uses for laccase described herein use any of the laccase enzymes described herein, e.g., laccase from Cerrena unicolor. Can be implemented. In some embodiments, the laccase is from about 0.005 mg / liter to about 5000 mg / liter, from about 0.05 mg / liter to about 500 mg / liter, from about 0.1 mg / liter to about 100 mg / liter, or from about 0 Used at a concentration of 5 mg / liter to about 10 mg / liter. In some denim processing embodiments, the laccase is about 0.005 mg to about 5000 mg per kg denim, about 0.05 mg to about 500 mg per kg denim, about 0.1 mg to about 100 mg per kg denim, or per kg denim Used at a concentration of about 0.5 mg to about 10 mg. In some embodiments, the laccase is used at a pH of about 5 to about 7, about 5.5 to about 6.5, about 5 to about 6, or about 6. Typical pH is approximately 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6. 0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, and 7.0.

使用準備済の組成物及びキット
上述したように、本発明の組成物は、１つ又はそれ以上のラッカーゼを含み、さらに、選択的に１つ又はそれ以上の伝達物質を含む。いくつかの実施形態において、この組成物は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、又は、これらの変異体若しくは断片から選択されるアミノ酸配列を含む、該アミノ酸配列からなる、又は、該アミノ酸配列から本質的になるポリペプチドを含む。特定の実施形態において、この組成物は、配列番号１９及び２０又はこれらの変異体若しくは断片から選択されるアミノ酸配列を含む、該アミノ酸配列からなる、又は、該アミノ酸配列から本質的になるポリペプチドを含む。好ましくは、そのようなポリペプチドが酵素のラッカーゼ活性を有する。その活性は、本明細書に記載されている分析及び手順を使用して測定することができる。 Ready-to-use compositions and kits As noted above, the compositions of the present invention comprise one or more laccases and optionally further comprise one or more transmitter substances. In some embodiments, the composition comprises SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, comprising a polypeptide comprising, consisting of, or consisting essentially of an amino acid sequence selected from SEQ ID NO: 20, or a variant or fragment thereof. In certain embodiments, the composition comprises a polypeptide comprising, consisting of, or consisting essentially of an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 19 and 20, or variants or fragments thereof. including. Preferably, such a polypeptide has an enzymatic laccase activity. Its activity can be measured using the assays and procedures described herein.

ラッカーゼ酵素及び伝達物質を含む、ラッカーゼ酵素及び伝達物質からなる、又は、ラッカーゼ酵素及び伝達物質から本質的になる「使用準備済」（ＲＴＵ）組成物の形態でそのような組成物を提供することもできる。いくつかの実施形態において、伝達物質は、アセトシリンゴン、シリングアルデヒド、シリングアミド、メチルシリングアミド、２−ヒドロキシエチルシリングアミド、シリンガ酸メチル、シリンゴニトリル、ジメチルシリンガアミド、及び、シリンガ酸から選択される。一実施形態において、伝達物質は、シリンゴニトリル（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾニトリル）である。このＲＴＵ組成物は、この組成物が溶液中に存在する場合には、ｐＨ緩衝を提供するための１つ又はそれ以上の化合物をさらに含んでいてもよい。例えば、いくつかの実施形態において、この組成物は、緩衝系としてモノナトリウムリン酸塩及びアジピン酸を含む。ＲＴＵ組成物は、保存及び輸送の容易さのために、固体の顆粒形態であってもよい。その後、この組成物は、例えば、説明されているような使用のための水溶液を提供するために水で希釈される。ＲＴＵ組成物は、分散剤、界面活性剤、遮断薬、ポリマー、及び、保存剤のような任意の数のさらなる試薬を含んでいてもよい。 Providing such a composition in the form of a “ready to use” (RTU) composition comprising, consisting essentially of, or consisting essentially of a laccase enzyme and a transmitter, comprising a laccase enzyme and a transmitter You can also. In some embodiments, the transmitter is from acetosyringone, syringaldehyde, syringamide, methyl syringamide, 2-hydroxyethyl syringamide, methyl syringate, syringonitrile, dimethyl syringamide, and syringic acid. Selected. In one embodiment, the transmitter is syringonitrile (4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzonitrile). The RTU composition may further comprise one or more compounds for providing pH buffering when the composition is in solution. For example, in some embodiments, the composition comprises monosodium phosphate and adipic acid as a buffer system. The RTU composition may be in solid granular form for ease of storage and transport. The composition is then diluted with water, for example, to provide an aqueous solution for use as described. The RTU composition may include any number of additional reagents such as dispersants, surfactants, blocking agents, polymers, and preservatives.

以下の実施例は、系、組成物及び方法を説明するために提供されるものであり、どのようにも限定的なものとして解釈してはならない。他の態様及び実施形態は、明細書を参照した当業者に明らかになるであろう。 The following examples are provided to illustrate the systems, compositions and methods and should not be construed as limiting in any way. Other aspects and embodiments will be apparent to those skilled in the art upon reference to the specification.

実施例
実施例において以下の酵素命名法を使用する。

Figure 0005422670
実施例１−ストーンウォッシュされたデニムのラッカーゼによる色変性に対する温度の影響 EXAMPLES The following enzyme nomenclature is used in the examples.
Figure 0005422670
Example 1-Effect of Temperature on Color Modification by Stonewashed Denim Laccase

酵素
この試験においては、セレナユニカラーに由来する顆粒状のラッカーゼＤ酵素（３８，０００Ｕ／ｇ）を使用した。１ラッカーゼ単位は、ラッカーゼ酵素がＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルフォナート））をその対応する安定なカチオンラジカル、ＡＢＴＳ＋に酸化する能力に基づいた分析の条件下において、１ｎｍｏｌのＡＢＴＳ基質を酸化するラッカーゼ活性の量として定義される。ラジカルの蓄積は、ＡＢＴＳを濃緑色にし、また、４２０ｎｍにおける吸収度を増大させる。色生成は、ラッカーゼ活性に比例しており、ラッカーゼ基準に対してモニターする。

伝達物質 Enzymes In this test, granular laccase D enzyme (38,000 U / g) derived from Serena Unicolor was used. One laccase unit is subject to analytical conditions based on the ability of the laccase enzyme to oxidize ABTS (2,2′-azinobis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonate)) to its corresponding stable cation radical, ABTS +. Defined as the amount of laccase activity that oxidizes 1 nmol of ABTS substrate. The accumulation of radicals makes ABTS dark green and increases the absorbance at 420 nm. Color production is proportional to laccase activity and is monitored against laccase criteria.

Transmitter

Punjab Chemicals & Crop Protection Limited(ムンバイ、インド)から４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾニトリル（シリンゴニトリル、ＳＮ）を購入した。

手順 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzonitrile (Syringonitrile, SN) was purchased from Punjab Chemicals & Crop Protection Limited (Mumbai, India).

procedure

約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚を、Ｕｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内で以下の条件において糊抜きした。
・０．５ｇ／ｌ（１５ｇ）のOPTISIZE（登録商標）１６０アミラーゼ（１５ｇ）(Genencor)及び０．５ｇ／ｌの非イオンの界面活性剤［例えば、Rucogen BFA(Rudolf Chemie)又はUltravon RW(Huntsman)］を用いた１０：１の液比における５０℃での１５分間の糊抜き
・３０：１の液比における５分間にわたる２回の冷水すすぎ Twelve denim legs weighing approximately 3 kg (total) were de-glueed in a Unimac UF50 washer under the following conditions:
0.5 g / l (15 g) OPTISIZE® 160 amylase (15 g) (Genencor) and 0.5 g / l non-ionic surfactant [eg Rucogen BFA (Rudolf Chemie) or Ultravon RW (Huntsman )] For 15 minutes at 50 ° C. at a liquid ratio of 10: 1 and two cold water rinses for 5 minutes at a liquid ratio of 30: 1.

糊抜きの後に、このデニムを、以下の条件下においてＵｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内でストーンウォッシュした。
・１０：１の液比における５分間の冷水すすぎ
・１ｋｇの軽石、ｐＨ４．５（１ｇ／ｌのトリクエン酸ナトリウム二水和物及び１ｇ／ｌのクエン酸一水和物）、及び、１．２ｇ／ｌのINDIAGE（登録商標）２ＸＬセルラーゼ(Genencor)を用いた１０：１の液比における５５℃での６０分間のストーンウォッシュ
・３０：１の液比における５分間にわたる２回の冷水すすぎ After desizing, the denim was stonewashed in a Unimac UF50 washer under the following conditions.
5 minutes cold water rinse in a 10: 1 liquid ratio 1 kg pumice, pH 4.5 (1 g / l sodium tricitrate dihydrate and 1 g / l citric acid monohydrate), and Stone wash for 60 minutes at 55 ° C. in a 10: 1 liquid ratio with 2 g / l INDIAGE® 2XL cellulase (Genencor) • 2 cold water rinses for 5 minutes in a 30: 1 liquid ratio

ストーンウォッシュ後に、以下のプロセスに従って、Ｕｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内においてラッカーゼ処理を実施した。
（ｉ）ｐＨ６のＣ．ユニカラーのラッカーゼＤ及びシリンゴニトリル（０．７ｇ／ｌのモノナトリウムリン酸塩及び０．１７ｇ／ｌのアジピン酸）、並びに、４０℃、３０℃又は２３℃の温度
（ｉｉ）ｐＨ４．８のNOVOPRIME(登録商標)Base268及びNOVOPRIME(登録商標)F258（０．２９ｇ／ｌのモノナトリウムリン酸塩及び０．５６ｇ／ｌのアジピン酸）、並びに、４０℃又は３０℃の温度
・３０：１の液比における５分間の２回の冷水すすぎ

デニムの脚の評価 After stone wash, laccase treatment was performed in a Unimac UF50 washer according to the following process.
(I) pH 6 C.I. Unicolor laccase D and syringonitrile (0.7 g / l monosodium phosphate and 0.17 g / l adipic acid) and a temperature of 40 ° C., 30 ° C. or 23 ° C. (ii) pH 4.8 NOVOPRIME® Base268 and NOVOPRIME® F258 (0.29 g / l monosodium phosphate and 0.56 g / l adipic acid) and a temperature of 40 ° C. or 30 ° C., 30: 1 2 cold water rinses for 5 minutes

Denim leg evaluation

Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験色空間において、Minolta Chromameter CR 310を用いたラッカーゼ処理の後にデニムの脚の「漂白」として報告された色変性の量を評価した。ＣＩＥＬＵＶ色空間としても知られているＣＩＥ色空間系は、１９７６年に国際照明委員会（ＣＩＥ）に採用されたものであり、以下のように算出される値Ｌ＊、ｕ＊及びｖ＊を含む。

Figure 0005422670
ここで、
Ｙ：三刺激値Ｙ（三刺激値Ｙ１０を使用することもできる）
ｕ’、ｖ’：ＣＩＥ１９７６ＵＣＳダイアグラムから得た色度座標
Ｙ０、ｕ’０、ｖ’０：完全反射拡散器の三刺激値Ｙ（又はＹ１０）及び色度座標ｕ’、ｖ’ The amount of color modification reported as “bleaching” of the denim leg after laccase treatment with a Minolta Chromameter CR 310 in the CIE test color space with a D65 light source was evaluated. The CIE color space system, also known as the CIELV color space, was adopted by the International Commission on Illumination (CIE) in 1976 and has the values L * , u * and v * calculated as follows: Including.
Figure 0005422670
here,
Y: tristimulus values Y (it is also possible to use the tristimulus values Y 10)
u ′, v ′: Chromaticity coordinates Y 0 , u ′ 0 , v ′ 0 obtained from the CIE 1976 UCS diagram: Tristimulus value Y (or Y 10 ) and chromaticity coordinates u ′, v ′ of the perfect reflection diffuser

それぞれのデニムの脚について８回の測定値を得て、１２本の脚（合計９６個の測定値）の結果を平均した。その結果を表１及び表２並びに図１に示す。
表１

Figure 0005422670
表２
Figure 0005422670
Eight measurements were obtained for each denim leg and the results for 12 legs (96 measurements total) were averaged. The results are shown in Tables 1 and 2 and FIG.
Table 1
Figure 0005422670
Table 2
Figure 0005422670

この結果は、ストーンウォッシュされたデニムの色変化に影響を与えることにおけるＣ．ユニカラーのラッカーゼ及びシリンゴニトリルの有効性を示している。

実施例２−ラッカーゼの効果：ストーンウォッシュされたデニムの色変性に対する伝達物質比率

手順 This result shows that C.I. in affecting the color change of stonewashed denim. It demonstrates the effectiveness of unicolor laccase and syringonitrile.

Example 2-Effect of laccase: transmitter ratio to color modification of stonewashed denim

procedure

実施例１に記載されているように、約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚を糊抜き及びストーンウォッシュした。ストーンウォッシュの後に、以下のプロセスに従ってＵｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内でラッカーゼ処理を実施した。
・Ｃ．ユニカラーのラッカーゼＤ及びシリンゴニトリル、１０：１の液比において３０分間、４０℃においてｐＨ６（０．７ｇ／ｌのモノナトリウムリン酸塩及び０．１７ｇ／ｌのアジピン酸）
・３０：１の液比において５分間にわたる２回の冷水すすぎ

デニムの脚の評価 As described in Example 1, twelve denim legs weighing about 3 kg (total) were desizing and stonewashed. After stone wash, laccase treatment was performed in a Unimac UF50 washer according to the following process.
・ C. Unicolor laccase D and syringonitrile, pH 6 (0.7 g / l monosodium phosphate and 0.17 g / l adipic acid) at 40 ° C. for 30 minutes in a 10: 1 liquid ratio
Two cold water rinses for 5 minutes at a 30: 1 liquid ratio

Denim leg evaluation

実施例１に記載されているようにデニムの脚の色変性を評価した。その結果を表３及び図２に示す。

表３

Figure 0005422670
Denim leg color modification was evaluated as described in Example 1. The results are shown in Table 3 and FIG.

Table 3
Figure 0005422670

この結果は、伝達物質に対するラッカーゼ酵素の比率を操作することによって、色変性を変化させることができることを示している。

実施例３−ストーンウォッシュされたデニムに対する、ラッカーゼと伝達物質とを含む組成物の色変性性能に対する温度の影響 This result indicates that color modification can be altered by manipulating the ratio of laccase enzyme to transmitter.

Example 3-Effect of temperature on the color modification performance of a composition comprising laccase and a transmitter on stonewashed denim

低温におけるラッカーゼによる色変性性能を調べるために、表４に示されているように「使用準備済」（ＲＴＵ）組成物を調製した。モノナトリウムリン酸塩及びアジピン酸は、以下に記載されているような使用の用途において、約ｐＨ６の緩衝機能を提供する。
表４

Figure 0005422670

手順 To examine the color modification performance with laccase at low temperatures, “Ready to Use” (RTU) compositions were prepared as shown in Table 4. Monosodium phosphate and adipic acid provide a buffering function of about pH 6 in applications for use as described below.
Table 4
Figure 0005422670

procedure

実施例１に記載されているように、約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚を糊抜き及びストーンウォッシュした。ストーンウォッシュの後に、以下のプロセスに従って、Ｕｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内でラッカーゼ処理を実施した。
・３０分間１０：１の液比において３０℃において又は流入スチームなし（すなわち、２１℃乃至２２℃の温度）で、表５及び表６に記載されている濃度及び温度において、上記ＲＴＵラッカーゼ組成物又はDENILITE(登録商標)IIＳ(Novozymes)を用いる
・３０：１の液比において５分間の２回の冷水すすぎ

デニムの脚の評価 As described in Example 1, twelve denim legs weighing about 3 kg (total) were desizing and stonewashed. After stone wash, laccase treatment was performed in a Unimac UF50 washer according to the following process.
The RTU laccase composition at the concentrations and temperatures described in Tables 5 and 6 at 30 ° C. for 30 minutes at 30 ° C. or without inflow steam (ie, temperatures between 21 ° C. and 22 ° C.) Or use DENILITE® IIS (Novozymes) • 2 cold water rinses for 5 minutes at 30: 1 liquid ratio

Denim leg evaluation

実施例１に記載されているようにデニムの脚の色変性を評価した。この結果を表５及び表６並びに図３及び図４に示す。
表５

Figure 0005422670
表６
Figure 0005422670
Denim leg color modification was evaluated as described in Example 1. The results are shown in Tables 5 and 6 and FIGS.
Table 5
Figure 0005422670
Table 6
Figure 0005422670

これらの結果は、Ｃ．ユニカラーラッカーゼＲＴＵ組成物は、従来の市販のラッカーゼ組成物と比較して、低温においてより優れた色変性を提供することを示している。

実施例４−３０℃においてワンステップストーンウォッシュ及び色変性 These results are shown in C.I. Unicolor laccase RTU compositions have been shown to provide better color modification at low temperatures compared to conventional commercial laccase compositions.

Example 4 One Step Stone Wash and Color Modification at 30 ° C

実施例１に記載されているように約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚をＵｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内で糊抜きした。 Twelve denim legs weighing about 3 kg (total) as described in Example 1 were desizing in a Unimac UF50 washer.

糊抜きの後に、このデニムを、以下の条件下においてＵｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内でストーンウォッシュ及び漂白した。
・３０分間、３０℃で、１０：１の液比において、ｐＨ６において、（ｉ）物に対して０．４重量％のINDIAGE(登録商標)Super GXセルラーゼ(Genencor)＋実施例３（すなわち、「ストーンウォッシュ＋漂白の１ステップ」）に記載されている、物に対して３重量％のＲＴＵラッカーゼ組成物、又は、（ｉｉ）INDIAGE（登録商標）Super GXセルラーゼのみ（すなわち、「ストーンウォッシュ」のみ）
・３０：１の液比において５分間にわたる２回の冷水すすぎ。軽石を使用しなかった。これらの結果を表７及び図５に示す。
表７

Figure 0005422670
After desizing, the denim was stone washed and bleached in a Unimac UF50 washer under the following conditions:
• 0.4% by weight of INDIAGE® Super GX Cellulase (Genencor) + Example 3 (ie 3% by weight RTU laccase composition, or (ii) INDIAGE® Super GX cellulase only (ie “Stonewash”), as described in “Stonewash + one step of bleaching”) only)
Two cold water rinses for 5 minutes at a 30: 1 liquid ratio. No pumice was used. These results are shown in Table 7 and FIG.
Table 7
Figure 0005422670

これらの結果は、ラッカーゼとセルラーゼとを同時に使用して色変性を達成することができることを示している。

実施例５−３０℃における２ステップのストーンウォッシュ及び色変性 These results indicate that color modification can be achieved using laccase and cellulase simultaneously.

Example 5-Two Step Stone Wash and Color Modification at 30 ° C

実施例１に記載されているように、Ｕｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内で約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚を糊抜きした。 As described in Example 1, twelve denim legs weighing about 3 kg (total) were desizing in a Unimac UF50 washer.

糊抜きの後に、デニムは、以下の条件下において、Ｕｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内でストーンウォッシュした。
・３０分間、１０：１の液比において、３０℃で、ｐＨ５．５において、物に対して０．４重量％のINDIAGE(登録商標)Super GXセルラーゼ(Genencor) After desizing, the denim was stonewashed in a Unimac UF50 washer under the following conditions.
-0.4% by weight of INDIAGE® Super GX cellulase (Genencor) at 30 ° C., 30 ° C., pH 5.5 for 30 minutes at pH 5.5

ストーンウォッシュの後に、このデニムを、以下の条件下においてＵｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内で漂白した。
・３０分間、１０：１の液比において、３０℃で、ｐＨ６において、物に対して３重量％の、実施例３に記載されているＲＴＵラッカーゼ組成物
・３０：１の液比において５分間にわたる２回の冷水すすぎ。軽石を使用しなかった。 After the stone wash, the denim was bleached in a Unimac UF50 washer under the following conditions.
• RTU laccase composition as described in Example 3, 30% at 30 ° C., pH 6 at 30 ° C., pH 6 for 30 minutes, 5 minutes at 30: 1 solution ratio Rinse twice with cold water. No pumice was used.

これらの結果を表８及び図５に示す。ストーンウォッシュと色変性との２ステップによる結果を、実施例４に記載されているストーンウォッシュのみの結果と比較した。
表８

Figure 0005422670
These results are shown in Table 8 and FIG. The results from the two steps of stone wash and color modification were compared with the results of only stone wash described in Example 4.
Table 8
Figure 0005422670

これらの結果は、ラッカーゼ処理による色変性がストーンウォッシュの後に達成可能であることを示している。

実施例６−ストーンウォッシュを用いない３０℃におけるデニムのラッカーゼによる色変性 These results show that color modification by laccase treatment can be achieved after stone wash.

Example 6 Color Modification by Denim Laccase at 30 ° C. without Stone Wash

実施例１に記載されているように、Ｕｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内で約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚を糊抜きした。 As described in Example 1, twelve denim legs weighing about 3 kg (total) were desizing in a Unimac UF50 washer.

糊抜きの後に、そのデニムを、以下の条件下においてＵｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内で漂白した。
・３０分間、１０：１の液比において、３０℃で、ｐＨ６において、物に対して３重量％の、実施例３に記載のＲＴＵラッカーゼ組成物
・３０：１の液比において５分間にわたる２回の冷水すすぎ。軽石を使用しなかった。 After desizing, the denim was bleached in a Unimac UF50 washer under the following conditions.
• RTU laccase composition as described in Example 3 at 30 ° C., 30 ° C., pH 6, at 3% by weight with respect to the product for 30 minutes • 2 for 5 minutes at 30: 1 solution ratio Rinse with cold water. No pumice was used.

これらの結果を表９及び図５に示す。実施例４に記載されているように、色変性の結果を、ストーンウォッシュのみの結果と比較した。
表９

Figure 0005422670
These results are shown in Table 9 and FIG. As described in Example 4, the color modification results were compared to the stonewash only results.
Table 9
Figure 0005422670

これらの結果は、ストーンウォッシュを伴わないラッカーゼ処理によって生じる色変性の程度がストーンウォッシュのみより高いことを示している。

実施例７−軽石を含まない単一槽中のプロセスにおけるセルラーゼ及びラッカーゼによるストーンウォッシュ及び色変性 These results show that the degree of color modification caused by laccase treatment without stone wash is higher than that of stone wash alone.

Example 7-Stone wash and color modification with cellulase and laccase in a single tank process without pumice

この実施例は、単一槽のプロセスにおいてラッカーゼ及びセルラーゼを使用して有効なストーンウォッシュ及び色変性が得られることを示している。

酵素 This example shows that effective stone wash and color modification can be obtained using laccase and cellulase in a single bath process.

enzyme

PRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100ラッカーゼ（バッチＮｏ．７８０９１３６１６、６，２９２ＧＬａｃＵ／ｇ）。

手順 PRIMAGREEN® EcoFade LT 100 laccase (Batch No. 780931616, 6,292 GLacU / g).

procedure

出発物質は、重さ約３ｋｇの糊抜きしたデニム（バラスト＋評価用の２脚）であった。 The starting material was desizing denim (ballast + 2 legs for evaluation) weighing about 3 kg.

このデニムを、以下の条件下において、Ｒｅｎｚａｃｃｉ ＬＸ ２２洗浄機内でストーンウォッシュした。
・４０分間、５０℃、１０：１の液比、ｐＨ６．５、物に対して０．４重量％のINDIAGE(登録商標)Neutra Ｌセルラーゼ（バッチＮｏ．４０１０５３５８００１、活性５１９７ＮＰＣＮＵ／ｇ）(Genencor)。
・ストーンウォッシュした後に、１本の脚を取り出して、評価のために乾燥した。
・ストーンウォッシュの後に、槽を排出（すなわち、排水）することなく、以下の条件下において第２のデニムの脚を色変性に供した。
・４０分間、４０℃、１０：１の液比、及び、物に対して１％重量の使用準備済み（ＲＴＵ）のPRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100。
・３分間にわたる２回の冷水すすぎ。
・デニムを工業用ドライヤーで乾燥した。

デニムの脚の評価 This denim was stonewashed in a Renzacci LX 22 washer under the following conditions.
40 minutes, 50 ° C., 10: 1 liquid ratio, pH 6.5, 0.4% by weight of INDIAGE® Neutra L cellulase (batch No. 40105358001, activity 5197 NPCNU / g) (Genencor) .
-After stone wash, one leg was removed and dried for evaluation.
After the stone wash, the second denim leg was subjected to color modification under the following conditions without draining the tank (ie draining).
• PRIMAGREEN® EcoFade LT 100 ready for use (RTU) 40 minutes at 40 ° C., 10: 1 liquid ratio, and 1% weight to product.
• 2 cold water rinses for 3 minutes.
・ Denim was dried with an industrial dryer.

Denim leg evaluation

ラッカーゼ処理の後及びセルラーゼ処理の後に、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験色空間においてMinolta Chromameter CR 310を用いて、デニムの脚に対する色変性及びストーンウォッシュを評価した。各脚について６回の測定値を得て、結果を平均化した。 After laccase treatment and after cellulase treatment, color denaturation and stone wash on denim legs were evaluated using a Minolta Chromameter CR 310 in a CIE test color space equipped with a D65 light source. Six measurements were taken for each leg and the results were averaged.

これらの結果を表１０にまとめる。単一槽中におけるセルラーゼとラッカーゼとの連続的な（すなわち、２ステップの）添加によって得られた色変性の程度は、実施例４のようにセルラーゼとラッカーゼとを同時に添加することによって得られた程度より大きかった。
表１０

Figure 0005422670
These results are summarized in Table 10. The degree of color modification obtained by continuous (ie, two-step) addition of cellulase and laccase in a single tank was obtained by adding cellulase and laccase simultaneously as in Example 4. Greater than the degree.
Table 10
Figure 0005422670

これらの結果は、単一浴槽におけるセルラーゼとラッカーゼとの連続的な（すなわち、２ステップ）の添加によって得られた色変性の程度が、実施例４のようにセルラーゼとラッカーゼとを同時に添加することによって得られた程度より大きいことを示している。

実施例８−ラッカーゼ及び軽石を用いた色変性 These results show that the degree of color modification obtained by the continuous (ie, two-step) addition of cellulase and laccase in a single bath is that cellulase and laccase are added simultaneously as in Example 4. Is greater than the degree obtained.

Example 8-Color modification with laccase and pumice

この実施例は、単一槽プロセスにおいて軽石とラッカーゼ伝達物質系とを使用して、有効なストーンウォッシュ及び色変性を得ることができることを示している。

酵素 This example shows that a pumice and laccase transmitter system can be used in a single tank process to obtain effective stone wash and color modification.

enzyme

PRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100ラッカーゼ（バッチ７８０９１３６１６０番、６，２９２のＧＬａｃＵ／ｇ）。

手順 PRIMAGREEN® EcoFade LT 100 laccase (Batch 7809136160, 6,292 GLacU / g).

procedure

実施例１に記載されているように、重さ約３ｋｇ（合計）の１２本のデニムの脚を、Ｕｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内で糊抜きした。 As described in Example 1, twelve denim legs weighing about 3 kg (total) were de-sanded in a Unimac UF50 washer.

糊抜きの後に、このデニムを、以下の条件下においてＵｎｉｍａｃ ＵＦ５０洗浄機内でストーンウォッシュした。
・３０分間、３０℃、１０：１の液比、３ｋｇの軽石、３％のPRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT100(Genencor)を用いた。水中で石のみを用いてブランク／コントロールを実施した。
・３０：１の液比において５分間にわたる２回の冷水すすぎ。

デニムの脚の評価 After desizing, the denim was stonewashed in a Unimac UF50 washer under the following conditions.
-30 minutes, 30 degreeC, 10: 1 liquid ratio, 3 kg pumice, 3% PRIMAGREEN (registered trademark) EcoFade LT100 (Genencor) was used. Blank / control was performed using only stones in water.
Two cold water rinses for 5 minutes at a 30: 1 liquid ratio.

Denim leg evaluation

先のように、ラッカーゼ処理の後及びストーンウォッシュ処理の後に、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験色空間においてMinolta Chromameter CR 310を用いて、デニムの脚に対する色変性を評価した。各脚の外側で得た８回の測定値の平均を漂白レベルとして報告した。各脚の内側で得た４回の測定値の平均を裏面染色レベルとして報告した。 As before, color modification to denim legs was evaluated using a Minolta Chromameter CR 310 in a CIE test color space with a D65 light source after laccase treatment and after stone wash treatment. The average of 8 measurements taken outside each leg was reported as the bleaching level. The average of the 4 measurements taken inside each leg was reported as the back staining level.

これらの結果を表１１及び表１２にまとめる。
表１１

Figure 0005422670
表１２
Figure 0005422670
These results are summarized in Tables 11 and 12.
Table 11
Figure 0005422670
Table 12
Figure 0005422670

これらの結果は、軽石が存在していても、ラッカーゼ処理が、色変性を提供し、裏面染色の低減／除去をさらに示すことを示している。

実施例９−硫黄染色された衣服のストーンウォッシュ及び色変性 These results indicate that, even in the presence of pumice, laccase treatment provides color modification and further demonstrates the reduction / removal of backside staining.

Example 9-Stone wash and color modification of sulfur dyed clothing

試験用の衣服は、硫黄のカーキーブラウン染料で染色された１００％綿綾織物生地でできていた。以下の条件下において、２５ｋｇのベリーウォッシャー（３６ｒｐｍ）において約７ｋｇ（合計）の重さの２１着の衣服をストーンウォッシュした。
・４５分間、５５℃、１８：１の液比、ｐＨ４．５、１ｇ／ｌのINDIAGE(登録商標)２ＸＬ
・１２：１の液比で３分間の１回の冷水すすぎ。軽石を使用しなかった。
・洗浄した後に、評価のために衣服を乾燥した。
・以下の条件下において上記のようにストーンウォッシュした３着の衣服（合計約１ｋｇ）をPRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100で処理した。
・１５分間、３０分間又は４５分間、５０：１の液比、４０℃、及び、１ｇ／ｌ、２ｇ／ｌ又は３ｇ／ｌのPRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100。ブランク／コントロールは、水のみで１５分間、３０分間又は４５分間にわたって洗浄した衣服を用いて実施した。
・３分間の１回の冷水すすぎ。
・デニムを工業用ドライヤーで乾燥させた。

デニムの脚の評価 The test garment was made of a 100% cotton twill fabric dyed with sulfur kirky brown dye. Under the following conditions, 21 garments weighing approximately 7 kg (total) were stonewashed in a 25 kg belly washer (36 rpm).
45 minutes, 55 ° C., 18: 1 liquid ratio, pH 4.5, 1 g / l INDIAGE® 2XL
-One cold water rinse for 3 minutes at a 12: 1 liquid ratio. No pumice was used.
• After washing, the clothes were dried for evaluation.
-Three clothes (total of about 1 kg) stonewashed as described above were treated with PRIMAGREEN (registered trademark) EcoFade LT 100 under the following conditions.
15 min, 30 min or 45 min, 50: 1 liquid ratio, 40 ° C. and 1 g / l, 2 g / l or 3 g / l PRIMAGREEN® EcoFade LT 100. Blanks / controls were performed using clothes washed with water alone for 15 minutes, 30 minutes or 45 minutes.
-One cold water rinse for 3 minutes.
-Denim was dried with an industrial dryer.

Denim leg evaluation

ラッカーゼ処理後及びストーンウォッシュ処理後に、上述されているように、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験空間においてMinolta Chromameter CR 310を用いて、硫黄染色された衣服の色変性及びストーンウォッシュを評価した。各衣服について１０回の測定値を得て、結果を平均化した。 After laccase treatment and after stone wash treatment, color modification and stone wash of sulfur-stained clothes were evaluated using a Minolta Chromameter CR 310 in a CIE test space equipped with a D65 light source as described above. Ten measurements were taken for each garment and the results averaged.

これらの結果を表１３にまとめる。
表１３

Figure 0005422670
These results are summarized in Table 13.
Table 13
Figure 0005422670

これらの結果は、色空間のａ値及びｂ値が、未処理及びブランクの生地と比較して著しく変化することを示している。衣服の色合いに対する変性は目視によって確認される。

実施例１０−ストーンウォッシュを伴わない硫黄染色された衣服の色変性 These results show that the a and b values of the color space vary significantly compared to untreated and blank fabrics. Modification to the color of the clothes is confirmed visually.

Example 10-Color modification of sulfur-dyed garments without stone wash

硫黄のカーキーブラウン染料で染色された約１ｋｇ（合計）の重さの１００％綿綾織物生地でできた３着の衣服を、以下の条件下において、５ｋｇのビリーウォッシャーにおいて（３６ｒｐｍ）処理した。
・１５分間、３０分間又は４５分間、４０：１の液比、４０℃、及び、１ｇ／ｌ、２ｇ／ｌ又は３ｇ／ｌのPRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100。ブランク／コントロールは、水のみで１５分間、３０分間又は４５分間にわたって洗浄した衣服を用いて実施した。
・３分間の１回の冷水すすぎ。
・工業用ドライヤーでデニムを乾燥させた。

デニムの脚の評価 Three garments made of 100% cotton twill fabric weighing about 1 kg (total) dyed with sulfur carky brown dye were treated (36 rpm) in a 5 kg Billy washer under the following conditions.
15 min, 30 min or 45 min, 40: 1 solution ratio, 40 ° C., and 1 g / l, 2 g / l or 3 g / l PRIMAGREEN® EcoFade LT 100. Blanks / controls were performed using clothes washed with water alone for 15 minutes, 30 minutes or 45 minutes.
-One cold water rinse for 3 minutes.
・ Denim was dried with an industrial dryer.

Denim leg evaluation

ラッカーゼ処理後及びストーンウォッシュ処理後に、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験色空間においてMinolta Chromameter CR 310を用いて、硫黄染色された衣服に対する色変性及びストーンウォッシュを評価した。各衣服について、１０回の測定値を得て、結果を平均化した。 After laccase treatment and after stone wash treatment, color modification and stone wash on sulfur-stained clothing was evaluated using a Minolta Chromameter CR 310 in a CIE test color space with a D65 light source. For each garment, 10 measurements were taken and the results were averaged.

これらの結果を表１４にまとめる。
表１４

Figure 0005422670
These results are summarized in Table 14.
Table 14
Figure 0005422670

これらの結果は、色空間のａ値及びｂ値が、未処理及びブランクの生地と比較して著しく変化することを示している。衣服の色合いに対する変性は目視によって確認される。

実施例１１−界面活性剤及び軽石の存在下における単一槽プロセス中のセルラーゼ及びラッカーゼによるストーンウォッシュ及び漂白の性能

酵素 These results show that the a and b values of the color space vary significantly compared to untreated and blank fabrics. Modification to the color of the clothes is confirmed visually.

Example 11-Performance of Stone Wash and Bleaching with Cellulase and Laccase in Single Tank Process in the Presence of Surfactant and Pumice

enzyme

PRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100ラッカーゼ（バッチＮｏ．７８０９１３６１６、６，２９２ＧＬａｃＵ／ｇ）

手順 PRIMAGREEN (registered trademark) EcoFade LT 100 laccase (Batch No. 780931616, 6,292GLacU / g)

procedure

純粋な藍で染色された重さ１０ｋｇ（合計）の１２着のデニム衣服を、以下の条件下でTupesaフロントローディングマシン（３６ｒｐｍ）において糊抜きした。
・１０分間、４０℃、１０：１の液比、ｐＨ７、並びに、０．５ｇ／ｌの潤滑剤、０．２ｇ／ｌの分散剤（非イオン性界面活性剤）、及び、０．２ｇ／ｌのポリエステル遮断薬（非イオン性の親水性コポリマー）。 Twelve denim garments weighing 10 kg (total) dyed with pure indigo were desizing in a Tupesa front loading machine (36 rpm) under the following conditions.
10 minutes, 40 ° C., 10: 1 liquid ratio, pH 7, and 0.5 g / l lubricant, 0.2 g / l dispersant (nonionic surfactant), and 0.2 g / l l Polyester blocker (nonionic hydrophilic copolymer).

糊抜きの後に、そのデニムを、以下の条件下でストーンウォッシュした。
・３０分間、４７℃、５：１の液比、ｐＨ６、７ｋｇの軽石、物に対して４重量％のINDIAGE(登録商標)Super GXセルラーゼ(Genencor)を用いる。評価のために１着の衣服を取り出した。
・ストーンウォッシュの後に、槽を排水（下垂）することなく、以下の条件下においてデニムを漂白した。
・３０分間、５：１の液比、４７℃、及び、物に対して２重量％の使用準備済（ＲＴＵ）PRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT100
・１：５０の液比における２分間にわたる２回の冷水すすぎ。
・デニムを工業用ドライヤーで乾燥させた。

デニムの脚の評価 After desizing, the denim was stonewashed under the following conditions.
30 minutes, 47 ° C., 5: 1 liquid ratio, pH 6, 7 kg of pumice, 4% by weight of INDIAGE® Super GX cellulase (Genencor) is used. One piece of clothing was removed for evaluation.
-After the stone wash, the denim was bleached under the following conditions without draining (dripping) the tank.
30 minutes, 5: 1 liquid ratio, 47 ° C. and 2% by weight of ready to use (RTU) PRIMAGREEN® EcoFade LT100
Two cold water rinses over 2 minutes at a 1:50 liquid ratio.
-Denim was dried with an industrial dryer.

Denim leg evaluation

ラッカーゼ処理の後及びセルラーゼ処理の後に、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験色空間においてMinolta Chromameter CR 310を用いて、デニムに対する色変性及びストーンウォッシュを評価した。各脚について８回の測定値を得て、結果を平均化した。 After laccase treatment and after cellulase treatment, color denaturation and stone wash for denim were evaluated using a Minolta Chromameter CR 310 in a CIE test color space equipped with a D65 light source. Eight measurements were taken for each leg and the results averaged.

これらの結果を表１５にまとめる。
表１５

Figure 0005422670
These results are summarized in Table 15.
Table 15
Figure 0005422670

これらの結果は、軽石及び界面活性剤の存在下におけるラッカーゼ処理によって色変性が生じることを示している。 These results indicate that color modification is caused by laccase treatment in the presence of pumice and surfactant.

本明細書に記載されている態様、実施形態及び実施例は、説明のみを目的とする。様々な変形は、当業者に明らかであり、この出願の精神及び範囲並びに添付されている特許請求の範囲の範囲内に包含される。本明細書において引用された刊行物及び特許文献のすべては、ここで言及することによってそれらの全体がそのまま組み込まれている。 The aspects, embodiments and examples described herein are for illustrative purposes only. Various modifications will be apparent to those skilled in the art and are encompassed within the spirit and scope of this application and the scope of the appended claims. All publications and patent literature cited herein are hereby incorporated by reference in their entirety.

Claims (26)

４０℃未満の温度において、繊維の色変性を生じさせるのに充分な時間及び条件下において、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させるステップを含み、前記伝達物質がシリンゴニトリルであることを特徴とする繊維処理方法。 At temperatures below 40 ° C., in a time and under conditions sufficient to cause the color modification of the fibers, viewed including the steps of contacting the fibers laccase enzyme and mediator, said transmitter is a SyringomycinE nitrile A characteristic fiber processing method. 前記色変性が、色の薄色化、色の変化、色合いの変化、再沈着／裏面染色の低減、及び、漂白から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。 The method of claim 1 , wherein the color modification is selected from color thinning, color change, tint change, redeposition / reverse dyeing reduction, and bleaching. 前記温度が２０℃以上４０℃未満であることを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。 The fiber treatment method according to claim 1, wherein the temperature is 20 ° C or higher and lower than 40 ° C. 前記温度が２０℃乃至３０℃であることを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。 Fiber treatment method according to claim 1, wherein the temperature is 2 0 ° C.乃optimum 3 0 ° C.. 前記繊維が藍染めされたデニムであることを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。 The fiber processing method according to claim 1, wherein the fiber is indigo-dyed denim. 前記繊維が硫黄染めされたデニムであることを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。 The fiber processing method according to claim 1, wherein the fiber is sulfur-dyed denim. 前記繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させるステップの前に又は同時に、前記デニムを糊抜き及び／又はストーンウォッシュすることを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。 The fiber processing method according to claim 1, wherein the denim is desizing and / or stonewashed before or simultaneously with the step of contacting the fiber with a laccase enzyme and a transmitter. ストーンウォッシュするステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップとを、同じ槽内で実行することを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。 The fiber processing method according to claim 1, wherein the step of stonewashing and the step of contacting the fiber with a laccase enzyme and a transmitter are performed in the same tank. 繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップと同時に又は連続して、繊維をセルラーゼ酵素に接触させるステップをさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。 The fiber processing method according to claim 1, further comprising the step of contacting the fiber with a cellulase enzyme simultaneously or sequentially with the step of contacting the fiber with a laccase enzyme and a transmitter. 繊維をセルラーゼ酵素に接触させる前記ステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップとを連続して実行し、かつ、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップの前に、繊維をセルラーゼ酵素に接触させる前記ステップを実行することを特徴とする請求項９に記載の繊維処理方法。 The step of contacting the fiber with the cellulase enzyme and the step of contacting the fiber with the laccase enzyme and the transmitter are performed sequentially and before the step of contacting the fiber with the laccase enzyme and the transmitter The fiber treatment method according to claim 9, wherein the step of bringing a cellulase into contact with a cellulase enzyme is performed. 繊維をセルラーゼ酵素に接触させる前記ステップと繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップとの間に槽を排水することなく、繊維をセルラーゼ酵素に接触させる前記ステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップとを、同一槽内において連続して実行することを特徴とする請求項１０に記載の繊維処理方法。 The step of contacting the fiber with the cellulase enzyme without draining the bath between the step of contacting the fiber with the cellulase enzyme and the step of contacting the fiber with the laccase enzyme and the transmitter; and the fiber with the laccase enzyme and transfer The fiber treatment method according to claim 10, wherein the step of bringing into contact with a substance is continuously performed in the same tank. 繊維をセルラーゼ酵素に接触させる前記ステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップとを、４０℃未満の温度において実行することを特徴とする請求項９乃至１１のいずれか１項に記載の繊維処理方法。 12. The method according to any one of claims 9 to 11, wherein the step of contacting the fiber with a cellulase enzyme and the step of contacting the fiber with a laccase enzyme and a transmitter are performed at a temperature of less than 40C. The fiber processing method as described. 前記ラッカーゼが微生物のラッカーゼであることを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 12, wherein the laccase is a microbial laccase. 前記ラッカーゼがセレナ(Cerrena)種に由来することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。 13. A method according to any one of the preceding claims, wherein the laccase is derived from a Cerrena species. 前記ラッカーゼがセレナユニカラー(C.
unicolor)に由来することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。 The laccase is Serena Unicolor (C.
The method according to claim 1, wherein the method is derived from unicolor). 前記ラッカーゼがセレナユニカラー(C.
unicolor)に由来するラッカーゼＤであることを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。 The laccase is Serena Unicolor (C.
The method according to any one of claims 1 to 12, wherein the laccase D is derived from unicolor). 前記ラッカーゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。 The laccase is a group consisting of SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 and SEQ ID NO: 20. 13. The method according to any one of claims 1 to 12, wherein the method has an amino acid sequence that is at least 70% identical to a more selected amino acid sequence. 前記ラッカーゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。 The laccase is a group consisting of SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 and SEQ ID NO: 20. The method according to any one of claims 1 to 12, wherein the method has an amino acid sequence that is at least 80% identical to the amino acid sequence selected. 前記ラッカーゼが、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。 13. The method according to any one of claims 1 to 12, wherein the laccase has an amino acid sequence that is at least 70% identical to SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20. 前記ラッカーゼが、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。 13. The method according to any one of claims 1 to 12, wherein the laccase has an amino acid sequence that is at least 80% identical to SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20. 前記ラッカーゼが、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 12, wherein the laccase has an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20. 前記温度が２０℃乃至３５℃であることを特徴とする請求項１乃至２１のいずれか１項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 21, wherein the temperature is 2 0 ° C.乃optimum 3 5 ° C.. 前記温度が２０℃乃至２３℃であることを特徴とする請求項１乃至２１のいずれか１項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 21, wherein the temperature is 2 0 ° C.乃optimum 2 3 ° C.. 前記温度が水道水の外界温度であることを特徴とする請求項１乃至２１のいずれか１項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 21, wherein the temperature is an outside temperature of tap water. 使用準備済組成物中に前記ラッカーゼ酵素と前記伝達物質とを一緒に提供することを特徴とする請求項１乃至２４のいずれか１項に記載の方法。 25. A method according to any one of claims 1 to 24 , wherein the laccase enzyme and the transmitter are provided together in a ready-to-use composition. 前記ラッカーゼ酵素及び伝達物質を固体形態で提供することを特徴とする請求項１乃至２４のいずれか１項に記載の方法。 25. A method according to any one of claims 1 to 24 , wherein the laccase enzyme and the transmitter are provided in solid form.
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