JP5421902B2 - 免疫の調節、ワクチン効果の増強、慢性fhv−1感染に関連した罹患率の低下及び結膜炎の予防又は治療に有用な組成物及び方法 - Google Patents
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Description
[0001]この出願は、2005年10月6日出願の米国特許仮出願第60/724,214号明細書の優先権を主張する2006年10月6日出願の米国特許出願第11/544,120号明細書の特典を主張する一部係属出願である2007年5月24日出願の米国特許出願第11/805,813号明細書の優先権を主張するものであり、それらの開示全体を参照により本明細書に組み込む。
発明の分野
[0002]本発明は一般的にプロバイオティクスに関し、詳細には自然免疫及び適応免疫を改善し、ワクチン効果を増強し、慢性FHV−1感染に関連した罹患率を低下させ、並びに結膜炎を予防又は治療するためのプロバイオティクスの使用に関する。
[0003]プロバイオティクスは、適量で投与されたとき、宿主の健康に利益をもたらす生きた微生物として定義することができる。プロバイオティクスは、病原細菌による粘膜表面のコロニー形成に対する耐性(コロニー形成耐性)を増加させることにより、又は免疫調節物質の産生を促進する、消化管関連リンパ系組織(GALT)に対する直接の影響を及ぼすことにより、プロバイオティックスの有益な健康効果を与えることができると理論付けられている。
[0010]したがって、本発明の目的は、免疫を調節し、ワクチン効果を増強し、慢性FHV−1感染に関連した罹患率を低下させ、結膜炎を予防又は治療する方法及び組成物を提供することである。
定義
[0022]本明細書及び実施例で以下の略語を使用することができる。FHV−1、ネコ鼻腔気管炎ウイルス;FCV、ネコカリシウイルス;FPV、ネコ汎白血球減少症ウイルス;spp.、種;ELISA、酵素結合免疫吸着測定法;DM、乾物;CFU、コロニー形成単位;kg、キログラム;及びBW、体重。
[0045]一態様では、本発明は免疫の調節、ワクチン効果の増強、慢性FHV−1感染に関連した罹患率の低下、及び/又は動物における結膜炎の予防若しくは治療に適した組成物を提供する。この組成物は、1つ又は複数のプロバイオティクスを、免疫の調節(例えば、自然免疫及び適応免疫の改善)、ワクチン効果の増強、慢性FHV−1感染に関連した罹患率の低下或いは動物における結膜炎の予防又は治療に有効な量で含む。
動物及び実験パラメータ
[0081]ネコ科の研究対象集団。6週齢のSPFの子ネコ20匹は、Liberty Laboratories(Liberty、NY)から購入した。子ネコは、ELISAによってネコ白血病ウイルス抗原及びネコ免疫不全ウイルス抗体に対して血清反応陰性であることが示された(Snap Combo、IDEXX Laboratories、Portland、ME)。
サンプル収集及び臨床的モニタリング
[0084]この研究を通して子ネコの態度と行動を毎日モニターした。体重は毎週測定した。血液、唾液、及び糞便を、7週齢のプロバイオティクス又は嗜好促進剤補給開始前、並びに9、15、21、及び27週齢時にネコ全てから採取した。さらに、糞便を28週齢の処理群の子ネコから採取した。子ネコの各群について、1日当たり5つの糞便試料を共用猫用トイレから無作為抽出し、標準化されたグラフィックスコアカードを用いて記録して、毎日の群平均値を測定した。総IgA及び総IgG測定用の糞便抽出液をBenyacoub J他(2003))によって記載されたプロトコルに従って処理した。試料は全て、バッチで測定するまで−80℃で保存した。
糞便のアッセイ
[0087]各試料採取日に、各子ネコから糞便を8階段で連続10倍希釈して、KFストレプトコッカス寒天培地に播種し、好気的に37℃で48時間インキュベートした。各形態型のコロニー10個を、無菌のループを用いて釣菌し、ブレインハートインフュージョン培地(BHI)(Becton Dickinson、Franklin Lakes、NJ)1.2mLに播種し、分析するまで−80℃に保存した。生きているE.フェシウムNCIMB10415(SF68)が投与したネコの糞便中に存在するかどうかを決定するため、及びこのプロバイオティクスが投与した子ネコから対照の子ネコに偶発的に伝播したかどうかを評価するために、RAPD−PCRを各試料からの細菌分離株で実施した。サーモサイクラーパラメータは以下の通りであった。即ち、95℃で1分の変性、40℃で1分のアニーリング、72℃で4分の伸長を30サイクル行った。反応混合液25.5μLには、10×マグネシウム非含有緩衝液(100mM Tris−HCl、pH8.3、500mM KC1)2.45μL、3.22mM MgCl2 、JumpStart Taq DNAポリメラーゼ(Sigma D−4184、Sigma−Aldrich,Inc.、St.Louis、MO)0.4μL(1ユニット)、dNTP混合物(2.5mM)1.9μL、プライマー(100μM)1μL、PCR水15.47μL及び細菌培養物1μLが含まれた。使用したプライマーの配列は、5’−GGTTGGGTGAGAATTGCACG−3’であった。PCR産物5〜10μLを2パーセントのアガロースゲルで泳動し、バンドのパターンをSF68陽性対照と比較した。市販のELISAを、クロストリジウム パーフリンジェンス エンテロトキシン又はC.ディフィシル毒素A/Bが全子ネコの糞便中に存在したかどうかを測定するために使用した(C.パーフリンジェンス(ELISA、キット番号92−000−22)及びC.ディフィシル(ELISA、キット番号94−0150−KT)、Techlabs、Blacksburg、VA.)。サルモネラ(Salmonella)属及びカンピロバクター(Campylobacter)属の所定の好気性糞便培養は、Colorado State University Diagnostic Laboratoryで実施された。
免疫学的アッセイ
[0090]完全血球数、血清生化学的パネル、及び尿分析はColorado State UniversityのClinical Pathology Laboratoryで実施した。抗原特異的体液性免疫応答を、血清FHV−1特異的IgG、FHV−1特異的IgA、FCV特異的IgG、及びネコ汎白血球減少症特異的IgGを血清中で測定し、並びに以前に公表されたELISAアッセイの適応を使用して、唾液中でFHV−1特異的IgG及びIgAレベルを測定することにより評価した(Lappin MR他(2002)及びDitmer DA他(1998)。FHV−1特異的IgG及びIgAについて、結果は各試料の3連の試験ウェルに対する両方の平均吸光度によって、及びパーセンテージELISA単位の計算によって算出した(試験試料平均吸光度マイナス陰性対照試料平均吸光度/陽性対照試料平均吸光度マイナス陰性対照試料平均吸光度に100を掛けた)。FCV及びFPVについては平均吸光度を使用した。血清、糞便抽出液及び唾液中の総IgG及びIgA濃度は、市販のELISAアッセイ又は放射状免疫拡散アッセイを使用して推定した(Bethyl Laboaratories,Inc.、Montgomery、TX)。
結膜炎に対するプロバイオティクスエンテロコッカス細菌の効果
[0098]慢性FHV−1感染を有する若齢の雌雄の成体ネコ(n=12)を別の研究から移し、5.5カ月の間SF68又はプラセボを投与した。これらのネコは、平衡化期間中及び補給後、結膜炎、くしゃみ及び鼻汁を毎日モニターした。補給期間中、これらのネコは群れの収容場所から個体の収容場所へ移動させ、潜在的FHV−1感染を活性化させるために外科的に滅菌した。動物における結膜炎をモニターした。
Claims (11)
- 慢性FHV−1感染に関連した結膜炎の予防又は治療に有効な量で1種又は複数のプロバイオティクスエンテロコッカス(Enterococcus)細菌を含む組成物を非ヒト動物に投与するステップを含み、
前記プロバイオティクスエンテロコッカス細菌が、少なくともE.フェシウム(faecium)株NCIMB10415(SF68)を含む、
前記非ヒト動物における前記結膜炎を予防又は治療する方法。 - 前記非ヒト動物がイヌ科又はネコ科である、請求項1に記載の方法。
- 前記非ヒト動物がネコである、請求項1または2に記載の方法。
- 前記組成物が動物食品組成物又は栄養補助食品である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記プロバイオティクスエンテロコッカスが前記組成物1グラム当たり少なくとも102から1011CFUの量で存在する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 非ヒト動物における慢性FHV−1感染に関連した結膜炎の予防若しくは治療に有効な量で1種又は複数のプロバイオティクスエンテロコッカス(Enterococcus)細菌を含み、
前記プロバイオティクスエンテロコッカス細菌が少なくともE.フェシウム(faecium)株NCIMB10415(SF68)を含む、前記結膜炎の予防または治療のための医薬品。 - 前記プロバイオティクスエンテロコッカス細菌が前記医薬品1グラム当たり少なくとも102から1011コロニー形成単位(CFU)の量で存在する、請求項6に記載の医薬品。
- 前記結膜炎の予防若しくは治療に有効な1種又は複数の物質をさらに含む、請求項6または7に記載の医薬品。
- 少なくとも1種のその他の種類のプロバイオティクスをさらに含む、請求項6〜8のいずれか一項に記載の医薬品。
- 前記非ヒト動物がイヌ科又はネコ科である、請求項6〜9のいずれか1項に記載の医薬品。
- 前記非ヒト動物がネコである、請求項6〜10のいずれか1項に記載の医薬品。
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