JP5363697B2 - Biofilm inhibitor / removal agent - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a biofilm inhibitor/remover for eliminating biofilms in the environment. <P>SOLUTION: The biofilm inhibitor/remover contains a compound represented by formula (A) (wherein R is a 6-18C alkyl group which may be substituted; G is a residue derived from a 5-6C reducing sugar; m is a number of 0 to 200; and n is a number of 1 to 30). <P>COPYRIGHT: (C)2007,JPO&amp;INPIT

Description

本発明は、バイオフィルムを環境から排除するバイオフィルム抑制・除去剤に関する。   The present invention relates to a biofilm inhibitor / removal agent that removes a biofilm from the environment.

バイオフィルムは、細菌やカビ等の微生物が固体や液体の表面に付着し、分泌物等と共に形成される微生物の群落であり、微生物が環境中に生息する場合は、バイオフィルムの状態にあることが非常に多い。バイオフィルムは、生活環境や産業上で、深刻な問題を引き起こす場合がある。例えば、住環境では、台所、浴室、トイレ等の排水口のぬめりやつまりの原因や悪臭の原因となり不快感を与える。温泉施設等の循環式の浴槽内で形成されたバイオフィルム中の細菌により感染症が発症する場合もある。一方、産業上では、下水道管や船底に形成されることにより腐食を引き起こす事が知られている。工場の製造ライン上のバイオフィルムが微生物汚染の原因となることもある。医療関連では、透析等のチューブや内視鏡、コンタクトレンズ等の医療器具に形成されたバイオフィルムが感染源となったり、また、皮膚等の人体組織でのバイオフィルム形成により疾病を引き起こしたりする。食品関連では、野菜等の生鮮食料品や加工食品原料及び調理器具に形成されたバイオフィルムが腐敗や食中毒の原因となる。   A biofilm is a community of microorganisms formed by microorganisms, such as bacteria and mold, adhering to the surface of solids and liquids and forming secretions. If microorganisms inhabit the environment, they must be in a biofilm state. There are very many. Biofilms can cause serious problems in the living environment and industry. For example, in a living environment, drainage outlets such as kitchens, bathrooms, and toilets become slimy, clogged, and cause bad odors, resulting in discomfort. Infectious diseases may develop due to bacteria in the biofilm formed in a circulating bath in a hot spring facility or the like. On the other hand, in the industry, it is known to cause corrosion by being formed on a sewer pipe or a ship bottom. Biofilms on factory production lines can cause microbial contamination. In the medical field, biofilms formed on medical devices such as dialysis tubes, endoscopes, and contact lenses can be the source of infection, and can also cause disease due to biofilm formation in human tissues such as skin. . In the food industry, fresh food products such as vegetables, raw materials for processed foods, and biofilms formed on cooking utensils cause rot and food poisoning.

さらに微生物がバイオフィルムを形成することにより、洗浄除去や薬剤、熱等のストレスに対して浮遊の状態にある場合に比べ非常に強固になることが知られており、通常の洗浄や殺菌方法ではその効果が十分発揮できないことが多く、徹底的な微生物の排除を困難にするため、深刻な問題となっている。   Furthermore, it is known that microorganisms form a biofilm, which makes it much stronger than when it is in a floating state against stress such as cleaning removal, chemicals, and heat. In many cases, the effect cannot be fully exhibited, and it is a serious problem because it makes it difficult to thoroughly eliminate microorganisms.

バイオフィルムを除去または殺菌する方法としては、一般的な洗浄剤や殺菌剤を用いることのほか、モノグリセリド多価カルボン酸エステル等の界面活性剤やデキストラナーゼ、ぺプチターゼ、グルカナーゼ等の酵素を組み合わせて用いるにことやアルカリ電解水により化学的に除去すること等が提案されている（特許文献１〜４参照）。また、バイオフィルムの付着部分を液体と接触させながら、それにパルスレーザを照射することやバブリング等で物理的にバイオフィルムを除去する方法（特許文献５〜７参照）も提案されている。   As a method for removing or sterilizing biofilms, in addition to using general detergents and sterilizers, combinations of surfactants such as monoglyceride polycarboxylic acid esters and enzymes such as dextranase, peptidase, and glucanase are combined. It has been proposed to use them and chemically remove them with alkaline electrolyzed water (see Patent Documents 1 to 4). In addition, a method of physically removing the biofilm by irradiating it with a pulse laser, bubbling, or the like while the attached portion of the biofilm is in contact with a liquid has been proposed (see Patent Documents 5 to 7).

しかしながら、一旦、バイオフィルムが形成されると、菌から産出される多糖類等の粘性物質は単に洗浄液を流したり、擦ったりすることでだけで充分に除去することは容易ではない。従って、バイオフィルムを環境から排除するためには、バイオフィルムの形成を抑制することが効果的である。これらの方法としてはファルネソールやキシリトールを用いてバイオフィルムの形成を抑制する方法（特許文献８参照）やラクトン誘導体及び／またはフラン誘導体を有効成分とするバイオフィルムの形成を抑制する方法（特許文献９参照）等が提案されているが、効果が十分ではなく、対象の菌種が限られている等の問題があった。その為、より効果が高く多くの菌種のバイオフィルム形成抑制能を持つ剤が求められている。   However, once a biofilm is formed, it is not easy to sufficiently remove viscous substances such as polysaccharides produced from bacteria simply by flowing a cleaning solution or rubbing them. Therefore, in order to exclude the biofilm from the environment, it is effective to suppress the formation of the biofilm. As these methods, a method of suppressing biofilm formation using farnesol or xylitol (see Patent Document 8), or a method of suppressing biofilm formation containing a lactone derivative and / or a furan derivative as an active ingredient (Patent Document 9). Etc.) have been proposed, but there are problems such as the effect is not sufficient and the target bacterial species is limited. Therefore, there is a demand for an agent that has a higher effect and has the ability to suppress biofilm formation of many bacterial species.

ラウリルグルコシド、オクチルガラクトシド等のアルキルグリコシド類は、低刺激性の非イオン性界面活性剤として広く知られている。しかし、微生物のバイオフィルムを環境から排除する効果があることについては全く知られていない。
特開平１０−２３４２９４号公報 特開平１０−２３４５９５号公報 特開平３−１９３号公報 特開２００３−２５０４３６号公報 特開２００４−２７５９７９号公報 特開２００４−６５６１２号公報 特開２００２−２８４６０４号公報 特開２００４−３２４０４５号公報 特開２００４−１５５６８１号公報 Alkyl glycosides such as lauryl glucoside and octyl galactoside are widely known as hypoallergenic nonionic surfactants. However, nothing is known about the effect of eliminating microbial biofilms from the environment.
Japanese Patent Laid-Open No. 10-234294 Japanese Patent Laid-Open No. 10-234595 Japanese Patent Laid-Open No. 3-193 JP 2003-250436 A Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-275979 JP 2004-65612 A JP 2002-284604 A JP 2004-324045 A JP 2004-155681 A

本発明は、環境中におけるバイオフィルムを排除するためのバイオフィルム抑制・除去剤を提供することに関する。   The present invention relates to providing a biofilm inhibiting / removing agent for eliminating biofilm in the environment.

本発明者らは、安全性が高く居住空間等に広く使用可能な化合物について検討したところ、下記式（Ａ）で表されるアルキルグリコシド類が優れたバイオフィルムの形成抑制作用及びバイオフィルム除去作用を有することを見出した。   The present inventors examined a compound that is highly safe and can be widely used in a living space and the like. As a result, the alkylglycoside represented by the following formula (A) has excellent biofilm formation suppressing action and biofilm removing action. It was found to have

すなわち本発明は、下記式（Ａ）：   That is, the present invention provides the following formula (A):

〔式中、Ｒは置換されてもよい炭素数６〜１８のアルキル基を示し、Ｇは炭素数５〜６の還元糖由来の残基を示し、ｍは０〜２００の数を示し、ｎは１〜３０の数を示す。〕
で表される化合物を含有するバイオフィルム抑制・除去剤を提供するものである。 [In the formula, R represents an optionally substituted alkyl group having 6 to 18 carbon atoms, G represents a residue derived from a reducing sugar having 5 to 6 carbon atoms, m represents a number of 0 to 200, n Indicates a number from 1 to 30. ]
The biofilm inhibitor / removal agent containing the compound represented by this is provided.

本発明によれば、住居内及び産業上の様々な環境において形成されるバイオフィルムの付着を簡便にかつ効率的に抑制、除去できる。   ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the adhesion | attachment of the biofilm formed in various environments on a residence and industry can be suppressed and removed simply and efficiently.

本発明に用いられる式（Ａ）で表される化合物は、炭素数６〜１８のアルキル基に直接又は１つ以上のオキシエチレン基を介して、１つ以上の炭素数５〜６の還元糖由来の残基がα−配置もしくはβ−配置でグリコシド結合した化合物である。
「炭素数６〜１８のアルキル基」としては、直鎖又は分岐鎖のいずれでもよく、例えばｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−デシル基、ｎ−ドデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−オクタデシル基、イソステアリル基（イソオクタデシル基）、２−エチルヘキシル基等が挙げられる。このうち、配合上及び効力の面から、炭素数８〜１６のアルキル基が好ましく、炭素数８〜１４がより好ましい。 The compound represented by the formula (A) used in the present invention includes one or more reducing sugars having 5 to 6 carbon atoms, directly or via one or more oxyethylene groups to an alkyl group having 6 to 18 carbon atoms. It is a compound in which the residue derived is glycosidically bonded in the α-configuration or β-configuration.
As the “alkyl group having 6 to 18 carbon atoms”, either a straight chain or a branched chain may be used. For example, n-hexyl group, n-heptyl group, n-octyl group, n-decyl group, n-dodecyl group, n -Tetradecyl group, n-hexadecyl group, n-octadecyl group, isostearyl group (isooctadecyl group), 2-ethylhexyl group, etc. are mentioned. Among these, an alkyl group having 8 to 16 carbon atoms is preferable and 8 to 14 carbon atoms are more preferable in terms of blending and efficacy.

アルキル基の水素原子は、置換基で置換されてもよい。この置換基としては、炭素数１〜６のアルコキシ基、ハロゲン原子（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等）、ニトロ基、炭素数１〜６のハロアルキル基、炭素数１〜６のハロアルコキシ基が挙げられる。   The hydrogen atom of the alkyl group may be substituted with a substituent. Examples of the substituent include an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, a halogen atom (eg, fluorine, chlorine, bromine, iodine, etc.), a nitro group, a haloalkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and a haloalkoxy group having 1 to 6 carbon atoms. Groups.

「炭素数５〜６の還元糖」としては、グルコース、フルクトース、ガラクトース、キシロース、マンノース、アラビノース等が挙げられ、これらの組み合わせであってもよい。このうちバイオフィルム形成抑制効果の点から、グルコース、ガラクトースが好ましい。また、これらの還元糖は、ピラノース型、フラノース型又はそれらの混合物のいずれも含まれる。   Examples of the “reducing sugar having 5 to 6 carbon atoms” include glucose, fructose, galactose, xylose, mannose, arabinose, and the like, and a combination thereof may be used. Among these, glucose and galactose are preferable from the viewpoint of the biofilm formation inhibitory effect. In addition, these reducing sugars include any of pyranose type, furanose type or a mixture thereof.

「還元糖由来の残基」とは、還元糖又はその縮合体におけるすべての非グリコシド性水酸基の水素原子及びグリコシド性水酸基の水素原子を除いたあとに残る糖残基を意味する。   The “residue derived from reducing sugar” means a sugar residue remaining after removing hydrogen atoms of all non-glycosidic hydroxyl groups and hydrogen atoms of glycosidic hydroxyl groups in reducing sugars or condensates thereof.

ｍは、０〜２００の数を示すが、バイオフィルム形成抑制作用の面から０〜１２が好ましく、０〜３がより好ましい。還元糖の縮合度を示すｎは１〜３０の数であるが、１〜６が好ましく、１〜３がより好ましい。ｎが１より大きい場合、即ちＧが２糖以上の糖鎖で構成される場合、糖鎖の結合様式は、１−２、１−３、１−４、１−６結合、及びこれらが混合された結合様式であってもよい。   Although m shows the number of 0-200, 0-12 are preferable from the surface of biofilm formation suppression effect, and 0-3 are more preferable. Although n which shows the condensation degree of a reducing sugar is a number of 1-30, 1-6 are preferable and 1-3 are more preferable. When n is larger than 1, that is, when G is composed of two or more sugar chains, the sugar chain binding mode is 1-2, 1-3, 1-4, 1-6 bond, and these are mixed It may be a binding mode.

式（Ａ）で表される化合物のうち、特に好ましいものとして、例えば、β−オクチルグルコシド、α−オクチルガラクトシド、β−オクチルガラクトシド、ラルリルガラクトシド、トリオキシエチレンラウリルガラクトシド、ラウリルグルコシド、Ｃ８〜Ｃ１６グルコシド混合物、Ｃ８〜Ｃ１６ガラクトシド混合物等が挙げられる。   Among the compounds represented by the formula (A), particularly preferable examples include β-octyl glucoside, α-octyl galactoside, β-octyl galactoside, laryl galactoside, trioxyethylene lauryl galactoside, lauryl glucoside, C8 to C16. A glucoside mixture, a C8-C16 galactoside mixture, etc. are mentioned.

式（Ａ）で表される化合物は、堀らの方法（薬学雑誌，Vol. 79, No.1, p80-83）や後述する製造例により製造することができる。また、マイドール（Ｃ８〜Ｃ１６グルコシド混合物、花王株式会社製）等の市販品を用いることもできる。   The compound represented by the formula (A) can be produced by the method of Hori et al. (Pharmaceutical Journal, Vol. 79, No. 1, p80-83) and the production examples described later. Commercial products such as mydol (C8-C16 glucoside mixture, manufactured by Kao Corporation) can also be used.

斯かる化合物（Ａ）は、後記実施例に示すように、緑膿菌、セパシア菌、大腸菌、セラチア菌を初めとするグラム陰性菌や黄色ブドウ球菌等のグラム陽性菌、酵母等の真菌等様々な環境に存在する微生物によるバイオフィルムの形成抑制作用及び除去作用を有する。従って、化合物（Ａ）は、様々な環境中のバイオフィルム抑制・除去剤として幅広く有用である。ここで、本発明におけるバイオフィルムの抑制・除去とは、微生物（細菌及び真菌）が分泌物や沈着物と共に形成する群落（バイオフィルム）の形成を阻止若しくは抑制すること及び／又は形成されたバイオフィルムを除去することをいい、形成に関わる微生物の種類やその種類数は特に限定されるものではない。   Such compounds (A) can be used in various forms such as gram-positive bacteria such as Pseudomonas aeruginosa, Sephacia, Escherichia coli and Serratia, Gram-positive bacteria such as Staphylococcus aureus, and fungi such as yeast. It has the action of suppressing the formation and removal of biofilms by microorganisms present in various environments. Therefore, the compound (A) is widely useful as a biofilm inhibitor / removal agent in various environments. Here, suppression / removal of the biofilm in the present invention refers to inhibiting or suppressing the formation of a community (biofilm) formed by microorganisms (bacteria and fungi) together with secretions and deposits, and / or formed bio. This refers to removing the film, and the types of microorganisms involved in formation and the number of types are not particularly limited.

本発明のバイオフィルム抑制・除去剤は、必要に応じて乳化剤、固着剤、分散剤、湿潤剤、安定剤、噴射剤等を適宜添加することにより、油剤、乳剤、水和剤、噴霧剤、エアゾール剤、燻煙剤、塗布剤、洗浄剤、粉剤及び粒剤の形態として製剤化することができ、化粧品、皮膚外用剤等の医薬品、医薬部外品として使用できる。斯かる化粧品や医薬部外品、洗浄剤等は、本発明の化合物（Ａ）を含有し、バイオフィルム形成抑制及び／又は除去作用を有し、そのために用いるものである旨の表示を付していることができる。   The biofilm inhibitor / removal agent of the present invention is appropriately added with an emulsifier, a fixing agent, a dispersant, a wetting agent, a stabilizer, a propellant, etc. It can be formulated as aerosols, smoke agents, coating agents, cleaning agents, powders and granules, and can be used as pharmaceuticals such as cosmetics and external preparations for skin and quasi drugs. Such cosmetics, quasi-drugs, detergents and the like contain the compound (A) of the present invention, have a biofilm formation inhibitory and / or removal action, and are labeled as such. Can be.

ここで、洗浄剤としては、住居用洗浄剤、台所用洗剤、工業用の洗浄剤、医療用の洗浄剤が挙げられ；化粧料としては、メーキャップ化粧料や基礎化粧料、毛髪用化粧料等が挙げられ、医薬品としては、例えば傷薬等が挙げられ；医薬部外品（薬事法第２条２項）としては、例えば浴用剤、薬用化粧品、コンタクトレンズ用消毒剤、外皮消毒剤、きず消毒保護剤、ひび・あかぎれ用剤等が挙げられる。
これらをバイオフィルムが形成される種々の環境、例えば床面、畳、浴槽、壁、便器等の住環境中や船底、工場等の配管、皮膚、傷口等の人体、コンタクトレンズ、内視鏡等の医療機器等に散布、噴霧、塗布又は蒸散することにより、その効果を発揮させることができる。 Here, examples of the cleaning agent include residential cleaning agents, kitchen detergents, industrial cleaning agents, and medical cleaning agents; cosmetics include makeup cosmetics, basic cosmetics, hair cosmetics, and the like. Examples of pharmaceuticals include wounds and the like; quasi drugs (Article 2, Paragraph 2 of the Pharmaceutical Affairs Law) include, for example, bath preparations, medicinal cosmetics, contact lens disinfectants, skin disinfectants, scratches Examples include disinfectant protective agents and cracking / redening agents.
These are various environments in which biofilms are formed, for example, living environments such as floors, tatami mats, bathtubs, walls, toilets, etc., ship bottoms, factory piping, etc., human bodies such as skin, wounds, contact lenses, endoscopes, etc. The effect can be exhibited by spraying, spraying, applying, or evaporating to other medical devices.

上記の製剤には、本発明の化合物（Ａ）に加えて、抗菌抗カビ剤、防腐防黴剤、抗生物質、浸透促進剤、界面活性剤、消臭剤及び芳香剤等を配合するとより効果的である。
抗菌抗カビ剤としては、例えばチアベンダゾール、トリクロサン、クロルヘキシジン、ジンクピリチオン、クロルキシレノール等や、キトサン、カテキン、チモール、ヒノキチオール、孟宗竹エキス、カラシ精油、ワサビ精油等の天然由来の抗菌成分等が挙げられる。 In addition to the compound (A) of the present invention, an antibacterial and antifungal agent, an antiseptic / antifungal agent, an antibiotic, a penetration enhancer, a surfactant, a deodorant, a fragrance and the like are added to the above preparation. Is.
Examples of the antibacterial and antifungal agents include thiabendazole, triclosan, chlorhexidine, zinc pyrithione, chlorxylenol, and the like, and natural antibacterial components such as chitosan, catechin, thymol, hinokitiol, scorpion bamboo extract, mustard essential oil, and wasabi essential oil.

防腐防黴剤としては、例えばパラオキシ安息香酸エステル（パラベン）類、２-フェノキシエタノール、安息香酸及びその塩類、サルチル酸及びその塩類、ソルビン酸及びその塩類、デヒドロ酢酸及びその塩類、ｐ‐トルエンスルホン酸及びその塩、エタノールやイソプロパノール等のアルコール類、塩化ベンザルコニウム等の第四級アンモニウム塩等及び防腐力を有する原料である多価アルコール類、中鎖脂肪酸やそのエステル類、グルセリン誘導体類、及びＥＤＴＡ等のキレート剤等が挙げられる。   Examples of antiseptic / antifungal agents include paraoxybenzoates (parabens), 2-phenoxyethanol, benzoic acid and its salts, salicylic acid and its salts, sorbic acid and its salts, dehydroacetic acid and its salts, p-toluenesulfonic acid And salts thereof, alcohols such as ethanol and isopropanol, quaternary ammonium salts such as benzalkonium chloride and the like, and polyhydric alcohols that are antiseptic raw materials, medium chain fatty acids and esters thereof, glycerol derivatives, and Examples include chelating agents such as EDTA.

本発明のバイオフィルム抑制・除去剤における化合物（Ａ）の配合量は、０．０１〜１０質量％、特に０．０３〜５質量％が好ましい。   The compounding amount of the compound (A) in the biofilm inhibitor / removal agent of the present invention is preferably 0.01 to 10% by mass, particularly preferably 0.03 to 5% by mass.

製造例１ α，β−ラウリルガラクトシドの製造
Ｄ−ガラクトースとラウリルアルコールを触媒量のパラトルエンスルホン酸１水和物存在下、加熱、減圧条件で脱水しながら反応させた。得られた混合物をシリカゲルカラムにより精製し、ガラクトース縮合度１〜３のラウリルガラクトシドを得た。ゲル浸透クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、¹Ｈ−ＮＭＲによる分析の結果、得られたラウリルガラクトシドの平均糖縮合度は１．４８であり、成分中のラウリルモノガラクトシドの組成はピラノシド／フラノシド＝８３／１７、そのうちピラノシドのα／β比は７５／２５であった。 Production Example 1 Production of α, β-laurylgalactoside D-galactose and lauryl alcohol were reacted in the presence of a catalytic amount of paratoluenesulfonic acid monohydrate while dehydrating under heating and reduced pressure conditions. The resulting mixture was purified by a silica gel column to obtain lauryl galactoside having a degree of galactose condensation of 1 to 3. As a result of analysis by gel permeation chromatography, gas chromatography and ¹ H-NMR, the average saccharide condensation degree of the obtained lauryl galactoside was 1.48, and the composition of lauryl monogalactoside in the component was pyranoside / furanoside = 83 / 17. Of these, the α / β ratio of pyranoside was 75/25.

製造例２ β−トリオキシエチレンラウリルガラクトシドの製造
ペンタアセチル−Ｄ−ガラクトースとトリオキシエチレンモノラウリルエーテルを三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体存在下、ジクロロメタン中、室温で反応させた。溶媒を減圧下で留去した後、シリカゲルカラムで精製することによりβ−トリオキシエチレンラウリル−２，３，４，６−テトラアセチルガラクトシドを得た。これをナトリウムメトキシドにより脱アセチル化して、β−トリオキシエチレンラウリルガラクトシドを得た。 Production Example 2 Production of β-trioxyethylene lauryl galactoside Pentaacetyl-D-galactose and trioxyethylene monolauryl ether were reacted in dichloromethane in the presence of boron trifluoride diethyl ether complex at room temperature. After distilling off the solvent under reduced pressure, β-trioxyethylene lauryl-2,3,4,6-tetraacetylgalactoside was obtained by purification with a silica gel column. This was deacetylated with sodium methoxide to obtain β-trioxyethylene lauryl galactoside.

¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) 0.88(t, 3H), 1.2-1.35(m, 18H), 1.57(m, 2H), 3.35-3.8(overlapped, 13H), 3.84(t,2H),3.97-4.07(overlapped, 3H), 4.17(d, 1H), 4.29(d, J=7.6Hz, 1H) ,4.41(d, 1H)。 ¹ H-NMR (400MHz, CDCl ₃ ) 0.88 (t, 3H), 1.2-1.35 (m, 18H), 1.57 (m, 2H), 3.35-3.8 (overlapped, 13H), 3.84 (t, 2H), 3.97 -4.07 (overlapped, 3H), 4.17 (d, 1H), 4.29 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.41 (d, 1H).

製造例３ α−及びβ−オクチルガラクトシドの製造
製造例２と同様にオクチルアルコールを原料として製造したα，β−オクチルガラクトシドをカラムにより精製し、α−オクチルガラクトシド及びβ−オクチルガラクトシドを得た。 Production Example 3 Production of α- and β-octylgalactoside α, β-octylgalactoside produced using octyl alcohol as a raw material in the same manner as in Production Example 2 was purified by a column to obtain α-octylgalactoside and β-octylgalactoside.

α体：0.78(t, 3H), 1.1-1.3(m, 10H), 1.47(m, 2H), 3.45-3.70(overlapped, 7H), 4.63(d, J=2.8Hz, 1H)、β体：0.86(t, 3H), 1.2-1.35(m, 10H), 1.51(m, 2H), 3.25-3.75(overlapped, 7H), 4.09(d, J=7.6Hz, 1H)。   α-form: 0.78 (t, 3H), 1.1-1.3 (m, 10H), 1.47 (m, 2H), 3.45-3.70 (overlapped, 7H), 4.63 (d, J = 2.8Hz, 1H), β-form: 0.86 (t, 3H), 1.2-1.35 (m, 10H), 1.51 (m, 2H), 3.25-3.75 (overlapped, 7H), 4.09 (d, J = 7.6Hz, 1H).

製造例４ Ｃ８〜Ｃ１６ガラクトシド混合物の製造
製造例１と同様の方法でＤ−ガラクトースとC8〜C16の混合アルコール(C8:C10:C12:C14 = <1:60:30:10:<1)を反応させた。得られた混合物から未反応アルコールを減圧下で留去することにより、C8〜C16ガラクトシド混合物を得た。分析の結果、平均糖縮合度は1.3であった。 Production Example 4 Production of C8 to C16 Galactoside Mixture In the same manner as in Production Example 1, D-galactose and C8 to C16 mixed alcohol (C8: C10: C12: C14 = <1: 60: 30: 10: <1) Reacted. Unreacted alcohol was distilled off from the obtained mixture under reduced pressure to obtain a C8-C16 galactoside mixture. As a result of analysis, the average degree of sugar condensation was 1.3.

上記製造例１〜４で製造された、α，β−ラウリルガラクトシド、β−トリオキシエチレンラウリルガラクトシド、α−オクチルガラクトシド及びβ−オクチルガラクトシド、Ｃ８〜Ｃ１６ガラクトシド混合物並びにβ-ｎ-オクチルグルコシド（同仁化学研究所製）、Ｃ８〜Ｃ１６グルコシド混合物（「マイドール12」花王株式会社製））を、実施例の試験物質として用いた。   Α, β-lauryl galactoside, β-trioxyethylene lauryl galactoside, α-octyl galactoside and β-octyl galactoside, C8-C16 galactoside mixture and β-n-octyl glucoside (Dojin) manufactured in the above Production Examples 1 to 4 Chemical Laboratory), C8-C16 glucoside mixture (“Mydoll 12” manufactured by Kao Corporation)) were used as test substances in the examples.

実施例１ 緑膿菌のバイオフィルム形成に対する抑制効果
（１）供試菌株
緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa ＮＢＲＣ １３７２５）
（２）実験方法
供試菌株を２４穴マイクロプレートを用いＬＢ培地（和光純薬工業）（600μL/ｗｅｌｌ）で振盪培養（３０℃、700ｒｐｍ、一昼夜）した後１００倍希釈したものを供試菌液とした。
バイオフィルムの調製と形成抑制効果の評価は次のように行った。
１）ＰＶＣ（ポリビニルアルコールクロライド）の96穴マイクロプレート（丸底）を用い、ＭＨＢ培地(ミューラヒントン液体培地、Difco)（100μL/ｗｅｌｌ）に各糖脂質を0.1％となるように添加した後、供試菌液を10μL接種し、３０℃で２４時間静置培養した。
２）培養液を取り除いた後、付着している菌体をバイオフィルムとし、0.1％クリスタルバイオレット液を200μL添加し、バイオフィルムを染色した。
３）クリスタルバイオレット液を除き、200μLの水道水で10回以上洗浄後、プレートに固着して残存していたバイオフィルムを定量した。
４）バイオフィルムの定量は染色したバイオフィルムを99.5％エタノール200μLに溶解後、吸光度（595nm）を測定することで行った。
５）なお、コントロールとして、試験物質を添加せずに同様の方法でバイオフィルムを形成させた。
結果を表１に示す。ここでバイオフィルム形成量は、コントロールを１００とした場合の比率で示した。 Example 1 Inhibitory effect on biofilm formation of Pseudomonas aeruginosa (1) Test strain Pseudomonas aeruginosa NBRC 13725
(2) Experimental method The test strain was diluted 100 times after shaking culture (30 ° C., 700 rpm, all day and night) in LB medium (Wako Pure Chemical Industries) (600 μL / well) using a 24-well microplate. Liquid.
Preparation of biofilm and evaluation of formation inhibitory effect were performed as follows.
1) After using a 96-well microplate (round bottom) of PVC (polyvinyl alcohol chloride), each glycolipid was added to MHB medium (Mura Hinton liquid medium, Difco) (100 μL / well) at 0.1%, 10 μL of the test bacterial solution was inoculated, and statically cultured at 30 ° C. for 24 hours.
2) After removing the culture solution, the attached cells were used as a biofilm, and 200 μL of 0.1% crystal violet solution was added to stain the biofilm.
3) After removing the crystal violet solution and washing 10 times or more with 200 μL of tap water, the remaining biofilm adhered to the plate was quantified.
4) The biofilm was quantified by dissolving the stained biofilm in 200 μL of 99.5% ethanol and measuring the absorbance (595 nm).
5) As a control, a biofilm was formed in the same manner without adding the test substance.
The results are shown in Table 1. Here, the biofilm formation amount is shown as a ratio when the control is 100.

実施例２ 種々の微生物によって形成されるバイオフィルムに対する抑制効果（１）
α、β-ラウリルガラクトシドを用い、供試菌株として表２に示す３種の菌株を用いて、実施例１と同様の方法でバイオフィルムの形成抑制効果を評価した。なお、α、β-ラウリルガラクトシドの濃度は0.05%及び0.2％とした。
結果を表２に示す。ここでバイオフィルム形成量は、コントロールを１００とした場合の比率で示した。 Example 2 Inhibitory effect on biofilms formed by various microorganisms (1)
Using α, β-lauryl galactoside and the three strains shown in Table 2 as test strains, the biofilm formation inhibitory effect was evaluated in the same manner as in Example 1. The concentrations of α, β-lauryl galactoside were 0.05% and 0.2%.
The results are shown in Table 2. Here, the biofilm formation amount is shown as a ratio when the control is 100.

実施例３ 種々の微生物によって形成されるバイオフィルムに対する抑制効果（２）
Ｃ８〜１６−グルコシド混合物を用い、供試菌株として表３に示す４種の菌株及び、環境分離菌２５株を用いて、実施例１と同様の方法でバイオフィルムの形成抑制効果を評価した。なお、菌株を混合する場合は培養後に混合したものを希釈した。また、Ｃ８〜１６−グルコシドの濃度は0.04％とした。
結果を表３に示す。ここでバイオフィルム形成量は、コントロールを１００とした場合の比率で示した。 Example 3 Inhibitory effect on biofilms formed by various microorganisms (2)
Using the C8-16-glucoside mixture, the biofilm formation inhibitory effect was evaluated in the same manner as in Example 1, using 4 strains shown in Table 3 as test strains and 25 environmentally isolated strains. In addition, when mixing a strain, what was mixed after culture | cultivation was diluted. The concentration of C8-16-glucoside was 0.04%.
The results are shown in Table 3. Here, the biofilm formation amount is shown as a ratio when the control is 100.

実施例４ バイオフィルムの除去効果
（１）供試菌株
緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa ＮＢＲＣ １３７２５）
セラチア菌（Serratia marcescens ＮＢＲＣ １２６４８）
黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus ＮＢＲＣ １３２７６）
（２）実験方法
供試菌株を２４穴マイクロプレートを用いＬＢ培地（和光純薬工業）（600μL/ｗｅｌｌ）で振盪培養（３０℃、700ｒｐｍ、一昼夜）した後１００倍希釈したものを供試菌液とした。
バイオフィルムの調製と除去効果の評価は次のように行った。
１）ＰＶＣ（ポリビニルアルコールクロライド）の96穴マイクロプレート（丸底）を用い、ＭＨＢ培地(ミューラヒントン液体培地、Difco)（100μL/ｗｅｌｌ）に供試菌液を10μL接種し、３０℃で２４時間静置培養した。
２）培養液を取り除きＰＢＳ（phosuphate-buffered saline(pH7.4)）で1回洗浄後プレート上に残ったバイオフィルムに200μLのＰＢＳを加え、さらにＣ８〜１6ガラクトシド混合物を0.1％になるように添加した後30℃で24時間放置した。
３）ＰＢＳを取り除いた後、残存しているバイオフィルムを実施例１の方法と同様に染色し、定量した。
なお、コントロールとして、Ｃ８〜１6ガラクトシド混合物を添加せずに同様の操作をした。
結果を表４に示す。ここでバイオフィルム量は、コントロールを１００とした場合の比率で示した。 Example 4 Removal effect of biofilm (1) Test strain Pseudomonas aeruginosa NBRC 13725
Serratia bacteria (Serratia marcescens NBRC 12648)
Staphylococcus aureus NBRC 13276
(2) Experimental method The test strain was diluted 100 times after shaking culture (30 ° C., 700 rpm, all day and night) in LB medium (Wako Pure Chemical Industries) (600 μL / well) using a 24-well microplate. Liquid.
The biofilm was prepared and the removal effect was evaluated as follows.
1) Using a 96-well microplate (round bottom) of PVC (polyvinyl alcohol chloride), inoculate 10 μL of the test bacterial solution into MHB medium (Mura Hinton liquid medium, Difco) (100 μL / well) at 30 ° C. for 24 hours. The culture was stationary.
2) Remove the culture solution, wash once with PBS (phosuphate-buffered saline (pH 7.4)), add 200 μL of PBS to the biofilm remaining on the plate, and add C8-16 galactoside mixture to 0.1%. After the addition, it was left at 30 ° C. for 24 hours.
3) After removing PBS, the remaining biofilm was stained and quantified in the same manner as in Example 1.
As a control, the same operation was performed without adding the C8-16 galactoside mixture.
The results are shown in Table 4. Here, the amount of biofilm is shown as a ratio when the control is 100.

Claims (1)

下記式（Ａ）：
で表され、
Ｒがラウリル基、Ｇがガラクトース由来の残基、ｍが０、ｎが１〜３の数であるα−及び／又はβ−ラウリルガラクトシド、
Ｒがラウリル基、Ｇがガラクトース由来の残基、ｍが３、ｎが１〜３の数であるβ−トリオキシエチレンラウリルガラクトシド、
Ｒが炭素数８〜１６のアルキル基、Ｇがグルコース由来の残基、ｍが０、ｎが１〜３の数であるＣ８〜Ｃ１６グルコシド混合物、及び
Ｒが炭素数８〜１６のアルキル基、Ｇがガラクトース由来の残基、ｍが０、ｎが１〜３の数であるＣ８〜Ｃ１６ガラクトシド混合物
からなる群から選ばれ少なくとも１種である化合物を含有するバイオフィルム抑制・除去剤。 The following formula (A):
Represented by
Α- and / or β-lauryl galactoside, wherein R is a lauryl group, G is a residue derived from galactose, m is 0, and n is a number from 1 to 3,
Β-trioxyethylene lauryl galactoside, wherein R is a lauryl group, G is a residue derived from galactose, m is 3, and n is a number from 1 to 3,
R is an alkyl group having 8 to 16 carbon atoms, G is a residue derived from glucose, m is 0, and a C8 to C16 glucoside mixture in which n is a number from 1 to 3, and
C8-C16 galactoside mixture wherein R is an alkyl group having 8 to 16 carbon atoms, G is a residue derived from galactose, m is 0, and n is 1 to 3
A biofilm inhibiting / removing agent comprising at least one compound selected from the group consisting of: