JP5274431B2 - Tie2 activator, vascular maturation, normalization or stabilization agent, lymphatic vessel stabilizer, wrinkle prevention / improving agent and swelling improvement / prevention agent - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new Tie2-activating agent, an agent for maturing, normalizing or stabilizing a blood vessel and a lymphatic vessel-stabilizing agent, each comprising the activating agent, and a wrinkle-preventing/ameliorating agent and a dropsy-ameliorating/preventing agent. <P>SOLUTION: The Tie2-activating agent comprises one or more compounds selected from the group consisting of Eleutheroside E, Eleutheroside E1, Sesamin, Eudesmine, Sylvatesmin, Pinoresinol, Yangambin, Forsythinol and Coumarine. The agent for maturing, normalizing or stabilizing a blood vessel and the lymphatic vessel-stabilizing agent each comprise the activating agent. The wrinkle-preventing/ameliorating agent and the dropsy-ameliorating/preventing agent each comprise the agent. <P>COPYRIGHT: (C)2011,JPO&amp;INPIT

Description

本発明は、エレウテロシドＥ（Eleutheroside）、エレウテロシドＥ１、セサミン（Sesamin）、ユーデスミン（Eudesmine）、シルバテスミン（Sylvatesmin）、ピノレジノール（Pinoresinol）、ヤンガンビン（Yangambin）、フォルシチノール（Forsythinol）及びクマリン（Coumarine）から成る群から選択される１又は複数種の化合物から成る新規なTie2（Tyrosine Kinase with Ig and EGF Homology Domain 2）活性化剤（Tie2リン酸化剤）、血管の成熟化、正常化若しくは安定化剤、リンパ管安定化剤、並びにしわ防止・改善剤及びむくみ改善・予防剤を提供する。   The present invention includes Eleutheroside E, Eleutheroside E1, Sesamin, Eudesmine, Sylvatesmin, Pinoresinol, Yangambin, Forsythinol, and Coumarin. A novel Tie2 (Tyrosine Kinase with Ig and EGF Homology Domain 2) activator (Tie2 phosphorylating agent) consisting of one or more compounds selected from the group consisting of: vascular maturation, normalization or stabilization, Provided are a lymphatic vessel stabilizer, a wrinkle prevention / improvement agent, and a swelling improvement / prevention agent.

血管は血管内皮細胞に対して、血管内皮細胞の外腔面から、血管壁細胞と総称される血管平滑筋細胞やペリサイトが、細胞外マトリックスを介して、あるいは直接的に接着している。血管径の大きさによっては内皮細胞と壁細胞の接着する比率が異なり、大血管系では、１層の内皮細胞に、複数層の壁細胞が裏打ちしており、中、小血管では、内皮細胞１細胞に壁細胞が１細胞裏打ちするものが多く、また、さらに径の細い血管では、１個の壁細胞が複数の内皮細胞に接着している。このように、壁細胞が血管内皮細胞に対し裏打ちすることは血管の構造的な「成熟化」過程にとって重要である。また、血管内皮細胞同士の接着により、血管内環境因子（細胞および液性因子）が容易には血管外に漏出しないような内皮細胞間の接着斑を形成することが、機能的な血管の「成熟化」過程にとって重要である。さらに、組織の酸素や栄養分の需要に応じて、とくにそれらが不足する際には、血管は管腔を拡大化させることで血流を増加させ、酸素、養分を組織に十分に行き渡らせるように調節する。つまり、血管内皮細胞同士が接着斑を形成することで透過性を制御し、血管内皮細胞が壁細胞の裏打ちを伴うことにより構造的安定化させ、血管腔を大中小に制御していく過程を、「血管成熟化」と定義する。   In the blood vessel, vascular smooth muscle cells and pericytes collectively called vascular wall cells are adhered to the vascular endothelial cells via the extracellular matrix or directly from the outer surface of the vascular endothelial cells. The ratio of adhesion between endothelial cells and wall cells differs depending on the size of the blood vessel diameter. In the large vascular system, one layer of endothelial cells is lined with multiple layers of wall cells. In many cases, one wall cell is lined with one cell, and in a blood vessel having a smaller diameter, one wall cell adheres to a plurality of endothelial cells. Thus, the lining of wall cells against vascular endothelial cells is important for the structural “maturation” process of blood vessels. In addition, adhesion between vascular endothelial cells can form adhesion spots between endothelial cells so that intravascular environmental factors (cells and humoral factors) do not easily leak out of the blood vessel. It is important for the “maturation” process. Furthermore, depending on the demand for oxygen and nutrients in the tissue, especially when they are deficient, the blood vessels increase blood flow by expanding the lumen so that oxygen and nutrients can be adequately distributed to the tissue. Adjust. In other words, the process of controlling the permeability by controlling adhesion by forming adhesion spots between vascular endothelial cells, structurally stabilizing vascular endothelial cells with wall cell lining, and controlling the vascular cavity to large, medium and small , Defined as “blood vessel maturation”.

また、種々の病態では、構造の乱れた血管が構築され、内皮細胞同士の接着が抑制されたり、壁細胞の内皮細胞への接着が欠損した未熟な血管が形成されている。これらが無秩序な血管透過性の亢進を招くことで、組織内と血管内の液性因子や細胞の交通が異常となる。透過性が亢進すれば組織浮腫が生じ、組織の機能不全の原因となり、また炎症細胞の浸潤が無秩序に生じることで炎症を招く。さらに壁細胞は既存の血管からの血管の発芽を抑制していることから、壁細胞の伴わない血管からは血管の発芽が過剰となり、無秩序な血管の発芽が誘導され病態の悪化をもたらす。このような現象は、糖尿病性網膜症や腫瘍、炎症に代表される病態で観察される。つまり、血管透過性の破たんした血管や血管の無秩序な増生をまねくような異常な血管を、内皮細胞同士の接着をたかめ、壁細胞の内皮細胞への裏打ちを促進することにより、血管を正常な状態にすることを「血管正常化」と定義する。また、上記のような異常な血管は、糖尿病、高脂血症、高血圧などにより、血流内外環境因子の変化が内皮細胞や壁細胞に障害（細胞死など）を与えたり、がんや炎症により血管新生促進因子の過度の産生上昇が引き金になって生じる。このような病態が発生した際に、既存の血管に対する障害を抑制し、内皮細胞同士の解離を抑制したり、内皮細胞と壁細胞の解離を抑制することを「血管安定化」と定義する。また、この安定化には内皮細胞の細胞死を抑制する機構も含まれる。   In various pathological conditions, blood vessels with disordered structures are constructed, and immature blood vessels are formed in which adhesion between endothelial cells is suppressed or adhesion of wall cells to endothelial cells is lost. These cause disordered increase in vascular permeability, thereby causing abnormal humoral factors and cellular traffic in the tissues and blood vessels. Increased permeability causes tissue edema, causes tissue dysfunction, and causes inflamed inflammatory cell infiltration, resulting in inflammation. Furthermore, since mural cells suppress sprouting of blood vessels from existing blood vessels, sprouting of blood vessels becomes excessive from blood vessels not accompanied by mural cells, and disordered sprouting of blood vessels is induced, resulting in worsening of the disease state. Such a phenomenon is observed in pathological conditions represented by diabetic retinopathy, tumor, and inflammation. In other words, blood vessels that have broken vascular permeability and abnormal blood vessels that cause disordered growth of blood vessels are promoted by lining the endothelial cells to the endothelial cells by increasing adhesion between the endothelial cells, thereby making the blood vessels normal. The state is defined as “normalization of blood vessels”. In addition, abnormal blood vessels such as those described above may cause changes in the internal and external blood flow factors, such as diabetes, hyperlipidemia, and hypertension, which may cause damage (cell death, etc.) to endothelial cells and mural cells, and cancer and inflammation. This triggers an excessive increase in the production of angiogenesis-promoting factors. When such a pathological condition occurs, it is defined as “blood vessel stabilization” to suppress damage to existing blood vessels, suppress dissociation of endothelial cells, or suppress dissociation of endothelial cells and wall cells. This stabilization also includes a mechanism for suppressing cell death of endothelial cells.

血管新生とは既存の血管から新たな血管のネットワークが形成される現象であり、腫瘍、慢性関節リウマチ、糖尿病網膜症、高脂血症、高血圧などの血管病変を主体とした疾患と深く関わっている。VEGF（vascular endothelial growth factor:血管内皮細胞増殖因子）が分子クローニングされたのを皮切りに血管形成に特異的に作用する因子としてVEGFファミリーとアンジオポエチン（angiopoietin；Ang）ファミリーの分子が次々に同定されてきた。VEGFとその受容体は脈管形成とよばれる血管の初期発生からその後の血管新生に至るまで非常に広い範囲の血管形成に関与する。一方、Angは脈管形成後、血管内皮細胞による発芽、分枝、嵌入、退縮などの細胞現象を伴った管腔形成において機能する。Angは血管内皮細胞に発現する受容体型チロシンキナーゼTie-2を介し、血管内皮細胞と、周皮細胞（ペリサイト）や血管平滑筋細胞のような血管壁細胞との接着を制御し、血管の構造的安定化に機能している（非特許文献１：実験医学 Vol.20, No.8 (2002) pp.52-57）。   Angiogenesis is a phenomenon in which a new blood vessel network is formed from existing blood vessels, and is deeply related to diseases mainly consisting of vascular lesions such as tumors, rheumatoid arthritis, diabetic retinopathy, hyperlipidemia, and hypertension. Yes. Beginning with the molecular cloning of VEGF (vascular endothelial growth factor), the VEGF family and angiopoietin (Angopoietin; Ang) family molecules have been identified one after another as factors that act specifically on angiogenesis. It was. VEGF and its receptors are involved in a very wide range of angiogenesis, from the initial development of blood vessels called angiogenesis to subsequent angiogenesis. On the other hand, Ang functions in luminal formation accompanied by cellular phenomena such as germination, branching, insertion, and retraction by vascular endothelial cells after angiogenesis. Ang regulates adhesion between vascular endothelial cells and vascular wall cells such as pericytes (pericytes) and vascular smooth muscle cells via the receptor tyrosine kinase Tie-2 expressed in vascular endothelial cells. It functions in structural stabilization (Non-patent Document 1: Experimental Medicine Vol.20, No.8 (2002) pp.52-57).

これまでにAng-1〜4までの４つのアイソフォームが知られ、Ang-1, Ang-2はヒト、マウスいずれにも存在するが、Ang-3はマウス、Ang-4はヒトに存在する。壁細胞から分泌されたAng-1,-4はTie-2を刺激し細胞内チロシンキナーゼドメインの自己リン酸化を惹起し、インテグリンの活性化、焦点接着キナーゼ（focal adhesion kinase; FAK）の活性化、PI3K/Akt（phosphatidylinositol-3-kinase；PI3K, serine-threonine kinase: Akt）の活性化を伴い、内皮細胞と壁細胞の接着を誘導する。正酸素状態では内皮細胞は壁細胞が恒常的に分泌するAng-1,-4により内皮細胞-壁細胞間の接着が維持されているが、局所的に低酸素状態が生じると、Ang-1,-4のアンタゴニストであるAng-2,-3の産生が高まり、Tie2の活性化を一時的に抑制し、内皮細胞とそれを裏打ちした壁細胞の接着が抑制される。そして壁細胞の解離により内皮細胞は増殖し発芽的血管新生を開始し、新しい血管網の形成に至る。Tie2の活性化は内皮細胞と壁細胞の接着を誘導することで、血管構造の安定化に寄与し、また、内皮細胞同士の接着を促進して血管透過性を制御する。また、Tie2の活性化は、内皮細胞の細胞死を抑制することも知られていることから（非特許文献２：Cho CH, Kammerer RA, Lee HJ, Yasunaga K, Kim KT, Choi HH, Kim W, Kim SH, Park SK, Lee GM, Koh GY. Designed angiopoietin-1 variant, COMP-Ang1, protects against radiation-induced endothelial cell apoptosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 Apr 13;101(15):5553-8）、種々の細胞内外の血管構造を破たんさせる環境因子に対しては、Tie2の活性化を誘導して、血管の不安定化を抑制して、血管を安定化および正常化させることが可能である。また、血管再生医療において、血管内皮細胞によって構築された血管においては、Tie2の活性化を誘導することにより、内皮細胞と壁細胞の接着を誘導して血管の成熟化が可能である。また、腫瘍や糖尿病性網膜症などで観察される、壁細胞が内皮細胞に接着しないことによる無秩序な血管が増生するような疾患では、Tie2の活性化により、壁細胞を内皮細胞に接着させ、血管を正常化させることが可能である。また文献によれば（非特許文献３：Thurston G, Suri C, Smith K, McClain J, Sato TN, Yancopoulos GD, McDonald DM. Leakage-resistant blood vessels in mice transgenically overexpressing angiopoietin-1. Science. 1999 Dec 24;286(5449):2511-4）、Tie2の活性化は、血管腔を拡大化することが報告されており、血管狭小化あるいは血管拡大化の抑制が原因となって生じる虚血性疾患においてはTie2の活性化により、血管腔を拡大化して病態の改善を図ることが可能である。   So far, four isoforms from Ang-1 to 4 are known, Ang-1 and Ang-2 exist in both humans and mice, but Ang-3 exists in mice and Ang-4 exists in humans. . Ang-1, -4 secreted from mural cells stimulates Tie-2 and induces autophosphorylation of intracellular tyrosine kinase domain, integrin activation, focal adhesion kinase (FAK) activation Involves activation of PI3K / Akt (phosphatidylinositol-3-kinase; PI3K, serine-threonine kinase: Akt) and induces adhesion between endothelial cells and mural cells. In normoxia, endothelial cells maintain their adhesion between endothelial cells and mural cells by Ang-1, -4, which is constantly secreted by mural cells, but when hypoxia occurs locally, Ang-1 , -4 antagonist Ang-2, -3 production is increased, Tie2 activation is temporarily suppressed, and adhesion between endothelial cells and wall cells lining it is suppressed. Endothelial cells proliferate by the dissociation of mural cells and initiate sprouting angiogenesis, leading to the formation of new vascular networks. Tie2 activation induces adhesion between endothelial cells and mural cells, thereby contributing to the stabilization of the vascular structure, and promotes adhesion between endothelial cells to control vascular permeability. In addition, Tie2 activation is also known to suppress cell death of endothelial cells (Non-patent Document 2: Cho CH, Kammerer RA, Lee HJ, Yasunaga K, Kim KT, Choi HH, Kim W , Kim SH, Park SK, Lee GM, Koh GY.Designed angiopoietin-1 variant, COMP-Ang1, protects against radiation-induced endothelial cell apoptosis.Proc Natl Acad Sci US A. 2004 Apr 13; 101 (15): 5553- 8) In response to environmental factors that disrupt vascular structures inside and outside cells, it is possible to induce Tie2 activation to suppress vascular destabilization and stabilize and normalize blood vessels It is. In blood vessel regenerative medicine, in blood vessels constructed by vascular endothelial cells, by inducing Tie2 activation, adhesion between endothelial cells and wall cells can be induced to mature blood vessels. In addition, in diseases such as tumors and diabetic retinopathy, where disordered blood vessels grow due to the inability of mural cells to adhere to endothelial cells, activation of Tie2 causes mural cells to adhere to endothelial cells, It is possible to normalize blood vessels. According to the literature (Non-Patent Document 3: Thurston G, Suri C, Smith K, McClain J, Sato TN, Yancopoulos GD, McDonald DM. Leakage-resistant blood vessels in mice transgenically overexpressing angiopoietin-1. Science. 1999 Dec 24 286 (5449): 2511-4), Tie2 activation has been reported to enlarge the vascular lumen, and in ischemic diseases caused by vascular narrowing or suppression of vasodilation By activating Tie2, it is possible to enlarge the vascular cavity and improve the disease state.

また最近ではAngの構造上の特徴であるcoiled-coiledドメインとfibrinogen-likeドメインを有する複数の分子が発見されている。これらはいずれもTie-1受容体、Tie-2受容体に結合能を示さないため、既存のAngファミリーとは異なる分子群とみなされ、アンジオポエチン様因子（Angiopoietin-like protein; Angptl）と命名され、Angptl-1,-2,-3,-4,-5,-6,-7が報告されている。いずれのAngptlも受容体は現時点では同定されていないオーファンリガンドであるが、これらにも多様な作用を示すことが期待される。   Recently, several molecules with coiled-coiled and fibrinogen-like domains, which are structural features of Ang, have been discovered. None of these have binding ability to Tie-1 receptor and Tie-2 receptor, so they are regarded as a different molecular group from the existing Ang family and named Angiopoietin-like protein (Angptl). Angptl-1, -2, -3, -4, -5, -6, -7 have been reported. All Angptl receptors are orphan ligands whose receptors have not been identified at the present time, but they are also expected to exhibit various actions.

血管内皮細胞以外ではTie2の活性化は細胞の休眠状態を誘導することが知られている。これまでの報告によると、造血幹細胞上のTie2の活性化が造血幹細胞の休眠を誘導することが報告されている（非特許文献４：Arai F, Hirao A, Ohmura M, Sato H, Matsuoka S, Takubo K, Ito K, Koh GY, Suda T. Tie2/angiopoietin-1 signaling regulates hematopoietic stem cell quiescence in the bone marrow niche. Cell. 2004 Jul 23;118(2):149-61）。つまり、Tie2の活性化を誘導することで、造血幹細胞の試験管内での生存を長期維持できることが可能となる。また、これまでの報告によれば、Tie2の活性化がインテグリンなどの接着因子の活性化により、細胞外マトリックスなどへの細胞の接着を誘導することが知られている（非特許文献５：Takakura N, Huang XL, Naruse T, Hamaguchi I, Dumont DJ, Yancopoulos GD, Suda T. Critical role of the TIE2 endothelial cell receptor in the development of definitive hematopoiesis. Immunity. 1998 Nov;9(5):677-86）。このような細胞接着の誘導により、Tie2の活性化によって造血幹細胞は足場依存的な生存維持が生体内外で誘導可能となると考えられる。さらに、近年の報告によると、がんの組織中に存在する最も悪性度の高いとされ、がんの再発に関与するとされているがん幹細胞において、Tie2の発現が示唆されてきている（非特許文献６：Lee OH, Xu J, Fueyo J, Fuller GN, Aldape KD, Alonso MM, Piao Y, Liu TJ, Lang FF, Bekele BN, Gomez-Manzano C. Expression of the receptor tyrosine kinase Tie2 in neoplastic glial cells is associated with integrin beta1-dependent adhesion to the extracellular matrix. Mol Cancer Res. 2006 Dec;4(12):915-26）。Tie2の活性化が、造血幹細胞の細胞周期を休眠状態に陥らせることが可能なように、がん幹細胞に発現するTie2の活性化によっても、がん幹細胞の増殖を抑制することが可能である。   Except for vascular endothelial cells, Tie2 activation is known to induce cell dormancy. According to previous reports, it has been reported that activation of Tie2 on hematopoietic stem cells induces dormancy of hematopoietic stem cells (Non-patent Document 4: Arai F, Hirao A, Ohmura M, Sato H, Matsuoka S, Takubo K, Ito K, Koh GY, Suda T. Tie2 / angiopoietin-1 signaling regulates hematopoietic stem cell quiescence in the bone marrow niche. Cell. 2004 Jul 23; 118 (2): 149-61). That is, by inducing activation of Tie2, it is possible to maintain the long-term survival of hematopoietic stem cells in vitro. In addition, according to previous reports, it is known that activation of Tie2 induces cell adhesion to an extracellular matrix or the like by activation of an adhesion factor such as integrin (Non-patent Document 5: Takakura). N, Huang XL, Naruse T, Hamaguchi I, Dumont DJ, Yancopoulos GD, Suda T. Critical role of the TIE2 endothelial cell receptor in the development of definitive hematopoiesis. Immunity. 1998 Nov; 9 (5): 677-86). By inducing cell adhesion, hematopoietic stem cells can be induced to maintain anchorage-dependent survival in vivo and externally by activation of Tie2. Furthermore, recent reports have suggested that Tie2 is expressed in cancer stem cells that are considered to be the most malignant in cancer tissues and are involved in cancer recurrence (non- Patent Document 6: Lee OH, Xu J, Fueyo J, Fuller GN, Aldape KD, Alonso MM, Piao Y, Liu TJ, Lang FF, Bekele BN, Gomez-Manzano C. Expression of the receptor tyrosine kinase Tie2 in neoplastic glial cells is associated with integrin beta1-dependent adhesion to the extracellular matrix. Mol Cancer Res. 2006 Dec; 4 (12): 915-26). Just as activation of Tie2 can put the cell cycle of hematopoietic stem cells into a dormant state, activation of Tie2 expressed in cancer stem cells can also suppress the growth of cancer stem cells. .

血管系とは別個に組織液の排水路を形成するものがリンパ管である。リンパ管は、末梢組織で血管から漏出した間質液、タンパク質、脂肪、細胞などを血管系へと環流することにより血液量を一定に保ち、閉鎖循環系を維持する。皮膚に存在する毛細血管では、内皮細胞の外側を基底膜が取り囲み、さらに周皮細胞が付着している。一方、毛細リンパ管では、内皮細胞の外には基底膜がほとんどなく、周皮細胞の付着もない。この構造が、効率よく間質から体液や細胞を取り込むために役立っている（非特許文献７：実験医学 Vol. 24, No. 18 (2006), pp. 133-138）。これまでに、チロシナーゼ型受容体VEGFR(vascular endothelial growth factor receptor)-3がリンパ管内皮細胞に特異的に発現することが示され、そのリガンドであるVEGF-CおよびVEGF-Dがリンパ管の新生を誘導することが示された。また、VEGF-Aはリンパ管内皮細胞に発現するVEGFR2を介してリンパ管新生を誘導していることが明らかになった（非特許文献８：Jussila L and Alitalo K, (2006) Vascular growth factors and lymphangiogenesis. Phisiol Rev 82:673-700）。さらに、リンパ管の機能に関しては、以下の報告がある。VEGF-Aを発現するアデノウイルスを感染させたマウス耳では、顕著なリンパ管新生が見られたが、構造的な異常とともに、コロイダルカーボンを耳に注入した実験から、リンパ管の回収機能も顕著に阻害されていることが明らかになった（非特許文献９：Nagy et al., (2002) Vascular permeability factor/ vascular endothelial growth factor induces lymphangiogenesis as well as angiogenesis. J Exp Med 196: 1497-1506）。つまり、リンパ管の機能にはリンパ管内皮細胞が適切に配置して裏打ちされていることが必要であると考えられる。これをわれわれは「リンパ管の安定化」と定義する。   A lymphatic vessel forms a drainage path for tissue fluid separately from the vascular system. The lymphatic vessels maintain a closed circulatory system by keeping the blood volume constant by circulating interstitial fluid, proteins, fats, cells, and the like leaked from the blood vessels in the peripheral tissues to the vascular system. In the capillaries existing in the skin, the basement membrane surrounds the outside of the endothelial cells, and pericytes are further attached. On the other hand, in capillary lymphatic vessels, there is almost no basement membrane outside the endothelial cells, and pericytes are not attached. This structure is useful for efficiently taking in body fluids and cells from the interstitium (Non-patent Document 7: Experimental Medicine Vol. 24, No. 18 (2006), pp. 133-138). So far, tyrosinase-type receptor VEGFR (vascular endothelial growth factor receptor) -3 has been shown to be specifically expressed in lymphatic endothelial cells, and its ligands VEGF-C and VEGF-D have been shown to form new lymph vessels. It was shown to induce In addition, VEGF-A was found to induce lymphangiogenesis via VEGFR2 expressed in lymphatic endothelial cells (Non-patent Document 8: Jussila L and Alitalo K, (2006) Vascular growth factors and lymphangiogenesis. Phisiol Rev 82: 673-700). Furthermore, regarding the function of lymphatic vessels, there are the following reports. In mouse ears infected with adenovirus expressing VEGF-A, remarkable lymphangiogenesis was observed, but along with the structural abnormalities, lymphoid recovery function was also remarkable from experiments in which colloidal carbon was injected into the ear (Non-patent document 9: Nagy et al., (2002) Vascular permeability factor / vascular endothelial growth factor induces lymphangiogenesis as well as angiogenesis. J Exp Med 196: 1497-1506). That is, it is considered that lymphatic endothelial cells must be appropriately arranged and lined for the function of lymphatic vessels. We define this as "lymphatic vessel stabilization".

皮膚に対する物理的あるいは化学的刺激は血管新生やVEGF-Aなどによる血管透過性を誘導して、この結果組織液の貯留と浮腫が生じる。一方で、これらの刺激は直接的にリンパ管の新生・拡張を誘導することも知られている。これまでに、紫外線炎症によってリンパ管の拡張が観測され、染料を注入した実験からリンパ管の機能が障害されていることが明らかになった。血管拡張に伴う水分の真皮内への漏出にともない、リンパ管は拡張して間質液を回収しようとしていると考えられる。しかしながら、過剰なリンパ管の拡張はその回収機能を逆に低下させ浮腫を遅延していると考えられた（非特許文献１０：Kajiya K., Hirakawa S., and Detmar M., (2006) VEGF-A mediates UVB-induced impairment of lymphatic vessel function. Am J Pathol 169: 1496-1503）。つまり、組織間液の速やかな回収には、リンパ管の過剰な拡張を誘導しないような“リンパ管の安定化”が必要であると考えられる。   Physical or chemical stimulation to the skin induces angiogenesis and vascular permeability such as by VEGF-A, resulting in fluid retention and edema. On the other hand, these stimuli are also known to directly induce lymphangiogenesis and expansion. So far, lymphatic dilation has been observed due to ultraviolet inflammation, and experiments with dye injection have revealed that lymphatic function is impaired. It is considered that lymphatic vessels are expanding and collecting interstitial fluid as water leaks into the dermis due to vasodilation. However, excessive lymphatic dilation was thought to reverse the recovery function and delay edema (Non-Patent Document 10: Kajiya K., Hirakawa S., and Detmar M., (2006) VEGF. -A mediates UVB-induced impairment of lymphatic vessel function. Am J Pathol 169: 1496-1503). That is, it is considered that “stabilization of lymphatic vessels” that does not induce excessive expansion of lymphatic vessels is necessary for rapid recovery of interstitial fluid.

これまでに、リンパ管の機能不全が関与する病態としては、先天性リンパ浮腫とともに、フィラリア、手術、悪性腫瘍、炎症にともなう二次性のリンパ浮腫、が知られている。先天性のリンパ浮腫としてはMilroy病、Meige病、lymphedema-distichiasis症候群がある。Milroy病ではリンパ管の無形成や低形成が報告され、一方でlymphedema-distichiasis症候群ではリンパ管の過形成が報告されている。これらからも、リンパ管の新生だけではなくリンパ管の安定化によって回収機能を保持することが必要であると考えられる（非特許文献１１：実験医学 Vol. 24, No. 18 (2006), pp. 139-143）。   So far, pathological conditions involving dysfunction of lymphatic vessels are known to include congenital lymphedema as well as filaria, surgery, malignant tumors, and secondary lymphedema associated with inflammation. Congenital lymphedema includes Milroy disease, Meige disease, and lymphedema-distichiasis syndrome. Milroy's disease has been reported to be aplastic and hypoplastic, while lymphedema-distichiasis syndrome has been reported to be hyperplastic. From these, it is considered necessary to maintain the recovery function not only by lymphatic neoplasia but also by stabilizing the lymphatic vessels (Non-patent Document 11: Experimental Medicine Vol. 24, No. 18 (2006), pp. 139-143).

実験医学 Vol.20, No.8 (2002) pp.52-57Experimental Medicine Vol.20, No.8 (2002) pp.52-57 Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 Apr 13;101(15):5553-8Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 Apr 13; 101 (15): 5553-8 Science. 1999 Dec 24;286(5449):2511-4Science. 1999 Dec 24; 286 (5449): 2511-4 Cell. 2004 Jul 23;118(2):149-61Cell. 2004 Jul 23; 118 (2): 149-61 Immunity. 1998 Nov;9(5):677-86Immunity. 1998 Nov; 9 (5): 677-86 Mol Cancer Res. 2006 Dec;4(12):915-26Mol Cancer Res. 2006 Dec; 4 (12): 915-26 実験医学 Vol. 24, No. 18 (2006), pp. 133-138Experimental Medicine Vol. 24, No. 18 (2006), pp. 133-138 Phisiol Rev 82:673-700Phisiol Rev 82: 673-700 J Exp Med 196: 1497-1506J Exp Med 196: 1497-1506 Am J Pathol 169: 1496-1503Am J Pathol 169: 1496-1503 実験医学 Vol. 24, No. 18 (2006), pp. 139-143Experimental Medicine Vol. 24, No. 18 (2006), pp. 139-143

本発明の課題は、新規なTie2活性化剤の提供、延いては、血管の成熟化、正常化、安定化剤、並びに、リンパ管の安定化を図り、リンパ管の回収機能を維持・亢進するのに有効な薬剤の提供にある。   The object of the present invention is to provide a novel Tie2 activator, and in turn to maintain and enhance the recovery function of the lymphatic vessel by stabilizing the vascular maturation, normalization, stabilizing agent and lymphatic vessel To provide an effective medicine to do.

紫外線Bの照射を受けた皮膚組織中での挙動について詳細に検討したところ、紫外線照射により内皮細胞と壁細胞の接着が抑制され、Tie2のリン酸化（活性化）が抑制された状態に誘導されること、そして、Tie2を強制発現した細胞に様々な生薬エキスを作用させて検討した実験から、ニッケイ（Cinnamomum)属植物由来のケイシ抽出物等にはTie2を活性化する作用があること、が見出されている（国際公開番号WO2009/123211）。また、同特許公報では、紫外線Bの照射により光老化を惹起させたマウス皮膚にケイシ抽出物を塗布した結果、同抽出物を塗布することにより改善作用が具体的に示されている。このように、同抽出物はTie2リン酸化により内皮細胞―壁細胞間の接着を改善、促進し、安定な血管構造を形成し、延いてはUVB誘導性の皮膚損傷およびしわ形成を回復することが確認されている。従って、Tie2活性化が血管の成熟化、正常化又は安定化に寄与していることが明らかにされている。   A detailed study of the behavior in the skin tissue irradiated with ultraviolet B revealed that adhesion of endothelial cells and wall cells was suppressed by ultraviolet irradiation, and Tie2 phosphorylation (activation) was suppressed. And, from experiments examined by acting various herbal extracts on cells that forcedly express Tie2, the extract of Cinnamomum genus plants has the effect of activating Tie2. Has been found (International Publication No. WO2009 / 123211). Further, in the same patent publication, as a result of applying a cinnamon extract to mouse skin that has been photoaged by irradiation with ultraviolet B, the improvement effect is specifically shown by applying the extract. Thus, the extract improves and promotes adhesion between endothelial cells and mural cells by Tie2 phosphorylation, forms a stable vascular structure, and thus restores UVB-induced skin damage and wrinkle formation. Has been confirmed. Therefore, it has been clarified that Tie2 activation contributes to vascular maturation, normalization or stabilization.

一方、Tie2とリンパ管との関係についてAng-1とリンパ管内皮細胞で発現しているTie2との関係に着目してAng-1の機能についてリンパドレナージュアッセイにより調べた結果、Ang-1はTie2の活性化を介してリンパ管の回収機能を促進することが明らかとされている（国際出願番号PCT/JP2009/061047）。従って、Tie2活性化は、血管の成熟化、正常化又は安定化のみならず、リンパ管の安定化に寄与しリンパの流れを促進することが明らかにされている。   On the other hand, as a result of investigating the function of Ang-1 by lymph drainage assay focusing on the relationship between Ang-1 and Tie2 expressed in lymphatic endothelial cells, the relationship between Tie2 and lymphatic vessels It has been clarified that the recovery function of lymphatic vessels is promoted through the activation of PCT (International Application No. PCT / JP2009 / 061047). Therefore, it has been clarified that Tie2 activation contributes not only to vascular maturation, normalization or stabilization but also to lymphatic vessel stabilization and promotes lymph flow.

本発明者がTie2活性化能を有する様々な薬剤についてスクリーニングを行ったところ、調べた薬剤のうちで、エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール、クマリンがTie2活性を有することを見出し、以下の発明を完成するに至った：
（１）エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンから成る群から選択される１又は複数種の化合物から成るTie2活性化剤。
（２）エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンから成る群から選択される１又は複数種の化合物から成る血管の成熟化、正常化又は安定化剤。
（３）（２）の血管の成熟化、正常化又は安定化剤、を含んで成るしわ防止・改善剤。
（４）（２）の血管の成熟化、正常化又は安定化剤を被験者に適用することからなる、しわを防止・改善するための美容学的方法。
（５）エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンから成る群から選択される１又は複数種の化合物から成るリンパ管の安定化剤。
（６）（５）のリンパ管安定化剤を含んで成るむくみ改善・予防剤。
（７）（５）のリンパ管の安定化剤を被験者に適用することからなる、むくみを改善又は予防するための美容学的方法。 When the present inventor screened for various drugs having Tie2 activation ability, among the drugs examined, eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, Yangan bin, forcytinol, and coumarin are Tie2 It has been found to have activity and has led to the completion of the following invention:
(1) A Tie2 activator comprising one or a plurality of compounds selected from the group consisting of eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, forcytinol and coumarin.
(2) Maturation, normalization, or stabilization of blood vessels composed of one or more compounds selected from the group consisting of eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, forcytinol and coumarin. .
(3) A wrinkle prevention / improving agent comprising the blood vessel maturation, normalization or stabilization agent of (2).
(4) A cosmetic method for preventing or improving wrinkles, comprising applying to the subject the vascular maturation, normalization or stabilizing agent of (2).
(5) A lymphatic stabilizer comprising one or more compounds selected from the group consisting of eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, forcytinol and coumarin.
(6) A swelling improving / preventing agent comprising the lymphatic vessel stabilizer of (5).
(7) A cosmetic method for improving or preventing swelling, comprising applying a lymphatic vessel stabilizer of (5) to a subject.

本発明によれば、エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及び／又はクマリンはTie2を活性化し、それにより血管が成熟化、正常化又は安定化され、そして／あるいはリンパ管が安定化され、その結果しわ、むくみの改善などが図られる。   According to the present invention, eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, forcitinol and / or coumarin activates Tie2, whereby the blood vessels are matured, normalized or stabilized, and / Or lymphatic vessels are stabilized, and as a result, wrinkles and swelling are improved.

エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール又はクマリンを添加した場合の、正常ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（HUVEC）におけるTie2のリン酸化を示すウェスタンブロット図である。It is a Western blot figure which shows the phosphorylation of Tie2 in a normal human umbilical vein vascular endothelial cell (HUVEC) at the time of adding an eleuteroside E, an eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, Yanganbin, forcytinol, or coumarin.

Tie2活性化剤
１つの観点において、本発明はエレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンから成る群から選択される１又は複数種の化合物から成るTie2活性化剤を提供する。 Tie2 Activator In one aspect, the present invention relates to Tie2 activity comprising one or more compounds selected from the group consisting of eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, forcytinol and coumarin. Providing an agent.

エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノールは穀類やゴマの種子の脂質などに含まれる成分であり、抗酸化作用やコレステロール低下作用などの効能などが知られる。エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノールの化学構造式を以下に示す。
クマリンはマメ科、セリ科に由来する芳香化合物としてよく知られる。クマリンの化学構造式を以下に示す。
これらの化合物はいずれも、Tie2活性化、Tie2活性化に伴う血管の成熟化、正常化又は安定化、あるいはリンパ管安定化、延いては、しわ、むくみの改善等の効果を奏することは知られていない。 Eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, and forcitinol are components contained in cereal and sesame seed lipids, and are known to have antioxidative and cholesterol lowering effects. The chemical structural formulas of eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin and forcytinol are shown below.
Coumarin is well known as an aromatic compound derived from legumes and cereals. The chemical structural formula of coumarin is shown below.
All of these compounds are known to have effects such as Tie2 activation, vascular maturation, normalization or stabilization associated with Tie2 activation, or lymphatic vessel stabilization, as well as improvement of wrinkles and swelling. It is not done.

上記化合物はその光学異性体が存在する場合には光学的に純粋なものであってもよいし、光学異性体の混合物であってもよい。また、上記化合物は無機塩又は有機塩であってもよい。塩としては、特に限定されないが、例えば、無機塩としては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。有機塩としては、酢酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、トリエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、アミノ酸塩等が挙げられる。   When the optical isomer exists, the compound may be optically pure or a mixture of optical isomers. In addition, the compound may be an inorganic salt or an organic salt. The salt is not particularly limited, and examples of the inorganic salt include hydrochloride, sulfate, phosphate, hydrobromide, sodium salt, potassium salt, magnesium salt, calcium salt, ammonium salt and the like. . Organic salts include acetate, lactate, maleate, fumarate, tartrate, citrate, methanesulfonate, p-toluenesulfonate, triethanolamine salt, diethanolamine salt, amino acid salt, etc. Can be mentioned.

Tie2の活性化とは、Tie2をリン酸化することでその活性体（リン酸化Tie2）に変換できる能力をいう。Tie2の活性化剤として、アンジオポエチン１(Ang-1)などがTie2を活性化するものとして知られていた。   Activation of Tie2 refers to the ability to convert Tie2 into its active form (phosphorylated Tie2) by phosphorylation. As an activator of Tie2, angiopoietin 1 (Ang-1) has been known to activate Tie2.

エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンは、それ自身単独または組み合わせでTie2活性化剤として使用できる。また、濃度依存的にTie2活性化作用を示すことから、エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンの配合量は、剤として配合される組成物全量中、０．１ｐｐＭ〜１００ｍＭ、好ましくは１ｐｐＭ〜１００ｍＭ、１０ｐｐＭ〜１０ｍＭである。   Eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, forcytinol and coumarin can themselves be used as Tie2 activators alone or in combination. Moreover, since Tie2 activation action is shown in a concentration-dependent manner, the compounding amounts of eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, forcytinol, and coumarin are included in the total amount of the composition formulated as an agent. 0.1 ppM to 100 mM, preferably 1 ppM to 100 mM, 10 ppM to 10 mM.

血管の成熟化、正常化又は安定化剤
別の観点において、本発明は、エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンから成る群から選択される１又は複数種の化合物から成る、血管の成熟化、正常化又は安定化剤を提供する。 Vascular maturation, normalization or stabilizing agent In another aspect, the present invention relates to one or more selected from the group consisting of eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, forcytinol and coumarin. A vascular maturation, normalization or stabilization agent comprising a plurality of compounds is provided.

本発明に係る血管の成熟化、正常化又は安定化剤は、血管の構造変化を原因とする、種々の疾患および老化の予防、改善に有効な医薬品または化粧品として利用できる。本発明の血管の成熟化、正常化又は安定化剤は、血管の正常化、安定化を誘導することにより、種々の炎症性疾患や免疫疾患、成人病など、例えば、種々の感染症、がん、関節リウマチ、痛風、高血圧、糖尿病、動脈硬化症、アトピー性皮膚炎などにおいて、血管新生や血管の破たんを伴う全身の病変部位の改善を図る医薬品として利用できる。また、血管透過性の抑制により、皮膚を含め臓器、器官、各種組織内の浮腫、たとえば炎症性疾患や免疫疾患、成人病による血管浮腫や、紫外線暴露や虫さされ、アレルギーなどによる血管透過性亢進による浮腫やかゆみなどの症状を改善する医薬品または化粧品として利用できる。さらに、Tie2リン酸化剤は、種々の要因によって誘導される内皮細胞の細胞死、たとえば炎症性疾患や免疫疾患、成人病など、例えば、種々の感染症、がん、関節リウマチ、痛風、高血圧、糖尿病、動脈硬化症、または放射線障害、種々の薬剤や紫外線による内皮細胞の細胞死を抑制して、血管の不安定化を抑制できる医薬品または化粧品として利用できる。本発明の血管の成熟化、正常化又は安定化剤は、血管成熟化や血管腔を拡大化することにより、外傷や縟そうなど創傷治癒の促進、血管再生医療における血管の成熟化、虚血性疾患、たとえば脳梗塞や心筋梗塞の改善剤として医薬品に利用でき、また、血流改善効果を利用して、腰痛症、凍傷、脱毛症などに対する内服および外用医薬品としても利用できる。脳血流の増大においては、痴呆症への応用も可能である。脱毛症に対しては、化粧品としての利用も可能である。また、がんにおいては、がん細胞の休眠を誘導する治療薬として、幹細胞においてはその生体内外での維持薬として利用が可能である。   The vascular maturation, normalization or stabilization agent according to the present invention can be used as a pharmaceutical or cosmetic effective for prevention and improvement of various diseases and aging caused by vascular structural changes. The vascular maturation, normalization or stabilization agent of the present invention induces normalization and stabilization of blood vessels, thereby causing various inflammatory diseases, immune diseases, adult diseases, etc., for example, various infectious diseases. It can be used as a drug for improving lesions throughout the body accompanied by neovascularization or vascular rupture in rheumatoid arthritis, gout, hypertension, diabetes, arteriosclerosis, atopic dermatitis, etc. In addition, by suppressing vascular permeability, edema in organs, organs and various tissues including the skin, such as inflammatory and immune diseases, vascular edema due to adult diseases, UV exposure, insect bites, allergies, etc. It can be used as a pharmaceutical or cosmetic to improve symptoms such as edema and itching caused by hypersensitivity. Furthermore, Tie2 phosphorylating agent is a cell death of endothelial cells induced by various factors, for example, inflammatory diseases, immune diseases, adult diseases, such as various infectious diseases, cancer, rheumatoid arthritis, gout, hypertension, It can be used as a pharmaceutical or a cosmetic that can suppress the destabilization of blood vessels by suppressing the death of endothelial cells due to diabetes, arteriosclerosis, radiation damage, various drugs or ultraviolet rays. The vascular maturation, normalization, or stabilizing agent of the present invention promotes wound healing, such as trauma or itch, by vascular maturation or enlargement of the vascular cavity, vascular maturation in revascularization medicine, ischemic It can be used in pharmaceuticals as an ameliorating agent for diseases such as cerebral infarction and myocardial infarction, and can also be used as an internal medicine and external medicine for low back pain, frostbite, alopecia, etc. by utilizing the effect of improving blood flow. In increasing cerebral blood flow, application to dementia is also possible. It can also be used as a cosmetic for alopecia. In cancer, it can be used as a therapeutic agent for inducing dormancy of cancer cells, and in stem cells as a maintenance agent in vivo and in vivo.

光老化とは、一般に日光に対する被曝が繰り返された結果として認められる皮膚の外見及び機能の変化を意味する。日光の構成要素である紫外線（ＵＶ）、特に中間ＵＶ（ＵＶＢと呼ばれる、波長２９０−３２０nm）が主として光老化を引き起こす。光老化を引き起こすのに必要なＵＶＢの被曝量は現在のところ知られていない。しかしながら、紅斑や日焼けを引き起こすレベルでのＵＶＢに対する繰り返しの被曝が、通常光老化に結びつく。臨床的には、光老化は肌荒れ、しわの形成、斑の着色、土色化、たるみの形成、毛細管拡張症の発症、ほくろの発生、紫斑病の発症、傷つき易くなる、萎縮、繊維症的色素除去領域の発生、前悪性腫瘍及び悪性腫瘍の発症等として特定され得る。光老化は普通、顔、耳、頭、首、と手のような、日光に習慣的に曝される皮膚に起こる。皮膚における老化においては、皮膚障害や紫外線に対する暴露による光老化が主因となるが、本Tie2リン酸化剤は、光老化の原因となる血管障害を抑制することにより、光老化の改善に利用できる。   Photoaging refers to changes in the appearance and function of the skin that are generally recognized as a result of repeated exposure to sunlight. Ultraviolet rays (UV), which is a component of sunlight, particularly intermediate UV (wavelength 290-320 nm, called UVB) mainly cause photoaging. The amount of UVB exposure necessary to cause photoaging is currently unknown. However, repeated exposure to UVB at levels that cause erythema and sunburn usually leads to photoaging. Clinically, photoaging is rough skin, wrinkle formation, spot coloration, soil coloration, sagging formation, onset of telangiectasia, development of mole, onset of purpura, vulnerable, atrophy, fibrosis It can be specified as the occurrence of a pigment removal region, the development of a pre-malignant tumor, a malignant tumor, and the like. Photoaging usually occurs in skin that is habitually exposed to sunlight, such as the face, ears, head, neck, and hands. In skin aging, photoaging due to skin damage or exposure to ultraviolet rays is the main cause, but this Tie2 phosphorylating agent can be used to improve photoaging by suppressing vascular damage that causes photoaging.

リンパ管安定化剤
別の観点において、本発明は、エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンから成る群から選択される１又は複数種の化合物から成る、リンパ管の安定化剤を提供する。 Lymphatic vessel stabilizer In another aspect, the present invention comprises one or more compounds selected from the group consisting of eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, forcytinol and coumarin. Provide lymphatic vessel stabilizers.

本発明に係るリンパ管安定化剤はリンパ管の構造の不安定化を原因とするリンパ液の漏出による様々な皮膚疾患、例えば浮腫（むくみ）の治療・予防に有効な医薬品または化粧品として利用できる。浮腫には、例えば紫外線照射、フィラリア、手術、悪性腫瘍、炎症にともなう二次性のリンパ浮腫や、先天性リンパ浮腫、例えばMilroy病、Meige病、lymphedema-distichiasis症候群がある。   The lymphatic vessel stabilizer according to the present invention can be used as a pharmaceutical or cosmetic effective for the treatment / prevention of various skin diseases such as edema (swelling) caused by leakage of lymph due to instability of the structure of lymphatic vessels. Examples of edema include secondary lymphedema associated with ultraviolet irradiation, filaria, surgery, malignancy, inflammation, and congenital lymphedema, such as Milroy disease, Meige disease, and lymphedema-distichiasis syndrome.

本発明に係るTie2活性化剤、血管の成熟化、正常化又は安定化剤及びリンパ管安定化剤は、その使用目的に合わせて用量、用法、剤型を適宜決定することが可能である。例えば、本発明の血管の成熟化、正常化又は安定化剤及びリンパ管安定化剤の投与形態は特に制限されるものではなく、経口、非経口、外用等であってよいが、好ましくは外用剤である。剤型としては、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等の外用剤、注射剤、点滴剤、若しくは坐剤等の非経口投与剤、又は錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経口投与剤を挙げることができ、タブレット、ドリンク、クッキー等の食品に配合することもできる。   The dosage, usage, and dosage form of the Tie2 activator, vascular maturation, normalization or stabilization agent, and lymphatic vessel stabilizer according to the present invention can be appropriately determined according to the purpose of use. For example, the administration form of the vascular maturation, normalization or stabilizer and lymphatic vessel stabilizer of the present invention is not particularly limited, and may be oral, parenteral, external, etc., but preferably external It is an agent. Examples of the dosage form include external preparations such as ointments, creams, emulsions, lotions, packs, bath preparations, parenteral preparations such as injections, drops, or suppositories, or tablets, powders, capsules, granules, Oral administration agents such as extracts and syrups can be mentioned, and can also be blended in foods such as tablets, drinks and cookies.

本発明の血管の成熟化、正常化又は安定化剤及びリンパ管安定化剤中のエレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンから成る群から選択される１又は複数種の化合物の配合量は、用途に応じて適宜決定できるが、一般には配合される組成物全量中、０．１ｐｐＭ〜１００ｍＭ、好ましくは１ｐｐＭ〜１００ｍＭ、１０ｐｐＭ〜１０ｍＭである。   Selected from the group consisting of eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, yangambin, forcytinol and coumarin in the vascular maturation, normalization or stabilizer and lymphatic vessel stabilizer of the present invention Although the compounding quantity of 1 or multiple types of compound can be suitably determined according to a use, generally it is 0.1ppM-100mM in the whole composition mix | blended, Preferably it is 1ppM-100mM, 10ppM-10mM.

また、本発明の血管の成熟化、正常化又は安定化剤及びリンパ管安定化剤には、エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンから成る群から選択される１又は複数種の化合物以外に、例えば、通常の食品や医薬品に使用される賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料等、化粧品等に通常用いられる美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。   Further, the vascular maturation, normalization or stabilization agent and lymphatic vessel stabilization agent of the present invention include eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, silvathesmin, pinoresinol, Yangan bin, forcytinol and coumarin. In addition to the selected compound or compounds, for example, excipients, moisture-proofing agents, preservatives, strengthening agents, thickeners, emulsifiers, antioxidants, sweeteners, acidity used in normal foods and pharmaceuticals Whitening agent, moisturizer, oily component, ultraviolet absorber, surfactant, thickener, alcohols, powder component, colorant, aqueous component, which are usually used in cosmetics, seasonings, colorants, fragrances, etc. Water, various skin nutrients, and the like can be appropriately blended as necessary.

さらに、本発明の血管の成熟化、正常化又は安定化剤あるいはリンパ管安定化剤を、しわ防止・改善剤又はむくみ改善・予防剤のような皮膚外用剤として使用する場合、皮膚外用剤に慣用の助剤、例えばエデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類、レチノイン酸、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール等のビタミンA類なども適宜配合することができる。皮膚外用剤に配合される血管の成熟化、正常化又は安定化剤あるいはリンパ管安定化剤の量は、適宜決定することができるが、一般には配合される組成物全量中、０．１ｐｐＭ〜１００ｍＭ、好ましくは１ｐｐＭ〜１００ｍＭ、１０ｐｐＭ〜１０ｍＭである。   Furthermore, when the vascular maturation, normalization or stabilization agent or lymphatic vessel stabilization agent of the present invention is used as a skin external preparation such as a wrinkle prevention / amelioration agent or swelling improvement / prevention agent, Conventional auxiliaries, e.g. disodium edetate, trisodium edetate, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, gluconic acid, sequestering agents, caffeine, tannin, verapamil, tranexamic acid and its derivatives, licorice Extracts, hot water extract of glabrizine, karin fruit, various herbal medicines, drugs such as tocopherol acetate, glycyrrhizic acid and its derivatives or salts thereof, vitamin C, magnesium ascorbate phosphate, glucoside ascorbate, arbutin, kojic acid, etc. Whitening agent, glucose, fructose, mannose, sucrose Saccharides such as trehalose, retinoic acid, retinol, retinol acetate, can also be suitably incorporated, such as vitamin A such as retinol palmitate. The amount of blood vessel maturation, normalization or stabilizer or lymphatic vessel stabilizer to be blended in the external preparation for skin can be determined as appropriate, but generally 0.1ppM to the total amount of the blended composition 100 mM, preferably 1 ppM to 100 mM, 10 ppM to 10 mM.

美容方法
別の観点において、本発明は、血管の成熟化、正常化又は安定化剤を被験者に適用することからなる、しわを防止・改善するための美容学的方法、を提供する。本発明に係る美容方法は、小じわが形成されやすい顔面の皮膚、特に目尻、下瞼または口元等の皮膚に適用することができるが、これらの部位に限定されない。 Cosmetic Method In another aspect, the present invention provides a cosmetic method for preventing and improving wrinkles, comprising applying a vascular maturation, normalization or stabilizing agent to a subject. The cosmetic method according to the present invention can be applied to facial skin where fine lines are likely to be formed, particularly skin such as the corners of the eyes, the lower eyelid, or the mouth, but is not limited to these parts.

更に別の観点において、本発明は、リンパ管の安定化剤を被験者に適用することからなる、むくみを改善又は予防するための美容学的方法、を提供する。本発明に係る美容方法は、むくみや目袋の軽減・予防を目的とするものである。この美容学的方法は、例えば本発明に係るリンパ管安定化剤をむくみなどのある部位に適用し、そのまま放置するか又は例えばリンパ管の流れの方向に即してマッサージなどを施し、リンパ管液の流れを促進するなどして行うことができる。この方法の適用箇所には顔面、首、手足、など、全身のあらゆる部位が挙げられる。   In yet another aspect, the present invention provides a cosmetic method for improving or preventing swelling, comprising applying a lymphatic stabilizer to a subject. The cosmetic method according to the present invention is intended to reduce or prevent swelling and eye bags. This cosmetic method is applied to, for example, a site with swelling of the lymphatic vessel stabilizer according to the present invention and left as it is, or subjected to, for example, massage according to the direction of the flow of the lymphatic vessel. For example, the liquid flow can be promoted. This part can be applied to all parts of the body such as the face, neck, limbs, and the like.

次に実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。   Next, the present invention will be described in more detail with reference to examples. In addition, this invention is not limited by this.

血管内皮細胞のウエスタンブロッティング
Tie2を発現する正常ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（HUVEC）は、三光純薬より購入した。増殖因子などの添加因子を加えたEBM-2（Cambrex; Verviers, Belgium）中でHUVECを培養した後、下記表に示す各化合物存在下でHUVEC内のタンパク質をPhosphosafe Extraction Reagent（Novagen, Madison, WI）で抽出した。陽性コントロールとしてAngiopoietin-1(R&D system, 923-AN )、陰性コントロールとしてDMSOを添加したHUVECも調製した。 Western blotting of vascular endothelial cells
Normal human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) expressing Tie2 were purchased from Sanko Junyaku. After culturing HUVEC in EBM-2 (Cambrex; Verviers, Belgium) to which additional factors such as growth factors were added, proteins in HUVEC were expressed in the presence of each compound shown in the following table using Phosphosafe Extraction Reagent (Novagen, Madison, WI ). An HUVEC supplemented with Angiopoietin-1 (R & D system, 923-AN) as a positive control and DMSO as a negative control was also prepared.

総タンパク量をRC DC Protein Assay Kit（BIO-RAD, Hercules, CA） にて定量し、以下のようにウエスタンブロッティングして検出した。等量の総タンパク量を７．５％アクリルアミドゲル（NPU-7.5L, ATTO, Japan）でSDS−PAGEを行い、Tie2およびリン酸化Tie2のタンパク質の発現は、抗体（Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA）を用いて、ECL Kitにより発色した。結果を図１に示す。   The total protein amount was quantified with RC DC Protein Assay Kit (BIO-RAD, Hercules, CA) and detected by Western blotting as follows. SDS-PAGE was performed on 7.5% acrylamide gel (NPU-7.5L, ATTO, Japan) with an equal amount of total protein, and the expression of Tie2 and phosphorylated Tie2 protein was confirmed by antibody (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, The color was developed with ECL Kit. The results are shown in FIG.

図１の結果より、コントロールのDMSOと比較して、エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、（＋）−シルバテスミン、（＋）−ピノレジノール、ヤンガンビン、フォルシチノール及びクマリンが、Ang-1と同様、顕著なTie2活性化作用を示すことが分かる。従って、これらの抽出物がいずれもTie2リン酸化効果を示し、血管成熟化、正常化、安定化に寄与し、その結果血管新生を抑制できることが示唆された。更に、Tie2活性化能を有するAng-1がリンパ管の回収機能を促進することから、これらの抽出物もAng-1と同様にリンパ管の安定化作用を奏するものと考えられる。   From the results of FIG. 1, compared to control DMSO, eleuteroside E, eleuteroside E1, sesamin, eudesmin, (+)-silvathesmin, (+)-pinoresinol, Yangan bin, forcytinol and coumarin are the same as Ang-1. It can be seen that it exhibits a remarkable Tie2 activation action. Therefore, it was suggested that these extracts all exhibited Tie2 phosphorylation effect and contributed to vascular maturation, normalization and stabilization, and as a result, angiogenesis could be suppressed. Furthermore, since Ang-1 having the ability to activate Tie2 promotes the recovery function of lymphatic vessels, it is considered that these extracts also have the effect of stabilizing lymphatic vessels in the same manner as Ang-1.

Tie2活性化剤の配合例
本発明によるTie2活性化剤を含む、錠剤、ソフトカプセル、顆粒、ドリンク、キャンディー、クッキーの配合例を以下に示す。これらの配合例は例示を目的として列挙されるものであって本発明の技術的範囲を限定することを意図するものではない。 Formulation Example of Tie2 Activator Formulation examples of tablets, soft capsules, granules, drinks, candy, and cookies containing the Tie2 activator according to the present invention are shown below. These formulation examples are listed for the purpose of illustration and are not intended to limit the technical scope of the present invention.

配合例１（錠剤）
（組成物） 配合量（ｍｇ／１錠中）
本発明のTie2活性化剤 ３６０．５
乳糖 １０２．４
カルボキシメチルセルロースカルシウム ２９．９
ヒドロキシプロピルセルロース ６．８
ステアリン酸マグネシウム ５．２
結晶セルロース １０．２

５１５．０ Formulation Example 1 (tablet)
(Composition) Formulation amount (mg / tablet)
Tie2 activator of the present invention 360.5
Lactose 102.4
Carboxymethylcellulose calcium 29.9
Hydroxypropylcellulose 6.8
Magnesium stearate 5.2
Crystalline cellulose 10.2

515.0

配合例２（錠剤）
（組成物） 配合量（ｍｇ／１錠中）
ショ糖エステル ７０
結晶セルロース ７４
メチルセルロース ３６
グリセリン ２５
本発明のTie2活性化剤 ４７５
Ｎ−アセチルグルコサミン ２００
ヒアルロン酸 １５０
ビタミンＥ ３０
ビタミンＢ６ ２０
ビタミンＢ２ １０
α−リポ酸 ２０
コエンザイムＱ１０ ４０
セラミド（コンニャク抽出物） ５０
Ｌ−プロリン ３００

１５００ Formulation Example 2 (tablet)
(Composition) Formulation amount (mg / tablet)
Sucrose ester 70
Crystalline cellulose 74
Methylcellulose 36
Glycerin 25
Tie2 activator of the present invention 475
N-acetylglucosamine 200
Hyaluronic acid 150
Vitamin E 30
Vitamin B6 20
Vitamin B2 10
α-Lipoic acid 20
Coenzyme Q10 40
Ceramide (konjac extract) 50
L-proline 300

1500

配合例３（ソフトカプセル）
（組成物） 配合量（ｍｇ／１カプセル中）
食用大豆油 ５３０
トチュウエキス ５０
ニンジンエキス ５０
本発明のTie2活性化剤 １００
ローヤルゼリー ５０
マカ ３０
ＧＡＢＡ ３０
ミツロウ ６０
ゼラチン ３７５
グリセリン １２０
グリセリン脂肪酸エステル １０５

１５００ Formulation Example 3 (soft capsule)
(Composition) Blending amount (mg / 1 capsule)
Edible soybean oil 530
Eucommia extract 50
Carrot extract 50
Tie2 activator of the present invention 100
Royal Jelly 50
Maca 30
GABA 30
Beeslow 60
Gelatin 375
Glycerin 120
Glycerin fatty acid ester 105

1500

配合例４（ソフトカプセル）
（組成物） 配合量（ｍｇ／１カプセル中）
玄米胚芽油 ６５９
本発明のTie2活性化剤 ５００
レスベラトロール １
ハス胚芽エキス １００
エラスチン １８０
ＤＮＡ ３０
葉酸 ３０

１５００ Formulation Example 4 (soft capsule)
(Composition) Blending amount (mg / 1 capsule)
Brown rice germ oil 659
Tie2 activator of the present invention 500
Resveratrol 1
Lotus germ extract 100
Elastin 180
DNA 30
Folic acid 30

1500

配合例５（顆粒）
（組成物） 配合量（ｍｇ／１包中）
本発明のTie2活性化剤 ４００
ビタミンＣ １００
大豆イソフラボン ２５０
還元乳糖 ３００
大豆オリゴ糖 ３６
エリスリトール ３６
デキストリン ３０
香料 ２４
クエン酸 ２４

１２００

配合例６（ドリンク）
（組成物） 配合量（ｇ／６０ｍＬ中）
トチュウエキス １．６
ニンジンエキス １．６
本発明のTie2活性化剤 １．６
還元麦芽糖水飴 ２８
エリスリトール ８
クエン酸 ２
香料 １．３
Ｎ−アセチルグルコサミン １
ヒアルロン酸Ｎａ ０．５
ビタミンＥ ０．３
ビタミンＢ６ ０．２
ビタミンＢ２ ０．１
α−リポ酸 ０．２
コエンザイムＱ１０ １．２
セラミド（コンニャク抽出物） ０．４
Ｌ−プロリン ２
精製水 残余

６０ Formulation Example 5 (granule)
(Composition) Blending amount (mg / pack)
Tie2 activator of the present invention 400
Vitamin C 100
Soy isoflavone 250
Reduced lactose 300
Soybean oligosaccharide 36
Erythritol 36
Dextrin 30
Fragrance 24
Citric acid 24

1200

Formulation Example 6 (Drink)
(Composition) Compounding amount (in g / 60 mL)
Eucommia extract 1.6
Carrot extract 1.6
Tie2 activator of the present invention 1.6
Reduced maltose starch syrup 28
Erythritol 8
Citric acid 2
Fragrance 1.3
N-acetylglucosamine 1
Hyaluronic acid Na 0.5
Vitamin E 0.3
Vitamin B6 0.2
Vitamin B2 0.1
α-Lipoic acid 0.2
Coenzyme Q10 1.2
Ceramide (konjac extract) 0.4
L-proline 2
Purified water residue

60

配合例７（キャンディー）
（組成物） 配合量（重量％）
砂糖 ５０
水飴 ４８
本発明のTie2活性化剤 １
香料 １

１００ Formulation Example 7 (candy)
(Composition) Compounding amount (% by weight)
Sugar 50
Minamata 48
Tie2 activator of the present invention 1
Fragrance 1

100

配合例８（クッキー）
（組成物） 配合量（重量％）
薄力粉 ４５．０
バター １７．５
グラニュー糖 ２０．０
本発明のTie2活性化剤 ４．０
卵 １２．５
香料 １．０

１００．０ Formulation Example 8 (Cookie)
(Composition) Compounding amount (% by weight)
Soft flour 45.0
Butter 17.5
Granulated sugar 20.0
Tie2 activator of the present invention 4.0
Egg 12.5
Fragrance 1.0

100.0

配合例８（クッキー）の製造方法
バターを撹拌しながらグラニュー糖を徐々に添加し、卵、本発明のTie2活性化剤（エレウテロシドＥ）及び香料を添加して撹拌した。十分に混合した後、均一に振るった薄力粉を加えて低速で撹拌し、塊状で冷蔵庫で寝かせた。その後、成型し１７０°Ｃ１５分間焼成しクッキーとした。 Production Method of Formulation Example 8 (Cookie) Granulated sugar was gradually added while stirring the butter, and the egg, the Tie2 activator of the present invention (eleuteroside E) and the fragrance were added and stirred. After thorough mixing, a weak flour that was shaken uniformly was added and stirred at a low speed. Then, it shape | molded and baked for 170 degreeC15 minutes, and was set as the cookie.

Claims (4)

エレウテロシドＥ（Eleutheroside）、エレウテロシドＥ１、セサミン（Sesamin）、ユーデスミン（Eudesmine）、シルバテスミン（Sylvatesmin）、ピノレジノール（Pinoresinol）、ヤンガンビン（Yangambin）及びフォルシチノール（Forsythinol）から成る群から選択される１又は複数種の化合物から成るTie2活性化剤。 Ereuteroshido E (Eleutheroside), Ereuteroshido E1, sesamin (Sesamin), Yudesumin (Eudesmine), Shirubatesumin (Sylvatesmin), pinoresinol (Pinoresinol), Yanganbin (Yangambin) and 1 or is selected from the folder cytidine Nord (Forsythinol) or al the group consisting Tie2 activator consisting of multiple compounds. エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン及びフォルシチノールから成る群から選択される１又は複数種の化合物から成る血管の成熟化、正常化又は安定化剤。 Ereuteroshido E, Ereuteroshido E1, sesamin, Yudesumin, Shirubatesumin, pinoresinol, maturation, normalization or stabilization agent of the vessel consisting of one or more compounds chosen from Yanganbin and Forushichino Le whether we made the group. エレウテロシドＥ、エレウテロシドＥ１、セサミン、ユーデスミン、シルバテスミン、ピノレジノール、ヤンガンビン及びフォルシチノールから成る群から選択される１又は複数種の化合物から成るリンパ管の安定化剤。 Ereuteroshido E, Ereuteroshido E1, sesamin, Yudesumin, Shirubatesumin, pinoresinol, stabilizer lymphatics of one or more compounds selected from Yanganbin and Forushichino Le whether we made the group. 請求項３に記載のリンパ管安定化剤を含んで成るむくみ改善・予防剤。   A swelling improving / preventing agent comprising the lymphatic vessel stabilizer according to claim 3.