JP5241764B2 - Evaluation method for biocompatible materials - Google Patents

Description

本発明は、生体適合性材料の評価方法およびその用途に関する。   The present invention relates to a biocompatible material evaluation method and use thereof.

外科手術において、生体組織部位への侵襲による炎症に起因して癒着を生じると隣接する構造の組織や臓器の正常な動作を妨害する。たとえば腹腔領域の術後に腸管と腹膜での癒着が原因で起こる腸閉塞は重篤な合併症である。このため、組織や臓器間のバリア効果が見込まれる被膜性生体適合性材料を利用する癒着防止材が開発されてきた。たとえば酸性多糖と塩基性多糖とのポリイオンコンプレックスの乾燥フィルム、カルボキシ含有ポリサッカロイドとポリエーテルの高分子間複合体の膜、ポリサッカロイドデキストリンを含む水性製剤、架橋性多糖誘導体の粉末またはシートなどの各種材料が開発されている（特許文献１〜４など参照）。   In a surgical operation, when adhesion occurs due to inflammation caused by invasion of a living tissue site, normal operation of a tissue or an organ of an adjacent structure is disturbed. For example, intestinal obstruction caused by adhesion between the intestine and the peritoneum after surgery in the abdominal region is a serious complication. For this reason, anti-adhesion materials using a coating biocompatible material that is expected to have a barrier effect between tissues and organs have been developed. For example, dry film of polyion complex of acidic polysaccharide and basic polysaccharide, film of interpolymer complex of carboxy-containing polysaccharide and polyether, aqueous preparation containing polysaccharide dextrin, powder or sheet of crosslinkable polysaccharide derivative, etc. Various materials have been developed (see Patent Documents 1 to 4, etc.).

特開２０００−１１６７６５号公報JP 2000-116765 A 特表２００２−５１１８９７号公報Japanese translation of PCT publication No. 2002-511897 特表２００３−５２０２４３号公報Special table 2003-520243 gazette 国際公開第２００４／０８１０５５号International Publication No. 2004/081055

上記のような癒着防止材の被膜は、完治した患部組織の正常な機能を可能にするため、最終的には消失すべきものである。このため癒着防止材は本質的に生体吸収性または生体分解性であり、患部に適用された癒着防止材の被膜は経時的に減少する。このような癒着防止材の有効性を評価する際に、適用した患部組織の治癒状態とともに観察される該組織に密着した癒着防止材の残存状態は、通常、目視で行われている。しかしながら、多くの癒着防止材自体は、通常、ほぼ無色で、かつ生体に適用するため着色剤も含ませない。このため、密着している組織と本質的に見分けにくい。また、起泡などにより視認性を有する材料もあるが、経時的減少あるいは厚みによって組織が透けて見えるため、実験者の判断に基づく残存状態（範囲）の評価は実験毎、特に実験者間によるバラツキが大きい。視認による半定量的な評価は困難である。
このため、癒着防止材あるいは他の各種医療用処置材として同様に患部に適用された生体適合性材料の残存状態を、容易に観察することができ、実験毎あるいは実験者間のバラツキ少なく確実に評価しうる方法の出現が望まれる。 The coating of the anti-adhesion material as described above should eventually disappear in order to allow normal functioning of the affected affected tissue. Therefore, the anti-adhesion material is essentially bioabsorbable or biodegradable, and the coating of the anti-adhesion material applied to the affected area decreases with time. When evaluating the effectiveness of such an adhesion-preventing material, the remaining state of the adhesion-preventing material in close contact with the tissue observed together with the healing state of the applied affected tissue is usually visually observed. However, many anti-adhesive materials themselves are usually almost colorless and do not contain colorants because they are applied to living bodies. For this reason, it is essentially difficult to distinguish from an intimate tissue. In addition, there are materials that have visibility due to foaming, etc., but since the structure can be seen through due to the decrease over time or thickness, the evaluation of the remaining state (range) based on the judgment of the experimenter depends on each experiment, especially between the experimenters. Large variation. Semi-quantitative evaluation by visual recognition is difficult.
For this reason, it is possible to easily observe the remaining state of the biocompatible material applied to the affected area in the same manner as an anti-adhesion material or other various medical treatment materials, and reliably with little variation between experiments or between experimenters. The emergence of methods that can be evaluated is desired.

本発明者は、上記のような生体適合性材料について検討するうちに、該材料が適用された組織は染色されない、すなわち生体適合性材料を適用した部位およびその周辺を含む組織片の染色により、染色されない領域として生体適合性材料の存在範囲が検出できるという知見も得た。また、組織に適用された生体適合性材料はゲル化などにより組織に密着しているが、多量の水と接触させることにより水膨潤性となり組織から容易に剥離することができることがわかった。これらから、以下の本発明が提供される。   While examining the biocompatible material as described above, the present inventor does not stain the tissue to which the material is applied, that is, by staining the tissue piece including the site to which the biocompatible material is applied and its periphery. It was also found that the existence range of the biocompatible material can be detected as an unstained region. In addition, it was found that the biocompatible material applied to the tissue is in close contact with the tissue by gelation or the like, but can be easily separated from the tissue by becoming water-swellable by contacting with a large amount of water. From these, the following present invention is provided.

本発明は、生体適合性材料を適用した生体組織の所定領域を含む組織片を染色し、該染色後の非染色領域を前記適用した生体適合性材料の残存する領域として検出する、生体適合性材料の評価方法である。
非染色の組織領域は、染色された周辺組織との対比として検出することができるため、目視観察により容易にかつ確実に検出することができる。 The present invention stains a tissue piece including a predetermined region of a biological tissue to which a biocompatible material is applied, and detects a non-stained region after the staining as a remaining region of the applied biocompatible material. This is a material evaluation method.
Since the unstained tissue region can be detected as a contrast with the stained surrounding tissue, it can be easily and reliably detected by visual observation.

上記染色後、組織表面を水で洗浄し、組織上に残存する剰余の染色剤を除去することが好ましい。
また、染色後、残存する生体適合性材料を組織から取り除いて、組織を露出させ、非染色領域を検出することもできる。この場合、生体適合性材料は、通常、水と接触して膨潤するため、上記洗浄水により膨潤させ、組織から剥離・除去することができる。 After the dyeing, it is preferable to wash the tissue surface with water to remove excess stain remaining on the tissue.
In addition, after staining, the remaining biocompatible material can be removed from the tissue to expose the tissue and detect a non-stained region. In this case, since the biocompatible material normally swells in contact with water, it can be swollen with the washing water, and can be peeled and removed from the tissue.

上記染色される組織片は、生体適合性材料を適用後所定期間が経過した後に生体から切り出される組織片である。本発明の好ましい態様では、この組織片に含まれる所定領域は、生体適合性材料の適用前に形成された創傷がある。具体的には、たとえば後述の実施例に示すように、動物を開腹して腹壁の所定領域に創傷を形成した後、該所定領域に生体適合性材料を適用して閉腹し、所定期間生存させた後、再開腹して所定領域を含む組織片である。
このような組織片を上記方法で評価することにより、適用した生体適合性材料の残存性と、創傷の治癒評価を同時に行うことができ、生体適合性材料の有効性を評価することができる。
したがって本発明では、生体適合性材料の設計における上記評価方法の利用も提供することができる。 The tissue piece to be stained is a tissue piece cut out from a living body after a predetermined period has elapsed after the biocompatible material is applied. In a preferred embodiment of the present invention, the predetermined area included in the tissue piece is a wound formed prior to application of the biocompatible material. Specifically, for example, as shown in the examples described later, after an animal is opened and a wound is formed in a predetermined region of the abdominal wall, a biocompatible material is applied to the predetermined region, the abdomen is closed, and a predetermined period of time is survived. Then, the tissue piece includes a predetermined region.
By evaluating such a tissue piece by the above-described method, it is possible to simultaneously evaluate the survival of the applied biocompatible material and the healing of the wound, and evaluate the effectiveness of the biocompatible material.
Therefore, the present invention can also provide use of the above evaluation method in the design of a biocompatible material.

本発明によれば、生体に適用した生体適合性材料の残存性を容易にかつ確実に判断することができ、実験ごと、実験者ごとの判断のバラツキ少なく生体適合性材料の残存状態を評価することができ、半定量的な評価ができる。このような評価方法は、生体適合性材料の有効性評価、生体適合性材料の設計に有用である。   According to the present invention, the survivability of a biocompatible material applied to a living body can be easily and reliably determined, and the remaining state of the biocompatible material is evaluated for each experiment and with little variation in the judgment of each experimenter. Can be evaluated semi-quantitatively. Such an evaluation method is useful for evaluating the effectiveness of the biocompatible material and designing the biocompatible material.

開腹したウサギ腹壁に剥離欠損創を形成した組織（枠囲み）の写真である。It is the photograph of the structure | tissue (frame frame) which formed the peeling defect wound in the opened rabbit abdominal wall. 図１の剥離欠損創の組織上にデキストリンゲルを噴霧した状態の写真である。It is a photograph of the state which sprayed dextrin gel on the structure | tissue of the peeling defect | deletion wound of FIG. 腹壁に剥離欠損創を形成したウサギの施術６時間後の剖検写真である。（Ａ）は染色前、（Ｂ）染色後、デキストリンゲルを取り除いた後の写真である。It is an autopsy photograph 6 hours after the operation of a rabbit in which a peeling defect was formed on the abdominal wall. (A) is a photograph before dyeing, (B) after dyeing, and after removing the dextrin gel. 腹壁に剥離欠損創を形成したウサギの施術１２時間後の剖検写真である。（Ａ）は染色前、（Ｂ）染色後、デキストリンゲルを取り除いた後の写真である。It is an autopsy photograph 12 hours after the operation of a rabbit in which an exfoliation defect was formed on the abdominal wall. (A) is a photograph before dyeing, (B) after dyeing, and after removing the dextrin gel.

本発明において、試験される生体組織は、実験動物、通常非ヒト動物の生体組織であり、生体の部位は体内・外のどの部位特に限定されないが、通常、腹壁または腹腔内臓器の組織であることが多い。   In the present invention, the biological tissue to be tested is a biological tissue of a laboratory animal, usually a non-human animal, and the part of the living body is not particularly limited to any part inside or outside, but is usually a tissue of an abdominal wall or an abdominal organ. There are many cases.

また本発明における生体適合性材料は、生体組織における残存性を評価すべき材料であればよく、特に限定されないが、好ましくは癒着防止材、止血材などとして使用される医療用処置材である。生体適合性材料は、本発明の評価方法で評価すべき材料であればよく、あらかじめシート状に形成されたフィルムであってもよく、粉末または溶液状態で組織に適用した後ゲル化させるタイプのものであってもよく、その形態は特に限定されない。その材質も、好ましくはその分解物の毒性の低減、および生体分解吸収性を有するように材料設計された医療用処置材であれば特に限定されないが、たとえばヒアルロン酸などの生体高分子、メチルセルロースおよびその誘導体、多糖類などを基材とする各種ゲル化材が知られている。有用な一例としては、活性エステル基を導入した多糖、特にデキストリンなどが挙げられる。
また、このような生体適合性材料は、透明で視認困難なものであっても、起泡などによりそれ自体に視認性をもたせたものであってもよい。視認性のものとしては、たとえば国際公開第０９／１３３７６３号に記載される視認性医療用処置材などが挙げられ、該視認性医療用処置材の具体的な態様は該公報の記載を引用して本明細書に記載されているものとする。後者の場合であっても、組織上に形成した膜が薄くなると、残存範囲などの残存状態を検出することは困難になるため、本発明の評価方法は有用性が高い。 In addition, the biocompatible material in the present invention is not particularly limited as long as it is a material whose survivability in a living tissue is to be evaluated, but is preferably a medical treatment material used as an adhesion preventing material, a hemostatic material, or the like. The biocompatible material may be a material to be evaluated by the evaluation method of the present invention, may be a film formed in a sheet shape in advance, and is a type of gelling after being applied to a tissue in a powder or solution state. It may be a thing and the form is not specifically limited. The material is also not particularly limited as long as it is a medical treatment material that is preferably designed to reduce toxicity of the degradation product and have biodegradability and absorbability. For example, biopolymers such as hyaluronic acid, methylcellulose and Various gelling materials based on derivatives, polysaccharides and the like are known. A useful example is a polysaccharide into which an active ester group has been introduced, particularly a dextrin.
Moreover, such a biocompatible material may be transparent and difficult to visually recognize, or may be provided with visibility by foaming or the like. Examples of the visibility include, for example, the visibility medical treatment material described in International Publication No. 09/133663, and the specific aspect of the visibility medical treatment material is referred to the description of the publication. As described in this specification. Even in the latter case, when the film formed on the tissue becomes thin, it becomes difficult to detect the remaining state such as the remaining range, and therefore the evaluation method of the present invention is highly useful.

生体組織の染色は、一般的な組織染色方法たとえばヘマトキシリンの標準方法に準じて行うことができる。特に限定されるものではないが、血液を含む生体組織と区別しやすい青色を含む色素が有利である。たとえば、カラッチのヘマトキシリン液、アルシアン青などが好ましく使用される。   Staining of a living tissue can be performed according to a general tissue staining method such as a standard method of hematoxylin. Although not particularly limited, a dye containing a blue color that can be easily distinguished from a biological tissue containing blood is advantageous. For example, Caratatch's hematoxylin solution, Alcian blue, etc. are preferably used.

染色後の組織片は、表面を水洗浄して残存する余剰の染色剤を除去する。
生体適合性材料で被覆されていた組織は染色されない。一方、染色された組織は、水洗しても染色が残存する。このため、生体適合性材料で被覆されていた組織は非染色領域として観察され、染色領域と明確に区別することができることから、生体適合性材料の存在を容易にかつ実験者間のバラツキもなく確認することができる。非染色領域の面積を見積もることで、残存量を半定量的に評価することができる。 The tissue piece after staining is washed with water to remove the remaining excess staining agent.
Tissue that has been coated with a biocompatible material is not stained. On the other hand, the stained tissue remains dyed even when washed with water. For this reason, the tissue covered with the biocompatible material is observed as a non-stained region and can be clearly distinguished from the stained region. Therefore, the presence of the biocompatible material can be easily and without variation between the experimenters. Can be confirmed. By estimating the area of the unstained region, the remaining amount can be evaluated semi-quantitatively.

また上記水洗浄により、組織上に適用されたゲル状の生体適合性材料を膨潤させることができる。したがって生体適合性材料を膨潤させて組織から取り除いて、生体適合性材料が適用されていた組織表面を観察することもできる。特に、生体適合性材料が適用された組織があらかじめ形成された創傷をもつ場合には、生体適合性材料の残存範囲とともに、創傷の治癒状態を観察することができる。
生体組織への創傷は、たとえば、ガーゼによる擦過創、メスによる層剥離などの欠損創などである。 Moreover, the gel-like biocompatible material applied on the tissue can be swollen by the water washing. Accordingly, the biocompatible material can be swollen and removed from the tissue, and the tissue surface to which the biocompatible material has been applied can be observed. In particular, when the tissue to which the biocompatible material is applied has a pre-formed wound, the healing state of the wound can be observed together with the remaining range of the biocompatible material.
Examples of wounds on living tissue include a flawed wound such as a fretting wound with gauze and a layer peeling with a scalpel.

本発明の評価方法に基づく創傷の形成と生体適合性材料の適用をした生体に対するこのような観察を、別々の所定期間経過時に行うことにより、創傷の治癒に対する生体適合性材料の有効性を確認することができる。すなわち、本発明の評価方法を利用して、試験する生体適合性材料の材質、使用量、使用方法などの設計を行うことができる。   The effectiveness of the biocompatible material for wound healing is confirmed by performing such observations on a living body that has undergone the formation of a wound and application of the biocompatible material based on the evaluation method of the present invention at different predetermined periods. can do. That is, the evaluation method of the present invention can be used to design the material, amount of use, and method of use of the biocompatible material to be tested.

以下に、本発明の実施例を示すが、この実施例は本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の範囲はなんら実施例に制限されるものではない。   Examples of the present invention will be shown below, but these examples are intended to explain the present invention more specifically, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

１．材料
＜使用動物＞
ウサギ、日本白色（ＪＷ）系、雌、体重２．８−３．０ｋｇ（Ｊｌａ：日本医科学動物資材研究所製）
＜生体適合性材料＞
２剤硬化型デキストリンゲル（硬化時起泡による視認性）
主剤：ＮＨＳデキストリン
国際公開０９／１３３７６３号公報の合成例１に準じて合成したＮＨＳデキストリン（ＮＨＳ導入率７５％）を用いた。合成手順を概略すれば、デキストリンからカルボキシ基およびカルボキシメチル基を含有する酸型多糖カルボキシメチルデキストリンを得た後、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド基（ＮＨＳ）を導入して活性エステル化し、デキストリン活性エステル誘導体（ＮＨＳデキストリン）を得た。
硬化剤：０．７Ｍ炭酸ナトリウム／０．３Ｍ炭酸水素ナトリウム混合液
＜染色剤＞
カラッチのヘマトキシリン液１０００ｍＬ（使用期限３ヶ月）
組成：
ヘマトキシリン１．０ｇ
ヨウ素酸ナトリウム０．２ｇ
カリウムミョウバン（硫酸カリウムアルミニウム・１２水）５０．０ｇ
グリセリン２００ｍＬ
精製水８００ｍＬ
調製方法：
精製水５０ｍＬをビーカーに入れ、ヘマトキシリンを加える。沸騰しない程度に加熱しながら撹拌し、完全に溶解した後、精製水１５０ｍＬを追加し液温を下げる。
別のビーカーに、精製水６００ｍＬとカリウムミョウバンを加え撹拌し、溶解する。
上記２つの液を混合し、そこにヨウ素酸ナトリウムを加え、速やかに撹拌する。ヨウ素酸ナトリウムが溶けたら、グリセリンを入れ撹拌する。
調製後１晩以上放置してから使用する。 1. Material <Animal used>
Rabbit, Japanese white (JW), female, body weight 2.8-3.0kg (Jla: manufactured by Japan Institute of Medical Science Animal Materials)
<Biocompatible material>
Two-component curable dextrin gel (visibility by foaming during curing)
Main agent: NHS dextrin NHS dextrin (NHS introduction rate 75%) synthesized according to Synthesis Example 1 of International Publication No. 09/133963 was used. An outline of the synthesis procedure is to obtain an acid-type polysaccharide carboxymethyldextrin containing a carboxy group and a carboxymethyl group from dextrin, then introduce an N-hydroxysuccinimide group (NHS) into an active ester, and dextrin active ester derivative ( NHS dextrin) was obtained.
Curing agent: 0.7M sodium carbonate / 0.3M sodium hydrogen carbonate mixture <stain>
1000 mL of caratach hematoxylin solution (expiration date 3 months)
composition:
Hematoxylin 1.0g
Sodium iodate 0.2g
Potassium alum (potassium aluminum sulfate, 12 water) 50.0 g
Glycerin 200mL
800 mL of purified water
Preparation method:
Place 50 mL of purified water in a beaker and add hematoxylin. Stir while heating to the extent that it does not boil and dissolve completely, then add 150 mL of purified water to lower the liquid temperature.
In another beaker, add 600 mL of purified water and potassium alum and stir to dissolve.
The above two liquids are mixed, sodium iodate is added thereto, and rapidly stirred. When sodium iodate is dissolved, add glycerin and stir.
Allow to stand for at least one night after preparation.

２．手術方法
＜創傷＞
手術前ウサギ給餌を１回分省略（絶食）した。ペントバルビタール（ソムノペンチル：共立製薬（株）製）３２．４ｍｇ／ｋｇの耳介静脈内投与により麻酔を行った。
正中線上で腹壁を約１５ｃｍ切開し、盲腸を腹腔内から引き出し、ガーゼで１００回擦過した。腹壁は３ｃｍ×５ｃｍの大きさで全層剥離欠損創を作製し、止血した。全層剥離欠損創を作製した腹壁の写真を図１に示す。
施術後盲腸傷害領域を腹壁傷害領域直下になるよう腹腔内に戻した。
腹壁正中線切開創を腹腔内が可視できる程度に鉗子等で開創して予め３７℃で予備加熱した生理食塩水（生食）１００ｍＬを５０ｍＬシリンジ２本に分けて腹壁及び盲腸の傷害部を洗浄した。洗浄後生食を電動式可搬型吸引器（BLUE CROSS製）で吸引除去した。 2. Surgery <Wound>
Rabbit feeding before operation was omitted once (fasted). Anesthesia was performed by intravenous administration of 32.4 mg / kg of pentobarbital (Somnopentyl: manufactured by Kyoritsu Pharmaceutical Co., Ltd.).
The abdominal wall was incised about 15 cm on the midline, the cecum was pulled out from the abdominal cavity, and was abraded 100 times with gauze. The abdominal wall was 3 cm × 5 cm in size, and a full thickness exfoliation wound was prepared and hemostasis was performed. A photograph of the abdominal wall from which the full-thickness delamination defect was produced is shown in FIG.
After the operation, the cecal injury area was returned to the abdominal cavity so that it was directly under the abdominal wall injury area.
The abdominal wall midline incision was opened with forceps etc. so that the inside of the abdominal cavity was visible, and 100 mL of physiological saline (saline) preheated at 37 ° C. was divided into two 50 mL syringes to wash the injured part of the abdominal wall and cecum . After washing, raw food was removed by suction using an electric portable suction device (manufactured by BLUE CROSS).

その後、２液を同時に吐出し合流させた後胴軸的に空気流にのせて噴霧するタイプ（特開２００９−１３１５９０の図１９〜２０に記載の構造参照）の噴霧器を用いて、腹壁損傷部位に、２剤硬化型デキストリンゲル１．２５ｍＬ（噴霧時混合比は、主剤：硬化剤＝４：１）をまんべんなく噴霧し（図２）、腹壁を閉じた。
腹壁を強弯丸針（瑞穂医科製）とブレードシルク１−０縫合糸（（株）ベアーメディック製）、皮膚を強弯角針（瑞穂医科製）とブレードシルク１−０縫合糸（同上）にてそれぞれ縫合閉鎖した。 After that, the two liquids are discharged and combined at the same time, and then the body is axially put on an air stream and sprayed (see the structure described in FIGS. 19 to 20 of JP-A-2009-131590). In addition, 1.25 mL of a two-component curable dextrin gel (mixing ratio during spraying: main agent: curing agent = 4: 1) was sprayed evenly (FIG. 2), and the abdominal wall was closed.
Strong abdominal round needle (Mizho Medical Co., Ltd.) and blade silk 1-0 suture (manufactured by Bear Medic Co., Ltd.); Each was closed with a suture.

３．剖検および解剖方法
施術所定時間経過後、ペントバルビタール（ソムノペンチル：共立製薬（株）製）６４．８ｍｇ／ｋｇの耳介静脈内投与により麻酔を行い、苦痛を与えず安楽死させた。腹部皮膚のみ剥離後正中線に垂直に腹膜を切開し、盲腸との癒着状況を確認しながら慎重に腹膜両側を正中線に平行に切開し、最終的に下コの字形に腹膜を開いた。 3. Necropsy and dissection method After a predetermined time of the operation, anesthesia was performed by intravenous administration of 64.8 mg / kg of pentobarbital (Somnopentyl: manufactured by Kyoritsu Pharmaceutical Co., Ltd.) and euthanized without causing pain. After removing only the abdominal skin, the peritoneum was incised perpendicularly to the midline, carefully incising both sides of the peritoneum in parallel to the midline while confirming the state of adhesion with the cecum, and finally the peritoneum was opened in a lower U shape.

４．染色処理
欠損創を含む腹壁組織（約６ｃｍ×８ｃｍ）を摘出し、噴霧器（あ〜んシュットアトマイザー：（株）キートロン）を用いて、組織表面全体にヘマトキシリン液を噴霧した。室温で１分間放置した後、水洗し、組織上に残存しているデキストリンゲルと余剰な染色液を取り除いた。
青紫色の着色有無を目視で確認し、染色された領域をデキストリンゲルが存在しない部位とし、染色されていない領域をデキストリンゲル残存部位とした。 4). Staining Treatment Abdominal wall tissue (approximately 6 cm × 8 cm) including the defect wound was extracted, and a hematoxylin solution was sprayed on the entire tissue surface using a sprayer (Anto Schuttomizer: Keytron Co., Ltd.). After standing at room temperature for 1 minute, it was washed with water to remove the dextrin gel remaining on the tissue and the excess staining solution.
The presence or absence of blue-violet color was visually confirmed, and the stained area was defined as a site where no dextrin gel was present, and the unstained area was defined as a dextrin gel remaining site.

上記３において、施術６時間または１２時間経過後に開腹した各ウサギの組織写真を、それぞれ図３および図４に示す。各図において、（Ａ）は染色前の摘出した組織、（Ｂ）は、その染色処理後の写真である。各図の（Ａ）および（Ｂ）の対比から明らかなとおり、目視では認めにくいゲルの残存領域（各図（Ａ）参照）も、染色されない部分として容易にかつ明確に認めることができた（各図（Ｂ）参照）。特に、ゲルの適用が少なく、その存在有無がとりわけ視認しにくい領域についても、非染色領域であることからゲルが存在すること（図３（Ｂ）の創傷部周縁の白色部分参照）、または染色領域であることからゲルが不存在であること（図４（Ｂ）矢印先方）が明確に判断できることが示された。   In 3 above, tissue photographs of each rabbit opened after 6 or 12 hours of treatment are shown in FIGS. 3 and 4, respectively. In each figure, (A) is a tissue extracted before staining, and (B) is a photograph after the staining treatment. As is clear from the comparison between (A) and (B) in each figure, the remaining region of the gel (see each figure (A)) that is difficult to visually recognize was also easily and clearly recognized as an unstained part ( (See each figure (B)). In particular, even in a region where the application of the gel is small and the presence or absence of the gel is particularly difficult to visually recognize, the gel is present because it is a non-stained region (see the white portion around the wound portion in FIG. 3B), or staining. From the region, it was shown that the absence of the gel (the direction of the arrow in FIG. 4B) can be clearly determined.

Claims (2)

生体適合性材料を生体組織の所定領域に適用して所定期間が経過した後、該所定領域を含む組織片を染色した後、染色した組織の少なくとも表面を水で洗浄し、前記洗浄水により膨潤する生体適合性材料を組織から取り除いて、非染色領域の組織を露出させ、
非染色領域を前記生体適合性材料の残存する領域として検出する、生体適合性材料の評価方法。 After a predetermined period of time has elapsed after applying a biocompatible material to a predetermined region of a biological tissue, a tissue piece including the predetermined region is stained, and at least the surface of the stained tissue is washed with water and swollen with the washing water. Remove the biocompatible material from the tissue to expose the tissue in the unstained area,
A method for evaluating a biocompatible material, wherein an unstained region is detected as a region where the biocompatible material remains. 前記組織片中の前記所定領域が、前記生体適合性材料の適用前に創傷が形成された領域である請求項１に記載の方法。   The method of claim 1, wherein the predetermined area in the tissue piece is an area where a wound has been formed prior to application of the biocompatible material.