JP5219112B2 - カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子および抵抗性遺伝子、ならびにその利用 - Google Patents
カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子および抵抗性遺伝子、ならびにその利用 Download PDFInfo
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Description
〔1〕 配列番号:1に記載の塩基配列において、エクソン1〜14の領域の塩基配列を有する、カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子をコードするDNA、
〔2〕 下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNA、
(a)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(b)配列番号:1に記載の塩基配列のコード領域を含むDNA
(c)配列番号:2に記載の塩基配列からなるDNA
〔3〕 カイコ2型濃核病ウイルス感受性を有する下記(d)または(e)に記載のDNA、
(d)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、付加および/もしくは挿入したアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(e)配列番号:2に記載の塩基配列からなるDNAにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNA
〔4〕 配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質の断片をコードするDNA、
〔5〕 〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAを含むベクター、
〔6〕 〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAによりコードされる蛋白質、
〔7〕 〔6〕に記載の蛋白質に結合する抗体、
〔8〕 〔6〕に記載の蛋白質をコードするアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、付加および/もしくは挿入したアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA、
〔9〕 配列番号:1に記載の塩基配列において、エクソン1〜14の領域のうち少なくとも1つのエクソン領域を欠失した塩基配列を有する、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性遺伝子をコードするDNA、
〔10〕 エクソン領域がエクソン5〜13からなる領域である、〔9〕に記載のDNA、
〔11〕 エクソン5〜13からなる領域が、配列番号:1に記載の塩基配列における7052位〜12028位である、〔10〕に記載のDNA、
〔12〕 下記(a)または(b)に記載のDNA、
(a)配列番号:5に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(b)配列番号:4に記載の塩基配列を含むDNA
〔13〕 カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性を有する下記(c)または(d)に記載のDNA、
(c)配列番号:5に記載のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、付加および/もしくは挿入したアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(d)配列番号:4に記載の塩基配列からなるDNAにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNA
〔14〕 配列番号:5に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質の断片をコードするDNA、
〔15〕 〔8〕〜〔14〕のいずれかに記載のDNAを含むベクター、
〔16〕 〔8〕〜〔14〕のいずれかに記載のDNAによりコードされる蛋白質、
〔17〕 〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAまたは〔5〕に記載のベクターを保持する、カイコ2型濃核病ウイルス感受性の形質転換カイコ細胞、
〔18〕 〔17〕に記載の形質転換カイコ細胞を含む、カイコ2型濃核病ウイルス感受性の形質転換カイコ、
〔19〕 〔18〕に記載の形質転換カイコの卵、子孫、もしくはクローンである、カイコ2型濃核病ウイルス感受性の形質転換カイコ、
〔20〕 〔18〕または〔19〕に記載の形質転換カイコを交配させることによる、カイコ2型濃核病ウイルス感受性の形質転換カイコの製造方法、
〔21〕 〔5〕に記載のベクターあるいは〔6〕に記載の蛋白質を有効成分とする、カイコ2型濃核病ウイルス感受性付与剤、
〔22〕 〔6〕に記載の蛋白質の機能が阻害されていることを特徴とする、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコ細胞、
〔23〕 〔22〕に記載の形質転換カイコ細胞を含む、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコ、
〔24〕 〔23〕に記載の形質転換カイコの卵、子孫、もしくはクローンである、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコ、
〔25〕 〔23〕または〔24〕に記載の形質転換カイコを交配させることによる、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコの製造方法、
〔26〕 〔6〕に記載の蛋白質の発現を阻害することを特徴とする、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコの製造方法、
〔27〕 〔6〕に記載の蛋白質の発現を、以下の(a)〜(c)からなる群より選択される化合物の投与によって阻害することを特徴とする、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコの製造方法、
(a)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAの転写産物と相補的なアンチセンスRNAをコードするDNA
(b)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAの転写産物を特異的に開裂するリボザイム活性を有するRNAをコードするDNA
(c)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAの発現を、RNAi効果により阻害する作用を有するRNAをコードするDNA
〔28〕 〔6〕に記載の蛋白質の機能阻害物質を有効成分として含有する、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤、
〔29〕 〔6〕に記載の蛋白質の機能阻害物質が、以下の(a)〜(c)からなる群より選択される化合物を含む、〔28〕に記載のカイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤、
(a)〔6〕に記載の蛋白質に対してドミナントネガティブの性質を有する〔6〕に記載の蛋白質の変異体
(b)〔6〕に記載の蛋白質に対して結合する抗体
(c)〔6〕に記載の蛋白質に結合する低分子化合物
〔30〕 〔6〕に記載の蛋白質の発現阻害物質を有効成分として含有する、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤、
〔31〕 〔6〕に記載の蛋白質の発現阻害物質が、以下の(a)〜(c)からなる群より選択される化合物を含む、〔30〕に記載のカイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤、
(a)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAの転写産物と相補的なアンチセンスRNAをコードするDNA
(b)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAの転写産物を特異的に開裂するリボザイム活性を有するRNAをコードするDNA
(c)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAの発現を、RNAi効果により阻害する作用を有するRNAをコードするDNA
〔32〕 以下の(a)〜(c)の工程を含む、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤のための候補化合物のスクリーニング方法、
(a)〔6〕に記載の蛋白質またはその部分ペプチドと被検化合物を接触させる工程
(b)前記蛋白質またはその部分ペプチドと被検化合物との結合活性を測定する工程
(c)〔6〕に記載の蛋白質またはその部分ペプチドと結合する化合物を選択する工程
〔33〕 以下の(a)〜(c)の工程を含む、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤のための候補化合物のスクリーニング方法、
(a)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAを発現する細胞に、被検化合物を接触させる工程
(b)該DNAの発現レベルを測定する工程
(c)被検化合物を接触させない場合と比較して、該発現レベルを低下させる化合物を選択する工程
〔34〕 以下の(a)〜(c)の工程を含む、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤のための候補化合物のスクリーニング方法、
(a)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAの転写調節領域とレポーター遺伝子とが機能的に結合した構造を有するDNAを含む細胞または細胞抽出液と、被検化合物を接触させる工程
(b)該レポーター遺伝子の発現レベルを測定する工程
(c)被検化合物の非存在下において測定した場合と比較して、該発現レベルを低下させる化合物を選択する工程
〔35〕 以下の(a)〜(c)の工程を含む、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤のための候補化合物のスクリーニング方法、
(a)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAを発現する細胞へ被検化合物を接触させる工程
(b)該細胞における〔6〕に記載の蛋白質の発現量または活性を測定する工程
(c)被検化合物に非存在下において測定した場合と比較して、当該蛋白質の発現量または活性を低下させる化合物を選択する工程
〔36〕 カイコ2型濃核病ウイルス感受性のカイコを判定する方法であって、配列番号:1に記載の塩基配列において、エクソン1〜14の領域のうち少なくとも1つのエクソン領域の欠失の有無を検出することを含む方法、
〔37〕 エクソン領域がエクソン5〜13からなる領域である、〔36〕に記載の方法、
〔38〕 エクソン5〜13からなる領域が、配列番号:1に記載の塩基配列における7052位〜12028位である、〔37〕に記載の方法、
〔39〕 前記エクソン領域の欠失が検出された場合に被検カイコはカイコ濃核病ウイルスに抵抗性であるものと判定され、検出されない場合に被検カイコはカイコ濃核病ウイルスに感受性であるものと判定される工程、をさらに含む〔36〕〜〔38〕のいずれかに記載の判定方法、
〔40〕 以下の(a)または(b)のオリゴヌクレオチドを含む、カイコ2型濃核病ウイルス感受性判定試薬、
(a)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAにハイブリダイズし、少なくとも15ヌクレオチドの鎖長を有するオリゴヌクレオチド
(b)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のDNAを増幅するためのプライマーオリゴヌクレオチド
を提供するものである。
また抵抗性系統J150の翻訳領域のcDNAの塩基配列を配列番号:4に、当該cDNAから翻訳されるアミノ酸配列を配列番号:5に示す。
(a)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(b)配列番号:1に記載の塩基配列のコード領域を含むDNA
(c)配列番号:2に記載の塩基配列からなるDNA
(a)配列番号:5に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(b)配列番号:4に記載の塩基配列を含むDNA
さらに配列番号:8に記載の塩基配列のコード領域を含むDNAも、本発明のカイコ2型濃核病ウイルス抵抗性遺伝子をコードするDNAに含まれる。
(d)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、付加および/もしくは挿入したアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(e)配列番号:2に記載の塩基配列からなるDNAにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNA
(c)配列番号:5に記載のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、付加および/もしくは挿入したアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(d)配列番号:4に記載の塩基配列からなるDNAにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNA
本発明の好ましい態様においては、カイコ2型濃核病ウイルス感受性蛋白質の発現を、以下の(a)〜(c)からなる群より選択される化合物の投与によって阻害する、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコの製造方法に関する。
(a)カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子をコードするDNAの転写産物と相補的なアンチセンスRNAをコードするDNA
(b)カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子をコードするDNAの転写産物を特異的に開裂するリボザイム活性を有するRNAをコードするDNA
(c)カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子をコードするDNAの発現を、RNAi効果により阻害する作用を有するRNAをコードするDNA
(a)カイコ2型濃核病ウイルス感受性蛋白質に対してドミナントネガティブの性質を有するカイコ2型濃核病ウイルス感受性蛋白質の変異体
(b)カイコ2型濃核病ウイルス感受性蛋白質に対して結合する抗体
(c)カイコ2型濃核病ウイルス感受性蛋白質に結合する低分子化合物
(a)カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子をコードするDNAの転写産物と相補的なアンチセンスRNAをコードするDNA
(b)カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子をコードするDNAの転写産物を特異的に開裂するリボザイム活性を有するRNAをコードするDNA
(c)カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子をコードするDNAの発現を、RNAi効果により阻害する作用を有するRNAをコードするDNA
また本発明のスクリーニング方法の他の態様は、カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子をコードするDNAの発現を指標とする方法である。当該DNAの発現量を低下させるような化合物は、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤となることが期待される。
本発明の薬剤の投与量は、剤型の種類、投与方法、カイコの年齢や体重、症状等を考慮して、最終的には医師または獣医師の判断により適宜決定することができる。
1. ウイルスおよび接種方法
カイコ1型濃核病ウイルス(Bombyx densovirus type1; DNV-1)およびカイコ2型濃核病ウイルス(Bombyx densovirus type 2; DNV-2)接種液は、独立行政法人農業生物資源研究所の古田要二氏より分譲を受けた。病蚕の10倍量の蒸留水を加えて粉砕、抽出された接種液をさらに10倍希釈して桑葉両面に塗布し、孵化直後の1齢幼虫または脱皮直後の4齢幼虫に与えた。
抵抗性品種としてJ150(独立行政法人農業生物資源研究所由来)、J124(独立行政法人農業生物資源研究所由来)、抵抗性系統としてNo.902(独立行政法人農業生物資源研究所由来)を、感受性品種としてC124(独立行政法人農業生物資源研究所由来)、p50T(東京大学由来)、C108T(東京大学由来)、感受性系統としてNo.908(独立行政法人農業生物資源研究所由来)、B(北海道大学由来)を、また、同様に感受性を示すカイコの野生近縁種であるクワコ(野外採取、つくば市内)を用いた。
プローブ作製、連鎖解析用、および塩基配列解析のためのPCR産物の増幅には、TaKaRa Ex Taq(タカラ)を用いた。RT-PCRには、SuperScript III First-strand Synthesis System(インビトロジェン)と上記のEx Taqを、5'-および3'-RACEには、SMART RACE cDNA Amplification Kit (クロンテック)を用いた。方法は全て試薬に添付のマニュアルに従った。
BACクローンのコンティグ化のための重複度11倍のBACクローンDNAがドットブロットされたHigh Density Replica Filter(HDRF)とのハイブリダイゼーション、および連鎖解析のためのウイルス分離個体群のRFLP-サザンブロットは、ECL Direct Nucleic Acid Labeling System(アマシャム)を用いた。
連鎖解析用、および目的遺伝子のゲノム、cDNA塩基配列解析には、PCR産物またはクローニング、精製したプラスミドDNAを用いて、DYEnamic ET Terminator Cycle Sequencing Kit試薬(アマシャム)を用い、ABI PRISM 3700 DNA AnalyzerおよびABI 3730xl DNA Analyzer (アプライド バイオシステムズ)で配列を読んだ。
ESTクローンやBACクローン、およびゲノムDNAからのPCR産物をECLラベルし、HDRFとのハイブリダイゼーションを行い、ポジティブBACクローンを得た。これらの末端シークエンス情報をKAIKO BLASTで検索し、周辺のホールゲノムショットガンシークエンス情報を得、また同時にポジティブBACクローンのDNAフィンガープリントコンティグ化を行い、整列化されたBACクローンの中で、最も先端に位置するBACクローンの末端シークエンス情報をもとにプローブを作製し、ゲノムDNAまたはBACクローンDNAを鋳型として、PCRを行い、このPCR産物を再びECLラベルしてポジティブクローンの探索を行うことを繰り返して、コンティグ末端を伸長した。
nsd-2候補領域の決定およびその領域の絞り込みのために用いた、抵抗性品種はJ150(nsd-2; DNV-2抵抗性、+; DNV-1感受性、+; 白蛾)、感受性系統はNo.908(+; DNV-2感受性、Nid-1; DNV-1抵抗性、Bm; 黒蛾)であり、nsd-2, Nid-1, Bmの3つの遺伝子とも第17連鎖群に座乗している。両親間でのF1オスに抵抗性品種のメスを戻し交雑したBC1 (backcrossed F1)を作り、これにDNV-2を接種して生き残った個体を、2型ウイルス選抜分離個体群とし、Nid-1の連鎖を見るためにこれにDNV-1を接種して更なる選抜(2重選抜)をかけ、さらにBmの連鎖を見るために蛾の体色を調べて(3重選抜)、これらの個体別のDNAを調整して、連鎖解析に用いた。連鎖の方向からnsd-2領域への接近を行い、連鎖する領域を限定できたならば、次にその領域を絞り込むために、領域内でプライマーを設計、またさらに、BC1のウイルス分離個体群を増やして、境界領域でなお連鎖していない個体を選び、連鎖解析を続けてさらに領域を絞り込んだ。
染色体歩行を開始したプローブm25、m134、m237、m274から上流、下流に計約4.9 MbにわたってBACクローンのコンティグが構築され、同時に行った連鎖解析により、この中の約500 Kb内にnsd-2領域が絞られた(図1)。この領域内でさらに細かくPCRプライマーを設計し、抵抗性と感受性親ゲノム間での比較を行ったところ、抵抗性親品種に約6 Kb長の欠失領域を発見した。その他数種の抵抗性、感受性系統/品種間で比較した結果、これはnsd-2を持つ品種/系統に特異的な欠失であった(図2)。
上記欠失領域の塩基配列を決定した。感受性系統No.908における欠失領域を含むゲノム塩基配列を配列番号:1に示す。配列番号:1における第5989位〜12355位が抵抗性系統では欠失していた。その情報から、発現遺伝子予測、蛋白質、cDNAの相同性検索を行い、発現している遺伝子を同定した(表2;欠失領域での塩基配列相同性検索)。
単離した遺伝子の塩基配列から5'UTRと3'UTR領域でプライマーを設計し、本ウイルス抵抗性と感受性品種/系統の幼虫中腸から調整したRNAでRT-PCRを行った結果、両品種間において、PCR産物のサイズに予測された通りの差が認められた(図4)。すなわち抵抗性ではすべて、欠失の分だけ産物が小さかった。
J150、No.908の4齢1日目における各組織のRNAを用いたRT-PCRの結果、本遺伝子はJ150、No.908ともに中腸のみで検出された(図5)。J150とNo.908における各発育時期についてRT-PCRを行った(図6)。本遺伝子は中腸が形成された後の胚子後期から全幼虫期にわたって検出され、摂食を中止して中腸細胞の脱落、更新の行われる眠期にはその発現は非常に少なかった。また、カイコ由来培養細胞から調整したRNAからはいずれもこの遺伝子の発現は見られなかった(図7)。
カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性個体に、カイコ2型濃核病ウイルス感受性個体由来の全長型遺伝子を導入した。その結果、導入された全長型遺伝子を発現した形質転換個体だけがカイコ2型濃核病ウイルス感受性になり、当該ウイルスで病死することが確認された。
Claims (28)
- 配列番号:1に記載の塩基配列において、エクソン1:1位〜57位、エクソン2:169位〜273位、エクソン3:4000位〜4258位、エクソン4:5415位〜5631位、エクソン5:7052位〜7095位、エクソン6:7292位〜7439位、エクソン7:7899位〜7977位、エクソン8:8065位〜8168位、エクソン9:8573位〜8765位、エクソン10:10680位〜10856位、エクソン11:10941位〜11040位、エクソン12:11155位〜11334位、エクソン13:11934位〜12028位、エクソン14:12781位〜13056位で示されるエクソン1〜14の領域の塩基配列を有する、カイコ2型濃核病ウイルス感受性遺伝子をコードするDNA。
- 下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNA。
(a)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(b)配列番号:1に記載の塩基配列のエクソン1:1位〜57位、エクソン2:169位〜273位、エクソン3:4000位〜4258位、エクソン4:5415位〜5631位、エクソン5:7052位〜7095位、エクソン6:7292位〜7439位、エクソン7:7899位〜7977位、エクソン8:8065位〜8168位、エクソン9:8573位〜8765位、エクソン10:10680位〜10856位、エクソン11:10941位〜11040位、エクソン12:11155位〜11334位、エクソン13:11934位〜12028位、エクソン14:12781位〜13056位で示されるコード領域を含むDNA
(c)配列番号:2に記載の塩基配列からなるDNA - カイコ2型濃核病ウイルス感受性を有する下記(d)または(e)に記載のDNA。
(d)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、付加および/もしくは挿入したアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(e)配列番号:2に記載の塩基配列と90%以上同一であるDNA - 請求項1〜3のいずれかに記載のDNAを含むベクター。
- 請求項1〜3のいずれかに記載のDNAによりコードされる蛋白質。
- 請求項5に記載の蛋白質に結合する抗体。
- 請求項5に記載の蛋白質をコードするアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、付加および/もしくは挿入したアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA。
- 配列番号:1に記載の塩基配列において、エクソン1:1位〜57位、エクソン2:169位〜273位、エクソン3:4000位〜4258位、エクソン4:5415位〜5631位、エクソン5:7052位〜7095位、エクソン6:7292位〜7439位、エクソン7:7899位〜7977位、エクソン8:8065位〜8168位、エクソン9:8573位〜8765位、エクソン10:10680位〜10856位、エクソン11:10941位〜11040位、エクソン12:11155位〜11334位、エクソン13:11934位〜12028位、エクソン14:12781位〜13056位で示されるエクソン1〜14の領域のうちエクソン5〜13からなる領域を欠失した塩基配列を有する、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性遺伝子をコードするDNA。
- 下記(a)または(b)に記載のDNA。
(a)配列番号:5に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(b)配列番号:4に記載の塩基配列を含むDNA - カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性を有する下記(c)または(d)に記載のDNA。
(c)配列番号:5に記載のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、付加および/もしくは挿入したアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
(d)配列番号:4に記載の塩基配列と90%以上同一であるDNA - 請求項7〜10のいずれかに記載のDNAを含むベクター。
- 請求項7〜10のいずれかに記載のDNAによりコードされる蛋白質。
- 請求項1〜3のいずれかに記載のDNAまたは請求項4に記載のベクターを保持する、カイコ2型濃核病ウイルス感受性の形質転換カイコ細胞。
- 請求項13に記載の形質転換カイコ細胞を含む、カイコ2型濃核病ウイルス感受性の形質転換カイコ。
- 請求項14に記載の形質転換カイコの卵、子孫、もしくはクローンである、カイコ2型濃核病ウイルス感受性の形質転換カイコ。
- 請求項14または15に記載の形質転換カイコを交配させることによる、カイコ2型濃核病ウイルス感受性の形質転換カイコの製造方法。
- 請求項5に記載の蛋白質の機能が阻害されていることを特徴とする、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコ細胞。
- 請求項17に記載の形質転換カイコ細胞を含む、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコ。
- 請求項18に記載の形質転換カイコの卵、子孫、もしくはクローンである、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコ。
- 請求項18または19に記載の形質転換カイコを交配させることによる、カイコ2型濃核病ウイルス抵抗性の形質転換カイコの製造方法。
- 以下の(a)〜(c)の工程を含む、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤のための候補化合物のスクリーニング方法。
(a)請求項5に記載の蛋白質と被検化合物を接触させる工程
(b)前記蛋白質と被検化合物との結合活性を測定する工程
(c)請求項5に記載の蛋白質と結合する化合物を選択する工程 - 以下の(a)〜(c)の工程を含む、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤のための候補化合物のスクリーニング方法。
(a)請求項1〜3のいずれかに記載のDNAを発現する細胞に、被検化合物を接触させる工程
(b)該DNAの発現レベルを測定する工程
(c)被検化合物を接触させない場合と比較して、該発現レベルを低下させる化合物を選択する工程 - 以下の(a)〜(c)の工程を含む、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤のための候補化合物のスクリーニング方法。
(a)請求項1〜3のいずれかに記載のDNAの転写調節領域とレポーター遺伝子とが機能的に結合した構造を有するDNAを含む細胞または細胞抽出液と、被検化合物を接触させる工程
(b)該レポーター遺伝子の発現レベルを測定する工程
(c)被検化合物の非存在下において測定した場合と比較して、該発現レベルを低下させる化合物を選択する工程 - 以下の(a)〜(c)の工程を含む、カイコ2型濃核病ウイルス感染阻害剤のための候補化合物のスクリーニング方法。
(a)請求項1〜3のいずれかに記載のDNAを発現する細胞へ被検化合物を接触させる工程
(b)該細胞における請求項5に記載の蛋白質の発現量または活性を測定する工程
(c)被検化合物に非存在下において測定した場合と比較して、当該蛋白質の発現量または活性を低下させる化合物を選択する工程 - カイコ2型濃核病ウイルス感受性のカイコ品種又は系統を判定する方法であって、配列番号:1に記載の塩基配列において、エクソン1:1位〜57位、エクソン2:169位〜273位、エクソン3:4000位〜4258位、エクソン4:5415位〜5631位、エクソン5:7052位〜7095位、エクソン6:7292位〜7439位、エクソン7:7899位〜7977位、エクソン8:8065位〜8168位、エクソン9:8573位〜8765位、エクソン10:10680位〜10856位、エクソン11:10941位〜11040位、エクソン12:11155位〜11334位、エクソン13:11934位〜12028位、エクソン14:12781位〜13056位で示されるエクソン1〜14の領域のうち少なくともエクソン5〜13からなるエクソン領域の欠失の有無を検出することを含む方法。
- エクソン領域が上記エクソン5〜13からなる領域である、請求項25に記載の方法。
- エクソン5〜13からなる領域が、配列番号:1に記載の塩基配列における7052位〜12028位である、請求項26に記載の方法。
- 前記エクソン領域の欠失が検出された場合に被検カイコはカイコ濃核病ウイルスに抵抗性であるものと判定され、検出されない場合に被検カイコはカイコ濃核病ウイルスに感受性であるものと判定される工程、をさらに含む請求項25〜27のいずれかに記載の判定方法。
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