JP5200216B2 - Novel benzyl benzoate derivatives and pharmaceuticals - Google Patents

Description

本発明は、安息香酸ベンジル誘導体を含有し血圧降下作用に特徴を有する医薬に関する。 The present invention relates to a medicament characterized in containing and antihypertensive effect Ahn Ikikosan benzyl induction body.

レニン−アンジオテンシン系は、生体内における血圧、水分量、体内電解質バランスなどの恒常性調節系として重要な役割を持つ。主要な生理活性物質はアンジオテンシンIIである。   The renin-angiotensin system has an important role as a homeostatic regulation system such as blood pressure, water content, and body electrolyte balance in the living body. The main bioactive substance is angiotensin II.

腎臓（傍糸球体）から分泌されるレニン（１種のたんぱく質分解酵素）は肝臓で生成されるレニン基質からアンジオテンシンI（前駆体デカペプチド）を生成する。その後、アンジオテンシンIはアンジオテンシン変換酵素（ACE）により強力な昇圧作用を有するアンジオテンシンII（オクタペプチド）に変換される。   Renin (a type of proteolytic enzyme) secreted from the kidney (paraglomerulus) produces angiotensin I (precursor decapeptide) from the renin substrate produced in the liver. Thereafter, angiotensin I is converted to angiotensin II (octapeptide) having a strong pressor action by angiotensin converting enzyme (ACE).

アンジオテンシンIIの昇圧機序は末梢血管平滑筋へ直接作用するとともに血管運動中枢を介して中枢性にも作用する。また、バソプレッシン分泌作用や、より低濃度におけるアルドステロン分泌作用も間接的に昇圧作用に結びつき、全身血圧の上昇をきたすと考えられる。   The pressor mechanism of angiotensin II acts directly on peripheral vascular smooth muscle and also acts centrally via the vasomotor center. In addition, vasopressin secretion and aldosterone secretion at a lower concentration are also indirectly related to pressor action, leading to an increase in systemic blood pressure.

アンジオテンシンIIは細胞膜上のアンジオテンシンII受容体、特に１型（AT₁）を介して血管収縮作用を示す。従って、AT₁ 受容体を拮抗させることにより、血圧降下作用が期待できる。 Angiotensin II exhibits a vasoconstrictive action via angiotensin II receptors on the cell membrane, particularly type 1 (AT ₁ ). Therefore, a blood pressure lowering effect can be expected by antagonizing the AT ₁ receptor.

レニン−アンジオテンシン系に作用する血圧降下剤としては、レニン阻害剤、ACE阻害剤（カプトプリル）、の他ペプチド性アンジオテンシンII拮抗剤（サララシン）、非ペプチド性アンジオテンシンII拮抗剤（ロサルタン）等が経口剤として臨床で用いられている。   As antihypertensive agents that act on the renin-angiotensin system, renin inhibitors, ACE inhibitors (captopril), other peptide angiotensin II antagonists (salalasin), non-peptide angiotensin II antagonists (losartan), etc. are oral agents As clinical use.

カルシウムイオン（Ｃａ²⁺）はすべての細胞と細胞外液に分布し、細胞の刺激応答反応において最も重要な細胞内情報伝達物質として応答反応発現に働いており、神経細胞の興奮、筋肉の収縮、ホルモンや消化酵素の分泌、ステロイド合成、糖や脂質の代謝、細胞増殖及び分化等、多くの細胞機能に関与している。従って、細胞内のＣａ²⁺濃度調節に異常が起こると種々の疾病を引き起こし、また疾病の治療には細胞内のＣａ²⁺濃度を整えることが有効である。細胞は細胞内のＣａ²⁺濃度を厳密にコントロールするために、細胞膜に存在するカルシウムチャンネル、カルシウムポンプ、または小胞体表面に存在するイノシトール三リン酸受容体、カルシウムポンプ等、種々の調節機構を準備している。このような細胞内情報伝達過程は複数の連鎖経路からなる場合もあり、一般に細胞ごとに異なって多様である。カルシウムチャンネル（特にＬ型）に拮抗作用を有する化合物は血管を拡張することにより血圧降下作用を示し、高血圧症の治療薬として臨床で使用されている。 Calcium ions (Ca ²⁺ ) are distributed in all cells and extracellular fluids, and act as the most important intracellular signal transmitter in the stimulation response of cells. It is involved in many cell functions such as secretion of hormones and digestive enzymes, steroid synthesis, sugar and lipid metabolism, cell proliferation and differentiation. Therefore, when an abnormality occurs in the regulation of intracellular Ca ²⁺ concentration, various diseases are caused, and it is effective to adjust the intracellular Ca ²⁺ concentration for the treatment of diseases. In order to strictly control the intracellular Ca ²⁺ concentration, cells have various regulatory mechanisms such as calcium channels existing in cell membranes, calcium pumps, inositol triphosphate receptors existing on the surface of the endoplasmic reticulum, calcium pumps, etc. I am preparing. Such an intracellular information transmission process may be composed of a plurality of chain pathways, and is generally different from cell to cell. A compound having an antagonistic action on a calcium channel (particularly L type) exhibits a blood pressure lowering action by dilating blood vessels, and is used clinically as a therapeutic agent for hypertension.

一方、血圧降下剤は対症療法剤であることから長期間にわたる反復投与が要求され、患者の煩わしさ軽減の見地から１日１回経口投与法が一般的であるが、これに伴い投与量と薬効継続の調節、目まい等の不快感の発現、他の薬剤との相互作用、服用中断による影響などの問題点が存在するのが現状である。   On the other hand, since antihypertensive agents are symptomatic treatments, repeated administration over a long period of time is required, and from the standpoint of reducing patient annoyance, the once-daily oral administration method is common. At present, there are problems such as regulation of continued pharmacological effects, expression of discomfort such as dizziness, interaction with other drugs, and effects of discontinuation of administration.

従って、治療の現場では、長期間服用しても安全であり、かつ確実な効果を奏する薬剤の開発が常に望まれている。   Therefore, in the field of treatment, it is always desired to develop a drug that is safe even if taken for a long period of time and has a certain effect.

安息香酸ベンジルは各種植物の成分として知られ、香料、抗疥癬剤、殺ダニ・シラミ剤としての用途が知られている。また、それら植物をいわゆるハーブとして用いた場合の血圧降下作用に関与しているとされるが、医薬品を指向してさらに検討された例は報告されていない。   Benzyl benzoate is known as a component of various plants, and its use as a fragrance, an anti-scabicide, an acaricide / lice agent is known. Moreover, although it is said that it is concerned in the blood pressure lowering effect at the time of using those plants as what is called an herb, the example further examined aiming at a pharmaceutical is not reported.

安息香酸ベンジル誘導体は種々知られているが血圧降下剤としての用途が報告された例はない。また、安息香酸の２−ブロモベンジルエステルはこれまでに文献への報告を見ない新規化合物である。   Various benzyl benzoate derivatives are known, but there has been no reported use as an antihypertensive agent. Moreover, 2-bromobenzyl ester of benzoic acid is a novel compound that has not been reported in the literature.

本発明は、アンジオテンシンII１型受容体拮抗剤、カルシウムチャンネル拮抗剤、血圧降下剤などとして作用する医薬を提供することを解決すべき課題とする。 The present invention angiotensin II1 type receptor antagonists, calcium channel antagonist, an object to be achieved by providing a medicament which acts as a blood pressure lowering agent.

本発明者らは、上記課題解決のため鋭意研究を重ねた結果、種々の安息香酸ベンジル誘導体のうち、新規化合物である２−ブロモベンジル安息香酸がインビトロでアンジオテンシンII１型受容体拮抗作用及びカルシウムチャンネル拮抗作用を示すこと、またグアニジノ関連構造を有するベンジルオキシカルボニル化合物がインビトロでの作用に加えてマウスを用いた動物試験において有意の血圧降下作用を示すことを見出し、本発明を完成した。   As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that among various benzyl benzoate derivatives, 2-bromobenzyl benzoate, which is a novel compound, has an angiotensin II type 1 receptor antagonistic activity and calcium channel in vitro. The inventors have found that benzyloxycarbonyl compounds having antagonism and guanidino-related structures exhibit significant blood pressure lowering effects in animal tests using mice in addition to in vitro effects, and thus completed the present invention.

すなわち、本発明の医薬は、下記一般式（２）の安息香酸ベンジル誘導体及び一般式（３）のカルボン酸ベンジル誘導体から選択される１以上の化合物である。特に、これら化合物は血圧降下剤として適用される。   That is, the medicament of the present invention is one or more compounds selected from benzyl benzoate derivatives of the following general formula (2) and benzyl carboxylic acid derivatives of the general formula (3). In particular, these compounds are applied as antihypertensive agents.

（式（２）中、Ｒ^1〜10は、水素、ハロゲン、保護基を有していても良い水酸基、アミノ基、保護基を有していても良いチオール基、ニトロ基、アシル基、アルコキシカルボニル基、スルホ基並びに炭化水素基（一部水素が、ハロゲン、保護基を有していても良い水酸基、アミノ基、保護基を有していても良いチオール基、ニトロ基、アシル基、アルコキシカルボニル基及びスルホ基から選択される１以上の基で置換されても良い）から選択される置換基からそれぞれ独立して選択される。但し、全てが水素原子である場合は除く。） (In the formula (2), R ^{1 to 10} are hydrogen, halogen, a hydroxyl group that may have a protecting group, an amino group, a thiol group that may have a protecting group, a nitro group, an acyl group, an alkoxy group. Carbonyl group, sulfo group and hydrocarbon group (partially hydrogen, halogen, hydroxyl group which may have a protecting group, amino group, thiol group which may have a protecting group, nitro group, acyl group, alkoxy (It may be substituted with one or more groups selected from a carbonyl group and a sulfo group) and is independently selected from substituents selected from the above, except when all are hydrogen atoms.)

（式（３）中、Ｒ^1〜5は、水素、ハロゲン、保護基を有していても良い水酸基、アミノ基、保護基を有していても良いチオール基、ニトロ基、アシル基、アルコキシカルボニル基、スルホ基並びに炭化水素基（一部水素が、ハロゲン、保護基を有していても良い水酸基、アミノ基、保護基を有していても良いチオール基、ニトロ基、アシル基、アルコキシカルボニル基及びスルホ基から選択される１以上の基で置換されても良い）から選択される置換基からそれぞれ独立して選択される。；Ｘは (In the formula (3), R ^{1 to 5} are hydrogen, halogen, a hydroxyl group that may have a protecting group, an amino group, a thiol group that may have a protecting group, a nitro group, an acyl group, an alkoxy group. Carbonyl group, sulfo group and hydrocarbon group (partially hydrogen, halogen, hydroxyl group which may have a protecting group, amino group, thiol group which may have a protecting group, nitro group, acyl group, alkoxy Each of which may be substituted with one or more groups selected from a carbonyl group and a sulfo group).

である。ｎは１以上；Ｘは＊の部分に式（３）のＣ¹で示す炭素原子が位置する。）
上記医薬を探索する過程で、下記式（１）で表される有用な新規安息香酸ベンジル誘導体（２−ブロモベンジル安息香酸）を発見した。この化合物は式（２）中に含まれる１の化合物であり、血圧降下剤として適用可能な化合物である。 It is. n is 1 or more; X is a carbon atom represented by C ¹ in the formula (3) in the part of *. )
In the process of searching for the medicine, a useful novel benzyl benzoate derivative (2-bromobenzylbenzoic acid) represented by the following formula (1) was discovered. This compound is one compound contained in the formula (2), and is a compound applicable as a blood pressure lowering agent.

・一般式（２）の安息香酸ベンジル誘導体について
式中、Ｒ^1〜10のうちの少なくとも１つは水素以外の置換基を有する。水素以外の置換基としては、ハロゲン、保護基を有していても良い水酸基、保護基を有しても良いアミノ基、保護基を有していても良いチオール基、ニトロ基、アシル基、アルコキシカルボニル基、スルホ基並びに炭化水素基から選択できる。特に、ハロゲン、例えば臭素が挙げられる。 -About the benzyl benzoate derivative of General formula (2) In formula, at least 1 of ^R1-10 has substituents other than hydrogen. Examples of the substituent other than hydrogen include halogen, a hydroxyl group which may have a protecting group, an amino group which may have a protecting group, a thiol group which may have a protecting group, a nitro group, an acyl group, It can be selected from an alkoxycarbonyl group, a sulfo group and a hydrocarbon group. In particular, halogens such as bromine are mentioned.

水酸基、アミノ基、チオール基の保護基である置換基としては特に限定しない。一般的な有機化学分野における反応が進行しないようにする本来の意味での保護基の他、プロドラッグ化のために導入する置換基が挙げられる。例えば、アセチル基、プロピオニル基、ピバロイル基、ベンゾイル基等のアシル基；メトキシカルボニル基、t-ブトキシカルボニル基等のアルコキシカルボニル基；ベンジルオキシカルボニル基等のアラルキルオキシカルボニル基；ベンジル基、ナフチルメチル基等のアリールメチル基；トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ベンジルジメチルシリル基、t-ブチルジフェニルシリル基等のシリル基；アセトニド基；ヒドロキシメチル基、メトキシメチル基、エトキシエチル基等の低級アルコキシアルキル基が挙げられる。   The substituent which is a protective group for the hydroxyl group, amino group, and thiol group is not particularly limited. In addition to the protecting group in the original sense that prevents the reaction in the general organic chemistry field from proceeding, examples include a substituent introduced for the formation of a prodrug. For example, acyl groups such as acetyl group, propionyl group, pivaloyl group and benzoyl group; alkoxycarbonyl groups such as methoxycarbonyl group and t-butoxycarbonyl group; aralkyloxycarbonyl groups such as benzyloxycarbonyl group; benzyl group and naphthylmethyl group Arylmethyl groups such as trimethylsilyl group, triethylsilyl group, benzyldimethylsilyl group, t-butyldiphenylsilyl group, etc .; acetonide group; lower alkoxyalkyl groups such as hydroxymethyl group, methoxymethyl group, ethoxyethyl group, etc. Can be mentioned.

アシル基は特に限定しないが、炭素数１〜５程度のものが挙げられる。アルコキシカルボニル基も特に限定しないが、炭素数１〜５程度のアルコールとのエステルが挙げられる。炭化水素基も特に限定しない。例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基などが挙げられる。これらの炭化水素基は炭素数が１〜５程度であり、水素原子の一部乃至全部が置換されていても良い。フェニル基（一部水素が置換されたものも含む）を採用することもできる。   The acyl group is not particularly limited, and examples thereof include those having about 1 to 5 carbon atoms. The alkoxycarbonyl group is not particularly limited, and examples thereof include esters with alcohols having about 1 to 5 carbon atoms. The hydrocarbon group is not particularly limited. For example, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, etc. are mentioned. These hydrocarbon groups have about 1 to 5 carbon atoms, and some or all of the hydrogen atoms may be substituted. A phenyl group (including those partially substituted with hydrogen) can also be employed.

これら安息香酸ベンジル誘導体は対応する安息香酸誘導体及びベンジルアルコール誘導体をエステル化することで容易に合成できる。また、前駆体となる置換基を導入後、後反応により目的の置換基に変換することでも合成できる。   These benzyl benzoate derivatives can be easily synthesized by esterifying the corresponding benzoic acid derivative and benzyl alcohol derivative. Moreover, it can synthesize | combine also by introduce | transducing the substituent used as a precursor, and converting into the target substituent by post-reaction.

・一般式（３）のカルボン酸ベンジル誘導体について
式中Ｒ⁶〜¹⁰が存在しない以外は一般式（２）における説明がすべて妥当する。更に、Ｘとしては上記（ａ）又は（ｂ）に記載の置換基が採用される。ここで、置換基（ａ）におけるｎは１以上であるが、好ましくはｎ＝１〜３、より好ましくはｎ＝１である。 - except the absence of wherein R ⁶ ~ ¹⁰ for carboxylic acid benzyl derivative of the general formula (3) described in the general formula (2) is valid all. Furthermore, as X, the substituent described in the above (a) or (b) is employed. Here, n in the substituent (a) is 1 or more, preferably n = 1 to 3, and more preferably n = 1.

以下に一般式（３）で表されるカルボン酸ベンジル誘導体のうち好ましいものを挙げる。下記式（４）はＸが（ａ）、ｎが１、Ｒ^1〜5が水素である４−オキソ−アゼチジン−２−カルボン酸ベンジルエステル（4-Oxo-azetidine-2-carboxylic acid benzyl ester）である。下記式（５）はＸが（ｂ）、Ｒ^1〜5が水素である（イミノ−ピラゾール−１−イル−メチル）−カルバミン酸ベンジルエステル（(Imino-pyrazol-1-yl-methyl)-carbamic acid benzyl ester）である。 Preferred examples of the carboxylic acid benzyl derivative represented by the general formula (3) are shown below. In the following formula (4), 4-oxo-azetidine-2-carboxylic acid benzyl ester wherein X is (a), n is 1, and R ¹ to ⁵ are hydrogen. It is. In the following formula (5), (Imino-pyrazol-1-yl-methyl) -carbamic (Imino-pyrazol-1-yl-methyl) -carbamic where X is (b) and R ^1-5 are hydrogen. acid benzyl ester).

これらカルボン酸ベンジル誘導体は対応するカルボン酸誘導体及びベンジルアルコール誘導体をエステル化することで容易に合成できる。また、前駆体となる置換基を導入後、後反応により目的の置換基に変換することでも合成できる。   These benzyl carboxylic acid derivatives can be easily synthesized by esterifying the corresponding carboxylic acid derivative and benzyl alcohol derivative. Moreover, it can synthesize | combine also by introduce | transducing the substituent used as a precursor, and converting into the target substituent by post-reaction.

（試料の調製）
・Ｒ^1〜10の各置換基を表１に示すものに変化させた安息香酸ベンジル誘導体を被検化合物とした。市販品のあるものは市販品を用い、ないものは合成した。合成方法は下記方法又は下記方法類似の方法にて行った。また、式（４）及び（５）の化合物も被検化合物とした（式（４）の化合物：ベンジル（Ｓ）-（-）-４−オキソ-２-アゼチジンカルボキシラート(Benzyl (S)-(-)-4-oxo-2-azetidine carboxylate)、式（５）の化合物：Ｎ−(ベンジルオキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジン (N-(Benzyloxycarbonyl)-1H-pyrazole-1-carboxamidine)）。 (Sample preparation)
^-The benzyl benzoate derivative which changed each substituent of ^R1-10 into what is shown in Table 1 was made into the test compound. Some commercially available products were used, and others were synthesized. The synthesis method was performed by the following method or a method similar to the following method. The compounds of formulas (4) and (5) were also used as test compounds (compound of formula (4): benzyl (S)-(−)-4-oxo-2-azetidinecarboxylate (Benzyl (S) -(-)-4-oxo-2-azetidine carboxylate), a compound of formula (5): N- (Benzyloxycarbonyl) -1H-pyrazole-1- (N- (Benzyloxycarbonyl) -1H-pyrazole-1-) carboxamidine)).

・２−ブロモベンジル安息香酸（一般式（２）におけるＲ¹がＢｒ、Ｒ^2〜10が水素）の合成：
ナス型フラスコに２−ブロモベンジルアルコール（２３８ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を採り、系内を窒素雰囲気下とした後、ピリジン（６．４ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。これに塩化ベンゾイル（１６５μL、１．４１ｍｍｏｌ）を加え、５０分間撹拌した。反応液に蒸留水１０ｍＬを加え、５分後室温に戻した。これを１０ｍＬのｎ−ヘキサンで３回抽出し、有機層を合わせて飽和塩化ナトリウム水溶液１０ｍＬで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０ｇ、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５０／１から２５／１）により精製して２−ブロモベンジル安息香酸３４５．１ｍｇ（回収率９２．６％）を白色固体として得た。 Synthesis of 2-bromobenzylbenzoic acid (R ¹ in the general formula (2) is Br and R ² to ¹⁰ are hydrogen):
2-Bromobenzyl alcohol (238 mg, 1.28 mmol) was taken in an eggplant-shaped flask, and the system was put under a nitrogen atmosphere, and then dissolved in pyridine (6.4 mL) and cooled to 0 ° C. To this was added benzoyl chloride (165 μL, 1.41 mmol) and stirred for 50 minutes. Distilled water (10 mL) was added to the reaction solution, and the temperature was returned to room temperature after 5 minutes. This was extracted three times with 10 mL of n-hexane, and the organic layers were combined, washed with 10 mL of a saturated aqueous sodium chloride solution, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off, and the residue was purified by silica gel column chromatography (10 g, n-hexane / ethyl acetate = 50/1 to 25/1) to obtain 345.1 mg of 2-bromobenzylbenzoic acid (recovery rate 92.6). %) As a white solid.

なお、出発物質としての２−ブロモベンジルアルコールに代えて、対応する構造をもつ化合物を採用することで目的の化合物が合成できる（例えば、３−ブロモベンジルアルコールを採用すると、２−ブロモベンジル安息香酸が合成できる）。   In addition, it replaces with 2-bromobenzyl alcohol as a starting material, and can synthesize | combine the target compound by employ | adopting the compound which has a corresponding structure (For example, when 3-bromobenzyl alcohol is employ | adopted, 2-bromobenzyl benzoic acid will be used. Can be synthesized).

分子式：Ｃ₁₄Ｈ₁₁Ｏ₂Ｂｒ（ｍｗ＝２９１）、¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）及び¹³Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）のそれぞれについて測定したスペクトルを図１及び２に示す。 1 and 2 show the spectra measured for molecular formulas: C ₁₄ H ₁₁ O ₂ Br (mw = 291), ¹ H-NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) and ¹³ C-NMR (100 MHz, CDCl ₃ ), respectively.

・３−アミノベンジル安息香酸（トリフルオロ酢酸塩）、（一般式（２）におけるＲ²がアミノ基、Ｒ^1、3〜10が水素）の合成：
ナス型フラスコに３−アミノベンジルアルコール（２０１．１ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を採り、系内を窒素雰囲気下とした後、１，４−ジオキサン（１．５ｍＬ）、蒸留水１．５ｍＬ、及び１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１．６ｍＬの混合液に溶解した。これにジ−ｔ−ブチルジカルボネート（(Boc)₂O、５２９．２ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）を加え、６時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して溶媒をできるだけ留去し、６ｍＬの酢酸エチルで３回抽出した。有機層を合わせて飽和塩化ナトリウム水溶液１０ｍＬで洗浄し、溶媒を留去した後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０ｇ、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５／１から１／１）により精製して、アミノ基が保護された３−アミノベンジルアルコール（４２２．５ｍｇ）を得た。 Synthesis of 3-aminobenzylbenzoic acid (trifluoroacetate salt) (wherein R ² in formula (2) is an amino group, R ¹ and 3 to ¹⁰ are hydrogen):
3-Aminobenzyl alcohol (201.1 mg, 1.62 mmol) was taken in an eggplant-shaped flask and the system was put under a nitrogen atmosphere, and then 1,4-dioxane (1.5 mL), distilled water 1.5 mL, and 1N It melt | dissolved in the liquid mixture of 1.6 mL of sodium hydroxide aqueous solution. Di-t-butyl dicarbonate ((Boc) ₂ O, 529.2 mg, 2.43 mmol) was added thereto, and the mixture was stirred for 6 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove the solvent as much as possible, and extracted with 6 mL of ethyl acetate three times. The organic layers were combined and washed with 10 mL of saturated aqueous sodium chloride solution, and the solvent was distilled off. The residue was purified by silica gel column chromatography (10 g, n-hexane / ethyl acetate = 5/1 to 1/1). The amino group protected 3-aminobenzyl alcohol (422.5 mg) was obtained.

ナス型フラスコに上記のアミノ基が保護された３−アミノベンジルアルコール（２５８．５ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を採り、系内を窒素雰囲気下とした後、ピリジン（５．８ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。これに塩化ベンゾイル（１５０μL、１．２８ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。反応液に蒸留水１０ｍＬを加え、３分後室温に戻した。これを１０ｍＬの酢酸エチルで３回抽出し、有機層を合わせて飽和塩化ナトリウム水溶液１０ｍＬで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０ｇ、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝２５／１から０／１）により精製してアミノ基が保護された３−アミノベンジル安息香酸（１９９．６ｍｇ）を白色固体として得た。   The above amino group-protected 3-aminobenzyl alcohol (258.5 mg, 1.16 mmol) was taken in an eggplant-shaped flask, and the system was put under a nitrogen atmosphere, and then dissolved in pyridine (5.8 mL). Cooled to ° C. To this was added benzoyl chloride (150 μL, 1.28 mmol) and stirred for 1 hour. Distilled water (10 mL) was added to the reaction solution, and the temperature was returned to room temperature after 3 minutes. This was extracted three times with 10 mL of ethyl acetate, and the organic layers were combined, washed with 10 mL of a saturated aqueous sodium chloride solution, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off, and the residue was purified by silica gel column chromatography (10 g, n-hexane / ethyl acetate = 25/1 to 0/1) to protect the amino group and 3-aminobenzylbenzoic acid (199. 6 mg) was obtained as a white solid.

ナス型フラスコに上記のアミノ基が保護された３−アミノベンジル安息香酸（４０．８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を採り、系内を窒素雰囲気下とした後、ジクロロメタン（０．３ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。これにトリフルオロ酢酸０．３ｍLを加え、１５分間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、３−アミノベンジル安息香酸（トリフルオロ酢酸塩）を５１．４ｍｇ、褐色固体として得た。   The above amino group-protected 3-aminobenzylbenzoic acid (40.8 mg, 0.12 mmol) was taken in an eggplant-shaped flask, and the system was placed in a nitrogen atmosphere, and then dissolved in dichloromethane (0.3 mL). Cooled to 0 ° C. To this, 0.3 mL of trifluoroacetic acid was added and stirred for 15 minutes. The reaction solution was concentrated under reduced pressure to obtain 51.4 mg of 3-aminobenzylbenzoic acid (trifluoroacetate) as a brown solid.

（アンジオテンシンII１型受容体への作用評価試験）
アンジオテンシンII１型受容体発現遺伝子を導入したヒト胎児腎細胞（ｍＡＴ１ａ（ＨＡ）／２９３―Ｔ）を用いて試験を行った。試験は、アンジオテンシンII添加による細胞内カルシウムイオン濃度の変化（被検化合物を２００μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ添加した場合の応答率を試料を添加しない場合を１００％として表す）を測定し、被験化合物のアンジオテンシンII１型受容体への作用を評価した。 (Evaluation test for angiotensin II type 1 receptor)
The test was performed using human fetal kidney cells (mAT1a (HA) / 293-T) into which angiotensin II type 1 receptor expression gene was introduced. The test measures changes in intracellular calcium ion concentration due to the addition of angiotensin II (the response rate when the test compound is added at 200 μg / mL, 20 μg / mL, and 2 μg / mL is expressed as 100% when the sample is not added). Then, the effect of the test compound on the angiotensin II type 1 receptor was evaluated.

具体的には、１０％ＦＣＳ／ＤＭＥＭ（０．１ｍｇ／ｍＬ相当のＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ添加）培地で培養した上記細胞を遠心分離操作により集め、蛍光試薬であるＦｕｒａ―２ＡＭの１ｍＭ（ＤＭＳＯ）溶液４０μＬを加えたＨＥＰＥＳ／Ｈａｎｋｓ緩衝液（０．１％ＢＳＡ添加）１０ｍＬに懸濁した後、３７℃で１時間静置して細胞内に蛍光試薬（Ｆｕｒａ―２ＡＭ）を吸収させ、続いて細胞内で加水分解により遊離のＦｕｒａ―２へと変換させた。遠心分離操作により集めた細胞を再び０．１％ＢＳＡ添加ＨＥＰＥＳ／Ｈａｎｋｓ緩衝液に約１００万〜２００万個／ｍLの濃度で懸濁させた。   Specifically, the above cells cultured in a 10% FCS / DMEM (with 0.1 mg / mL equivalent Hygromycin B) medium were collected by centrifugation, and 40 μL of a 1 mM (DMSO) solution of Fura-2AM as a fluorescent reagent was added. The suspension was suspended in 10 mL of HEPES / Hanks buffer (with 0.1% BSA) and allowed to stand at 37 ° C. for 1 hour to absorb the fluorescent reagent (Fura-2AM) into the cell, followed by It was converted to free Fura-2 by degradation. Cells collected by centrifugation were suspended again in a HEPES / Hanks buffer solution supplemented with 0.1% BSA at a concentration of about 1 to 2 million cells / mL.

この懸濁液を０．５ｍＬキュベットにとり、蛍光光度計にセットして、被験化合物（接触濃度の１００倍濃度のＭｅＯＨ溶液）を５μＬ添加した。その後、１０^-5〜１０^-7ＭのアンジオテンシンII／ＨＥＰＥＳ／Ｈａｎｋｓ緩衝液（０．１％ＢＳＡ添加）を５μｌ添加した。この時、励起波長３４０ｎｍ及び３８０ｎｍでの５００ｎｍの蛍光を測定し、その蛍光強度比（３４０／３８０）を求めた。何も添加しないときの蛍光強度比（３４０／３８０）をＡ0、次いでアンジオテンシンIIのみ添加後の最高蛍光強度比（３４０／３８０）をＢとし、（Ｂ−Ａ₀）を対照とした（応答率１００％）。試料を添加する前の蛍光強度比（３４０／３８０）をＡ₁、被験化合物、次いでアンジオテンシンII添加後の最高蛍光強度比（３４０／３８０）をＤとし、（Ｄ−Ａ₁）の（Ｂ−Ａ₀）に対する割合を被験化合物の応答率（％）としてアンジオテンシンII１型受容体に対する拮抗作用を評価した。即ち、被験化合物の応答率が小さいほど同拮抗作用が強いことを示した。尚、被験化合物のみ添加したときの蛍光強度比（３４０／３８０）をＣとした場合、（Ｃ−Ａ₁）の（Ｂ−Ａ₀）に対する割合を被験化合物の変化率（％）とした。 This suspension was placed in a 0.5 mL cuvette, set in a fluorometer, and 5 μL of a test compound (MeOH solution having a concentration 100 times the contact concentration) was added. Thereafter, ⁵ μl of 10 ⁻⁵ to 10 ⁻⁷ M angiotensin II / HEPES / Hanks buffer solution (with 0.1% BSA added) was added. At this time, fluorescence at 500 nm at excitation wavelengths of 340 nm and 380 nm was measured, and the fluorescence intensity ratio (340/380) was determined. The fluorescence intensity ratio (340/380) when nothing is added is A0, then the maximum fluorescence intensity ratio (340/380) after addition of only angiotensin II is B, and (B−A ₀ ) is the control (response rate). 100%). The fluorescence intensity ratio before adding the sample (340/380) is A ₁ , and the highest fluorescence intensity ratio (340/380) after addition of the test compound and then angiotensin II is D, and (D-A ₁ ) (B- The ratio of A ₀ ) was defined as the response rate (%) of the test compound, and the antagonistic action against the angiotensin II type 1 receptor was evaluated. That is, the smaller the response rate of the test compound, the stronger the antagonism. When the fluorescence intensity ratio (340/380) when only the test compound was added was C, the ratio of (C-A ₁ ) to (B-A ₀ ) was defined as the change rate (%) of the test compound.

また、本試験条件下では、血圧降下剤として臨床で用いられている非ペプチド性アンジオテンシンII拮抗剤、ニューロタン錠の有効成分であるロサルタンは接触濃度０．０１μｇ／ｍＬで約２４．３％の応答率を示した。なお、応答率が５０％以下であれば、細胞内へのカルシウムイオンの流入が阻害されており、アンジオテンシンII１型受容体拮抗作用が生じていると考えられる。結果を表１に示す。   Also, under this test condition, the non-peptide angiotensin II antagonist clinically used as an antihypertensive agent, losartan, which is an active ingredient of the neurotan tablet, has a response of about 24.3% at a contact concentration of 0.01 μg / mL. Showed the rate. If the response rate is 50% or less, the inflow of calcium ions into the cell is inhibited, and it is considered that an angiotensin II type 1 receptor antagonistic action occurs. The results are shown in Table 1.

表１に示した化合物はすべて、応答率を低下させていることが明らかになった。特に、化合物１〜１１及び式（５）の化合物が応答率低下作用が大きかった。接触濃度２００μｇ／ｍＬにおける結果から、化合物１〜５及び７〜１１の応答率低下作用が特に大きいことが明らかになった。そのなかでも化合物１〜４、７及び８が、更には化合物１〜３が大きな応答率低下作用を示すことが明らかになった。また、接触濃度２０μｇ／ｍＬの結果からは化合物１、３及び１１並びに式（５）の化合物が大きな応答率低下作用を示すことが明らかになった。特に化合物１１は、０．２μｇ／ｍＬにおいても有意の阻害活性が見られた。   All the compounds shown in Table 1 were found to reduce the response rate. In particular, the compounds 1 to 11 and the compound of the formula (5) had a large response rate reducing effect. From the results at the contact concentration of 200 μg / mL, it was revealed that the response rate lowering effects of the compounds 1 to 5 and 7 to 11 were particularly large. Among them, it has been clarified that the compounds 1 to 4, 7 and 8 and further the compounds 1 to 3 show a large response rate reducing action. In addition, from the results of the contact concentration of 20 μg / mL, it has been clarified that the compounds 1, 3 and 11 and the compound of the formula (5) have a large response rate reducing action. In particular, Compound 11 showed significant inhibitory activity even at 0.2 μg / mL.

また、Ｒ²がＢｒである安息香酸ベンジル誘導体についてアンジオテンシンII１型受容体（210020 Angiotensin AT1）及びアンジオテンシンII２型受容体（210110 Angiotensin AT2）の阻害活性測定を外部機関（ＭＤＳＰＳ）に依頼した。その結果、アンジオテンシンII１型受容体の阻害活性が３００μＭで７２％、１００μＭで５０％、アンジオテンシンII２型受容体の阻害活性が３００μＭで２３％、１００μＭで１０％であり、アンジオテンシンII１型受容体を選択的に阻害していることが明らかとなった。 Also, an external organization (MDSPS) was requested to measure the inhibitory activity of angiotensin II type 1 receptor (210020 Angiotensin AT1) and angiotensin II type 2 receptor (210110 Angiotensin AT2) for benzyl benzoate derivatives in which R ² is Br. As a result, the inhibitory activity of the angiotensin II type 1 receptor was 72% at 300 μM, 50% at 100 μM, the inhibitory activity of the angiotensin II type 2 receptor was 23% at 300 μM, and 10% at 100 μM, and the angiotensin II type 1 receptor was selected. It became clear that it was inhibiting.

（経口投与動物試験）
被験化合物の血圧降下作用を経口投与による動物試験で検証した。被検化合物としては式（５）に記載の化合物を採用した。６週齢のｄｄＹマウスをコントロール群とサンプル投与群の４群に分けた（１群５匹）。被験化合物５０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇを経口投与した３０分後に１回目の収縮期血圧を測定した。その直後にアンジオテンシンII１００μｇ／ｋｇ腹腔内投与して、４分後に２回目の収縮期血圧を測定した。結果を図３に示す。 (Oral administration animal study)
The blood pressure lowering effect of the test compound was verified by an animal test by oral administration. As the test compound, the compound described in the formula (5) was employed. Six-week-old ddY mice were divided into four groups: a control group and a sample administration group (5 mice per group). The first systolic blood pressure was measured 30 minutes after oral administration of 50 mg / kg, 5 mg / kg, and 0.5 mg / kg of the test compound. Immediately thereafter, angiotensin II was intraperitoneally administered at 100 μg / kg, and the second systolic blood pressure was measured 4 minutes later. The results are shown in FIG.

被験試料を経口投与しないコントロール群においては、アンジオテンシンIIを腹腔内投与することにより有意に血圧が上昇した。一方、被検化合物を経口投与した群においては、投与量の増加に伴い血圧上昇の抑制効果が大きくなった。この結果より、被検化合物の優れた血圧降下作用が確認された。   In the control group in which the test sample was not administered orally, blood pressure was significantly increased by intraperitoneally administering angiotensin II. On the other hand, in the group to which the test compound was orally administered, the effect of suppressing the increase in blood pressure was increased as the dose was increased. From this result, the blood pressure lowering action of the test compound was confirmed.

本発明の医薬及び式（１）で表される新規安息香酸ベンジル誘導体は血圧降下剤として有用である。   The medicament of the present invention and the novel benzyl benzoate derivative represented by the formula (1) are useful as antihypertensive agents.

式（１）に示す化合物の¹Ｈ−ＮＭＲのスペクトルを示す図である。It is a figure which shows the spectrum of < ¹ > H-NMR of the compound shown to Formula (1). 式（１）に示す化合物の¹³Ｃ−ＮＭＲのスペクトルを示す図である。It is a figure which shows the spectrum of < ¹³ > C-NMR of the compound shown to Formula (1). 動物試験において被検化合物が血圧上昇を抑制する効果を示したグラフである。It is the graph which showed the effect which the test compound suppresses a blood pressure rise in an animal test.

Claims (1)

下記一般式（２）又は（３）で表される安息香酸ベンジル誘導体を有効成分として含有するアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗剤。

（式（２）中、Ｒ^１〜３は水素、ハロゲン、ニトロ基、ＯＭｅから選択される。但し、Ｒ^１〜３全てが水素原子である場合は除く。Ｒ^４〜１０は水素である。）

（式（ ３ ） 中、Ｒ^１〜５は、水素、ハロゲン、保護基を有していても良い水酸基、アミノ基、保護基を有していても良いチオール基、ニトロ基、アシル基、アルコキシカルボニル基、スルホ基並びに炭化水素基（ 一部水素が、ハロゲン、保護基を有していても良い水酸基、アミノ基、保護基を有していても良いチオール基、ニトロ基、アシル基、アルコキシカルボニル基及びスルホ基から選択される１ 以上の基で置換されても良い） から選択される置換基からそれぞれ独立して選択される。ここで、上記保護基はアシル基、アルコキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基、アリールメチル基、シリル基、アセトニド基、低級アルコキシアルキル基からそれぞれ独立して選択される。； Ｘ は

である。ｎ は１である。； Ｘ は＊ の部分に式（ ３ ） のＣ^１で示す炭素原子が位置する。） An angiotensin II receptor antagonist containing a benzyl benzoate derivative represented by the following general formula (2) or (3) as an active ingredient.

(In the formula (2), R ^{1 to 3} are selected from hydrogen, halogen, nitro group, and OMe, except when R ^{1 to 3} are all hydrogen atoms, and R ^{4 to 10} are hydrogen. )

(In formula (3), ^R1-5 is hydrogen, a halogen, the hydroxyl group which may have a protecting group, an amino group, the thiol group which may have a protecting group, a nitro group, an acyl group, alkoxy. Carbonyl group, sulfo group and hydrocarbon group (partial hydrogen is halogen, hydroxyl group which may have a protecting group, amino group, thiol group which may have a protecting group, nitro group, acyl group, alkoxy Each of which may be substituted with one or more groups selected from a carbonyl group and a sulfo group), wherein each of the protecting groups is an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an aralkyl group. Each independently selected from an oxycarbonyl group, an arylmethyl group, a silyl group, an acetonide group, and a lower alkoxyalkyl group ;

It is. n is 1 . X represents a carbon atom represented by C ¹ in the formula (3) in the part of *. )

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