JP5185230B2 - Polyoxyalkylene derivative and method for producing the same - Google Patents

Description

本発明は、ポリオキシアルキレン誘導体、その製造方法、該ポリオキシアルキレン誘導体を用いて修飾した生理活性物質およびその製造方法に関する。さらに詳しくは、タンパク質、ポリペプチド、抗癌剤、抗真菌剤、リン脂質などの生理活性物質の修飾等に用いられるポリオキシアルキレン誘導体およびその製造方法、またこのポリオキシアルキレン誘導体を用いて修飾した生理活性物質およびその活性を低下させずに修飾を行なう製造方法に関する。   The present invention relates to a polyoxyalkylene derivative, a production method thereof, a physiologically active substance modified with the polyoxyalkylene derivative, and a production method thereof. More specifically, polyoxyalkylene derivatives used for modification of physiologically active substances such as proteins, polypeptides, anticancer agents, antifungal agents, phospholipids, and the like, and production methods thereof, and physiological activities modified using these polyoxyalkylene derivatives The present invention relates to a substance and a production method in which modification is performed without reducing its activity.

近年、生理活性を有するタンパク質、ポリペプチド、合成化合物、及び天然資源より抽出された化合物等が数多く発見されており、それらの医薬品への応用が盛んに研究されている。しかし、これらの生理活性物質は、生体内に投与された際の血中半減期が短く、十分な薬理効果を得ることは難しい。これは、通常生体内へ投与された生理活性物質が、腎臓における糸球体濾過や、肝臓や脾臓などにおけるマクロファージの取り込みにより、生体内から消失するためである。このため、これらの生理活性物質をリポソームやポリマーミセル中へ封入したり、ポリオキシアルキレン誘導体のなかでも両親媒性高分子であるポリエチレングリコールを化学修飾させて分子量を増大させることで、生体内挙動を改善する試みがなされている。ポリエチレングリコールは、その立体反発効果のために他の生体成分との相互作用が低いことから、ポリエチレングリコールで修飾したタンパク質や酵素等のポリペプチドは、生体内へ投与された場合、腎臓における糸球体濾過や免疫反応等の生体反応を回避させる効果があり、非修飾のものより長い血中半減期を達成する。また、
毒性や抗原性も低下し、更には、疎水性の高い難水溶性の化合物の溶解性を高める効果もある。 In recent years, many proteins, polypeptides, synthetic compounds, compounds extracted from natural resources and the like having physiological activity have been discovered, and their application to pharmaceuticals has been actively studied. However, these physiologically active substances have a short blood half-life when administered in vivo, and it is difficult to obtain a sufficient pharmacological effect. This is because the physiologically active substance normally administered to the living body disappears from the living body by glomerular filtration in the kidney and uptake of macrophages in the liver, spleen and the like. For this reason, by encapsulating these physiologically active substances in liposomes or polymer micelles or by chemically modifying polyethylene glycol, which is an amphiphilic polymer among polyoxyalkylene derivatives, to increase the molecular weight, Attempts have been made to improve. Polyethylene glycol has a low interaction with other biological components due to its steric repulsive effect, and therefore, polypeptides such as proteins and enzymes modified with polyethylene glycol have glomeruli in the kidney when administered in vivo. It has the effect of avoiding biological reactions such as filtration and immune reaction, and achieves a longer blood half-life than the unmodified one. Also,
Toxicity and antigenicity are also reduced, and further, there is an effect of increasing the solubility of a highly hydrophobic poorly water-soluble compound.

工業的に合成されているポリエチレングリコール誘導体は、一方の末端にメトキシ基などの非反応性の基、他方の末端に水酸基を有するもの、あるいは両末端に水酸基を有するものがほとんどである。水酸基はたんぱく質等の表面の官能基に対して反応性が低いので、タンパク質の修飾剤として利用するために、メトキシポリエチレングリコール誘導体の片末端の水酸基をより反応性の高い官能基に変換する試みが行われている。   Most industrially synthesized polyethylene glycol derivatives have a non-reactive group such as a methoxy group at one end, a hydroxyl group at the other end, or a hydroxyl group at both ends. Since hydroxyl groups are less reactive with surface functional groups such as proteins, attempts to convert hydroxyl groups at one end of methoxypolyethylene glycol derivatives to functional groups with higher reactivity are required for use as protein modifiers. Has been done.

ポリエチレングリコール誘導体の両端に種々の異なるタンパク質等の物質を選択的に結合させる場合には、両末端に相異なる官能基を有するポリエチレングリコール誘導体が必要となる。しかしながら、上記のようなポリエチレングリコールの両末端に存在する水酸基を反応性の高い官能基に変換する方法では、未反応の水酸基末端が残る可能性がある。また、反応性生成物は両末端に同一の官能基を有するものと、両末端に相異なる官能基を有するものとの混合物として得られる。このため、カラムクロマトグラフィーなどの方法により精製する必要があり、収率や純度の面で問題がある。   In the case of selectively bonding various different substances such as proteins to both ends of the polyethylene glycol derivative, polyethylene glycol derivatives having different functional groups at both ends are required. However, in the method of converting the hydroxyl groups present at both ends of polyethylene glycol as described above into highly reactive functional groups, there is a possibility that unreacted hydroxyl groups remain. The reactive product is obtained as a mixture of one having the same functional group at both ends and one having different functional groups at both ends. For this reason, it is necessary to purify by a method such as column chromatography, which is problematic in terms of yield and purity.

ところで、高反応性の官能基の中で、アルデヒド基はタンパク質等のアミノ基と選択的に反応するため、可溶性または不溶性ポリマー表面へのポリエチレングリコール修飾や、タンパク質へのポリエチレングリコール修飾に用いられている。アルデヒド基と１級アミノ基との反応では、２級アミンが形成されるため、溶液中においてタンパク質の荷電があまり変わらず、このためタンパク質の活性が低下したり、あるいはコンフォメーションが変化するなどの問題が生じにくいという利点がある。   By the way, among the highly reactive functional groups, the aldehyde group selectively reacts with amino groups such as proteins, so it is used for the modification of polyethylene glycol on soluble or insoluble polymer surfaces and polyethylene glycol modification on proteins. Yes. In the reaction between an aldehyde group and a primary amino group, a secondary amine is formed, so that the charge of the protein does not change so much in the solution, so that the activity of the protein decreases or the conformation changes. There is an advantage that problems are less likely to occur.

アルキルアセタール基を有する化合物を開始剤としてアルデヒド基を有するポリエチレングリコールを製造する方法は知られている（例えば特許文献１参照）。また、アルデヒド基を有する水溶性ポリマーを酸性条件下でタンパク質またはその類似体に結合させる方法が知られている（例えば特許文献２参照）。   A method for producing polyethylene glycol having an aldehyde group using a compound having an alkyl acetal group as an initiator is known (see, for example, Patent Document 1). In addition, a method is known in which a water-soluble polymer having an aldehyde group is bound to a protein or an analog thereof under acidic conditions (see, for example, Patent Document 2).

しかしながら、アルキルアセタール基を加水分解してアルキルアルデヒド基に変換する際には、反応溶液を酸性にする必要があり、また、アルキルアルデヒド基をアミノ基と反応させる際にも、酸性条件が必須である。このため、このような酸性条件下で不安定なタンパク質や薬物等への修飾は、タンパク質や薬物が変性し、薬理活性が低下するといった問題がある。また、アルキルアルデヒド基は水中での安定性が低くアルドール縮合をおこし、純度が低下する反応といった問題点があった。   However, when the alkyl acetal group is hydrolyzed and converted to an alkyl aldehyde group, the reaction solution must be acidified, and acidic conditions are also essential when the alkyl aldehyde group is reacted with an amino group. is there. For this reason, modification to a protein or drug that is unstable under such acidic conditions has a problem that the protein or drug is denatured and the pharmacological activity is reduced. In addition, the alkylaldehyde group has a problem in that the stability in water is low and aldol condensation occurs, resulting in a decrease in purity.

特開平０７−３１６２８５号公報JP 07-316285 A 特開平１１−３１０６００号公報Japanese Patent Laid-Open No. 11-310600

本発明の目的は、水溶液中、ｐＨ５〜７の条件下で生理活性物質のアミノ基と反応が可能なポリオキシアルキレン誘導体および、このポリオキシアルキレン誘導体を得る製造方法および、このポリオキシアルキレン誘導体で修飾された生理活性物質とその修飾化方法を提供することである。   An object of the present invention is to provide a polyoxyalkylene derivative capable of reacting with an amino group of a physiologically active substance in an aqueous solution under conditions of pH 5 to 7, a production method for obtaining the polyoxyalkylene derivative, and the polyoxyalkylene derivative. It is to provide a modified physiologically active substance and a modification method thereof.

本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、一方の末端にｐＨ５〜７の条件下でアミノ基と反応が可能なフェニルアセタール基を、他方の末端に水酸基、アルキル基、または、アミノ基、メルカプト基、不飽和結合、カルボキシル基と反応可能な基を有する、高純度であり、反応性に優れた生理活性物質等の修飾に用いられるポリオキシアルキレン誘導体、このポリオキシアルキレン誘導体を得る製造方法および修飾された生理活性物質とその修飾化方法を見出し、本発明を完成した。   As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that a phenylacetal group capable of reacting with an amino group at one end under a pH of 5 to 7 and a hydroxyl group, an alkyl group, or at the other end , Polyoxyalkylene derivatives having amino groups, mercapto groups, unsaturated bonds, groups capable of reacting with carboxyl groups, and high-purity, highly reactive physiologically active substances, etc., and these polyoxyalkylene derivatives The present inventors have completed the present invention by discovering a production method for obtaining the above, a modified physiologically active substance and a modification method thereof.

すなわち、本発明は、以下に示す発明である。
（Ａ） 式（１）で示されるポリオキシアルキレン誘導体。 That is, this invention is the invention shown below.
(A) A polyoxyalkylene derivative represented by the formula (1).

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｘは水素原子、炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）から選ばれる１種の基を示す。］
群（Ｉ） [Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. X represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or one group selected from group (I). ]
Group (I)

（群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。）
（Ｂ） 式（２）で示されるポリオキシアルキレン誘導体。 (In group (I), Z represents a covalent bond with a linker of oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms.)
(B) A polyoxyalkylene derivative represented by the formula (2).

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｑは炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）から選ばれる１種の基を示す。］
群（Ｉ） [Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. Q represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms or one group selected from the group (I). ]
Group (I)

（群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。）
（Ｃ） 式（４） (In group (I), Z represents a covalent bond with a linker of oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms.)
(C) Formula (4)

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基を示す。］
で示される化合物を還元して式（５） [Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms. ]
To reduce the compound represented by formula (5)

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基を示す］
で示される化合物を得た後、式（５）の化合物をアルカリ金属触媒存在下、アルキレンオキシドの付加重合反応により式（６） [Wherein R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms]
After obtaining the compound represented by formula (5), the compound of formula (5) is subjected to addition polymerization reaction of alkylene oxide in the presence of an alkali metal catalyst to formula (6).

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｍはアルカリ金属を示す。］
の反応中間体とした後、この中間体のアルコキシ末端を化学修飾することを特徴とする式（２）で示されるポリオキシアルキレン誘導体の製造方法。 [Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. M represents an alkali metal. ]
A method for producing a polyoxyalkylene derivative represented by the formula (2), wherein the alkoxy terminal of the intermediate is chemically modified after the reaction intermediate of

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基であり、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基である。ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｑは炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）から選ばれる１種の基を示す。］
群（Ｉ） [Wherein, R is an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, and AO is an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms. n shows the average addition mole number of an oxyalkylene group, and is 10-2000. Q represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms or one group selected from the group (I). ]
Group (I)

（群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。）
（Ｄ） 式（３）の化合物の水酸基を化学修飾することを特徴とする式（２）で示されるポリオキシアルキレン誘導体の製造方法。 (In group (I), Z represents a covalent bond with a linker of oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms.)
(D) A method for producing a polyoxyalkylene derivative represented by the formula (2), wherein the hydroxyl group of the compound of the formula (3) is chemically modified.

群（Ｉ） Group (I)

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｑは炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）で示される基を示す。群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。］
（Ｅ） 分子中の少なくとも１個のアミノ基に式（１）のポリオキシアルキレン誘導体を結合させた生理活性物質。 [Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. Q represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms or a group represented by group (I). In group (I), Z represents a covalent bond with a linker between an oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms. ]
(E) A physiologically active substance obtained by binding a polyoxyalkylene derivative of the formula (1) to at least one amino group in the molecule.

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｘは水素原子、炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）から選ばれる１種の基を示す。］
群（Ｉ） [Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. X represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or one group selected from group (I). ]
Group (I)

（群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。）
（Ｆ） 式（１）のポリオキシアルキレン誘導体と生理活性物質を、ｐＨ５〜７の条件下で反応させることを特徴とする前記の生理活性物質の修飾方法。 (In group (I), Z represents a covalent bond with a linker of oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms.)
(F) The method for modifying a physiologically active substance, wherein the polyoxyalkylene derivative of the formula (1) is reacted with a physiologically active substance under conditions of pH 5 to 7.

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｘは水素原子、炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）から選ばれる１種の基を示す。］
群（Ｉ） [Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. X represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or one group selected from group (I). ]
Group (I)

（群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。） (In group (I), Z represents a covalent bond with a linker of oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms.)

本発明のポリオキシアルキレン誘導体は、水溶液中ｐＨ５〜７の中性に近い条件下で生理活性物質と反応が可能であり、反応性に優れている。本発明のポリオキシアルキレン誘導体は、フェニルアセタール基を有することにより、水中でアルドール縮合等を起こしにくく安定であり、また、中性に近い条件下で生理活性物質のアミノ基と反応することができるため、修飾された生理活性物質は、ポリオキシアルキレンとの反応の際の構造変化、活性の低下が少なく、かつポリオキシアルキレンにより修飾されることにより生体内挙動が改善され、優れた薬理活性等を発現するポリオキシアルキレン修飾化生理活性物質を提供することができる。また、本発明の製造方法を用いることにより、本発明のポリオキシアルキレン誘導体を容易に得ることができる。   The polyoxyalkylene derivative of the present invention is capable of reacting with a physiologically active substance under conditions close to neutral pH 5 to 7 in an aqueous solution and is excellent in reactivity. Since the polyoxyalkylene derivative of the present invention has a phenylacetal group, it is stable and hardly causes aldol condensation in water, and can react with an amino group of a physiologically active substance under conditions close to neutrality. Therefore, the modified physiologically active substance has little structural change and decrease in activity upon reaction with polyoxyalkylene, and is modified with polyoxyalkylene to improve the in vivo behavior and has excellent pharmacological activity, etc. A polyoxyalkylene-modified physiologically active substance that expresses can be provided. Moreover, the polyoxyalkylene derivative of the present invention can be easily obtained by using the production method of the present invention.

本発明のポリオキシアルキレン誘導体を用いることにより、タンパク質、ポリペプチド、抗癌剤、抗真菌剤、リン脂質等の生体内挙動が改善され、高い薬理効果を示す製剤の開発が可能となると同時に、上記薬物等水溶性の改善、貯蔵安定性の増大、免疫原性の減少、酵素分解特性の向上が可能となる。   By using the polyoxyalkylene derivative of the present invention, the in vivo behavior of proteins, polypeptides, anticancer agents, antifungal agents, phospholipids, etc. is improved, and it is possible to develop a preparation showing a high pharmacological effect. It is possible to improve water solubility, increase storage stability, decrease immunogenicity, and improve enzymatic degradation characteristics.

以下に、本発明を詳しく説明する。
式（１）、式（２）、式（３）、式（４）、式（５）および式（６）において、Ｒは炭素数１〜８の炭化水素基であり、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、第三ブチル基、アミル基、イソアミル基、ヘキシル基、ヘプチル基、２−エチルヘキシル基、オクチル基などが挙げられ、好ましくはメチル基、エチル基であり、更に好ましくはエチル基である。 The present invention is described in detail below.
In Formula (1), Formula (2), Formula (3), Formula (4), Formula (5), and Formula (6), R is a hydrocarbon group having 1 to 8 carbon atoms, such as a methyl group, Examples include an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, a tertiary butyl group, an amyl group, an isoamyl group, a hexyl group, a heptyl group, a 2-ethylhexyl group, and an octyl group, preferably a methyl group and an ethyl group. More preferably, it is an ethyl group.

ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基を示す。例えば、オキシエチレン基、オキシプロピレン基、オキシトリメチレン基、オキシ−１−エチルエチレン基、オキシ−１、２−ジメチルエチレン基、オキシテトラメチレン基などが挙げられる。オキシアルキレン基は１種または２種以上の組み合わせであってもよく、またはランダム状に付加していてもブロック状に付加していてもよい。オキシアルキレン基の炭素数の少ない方がより親水性が高く、好ましくはオキシエチレン基、オキシプロピレン基であり、より好ましくはオキシエチレン基である。ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数であり、１０〜２０００であり、好ましくは１０〜８００、更に好ましくは２０〜５００である。   AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms. For example, an oxyethylene group, an oxypropylene group, an oxytrimethylene group, an oxy-1-ethylethylene group, an oxy-1, 2-dimethylethylene group, an oxytetramethylene group, and the like can be given. The oxyalkylene group may be one kind or a combination of two or more kinds, or may be added randomly or in a block form. A oxyalkylene group having a smaller number of carbon atoms has higher hydrophilicity, preferably an oxyethylene group or an oxypropylene group, and more preferably an oxyethylene group. n is the average addition mole number of an oxyalkylene group, and is 10-2000, Preferably it is 10-800, More preferably, it is 20-500.

式（１）において、Ｘは水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、または群（Ｉ）から選ばれる１種の基である。炭素数１〜４のアルキル基としてはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、第三ブチル基等が挙げられ、好ましくはメチル基である。また、Ｘは、好ましくは水素原子、または群（Ｉ）から選ばれる１種の基である。
群（Ｉ） In the formula (1), X is a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or one group selected from the group (I). Examples of the alkyl group having 1 to 4 carbon atoms include a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, and a tertiary butyl group, and a methyl group is preferable. X is preferably a hydrogen atom or one group selected from group (I).
Group (I)

アミノ基と反応させる場合は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｋ）で示される基が好ましく、メルカプト基と反応させる場合は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）で示される基が好ましく、不飽和結合と反応させる場合は、（ｃ）で示される基が好ましく、カルボキシル基と反応させる場合は（ｃ）、（ｇ）で示される基が好ましい。   When reacting with an amino group, groups represented by (a), (b), (d), (f), (h), (i), (k) are preferred, and when reacting with a mercapto group, The groups represented by (a), (b), (c), (d), (e), (f), (h), (i), (j) are preferred, and when reacting with an unsaturated bond The group represented by (c) is preferred, and when reacted with a carboxyl group, the group represented by (c) or (g) is preferred.

群（Ｉ）におけるＺはオキシアルキレン基と反応性官能基との間のリンカーであり、共有結合であれば特に制限は無いが、好ましくはアルキレン基、及びエステル結合、カーバメート結合、アミド結合、ウレア結合、カーボネート結合、スルフィド結合、２級アミノ基を含んだアルキレン基等が挙げられる。アルキレン基として好ましいものは、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、イソプロピレン基、イソブチレン基等が挙げられ、更に好ましくは下記（ｚ１）のような構造が挙げられる。エステル結合を含んだアルキレン基として更に好ましいものは、下記（ｚ２）のような構造が挙げられる。アミド結合を含んだアルキレン基として更に好ましいものは、下記（ｚ３）のような構造が挙げられる。エーテル結合を含んだアルキレン基として更に好ましいものは、下記（ｚ４）のような構造が挙げられる。カーバメート結合を含んだアルキレン基として更に好ましいものは、下記（ｚ５）のような構造が挙げられる。２級アミノ基を含んだアルキレン基として更に好ましいものは、下記（ｚ６）のような構造が挙げられる。   Z in group (I) is a linker between an oxyalkylene group and a reactive functional group, and is not particularly limited as long as it is a covalent bond, but is preferably an alkylene group, an ester bond, a carbamate bond, an amide bond, a urea. Examples include a bond, a carbonate bond, a sulfide bond, and an alkylene group containing a secondary amino group. Preferable examples of the alkylene group include a methylene group, an ethylene group, a propylene group, a butylene group, an isopropylene group, and an isobutylene group, and more preferable examples include the following structure (z1). More preferable examples of the alkylene group containing an ester bond include the following structure (z2). More preferable examples of the alkylene group containing an amide bond include the following structure (z3). More preferable examples of the alkylene group containing an ether bond include the following structure (z4). More preferable examples of the alkylene group containing a carbamate bond include the following structure (z5). More preferable examples of the alkylene group containing a secondary amino group include the following structures (z6).

Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基であり、具体的にはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、第三ブチル基、ヘキシル基、ノニル基、ビニル基、フェニル基、ベンジル基、４−メチルフェニル基、トリフルオロメチル基、２，２，２−トリフルオロエチル基、４−（トリフルオロメトキシ）フェニル基等が挙げられるが、好ましくはメチル基、ビニル基、４−メチルフェニル基、２，２，２−トリフルオロエチル基の場合である。   Y is a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms, specifically a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, a tertiary butyl group, a hexyl group, a nonyl group, Examples include vinyl group, phenyl group, benzyl group, 4-methylphenyl group, trifluoromethyl group, 2,2,2-trifluoroethyl group, 4- (trifluoromethoxy) phenyl group, preferably methyl group , Vinyl group, 4-methylphenyl group, and 2,2,2-trifluoroethyl group.

式（２）において、ＱはＸより水素原子を除いた基である。   In the formula (2), Q is a group obtained by removing a hydrogen atom from X.

式（１）で示されるポリオキシアルキレン誘導体により、生理活性物質を修飾する場合、用途等によって、式（２）および式（３）で示されるポリオキシアルキレン誘導体を適宜使用することができる。また、式（３）で示される化合物は式（２）で示される化合物の中間体としても有用である。   When the physiologically active substance is modified with the polyoxyalkylene derivative represented by the formula (1), the polyoxyalkylene derivative represented by the formula (2) and the formula (3) can be appropriately used depending on the use. The compound represented by the formula (3) is also useful as an intermediate for the compound represented by the formula (2).

本発明の式（２）で示されるポリオキシアルキレン誘導体は例えば次のようにして製造することができる。   The polyoxyalkylene derivative represented by the formula (2) of the present invention can be produced, for example, as follows.

まず式（４）で表されるアセタール基を有するベンズアルデヒド誘導体を還元して、式（５）で表されるアセタール基を有するベンジルアルコール誘導体を得た後、アルカリ金属触媒下、この化合物の水酸基にアルキレンオキシドを付加重合させ、式（６）のポリオキシアルキレン誘導体とした後、更に、このようにして得られたポリオキシアルキレン誘導体の末端アルコキシ基を、群（Ｉ）に示した各種反応性基へ変性させることで本発明のポリオキシアルキレン誘導体を製造することができる。   First, a benzaldehyde derivative having an acetal group represented by the formula (4) is reduced to obtain a benzyl alcohol derivative having an acetal group represented by the formula (5). After addition polymerization of alkylene oxide to obtain a polyoxyalkylene derivative of formula (6), the terminal alkoxy group of the polyoxyalkylene derivative thus obtained is further converted into various reactive groups shown in group (I). The polyoxyalkylene derivative of the present invention can be produced by modifying the polymer.

また、式（６）で表されるポリオキシアルキレン誘導体の末端アルコキシル基を、水で処理することにより、式（３）で表されるポリオキシアルキレン誘導体とした後、末端水酸基を、群（Ｉ）に示した各種反応性基へ変性させることで本発明のポリオキシアルキレン誘導体を製造することが出来る。   Further, the terminal alkoxyl group of the polyoxyalkylene derivative represented by the formula (6) is treated with water to form the polyoxyalkylene derivative represented by the formula (3), and then the terminal hydroxyl group is converted into a group (I The polyoxyalkylene derivative of the present invention can be produced by modification to various reactive groups shown in (1).

式（４）で表されるアセタール基を有するベンズアルデヒド誘導体としては、４−（ジメトキシメチル）ベンズアルデヒド、４−（ジエトキシメチル）ベンズアルデヒド、４−（ジプロポキシメチル）ベンズアルデヒド、４−（ジブチロキシメチル）ベンズアルデヒド等が挙げられるが、好ましくは４−（ジエトキシメチル）ベンズアルデヒドである。   As the benzaldehyde derivative having an acetal group represented by the formula (4), 4- (dimethoxymethyl) benzaldehyde, 4- (diethoxymethyl) benzaldehyde, 4- (dipropoxymethyl) benzaldehyde, 4- (dibutoxymethyl) Examples thereof include benzaldehyde, and 4- (diethoxymethyl) benzaldehyde is preferable.

式（５）で表されるアセタール基を有するベンジルアルコール誘導体は、式（４）の化合物を、パラジウムカーボン触媒、水素もしくはＮａＢＨ₄等の水素供与体を用いた公知の還元反応にて製造することができる。 The benzyl alcohol derivative having an acetal group represented by the formula (5) is prepared by a known reduction reaction using a compound of the formula (4) using a hydrogen donor such as a palladium carbon catalyst, hydrogen or NaBH _4. Can do.

式（６）で表される化合物は式（５）で表されるアセタール基を有するベンジルアルコール誘導体の１級水酸基残基へアルキレンオキシドを付加重合することにより得られる。アルキレンオキシド付加重合は有機溶媒もしくは無溶媒中、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属を触媒とし、公知の方法にて行うことができる。有機溶媒は重合反応を妨害しないものであれば特に限定されず、例えばトルエン、ベンゼン、テトラヒドロフランなどが挙げられる。   The compound represented by the formula (6) can be obtained by addition polymerization of alkylene oxide to the primary hydroxyl group residue of the benzyl alcohol derivative having an acetal group represented by the formula (5). The alkylene oxide addition polymerization can be performed by a known method using an alkali metal such as sodium or potassium as a catalyst in an organic solvent or without a solvent. The organic solvent is not particularly limited as long as it does not interfere with the polymerization reaction, and examples thereof include toluene, benzene, tetrahydrofuran and the like.

式（３）で表される化合物は、式（６）で表される化合物を水で処理することにより得
られる。添加する水の量は式（６）の化合物に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５０モルの範囲で反応させるのが好ましい。反応温度としては、０〜１００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜５０℃である。 The compound represented by the formula (3) can be obtained by treating the compound represented by the formula (6) with water. The amount of water to be added is preferably equimolar or more, more preferably equimolar to 50 molar, relative to the compound of formula (6). As reaction temperature, 0-100 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-50 degreeC.

続いて、式（３）の水酸基または式（６）のアルコキシル基へのアルキル基または反応性基の導入について説明する。
＜Ｘが炭素数１〜４のアルキルである式（１）の製造方法＞
一般に知られる水酸基またはアルコキシル基のアルキルエーテル化の反応を用いることができる。
＜（ｂ）、（ｄ）、（ｈ）、（ｉ）の製造方法＞
トルエン、ベンゼン、キシレン、アセトニトリル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルーメチルエーテル、テトラヒドロフラン、クロロホルム、塩化メチレン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド等の非プロトン性溶媒、もしくは無溶媒中、トリエチルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン等の有機塩基、もしくは炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化カリウム等の無機塩基と下記式（ｂ１）、（ｄ１）、（ｈ１）、（ｉ１）で示される化合物のいずれかと反応させることで、それぞれ（ｂ）、（ｄ）、（ｈ）、（ｉ）を製造することができる。また、上記有機塩基、無機塩基は用いなくとも良い。有機塩基、無機塩基の使用割合は、特に制限はないが、式（２）に対して等モル以上が好ましい。また、有機塩基を溶媒として用いてもよい。 Subsequently, introduction of an alkyl group or a reactive group into the hydroxyl group of formula (3) or the alkoxyl group of formula (6) will be described.
<The manufacturing method of Formula (1) whose X is a C1-C4 alkyl>
A generally known reaction of alkyl etherification of a hydroxyl group or an alkoxyl group can be used.
<Production Method of (b), (d), (h), (i)>
Aprotic solvent such as toluene, benzene, xylene, acetonitrile, ethyl acetate, diethyl ether, t-butyl-methyl ether, tetrahydrofuran, chloroform, methylene chloride, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, dimethylacetamide, or the like, triethylamine, Organic bases such as pyridine and 4-dimethylaminopyridine, or inorganic bases such as sodium carbonate, sodium hydroxide, sodium bicarbonate, sodium acetate, potassium carbonate, potassium hydroxide and the following formulas (b1), (d1), (h1 ) And (i1) can be reacted with any of the compounds represented by (i1) to produce (b), (d), (h), and (i), respectively. Further, the organic base and inorganic base need not be used. The ratio of the organic base and inorganic base used is not particularly limited, but is preferably equimolar or more with respect to formula (2). An organic base may be used as a solvent.

（ｂ１）、（ｄ１）、（ｈ１）、（ｉ１）におけるＷはＣｌ、Ｂｒ、Ｉより選択されるハロゲン原子であり、好ましくはＣｌである。式（ｂ１）、（ｄ１）、（ｈ１）、（ｉ１）で示される化合物の使用割合は、特に制限はないが、式（２）に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５０モルの範囲で反応させるのが好ましい。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。生成した化合物は、抽出、再結晶、吸着処理、再沈殿、カラムクロマトグラフィー、超臨界抽出等の精製手段にて精製してもよい。   W in (b1), (d1), (h1), and (i1) is a halogen atom selected from Cl, Br, and I, and is preferably Cl. The ratio of the compounds represented by formulas (b1), (d1), (h1) and (i1) is not particularly limited, but is preferably equimolar or more, more preferably equimolar to the formula (2). It is preferable to make it react in 50 mol range. As reaction temperature, 0-300 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-150 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 24 hours. The produced compound may be purified by a purification means such as extraction, recrystallization, adsorption treatment, reprecipitation, column chromatography, supercritical extraction or the like.

（ＷはＣｌ、Ｂｒ、Ｉより選択されるハロゲン原子）
＜（ａ）、（ｋ）の製造方法＞
式（３）を無水コハク酸や無水グルタル酸等のジカルボン酸無水物と反応させてカルボキシル体（ｋ）を得た後、縮合剤存在下、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドと縮合反応させることで、（ａ）のコハク酸イミド体を得ることができる。式（３）とジカルボン酸無水物との反応は、上述の非プロトン性溶媒、もしくは無溶媒中で行う。ジカルボン酸無水物の使用割合は、特に制限はないが、式（３）に対して等モル以上が好ましく、更に好まし
くは等モル〜５モルである。反応温度としては、０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。反応にはトリエチルアミン、ピリジン、ジメチルアミノピリジン等の有機塩基や炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化カリウム等の無機塩基を触媒として用いてもよい。触媒の使用割合は０．１〜５０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．５〜２０重量％である。このようにして生成したカルボキシル体（ｋ）は、前述の精製手段にて精製してもよいし、そのまま次の縮合反応に用いても良い。 (W is a halogen atom selected from Cl, Br, and I)
<Production method of (a), (k)>
After reacting Formula (3) with a dicarboxylic anhydride such as succinic anhydride or glutaric anhydride to obtain a carboxyl form (k), a condensation reaction with N-hydroxysuccinimide in the presence of a condensing agent is performed. The succinimide body of (a) can be obtained. The reaction of the formula (3) and the dicarboxylic acid anhydride is carried out in the above-mentioned aprotic solvent or in the absence of a solvent. Although there is no restriction | limiting in particular in the usage-amount of dicarboxylic acid anhydride, equimolar or more is preferable with respect to Formula (3), More preferably, it is equimolar-5 mol. As reaction temperature, 0-200 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-150 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 12 hours. For the reaction, an organic base such as triethylamine, pyridine, dimethylaminopyridine, or an inorganic base such as sodium carbonate, sodium hydroxide, sodium hydrogen carbonate, sodium acetate, potassium carbonate, potassium hydroxide may be used as a catalyst. The use ratio of the catalyst is preferably 0.1 to 50% by weight, more preferably 0.5 to 20% by weight. The carboxyl body (k) thus produced may be purified by the above-described purification means, or may be used as it is in the next condensation reaction.

続く縮合反応も同様に上記非プロトン性溶媒中、もしくは無溶媒中で行う。縮合剤としては、特に制限は無いが、好ましくはＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドである。Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドの使用割合は式（３）に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５モルである。Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドの使用割合は式（３）に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５モルである。反応温度としては、０〜１００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜８０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。   The subsequent condensation reaction is similarly performed in the aprotic solvent or in the absence of a solvent. Although there is no restriction | limiting in particular as a condensing agent, Preferably it is N, N'-dicyclohexyl carbodiimide. The use ratio of N, N'-dicyclohexylcarbodiimide is preferably equimolar or more, more preferably equimolar to 5 molar relative to the formula (3). The use ratio of N-hydroxysuccinimide is preferably equimolar or more, more preferably equimolar to 5 molar relative to the formula (3). As reaction temperature, 0-100 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-80 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 12 hours. The resulting compound may be purified by the aforementioned purification means.

＜（ｇ）の製造方法＞
式（３）を水、アルコール、アセトニトリル等の溶媒中、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の無機塩基を触媒とし、アクリロニトリル等を付加させてニトリル体を得たあと、オートクレーブ中でニッケルやパラジウム触媒下でニトリル基の水素添加反応を行うことで（ｇ）のアミン体を得ることができる。ニトリル体を得る際の無機塩基の使用割合は、特に制限はないが、式（３）に対して０．０１〜５０重量％が好ましい。アクリロニトリル等の使用割合は、特に制限はないが、式（３）に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜１００モルの範囲で反応させるのが好ましい。また、アクリロニトリルを溶媒として用いても良い。反応温度としては、−５０〜１００℃が好ましく、更に好ましくは、−２０〜６０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。続くニトリル体の水素添加反応における反応溶媒は、反応に関与しない溶媒であれば特に制限は無いが、好ましくはトルエンである。ニッケル、もしくはパラジウム触媒の使用割合は、特に制限は無いが、ニトリル体に対して０．０５〜３０重量％であり、好ましくは０．５〜５重量％である。反応温度は２０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、５０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。水素圧は２〜１０ＭＰａが好ましく、更に好ましくは３〜６ＭＰａである。また、２量化を防ぐために反応系中にアンモニアを加えてもよい。アンモニアを加える場合の使用割合は、特に制限は無いが、好ましくはニトリル体に対して１〜１００重量％であり、更に好ましくは５〜５０重量％である。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。 <Production method of (g)>
Using formula (3) in a solvent such as water, alcohol or acetonitrile, an inorganic base such as sodium hydroxide or potassium hydroxide as a catalyst, and adding acrylonitrile or the like to obtain a nitrile body, nickel or palladium catalyst in an autoclave The amine body of (g) can be obtained by performing a hydrogenation reaction of a nitrile group under the above. Although there is no restriction | limiting in particular in the usage-amount of the inorganic base at the time of obtaining a nitrile body, 0.01-50 weight% is preferable with respect to Formula (3). Although there is no restriction | limiting in particular in the usage rate of acrylonitrile etc., equimolar or more is preferable with respect to Formula (3), More preferably, it is preferable to make it react in the range of equimolar-100 mol. Further, acrylonitrile may be used as a solvent. As reaction temperature, -50-100 degreeC is preferable, More preferably, it is -20-60 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 24 hours. The reaction solvent in the subsequent hydrogenation reaction of the nitrile body is not particularly limited as long as it is a solvent that does not participate in the reaction, but is preferably toluene. The use ratio of the nickel or palladium catalyst is not particularly limited, but is 0.05 to 30% by weight, preferably 0.5 to 5% by weight, based on the nitrile body. The reaction temperature is preferably 20 to 200 ° C, more preferably 50 to 150 ° C. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 24 hours. The hydrogen pressure is preferably 2 to 10 MPa, more preferably 3 to 6 MPa. In order to prevent dimerization, ammonia may be added to the reaction system. The use ratio in the case of adding ammonia is not particularly limited, but is preferably 1 to 100% by weight, more preferably 5 to 50% by weight, based on the nitrile body. The resulting compound may be purified by the aforementioned purification means.

上記アミン体（ｇ）、（ｊ）は、（ｂ）をアンモニア水で加水分解させることでも得ることができる。反応は、アンモニア水中で行い、アンモニアの濃度は特に制限は無いが、好ましくは１０〜４０重量％の範囲である。アンモニア水の使用割合は、含有アンモニアが（ｂ）の等モル以上であれば特に制限は無いが、好ましくは、等モル〜５００００倍モルである。反応温度としては、０〜１００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜８０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。   The amine bodies (g) and (j) can also be obtained by hydrolyzing (b) with aqueous ammonia. The reaction is performed in ammonia water, and the concentration of ammonia is not particularly limited, but is preferably in the range of 10 to 40% by weight. Although there will be no restriction | limiting in particular if the containing ammonia is equimolar or more of (b), the amount of ammonia water is preferably equimolar to 50,000 times mole. As reaction temperature, 0-100 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-80 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 12 hours. The resulting compound may be purified by the aforementioned purification means.

＜（ｅ）の製造方法＞
更に、得られた（ｇ）のアミンを、前述の非プロトン性溶媒、もしくは無溶媒中、無水マレイン酸と反応させてマレアミド体を得たあと、無水酢酸及び酢酸ナトリウムを触媒として、閉環反応させることで（ｅ）のマレイミド体を得ることができる。マレアミド化反応における無水マレイン酸の使用割合は、特に制限はないが、式（３）に対して等モル以
上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５モルである。反応温度としては、０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１２０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。生成したマレアミド体は、前述の精製手段にて精製してもよいし、そのまま次の閉環反応に用いても良い。 <Production method of (e)>
Further, the obtained amine (g) is reacted with maleic anhydride in the aforementioned aprotic solvent or in the absence of a solvent to obtain a maleamide, and then subjected to a ring-closing reaction using acetic anhydride and sodium acetate as catalysts. Thus, the maleimide body of (e) can be obtained. The proportion of maleic anhydride used in the maleamidation reaction is not particularly limited, but is preferably equimolar or more, more preferably equimolar to 5 molar relative to formula (3). As reaction temperature, 0-200 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-120 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 12 hours. The produced maleamide may be purified by the above-described purification means, or may be used as it is in the next ring closure reaction.

続く閉環反応における反応溶媒は水、アルコール、アセトニトリルが好ましく、無水酢酸を反応溶媒としてもよい。酢酸ナトリウムの使用割合は、特に制限はないが、マレアミド体に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５０モルである。反応温度としては、０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。   The reaction solvent in the subsequent ring closure reaction is preferably water, alcohol, or acetonitrile, and acetic anhydride may be used as the reaction solvent. The ratio of sodium acetate to be used is not particularly limited, but is preferably equimolar or more, more preferably equimolar to 50 molar relative to the maleamide body. As reaction temperature, 0-200 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-150 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 12 hours. The resulting compound may be purified by the aforementioned purification means.

上記マレイミド体は、下記式（ｅ１）と、上述の（ｇ）のアミンを反応させることでも得ることができる。反応は、前述の非プロトン性溶媒、もしくは無溶媒中で行い、化合物（ｅ１）を（ｇ）のアミンに対して等モル以上加えて反応させる。（ｅ１）の使用割合は（ｇ）の等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５モルである。反応温度としては、０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜８０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。   The maleimide body can also be obtained by reacting the following formula (e1) with the above-described amine (g). The reaction is carried out in the aforementioned aprotic solvent or in the absence of a solvent, and the compound (e1) is added in an equimolar amount or more with respect to the amine of (g) and reacted. The use ratio of (e1) is preferably equimolar or more of (g), more preferably equimolar to 5 molar. As reaction temperature, 0-200 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-80 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 12 hours. The resulting compound may be purified by the aforementioned purification means.

（Ｑは炭素数１〜７の炭化水素基を示す。）     (Q represents a hydrocarbon group having 1 to 7 carbon atoms.)

＜（ｆ）の製造方法＞
化合物（ｂ）を（ｆ１）のアセタール化合物と反応させてアセタール体を得た後、酸性条件にて加水分解を行うことで、アルデヒド体（ｆ）を得ることができる。化合物（ｂ）の製造は上述の通りである。アセタール化反応は前述の非プロトン性溶媒中、もしくは無溶媒中、（ｂ）と等モル以上、好ましくは等モル〜５０モルの（ｆ１）を反応させることで得ることができる。（ｆ１）は相当するアルコールから、金属ナトリウム、金属カリウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、ナトリウムメトキシド、カリウム−ｔ−ブトキシド等を用いて調製することができる。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。 <Production method of (f)>
After reacting the compound (b) with the acetal compound of (f1) to obtain an acetal body, the aldehyde body (f) can be obtained by hydrolysis under acidic conditions. The production of compound (b) is as described above. The acetalization reaction can be obtained by reacting (b) with (b1) in an aprotic solvent or in the absence of solvent in an equimolar or more, preferably equimolar to 50 molar (f1). (F1) can be prepared from the corresponding alcohol using metallic sodium, metallic potassium, sodium hydride, potassium hydride, sodium methoxide, potassium-t-butoxide and the like. As reaction temperature, 0-300 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-150 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 24 hours.

（ｆ２）を用いる場合は、式（３）の水酸基を上述の方法でアルコラートとした後、前述の非プロトン性溶媒中、もしくは無溶媒中、（ｆ２）を等モル以上、好ましくは等モル〜１００モルの割合で反応を行うことでアセタール体を得ることができる。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。   When (f2) is used, the hydroxyl group of formula (3) is converted to an alcoholate by the above-described method, and then (f2) is equimolar or more, preferably equimolar or more, in the above-mentioned aprotic solvent or in the absence of solvent. An acetal body can be obtained by carrying out the reaction at a ratio of 100 mol. As reaction temperature, 0-300 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-150 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 24 hours.

（ｆ３）を用いる場合は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｈ）、（ｉ）または（ｋ）と（ｆ３）を反応させることでアセタール体を得ることができる。（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｈ）、（ｉ）または（ｋ）の製造については前述の通りである。（ｆ３）との反応では、溶媒は特に制限されないが、好ましくは前述の非プロトン性溶媒中で行う。（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｈ）、（ｉ）もしくは（ｋ）に対する（ｆ３）の仕込み割合は、等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜１０モルである。反応温度としては、−３０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。（ｋ）を用いる場合は、適宜縮合剤を用いても良い。   When (f3) is used, an acetal body can be obtained by reacting (f) with (a), (b), (d), (h), (i) or (k). The production of (a), (b), (d), (h), (i) or (k) is as described above. In the reaction with (f3), the solvent is not particularly limited, but is preferably carried out in the aprotic solvent described above. The charge ratio of (f3) to (a), (b), (d), (h), (i) or (k) is preferably equimolar or more, more preferably equimolar to 10 molar. As reaction temperature, -30-200 degreeC is preferable, More preferably, it is 0-150 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 24 hours. When (k) is used, a condensing agent may be appropriately used.

このようにして得られたアセタール体は前述の精製手段にて精製してもよいし、精製を行わずにそのまま次のアルデヒド化反応に用いても良い。   The acetal thus obtained may be purified by the above-described purification means, or may be used as it is in the next aldehyde reaction without purification.

アルデヒド化は、アセタール体を酢酸、リン酸、硫酸、塩酸等の酸にて酸性に調整した水溶液中で加水分解させ、製造することができる。反応温度としては、−２０〜１００℃が好ましく、更に好ましくは、０〜８０℃である。反応時間は１０分〜２４時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１０時間である。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。   Aldehydation can be produced by hydrolyzing the acetal body in an aqueous solution adjusted to be acidic with an acid such as acetic acid, phosphoric acid, sulfuric acid, and hydrochloric acid. As reaction temperature, -20-100 degreeC is preferable, More preferably, it is 0-80 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 24 hours, more preferably 30 minutes to 10 hours. The resulting compound may be purified by the aforementioned purification means.

（式中、Ｒ¹、Ｒ²は炭素数１〜３の炭化水素基であり、それぞれ同一であっても、異なっていても良い。また相互に環を形成していても良い。Ｍ¹はナトリウムもしくはカリウムであり、ＷはＣｌ、Ｂｒ、Ｉより選択されるハロゲン原子であり、ｔは１〜５の整数である。） (Wherein, R ^1, R ² is a hydrocarbon group having 1 to 3 carbon atoms, even each same or may be different. The good .M ¹ may form a ring with each other (It is sodium or potassium, W is a halogen atom selected from Cl, Br, and I, and t is an integer of 1 to 5.)

＜（ｃ）（ｊ）の製造方法＞
（ｃ）のメルカプト体は、化合物（ｂ）とチオウレア等のチア化剤と反応させることで得ることができる。化合物（ｂ）の製造は前述の通りである。チア化反応は水、アルコール、アセトニトリル等の溶媒中もしくは無溶媒中で行う。チオウレアの使用割合は、化合物（ｂ）に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５０モルの範囲である。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。反応後、生成したチアゾリウム塩をアルカリ加水分解し、メルカプト体を得ることができる。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。 <(C) (j) Production Method>
The mercapto compound (c) can be obtained by reacting the compound (b) with a thialating agent such as thiourea. The production of compound (b) is as described above. The thialation reaction is performed in a solvent such as water, alcohol, acetonitrile, or in the absence of a solvent. The proportion of thiourea used is preferably equimolar or more, more preferably equimolar to 50 molar relative to compound (b). As reaction temperature, 0-300 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-150 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 24 hours. After the reaction, the resulting thiazolium salt can be hydrolyzed with alkali to obtain a mercapto compound. The resulting compound may be purified by the aforementioned purification means.

また、上記メルカプト体は、化合物（ｂ）を下記化合物（ｃ１）と反応させ、１級アミンにて分解させることでも得ることができる。（ｂ）と（ｃ１）との反応は、前述の非プロトン性溶媒中、もしくは無溶媒中で行う。（ｃ１）の使用割合は、式（２）に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５０モルの範囲である。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜８０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。続く１級アミンによるアルカリ分解は、前述の非プロトン性溶媒、もしくは無溶媒中で行う。用いる１級アミンとしては特に制限は無いが、好ましくはアンモニア、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、ブチルアミン、ペンチルアミン、ヘキシルアミン、シクロヘキシルアミン、エタノールアミン、プロパノールアミン、ブタノールアミン等が挙げられる。当然、これらの１級アミンを溶媒として用いても良い。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。   The mercapto compound can also be obtained by reacting the compound (b) with the following compound (c1) and decomposing it with a primary amine. The reaction between (b) and (c1) is carried out in the aforementioned aprotic solvent or in the absence of a solvent. The use ratio of (c1) is preferably equimolar or more with respect to formula (2), more preferably in the range of equimolar to 50 molar. As reaction temperature, 0-300 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-80 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 24 hours. The subsequent alkali decomposition with a primary amine is performed in the aprotic solvent described above or in the absence of a solvent. Although there is no restriction | limiting in particular as primary amine to be used, Preferably, ammonia, methylamine, ethylamine, propylamine, butylamine, pentylamine, hexylamine, cyclohexylamine, ethanolamine, propanolamine, butanolamine, etc. are mentioned. Of course, these primary amines may be used as a solvent. The resulting compound may be purified by the aforementioned purification means.

また、化合物（ｊ）は（ｃ）の化合物を得た後、２−メルカプトピリジンを反応させることにより得ることができる。２−メルカプトピリジンの使用割合は、化合物（ｃ）に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５０モルの範囲である。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜８０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。   Compound (j) can be obtained by reacting 2-mercaptopyridine after obtaining compound (c). The use ratio of 2-mercaptopyridine is preferably equimolar or more, more preferably in the range of equimolar to 50 molar relative to the compound (c). As reaction temperature, 0-300 degreeC is preferable, More preferably, it is 20-80 degreeC. The reaction time is preferably 10 minutes to 48 hours, more preferably 30 minutes to 24 hours.

本発明のポリオキシアルキレン誘導体は、特に生理活性物質の修飾に有用な化合物である。生理活性物質は、特にその種類を限定されるものではないが、本発明のポリオキシアルキレン誘導体とアミノ基を介して反応するものであればよく、タンパク質、ポリペプチド、抗癌剤、抗真菌剤、リン脂質が挙げられる。   The polyoxyalkylene derivative of the present invention is a compound particularly useful for modifying a physiologically active substance. The physiologically active substance is not particularly limited in its kind, but any substance that reacts with the polyoxyalkylene derivative of the present invention via an amino group may be used. Protein, polypeptide, anticancer agent, antifungal agent, phosphorus Lipids.

これらの生理活性物質がアミノ基を持たない場合は、一般に知られる方法で生理活性物質の他の官能基をアミノ基に変換してもよい。   When these bioactive substances do not have an amino group, other functional groups of the bioactive substance may be converted into amino groups by a generally known method.

より具体的なタンパク質、ポリペプチドとしては、例えば以下に挙げられるものである。ヘモグロビン、血液因子等の血清タンパク質；ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ等の免疫グロブリン；インターロイキン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１およびＩＬ１２サブタイプ）、インターフェロン（―α、−β、−γ）、顆粒球コロニー刺激因子（αおよびβ型）、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子、血小板由来増殖因子、ホスホリパーゼ活性化タンパク質、インシュリン、グルカゴン、レクチン、リシン、腫瘍壊死因子、上皮細胞増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（―α、−β）、繊維芽細胞増殖因子、肝細胞増殖因子、血管内皮増殖因子、神経成長因子、骨増殖因子、インスリン様増殖因子、ヘパリン結合増殖因子、腫瘍増殖因子、グリア細胞株由来神経栄養因子、マクロファージ分化因子、分化誘導因子、白血病阻害因子、アンフィレグリン、ホルモン、ソマトメジン、エリスロポエチン、ヘモポエチン、トロンボポエチン、カルシトニン等のサイトカインおよびそのフラグメント；タンパク質分解酵素、オキシドリダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、リガーゼ、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、エンドトキシナーゼ、カタラーゼ、キモトリプシン、リパーゼ、ウリカーゼ、エラスターゼ、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、アデノシンジホスファターゼ、チロシナーゼ、ビリルビンオキシターゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコダーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、グルコウロニダーゼ等の酵素；モノクロナール及びポリクロナール抗体およびそれらのフラグメント；ポリ−L−リジン、ポリ−Ｄ−リジン等のポリアミノ酸；Ｂ型肝炎ワクチン、マラリアワクチン、メラノーマワクチン、ＨＩＶ−１ワクチン等のワクチンおよび抗原；また、糖タンパクも含まれる。また、これらの生理活性物質と同様の生理活性を有する類似構造物質もこれに含まれる。また、これらのタンパク質、ポリペプチドは、それらの天然源または遺伝子工学的処理を受けた細胞から単離されるか、あるいは種々の合成法を経て作り出されたものでも良い。   More specific proteins and polypeptides include those listed below, for example. Serum proteins such as hemoglobin and blood factors; immunoglobulins such as IgG, IgE, IgM, IgA and IgD; interleukins (IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11 and IL12 subtypes), interferons (-α, -β, -γ), granulocyte colony stimulating factors (α and β types), macrophages Colony stimulating factor, granulocyte macrophage / colony stimulating factor, platelet derived growth factor, phospholipase activating protein, insulin, glucagon, lectin, ricin, tumor necrosis factor, epidermal growth factor, transforming growth factor (-α, -β) , Fibroblast growth factor, hepatocyte growth factor, vascular endothelial growth factor, nerve growth factor, bone growth factor, insulin Cytokines such as growth factor, heparin-binding growth factor, tumor growth factor, glial cell line-derived neurotrophic factor, macrophage differentiation factor, differentiation inducer, leukemia inhibitory factor, amphiregulin, hormone, somatomedin, erythropoietin, hemopoietin, thrombopoietin, calcitonin And fragments thereof; proteolytic enzyme, oxidoreductase, transferase, hydrolase, lyase, isomerase, ligase, asparaginase, arginase, arginine deaminase, adenosine deaminase, superoxide dismutase, endotoxinase, catalase, chymotrypsin, lipase, uricase, elastase, strepto Kinase, urokinase, prourokinase, adenosine diphosphatase, tyrosina Enzymes, bilirubin oxidase, glucose oxidase, glucodase, galactosidase, glucocerebrosidase, glucouronidase, etc .; monoclonal and polyclonal antibodies and fragments thereof; polyamino acids such as poly-L-lysine, poly-D-lysine Vaccines and antigens such as hepatitis B vaccine, malaria vaccine, melanoma vaccine, HIV-1 vaccine; glycoproteins are also included. In addition, similar structural substances having the same physiological activity as these physiologically active substances are also included. Moreover, these proteins and polypeptides may be isolated from their natural sources or cells subjected to genetic engineering treatment, or may be produced through various synthetic methods.

抗癌剤としては、特に限定されるものではないが、例えば、パクリタキセル、アドリアマイシン、ドキソルビシン、シスプラチン、ダウノマイシン、マイトマイシン、ビンクリスチン、エピルビシン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル、アクラシノマイシン、イダマイシン、ブレオマイシン、ピラルビシン、ペプロマイシン等が挙げられる。具体
的な抗真菌剤としては、特に限定されるものではないが、アンホテリシンＢ、ナイスタチン、フルシトシン、ミコナゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾールおよびペプチド性抗真菌剤が挙げられる。 Examples of anticancer agents include, but are not limited to, paclitaxel, adriamycin, doxorubicin, cisplatin, daunomycin, mitomycin, vincristine, epirubicin, methotrexate, 5-fluorouracil, aclacinomycin, idamycin, bleomycin, pirarubicin, pepromycin, and the like. Can be mentioned. Specific antifungal agents include, but are not limited to, amphotericin B, nystatin, flucytosine, miconazole, fluconazole, itraconazole, ketoconazole and peptidic antifungal agents.

具体的なリン脂質としては、特に限定されるものではないが、フォスファチジルエタノールアミンが挙げられ、これらは卵黄あるいは大豆等の天然物由来のものでも良いし、合成物でも良い。脂肪酸組成としては、特に限定されるものではないが、炭素数１２〜２２の脂肪酸が挙げられ、より好ましくは炭素数１２〜２２の脂肪酸が挙げられる。これらの脂肪酸は飽和脂肪酸でも良いし、不飽和結合を含んだものでも良い。   Specific phospholipids are not particularly limited, and include phosphatidylethanolamine, which may be derived from natural products such as egg yolk or soybean, or may be a synthetic product. Although it does not specifically limit as a fatty acid composition, A C12-C22 fatty acid is mentioned, More preferably, a C12-C22 fatty acid is mentioned. These fatty acids may be saturated fatty acids or may contain unsaturated bonds.

本発明における式（１）のポリオキシアルキレン誘導体より修飾された生理活性物質の製造方法について説明すると、生理活性物質の使用割合の１モルに対して式（１）のポリオキシアルキレン誘導体を１モルもしくはそれ以上の使用割合において反応させればよい。好ましくは、生理活性物質の活性を失わない範囲で製品の要求性能により選択されるが、生理活性物質のアミノ基１等量に対して１〜１００モルの式（１）のポリオキシアルキレン誘導体を用い、好ましくは１〜２０モル、より好ましくは１〜５モルである。   The production method of the physiologically active substance modified from the polyoxyalkylene derivative of the formula (1) in the present invention will be described. One mole of the polyoxyalkylene derivative of the formula (1) is used per mole of the physiologically active substance used. Alternatively, the reaction may be carried out at a higher usage rate. Preferably, it is selected according to the required performance of the product within a range not losing the activity of the physiologically active substance, but 1 to 100 mol of the polyoxyalkylene derivative of the formula (1) is used per 1 equivalent of the amino group of the physiologically active substance. Used, preferably 1 to 20 mol, more preferably 1 to 5 mol.

反応溶媒としては、反応に関与しない溶媒であれば特に制限されないが、例えばリン酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液などの緩衝液が好ましい溶媒として挙げられる。また生理活性物質を失活させることなく、反応に関与しないアセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド等の有機溶媒を添加しても良い。   The reaction solvent is not particularly limited as long as it is a solvent that does not participate in the reaction. For example, a buffer solution such as a phosphate buffer solution, an acetate buffer solution, and a citrate buffer solution is preferable. Moreover, you may add organic solvents, such as acetonitrile, a dimethylsulfoxide, and a dimethylformamide which do not participate in reaction, without inactivating a bioactive substance.

このとき、反応溶液のｐＨは５〜７であり、好ましくは５．５〜６．５である。   At this time, the pH of the reaction solution is 5 to 7, and preferably 5.5 to 6.5.

この条件下で式（１）と生理活性物質を混合することにより、式（１）のフェニルアセタール基はアルデヒド基に変換し、生理活性物質のアミノ基と反応する。また、一旦、式（１）の化合物をｐＨは５〜７の条件下で、中間体としてフェニルアルデヒド基を有するポリオキシアルキレン体を生成させた後、生理活性物質を添加して反応させても良い。   By mixing the formula (1) and the physiologically active substance under these conditions, the phenylacetal group of the formula (1) is converted to an aldehyde group and reacts with the amino group of the physiologically active substance. Alternatively, once the compound of formula (1) is produced under conditions of pH 5 to 7 and a polyoxyalkylene having a phenylaldehyde group is formed as an intermediate, a physiologically active substance is added and reacted. good.

反応温度は生理活性物質が変性しない温度であればよいが、０〜４０℃が好ましい。
反応時間は通常０．５〜７２時間であり、通常は１〜２４時間程度で反応は十分に進行する。 The reaction temperature may be any temperature at which the physiologically active substance is not denatured, but is preferably 0 to 40 ° C.
The reaction time is usually 0.5 to 72 hours, and usually the reaction proceeds sufficiently in about 1 to 24 hours.

反応後は、透析、塩析、限外ろ過、イオン交換クロマトグラフィー、電気泳動などの通常の精製方法で精製し、目的とするポリオキシアルキレンで修飾された生理活性物質を得ることができる。   After the reaction, the target bioactive substance modified with polyoxyalkylene can be obtained by purification by a usual purification method such as dialysis, salting out, ultrafiltration, ion exchange chromatography, and electrophoresis.

以下、実施例に基づいて本発明をさらに具体的に説明する。なお、例中の化合物の分析、同定には¹Ｈ−ＮＭＲおよびＧＰＣを用いた。
＜¹Ｈ−ＮＭＲの分析方法＞
¹Ｈ−ＮＭＲ分析では、日本電子データム（株）製ＪＮＭ−ＥＣＰ４００を用いた。
＜ＧＰＣの分析方法＞ＧＰＣ分析では、ＳＨＯＤＥＸ ＧＰＣ ＳＹＳＴＥＭ−１１を用い、下記条件にて測定を行った。
展開溶媒：テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ
カラム：ＳＨＯＤＥＸ ＫＦ−８０１，ＫＦ−８０３，ＫＦ−８０４（Ｉ．Ｄ．
８ｍｍＸ３０ｃｍ）
カラム温度：４０℃
検出器：ＲＩ
サンプル量：１ｍｇ／ｇ，１００μｌ Hereinafter, the present invention will be described more specifically based on examples. ¹ H-NMR and GPC were used for analysis and identification of the compounds in the examples.
<Analysis method of ¹ H-NMR>
^{In 1} H-NMR analysis, JNM-ECP400 manufactured by JEOL Datum was used.
<GPC Analysis Method> In GPC analysis, SHODEX GPC SYSTEM-11 was used for measurement under the following conditions.
Developing solvent: Tetrahydrofuran (THF)
Flow rate: 1 ml / min
Column: SHODEX KF-801, KF-803, KF-804 (ID
8mmX30cm)
Column temperature: 40 ° C
Detector: RI
Sample amount: 1 mg / g, 100 μl

（実施例１）α−４−（ジエトキシメチル）ベンジル−ω−２−（２−ピリジルジチオ）エチルポリオキシエチレンの合成
（実施例１−１）
アルゴンガス存在下、脱水エタノール３００ｍＬに４−（ジエトキシメチル）ベンズアルデヒド１５ｇ（７２ｍｍｏｌ）を溶解させ温度を０℃にした。そして、ＮａＢＨ₄１．４０ｇ（７９．３ｍｍｏｌ）を少しずつ加えて反応させた。このとき、ＴＬＣ（シリカゲル）にて反応時間の確認を行った（ジエチルエーテル／ヘキサン＝１：１）。１時間ほど攪拌した後、１００ｍＬの純水を加えて未反応の還元剤を失活させた。目的物は、塩化メチレンにて抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで脱水後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を除去した。最後に、減圧蒸留にて精製し、下記式（７）で示される４−（ジエトキシメチル）ベンジルアルコールを得た（留分；１３８〜１４０℃／ｍｍＨｇ）。 Example 1 Synthesis of α-4- (diethoxymethyl) benzyl-ω-2- (2-pyridyldithio) ethyl polyoxyethylene (Example 1-1)
In the presence of argon gas, 15 g (72 mmol) of 4- (diethoxymethyl) benzaldehyde was dissolved in 300 mL of dehydrated ethanol to bring the temperature to 0 ° C. Then, 1.40 g (79.3 mmol) of NaBH _{4 was} added little by little to react. At this time, the reaction time was confirmed by TLC (silica gel) (diethyl ether / hexane = 1: 1). After stirring for about 1 hour, 100 mL of pure water was added to deactivate the unreacted reducing agent. The target product was extracted with methylene chloride, the organic layer was dehydrated with anhydrous magnesium sulfate, and then the solvent was removed using a rotary evaporator. Finally, it was purified by distillation under reduced pressure to obtain 4- (diethoxymethyl) benzyl alcohol represented by the following formula (7) (fraction: 138 to 140 ° C./mmHg).

¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，内部標準ＴＭＳ） δ（ｐｐｍ）：１．１２（６Ｈ，ｍ，ＣＨ ₃ ＣＨ₂Ｏ−）、３．４０−３．６０（４Ｈ，ｍ，ＣＨ₃ＣＨ ₂ Ｏ−），４．４５（２Ｈ，ｓ，Ｐｈ−ＣＨ ₂ ）、５．２０（１Ｈ，ｍ，-ＯＨ）５．４５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、７．２７−７．３８（４Ｈ，ｍ，−Ｐｈ−） ※Ｐｈはベンゼン環を示す。 ¹ H-NMR (CDCl ₃ , internal standard TMS) δ (ppm): 1.12 (6H, m, C H ₃ CH ₂ O—), 3.40-3.60 (4H, m, CH ₃ C H ₂ O—), 4.45 (2H, s, Ph—C H ₂ ), 5.20 (1H, m, —O H ) 5.45 (1 H, m, C H ), 7.27-7. 38 (4H, m, -Ph- ) * Ph represents a benzene ring.

（実施例１−２）
アルゴンガス存在下、ナスフラスコ中において、脱水ＴＨＦ３０ｍＬに重合開始剤として実施例１−１で精製して得られた４−（ジエトキシメチル）ベンジルアルコール０．１９ｇ（０．９０ｍｍｏｌ）を加えた。そして、カリウムナフタレン等モル量を用いてアルコキシドを形成させた後、エチレンオキシド４．２ｇ（９６ｍｍｏｌ）を加え２日間室温下で重合した。そして、トリエチルアミン０．８２ｇ（８．１ｍｍｏｌ）とカリウムナフタレン０．４ｍｍｏｌをポリマー溶液に加えた。さらに、停止反応として、メタンスルホニルクロリド０．７２ｇ（６．３ｍｍｏｌ）を脱水ＴＨＦ１０ｍＬに溶解させたところへ、このポリマー溶液を滴下することによって、停止末端へのメタンスルホニル基の導入を行った。その後、クロロホルムと飽和食塩水にて抽出し、有機層は無水硫酸マグネシウムを用いて脱水した。ロータリーエバポレーターにて濃縮後、エーテル再沈、吸引ろ過にてポリマーを回収し、最後に減圧乾燥にて白色固体のα−４−（ジエトキシメチル）ベンジル−ω−メタンスルフォニルポリオキシエチレン（８）を得た。 (Example 1-2)
In an eggplant flask in the presence of argon gas, 0.19 g (0.90 mmol) of 4- (diethoxymethyl) benzyl alcohol obtained by purification in Example 1-1 as a polymerization initiator was added to 30 mL of dehydrated THF. And after forming an alkoxide using equimolar amounts of potassium naphthalene, 4.2 g (96 mmol) of ethylene oxide was added and polymerized at room temperature for 2 days. Then, 0.82 g (8.1 mmol) of triethylamine and 0.4 mmol of potassium naphthalene were added to the polymer solution. Furthermore, as a termination reaction, methanesulfonyl chloride was introduced into the termination end by dropping this polymer solution into a place where 0.72 g (6.3 mmol) of methanesulfonyl chloride was dissolved in 10 mL of dehydrated THF. Thereafter, the mixture was extracted with chloroform and saturated saline, and the organic layer was dehydrated using anhydrous magnesium sulfate. After concentration with a rotary evaporator, the polymer is recovered by ether reprecipitation and suction filtration. Finally, α-4- (diethoxymethyl) benzyl-ω-methanesulfonyl polyoxyethylene (8) is obtained by drying under reduced pressure. Got.

¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，内部標準ＴＭＳ） δ（ｐｐｍ）：１．１２（６Ｈ，ｍ，ＣＨ ₃ ＣＨ₂Ｏ−）、３．２０（３Ｈ，ｓ，ＯＳＯ₂−ＣＨ ₃ ），３．２０−３．８０（４８０Ｈ，ｍ，ＣＨ₃ＣＨ ₂ Ｏ，−ＯＣＨ ₂ ＣＨ ₂ Ｏ−），４．２５（２Ｈ，ｍ，ＣＨ ₂ −ＯＳＯ₂−），４．４５（２Ｈ，ｓ，Ｐｈ−ＣＨ ₂ ），５．４５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、７．２７−７．３８（４Ｈ，ｍ，−Ｐｈ−） ¹ H-NMR (CDCl _3, internal standard TMS) δ (ppm): 1.12 (6H, m, C H 3 CH 2 O -), 3.20 (3H, s, OSO 2 -C H 3), _{3.20-3.80 (480H, m, CH 3} C H 2 O, -OC H 2 C H 2 O -), 4.25 (2H, m, C H 2 -OSO 2 -), 4.45 (2H, s, Ph-C H 2), 5.45 (1H, m, C H), 7.27-7.38 (4H, m, - Ph -)

（実施例１−３）
減圧乾燥したＯ−エチルジチオ炭酸カリウム０．０４３ｇ（０．２７ｍｍｏｌ）に脱水ＴＨＦ３０ｍＬとジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１．０ｍＬを加え攪拌した。この溶液を実施例１−２で得られたα−４−（ジエトキシメチル）ベンジル−ω−メタンスルフォニルポリオキシエチレン０．１５ｇに加えて、室温にて４時間反応させた。その後、クロロホルムと飽和食塩水にて抽出し、有機層は無水硫酸マグネシウムを用いて脱水した。ロータリーエバポレーターにて濃縮後、エーテル再沈、吸引ろ過にてポリマーを回収し、最後に減圧乾燥にてポリオキシアルキレン誘導体を得た後、この誘導体の８０ｍｇ（０．０１３８ｍｍｏｌ）と２−メチルカプトピリジン（２−ＰＤＳ）３０４ｍｇ（１．３８ｍｍｏｌ）は、アルゴン下にて脱水ＴＨＦに溶解させた。そして、ｎ−プロピルアミン１．７５ｍＬをゆっくり滴下して室温で３時間反応させた。精製は、メタノール透析後に溶媒を除去し、クロロホルム（２ｍＬ）からエーテル再沈を行った。最後に減圧乾燥にて式（９）で示されるα−４−（ジエトキシメチル）ベンジル−ω−（２−ピリジルジチオ）エチルポリオキシエチレンを得た（収率：６６ｍｇ（８２．５％））。
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，内部標準ＴＭＳ） δ（ｐｐｍ）：１．１２（６Ｈ，ｍ，ＣＨ ₃ ＣＨ₂Ｏ−）、３．０２（２Ｈ，ｓ，−ＣＨ₂ＣＨ ₂ −ＳＳ），３．２０−３．８０（４８０Ｈ，ｍ，ＣＨ₃ＣＨ ₂ Ｏ，−ＯＣＨ ₂ ＣＨ ₂ Ｏ−），４．４５（２Ｈ，ｓ，Ｐｈ−ＣＨ ₂ ），５．４５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、７．２７−７．３８（４Ｈ，ｍ，−Ｐｈ−），７．１，７．７，７．８．８．５（４Ｈ，ピリジン環−Ｈ）
数平均分子量：５６３０（ＧＰＣにより測定） (Example 1-3)
30 mL of dehydrated THF and 1.0 mL of dimethylformamide (DMF) were added to 0.043 g (0.27 mmol) of potassium O-ethyldithiocarbonate dried under reduced pressure and stirred. This solution was added to 0.15 g of α-4- (diethoxymethyl) benzyl-ω-methanesulfonylpolyoxyethylene obtained in Example 1-2 and reacted at room temperature for 4 hours. Thereafter, the mixture was extracted with chloroform and saturated saline, and the organic layer was dehydrated using anhydrous magnesium sulfate. After concentration by a rotary evaporator, the polymer is recovered by ether reprecipitation and suction filtration. Finally, a polyoxyalkylene derivative is obtained by drying under reduced pressure, and then 80 mg (0.0138 mmol) of this derivative and 2-methylcaptopyridine. 304 mg (1.38 mmol) of (2-PDS) was dissolved in dehydrated THF under argon. Then, 1.75 mL of n-propylamine was slowly added dropwise and reacted at room temperature for 3 hours. For purification, the solvent was removed after dialysis with methanol, and ether reprecipitation was performed from chloroform (2 mL). Finally, α-4- (diethoxymethyl) benzyl-ω- (2-pyridyldithio) ethyl polyoxyethylene represented by the formula (9) was obtained by drying under reduced pressure (yield: 66 mg (82.5%)). ).
¹ H-NMR (CDCl _3, internal standard TMS) δ (ppm): 1.12 (6H, m, C H 3 CH 2 O -), 3.02 (2H, s, -CH 2 C H 2 -SS ), 3.20-3.80 (480H, m, CH 3 C H 2 O, -OC H 2 C H 2 O -), 4.45 (2H, s, Ph-C H 2), 5.45 (1H, m, C H ), 7.27-7.38 (4H, m, -Ph- ), 7.1, 7.7, 7.8.8.5 (4H, pyridine ring -H )
Number average molecular weight: 5630 (measured by GPC)

（実施例２）α−４−（ジエトキシメチル）ベンジル−ω−メチルポリオキシエチレンの合成
アルゴンガス存在下、ナスフラスコ中において、脱水ＴＨＦ３０ｍＬに重合開始剤として実施例１−１で精製して得られた４−（ジエトキシメチル）ベンジルアルコール０．１９ｇ（０．９０ｍｍｏｌ）を加えた。そして、カリウムナフタレン等モル量を用いてアルコキシドを形成させた後、エチレンオキシド４．０ｇ（９１ｍｍｏｌ）を加え２日間室温下で重合した。そして、トリエチルアミン０．８２ｇ（８．１ｍｍｏｌ）とカリウムナフタレン０．４ｍｍｏｌをポリマー溶液に加えた。さらに、停止反応として、ナトリウムメトキシド２８％メタノール溶液１．２２ｇ（６．３ｍｍｏｌ）を、このポリマー溶液に滴下することによって、停止末端へのメチル基の導入を行った。その後、クロロホルムと飽和食塩水にて抽出し、有機層は無水硫酸マグネシウムを用いて脱水した。ロータリーエバポレーターにて濃縮後、エーテル再沈、吸引ろ過にてポリマーを回収し、最後に減圧乾燥にて白色固体のα−４−（ジエトキシメチル）ベンジル−ω−メチルポリオキシエチレン（１０）を得た。 (Example 2) Synthesis of α-4- (diethoxymethyl) benzyl-ω-methylpolyoxyethylene Purified in Example 1-1 as a polymerization initiator in 30 mL of dehydrated THF in an eggplant flask in the presence of argon gas. 0.19 g (0.90 mmol) of 4- (diethoxymethyl) benzyl alcohol obtained was added. And after forming an alkoxide using equimolar amounts of potassium naphthalene, 4.0 g (91 mmol) of ethylene oxide was added and polymerized at room temperature for 2 days. Then, 0.82 g (8.1 mmol) of triethylamine and 0.4 mmol of potassium naphthalene were added to the polymer solution. Further, as a termination reaction, 1.22 g (6.3 mmol) of a 28% sodium methoxide methanol solution was added dropwise to the polymer solution to introduce a methyl group at the termination end. Thereafter, the mixture was extracted with chloroform and saturated saline, and the organic layer was dehydrated using anhydrous magnesium sulfate. After concentration with a rotary evaporator, the polymer is recovered by ether reprecipitation and suction filtration. Finally, a white solid α-4- (diethoxymethyl) benzyl-ω-methylpolyoxyethylene (10) is obtained by drying under reduced pressure. Obtained.

¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，内部標準ＴＭＳ） δ（ｐｐｍ）：１．１２（６Ｈ，ｍ，ＣＨ ₃ ＣＨ₂Ｏ−）、３．２０−３．８０（４４２Ｈ，ｍ，ＣＨ₃ＣＨ ₂ Ｏ，−ＯＣＨ ₂ ＣＨ ₂ Ｏ−），３．３８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ−ＣＨ ₃ ），４．４５（２Ｈ，ｓ，Ｐｈ−ＣＨ ₂ ），５．４５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、７．２７−７．３８（４Ｈ，ｍ，−Ｐｈ−）
数平均分子量：５，２００（ＧＰＣにより測定） ¹ H-NMR (CDCl ₃ , internal standard TMS) δ (ppm): 1.12 (6H, m, C H ₃ CH ₂ O—), 3.20-3.80 (442 H , m, CH ₃ C H _{2 O, -OC H 2 C H} 2 O -), 3.38 (3H, s, CH 2 CH 2 O-C H 3), 4.45 (2H, s, Ph-C H 2), 5. 45 (1H, m, C H ), 7.27-7.38 (4H, m, -Ph- )
Number average molecular weight: 5,200 (measured by GPC)

（実施例３）α−４−（ジエトキシメチル）ベンジルポリオキシエチレンの合成
アルゴンガス存在下、ナスフラスコ中において、脱水ＴＨＦ３０ｍＬに重合開始剤として実施例１−１で精製して得られた４−（ジエトキシメチル）ベンジルアルコール０．１９ｇ（０．９０ｍｍｏｌ）を加えた。そして、カリウムナフタレン等モル量を用いてアルコキシドを形成させた後、エチレンオキシド２．５ｇ（５７ｍｍｏｌ）を加え２日間室温下で重合した。さらに、停止反応として、水１．２２ｇ（６．３ｍｍｏｌ）を、このポリマー溶液に滴下することによって、停止末端への水酸基の導入を行った。その後、クロロホルムと飽和食塩水にて抽出し、有機層は無水硫酸マグネシウムを用いて脱水した。ロータリーエバポレーターにて濃縮後、エーテル再沈、吸引ろ過にてポリマーを回収し、最後に減圧乾燥にて白色固体のα−４−（ジエトキシメチル）ベンジルポリオキシエチレン（１１）を得た。 (Example 3) Synthesis of α-4- (diethoxymethyl) benzylpolyoxyethylene 4 obtained by purifying in Example 1-1 as a polymerization initiator in 30 mL of dehydrated THF in an eggplant flask in the presence of argon gas. 0.19 g (0.90 mmol) of-(diethoxymethyl) benzyl alcohol was added. And after forming an alkoxide using equimolar amounts of potassium naphthalene, 2.5 g (57 mmol) of ethylene oxide was added and polymerized at room temperature for 2 days. Furthermore, as a termination reaction, 1.22 g (6.3 mmol) of water was added dropwise to the polymer solution to introduce a hydroxyl group at the termination end. Thereafter, the mixture was extracted with chloroform and saturated saline, and the organic layer was dehydrated using anhydrous magnesium sulfate. After concentration with a rotary evaporator, the polymer was recovered by ether reprecipitation and suction filtration, and finally α-4- (diethoxymethyl) benzylpolyoxyethylene (11) was obtained by drying under reduced pressure.

¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，内部標準ＴＭＳ） δ（ｐｐｍ）：１．１２（６Ｈ，ｍ，ＣＨ ₃ ＣＨ₂Ｏ−）、３．２０−３．８０（２７２Ｈ，ｍ，ＣＨ₃ＣＨ ₂ Ｏ，−ＯＣＨ ₂ ＣＨ ₂ Ｏ−），４．４５（２Ｈ，ｓ，Ｐｈ−ＣＨ ₂ ），５．４５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、７．２７−７．３８（４Ｈ，ｍ，−Ｐｈ−）
数平均分子量：３１２０（ＧＰＣにより測定） ¹ H-NMR (CDCl ₃ , internal standard TMS) δ (ppm): 1.12 (6H, m, C H ₃ CH ₂ O—), 3.20-3.80 (272 H , m, CH ₃ C H ₂ O, —OC H ₂ C H ₂ O—), 4.45 (2H, s, Ph—C H ₂ ), 5.45 (1H, m, C H ), 7.27-7.38 (4H , M, -Ph- )
Number average molecular weight: 3120 (measured by GPC)

（実施例４）α−４−（ジエトキシメチル）ベンジル−ω−メチルポリオキシエチレンによるＯＶＡの修飾
ｐＨ６．０に調整したリン酸緩衝溶液１ｍＬへＯＶＡ（ALBUMIN, CHIKEN EGG
分子量約４万）５．０ｍｇ（０．１μｍｏｌ）、実施例２で得られたα−４−（ジエトキシメチル）ベンジル−ω−メチルポリオキシエチレン２０ｍｇを加え、室温で１２時間攪拌した。反応液をイオン交換水にて５倍希釈し、この希釈液２０μＬとトリスＳＤＳサンプル処理液２０μＬを混合後、沸騰水浴中で２分３０秒加温した。この処理液をドデシル硫酸ナトリウムーポリアクリルアミドゲル電気泳動（４−２０％）分析した。染色はＣＢＢ染色で行った。比較としてＯＶＡのみ、およびマーカー（Bio-rad Broad range SDS-PAGE standards、分子量201000,130000,94000,48600,36400,29800,20600,6600）についても同時に分析を行った。これらの結果、上記のＯＶＡとの反応物において、原料ＯＶＡのバンドは残存せず、ＯＶＡ１分子あたり１〜１５個所の修飾を受けた場合に相当する分子量のバンドが観察された。 Example 4 Modification of OVA with α-4- (diethoxymethyl) benzyl-ω-methylpolyoxyethylene To 1 mL of phosphate buffer adjusted to pH 6.0, OVA (ALBUMIN, CHIKEN EGG
A molecular weight of about 40,000) 5.0 mg (0.1 μmol) and 20 mg of α-4- (diethoxymethyl) benzyl-ω-methylpolyoxyethylene obtained in Example 2 were added, and the mixture was stirred at room temperature for 12 hours. The reaction solution was diluted 5 times with ion-exchanged water, 20 μL of this diluted solution and 20 μL of Tris SDS sample treatment solution were mixed, and then heated in a boiling water bath for 2 minutes 30 seconds. This treatment solution was analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (4-20%). Staining was performed by CBB staining. As a comparison, analysis was performed simultaneously for OVA alone and markers (Bio-rad Broad range SDS-PAGE standards, molecular weights 201000, 130000, 94000, 48600, 36400, 29800, 20600, 6600). As a result, in the reaction product with the above OVA, no band of the raw material OVA remained, and a band having a molecular weight corresponding to 1 to 15 modifications per OVA molecule was observed.

（比較例１）α−メチル−ω−オキソプロピルポリオキシエチレン（化合物（１２））によるＯＶＡの修飾
ＣＨ₃Ｏ（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_nＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨＯ （１２）
ｎ≒１１０
実施例４と同様に、ｐＨ６．０に調整したリン酸緩衝溶液１ｍｌへＯＶＡ（ALBUMIN, CHIKEN EGG 分子量約４万）５．０ｍｇ（０．１μｍｏｌ）、α−メチル−ω−オキソプロピルポリオキシエチレン（日本油脂（株）製、分子量約５０００）２０ｍｇを加え、室温で１２時間攪拌した。反応液をイオン交換水にて５倍希釈し、この希釈液２０μＬとトリスＳＤＳサンプル処理液２０μＬを混合後、沸騰水浴中で２分３０秒加温した。この処理液をドデシル硫酸ナトリウムーポリアクリルアミドゲル電気泳動（４−２０％）分析した。染色はＣＢＢ染色で行った。比較としてＯＶＡのみ、およびマーカー（Bio-rad Broad range DS-PAGE standards、分子量201000,130000,94000,48600,36400,29800,20600,6600）についても同時に分析を行った。これらの結果、上記のＯＶＡと化合物（１２）の反応物において、原料ＯＶＡおよび化合物（１２）のバンドはみられたが、化合物（１２）で修飾を受けた場合に相当する分子量のバンドはほとんど観察されなかった。 (Comparative Example 1) Modification of OVA with α-methyl-ω-oxopropylpolyoxyethylene (compound (12)) CH ₃ O (CH ₂ CH ₂ O) _n CH ₂ CH ₂ CHO (12)
n≈110
In the same manner as in Example 4, 5.0 mg (0.1 μmol) of OVA (ALBUMIN, CHIKEN EGG, molecular weight of about 40,000), α-methyl-ω-oxopropyl polyoxyethylene was added to 1 ml of a phosphate buffer adjusted to pH 6.0. 20 mg (manufactured by Nippon Oil & Fats Co., Ltd., molecular weight of about 5000) was added and stirred at room temperature for 12 hours. The reaction solution was diluted 5 times with ion-exchanged water, 20 μL of this diluted solution and 20 μL of Tris SDS sample treatment solution were mixed, and then heated in a boiling water bath for 2 minutes 30 seconds. This treatment solution was analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (4-20%). Staining was performed by CBB staining. As a comparison, analysis was also performed on OVA alone and markers (Bio-rad Broad range DS-PAGE standards, molecular weights 201000, 130000, 94000, 48600, 36400, 29800, 20600, 6600) at the same time. As a result, in the reaction product of OVA and the compound (12), bands of the raw material OVA and the compound (12) were observed, but most of the molecular weight bands corresponding to the modification with the compound (12) were observed. Not observed.

Claims (5)

式（２）で示されるポリオキシアルキレン誘導体。

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｑは炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）から選ばれる１種の基を示す。］
群（Ｉ）

（群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。） A polyoxyalkylene derivative represented by the formula (2).

[Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. Q represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms or one group selected from the group (I). ]
Group (I)

(In group (I), Z represents a covalent bond with a linker of oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms.) 式（４）

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基を示す。］
で示される化合物を還元して式（５）

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基を示す］
で示される化合物を得た後、式（５）の化合物をアルカリ金属触媒存在下、アルキレンオキシドの付加重合反応により式（６）

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｍはアルカリ金属を示す。］
の反応中間体とした後、この中間体のアルコキシ末端を化学修飾することを特徴とする式（２）で示されるポリオキシアルキレン誘導体の製造方法。

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基であり、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基である。ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｑは炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）から選ばれる１種の基を示す。］
群（Ｉ）

（群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。） Formula (4)

[Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms. ]
To reduce the compound represented by formula (5)

[Wherein R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms]
After obtaining the compound represented by formula (5), the compound of formula (5) is subjected to addition polymerization reaction of alkylene oxide in the presence of an alkali metal catalyst to formula (6).

[Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. M represents an alkali metal. ]
A method for producing a polyoxyalkylene derivative represented by the formula (2), wherein the alkoxy terminal of the intermediate is chemically modified after the reaction intermediate of

[Wherein, R is an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, and AO is an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms. n shows the average addition mole number of an oxyalkylene group, and is 10-2000. Q represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms or one group selected from the group (I). ]
Group (I)

(In group (I), Z represents a covalent bond with a linker of oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms.) 式（３）の化合物の水酸基を化学修飾することを特徴とする式（２）で示されるポリオキシアルキレン誘導体の製造方法。

群（Ｉ）

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｑは炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）から選ばれる１種の基を示す。群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。］ A method for producing a polyoxyalkylene derivative represented by the formula (2), wherein the hydroxyl group of the compound of the formula (3) is chemically modified.

Group (I)

[Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. Q represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms or one group selected from the group (I). In group (I), Z represents a covalent bond with a linker between an oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms. ] 分子中の少なくとも１個のアミノ基に式（１）のポリオキシアルキレン誘導体を結合させた生理活性物質。

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｘは水素原子、炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）から選ばれる１種の基を示す。］
群（Ｉ）

（群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。） A physiologically active substance obtained by binding a polyoxyalkylene derivative of the formula (1) to at least one amino group in a molecule.

[Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. X represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or one group selected from group (I). ]
Group (I)

(In group (I), Z represents a covalent bond with a linker of oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms.) 式（１）のポリオキシアルキレン誘導体と生理活性物質を、ｐＨ５〜７の条件下で反応させることを特徴とする請求項４記載の生理活性物質の修飾方法。

［式中、Ｒは炭素数１〜８のアルキル基、ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を示し、１０〜２０００である。Ｘは水素原子、炭素数１〜４のアルキル基または群（Ｉ）から選ばれる１種の基を示す。］
群（Ｉ）

（群（Ｉ）中、Ｚはオキシアルキレンと反応性官能基とのリンカーで共有結合を示す。Ｙは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。） The method for modifying a physiologically active substance according to claim 4, wherein the polyoxyalkylene derivative of the formula (1) and the physiologically active substance are reacted under conditions of pH 5-7.

[Wherein, R represents an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, AO represents an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, and n represents an average addition mole number of the oxyalkylene group, and is 10 to 2000. X represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or one group selected from group (I). ]
Group (I)

(In group (I), Z represents a covalent bond with a linker of oxyalkylene and a reactive functional group. Y represents a hydrocarbon group which may contain a fluorine atom having 1 to 10 carbon atoms.)