JP5178530B2 - 有核赤血球の測定方法 - Google Patents
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Description
本願は、2005年2月1日に出願された出願番号第11/048,086号の一部継続出願である。出願番号第11/048,086号は、2004年2月10日に出願された仮特許出願第60/543,162号の米国特許法119条(e)の下での利益を主張する。これらの特許出願は、本明細書中に参考として援用される。
本発明は、光学測定およびインピーダンス測定によって有核赤血球を測定する方法に関する。
正常な末梢血は、無核の成熟赤血球を含有する。有核赤血球(NRBC)すなわち赤芽球は、未熟な赤血球である。それらは通常、骨髄内に存在し、末梢血中には存在しない。しかし、貧血および白血病など、ある種の疾患では、有核赤血球が末梢血中にも存在する。したがって、NRBCの測定は臨床で重要である。伝統的には、有核赤血球の識別および計数は手作業で行われる。その方法は、顕微鏡スライド上に血液試料を塗沫し、そのスライドを染色するステップと、それに続いて、個々のスライドを手作業で画像分析するステップとを含む。有核赤血球濃度は、100細胞の白血球(WBC)あたりのNRBCの数として報告される。通常は、血液塗抹標本上の同じ領域に存在する200細胞の白血球と、NRBCの数とを計数し、その数を2で割って、NRBC/100WBCの数としてNRBC濃度を表す。このアプローチは非常に時間がかかり、同時に、スライドを分析する個人の解釈によって主観的となる。
一実施形態では、本発明は、血球試料中の有核赤血球を測定する方法を対象とする。上記方法は、成熟赤血球を溶解させ、試料混合物を形成させる試薬系に血球試料を曝露するステップと、軸方向光減失、DCインピーダンス、および中角散乱光シグナルを測定することによって、フローセル中の上記試料混合物を分析するステップと、得られた軸方向光減失、DCインピーダンス、および中角散乱光シグナルを用いて、有核赤血球を他の細胞型と識別するステップと、上記血球試料中の有核赤血球を報告するステップとを含む。中角散乱光シグナルは、約15°から約70°までの範囲、好ましくは約20°から約45°までの範囲で測定する。有核赤血球と他の細胞型との識別には、上記中角散乱光およびDCインピーダンスシグナルの関数、上記中角散乱光および軸方向光減失シグナルの関数、上記軸方向光減失およびDCインピーダンスシグナルの関数、またはこれらの組合せを含めた1つまたは複数の関数を用いることができる。
一実施形態では、本発明は、軸方向光減失測定およびDCインピーダンス測定を併用して、有核赤血球を他の細胞型と識別する方法を提供する。上記方法は、成熟赤血球を溶解させる試薬系に血球試料を曝露するステップと、軸方向光減失およびDCインピーダンスシグナルを測定することによって、フローセル中の試料を分析するステップと、軸方向光減失およびDCインピーダンスシグナルを用いて、有核赤血球を他の細胞型と識別するステップと、上記血球試料中の有核赤血球を報告するステップとを含む。
末梢血とも呼ばれる抗凝血化全血試料14μlを、等張血液希釈液Isoton(登録商標)3E(米国フロリダ州マイアミ(Miami)所在のBeckman Coulter社の製品)614μLで希釈し、実験用血液分析機の混合チャンバー中で溶解試薬125μLと混合した。溶解試薬を添加した約9秒後に、有核赤血球の識別分析用に、シース液であるIsoton(登録商標)3Eと共に試料混合物をフローセルに送達させた。上記溶解試薬は、赤血球の溶解用および有核赤血球の分析用の活性成分、すなわち36g/Lのドデシルトリメチルアンモニウムクロライド(50%溶液)および3.6g/Lのテトラデシルトリメチルアンモニウムクロライドを含有し、pH約4を有する水溶液であった。
実施例1で記載したものと同じ試薬および手順を用いて、新鮮な正常全血試料を分析した。図1Bは、得られた、正常血液試料のDC対ALL散布図を示す。示されている通り、有核赤血球細胞が属する領域にはいかなる細胞集団も存在していなかった。
有核赤血球を含有する臨床全血試料、および新鮮な正常全血試料を、実施例1で記載した手順を用いて、実施例1で記載したものと同等な検出系を備えた別の実験用血液分析機で分析した。但し、データは14ビットADC分解能で取得した。用いた溶解試薬および希釈剤は、Lyse S(登録商標)4およびIsoton(登録商標)4(米国フロリダ州マイアミ所在のBeckman Coulter社の製品)であった。
132の臨床試料を含めた総計336の全血試料を、実施例1で記載した手順および試薬を用いて分析した。NRBCの結果は、F1対ALL散布図を用いた識別分析から得た。前述の通り、F1はDCおよびLS1の関数であり、((DC+LS1)/DC×1000))に等しい。
フローセル内を通過する細胞のDCインピーダンス、軸方向光減失、低角散乱光、および中角散乱光シグナルを検出する検出系を備えた実験用血液分析機で、実施例1で記載した手順を用いて、様々な臨床全血試料を分析した。上記検出系では、DCインピーダンス検出器、ならびに軸方向光減失および低角散乱光シグナルを検出するための光学検出器集合体の2つの光検出器は、実施例1で用いたものと同じであった。上記光学検出器集合体は、入射光から20°から43°までの範囲における中角散乱光シグナルを測定するための第3の光検出器をさらに含有していた。これはLS2と呼ばれた。実施例1に記載の通り、血液試料を溶解および希釈するのに、Lyse S(登録商標)4および等張血液希釈剤を用いた。等張血液希釈剤は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている米国特許第5935857号に記載されている。
Claims (21)
- 血球試料中の有核赤血球を測定する方法であって、
(a)試薬系に前記血球試料を曝露して、成熟赤血球を溶解させ、試料混合物を形成させるステップと、
(b)軸方向光減失、DCインピーダンス、および中角散乱光シグナルを測定することによって、フローセル内の前記試料混合物を分析するステップと、
(c)ステップ(b)で得られた前記軸方向光減失、DCインピーダンス、および中角散乱光シグナルを用いて、有核赤血球を他の細胞型と識別するステップと、
(d)前記血球試料中の有核赤血球を報告するステップと
を含み、
中角散乱光の測定が、DCインピーダンスおよび軸方向光減失の測定と併せて用いられることにより、有核赤血球を細胞破片からさらに識別し、前記細胞破片は、血小板、大型血小板、巨大血小板、血小板凝集塊、鎌状赤血球、または未溶解赤血細胞膜を含む、方法。 - 前記中角散乱光シグナルを約15°から約70°までの範囲で測定する、請求項1に記載の方法。
- 前記中角散乱光シグナルを約20°から約45°までの範囲で測定する、請求項1に記載の方法。
- 前記有核赤血球を他の細胞型と識別するステップで、前記中角散乱光とDCインピーダンスシグナルの関数、前記中角散乱光と軸方向光減失シグナルの関数、前記軸方向光減失とDCインピーダンスシグナルの関数、ならびにこれらの組合せからなる群から選択された1つまたは複数の関数を用いる、請求項1に記載の方法。
- 血球試料中の有核赤血球を測定する方法であって、
(a)試薬系に前記血球試料を曝露し、成熟赤血球を溶解させ、試料混合物を形成させるステップと、
(b)軸方向光減失、低角散乱光、および中角散乱光シグナルを測定することによって、フローセル内の前記試料混合物を分析するステップと、
(c)ステップ(b)で得られた前記軸方向光減失、低角散乱光、および中角散乱光シグナルを用いて、有核赤血球を他の細胞型と識別するステップと、
(d)前記血球試料中の有核赤血球を報告するステップと
を含む方法。 - 前記中角散乱光シグナルを約15°から約70°までの範囲で測定する、請求項5に記載の方法。
- 前記中角散乱光シグナルを約20°から約45°までの範囲で測定する、請求項5に記載の方法。
- 前記低角散乱光シグナルを10°未満で測定する、請求項5に記載の方法。
- 前記低角散乱光シグナルを約1°から約7°までの範囲で測定する、請求項5に記載の方法。
- 前記有核赤血球を他の細胞型と識別するステップが、前記中角散乱光と低角散乱光シグナルの関数、前記中角散乱光と軸方向光減失シグナルの関数、前記軸方向光減失と低角散乱光シグナルの関数、ならびにこれらの組合せからなる群から選択された1つまたは複数の関数を用いる、請求項5に記載の方法。
- 血球試料中の有核赤血球を測定する方法であって、
(a)試薬系に前記血球試料を曝露し、成熟赤血球を溶解させ、試料混合物を形成させるステップと、
(b)軸方向光減失、DCインピーダンス、低角散乱光、および中角散乱光シグナルを測定することによって、フローセル内の前記試料混合物を分析するステップと、
(c)ステップ(b)で得られた前記軸方向光減失、DCインピーダンス、低角散乱光、および中角散乱光シグナルを用いて、有核赤血球を他の細胞型と識別するステップと、
(d)前記血球試料中の有核赤血球を報告するステップと
を含み、
中角散乱光の測定が、DCインピーダンス、低角散乱光、軸方向光減失の測定と併せて用いられることにより、有核赤血球を細胞破片からさらに識別し、前記細胞破片は、血小板、大型血小板、巨大血小板、血小板凝集塊、鎌状赤血球、または未溶解赤血細胞膜を含む、方法。 - 前記中角散乱光シグナルを約15°から約70°までの範囲で測定する、請求項11に記載の方法。
- 前記中角散乱光シグナルを約20°から約45°までの範囲で測定する、請求項11に記載の方法。
- 前記低角散乱光シグナルを10°未満で測定する、請求項11に記載の方法。
- 前記低角散乱光シグナルを約1°から約7°までの範囲で測定する、請求項11に記載の方法。
- 前記有核赤血球を他の細胞型と識別するステップで、前記軸方向光減失とDCインピーダンスシグナルの関数、前記軸方向光減失と低角散乱光シグナルの関数、前記低角散乱光とDCインピーダンスシグナルの関数、前記中角散乱光とDCインピーダンスシグナルの関数、前記中角散乱光と低角散乱光シグナルの関数、前記中角散乱光と軸方向光減失シグナルの関数、前記軸方向光減失、DCインピーダンス、および低角散乱光シグナルの関数、前記軸方向光減失と、DCインピーダンスと、中角散乱光シグナルの関数、前記軸方向光減失と、低角散乱光と、中角散乱光シグナルの関数、ならびにこれらの組合せからなる群から選択された1つまたは複数の関数を用いる、請求項11に記載の方法。
- 前記有核赤血球を他の細胞型と識別するステップが、
前記中角散乱光およびDCインピーダンスシグナルを用いて、細胞破片を前記有核赤血球および前記白血球と識別するステップと、
前記低角散乱光、軸方向光減失、およびDCインピーダンスシグナルを用いて、前記有核赤血球を前記白血球と識別するステップと
を含む、請求項11に記載の方法。 - 前記有核赤血球を他の細胞型と識別するステップが、
前記中角散乱光、DCインピーダンス、および軸方向光減失シグナルを用いて、細胞破片を前記有核赤血球および前記白血球と識別するステップと、
前記低角散乱光、軸方向光減失、およびDCインピーダンスシグナルを用いて、前記有核赤血球を前記白血球と識別するステップと
を含む、請求項11に記載の方法。 - 前記細胞破片が血小板、大型血小板、巨大血小板、血小板凝集塊、鎌状赤血球、または未溶解赤血細胞膜を含む、請求項18に記載の方法。
- 白血球亜集団を識別および報告するステップをさらに含む、請求項11に記載の方法。
- ステップ(b)における前記試料混合物中の残留血球数を得るステップと、前記有核赤血球および細胞破片を前記残留血球数から減算して、補正白血球数を得るステップと、前記血液試料中の前記補正白血球数を報告するステップとをさらに含む、請求項11に記載の方法。
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