JP5135521B2

JP5135521B2 - Multi-capsule environmental hormone degrading agent and method for producing the same

Info

Publication number: JP5135521B2
Application number: JP2006238069A
Authority: JP
Inventors: 燦郎橘; 啓太藤井
Original assignee: Ehime University NUC
Current assignee: Ehime University NUC
Priority date: 2006-09-01
Filing date: 2006-09-01
Publication date: 2013-02-06
Anticipated expiration: 2026-09-01
Also published as: JP2008222727A

Description

本発明は、ダイオキシン分解能力を有する粗酵素と酵素賦活剤とをカプセル構造に形成して、ダイオキシン類を始めとする環境ホルモンで汚染された土壌中や水中に直接投与しても、前記の粗酵素や酵素賦活剤の効力が長期間持続し、汚染土壌中や汚染水中のダイオキシン類を効果的に分解除去することができるようにした多重カプセル環境ホルモン分解剤及びその製造方法に関するものである。 In the present invention, even when a crude enzyme having an ability to decompose dioxin and an enzyme activator are formed in a capsule structure and directly administered into soil or water contaminated with environmental hormones such as dioxins, The present invention relates to a multi-capsule environmental hormone degrading agent and a method for producing the same, in which the effectiveness of an enzyme or an enzyme activator is maintained for a long period of time and dioxins in contaminated soil or contaminated water can be effectively decomposed and removed.

近年、ダイオキシン類を始めとする環境ホルモンによる環境汚染が大きな社会問題となっている。 In recent years, environmental pollution by environmental hormones such as dioxins has become a major social problem.

ダイオキシンは、有機塩素化合物の一種で、２個のベンゼン環が１個又は２個の酸素原子によって結び付けられた骨格構造を持つジベンゾフラン又はシベンゾ−Ｐ−ダイオキシンの総称で、塩素原子の置換のされ方によって、理論的には夫々１３５種類及び７５種類の異性体が存在するとされる。毒性は、塩素の置換位置と数により大きく変化し、中でも２，３，７，８−テトラクロロジベンゾ−Ｐ−ダイオキシンの毒性が最も高いとされている。また、環境ホルモンは、生体内において、ホルモンのような働きをし、体内の機能を狂わせる内分泌撹乱物質として知られている。 Dioxin is a kind of organochlorine compound and is a general term for dibenzofuran or cibenzo-P-dioxin having a skeletal structure in which two benzene rings are linked by one or two oxygen atoms. Theoretically there are 135 and 75 isomers, respectively. Toxicity varies greatly depending on the substitution position and number of chlorine, and 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-P-dioxin is said to have the highest toxicity. In addition, environmental hormones are known as endocrine disrupting substances that act like hormones in the living body and disrupt the functions of the body.

ダイオキシン類は急性毒性の他に、慢性毒性、催奇形性、発ガン性などの毒性をもっている。ダイオキシン類は、主として物質の燃焼などによって、非意図的に生産されている。現在、発生源の一つであるゴミ類の焼却などの規制が実施されている。しかし、ゴミ類の焼却によるダイオキシン類の発生を完全に抑制することは現実問題として不可能である。ダイオキシン類はゴミ類の焼却によって焼却灰や排ガス或いは飛散灰中に存在し、飛散灰は近くの土壌に落下する。また排ガスは、より遠くへ気流に乗って放散され、やがて近隣の地上へ落下する。土壌へ落下したダイオキシン類は、化学的安定性のため土壌中に長期間分解されずに残存し、その一部は河川に流れ、海洋に到達して拡散する。土壌、河川や海洋に拡散されたダイオキシン類は、食物連鎖による生物濃縮によって高濃度となり、やがて人体に蓄積されることになる。それに伴う発ガン性や偏奇形性が、大きな社会問題として懸念されるところである。そのため、環境中のダイオキシン類を分解し、浄化するための技術の確立が強く望まれている。 In addition to acute toxicity, dioxins have toxicities such as chronic toxicity, teratogenicity, and carcinogenicity. Dioxins are unintentionally produced mainly by combustion of substances. Currently, regulations such as incineration of garbage, which is one of the sources, are being implemented. However, it is impossible as a real problem to completely suppress the generation of dioxins by incineration of garbage. Dioxins are present in incineration ash, exhaust gas, or fly ash by incineration of garbage, and the fly ash falls to nearby soil. In addition, the exhaust gas is dissipated in an airstream farther away, and eventually falls to the nearby ground. Dioxins that have fallen into the soil remain in the soil for a long time without being decomposed due to chemical stability, and some of them flow into the river and reach the ocean and diffuse. Dioxins diffused in soil, rivers, and oceans become highly concentrated due to bioconcentration through the food chain and eventually accumulate in the human body. The carcinogenicity and malformation associated therewith is a concern as a major social problem. Therefore, establishment of a technique for decomposing and purifying dioxins in the environment is strongly desired.

これら環境中のダイオキシン類を分解除去する技術として、物理・化学的あるいは生物的手法などの様々な方面から検討されている。物理・化学的な方法は汚染物質が集中して存在する場合には有効な方法であるが、処理コストが高い、あるいは適用範囲が狭いといった問題がある。一方、微生物を用いて環境浄化を行うバイオレメディエーションは、物理・化学的な手法に比べると、低コスト・持続的効果、環境負荷の軽減などの利点があり、土壌中のダイオキシン類などの低濃度で広範囲に拡散した汚染物質の浄化には適した方法である。 As a technique for decomposing and removing dioxins in the environment, various techniques such as physical / chemical or biological techniques have been studied. The physical / chemical method is effective when pollutants are concentrated, but has a problem that the processing cost is high or the application range is narrow. On the other hand, bioremediation, which uses microorganisms to purify the environment, has advantages such as low cost, sustained effects, and reduction of environmental burden compared to physical and chemical methods, and low concentrations of dioxins in soil. This is a suitable method for the purification of pollutants diffused over a wide area.

ダイオキシンを効果的に分解できる微生物としては、既に特開平１１−３４１９７８号公報や特開２００１−１６１３４９号公報で、ダイオキシン分解能力の高い新規微生物を得て公表されている。特開平１１−３４１９７８号公報では、フザリウム・アベナセウム（コルダ：フライズ）サッカルド６５菌株と、フザリウム・アベナセウム（コルダ：フライズ）サッカルドＰＣ×６５菌株と、カワタケ属２６７菌株と、カワタケ属ＰＣ×２６７菌株と、コウヤタケ科（特にカワタケ属）に属する微生物が紹介されている。特開２００１−１６１３４９号公報では、ヒラタケ科ヒラタケ属に属するヒラタケ１又はヒラタケ２と、タコウキン科シュタケ属に属するヒイロタケ１が紹介されている。 As microorganisms capable of effectively degrading dioxins, Japanese Patent Application Laid-Open No. 11-341978 and Japanese Patent Application Laid-Open No. 2001-161349 have already obtained and published new microorganisms having high ability to decompose dioxins. In JP-A-11-341978, Fusarium Avenaceum (Corda: Fries) Sacchard 65 strain, Fusarium Abenaceum (Corda: Fries) Sacchard PC × 65 strain, Kawatake genus 267 strain, Kawatake genus PC × 267 strain and In addition, microorganisms belonging to the family Koyatake (particularly the genus Kawatake) are introduced. Japanese Patent Application Laid-Open No. 2001-161349 introduces oyster mushroom 1 or oyster mushroom 2 belonging to the genus Oyster mushrooms and oyster mushroom 1 belonging to the genus Stamenaceae.

かくして見出されたダイオキシン分解能力を有する微生物は、農地等の土壌中に投与すると、その土壌中の雑菌により前記微生物の生息が阻害される場合が多いので、雑菌の多い土壌中では思うようにダイオキシン類の分解が進行しない場合が多い。前記の微生物が直接ダイオキシン類を分解するのではなくて、この微生物が産生する酵素がダイオキシン類を分解できる。 When the microorganisms having the ability to decompose dioxins thus found are administered into soil such as farmland, the presence of the microorganisms in the soil is often inhibited by the bacteria in the soil. In many cases, the decomposition of dioxins does not proceed. Rather than the microorganisms directly degrading dioxins, enzymes produced by the microorganisms can degrade dioxins.

しかし、前記微生物が産生する酵素は一般的に不安定であり、酸、アルカリ、有機溶媒や雑菌類よって、またその他の物理的、化学的要因によって、その活性が失われるので、酵素を直接農地等の土壌中に投与しても、ダイオキシン類分解能力は短期間で失われる。 However, the enzymes produced by the microorganisms are generally unstable and their activity is lost by acids, alkalis, organic solvents and fungi, and by other physical and chemical factors. Even when administered in soil, the ability to decompose dioxins is lost in a short period of time.

この対策として、特開２００１−２３２３４６号公報には、塩素化ダイオキシン類で汚染された土壌又は水に、磁性体微粒子に固定化された塩素化ダイオキシン分解酵素を接触させて、塩素化ダイオキシン類で汚染された土壌又は水を浄化する方法が開示されている。 As a countermeasure, JP 2001-232346 A discloses that chlorinated dioxins are contacted with soil or water contaminated with chlorinated dioxins by contacting a chlorinated dioxin degrading enzyme immobilized on magnetic fine particles with chlorinated dioxins. A method for purifying contaminated soil or water is disclosed.

しかしながら、この塩素化ダイオキシン分解酵素は磁性体微粒子の表面に付着しているだけであり、酵素が雑菌の多い汚染された土壌と直接接触して、酵素の活性を長期間持続できない。 However, this chlorinated dioxin degrading enzyme is only attached to the surface of the magnetic fine particles, and the enzyme cannot directly maintain the activity of the enzyme for a long period of time by directly contacting the contaminated soil with many germs.

また、この対策として、本発明者等は、特開２００４−３５１２６３号公報にて、白色腐朽菌を培養した培養物中から粗酵素を抽出し、得られた粗酵素を包括法により固定化した顆粒状ダイオキシン類分解剤を汚染土壌に施し、酵素の活性を長期間維持することにより、土壌中のダイオキシン類を効果的に分解除去する土壌浄化方法を公表している。この発明により粗酵素を包括法により固定化した顆粒状ダイオキシン類分解剤は、土壌中に直接投与しても、固定化した顆粒状ダイオキシン類分解剤の活性が長期間持続するようになった。しかしながら、前記顆粒状ダイオキシン類分解剤を使用する際には、酵素賦活剤をこの汚染土壌に同時に、かつ、両者の相互作用が効果的に得られる形で添加しなければならず、その種施工方法の実施が難しかった。その上、この酵素賦活剤は前記酵素と接触する前に汚染土壌に分散接触されるのでその効力が低下して、酵素賦活剤の効果が有効に活用されない欠点があった。
特開平１１−３４１９７８号公報、第１頁特開２００１−１６１３４９号公報、第１頁特開２００１−２３２３４６号公報、第１頁特開２００４−３５１２６３号公報、第２頁 In addition, as a countermeasure, the present inventors extracted a crude enzyme from a culture in which white rot fungi were cultured in JP-A No. 2004-351263, and immobilized the obtained crude enzyme by a comprehensive method. A soil purification method that effectively decomposes and removes dioxins in soil by applying a granular dioxin degrading agent to contaminated soil and maintaining the activity of the enzyme for a long period of time has been announced. According to the present invention, the granular dioxin degrading agent in which the crude enzyme is immobilized by the comprehensive method has been able to maintain the activity of the immobilized granular dioxin degrading agent for a long period of time even when directly administered into soil. However, when using the granular dioxin degrading agent, the enzyme activator must be added to the contaminated soil at the same time and in an effective way to obtain the interaction between the two. Implementation of the method was difficult. In addition, since the enzyme activator is dispersed and contacted with the contaminated soil before coming into contact with the enzyme, its effectiveness is lowered and the effect of the enzyme activator is not effectively utilized.
JP 11-341978, first page JP 2001-161349 A, page 1 JP 2001-232346 A, page 1 JP 2004-351263 A, page 2

本発明の課題は、ダイオキシン分解能力を有する粗酵素と酵素賦活剤とを環境ホルモンで汚染された土壌中や汚染水中に直接投与しても、前記の粗酵素や酵素賦活剤の効力が長期間持続し、土壌中や汚染水中のダイオキシン類を効果的に分解除去することができる多重カプセル環境ホルモン分解剤及びその製造方法を提供することにある。 The problem of the present invention is that even when a crude enzyme having an ability to decompose dioxin and an enzyme activator are directly administered into soil contaminated with environmental hormones or contaminated water, the effectiveness of the crude enzyme or enzyme activator is long-term. An object of the present invention is to provide a multi-capsule environmental hormone degrading agent that can sustain and effectively decompose and remove dioxins in soil and contaminated water, and a method for producing the same.

本発明者は、上記課題を解決するために鋭意工夫した結果、酵素賦活剤をも包含してカプセル化、特に容易に製造できて効果的に機能を果たすことができる多重カプセル構造とすることを見出して本発明に到達した。即ち、本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤は、ダイオキシン分解能力を持つ菌から抽出した粗酵素をコア成分とし、前記粗酵素を活性化させる酵素賦活剤をシーズ成分とする環境ホルモン分解剤であって、前記コア成分をイオン透過機能を有する被膜で被覆すると共に、その回りに前記シーズ成分を配置し、更にその回りをイオン透過機能を有する被膜で被覆して二重カプセル構造とし、前記シーズ成分は、１-ヒドロキシベンゾトリアゾールと界面活性剤とから成る酵素賦活剤と、硫酸マンガンとを含有していることを特徴とする。 As a result of diligent efforts to solve the above problems, the present inventor has encapsulated an enzyme activator, and in particular, has a multi-capsule structure that can be easily manufactured and can function effectively. The present invention has been found. That is, the multi-capsule environmental hormone degrading agent of the present invention is an environmental hormone degrading agent having a crude enzyme extracted from a dioxin-degrading bacterium as a core component and an enzyme activator that activates the crude enzyme as a seed component. Te, the core components with covering with a film having ion permeability function, the sheathed components arranged around it, a double capsule structure to further cover the surrounding with a film having ion permeability function, the sheathed component Is characterized by containing an enzyme activator comprising 1-hydroxybenzotriazole and a surfactant, and manganese sulfate .

これにより、酵素及び酵素賦活剤を夫々カプセル構造とした上で粗酵素及び酵素賦活剤を常時共存させた関係を保つことができるので、環境ホルモンで汚染された水や土壌の施工対象の状態、状況に拘わらず、施工と同時に最も効果的にダイオキシン類を分解できる固形の多重カプセル構造によるので、施工が容易で、商品化に適し、各種環境ホルモンで汚染された部位に施工できる。 This allows the enzyme and the enzyme activator to have a capsule structure, respectively, so that the relationship of coexistence of the crude enzyme and the enzyme activator can always be maintained, so that the state of the construction target of water or soil contaminated with environmental hormones, Regardless of the situation, the solid multi-capsule structure that can decompose dioxins most effectively at the same time as construction is easy to install, suitable for commercialization, and can be applied to sites contaminated with various environmental hormones.

具体的な土壌への適用方法を示すと、本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤は直径を６〜１０ｍｍの大きさに形成し、これをダイオキシン類で汚染された田畑を含む土壌を耕してから、乾燥土壌１ｋｇに対して対し１，０００〜１０，０００Ｕに相当する量の酵素を含む多重カプセル環境ホルモン分解剤を散布し、カプセルがつぶれないように軽く混合する。その後も、月に１〜２回軽く混合するのがよい。ここで言うＵとは、酵素量を表すために規定された量で、酵素活性の強さ、すなわち一定条件において、一定時間に酵素によって触媒された反応量で表される。通常、１分間に１μ ｍｏｌの変化をおこなう酵素量を１単位（Ｕｎｉｔ）とする。 A specific application method to soil will be described. The multi-capsule environmental hormone degrading agent of the present invention has a diameter of 6 to 10 mm, and this is cultivated on soil containing fields contaminated with dioxins. A multi-capsule environmental hormone degrading agent containing an amount of enzyme corresponding to 1,000 to 10,000 U is sprayed on 1 kg of dry soil, and lightly mixed so that the capsules are not crushed. After that, lightly mix once or twice a month. U as used herein is an amount defined to represent the amount of enzyme, and is represented by the strength of enzyme activity, that is, the amount of reaction catalyzed by the enzyme for a certain time under a certain condition. Usually, the amount of enzyme that changes 1 μmol per minute is defined as 1 unit.

尚、本発明でいうイオン透過機能を有する被膜とは、後述するＭｎ^３＋イオン等の金属イオンが透過可能な被膜であり、大半の半透膜がこれに該当する。 In addition, the film which has an ion permeable function as used in the field of this invention is a film which can permeate | transmit metal ions, such as Mn3 ⁺ ion mentioned later, and most semipermeable membranes correspond to this.

本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤は、ダイオキシン分解能力を持つ菌から抽出した粗酵素をコア成分とし、前記粗酵素を活性化させる酵素賦活剤をシーズ成分とする環境ホルモン分解剤であって、前記コア成分をイオン透過機能を有する被膜で被覆すると共に、その回りに前記シーズ成分を配置し、更にその回りをイオン透過機能を有する被膜で被覆して多重カプセル構造とし、前記被膜は、アルギン酸カルシウム、若しくはκ-カラギーナンカリウム、又はι-カラギーナンカルシウムがゲル化した半透膜から成ることを特徴とする。 The multiple capsule environmental hormone degrading agent of the present invention is an environmental hormone degrading agent having a crude enzyme extracted from a bacterium having dioxin degrading ability as a core component and an enzyme activator for activating the crude enzyme as a seed component, The core component is coated with a film having an ion permeation function, the seed component is disposed around the core component, and the periphery is further coated with a film having an ion permeation function to form a multiple capsule structure. or κ- carrageenan potassium, or ι- calcium carrageenan is characterized in that it consists of gelled semipermeable membrane.

本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤において、前記ダイオキシン分解能力を持つ菌は白色腐朽菌であって、この白色腐朽菌がフザリウム・アベナセウム（コルダ：フライズ）サッカルド６５菌株、フザリウム・アベナセウム（コルダ：フライズ）サッカルドＰＣ×６５菌株、カワタケ属２６７菌株、カワタケ属ＰＣ×２６７菌株、コウヤクタケ科に属する微生物、カワタケ属コウヤタケ科に属する微生物、ヒラタケ科ヒラタケ属に属するヒラタケ１又はヒラタケ２、タコウキン科シュタケ属に属するヒイロタケ１の内、いずれか１つを含むことを特徴とする多重カプセル環境ホルモン分解剤とすることができる。 In the multi-capsule environmental hormone-degrading agent of the present invention, the fungus capable of decomposing dioxins is a white rot fungus, and the white rot fungus is Fusarium avenaceum (Corda: Fries) Sacchard 65 strain, Fusarium avenaceum (Corda: Fries) ) Sacchardo PC × 65 strain, Kawatake genus 267 strain, Kawatake genus PC × 267 strain, microorganism belonging to the family Koyakutake, microorganism belonging to the family Agaricaceae, oyster mushroom 1 or oyster mushroom 2 belonging to the genus Oleander, of belongs Hiirotake 1, Ru can be a multiple capsules environmental hormone decomposing agent characterized by containing one.

本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤の製造方法は、粗酵素を溶解したマロン酸緩衝液に、アルギン酸ナトリウム、若しくはκ-カラギーナン、又はι-カラギーナンを加えて混合してコア成分原料液とし、これを塩化カルシウム溶液又は塩化カリウム溶液に滴下してその回りに被膜を形成して一重カプセル化した固定化酵素と成し、次いで、酵素賦活剤を溶解したマロン酸緩衝液に、アルギン酸ナトリウム、若しくはκ-カラギーナン、又はι-カラギーナンを加えて溶解した酵素賦活剤成分液に前記一重カプセル化した固定化酵素を浸漬してその回りにシーズ成分を付与し、しかる後に再度塩化カルシウム溶液又は塩化カリウム溶液に浸漬又は滴下してその回りに被膜を形成して二重カプセルを備えた構造としたことを特徴とする。これにより、容易、安全に多重カプセル構造を作ることができる。 The method for producing a multi-capsule environmental hormone degrading agent of the present invention comprises adding a sodium alginate, κ-carrageenan, or ι-carrageenan to a malonic acid buffer solution in which a crude enzyme is dissolved, and mixing it to obtain a core component raw material liquid. The solution is dropped into a calcium chloride solution or a potassium chloride solution to form a film around it to form a single-encapsulated enzyme, and then sodium alginate or κ is added to a malonic acid buffer solution in which an enzyme activator is dissolved. -Immobilize the single-encapsulated immobilized enzyme in the enzyme activator component solution dissolved by adding carrageenan or ι-carrageenan to give a seed component around it, and then re-add to the calcium chloride solution or potassium chloride solution. It is characterized by having a structure provided with double capsules by dipping or dropping to form a coating around it. Thereby, a multiple capsule structure can be made easily and safely.

また、本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤を製造する好ましい方法として、粗酵素、グルコースオキシダーゼ、グルコースを溶解したマロン酸緩衝液に、アルギン酸ナトリウム、若しくはκ-カラギーナン、又はι-カラギーナンを加えて混合してコア成分原料液とし、これを塩化カルシウム溶液又は塩化カリウム溶液に滴下し、その回りに被膜を形成して一重カプセル化した固定化酵素と成し、次いで、１-ヒドロキシベンゾトリアゾール、界面活性剤、硫酸マンガンを溶解したマロン酸緩衝液に、アルギン酸ナトリウム、若しくはκ-カラギーナン、又はι-カラギーナンを加えて溶解した酵素賦活剤成分液に前記一重カプセル化した固定化酵素を浸漬してシーズ成分を付与し、しかる後に再度塩化カルシウム溶液又は塩化カリウム溶液に浸漬又は滴下してその回りに被膜を形成し、二重カプセルを備えた多重構造とすることができる。 Further, as a preferred method for producing the multiple capsule environmental hormone degrading agent of the present invention, sodium alginate, κ-carrageenan, or ι-carrageenan is added to a malonic acid buffer solution in which crude enzyme, glucose oxidase, and glucose are dissolved and mixed. As a core component raw material liquid, this is dropped into a calcium chloride solution or a potassium chloride solution to form an immobilized enzyme in which a film is formed around it, and then 1-hydroxybenzotriazole, surfactant Seed ingredient by immersing the single-encapsulated immobilized enzyme in an enzyme activator component solution in which sodium alginate, κ-carrageenan, or ι-carrageenan is added to a malonate buffer solution in which the agent and manganese sulfate are dissolved And then immersed again in calcium chloride solution or potassium chloride solution. It can be dipped or dripped to form a coating around it, thereby forming a multiple structure with double capsules.

ダイオキシン類の分解において、白色腐朽菌が産生する酵素としては、マンガンペルオキシターゼ（以下ＭｎＰという）、リグニンペルオキシターゼ（以下ＬｉＰという）、ラッカーゼ（以下Ｌａｃという）、カテコール１，２−ジオキシゲナーゼ、カテコール２，３−ジオキシゲナーゼ等があり、ダイオキシン類の分解には、ＭｎＰ、ＬｉＰ及びＬａｃが関与していると考えられる。 In the decomposition of dioxins, enzymes produced by white rot fungi include manganese peroxidase (hereinafter referred to as MnP), lignin peroxidase (hereinafter referred to as LiP), laccase (hereinafter referred to as Lac), catechol 1,2-dioxygenase, catechol 2, There are 3-dioxygenases and the like, and it is considered that MnP, LiP and Lac are involved in the decomposition of dioxins.

本発明は、ダイオキシン分解能力を持つ菌から抽出した粗酵素を含有したコア成分と、前記粗酵素を活性化させる酵素賦活剤をシーズ成分とし、夫々イオン透過機能を有する膜で被覆した多重カプセル環境ホルモン分解剤なので、取り扱い性が良く、ダイオキシン類を始めとする環境ホルモンで汚染された土壌や水に対してそのまま容易に施工できる。また、施工された本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤中の粗酵素や酵素賦活剤は、汚染土壌、汚染水や外気に直接触れることが無いので、粗酵素や酵素賦活剤の機能が持続する。更に、前記粗酵素と前記酵素賦活剤は前記イオン透過機能を有する被膜を介して接触しているので、粗酵素に対して酵素賦活剤が有効に作用して粗酵素のダイオキシン類分解能力を向上させる効果がある。 The present invention provides a multi-capsule environment in which a core component containing a crude enzyme extracted from a fungus capable of decomposing dioxins and an enzyme activator for activating the crude enzyme as sheath components, each coated with a membrane having an ion permeation function Since it is a hormone degrading agent, it is easy to handle and can be easily applied to soil and water contaminated with environmental hormones such as dioxins. In addition, since the crude enzyme and enzyme activator in the constructed multi-capsule environmental hormone degrading agent of the present invention do not come into direct contact with contaminated soil, contaminated water or outside air, the functions of the crude enzyme and enzyme activator are maintained. . Furthermore, since the crude enzyme and the enzyme activator are in contact via the film having the ion permeation function, the enzyme activator effectively acts on the crude enzyme to improve the ability of the crude enzyme to decompose dioxins. There is an effect to make.

本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤は、多重カプセル構造とされるので、汚染水や汚染土壌に対して容易に施工できる。 Since the multiple capsule environmental hormone degrading agent of the present invention has a multiple capsule structure, it can be easily applied to contaminated water and contaminated soil.

前記シーズ成分には、硫酸マンガンが含有されているので、前記硫酸マンガンのＭｎ^２＋イオンが、粗酵素のＭｎＰによってＭｎ^３＋イオンとなりダイオキシン類を分解する。 Since the seed component contains manganese sulfate, Mn ²⁺ ions of the manganese sulfate are converted into Mn ³⁺ ions by MnP of the crude enzyme and decompose dioxins.

また、カプセル化させる被膜が、アルギン酸カルシウム、若しくはκ-カラギーナンカリウム、又はι-カラギーナンカルシウムがゲル化した半透膜、特にアルギン酸カルシウムがゲル化した半透膜なので、ダイオキシン類を始めとする環境ホルモンで汚染された土壌中や汚染水中でも、前記粗酵素や前記酵素賦活剤の機能をより長期間持続させることができると共に、前記のＭｎ^３＋等のイオンが前記半透膜を透過してダイオキシン類を分解除去することができる。 In addition, the encapsulated film is a semipermeable membrane in which calcium alginate, κ-carrageenan potassium, or ι-carrageenan calcium is gelled, particularly a semipermeable membrane in which calcium alginate is gelled. Therefore, environmental hormones including dioxins The function of the crude enzyme and the enzyme activator can be maintained for a longer period of time in soil contaminated with contaminated water or in contaminated water, and the ions such as Mn ³⁺ permeate the semipermeable membrane to cause dioxins. Can be decomposed and removed.

更に、本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤の製造方法は、アルギン酸ナトリウム等のカプセル化剤を含有した成分原料液を塩化カルシウム等の塩化物溶液に滴下することにより、その界面で前記カプセル化剤と前記塩化物とが反応して生じたアルギン酸カルシウム等の反応物のゲル化半透膜でカプセル化する手法なので、極めて容易にカプセル化することができ、高品質の多重カプセル環境ホルモン分解剤を効率良く安価に製造することができる。 Furthermore, the method for producing the multiple capsule environmental hormone degrading agent of the present invention comprises adding the component raw material solution containing an encapsulating agent such as sodium alginate to a chloride solution such as calcium chloride, and then encapsulating the encapsulating agent at the interface. Encapsulated with a gelled semipermeable membrane of a reaction product such as calcium alginate produced by the reaction of the above and the chloride, so that it can be encapsulated very easily, It can be manufactured efficiently and inexpensively.

次に、本発明を実施するための最良の形態について二重カプセルの例を挙げて説明する。二重以外の三重構造については後述するが、本発明では二重を含めて、それ以上の多重構造を提案するものである。 Next, the best mode for carrying out the present invention will be described with an example of a double capsule. Although triple structures other than double will be described later, the present invention proposes a multiple structure including double.

図１は、本発明の一実施形態に係わる二重カプセル環境ホルモン分解剤を示す断面図である。二重カプセル環境ホルモン分解剤１のコア成分２にはダイオキシン分解能力を持つ菌から抽出した粗酵素が１０〜１００Ｕ（ＭｎＰから換算）含有されている。 FIG. 1 is a sectional view showing a double capsule environmental hormone degrading agent according to an embodiment of the present invention. The core component 2 of the double capsule environmental hormone degrading agent 1 contains 10 to 100 U (converted from MnP) of a crude enzyme extracted from bacteria having dioxin decomposing ability.

前記ダイオキシン分解能力を持つ菌は白色腐朽菌であって、この白色腐朽菌がフザリウム・アベナセウム（コルダ：フライズ）サッカルド６５菌株、フザリウム・アベナセウム（コルダ：フライズ）サッカルドＰＣ×６５菌株、カワタケ属２６７菌株、カワタケ属ＰＣ×２６７菌株、コウヤクタケ科に属する微生物、カワタケ属コウヤタケ科に属する微生物、ヒラタケ科ヒラタケ属に属するヒラタケ１又はヒラタケ２、タコウキン科シュタケ属に属するヒイロタケ１の内、いずれか１つを含んでいる。 The fungus capable of decomposing dioxins is a white rot fungus, and the white rot fungus is Fusarium abenaceum (Corda: Fries) Sacchard 65 strain, Fusarium abenaceum (Corda: Fries) Sacchard PC × 65 strain, Kawatake genus 267 strain One of the following species: a genus Pleurotus genus PC × 267, a microorganism belonging to the family Agaricaceae, a microorganism belonging to the genus Agaricaceae, a oyster mushroom 1 or oyster mushroom 2 belonging to the genus Oleander genus, Contains.

前記コア成分２には、前記粗酵素の外にグルコースオキシダーゼ、グルコースが含有されている。このグルコースオキシダーゼとグルコースが反応して過酸化水素が発生し、発生した過酸化水素の存在下で粗酵素のＭｎＰがダイオキシン類を分解する。 The core component 2 contains glucose oxidase and glucose in addition to the crude enzyme. This glucose oxidase and glucose react to generate hydrogen peroxide, and in the presence of the generated hydrogen peroxide, the crude enzyme MnP decomposes dioxins.

シーズ成分３には、１-ヒドロキシベンゾトリアゾールとＴｗｅｅｎ８０等の界面活性剤とから成る酵素賦活剤と、硫酸マンガンとを含有している。前記酵素賦活剤は粗酵素のダイオキシン分解能力を向上させる効果があり、また、前記硫酸マンガンのＭｎ^２＋イオンは、粗酵素のＭｎＰによってＭｎ^３＋イオンとなってダイオキシン類を分解する効果がある。 The seed component 3 contains an enzyme activator composed of 1-hydroxybenzotriazole and a surfactant such as Tween 80, and manganese sulfate. The enzyme activator has the effect of improving the dioxin decomposing ability of the crude enzyme, and the manganese sulfate Mn ²⁺ ion has the effect of decomposing dioxins into Mn ³⁺ ions by the crude enzyme MnP.

コア成分２と、シーズ成分３の周囲には、夫々イオン透過機能を有する内側被膜（内膜ともいう）４と外側被膜（外膜ともいう）５が形成されている。このイオン透過機能を有する被膜は、アルギン酸カルシウム、若しくはκ-カラギーナンカリウム、又はι-カラギーナンカルシウムがゲル化した半透膜、特にアルギン酸カルシウムがゲル化した半透膜が好ましく用いられる。このアルギン酸カルシウムがゲル化した半透膜は、前記粗酵素や前記酵素賦活剤は透過できないので、その機能を長期間持続させることができ、ダイオキシン分解能力を持つ前記Ｍｎ^３＋イオンが前記半透膜を透過して、ダイオキシン類を効果的に分解除去することができる。 Around the core component 2 and the seed component 3, an inner coating (also referred to as an inner membrane) 4 and an outer coating (also referred to as an outer membrane) 5 each having an ion transmission function are formed. As the film having an ion permeation function, a semipermeable membrane in which calcium alginate, κ-carrageenan potassium, or ι-carrageenan calcium is gelled, particularly a semipermeable membrane in which calcium alginate is gelled is preferably used. This semipermeable membrane in which calcium alginate has gelled cannot pass through the crude enzyme or the enzyme activator, so that its function can be maintained for a long period of time, and the Mn ³⁺ ion having the ability to decompose dioxin is converted into the semipermeable membrane. And dioxins can be effectively decomposed and removed.

本発明の二重カプセル環境ホルモン分解剤１の大きさは、外径Ｄ2が６〜１０ｍｍであり、その他の寸法は表１に示す通りなので、製造し易く、且つ、取り扱い性が良く、汚染土壌に容易に散布して混合することができる。

As for the size of the double capsule environmental hormone degrading agent 1 of the present invention, the outer diameter D2 is 6 to 10 mm and the other dimensions are as shown in Table 1, so that it is easy to manufacture and easy to handle. Can be easily sprayed and mixed.

次に、本発明の二重カプセル環境ホルモン分解剤の製造方法を説明する。まず、菌の培養物基材として楢又は及びブナの木紛からなる菌床を用いる。液体培地としてはグルコース、コハク酸ナトリウム六水和物、第一リン酸カリウム等からなるＫｉｒｋの培地を用いる。 Next, the manufacturing method of the double capsule environmental hormone degradation agent of this invention is demonstrated. First, a fungus bed made of wood or beech wood is used as a fungus culture substrate. As the liquid medium, Kirk's medium comprising glucose, sodium succinate hexahydrate, monobasic potassium phosphate and the like is used.

これらの培養物基材に白色腐朽菌と、この白色腐朽菌を繁殖させるのに必要な量の栄養源を加える。栄養源としては、米糠又は及び小麦ふすまを加える。白色腐朽菌としては前記のとおりであるが、ヒラタケ科ヒラタケ属に属するヒラタケ１若しくはヒラタケ２又はタコンキン科シュタケ属に属するヒイロタケ１が好適に用いられる。ここでは、これをＰＬ１菌と称す。このＰＬ１菌を菌糸蔓延した状態まで培養した後、この菌体にリン酸緩衝液を加えて摩砕し、粗酵素を濾過抽出する。 To these culture substrates are added white rot fungi and the amount of nutrients necessary to propagate the white rot fungi. Add rice bran or wheat bran as a nutrient source. As the white rot fungi, as described above, oyster mushroom 1 or oyster mushroom 2 belonging to the genus Oyster mushroom genus or oyster mushroom 1 belonging to the genus Stachykinaceae is preferably used. Here, this is referred to as PL1 bacteria. After culturing the PL1 bacterium to a state where the mycelium is infested, a phosphate buffer is added to the microbial cell and ground, and the crude enzyme is filtered and extracted.

次に前記で得られた粗酵素を用いて、外径約８ｍｍの二重カプセル分解剤１００個作成する場合について具体的に説明する。 Next, a case where 100 double capsule decomposing agents having an outer diameter of about 8 mm are prepared using the crude enzyme obtained above will be specifically described.

濾過抽出した粗酵素１，２００〜４，８００Ｕ（ＭｎＰから換算）、グルコース５〜５００ｍｇ、グルコースオキシダーゼ２４〜１，２００Ｕを１０〜５０ｍＭのマロン酸緩衝液５〜１０ｍｌに溶解し、これに１．０〜５．０ｗｔ％に相当するアルギン酸ナトリウム０．０５〜０．５ｇを加えて溶解して粗酵素原料液を得る。 The crude enzyme 1,200-4,800 U (converted from MnP) extracted by filtration, glucose 5-500 mg, and glucose oxidase 24-1,200 U were dissolved in 5-10 ml of 10-50 mM malonate buffer solution. 0.05 to 0.5 g of sodium alginate corresponding to 0 to 5.0 wt% is added and dissolved to obtain a crude enzyme raw material solution.

図１は、本発明の二重カプセル環境ホルモン分解剤１を実験室的に製造するフローを示す説明図である。図２（ａ）に示すように、前記で得られた粗酵素原料液６をホールピペット７に入れて、軽く撹拌している０．１〜０．２Ｍの塩化カルシウムを溶解した２０〜５０ｍＭマロン酸緩衝液８に、２０〜５０ｍｌに滴下する。滴下された粗酵素原料液は略球状体となり、その表面では前記アルギン酸ナトリウムと前記塩化カルシウムが反応してアルギン酸カルシウムのゲル化半透膜の内膜４が形成される。これを引き上げることにより一重カプセルの固定化酵素９が得られる。 FIG. 1 is an explanatory diagram showing a flow for manufacturing the double capsule environmental hormone degrading agent 1 of the present invention in a laboratory. As shown in FIG. 2 (a), the crude enzyme raw material solution 6 obtained above is put into a whole pipette 7, and 20-50 mM marron in which 0.1-0.2 M calcium chloride is lightly stirred is dissolved. The acid buffer 8 is added dropwise to 20 to 50 ml. The dropped crude enzyme raw material liquid becomes a substantially spherical body, and on the surface thereof, the sodium alginate and the calcium chloride react to form a gelled semipermeable membrane inner membrane 4 of calcium alginate. By pulling this up, a single capsule immobilized enzyme 9 is obtained.

次に、図２（ｂ）に示すように、１-ヒドロキシベンゾトリアゾール（以下ＨＢＴという）１〜２００ｍｇ、界面活性剤Ｔｗｅｅｎ８０１０〜２００ｍｇ、硫酸マンガン０．１〜１００ｍｇを２０〜５０ｍＭのマロン酸緩衝液１５〜２０ｍｌに溶解し、これに１．０〜５．０ｗｔ％に相当するアルギン酸ナトリウム０．１５〜１．０ｇを加えて溶解して酵素賦活剤成分液１０を準備する。次いで、前記一重カプセルの固定化酵素９を添加してシーズ成分を付与し、軽く撹拌している０．１〜０．２Ｍの塩化カルシウムを溶解した２０〜５０ｍＭのマロン酸緩衝液１１に、３０〜５０ｍｌに滴下する。滴下されたカプセル剤は、前記の一重カプセルの固定化酵素９の場合と同様に、アルギン酸カルシウムのゲル化半透膜の外膜５が形成される。これを引き上げることにより二重カプセル環境ホルモン分解剤１が製造される。 Next, as shown in FIG. 2 (b), 1-200 mg of 1-hydroxybenzotriazole (hereinafter referred to as HBT), 10-200 mg of surfactant Tween 80, 0.1-100 mg of manganese sulfate is added to 20-50 mM malonic acid buffer. It melt | dissolves in 15-20 ml of liquids, 0.15-1.0g of sodium alginate equivalent to 1.0-5.0 wt% is added and melt | dissolved in this, and the enzyme activator component liquid 10 is prepared. Next, the immobilized enzyme 9 of the single capsule was added to give a seed component, and the solution was added to 20-50 mM malonate buffer solution 11 in which 0.1-0.2 M calcium chloride dissolved in lightly stirring was dissolved. Add dropwise to ~ 50 ml. The dropped capsule forms the outer membrane 5 of the gelled semipermeable membrane of calcium alginate, as in the case of the immobilized enzyme 9 of the single capsule. By pulling up this, the double capsule environmental hormone degrading agent 1 is produced.

前記の１．０〜５．０ｗｔ％に相当するアルギン酸ナトリウムの代わりに、１．０〜５．０ｗｔ％に相当するκ-カラギーナンを用いてもよく、この場合は、前記０．１〜０．２Ｍに相当する塩化カルシウムの代わりに０．５〜１．０Ｍに相当する塩化カリウムを用いる。また、前記の１．０〜５．０ｗｔ％に相当するアルギン酸ナトリウムの代わりに、１．０〜５．０ｗｔ％に相当するι-カラギーナンを用いてもよく、この場合は、前記０．１〜０．２Ｍの塩化カルシウムをそのまま用いる。前記κ-カラギーナン、又はι-カラギーナンを用いるよりも、アルギン酸ナトリウムを用いる方が、環境ホルモン分解率が大幅に向上するので好ましい。 In place of the sodium alginate corresponding to 1.0 to 5.0 wt%, κ-carrageenan corresponding to 1.0 to 5.0 wt% may be used. Instead of calcium chloride corresponding to 2M, potassium chloride corresponding to 0.5 to 1.0M is used. In addition, ι-carrageenan corresponding to 1.0 to 5.0 wt% may be used instead of the sodium alginate corresponding to 1.0 to 5.0 wt%. 0.2M calcium chloride is used as it is. The use of sodium alginate is more preferable than the use of κ-carrageenan or ι-carrageenan because the rate of degradation of environmental hormones is greatly improved.

［実施例１］
固定化酵素の包括剤として、アルギン酸ナトリウムとκ-カラギーナンとι-カラギーナンを用いた一重カプセルの固定化酵素の酵素活性保持能力比較テストを下記要領で実施した。 [Example 1]
A comparative test of the enzyme activity retention ability of the single-capsule enzyme using sodium alginate, κ-carrageenan and ι-carrageenan as the immobilizing agent for the immobilized enzyme was performed as follows.

テストサンプルの準備：前記の要領でＰＬ１菌から抽出した粗酵素２，４００Ｕ（ＭｎＰ活性から換算）、グルコース２００ｍｇ、グルコースオキシダーゼ６００Ｕを３０ｍＭのマロン酸緩衝液３０ｍｌに溶解させ、これに１．５ｗｔ％に相当するアルギン酸ナトリウムを加えて混合して得た粗酵素原料液６を図２に示すホールピペット７に入れて、０．１Ｍ塩化カルシウムを溶解した３０ｍＭのマロン酸緩衝液３０ｍｌに滴下した後引き上げて、アルギン酸カルシウムのゲル化半透膜で粗酵素を包括した一重カプセルの固定化酵素９のサンプルＡを得た。 Preparation of test sample: 2,400 U of crude enzyme extracted from PL1 bacteria as described above (converted from MnP activity), 200 mg of glucose and 600 U of glucose oxidase were dissolved in 30 ml of 30 mM malonate buffer solution, and 1.5 wt% The crude enzyme raw material liquid 6 obtained by adding and mixing sodium alginate corresponding to the above is put into a whole pipette 7 shown in FIG. 2 and dropped into 30 ml of 30 mM malonic acid buffer solution in which 0.1 M calcium chloride is dissolved and then pulled up. Thus, Sample A of immobilized enzyme 9 in a single capsule containing the crude enzyme with a gelled semipermeable membrane of calcium alginate was obtained.

前記１．５ｗｔ％に相当するアルギン酸ナトリウムの代わりに、１．５ｗｔ％に相当するκ-カラギーナンを、更に、前記０．１Ｍ塩化カルシウムの代わりに１．０Ｍの塩化カリウムを用いた外は前記と同じ要領にて粗酵素をκ-カラギーナンカリウム膜で包括した一重カプセルの固定化酵素９のサンプルκを得た。 The above except that κ-carrageenan corresponding to 1.5 wt% was used instead of sodium alginate corresponding to 1.5 wt%, and 1.0 M potassium chloride was used instead of 0.1 M calcium chloride. In the same manner, a sample κ of immobilized enzyme 9 in a single capsule in which the crude enzyme was covered with a κ-carrageenan potassium membrane was obtained.

また、前記１．５ｗｔ％に相当するアルギン酸ナトリウム代わりに、１．５ｗｔ％に相当するι-カラギーナンを用いた以外は、サンプルＡと同じ要領にて粗酵素をι-カラギーナンカルシウム半透膜で包括した一重カプセルの固定化酵素９のサンプルιを得た。 In addition, instead of sodium alginate equivalent to 1.5 wt%, ι-carrageenan equivalent to 1.5 wt% was used, and the crude enzyme was covered with ι-carrageenan calcium semipermeable membrane in the same manner as Sample A. A sample ι of immobilized enzyme 9 in a single capsule was obtained.

酵素活性保持能力テスト実施：前記の方法で得た一重カプセルの固定化酵素９のサンプルＡ、サンプルκ、サンプルιを夫々、２００ｍｌの三角フラスコに入れた５０ｍＭのマロン酸緩衝液４０ｍｌ（ｐＨ４．５）に加え、２５℃の暗所で１２０ｒｐｍの条件下で０，２４，４８，７２時間処理を行った。処理期間後吸引濾過を行い、濾液と固定化酵素に分けて下記の方法でＭｎＰ活性とＬｉＰ活性を測定した。 Enzyme activity retention ability test: Single capsule immobilized enzyme 9 obtained by the above method Sample A, sample κ and sample ι were each placed in a 200 ml Erlenmeyer flask in 40 ml of 50 mM malonate buffer (pH 4.5). In addition, the treatment was performed for 0, 24, 48, and 72 hours under the condition of 120 rpm in a dark place at 25 ° C. After the treatment period, suction filtration was carried out, and the MnP activity and LiP activity were measured by the following method for the filtrate and the immobilized enzyme.

ＭｎＰ活性の測定：５０ｍＭマロン酸緩衝液（ｐＨ４．５）１７５０μｌ、２０ｍＭの硫酸マンガン水溶液１２５μｌ、粗酵素液１０００μｌをセルに入れ、２ｍＭのＨ_２Ｏ_２を３００ｍｌ加えて、波長４７０ｎｍの吸光度を２８℃で１分間測定した。（モル吸光度係数ε：４９６００ｍｏｌ^−１ｃｍ^−１）を１分間後の数値を読み取り、Ｆ．Ｈ．Ｐｅｒｉｅらの方法（Ａｐｐｌｉｅｄ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，５７（８），２２４０−２２４５（１９９１））によってＭｎＰ活性を算出した。 Measurement of MnP activity: 1750 μl of 50 mM malonate buffer (pH 4.5), 125 μl of 20 mM manganese sulfate aqueous solution and 1000 μl of crude enzyme solution were added to the cell, 300 ml of ₂ mM H ₂ O ₂ was added, and the absorbance at a wavelength of 470 nm was 28. Measured at 1 ° C. for 1 minute. (Molar absorbance coefficient ε: 49600 mol ⁻¹ cm ⁻¹ ) is read for 1 minute, and F.R. H. MnP activity was calculated by the method of Perie et al. (Applied. Environ. Microbiol, 57 (8), 2240-2245 (1991)).

ＬｉＰ活性の測定：ベラトリルアルコール０．４ｍＭ、Ｔｗｅｅｎ８０の０．１％を含む０．１Ｍ酒石酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）２０００μｌ、粗酵素液１０００μｌをセルに入れ、２ｍＭのＨ_２Ｏ_２を３００μｌ加えて、波長３１０ｎｍの吸光度を３７℃で５分間測定した。（モル吸光度係数ε：９３００ｍｏｌ^−１ｃｍ^−１）５分後の数値を読み取り、Ｔ．Ｋ．Ｋｉｒｋらの方法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１，２２８０−２２８４（１９８４））によってＬｉＰ活性を算出した。 LiP activity measurement: Veratryl alcohol 0.4 mM, 0.1 M of Tween 80 0.1M sodium tartrate buffer solution (pH 3.0) 2000 μl, crude enzyme solution 1000 μl was put in a cell, and 2 mM H ₂ O ₂ was added. 300 μl was added, and the absorbance at a wavelength of 310 nm was measured at 37 ° C. for 5 minutes. (Molar absorbance coefficient ε: 9300 mol ⁻¹ cm ⁻¹ ) The numerical value after 5 minutes was read. K. LiP activity was calculated by the method of Kirk et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 2280-2284 (1984)).

酵素活性保持能力テスト結果：図３は、各カプセル基剤によるカプセル中の酵素ＭｎＰの活性率の経時変化を示す棒線グラフであり、図４は各カプセル基剤によるカプセル中の酵素ＬｉＰの活性率の経時変化を示す棒線グラフである。図中Ａ−１〜Ａ−４は、カプセル被膜としてアルギン酸カルシウムを、κ−１〜κ−４はカプセル被膜としてκ-カラギーナンカリウムを、ι−１〜ι−４はカプセル被膜としてι-カラギーナンカルシウムを夫々用いた場合を示している。図３及び図４から明らかなように、カプセル被膜としてはアルギン酸カルシウム膜が最も優れていることが分かる。特にＭｎＰの活性率の場合その傾向は顕著である。ＭｎＰの活性率の場合はι−２、ι−３、ι−４の値が小さいけれども、ＬｉＰの活性率の場合は、カプセル膜としてκ-カラギーナンカリウムやι-カラギーナンカルシウムの値が高く、これも利用可能であることが示されている。 Enzyme activity retention ability test results: FIG. 3 is a bar graph showing the change over time of the activity rate of the enzyme MnP in the capsule by each capsule base, and FIG. 4 shows the activity of the enzyme LiP in the capsule by each capsule base. It is a bar graph which shows a time-dependent change of a rate. In the figure, A-1 to A-4 are calcium alginate as the capsule film, κ-1 to κ-4 are κ-carrageenan potassium as the capsule film, and ι-1 to ι-4 are ι-carrageenan calcium as the capsule film. The case where each is used is shown. As is clear from FIGS. 3 and 4, it can be seen that the calcium alginate film is the most excellent capsule film. This tendency is particularly remarkable in the case of the activity rate of MnP. In the case of the activity rate of MnP, the values of ι-2, ι-3, and ι-4 are small, but in the case of the activity rate of LiP, the value of κ-carrageenan potassium and ι-carrageenan calcium is high as the capsule membrane. Has also been shown to be available.

［実施例２］
一重カプセルと二重カプセルの環境ホルモン分解剤を用いて、環境ホルモン分解能力の比較テストを下記要領で実施した。 [Example 2]
Using a single capsule and a double capsule environmental hormone degrading agent, a comparative test of environmental hormone degrading ability was performed as follows.

テストサンプルの準備：前記一重カプセルの固定化酵素９のサンプルＡと同一条件で作成したものをサンプルＳとした。 Preparation of test sample: Sample S was prepared under the same conditions as sample A of immobilized enzyme 9 of the single capsule.

次に、ＨＢＴ１０．６ｍｇ、Ｔｗｅｅｎ８０４０ｍｇ、２０ｍＭ硫酸マンガン（３．０２ｍｇ）溶液１ｍｌを５０ｍＭのマロン酸緩衝液１０ｍｌに溶解し、１．５ｗｔ％に相当するアルギン酸ナトリウムを加えて溶解した酵素賦活剤成分液１０を準備して、これに前記一重カプセルの固定化酵素９のサンプルＳの半数を浸漬してシーズ成分を付与し、しかる後に、０．１Ｍ塩化カルシウムを５０ｍＭのマロン酸緩衝液３０ｍｌに溶解した溶液１１に滴下して引き上げてアルギン酸カルシウムのゲル化半透膜による外膜５を形成した二重カプセルの環境ホルモン分解剤１のサンプルＷを作成した。 Next, an enzyme activator component obtained by dissolving 1 ml of HBT 10.6 mg, Tween 80 40 mg, 20 mM manganese sulfate (3.02 mg) in 10 ml of 50 mM malonate buffer and adding sodium alginate corresponding to 1.5 wt% to dissolve. A liquid 10 is prepared, and half of the sample S of the immobilized enzyme 9 of the single capsule is immersed in the liquid 10 to give a seed component, and then 0.1 M calcium chloride is dissolved in 30 ml of 50 mM malonate buffer. A sample W of a double capsule environmental hormone degrading agent 1 in which an outer membrane 5 was formed by dropping the solution 11 and pulling it up to form a gelled semipermeable membrane of calcium alginate was prepared.

一重カプセルの固定化酵素の水中ＤＤＴ分解テストの実施：２００ｍｌの三角フラスコにＨＢＴ１０．６ｍｇ、Ｔｗｅｅｎ８０４０ｍｇ、２０ｍＭ硫酸マンガン３．０２ｍｇを含む５０ｍＭマロン酸緩衝液（ｐＨ４．５）４０ｍｌ加え、そこに前記で作成した一重カプセルの固定化酵素サンプルＳを添加した。その後２００μｌのＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（以下ＤＭＦという）に溶かしたＤＤＴを０．０１ｍＭとなるように添加し、２５℃の暗所に１２０ｒｐｍの条件下１２、２４、４８時間処理を行って、その分解率を調べた。 Implementation of a single capsule immobilized enzyme in water DDT degradation test: To a 200 ml Erlenmeyer flask, 40 ml of 50 mM malonate buffer (pH 4.5) containing 10.6 mg of HBT, 40 mg of Tween 80, 3.02 mg of 20 mM manganese sulfate was added. The single-capsule immobilized enzyme sample S prepared in (1) was added. Thereafter, DDT dissolved in 200 μl of N, N′-dimethylformamide (hereinafter referred to as DMF) was added to a concentration of 0.01 mM, and treatment was performed in a dark place at 25 ° C. under conditions of 120 rpm for 12, 24 and 48 hours. The decomposition rate was examined.

二重カプセルの環境ホルモン分解剤の水中ＤＤＴ分解テストの実施：２００ｍｌの三角フラスコに５０ｍＭマロン酸緩衝液（ｐＨ４．５）４０ｍｌ加え、そこに前記で作成した二重カプセルの環境ホルモン分解剤（サンプルＷ）を添加した。その後２００μｌのＤＭＦに溶かしたＤＤＴを０．０１ｍＭとなるように添加し、２５℃の暗所に１２０ｒｐｍの条件下１２、２４、４８時間処理を行って、その分解率を調べた。 Implementation of double capsule environmental hormone degrading agent in water DDT degradation test: 40 ml of 50 mM malonate buffer (pH 4.5) was added to a 200 ml Erlenmeyer flask, and the double capsule environmental hormone degrading agent prepared above (sample) W) was added. Thereafter, DDT dissolved in 200 μl of DMF was added to a concentration of 0.01 mM, followed by treatment in a dark place at 25 ° C. under conditions of 120 rpm for 12, 24, and 48 hours, and the degradation rate was examined.

一重カプセルと二重カプセルの水中ＤＤＴ分解比較テスト結果：図５は一重カプセルと二重カプセルの環境ホルモン分解剤の水中でのＤＤＴ分解率を示す棒線グラフである。図中Ｓ−１，Ｓ−２，Ｓ−３は比較例の一重カプセルの固定化酵素９であり、Ｗ−１，Ｗ−２，Ｗ−３は本発明の二重カプセルの環境ホルモン分解剤１である。この図から明らかなように、本発明の二重カプセルの環境ホルモン分解剤１は、一重カプセルの固定化酵素９よりも環境ホルモンＤＤＴ分解率が２〜６％も高く、２４時間で３４％、４８時間で３８％分解することが分かった。 Results of single capsule and double capsule DDT degradation comparison test in water: FIG. 5 is a bar graph showing the DDT degradation rate of single capsule and double capsule environmental hormone degradation agents in water. In the figure, S-1, S-2, and S-3 are the single capsule immobilized enzyme 9 of the comparative example, and W-1, W-2, and W-3 are the double capsule environmental hormone degrading agents of the present invention. 1. As is clear from this figure, the environmental hormone degrading agent 1 of the double capsule of the present invention has an environmental hormone DDT degradation rate 2-6% higher than the immobilized enzyme 9 of the single capsule, 34% in 24 hours, It was found to decompose 38% in 48 hours.

一重カプセルの環境ホルモン分解剤の土壌中ＤＤＴ分解テスト実施：２００ｇの土壌（乾燥重量換算）中に、ＨＢＴ１０．６ｍｇ、Ｔｗｅｅｎ８０４０ｍｇ、２０ｍＭ硫酸マンガン３．０２ｍｇを含む５０ｍＭマロン酸緩衝液（ｐＨ４．５）４０ｍｌ加え、更に、Ｔｗｅｅｎ８０を５０μｌ含む５ｍｌの水と０．２ｍｇのＤＤＴを溶かした２００μｌのＤＭＦを混合して添加した。これを軽く振り、玉ができたら潰した。撹拌後、前記で作成したサンプルＳを散布して撹拌した。その後、Ｔｗｅｅｎ８０を５０μｌ含む５ｍｌの水を土壌に散布して、軽く振り、玉を潰してから７日、１５日処理を行って、その分解率を調べた。 DDT degradation test in soil of single capsule environmental hormone degrading agent: 50 mM malonic acid buffer solution (pH 4.5) containing 10.6 mg of HBT, 40 mg of Tween 80, 3.02 mg of 20 mM manganese sulfate in 200 g of soil (in terms of dry weight) 40 ml was added, and 5 ml of water containing 50 μl of Tween 80 and 200 μl of DMF in which 0.2 mg of DDT was dissolved were mixed and added. Shake this lightly and crush it when a ball is made. After stirring, the sample S prepared above was sprayed and stirred. Thereafter, 5 ml of water containing 50 μl of Tween 80 was sprayed on the soil, shaken lightly, crushed the balls, and then treated for 7 to 15 days, and the degradation rate was examined.

二重カプセルの環境ホルモン分解剤の土壌中ＤＤＴ分解テスト実施：２００ｇの土壌（乾燥重量換算）中に、Ｔｗｅｅｎ８０を５０μｌ含む５ｍｌの水と０．２ｍｇのＤＤＴを溶かした２００μｌのＤＭＦを混合して添加した。これを軽く振り、玉ができたら潰した。撹拌後、二重カプセルの環境ホルモン分解剤のサンプルＷを散布して撹拌した。その後、Ｔｗｅｅｎ８０を５０μｌ含む５ｍｌの水を土壌に散布して、軽く振り、玉を潰してから７日、１５日処理を行って、その分解率を調べた。 DDT degradation test in soil of double capsule environmental hormone degrading agent: In 200 g of soil (in terms of dry weight), 5 ml of water containing 50 μl of Tween 80 and 200 μl of DMF dissolved in 0.2 mg of DDT were mixed. Added. Shake this lightly and crush it when a ball is made. After stirring, a sample W of a double capsule environmental hormone degrading agent was sprayed and stirred. Thereafter, 5 ml of water containing 50 μl of Tween 80 was sprayed on the soil, shaken lightly, crushed the balls, and then treated for 7 to 15 days, and the degradation rate was examined.

一重カプセルと二重カプセルの土壌中ＤＤＴ分解比較テスト結果：図６は、一重カプセルと二重カプセルの環境ホルモン分解剤の土壌中でのＤＤＴ分解率を示す棒線グラフである。図中Ｓ−１，Ｓ−２は比較例の一重カプセルの固定化酵素であり、Ｗ−１，Ｗ−２は本発明の二重カプセルの環境ホルモン分解剤である。図６から明らかなように、本発明の二重カプセルの環境ホルモン分解剤は一重カプセルの固定化酵素よりも土壌中での環境ホルモンＤＤＴ分解率が２％高く、７日間で２３％、１５日間で２５％分解することが分かった。 DDT decomposition comparison test result in soil of single capsule and double capsule: FIG. 6 is a bar graph showing the DDT decomposition rate in soil of the environmental hormone degrading agent of single capsule and double capsule. In the figure, S-1 and S-2 are immobilized enzymes of a single capsule of a comparative example, and W-1 and W-2 are environmental hormone degrading agents of the double capsule of the present invention. As is apparent from FIG. 6, the double-capsule environmental hormone-degrading agent of the present invention has a 2% higher rate of environmental hormone DDT degradation in soil than the single-capsule immobilized enzyme, 23% for 7 days, and 15 days. in was found Rukoto disintegrate 25% min.

［実施例３］
二重カプセルの環境ホルモン分解剤によるダイオキシン類3,3’,4,4’-テトラクロロビフェニール（以下ＴＣＢという）の水中分解テストを下記要領にて実施した。 [Example 3]
An underwater degradation test of dioxins 3,3 ′, 4,4′-tetrachlorobiphenyl (hereinafter referred to as TCB) with a double capsule environmental hormone degrading agent was conducted as follows.

テストサンプルの準備：前記サンプルＷの製造において、全て同一条件で作成した二重カプセルの環境ホルモン分解剤をサンプルＷ24とし、粗酵素の量を４８００Ｕにした以外は同一条件で作成した二重カプセルの環境ホルモン分解剤をサンプルＷ48として準備した。 Preparation of test sample: In the production of sample W, the double-capsule environmental hormone degrading agent prepared under the same conditions was designated as sample W24, and the amount of crude enzyme was changed to 4800 U. An environmental hormone degrading agent was prepared as Sample W48.

二重カプセルの環境ホルモン分解剤の水中ＴＣＢ分解テスト実施：実施例１の水中ＤＤＴ分解テストにおいて、サンプルＳとサンプルＷの代わりにサンプルＷ24とサンプルＷ48を用い、ＤＤＴの代わりにＴＣＢを用いてその分解率を測定した以外は、全く同一条件で水中のＴＣＢ分解テストを行った。 In-water TCB degradation test of double capsule environmental hormone degrading agent: In the underwater DDT degradation test of Example 1, sample W24 and sample W48 were used instead of sample S and sample W, and TCB was used instead of DDT. A TCB decomposition test in water was performed under exactly the same conditions except that the decomposition rate was measured.

二重カプセルの環境ホルモン分解剤の水中ＴＣＢ分解テスト結果：図７は、本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤１の水中でのＴＣＢ分解率を示す棒線グラフである。図７から明らかなように、本発明の二重カプセルの環境ホルモン分解剤１は、水中でのダイオキシン類のＴＣＢ分解率においても、酵素量２４００Ｕの場合４８時間で２４％、７２時間で２４％、酵素量４８００Ｕの場合４８時間で３１％分解することが分かった。 Results of TCB degradation test in water of double capsule environmental hormone degrading agent: FIG. 7 is a bar graph showing the TCB degradation rate in water of the multiple capsule environmental hormone degrading agent 1 of the present invention. As apparent from FIG. 7, environmental hormone decomposing agent 1 of the double capsule invention, even in dioxin TCB decomposition rate in water, 24% at 48 hours for the amount of enzyme 2400 U, 24% at 72 hours In the case of the enzyme amount of 4800 U, it was found that 31% was degraded in 48 hours.

以上の実施例の結果から、本発明の二重カプセルの環境ホルモン分解剤１は、一重カプセルの場合のようにＨＢＴ、Ｔｗｅｅｎ８０、硫酸マンガンを含むマロン酸緩衝液を汚染土壌中に加える必要がなく、また、汚染土壌中に直接投与しても酵素賦活剤は二重カプセル内にあって直接汚染土壌と接触しないので酵素賦活効果が持続し、更に、粗酵素と酵素賦活剤がイオン透過機能を有するアルギン酸カルシウムのゲル化半透膜を介して接触しているので、粗酵素に対して酵素賦活剤が有効に作用してダイオキシン類を始めとする環境ホルモンを効果的に分解除去することができることが分かった。 From the results of the above examples, the double-capsule environmental hormone degrading agent 1 of the present invention does not need to add a malonic acid buffer solution containing HBT, Tween 80, and manganese sulfate to the contaminated soil as in the case of a single capsule. In addition, even when administered directly into contaminated soil, the enzyme activator is in a double capsule and does not come into direct contact with the contaminated soil, so that the enzyme activation effect is sustained, and the crude enzyme and enzyme activator have an ion permeation function. Since it is in contact through the gelled semipermeable membrane of calcium alginate, the enzyme activator acts effectively on the crude enzyme and can effectively decompose and remove dioxins and other environmental hormones. I understood.

二重カプセル環境ホルモン分解剤１の例を例示したが、本発明は二重に限定されるものではなく、複数のコア成分による一重カプセルを一つのシーズ成分によるカプセルでまとめたり、二重カプセルの内又は外に、更に活性剤とか、分解剤とか、肥料等、他の成分を含めた多重カプセル構造とすることもできる。 Although the example of the double capsule environmental hormone degrading agent 1 has been illustrated, the present invention is not limited to double, and a single capsule composed of a plurality of core components is combined into a capsule composed of one seed component, A multiple capsule structure including other components such as an active agent, a decomposing agent, and a fertilizer can also be formed inside or outside.

二重、三重に構成された本発明の多重カプセル環境ホルモン分解剤は、その投与又は施工によって環境中のダイオキシン類を消滅させることができるので、汚染土壌、汚染水、その他汚染部位に適時、適切に適用できる。しかもカプセル構造であるので、容器に入れての販売が可能であり、従来の肥料と同様の感覚で散布施工可能であり、実用化できる。 The multi-capsule environmental hormone-degrading agent of the present invention constituted in double or triple can eliminate dioxins in the environment by its administration or construction, so it is suitable for contaminated soil, contaminated water, and other contaminated sites in a timely and appropriate manner. Applicable to. Moreover, since it has a capsule structure, it can be sold in a container, and can be spread and applied in the same manner as a conventional fertilizer, and can be put to practical use.

本発明は、前記実施の形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲で適宜設計的変更を行うことができ、各種態様で実施することができる。 The present invention is not limited to the embodiment described above, and can be appropriately modified in design without departing from the gist of the present invention, and can be implemented in various modes.

本発明の一実施形態に係わる二重カプセル環境ホルモン分解剤を示す断面図である。It is sectional drawing which shows the double capsule environmental hormone decomposing agent concerning one Embodiment of this invention. 本発明の二重カプセル環境ホルモン分解剤を実験室的に製造するフローを示す説明図である。It is explanatory drawing which shows the flow which manufactures the double capsule environmental hormone degradation agent of this invention laboratory. 各カプセル基剤によるカプセル中の酵素ＭｎＰの活性率の経時変化を示す棒線グラフである。It is a bar graph which shows the time-dependent change of the activity rate of the enzyme MnP in the capsule by each capsule base. 各カプセル基剤によるカプセル中の酵素ＬｉＰの活性率の経時変化を示す棒線グラフである。It is a bar graph which shows the time-dependent change of the activity rate of the enzyme LiP in the capsule by each capsule base. 一重カプセルと二重カプセルの環境ホルモン分解剤の水中でのＤＤＴ分解率を示す棒線グラフである。It is a bar graph which shows the DDT degradation rate in the water of the environmental hormone degradation agent of a single capsule and a double capsule. 一重カプセルと二重カプセルの環境ホルモン分解剤の土壌中でのＤＤＴ分解率を示す棒線グラフである。It is a bar graph which shows the DDT degradation rate in the soil of the environmental hormone degradation agent of a single capsule and a double capsule. 本発明の二重カプセル環境ホルモン分解剤の水中でのＴＣＢ分解率を示す棒線グラフである。It is a bar graph which shows the TCB decomposition | disassembly rate in the water of the double capsule environmental hormone degradation agent of this invention.

符号の説明Explanation of symbols

１二重カプセル環境ホルモン分解剤
２コア成分
３シーズ成分
４内膜
５外膜
６粗酵素原料液
７ホールピペット
８，１１塩化カルシウムを溶解したマロン酸緩衝液
９一重カプセル固定化酵素
１０酵素賦活剤溶液 DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Double capsule environmental hormone degradation agent 2 Core component 3 Seeds component 4 Inner membrane 5 Outer membrane 6 Crude enzyme raw material solution 7 Whole pipette 8,11 Malonic acid buffer solution which dissolved calcium chloride 9 Single capsule fixed enzyme 10 Enzyme activator solution

Claims

ダイオキシン分解能力を持つ菌から抽出した粗酵素をコア成分とし、前記粗酵素を活性化させる酵素賦活剤をシーズ成分とする環境ホルモン分解剤であって、
前記コア成分をイオン透過機能を有する被膜で被覆すると共に、その回りに前記シーズ成分を配置し、更にその回りをイオン透過機能を有する被膜で被覆して多重カプセル構造とし、
前記シーズ成分は、１-ヒドロキシベンゾトリアゾールと界面活性剤とから成る酵素賦活剤と、硫酸マンガンとを含有している、
ことを特徴とする多重カプセル環境ホルモン分解剤。 An environmental hormone degrading agent comprising a crude enzyme extracted from a fungus capable of decomposing dioxin as a core component and an enzyme activator that activates the crude enzyme as a seed component,
The core component is coated with a film having an ion permeation function, the seeds component is disposed around the core component, and the periphery is further coated with a film having an ion permeation function to form a multiple capsule structure .
The seed component contains an enzyme activator composed of 1-hydroxybenzotriazole and a surfactant, and manganese sulfate.
A multi-capsule environmental hormone degrading agent characterized by that.

ダイオキシン分解能力を持つ菌から抽出した粗酵素をコア成分とし、前記粗酵素を活性化させる酵素賦活剤をシーズ成分とする環境ホルモン分解剤であって、
前記コア成分をイオン透過機能を有する被膜で被覆すると共に、その回りに前記シーズ成分を配置し、更にその回りをイオン透過機能を有する被膜で被覆して多重カプセル構造とし、
前記被膜は、アルギン酸カルシウム、若しくはκ-カラギーナンカリウム、又はι-カラギーナンカルシウムがゲル化した半透膜から成る、
ことを特徴とする多重カプセル環境ホルモン分解剤。 An environmental hormone degrading agent comprising a crude enzyme extracted from a fungus capable of decomposing dioxin as a core component and an enzyme activator that activates the crude enzyme as a seed component,
The core component is coated with a film having an ion permeation function, the seeds component is disposed around the core component, and the periphery is further coated with a film having an ion permeation function to form a multiple capsule structure.
The coating comprises a semipermeable membrane in which calcium alginate, κ-carrageenan potassium, or ι-carrageenan calcium is gelled.
Multiplex capsules environmental hormone decomposing agent you wherein a.

請求項１又は請求項２に記載の多重カプセル環境ホルモン分解剤において、
前記菌は白色腐朽菌であって、この白色腐朽菌がフザリウム・アベナセウム（コルダ：フライズ）サッカルド６５菌株、フザリウム・アベナセウム（コルダ：フライズ）サッカルドＰＣ×６５菌株、カワタケ属２６７菌株、カワタケ属ＰＣ×２６７菌株、コウヤクタケ科に属する微生物、カワタケ属コウヤタケ科に属する微生物、ヒラタケ科ヒラタケ属に属するヒラタケ１又はヒラタケ２、タコウキン科シュタケ属に属するヒイロタケ１の内、いずれか１つを含む、
ことを特徴とする多重カプセル環境ホルモン分解剤。 In the multiple capsule environmental hormone degrading agent according to claim 1 or 2,
The bacterium is a white rot fungus, and the white rot fungus is Fusarium abenaceum (Corda: Fries) Sacchard 65 strain, Fusarium abenaceum (Corda: Fries) Sacchard PC × 65 strain, Kawatake genus 267 strain, Kawatake genus PC × Including any one of 267 strains, microorganisms belonging to the family Amanitaceae, microorganisms belonging to the genus Amanitaceae, oyster mushroom 1 or oyster mushroom 2 belonging to the genus Amanita mushroom,
Multiplex capsules environmental hormone decomposing agent you wherein a.

粗酵素を溶解したマロン酸緩衝液に、アルギン酸ナトリウム、若しくはκ-カラギーナン、又はι-カラギーナンを加えて混合してコア成分原料液とし、
これを塩化カルシウム溶液又は塩化カリウム溶液に滴下してその回りに被膜を形成して一重カプセル化した固定化酵素と成し、
次いで、酵素賦活剤を溶解したマロン酸緩衝液に、アルギン酸ナトリウム、若しくはκ-カラギーナン、又はι-カラギーナンを加えて溶解した酵素賦活剤成分液に前記一重カプセル化した固定化酵素を浸漬してその回りにシーズ成分を付与し、
しかる後に再度塩化カルシウム溶液又は塩化カリウム溶液に浸漬又は滴下してその回りに被膜を形成して二重カプセルを備えた構造とした、
ことを特徴とする多重カプセル環境ホルモン分解剤の製造方法。 To the malonic acid buffer solution in which the crude enzyme is dissolved, sodium alginate, κ-carrageenan, or ι-carrageenan is added and mixed to form a core ingredient raw material solution.
This is dripped into a calcium chloride solution or a potassium chloride solution to form a film around it and to form a single-encapsulated enzyme,
Next, the immobilized enzyme encapsulated in a single capsule is immersed in an enzyme activator component solution in which sodium alginate, κ-carrageenan, or ι-carrageenan is added and dissolved in a malonic acid buffer solution in which the enzyme activator is dissolved. Add seeds ingredients around,
After that, it was immersed or dropped again in a calcium chloride solution or a potassium chloride solution to form a film around it and to have a structure with double capsules,
Method for producing a multiplex capsules environmental hormone decomposing agent you wherein a.

粗酵素、グルコースオキシダーゼ、グルコースを溶解したマロン酸緩衝液に、アルギン酸ナトリウム、若しくはκ-カラギーナン、又はι-カラギーナンを加えて混合してコア成分原料液とし、
これを塩化カルシウム溶液又は塩化カリウム溶液に滴下し、その回りに被膜を形成して一重カプセル化した固定化酵素と成し、
次いで、１-ヒドロキシベンゾトリアゾール、界面活性剤、硫酸マンガンを溶解したマロン酸緩衝液に、アルギン酸ナトリウム、若しくはκ-カラギーナン、又はι-カラギーナンを加えて溶解した酵素賦活剤成分液に前記一重カプセル化した固定化酵素を浸漬してシーズ成分を付与し、
しかる後に再度塩化カルシウム溶液又は塩化カリウム溶液に浸漬又は滴下してその回りに被膜を形成し、二重カプセルを備えた構造とした、
ことを特徴とする多重カプセル環境ホルモン分解剤の製造方法。 Crude enzyme , glucose oxidase, glucose- dissolved malonate buffer solution, sodium alginate, κ-carrageenan, or ι-carrageenan added and mixed to form a core component raw material solution,
This is dropped into a calcium chloride solution or a potassium chloride solution, and a film is formed around it to form a single-encapsulated enzyme,
Next, the single-encapsulation in the enzyme activator component solution in which sodium alginate, κ-carrageenan, or ι-carrageenan is added to the malonate buffer solution in which 1-hydroxybenzotriazole, surfactant, and manganese sulfate are dissolved is added. grant sheet over's components by immersing the immobilized enzyme,
To form a film around it by dipping or dropping again the calcium chloride solution or potassium chloride solution thereafter and a structure with a double capsule,
Producing how the multiple capsule environmental hormone decomposing agent, characterized in that.