JP5099871B2 - Feed for seafood - Google Patents
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Description
本発明は、養殖魚を含む、例えば、ブリ、真鯛またはヒラメ等の魚介類用の餌飼料であり、特に、養殖現場における養殖魚へのストレスによる罹患と肉質悪化を改善するための魚介類用餌飼料に関するものである。 The present invention is a feed for fish and shellfish such as yellowtail, snapper or flounder including cultured fish, and particularly for fish and shellfish for improving morbidity and deterioration of meat quality due to stress on farmed fish at aquaculture sites. It relates to feed.
近年、食品に対する安全性、安心性に関して国民の関心が急激に高まっており、さらに高齢化社会における健康への不安から、健康食品への希求もかつてない高まりを見せている。 In recent years, the public's interest in food safety and security has been rapidly increasing, and the demand for health foods has never been higher due to health concerns in an aging society.
このような状況下において、例えば、魚介類においては、飼・餌料、飼育方法、投薬歴等を含めた履歴証明（トレーサビリティ）の確保による安全性、安心性が求められるだけでなく、人の健康に良い養殖魚介類等の生産、供給が重要課題となっており、これらが養殖魚介類等の商品価値を決める大きな要因の一つになっている。 Under such circumstances, for example, seafood is not only required to have safety and security by securing history certification (traceability) including feeding / feeding, breeding methods, medication history, etc., but also human health. The production and supply of well-cultured seafood and the like is an important issue, and these are one of the major factors that determine the commercial value of cultured seafood.
さらに、魚介類の体色を含めた姿形、味、におい、肉色、テクスチャー、鮮度等の肉質も商品価値を決める重要な要因になっている。 In addition, the shape, taste, smell, meat color, texture, freshness and other meat quality including the body color of seafood are also important factors that determine the commercial value.
養殖魚介類は、一般的に、生きたまま活魚としても出荷されることが多く、また、養殖用の種苗も当然のことながら生きたまま出荷されている。その活魚を輸送する際、過密や、酸素不足等のストレス負荷により、活力の低下や斃死発生が問題となっている。 In general, cultured seafood is often shipped as live fish while alive, and seedlings for aquaculture are naturally shipped alive. When transporting the live fish, a decrease in vitality or the occurrence of drowning is a problem due to overloading or stress loads such as lack of oxygen.
これら養殖等の魚介類用の飼餌料については、飼料効率と経済性を主眼とした研究が中心に行われているのが現実であり、養殖生産物の食品としての商品価値を高める観点、養殖魚介類の健康増進ないしは種苗を含めた養殖魚介類の活魚輸送時におけるリスク回避手段としての観点からの技術的研究は少ない。 With regard to these foods for aquaculture such as aquaculture, research is focused on feed efficiency and economics, and in reality, the viewpoint of increasing the commercial value of aquaculture products as food, aquaculture There are few technical researches from the viewpoint of risk avoidance measures when promoting the health of seafood or transporting live fish of cultured seafood including seedlings.
以上のことから、健康に育って活力高く、肉質も良く、安全・安心で人の健康にも良い魚介類の養殖を可能とする飼料ないしは飼料添加物の開発が、養殖業者だけでなく、消費者からも強く望まれている。 Based on the above, the development of feeds or feed additives that enable the cultivation of seafood that is healthy and vibrant, has good meat quality, is safe and secure, and is good for human health is not limited to fishermen. It is also strongly desired by those who are.
そこで、養殖魚の肉質を改善できる魚介類用の餌飼料としては、例えば、リン脂質１００ｇに対してカロチノイド０．１ｇ〜１０ｇの割合で配合してなる養魚飼料添加剤、および、飼料１００ｇ中にリン脂質２ｇ以上とカロチノイド３ｍｇ以上とを含有してなる養魚飼料がある（特許文献１参照）。 Therefore, as a feed for seafood that can improve the meat quality of cultured fish, for example, a fish feed additive that is blended at a ratio of 0.1 g to 10 g of carotenoid to 100 g of phospholipid, and phosphorus in 100 g of feed There is a fish feed containing 2 g or more of lipid and 3 mg or more of carotenoid (see Patent Document 1).
この特許文献１の公知技術においては、リン脂質に所要量のカロチノイドを配合させることによって、これを給餌された魚介類の肉色に赤い鮮やかな色合いが発現するようになり、異味，異臭のないすぐれた肉質を得ることができるというものである。
In the known technology of this
ところで、前述したように、養殖魚介類は、生きたまま活魚としても出荷・輸送されることが多く、その輸送する際における過密や、酸素不足等のストレス負荷によって活魚の肉質に悪化が生じてしまうことが問題として考えられるが、前記特許文献１の公知技術においては、この活魚輸送時等のストレス負荷による肉質悪化については考慮されていないものである。
By the way, as described above, cultured fish and shellfish are often shipped and transported as live fish alive, and the quality of live fish deteriorates due to overloading during transport and stress loads such as lack of oxygen. However, in the known technique of
従って、活魚輸送時等のストレス負荷による肉質悪化を抑制・改善できる魚介類用の餌飼料を得るということに解決しなければならない課題を有している。 Therefore, it has the problem which must be solved by obtaining the bait feed for fishery products which can suppress and improve the meat quality deterioration by the stress load at the time of live fish transportation.
本発明者らは、上記の諸課題の観点から、精力的に検討を重ねた結果、魚介類用の餌飼料に水溶性抗酸化物質を有効成分として含有させることにより、上記の諸課題を解決することができることを見出した。 As a result of intensive studies from the viewpoint of the above-mentioned problems, the present inventors solved the above-mentioned problems by including a water-soluble antioxidant as an active ingredient in the feed for fish and shellfish. Found that you can.
更に、前記水溶性抗酸化物質として、糖の部分構造にもつと共にアミノ基を有し、分子量が２６８または２８３のいずれかであるものを用いることが好ましく、また、緑藻網（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）オオヒゲマワリ目（Ｖｏｌｖｏｃａｌｅｓ）のデュナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）に属する微細藻（藻体）から得たものを用いた場合には、該デュナリエラ属に属する微細藻から得られる前記水溶性抗酸化物質の作用と、該藻体に含有されるβ−カロテンを含むカロテノイド（脂溶性抗酸化物質）の作用との相乗効果を得ることができるようになり、より好ましい形態とすることができるのである。 Further, as the water-soluble antioxidant, it is preferable to use a sugar having a partial structure of sugar and an amino group, and having a molecular weight of either 268 or 283. Further, Chlorophyceae Volvocales ) When using a microalga belonging to the genus Dunaliella (algae), the action of the water-soluble antioxidant substance obtained from the microalga belonging to the genus Dunaliella, and the alga It becomes possible to obtain a synergistic effect with the action of carotenoid (a fat-soluble antioxidant substance) containing β-carotene contained in, and a more preferable form can be obtained.
そこで、本発明に係る魚介類用餌飼料においては、上記した従来例の課題を解決する具体的手段として、緑藻網オオヒゲマワリ目のデュナリエラ属に属する微細藻であるデュナリエラ藻体乾燥粉末から蒸留水を用いて抽出した水溶性抗酸化物質を有効成分として含有することを最も主要な特徴とするものであり、更に、前記デュナリエラ藻体乾燥粉末から蒸留水を用いて抽出した水溶性抗酸化物質は、分子量が２６８または２８３のいずれかであり、糖の部分構造をもつと共にアミノ基を有することを付加的な要件として含むものである。 Therefore, in the feed for fish and shellfish according to the present invention, as a specific means for solving the above-described problems of the conventional examples, distilled water is used from the dried powder of Dunaliella alga body, which is a microalga belonging to the genus Dunaliella belonging to the order of the green alga net of the bearded sunflower. The water-soluble antioxidant substance extracted using the water-soluble antioxidant substance as the active ingredient is the main feature, and further, the water-soluble antioxidant substance extracted from the Dunaliella alga body dry powder using distilled water , The molecular weight is either 268 or 283, and it has an additional requirement that it has a sugar partial structure and an amino group.
本発明に係る魚介類用餌飼料は、緑藻網オオヒゲマワリ目のデュナリエラ属に属する微細藻であるデュナリエラ藻体乾燥粉末から蒸留水を用いて抽出した水溶性抗酸化物質を有効成分として含有するものであるため、この魚介類用餌飼料を養殖魚を含む魚介類に与えることで、活性酸素消去能が亢進され、活魚輸送時等において魚介類に対してストレス負荷が生じたとしても、該ストレス負荷に対して前記魚介類の性状の変化が抑制されることから、肉質悪化を抑制・改善できると共に、罹患が改善されて抗病性増強も期待でき、健康かつ活力の高い状態で育てることができ、消費者にとって肉質が良く、安全・安心で、人の健康にも積極的に寄与できるようになるという優れた効果を奏する。 The feed for seafood according to the present invention contains, as an active ingredient, a water-soluble antioxidant substance extracted using distilled water from a dried powder of Dunaliella algae, which is a microalga belonging to the genus Dunaliella belonging to the green alga net of the sunflower. Therefore, by supplying this fish and shellfish feed to fish and shellfish including cultured fish, the active oxygen scavenging ability is enhanced, and even if a stress load occurs on fish and shellfish during transport of live fish, the stress load In contrast, the change in the properties of the seafood is suppressed, so that the deterioration of meat quality can be suppressed / improved, the morbidity can be improved and the anti-morbidity can be expected to increase, and it can be raised in a healthy and vigorous state. It has the excellent effect that the meat quality is good for consumers, it is safe and secure, and it can contribute positively to human health.
次に、本発明を具体的な実施の形態に基づいて詳しく説明する。
まず、本発明において水溶性抗酸化物質とは、水に溶解する性質を有する抗酸化物質を意味するものである。この抗酸化物質としては、例えば、微細藻類の一種である緑藻網（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）オオヒゲマワリ目（Ｖｏｌｖｏｃａｌｅｓ）のデュナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）に属する微細藻（藻体）等から得ることができ、天然由来のものが好ましいものである。このデュナリエラとしては、例えば、Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ（Ｄ．ｓａｌｉｎａ）、Ｄ． ｂａｒｄａｗｉｌ及びＤ． ｔｅｒｔｉｏｌｅｃｔａ等を使用することができる。
Next, the present invention will be described in detail based on specific embodiments.
First, the water-soluble antioxidant substance in the present invention means an antioxidant substance having a property of being dissolved in water. As this antioxidant, for example, it can be obtained from the microalgae (algae) belonging to the genus Dunaliella of the Chlorophyceae, Volvocales, which is a kind of microalgae, and derived from nature Is preferred. As the Dunaliella, for example, Dunaliella salina (D.salina), D. bardawil and D. teriolecta or the like can be used.
前記デュナリエラ等の微細藻は、天然由来のものまたは培養によるもののいずれを用いても良いが、安定供給と品質保持の観点から、培養により増殖させて使用することが望ましい。また、前記微細藻は、生の藻体、乾燥した藻体または乾燥した粉体等のいずれであっても良い。 Although the microalgae such as Dunaliella may be either naturally derived or cultured, it is desirable to grow and use them from the viewpoint of stable supply and quality maintenance. The microalgae may be any of raw alga bodies, dried alga bodies, dried powders, and the like.
微細藻は光合成を行なって自らのエネルギーとしているため、培養は光照射下に藻類培養用の培地を用い、通常の培養方法により行なうことができる。具体的な培養条件を述べれば下記のとおりである。 Since microalgae carry out photosynthesis and generate their own energy, culturing can be performed by a normal culture method using a culture medium for algae under light irradiation. Specific culture conditions are described as follows.
Ｄ．ｓａｌｉｎａを培養する方法としては、培地は一般的な好塩性緑藻類を培養する際に用いられるものであれば格別な制限はなく、例えば、Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ ｇｒｏｗｔｈ ｍｅｄｉｕｍ等の培地を用いることができる。 D. As a method for cultivating salina , there is no particular limitation as long as the medium can be used for culturing general halophilic green algae. For example, a medium such as Dunaliella salina growth medium can be used.
即ち、新鮮なろ過海水９９９ｍｌに対してＮａＣｌ ８７ｇ、ＫＮＯ３ ７６ｍｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ ８．７ｍｇ及びＮａＨＣＯ３ ４．２ｇを添加した溶液に、ＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ２００ｍｇ／ｌ、Ｚｎ Ｃｌ２ １００ｍｇ／ｌ、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ２００ｍｇ／ｌ、ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ ６００ｍｇ／ｌ、ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ ４００ｍｇ／ｌ、（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４・４Ｈ２Ｏ １．２ｇ／ｌ及びＥＤＴＡ２Ｎａ・２Ｈ２Ｏ ２．２ｇ／ｌからなる微量元素混合溶液１ｍｌを添加することにより培地を調製した。 That is, to a solution obtained by adding 87 g of NaCl, 76 mg of KNO 3 , 8.7 mg of K 2 HPO 4 and 4.2 g of NaHCO 3 to 999 ml of fresh filtered seawater, CuCl 2 .2H 2 O 200 mg / l, Zn Cl 2 100 mg / L, CoCl 2 · 6H 2 O 200 mg / l, MnCl 2 · 4H 2 O 600 mg / l, FeCl 3 · 6H 2 O 400 mg / l, (NH 4 ) 6Mo 7 O 24 · 4H 2 O 1.2 g / l The medium was prepared by adding 1 ml of a trace element mixed solution consisting of 2.2 g / l of EDTA 2 Na · 2H 2 O.
培養は、Ｄ．ｓａｌｉｎａの細胞数が１−２×１０３ ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるように培地に接種し、２リットル容のガラス扁平フラスコを用いて行なった。培養期間は７−１４日間が適当であり、培養は空気を適当な通気手段により導入する好気的条件下（炭酸ガス供給は０％〜１０％）にかつ蛍光灯や太陽光を光源として照度を３０００ ｌｕｘ〜１５００００ ｌｕｘに設定し、連続光照射（２４時間明）から８時間明／１６時間暗にて行なうのが望ましい。培養温度は１５−４０℃であり、３０℃付近が望ましい。 The culture is performed as follows . The medium was inoculated so that the number of salina cells was 1-2 × 10 3 cells / ml, and this was carried out using a 2-liter glass flat flask. The culture period is suitably 7-14 days, and the culture is performed under aerobic conditions (carbon dioxide supply is 0% to 10%) in which air is introduced by an appropriate ventilation means, and fluorescent light or sunlight is used as the light source. Is set to 3000 lux to 150,000 lux, and it is desirable to carry out at 8 hours light / 16 hours from continuous light irradiation (24 hours light). The culture temperature is 15-40 ° C, preferably around 30 ° C.
培養した微細藻（藻体）を常法により収集した後、例えば、遠心分離等によりデュナリエラ藻体と培養液とを分離し、得られたペーストを凍結乾燥して、デュナリエラ藻体乾燥粉末を得ることができる。 After collecting the cultured microalgae (algae) by a conventional method, the Dunaliella alga bodies and the culture solution are separated by, for example, centrifugation, etc., and the obtained paste is freeze-dried to obtain Dunaliella alga bodies dry powder be able to.
本発明においては、水溶性抗酸化物質として、このようにして得られた微細藻をそのまま用いても良いが、例えば、微細藻から抽出した抽出物等を用いるのが良い。 In the present invention, the microalgae thus obtained may be used as it is as the water-soluble antioxidant substance, but for example, an extract extracted from the microalgae may be used.
このようなデュナリエラ等の微細藻から抽出物を抽出する方法としては、常法により抽出することができるが、例えば、容器内にデュナリエラの微細藻と蒸留水とを収納して懸濁させ、必要により攪拌や超音波処理をしながら、時間は約１０〜１２０分間、好ましくは約２０〜４０分間、温度は約０〜３０℃、好ましくは約０〜１５℃にしてデュナリエラ等の水抽出物を抽出する。 As a method for extracting an extract from such microalgae such as Dunaliella, extraction can be performed by a conventional method. For example, Dunaliella's microalgae and distilled water are stored in a container and suspended. The water extract such as Dunaliella is set at about 10 to 120 minutes, preferably about 20 to 40 minutes, and the temperature is about 0 to 30 ° C., preferably about 0 to 15 ° C. Extract.
このデュナリエラ等の微細藻から水抽出物を抽出する際の蒸留水中におけるデュナリエラの微細藻の濃度としては、例えば、約５重量％〜５０重量％程度の濃度であれば良く、約５重量％〜１５重量％程度の濃度にすることが好ましい。この理由としては、抽出時のデュナリエラの藻体（粉末を含む）の濃度は特に臨界的ではないが、濃度が高すぎるとデュナリエラ水抽出物の回収率が悪くなり、また濃度が低過ぎると抽出液中の有効成分（水溶性抗酸化物質）の濃度が低くなり、抽出液からの有効成分の回収のためのコストが高くなるからである。 The concentration of Dunaliella microalgae in distilled water when extracting the water extract from the microalgae such as Dunaliella is about 5 wt% to 50 wt%, for example, about 5 wt% to The concentration is preferably about 15% by weight. The reason for this is that the concentration of Dunaliella alga bodies (including powder) at the time of extraction is not particularly critical, but if the concentration is too high, the recovery rate of Dunaliella water extract will be poor, and if the concentration is too low, it will be extracted This is because the concentration of the active ingredient (water-soluble antioxidant substance) in the liquid is lowered, and the cost for recovering the active ingredient from the extract is increased.
この抽出液からデュナリエラの水抽出物を得る方法としては、常法により得ることができるが、例えば、前記抽出液を遠心分離後、その上澄み液をとり、該上澄み液をフィルターを用いて濾過することによりデュナリエラの藻体と抽出液とを分離した後、これを凍結乾燥して前記抽出液からデュナリエラ水抽出物を得るものである。また、前記フィルターにより濾過して分離された抽出液を濃縮して濃縮液にし、該濃縮液を乾燥させて乾燥したデュナリエラの水抽出物を得るようにしても良い。このような濃縮・乾燥する方法としては、常法により行うことができるが、例えば、減圧濃縮や、凍結乾燥や、噴霧乾燥等の方法により行なうことができる。 As a method for obtaining an aqueous extract of Dunaliella from this extract, it can be obtained by a conventional method. For example, after centrifuging the extract, the supernatant is taken, and the supernatant is filtered using a filter. Thus, the Dunaliella alga body and the extract are separated and then lyophilized to obtain the Dunaliella water extract from the extract. Alternatively, the extract separated by filtration through the filter may be concentrated to a concentrated solution, and the concentrated solution may be dried to obtain a dried Dunaliella water extract. Such a concentration / drying method can be carried out by a conventional method, and for example, can be carried out by a method such as concentration under reduced pressure, freeze-drying or spray drying.
このようにして得られたデュナリエラ水抽出物について、カラムクロマトグラフィーを用いて精製を行った。このカラムクロマトグラフィーにおいては、例えば、ＯＤＳ樹脂（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ）を充填した逆相カラムクロマトグラムと、陰イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ １×８）を充填したイオン交換クロマトグラムと、更には、高速液体クロマトグラフィー（ＯＤＳカラム）とにより精製を行い、ＷＳＴ−１法によるスーパーオキシドアニオン消去活性を指標として、２つの活性画分を得、これを所望により常法に従って、濃縮、凍結、および乾燥し、２種類の水溶性の抗酸化物質を得た。
The Dunaliella water extract thus obtained was purified using column chromatography. In this column chromatography, for example, a reverse phase column chromatogram packed with ODS resin (Chromatorex), an ion exchange chromatogram packed with an anion exchange resin (
このようにして得られたデュナリエラ水抽出物について、その性質を調べたところ、次のような性質を有していることが分かった。
（１）ＬＣ／ＭＳ分析の結果、分子量は２６８と２８３であった。
（２）ＮＭＲ分析の結果、これら分子量が２６８または２８３のいずれかである両物質ともに、ヒドロキシル基を多く含む糖の部分構造をもつと推定された。
（３）ニンヒドリン反応により、これら分子量が２６８または２８３のいずれかである両物質ともに、アミノ基を有しているものであった。
The properties of the Dunaliella water extract obtained as described above were examined and found to have the following properties.
(1) As a result of LC / MS analysis, the molecular weights were 268 and 283.
(2) As a result of NMR analysis, it was estimated that both substances having a molecular weight of either 268 or 283 have a sugar partial structure containing many hydroxyl groups.
(3) Due to the ninhydrin reaction, both of these substances having a molecular weight of either 268 or 283 had amino groups.
そして、デュナリエラ水抽出物から得られた分子量が２６８または２８３のいずれかの物質は、水溶性で抗酸化活性を有していることが分かった。つまり、これら分子量が２６８または２８３のいずれかであるデュナリエラ水抽出物に含まれていた両物質は、水溶性抗酸化物質であることが分かった。 And it turned out that the substance of molecular weight 268 or 283 obtained from the Dunaliella water extract is water-soluble and has antioxidant activity. That is, it was found that both substances contained in the Dunaliella water extract having a molecular weight of either 268 or 283 are water-soluble antioxidants.
このように、糖の部分構造にもつと共にアミノ基を有し、分子量が２６８または２８３のいずれかであるということに特定された水溶性抗酸化物質を使用する場合には、該水溶性抗酸化物質としてのより高い作用が得られるようになるのである。 Thus, when using a water-soluble antioxidant having a sugar partial structure, an amino group, and a molecular weight of either 268 or 283, the water-soluble antioxidant is used. A higher effect as a substance can be obtained.
本発明においては、例えば、デュナリエラの微細藻等から得られた水溶性抗酸化物質を養殖魚等の魚介類用の餌飼料に配合することによって、前記水溶性抗酸化物質が有効成分として作用し、この有効成分を含んだ前記魚介類用餌飼料を与えられた魚介類におけるストレスによる肉質悪化等を抑制・改善するという新知見によるものである。 In the present invention, for example, the water-soluble antioxidant substance acts as an active ingredient by blending a water-soluble antioxidant substance obtained from the microalga of Dunaliella into a feed for seafood such as cultured fish. This is due to a new finding that suppresses and improves the deterioration of meat quality due to stress in fish and shellfish fed with the fish and shellfish feed containing this active ingredient.
そして、魚介類用の餌飼料に水溶性抗酸化物質を配合させる場合には、餌飼料に水溶性抗酸化物質を配合させることは勿論だが、例えば、デュナリエラの微細藻等の藻体自体や、デュナリエラの微細藻等の抽出物等を餌飼料に含有させても良い。また、前記餌飼料にデュナリエラの藻体を含有させるような場合には、魚介類用餌飼料中におけるデュナリエラ藻体の含有量として、略０．０５重量部％〜１０重量部％程度の範囲であれば良いのである。 And when blending a water-soluble antioxidant in a feed for fish and shellfish, of course, for example, blending a water-soluble antioxidant in the feed, for example, algal bodies such as Dunaliella's microalgae, Extracts such as Dunaliella microalgae may be included in the feed. In addition, when the dietary feed contains Dunaliella alga bodies, the content of Dunaliella alga bodies in the fishery food feed is in the range of about 0.05 wt% to 10 wt%. It only has to be.
本発明を応用できる魚介類としては、例えば、ブリ、真鯛、ヒラメ、ハマチ、トラフグ、カンパチ、アジ、スギ、シマアジ、鯖、鱒、鮎、ウナギ、鯉、ギンザケ、車えびまたは鮑などが含まれる。 Examples of fish and shellfish to which the present invention can be applied include yellowtail, snapper, Japanese flounder, yellowtail, tiger puffer, amberjack, horse mackerel, cedar, striped horse mackerel, sea bream, sea bream, sea bream, eel, sea bream, coho salmon, prawn or sea bream .
本発明に言う魚介類用餌飼料とは、鰯、秋刀魚、アジ、鯖またはイカナゴ等の単独使用時に添加されるもの、および市販されている全ての魚介類用餌飼料に対して添加使用されるものを指す。 The seafood feed described in the present invention is added to salmon, swordfish, horse mackerel, sea bream, squid, etc. when used alone, and added to all commercially available seafood feeds. Refers to things.
そして、水溶性抗酸化物質を魚介類用の餌飼料に添加させる際の形態としては、顆粒状、粉末状、液体状、ペースト状等様々なものが挙げられる。さらに魚介類用餌飼料には、デュナリエラ属微細藻等から得られた水溶性抗酸化物質に加えて、例えば、ビタミン類、ミネラル類、オキアミエキス、粘結剤、防腐剤、色素類、強肝剤等の有用成分をそのまま使用目的に応じて配合することが可能である。 And as a form at the time of adding a water-soluble antioxidant substance to the feed for fishery products, various things, such as granular form, powder form, liquid form, and paste form, are mentioned. Furthermore, in addition to water-soluble antioxidants obtained from Dunaliella microalgae, for example, vitamins, minerals, krill extract, caking agents, preservatives, pigments, strong liver Useful components such as agents can be blended as they are depending on the purpose of use.
次に、具体的な実施例を用いて説明するが、本発明は以下の実施例になんら限定されるものではない。 Next, although it demonstrates using a specific Example, this invention is not limited to a following example at all.
［Ｄ．ｓａｌｉｎａの培養］
この実施例１において、Ｄ．ｓａｌｉｎａの培養としては、上記 Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ ｇｒｏｗｔｈ ｍｅｄｉｕｍを用いて、Ｄ．ｓａｌｉｎａの細胞数が約１×１０３ ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるように培地に接種し、２リットル容のガラス扁平フラスコを用いて行なった。２３℃で、炭酸ガス５％を含有する空気を通気し、蛍光灯（３５００ｌｕｘ）にて連続照射し、１０日間培養した。培養した藻体を遠心分離機（３０００回転１０分間）にて分離し、得られたペーストを凍結乾燥して、デュナリエラ藻体乾燥粉末を得た。
[ D. Salina culture]
In this Example 1, D.I. As the culture of salina , the above Dunaliella salina growth medium is used . The medium was inoculated so that the number of salina cells was about 1 × 10 3 cells / ml, and this was carried out using a 2-liter glass flat flask. At 23 ° C., air containing 5% carbon dioxide gas was aerated, continuously irradiated with a fluorescent lamp (3500 lux), and cultured for 10 days. The cultured algal bodies were separated with a centrifuge (3000 rpm for 10 minutes), and the obtained paste was freeze-dried to obtain Dunaliella algal body dry powder.
［試験飼料の作製］
この実施例１においては、ブリ用市販粉末飼料（ハマチモイストベースII）に水溶性抗酸化物質を含有させた上記培養デュナリエラ藻体乾燥粉末を０．１％および１％添加した魚介類用餌飼料を作製した。すなわち、粉末飼料９００ｇにデュナリエラ藻体乾燥粉末を１ｇまたは１０ｇを添加し、よく混合した後、魚油１００ｇと水４００ｍｌを加えてミンチ機でペレット状に成型した。使用時まで−２０℃の冷凍庫にて保存した。
[Production of test feed]
In this
［対照飼料］
前記実施例１と比較するための対照飼料として、前記実施例１と同様のブリ用市販粉末飼料に魚油１００ｇと水４００ｍｌを加えてミンチ機でペレット状に成型した。使用時まで−２０℃の冷凍庫にて保存した。
[Control feed]
As a control feed for comparison with Example 1, 100 g of fish oil and 400 ml of water were added to a commercial powdered feed for yellowtail similar to that of Example 1 and molded into pellets with a mincing machine. It preserve | saved in the -20 degreeC freezer until use.
［試験の条件］
以下の試験においては、体重約３００ｇの真鯛を８００Ｌ容水槽に１水槽あたり１５尾収容した。試験群は、前記対照飼料を与えた対照飼料群と、前記実施例１の水溶性抗酸化物質を含有させたデュナリエラ藻体乾燥粉末を０．１％添加した０．１％試験飼料群と、前記実施例１の水溶性抗酸化物質を含有させたデュナリエラ藻体乾燥粉末を１％添加した１％試験飼料群との３群とした。給餌は、日曜日を除く毎日、１日１回飽食給餌とした。２ヶ月飼育した後、色揚げ効果を判定しその後、ストレス負荷試験を行った。
[Test conditions]
In the following test, 15 fishes with a body weight of about 300 g were accommodated in an 800 L water tank per tank. Test group, the control feed group was given the control feed, and 0.1% test feed group Dunaliella alga dry powder was added 0.1% of which contains a water-soluble antioxidant of Example 1, was three groups of the 1% test feed group was added Dunaliella alga
［色揚げ効果試験］
この色揚げ効果試験においては、前記対照飼料群と、０．１％試験飼料群と、１％試験飼料群との３群について、それぞれ肉眼で体表面の色の濃淡を確認した。その結果、各群に差が認められなかったため、色彩色差計による測定はしなかった。本発明の魚介類用餌飼料には、色揚げ効果は認められなかった。
[Color frying effect test]
In this color frying effect test, the shade of the color of the body surface was confirmed with the naked eye for each of the control feed group, the 0.1% test feed group, and the 1% test feed group. As a result, no difference was observed in each group, so measurement with a color difference meter was not performed. In the feed for fish and shellfish of the present invention, no deepening effect was observed.
［慢性ストレス負荷試験（低水位ストレス）］
この慢性ストレス負荷試験においては、対照飼料群７尾と、０．１％試験飼料群８尾と、１％試験飼料群７尾とを用いて行った。それぞれが収容された水槽の水位を真鯛の背びれが完全に露出する７．２ｃｍまで下げ、かつ水槽の幅を３３ｃｍまで狭くして低水位高密度条件に設定した。その際、海水とエアレーションの供給は維持したので、飼育水の溶存酸素量は約５．７と十分な酸素量であった。この低水位高密度条件にしてから３０分放置した。
[Chronic stress load test (low water level stress)]
In this chronic stress load test, seven control feed groups, eight 0.1% test feed groups, and seven 1% test feed groups were used. The water level of the water tank in which each was housed was lowered to 7.2 cm at which the true dorsal fin was completely exposed, and the width of the water tank was narrowed to 33 cm to set the low water level and high density conditions. At that time, since the supply of seawater and aeration was maintained, the dissolved oxygen amount of the breeding water was about 5.7, which was a sufficient oxygen amount. This low water level and high density condition was allowed to stand for 30 minutes.
［急性ストレス負荷試験（空中露出ストレス）］
この急性ストレス負荷試験においては、前記対照飼料群と、０．１％試験飼料群と、１％試験飼料群との各試験群それぞれ３尾を用いて行った。これら各試験群について、暴れさせないようにしてそれぞれの魚を静かに１尾網で捕獲し、１分間空中で放置した。
[Acute stress load test (air exposure stress)]
In this acute stress load test, each test group of the control feed group, the 0.1% test feed group, and the 1% test feed group was used for three each. For each of these test groups, each fish was gently caught by one fish net without being ramped and left in the air for 1 minute.
［血液ならびに肝臓検査］
前記対照飼料群と、０．１％試験飼料群と、１％試験飼料群との各試験群３尾について、ストレス負荷なしで、採血すると共に、肝臓を摘出した。また、前記慢性ストレス負荷試験と急性ストレス負荷試験との各ストレスを負荷した魚についても、ストレス負荷後直ちに採血すると共に、肝臓を摘出した。採取した血液は、自動血液性状検査機（セルタックα）を用いて血液性状を調べた。肝臓については、ＴＢＡ値を測定した。
[Blood and liver tests]
Blood was collected and the liver was extracted from three test groups of the control feed group, the 0.1% test feed group, and the 1% test feed group without stress. In addition, for the fish loaded with each stress in the chronic stress load test and the acute stress load test, blood was collected immediately after the stress load and the liver was removed. The collected blood was examined for blood properties using an automatic blood property tester (Celtac α). For the liver, TBA values were measured.
［血液性状の測定結果］
前記血液性状を調べた測定結果を図１に示す。なお、図１においては、前記慢性ストレス負荷試験を行っていないもの（ストレス前）と、慢性ストレス負荷試験を行ったもの（低水位ストレス）と、急性ストレス負荷試験を行ったもの（空中露出ストレス直後）とに分類して示してある。
[Measurement results of blood properties]
The measurement results of examining the blood properties are shown in FIG. In addition, in FIG. 1, what did not perform the said chronic stress load test (before stress), what performed the chronic stress load test (low water level stress), and what performed the acute stress load test (air exposure stress) (Immediately after).
この図１から明らかなように、慢性ストレス負荷試験においては、対照飼料群ではヘマトクリット値が若干低下したが、０．１％試験飼料群と、１％試験飼料群とにおいては、ほとんど変動は認められなかった。また、急性ストレス負荷試験においては、３群ともヘマトクリット値が上昇したが、特に対照飼料群で大きな変動が認められた。 As is apparent from FIG. 1, in the chronic stress load test, the hematocrit value slightly decreased in the control feed group, but almost no change was observed in the 0.1% test feed group and the 1% test feed group. I couldn't. In the acute stress load test, the hematocrit value increased in all three groups, but a large variation was observed particularly in the control feed group.
この血液性状の結果より、本発明に係る魚介類用餌飼料を魚介類（真鯛）に与えることによって、ストレス負荷時における魚介類の血液性状の変動を抑制する作用が認められ、ストレスに対する耐性を高める効果が認められた。 From the results of this blood property, by giving the fish and shellfish (mackerel) according to the present invention a feed for fish and shellfish, the effect of suppressing fluctuations in the blood properties of the fish and shellfish during stress loading is recognized, and resistance to stress is exhibited. The effect of increasing was recognized.
［肝臓ＴＢＡ値の測定結果］
前記摘出した肝臓のＴＢＡ値を測定した結果を図２に示す。なお、図２（ａ）は、前記慢性ストレス負荷試験を行っていないもの（ストレス前）と、慢性ストレス負荷試験を行ったもの（ストレス後）とのＴＢＡ値を示し、図２（ｂ）は、急性ストレス負荷試験（空中露出ストレス）のＴＢＡ値を示してある。
[Measurement result of liver TBA value]
The result of measuring the TBA value of the extracted liver is shown in FIG. FIG. 2 (a) shows TBA values of those not subjected to the chronic stress load test (before stress) and those subjected to the chronic stress load test (after stress), and FIG. The TBA value of the acute stress load test (air exposure stress) is shown.
この図２（ａ）から明らかなように、慢性ストレス負荷試験において、ＴＢＡ値の上昇が認められた。しかし、その上昇度合いは、対照飼料群でもっとも大きく、次に０．１％試験飼料群、１％試験飼料群であった。特に、１％試験飼料群においては、ストレス負荷しない場合とほとんど変わりはなかった。また、図２（ｂ）から明らかなように、急性ストレス負荷試験においても同様の傾向が認められ、対照飼料群のＴＢＡ値が最も高く、０．１％試験飼料群、１％試験飼料群の順であった。１％試験飼料群のＴＢＡ値は、対照飼料群の約半分であった。 As apparent from FIG. 2 (a), an increase in the TBA value was observed in the chronic stress load test. However, the degree of increase was greatest in the control feed group, followed by the 0.1% test feed group and the 1% test feed group. In particular, in the 1% test feed group, there was almost no difference from when no stress was applied. Further, as is clear from FIG. 2 (b), the same tendency was observed in the acute stress load test, and the TBA value of the control feed group was the highest, with 0.1% test feed group and 1% test feed group. It was in order. The TBA value of the 1% test feed group was approximately half that of the control feed group.
この肝臓ＴＢＡ値の測定結果より、本発明に係る魚介類用餌飼料を魚介類（真鯛）に与えることによって、ストレス負荷時における魚介類のＴＢＡ値の変動を抑制する作用が認められ、ストレスに対する耐性を高める効果が認められた。 From the measurement result of this liver TBA value, by giving the fish and shellfish food feed according to the present invention to the fish and shellfish (red snapper), the action of suppressing the fluctuation of the TBA value of the fish and shellfish at the time of stress load is recognized. The effect of increasing tolerance was observed.
これら血液性状と肝臓ＴＢＡ値との測定結果より、活魚輸送時等において魚介類に対してストレス負荷が生じたとしても、該ストレス負荷に対して前記魚介類の性状の変化が抑制されることから、肉質悪化を抑制・改善できるようになる。 From the measurement results of these blood properties and liver TBA values, even if a stress load occurs on fish and shellfish during transport of live fish, changes in the properties of the fish and shellfish are suppressed with respect to the stress load. It will be possible to suppress and improve the deterioration of meat quality.
（デュナリエラ水溶性抗酸化物質の調製）
前記デュナリエラを粉末にしたデュナリエラ藻体乾燥粉末から水溶性抗酸化物質を調製した。デュナリエラ藻体乾燥粉末４０ｇに水３６０ｍｌ（ミリリットル）を添加し、室温で２０分間攪拌した。その後、氷冷下で３分間超音波処理をし、遠心分離（２０００ｒｐｍで３０分した後、更に１５０００ｒｐｍで３０分）を行ない、得られた上清をさらにシリンジフィルター（アドバンテック東洋社製、０．８μｍ）でろ過してデュナリエラ水抽出物を得た。このデュナリエラ水抽出物２００ｍｌをＯＤＳ樹脂（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ）を充填したカラムクロマトグラフィーを実施した。溶出された非吸着画分と２Ｌ（リットル）の水で溶出した画分を併せて画分１とした。
(Preparation of Dunaliella water-soluble antioxidants)
A water-soluble antioxidant substance was prepared from Dunaliella alga body dry powder obtained by powdering Dunaliella. 360 ml (milliliter) of water was added to 40 g of Dunaliella alga body dry powder and stirred at room temperature for 20 minutes. Then, it was sonicated for 3 minutes under ice-cooling, centrifuged (after 30 minutes at 2000 rpm, and further 30 minutes at 15000 rpm), and the resulting supernatant was further treated with a syringe filter (Advantech Toyo Co., Ltd., 0. 8 [mu] m) to obtain a Dunaliella water extract. Column chromatography was performed by filling 200 ml of this Dunaliella water extract with ODS resin (Chromatorex). The eluted non-adsorbed fraction and the fraction eluted with 2 L (liter) of water were combined as
次に、５０％メタノール溶液２Ｌを用いて溶出し、画分２を得た。これら画分１と画分２との各画分を濃縮乾固後、水２００ｍｌに溶解させた。各画分それぞれ、陰イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ １Ｘ８）を充填したカラムクロマトグラフィーを実施した。溶出された非吸着画分と１．２Ｌの水で溶出した画分を合わせて中性・酸性画分を得た。
Next, elution was performed using 2 L of a 50% methanol solution to obtain
この得られた中性・酸性画分について再度ＯＤＳ樹脂（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ）を充填したカラムクロマトグラフィーを実施した。５０％メタノール溶液で溶出した画分を得た。この画分の８０ｍｌを８ｍｌまで濃縮乾固し、ＨＰＬＣ（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ Ｐａｃｋｅｄ Ｃｏｌｕｍｎ ５Ｃ１８カラム）で精製を行なった。１回のアプライ量を４００μｌとし、２０回実施した。溶出順序の６番目と８番目の画分を得た。 The obtained neutral / acid fraction was again subjected to column chromatography packed with ODS resin (Chromatorex). A fraction eluted with 50% methanol solution was obtained. 80 ml of this fraction was concentrated to dryness to 8 ml and purified by HPLC (Cosmosil Packed Column 5C18 column). The amount of one application was set to 400 μl, and the operation was performed 20 times. Fifth and eighth fractions of elution order were obtained.
（飼料の作製）
この実施例２においては、ブリ用市販粉末飼料（ハマチモイストベースII）に上記デュナリエラ水溶性抗酸化物質、即ち、糖の部分構造にもつと共にアミノ基を有し、分子量が２６８または２８３のいずれかである水溶性抗酸化物質を添加して魚介類用餌飼料を作製した。
(Food preparation)
In this Example 2, the commercial powdered feed for yellowtail (Hamachi Moist Base II) has the above-mentioned Dunaliella water-soluble antioxidant substance, ie, a sugar partial structure and an amino group, and has a molecular weight of either 268 or 283. A feed for fish and shellfish was prepared by adding a water-soluble antioxidant.
Claims (2)
を特徴とする魚介類餌飼料。 A feed for seafood characterized by containing, as an active ingredient, a water-soluble antioxidant substance extracted from distilled powder of Dunaliella algae, which is a microalga belonging to the genus Dunaliella belonging to the genus Dunaliella of the green alga net .
分子量が２６８または２８３のいずれかであって、糖の部分構造をもつと共にアミノ基を有すること
を特徴とする請求項１に記載の魚介類餌飼料。 A water-soluble antioxidant substance extracted from the Dunaliella alga body dry powder using distilled water ,
2. The fish and shellfish bait according to claim 1, having a molecular weight of either 268 or 283, having a sugar partial structure and an amino group.
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