JP5086045B2

JP5086045B2 - Filter filtration system and inner diameter adjuster

Info

Publication number: JP5086045B2
Application number: JP2007313332A
Authority: JP
Inventors: 靖朗本山; 真実松本
Original assignee: Asahi Group Holdings Ltd
Current assignee: Asahi Group Holdings Ltd
Priority date: 2007-12-04
Filing date: 2007-12-04
Publication date: 2012-11-28
Anticipated expiration: 2027-12-04
Also published as: JP2009139127A

Description

本発明は、フィルター上に捕集した微生物を染色して検出するに際し、フィルターの染色ノイズ発生を抑制可能なフィルターろ過システム、該ろ過システムに使用する、ろ過面の面積を変更可能な調整具、及びこれらフィルターろ過システム又は調整具の使用に好適な微生物の検出方法に関する。 The present invention is a filter filtration system capable of suppressing the generation of staining noise of a filter when staining and detecting microorganisms collected on a filter, and an adjustment tool capable of changing the area of a filtration surface used in the filtration system, The present invention also relates to a method for detecting microorganisms suitable for use in these filter filtration systems or regulators.

液体サンプル中に含有される微生物の検出は、飲食品の品質検査や、生化学分野の各種試験において種々汎用されている技術である。
そして、微生物の検出方法としては、従来、例えば、図１０に示すようなフィルターろ過装置を使用して、フィルター上に微生物を補修し、これを染色して検出する方法が汎用されている。
より具体的には、ファンネル７、フィルター８及びベース９を使用してろ過装置を組み立て、まず液体サンプルをファンネル７に供給してろ過し、フィルター上に微生物を捕集する。次いで、染色液をファンネル７に供給してろ過し、フィルター上に捕集された微生物を染色する。次いで、洗浄液をファンネル７に供給してろ過し、フィルターを洗浄して、微生物の染色以外でフィルター上に残留している余剰の染色液を極力除去する。これにより、フィルター上の染料を光学的に検出することで、所望の微生物を検出できることになる。 Detection of microorganisms contained in a liquid sample is a technique that is widely used in quality inspections of foods and beverages and various tests in the biochemical field.
As a method for detecting microorganisms, conventionally, for example, a method of repairing microorganisms on a filter using a filter filtration device as shown in FIG.
More specifically, a filtration device is assembled using the funnel 7, the filter 8 and the base 9, and first, a liquid sample is supplied to the funnel 7 and filtered to collect microorganisms on the filter. Next, the staining solution is supplied to the funnel 7 and filtered to stain the microorganisms collected on the filter. Next, the cleaning liquid is supplied to the funnel 7 and filtered, and the filter is washed to remove as much as possible the excess staining liquid remaining on the filter other than the staining of microorganisms. Thereby, a desired microorganism can be detected by optically detecting the dye on the filter.

しかし実際には、染色液をろ過した際に、ファンネル７のリム押さえ部７２とフィルター８の上面との間、並びにフィルター８の下面とベース９との間に、染色液が滲み出すことがある。これは、リム押さえ部７２とフィルター８の上面、並びにフィルター８の下面とベース９とを、それぞれ完全に密着させることが困難であり、微細な空隙部が生じることがあるからである。空隙部が生じると、例えば毛細管現象等により、染色液が滲み出してしまうのである。これは、例えば、ファンネル７、フィルター８及びベース９を、クランプ等を使用して一体に固定してろ過装置を組み立てた場合でも、これらの材質の組み合わせによっては、避けることができない。なお、図１０においては、染色液の滲み出しを説明するために、染色液を強調して図示している。
一旦空隙部に染色液が滲み出してしまうと、洗浄液をろ過しても、滲み出した染色液を十分に洗浄して除去することができず、フィルター上に染色ノイズが発生してしまう。すると、染料の検出時に、微生物を染色している染料と染色ノイズとを区別できなくなり、Ｓ／Ｎ比が低下して、微生物を高精度に検出できないという問題点があった。 However, in actuality, when the staining solution is filtered, the staining solution may ooze between the rim pressing portion 72 of the funnel 7 and the upper surface of the filter 8 and between the lower surface of the filter 8 and the base 9. . This is because it is difficult to completely bring the rim pressing portion 72 and the upper surface of the filter 8 and the lower surface of the filter 8 and the base 9 into close contact with each other, and a fine gap portion may be generated. When the void portion is generated, the staining liquid oozes out due to, for example, a capillary phenomenon. This is unavoidable depending on the combination of these materials, for example, even when the funnel 7, the filter 8 and the base 9 are fixed together using a clamp or the like to assemble the filtration device. Note that, in FIG. 10, the staining solution is emphasized in order to explain the bleeding of the staining solution.
Once the staining liquid oozes out into the gap, even if the cleaning liquid is filtered, the exuded staining liquid cannot be sufficiently washed and removed, and staining noise is generated on the filter. Then, at the time of detecting the dye, it becomes impossible to distinguish the dye that stains the microorganism from the staining noise, and there is a problem that the S / N ratio is lowered and the microorganism cannot be detected with high accuracy.

そこで、この問題点を解決する手法として、微生物を捕集したフィルターをろ過装置から外し、染色液を染み込ませた染色パッドの上に載置して、所定箇所を染色し、洗浄液で余剰の染色液を除去する微生物の検出方法が提案されている（非特許文献１参照）。この方法によれば、余剰の染色液はフィルター上に残留し難いため、洗浄操作は重要ではなく、洗浄操作を省いても、フィルター上に染色ノイズはほとんど発生しない。
ＣｈｅｍＳｃａｎＲＤＩ取扱説明書、グンゼ産業株式会社 Therefore, as a technique to solve this problem, remove the filter that has collected the microorganisms from the filtration device, place it on the staining pad soaked with the staining solution, stain a predetermined location, and then use the washing solution to stain the excess. A method for detecting a microorganism that removes the liquid has been proposed (see Non-Patent Document 1). According to this method, since the excess staining solution hardly remains on the filter, the cleaning operation is not important, and even if the cleaning operation is omitted, staining noise hardly occurs on the filter.
ChemScan RDI Instruction Manual, Gunze Sangyo Co., Ltd.

しかし、染色パッドを使用する上記方法は、微生物の染色効率が著しく低く、染色に長時間を要するだけでなく、フィルター上のすべての微生物を染色できないことがあり、微生物の検出感度および検出精度が著しく低いという問題点があった。また、操作が煩雑であり、微生物の検出効率が低いという問題点があった。 However, the above-mentioned method using a staining pad has a very low staining efficiency of microorganisms and not only takes a long time for staining, but also may not stain all the microorganisms on the filter. There was a problem that it was extremely low. In addition, the operation is complicated and the detection efficiency of microorganisms is low.

本発明は上記事情に鑑みて為されたものであり、液体サンプル中の微生物をフィルター上に捕集及び染色して検出するに際し、染色ノイズの発生を抑制し、高い感度及び精度で簡便に検出できる微生物の検出方法、該検出方法で使用するフィルターろ過システムを提供することを課題とする。 The present invention has been made in view of the above circumstances, and when detecting microorganisms in a liquid sample by collecting and staining on a filter, the generation of staining noise is suppressed, and detection is easily performed with high sensitivity and accuracy. It is an object of the present invention to provide a method for detecting microorganisms that can be produced and a filter filtration system used in the detection method.

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、洗浄液をろ過する時のフィルター上のろ過面を、微生物を含有する液体サンプル及び染色液をろ過する時のフィルター上のろ過面を包含するように拡大して、洗浄液をろ過することで、染色ノイズの発生を抑制でき、このようなろ過面の拡大は、特にリング状の調整具を別途使用することで容易に達成できることを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the inventors have obtained a filtration surface on the filter when filtering the washing liquid, a filtration surface on the filter when filtering the liquid sample containing microorganisms and the staining liquid, and the like. By enlarging the filter so as to include it and filtering the cleaning liquid, it is possible to suppress the generation of staining noise, and it has been found that such an expansion of the filtration surface can be easily achieved especially by using a separate ring-shaped adjustment tool. The present invention has been completed.

すなわち、本発明は、液体をフィルターに供給する供給口を有するファンネルと、前記フィルターによる前記液体のろ過で得られたろ過液を集液するベースと、前記ファンネルの供給口内径よりも小さい内径を有し、かつ前記フィルター上のろ過面積を変更可能なリング状又は筒状の内径調整具と、を備えることを特徴とするフィルターろ過システムを提供する。
本発明のフィルターろ過システにおいては、微生物を含有する液体サンプル、該微生物を染色する染色液、該染色液を洗浄する洗浄液を順次ろ過するために用いられ、前記内径調整具により、前記洗浄液のろ過面が、前記液体サンプル及び前記染色液のろ過面を包含するように、これらろ過面よりも拡大させることが好ましい。
また、本発明は、上記本発明のフィルターろ過システムに備えられるリング状又は筒状の内径調整具であって、内径が、前記ファンネルの供給口内径の１２〜８８％であることを特徴とする内径調整具を提供する。
本発明の内径調整具がリング状である場合には、前記フィルターろ過システムに挿入した状態よりも取り外した状態のほうが、前記フィルター上のろ過面が拡大することが好ましい。
また、本発明の内径調整具が筒状である場合には、その開口端を前記フィルターに密着させて配置した状態よりも、前記開口端を前記フィルターから離間させた状態のほうが、前記フィルター上のろ過面が拡大することが好ましい。 That is, the present invention has a funnel having a supply port for supplying liquid to a filter, a base for collecting the filtrate obtained by filtering the liquid through the filter, and an inner diameter smaller than the inner diameter of the supply port of the funnel. Yes and, and to provide a filtration system characterized in that it comprises a ring-shaped or cylindrical inner diameter adjuster capable of changing a filter area on the filter.
In the filter filtration system of the present invention, a liquid sample containing microorganisms, a staining liquid for staining the microorganisms, and a cleaning liquid for washing the staining liquid are used for sequential filtration, and the cleaning liquid is filtered by the inner diameter adjuster. It is preferable that the surface is larger than these filtration surfaces so as to include the filtration surfaces of the liquid sample and the staining liquid .
Further, the present invention is a ring-shaped or cylindrical inner diameter adjuster provided in the filter filtration system of the present invention, wherein the inner diameter is 12 to 88% of the inner diameter of the supply port of the funnel. An inner diameter adjuster is provided.
When the inner diameter adjuster of the present invention is ring-shaped, it is preferable that the filtration surface on the filter is enlarged in the removed state than in the state inserted in the filter filtration system.
In addition, when the inner diameter adjuster of the present invention is cylindrical, the state in which the open end is spaced from the filter is better than the state in which the open end is disposed in close contact with the filter. It is preferable to enlarge the filtration surface.

本発明によれば、液体サンプル中の微生物をフィルター上に捕集及び染色して検出するに際し、染色ノイズの発生を抑制し、高い感度及び精度で簡便に検出できる。 According to the present invention, when detecting microorganisms in a liquid sample by collecting and staining on a filter, generation of staining noise can be suppressed, and detection can be easily performed with high sensitivity and accuracy.

以下、図面を参照しながら、本発明について詳しく説明する。
＜フィルターろ過システム及び内径調整具＞
まず、本発明に係るフィルターろ過システム及び内径調整具について説明する。
図１は、本発明に係るフィルターろ過システムを例示する概略構成図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は（ａ）のＢ−Ｂ線における断面図である。
ここに例示するフィルターろ過システムは、フィルター４に液体を供給するファンネル１と、液体をフィルター４でろ過して得られたろ過液を集液するベース３と、ファンネル１とフィルター４との間に挿入される内径調整具（以下、調整具と略記することがある）２とを備える。そして、ファンネル１、調整具２、フィルター４及びベース３は、この順で通常はほぼ同心状に組み立てられる。これらを組み立てる際は、周知のろ過装置と同様にクランプを使用して固定すると良い。 Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the drawings.
<Filter filtration system and inner diameter adjuster>
First, a filter filtration system and an inner diameter adjuster according to the present invention will be described.
FIG. 1 is a schematic configuration diagram illustrating a filter filtration system according to the present invention, where (a) is a perspective view and (b) is a cross-sectional view taken along line BB of (a).
The filter filtration system illustrated here includes a funnel 1 that supplies liquid to the filter 4, a base 3 that collects a filtrate obtained by filtering the liquid through the filter 4, and a funnel 1 and a filter 4. An inner diameter adjuster (hereinafter sometimes abbreviated as an adjuster) 2 is provided. The funnel 1, the adjustment tool 2, the filter 4 and the base 3 are normally assembled in this order substantially concentrically. When assembling these, it is good to fix using a clamp like a well-known filtration apparatus.

ろ過に供する液体サンプル中の微生物は、フィルターで捕集可能なあらゆるものが対象となる。
そして、フィルター４は、ろ過による微生物の捕集に使用されるものであればいずれでも良く、種々の市販品等から目的に応じて適宜選択できる。また、所定のポアサイズを有するポリカーボネイト、ポリエステルなどの樹脂製シートや、これらシート表面を金属などでコーティングしたもの（例えば、国際公開第２００６／０４９２００号パンフレット参照）を使用しても良い。 The microorganisms in the liquid sample to be filtered are all those that can be collected by the filter.
The filter 4 may be any filter as long as it is used for collecting microorganisms by filtration, and can be appropriately selected from various commercially available products according to the purpose. Also, resin sheets such as polycarbonate and polyester having a predetermined pore size, or those obtained by coating the sheet surface with metal or the like (see, for example, International Publication No. 2006/049200 pamphlet) may be used.

ファンネル１は、フィルター４へ液体を供給する、内径ｄ_１の供給口１１を有する。そして、該供給口１１の開口端は、ベース３との間で、調整具２やフィルター４を挟持するリム押さえ部１２となっている。
ｄ_１は、調整具２の内径ｄ_２よりも大きければ、その値は特に限定されないが、微生物の検出に使用することを考慮すると、通常は５０ｍｍ以下であることが好ましく、３０ｍｍ以下であることがより好ましく、１０〜２５ｍｍであることが特に好ましく、１２〜２０ｍｍであることが最も好ましい。
ファンネル１は、上記の点を除けば、その他の形態および材質については通常のファンネルと同様のもので良く、市販品を使用しても良い。例えば、材質であれば、好ましいものとしてガラス、ステンレス及び各種樹脂類が例示できる。 The funnel 1 has a supply port 11 having an inner diameter d ₁ for supplying a liquid to the filter 4. The opening end of the supply port 11 serves as a rim pressing portion 12 that sandwiches the adjustment tool 2 and the filter 4 with the base 3.
The value of d ₁ is not particularly limited as long as it is larger than the inner diameter d ₂ of the adjustment tool 2, but considering that it is used for detecting microorganisms, it is usually preferably 50 mm or less, and 30 mm or less. Is more preferably 10 to 25 mm, and most preferably 12 to 20 mm.
Except for the above points, the funnel 1 may have the same configuration and material as those of a normal funnel, and a commercially available product may be used. For example, if it is a material, glass, stainless steel, and various resin can be illustrated as a preferable thing.

調整具２はリング状であり、ファンネル１とフィルター４との間に挿入及び挟持され、フィルターろ過時には、ファンネル１の供給口１１からフィルター４へ前記液体サンプルや染色液を通液させるものである。より具体的には、調整具２は、その上部のリム押さえ部１２との接触部及び下部のフィルター４との接触部が平坦に形成され、リム押さえ部１２及びフィルター４と密着可能とされている。 The adjustment tool 2 has a ring shape, and is inserted and sandwiched between the funnel 1 and the filter 4, and at the time of filter filtration, the liquid sample and the staining solution are passed from the supply port 11 of the funnel 1 to the filter 4. . More specifically, the adjustment tool 2 has a flat contact portion with the upper rim pressing portion 12 and a lower contact portion with the filter 4 so that the adjustment tool 2 can be in close contact with the rim pressing portion 12 and the filter 4. Yes.

調整具２の内径ｄ_２は、ｄ_１よりも小さければ良いが、通常はｄ_１の１２〜８８％であることが好ましく、４０〜８５％であることがより好ましく、６０〜８０％であることが特に好ましい。このような範囲とすることで、後記する染色ノイズを除去する高い効果が得られるだけでなく、ろ過面を必要以上に小さくすることがないので、液体サンプルや染色液を短時間でろ過できる。
調整具２の外径Ｄ_２は、ｄ_１及びベースの内径ｄ_３よりも大きければ良く、この範囲内において任意に選択できる。
調整具２の厚みＴ_２は、特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜選択し得るが、取り扱い易さを考慮すると、通常は１〜１０ｍｍであることが好ましい。 The inner diameter _{d 2} of the adjusting device 2 may be smaller than _{d 1,} and more preferably, 60% to 80% to be and the temperature is usually preferably from 12 to 88% of _{d 1,} 40 to 85% It is particularly preferred. By setting it as such a range, not only the high effect which removes the dyeing noise mentioned later is acquired, but since a filtration surface is not made smaller than necessary, a liquid sample and a dyeing liquid can be filtered in a short time.
Outer diameter D ₂ of the adjusting device 2 may be larger than d ₁ and the base of the inner diameter d _3, it can be arbitrarily selected within this range.
The thickness T ₂ of the adjusting device 2 is not limited particularly, but may be suitably selected according to the purpose, in view of the ease of handling, it is usually preferable is 1 to 10 mm.

調整具２の材質は、液体サンプルや染色液を吸収し易かったり、これらを変質させたりするなど、ろ過に支障をきたさないものであれば特に限定されず、具体的には、金属類、合金類、樹脂類が例示でき、これらの中から目的に応じて適宜選択すれば良い。例えば、ファンネル１及びフィルター４との密着度を一層向上させ、液体サンプルや染色液の滲み出し抑制効果を一層高めるという観点からは、樹脂類などの弾力性を有するものが好ましい。また、耐久性という観点からは、耐食性を有するものが好ましく、例えば、合金類であればステンレス、樹脂類であれば、ポリテトラフルオロエチレン等の各種フッ素樹脂が好適である。あるいは、これら弾力性又は耐食性を有するもので任意の材質を被覆しても良い。その他、複数種類の材質の複合体でも良く、好ましいものとして、ステンレスと樹脂を貼り合せたものが例示できる。この場合、ステンレス面はリム押さえ部１２と接触するように、樹脂面はフィルター４と接触するように配置すれば、より効果的である。 The material of the adjuster 2 is not particularly limited as long as it does not interfere with filtration, such as easily absorbing a liquid sample or staining solution, or changing the quality thereof. Specifically, metals, alloys And resins can be illustrated and can be appropriately selected from these according to the purpose. For example, from the viewpoint of further improving the degree of adhesion between the funnel 1 and the filter 4 and further enhancing the effect of suppressing the seepage of the liquid sample and the staining liquid, those having elasticity such as resins are preferable. Further, from the viewpoint of durability, those having corrosion resistance are preferable. For example, stainless steel is used for alloys, and various fluororesins such as polytetrafluoroethylene are preferable for resins. Or you may coat | cover arbitrary materials with what has these elasticity or corrosion resistance. In addition, a composite of a plurality of types of materials may be used, and a preferable example is a laminate of stainless steel and resin. In this case, it is more effective if the stainless steel surface is arranged so as to be in contact with the rim pressing portion 12 and the resin surface is arranged so as to be in contact with the filter 4.

ベース３は、フィルター４による液体のろ過で得られたろ過液を集液するものである。
ベース３の内径ｄ_３は、ろ過時にろ過液が漏出しない範囲であれば特に限定されないが、ｄ_２よりも大きいことが好ましく、ｄ_１と同等以上であることがより好ましい。このようにすることで、短時間でろ過できるだけでなく、後記するように、ろ過液導入側の開口端部３２とフィルター４との密着面への、染色液の滲出が一層確実に抑制できる。
ベース３は、上記の点を除けば、その他の形態および材質については通常のベースと同様のもので良い。例えば、材質であれば、ファンネル１と同様のものが例示できる。そして、例えば、図１に示すように、フィルター４を安定して保持できる点から、開口端部３２内側に焼結ガラス板３１を備えたものが好適である。 The base 3 collects the filtrate obtained by filtering the liquid with the filter 4.
The inner diameter d ₃ of the base 3 is filtrate during the filtration is not particularly limited as long as it does not leak, it is preferably greater than d _2, and more preferably d ₁ equal to or more. By doing in this way, not only can it filter in a short time, but it can suppress more reliably the exudation of a dyeing liquid to the contact surface of the opening end part 32 and the filter 4 by the side of a filtrate introduction so that it may mention later.
Except for the above points, the base 3 may be the same as the normal base in other forms and materials. For example, if it is a material, the thing similar to the funnel 1 can be illustrated. For example, as shown in FIG. 1, one having a sintered glass plate 31 inside the opening end 32 is preferable from the viewpoint that the filter 4 can be stably held.

本発明の調整具は、図１に示すものに限定されず、本発明の効果を損なわない範囲内において、種々の実施形態とすることができる。
図２は、本発明に係る調整具の他の実施形態を例示する斜視図である。
本実施形態に係る調整具２’は、外径Ｄ_２’のリングの径方向外側周縁部より高さＨ_２２’、厚みＴ_２２’の側壁２２’が立設されており、これ以外の点は、図１に示す調整具２と同様である。
調整具２’おいて、Ｄ_２’−２Ｔ_２２’の値は、リム押さえ部１２の最大径よりも小さく、リング上面２３’にリム押さえ部１２の下部を密着できるようになっている。外径Ｄ_２’及び厚みＴ_２２’は、このような条件を満たし、かつＤ_２’−２Ｔ_２２’の値が調整具２の外径Ｄ_２と同様となるように適宜調整すれば良い。
Ｈ_２２’は特に限定されないが、取り扱い易さを考慮すると、通常は１〜２０ｍｍであることが好ましい。
このように側壁２２’が立設されていることにより、調整具２’をファンネル１とフィルター４との間に挿入して挟持した時に、側壁２２’がリム押さえ部１２に当接し、調整具２’の配置位置のずれが抑制される。 The adjustment tool of the present invention is not limited to the one shown in FIG. 1, and can be various embodiments within a range not impairing the effects of the present invention.
FIG. 2 is a perspective view illustrating another embodiment of the adjustment tool according to the present invention.
The adjustment tool 2 ′ according to the present embodiment has a side wall 22 ′ having a height H _{22 ′} and a thickness T _{22 ′} erected from the radially outer peripheral edge of the ring having an outer diameter D _{2 ′.} Is the same as the adjustment tool 2 shown in FIG.
In the adjuster 2 ′, the value of D _{2 ′} −2T _{22 ′} is smaller than the maximum diameter of the rim pressing portion 12 so that the lower portion of the rim pressing portion 12 can be in close contact with the ring upper surface 23 ′. The outer diameter D _{2 ′} and the thickness T _{22 ′} may be adjusted as appropriate so as to satisfy such conditions and the value of D _{2 ′} −2T _{22 ′} is the same as the outer diameter D ₂ of the adjusting tool 2.
H _{22 ′} is not particularly limited, but in consideration of ease of handling, it is usually preferably 1 to 20 mm.
Since the side wall 22 ′ is erected in this way, when the adjustment tool 2 ′ is inserted and clamped between the funnel 1 and the filter 4, the side wall 22 ′ comes into contact with the rim presser 12 and the adjustment tool The displacement of the 2 ′ arrangement position is suppressed.

図３は、本発明に係る調整具のさらに他の実施形態を例示する平面図である。
本実施形態に係る調整具５は、通液部５０及び取っ手部５１とからなり、該取っ手部５１をつまむことで、ろ過システムに対して挿入及び取り外しを容易に行えるように、取り扱い性を向上させたものである。
通液部５０は、図１に示す調整具２と同様であり、内径ｄ_５及び外径Ｄ_５のリング状である。
通液部５０の外周面５００上には、当該面上の一点を略中心とする、内径ｄ_５１及び外径Ｄ_５１の略半リング状である取っ手部５１が突設されている。
取っ手部５１の厚みは通液部５０の厚みと同等である。 FIG. 3 is a plan view illustrating still another embodiment of the adjustment tool according to the present invention.
The adjustment tool 5 according to the present embodiment includes a liquid passing part 50 and a handle part 51, and the handleability is improved by pinching the handle part 51 so that the filter system can be easily inserted and removed. It has been made.
Liquid passing portion 50 is similar to the adjustment equipment 2 shown in FIG. 1, a ring-shaped inner diameter d ₅ and the outer diameter D _5.
On the outer peripheral surface 500 of the liquid passing portion 50, and substantially centered on one point on the surface, the handle portion 51 is projected a substantially semi-ring-shaped inner diameter d ₅₁ and the outer diameter D _51.
The thickness of the handle part 51 is equivalent to the thickness of the liquid passing part 50.

通液部５０及び取っ手部５１のサイズは、目的に応じて適宜設定し得る。
例えば、取っ手部５１のサイズは指先やピンセットなどでつまみ易いように設定するのが良く、通液部の内径ｄ_５及び外径Ｄ_５が、前記ｄ_２及びＤ_２と同様である場合には、ｄ_５１は３〜１６ｍｍであることが好ましく、４〜１２ｍｍであることがより好ましく、５〜１０ｍｍであることが特に好ましい。また、Ｄ_５１はｄ_５１の大きさを考慮して設定すれば良く、通常ｄ_５１よりも３〜１０ｍｍ大きいことが好ましく、４〜６ｍｍ大きいことがより好ましい。 The sizes of the liquid passing part 50 and the handle part 51 can be appropriately set according to the purpose.
For example, the size of the handle portion 51 is preferably set so that it can be easily pinched with a fingertip or tweezers, and the inner diameter d ₅ and the outer diameter D _{5 of the} liquid passing portion are the same as the d ₂ and D ₂ described above. , D ₅₁ is preferably 3 to 16 mm, more preferably 4 to 12 mm, and particularly preferably 5 to 10 mm. Further, D ₅₁ may be set in consideration of the size of d ₅₁ , and is usually preferably 3 to 10 mm larger than d _{51 and} more preferably 4 to 6 mm larger.

本発明の取っ手部が設けられた調整具は、ここに示すものに限定されず、本発明の効果を損なわない範囲内において、種々の実施形態とすることができる。
例えば、図３において、取っ手部５１の厚みは通液部５０の厚みと異なっていても良いし、同じ厚みでもあっても、通液部５０と略同一平面内に設けられていなくても良い。具体的には、取っ手部５１表面が、通液部５０表面と直交するように、図３に示す位置から回転させられていても良いし、回転の角度は９０°以外でも良い。また、通液部５０との間に段差が形成されていても良い。 The adjusting tool provided with the handle portion of the present invention is not limited to the one shown here, and various embodiments can be made within a range not impairing the effects of the present invention.
For example, in FIG. 3, the thickness of the handle portion 51 may be different from the thickness of the liquid passing portion 50, may be the same thickness, or may not be provided in substantially the same plane as the liquid passing portion 50. . Specifically, the handle portion 51 surface may be rotated from the position shown in FIG. 3 so as to be orthogonal to the liquid passing portion 50 surface, and the rotation angle may be other than 90 °. Further, a step may be formed between the liquid passing part 50.

一方、調整具は、フィルターのろ過面と平行な面内において移動可能にファンネル又はベースと連結されていても良い。図４はこのような調整具を備えたフィルターろ過システムをフィルターと共に例示する概略構成図である。
図４に示すように、ファンネル１には固定部材２０が取り付けられ、該固定部材２０には、調整具２を支持するＬ字状の支持部材２１が連結部２１０を介して連結されている。より具体的には、連結部２１０は、その先端側の所定範囲が、固定部材２０に設けられた軸穴に挿通され、その長手方向を回転軸として固定部材２０に対して回転可能とされている。すなわち、調整具２は、前記連結部２１０を回転軸として回転し、フィルター４のろ過面と平行な面内において移動可能となっている。
本実施形態においては、調整具２が上記のように移動可能となっているので、ろ過システムに対する挿入及び取り外しが容易であり、取り扱い性が向上したものである。
なお、調整具２は、フィルター４のろ過面に対して並行に移動可能であれば良く、例えば、固定部材２０はベース３に取り付けられていても良いし、ファンネル１又はベース３に一体成形されていても良く、着脱可能に取り付けられていても良い。支持部材２１も連結部２１０を備えていればＬ字状のものに限定されない。支持部材２１の固定部材２０への連結方法、及び調整具２の支持方法は、周知の方法から適宜選択すれば良い。 On the other hand, the adjustment tool may be connected to the funnel or the base so as to be movable in a plane parallel to the filtration surface of the filter. FIG. 4 is a schematic configuration diagram illustrating a filter filtration system including such a regulator together with a filter.
As shown in FIG. 4, a fixing member 20 is attached to the funnel 1, and an L-shaped support member 21 that supports the adjustment tool 2 is connected to the fixing member 20 via a connecting portion 210. More specifically, the connecting portion 210 has a predetermined range on the distal end side inserted into a shaft hole provided in the fixing member 20, and is rotatable with respect to the fixing member 20 with the longitudinal direction as a rotation axis. Yes. That is, the adjustment tool 2 rotates about the connecting portion 210 as a rotation axis, and can move in a plane parallel to the filtration surface of the filter 4.
In this embodiment, since the adjustment tool 2 is movable as described above, insertion and removal from the filtration system are easy, and handling is improved.
Note that the adjustment tool 2 only needs to be movable in parallel to the filtration surface of the filter 4. For example, the fixing member 20 may be attached to the base 3, or may be integrally formed with the funnel 1 or the base 3. It may be attached and may be attached so that attachment or detachment is possible. The support member 21 is not limited to an L shape as long as it includes the connecting portion 210. The connection method of the support member 21 to the fixing member 20 and the support method of the adjustment tool 2 may be appropriately selected from known methods.

ここまでは、リング状の調整具について説明したが、筒状の調整具を使用することもできる。
図５は、本発明に係るフィルターろ過システムの他の実施形態を例示する概略構成図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は（ａ）のＡ−Ａ線における断面図、（ｃ）は調整具を（ｂ）の配置位置から移動させた時の断面図である。
本実施形態に係るフィルターろ過システムは、フィルター４に液体を供給するファンネル６１と、液体をフィルター４でろ過して得られたろ過液を集液するベース６３と、ファンネル６１内に挿入された調整具６２とを備える。そしてこれらは、通常はほぼ同心状に組み立てられ、組み立てにはクランプを使用できる。 Up to this point, the ring-shaped adjustment tool has been described, but a cylindrical adjustment tool can also be used.
FIG. 5: is a schematic block diagram which illustrates other embodiment of the filter system which concerns on this invention, (a) is a perspective view, (b) is sectional drawing in the AA of (a), (c) ) Is a cross-sectional view when the adjustment tool is moved from the arrangement position of (b).
The filter filtration system according to the present embodiment includes a funnel 61 that supplies liquid to the filter 4, a base 63 that collects a filtrate obtained by filtering the liquid through the filter 4, and an adjustment inserted in the funnel 61. The tool 62 is provided. These are usually assembled almost concentrically, and clamps can be used for assembly.

ファンネル６１は、内径ｄ_６１の供給口６１１を有する。そして、該供給口６１１の開口端６１３は平坦に形成され、フィルター４の上面と密着可能とされている。
ベース６３は、内径ｄ_６３の開口端６３２を有し、該開口端６３２は平坦に形成され、フィルター４の下面と密着可能とされている。 Funnel 61 has a supply port 611 of the inner diameter _{d 61.} The opening end 613 of the supply port 611 is formed flat and can be brought into close contact with the upper surface of the filter 4.
The base 63 has an opening end 632 having an inner diameter d _63. The opening end 632 is formed flat and can be brought into close contact with the lower surface of the filter 4.

調整具６２は筒状であり、供給口６１１内に配された一方の開口端６２３側は、内径がｄ_６２に拡大されている。そしてフィルターろ過時には、フィルター４へ前記液体サンプルや染色液を通液させるものである。調整具６２の前記開口端６２３は平坦に形成され、ファンネル６１内において、フィルター４の上面と密着可能とされている。ここに示すように、ｄ_６２はｄ_６１よりも小さい。
調整具６２は、図５（ｃ）に示すように、その中心軸方向に移動可能であり、引き上げ時には、フィルター４の上面との間に所定のスペースが形成される。そして、フィルター４の上面と密着している状態で、他方の開口端６２２は、ファンネル６１から突出している。 Adjustment member 62 is cylindrical, is disposed the one opening end 623 side in the supply port 611, the inner diameter is enlarged to d _62. And at the time of filter filtration, the said liquid sample and dyeing | staining liquid are made to flow through the filter 4. FIG. The opening end 623 of the adjustment tool 62 is formed flat and can be brought into close contact with the upper surface of the filter 4 in the funnel 61. As shown _{here, d 62} is smaller than _{d 61.}
As shown in FIG. 5C, the adjustment tool 62 can move in the central axis direction, and a predetermined space is formed between the adjustment tool 62 and the upper surface of the filter 4 when the adjustment tool 62 is pulled up. The other open end 622 protrudes from the funnel 61 while being in close contact with the upper surface of the filter 4.

ファンネル６１、調整具６２及びベース６３の材質は、前記のファンネル１、調整具２及びベース３と同様である。
そして、ｄ_６１は前記ｄ_１と、ｄ_６２は前記ｄ_２と、ｄ_６３は前記ｄ_３とそれぞれ同様である。
調整具６２の厚みＴ_６２は、特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜選択し得るが、取り扱い易さを考慮すると、通常は２〜４ｍｍであることが好ましい。 The material of the funnel 61, the adjustment tool 62, and the base 63 is the same as that of the funnel 1, the adjustment tool 2, and the base 3.
D ₆₁ is the same as d ₁ , d ₆₂ is the same as d ₂ , and d ₆₃ is the same as d ₃ .
The thickness T ₆₂ of the adjuster 62 is not particularly limited, but may be suitably selected according to the purpose, in view of the ease of handling, it is preferable usually is 2-4 mm.

ここに示すフィルターろ過システムにおいては、例えば、調整具６２の他方の開口端６２２側より、該調整具６２内にシリンジ（図示略）の注入口を挿通し、シリンジ内の液体を調整具６２内に供給することで、液体をフィルターに供給し、ろ過できる。
調整具６２の前記開口端６２２側の外径は、ファンネル６１の上部開口部６１２側の内径よりも僅かに小さくすることが好ましい。そして、シリンジの注入口外径を、前記開口端６２２側の内径より僅かに小さくすることが好ましい。このように設計することで、ファンネル６１の上部開口部６１２側において、シリンジの注入口、調整具６２及びファンネル６１の間に空隙部が生じるのを抑制できるので、外部からの微生物の混入を抑制しながら、シリンジ内の液体をろ過できる。 In the filter filtration system shown here, for example, an injection port of a syringe (not shown) is inserted into the adjustment tool 62 from the other opening end 622 side of the adjustment tool 62, and the liquid in the syringe is passed through the adjustment tool 62. The liquid can be supplied to the filter and filtered.
The outer diameter of the adjustment tool 62 on the opening end 622 side is preferably slightly smaller than the inner diameter of the funnel 61 on the upper opening 612 side. And it is preferable to make the outer diameter of the injection port of the syringe slightly smaller than the inner diameter on the opening end 622 side. By designing in this way, on the upper opening 612 side of the funnel 61, it is possible to suppress the generation of voids between the syringe inlet, the adjustment tool 62, and the funnel 61, thereby suppressing the introduction of microorganisms from the outside. The liquid in the syringe can be filtered.

筒状の調整具は、ここに示すものに限定されず、本発明の効果を損なわない範囲内において、種々の実施形態とすることができる。
例えば、図５において、調整具６２はその内径が一方の開口端６２３から他方の開口端６２２へかけて略同等となるようにしても良い。また、調整具６２の開口端６２２又はその近傍には、取っ手部を設けても良い。調整具６２は、フィルター４の上面と密着している状態で、その開口端６２２が前記のようにファンネル６１から突出していることが好ましいが、前記取っ手部を設ける場合には、ファンネル６１から突出していなくても良い。 A cylindrical adjustment tool is not limited to what is shown here, It can be set as various embodiment in the range which does not impair the effect of this invention.
For example, in FIG. 5, the adjustment tool 62 may have an inner diameter that is substantially the same from one opening end 623 to the other opening end 622. Further, a handle portion may be provided at the opening end 622 of the adjustment tool 62 or in the vicinity thereof. The adjustment tool 62 is preferably in contact with the upper surface of the filter 4 and its open end 622 preferably protrudes from the funnel 61 as described above. However, when the handle portion is provided, the adjustment tool 62 protrudes from the funnel 61. It does not have to be.

＜微生物の検出方法＞
次に、本発明に係る微生物の検出方法について説明する。
本発明に係る微生物の検出方法は、ファンネル及びフィルターを使用して、微生物を含有する液体サンプル、該微生物を染色する染色液、該染色液を洗浄する洗浄液を順次ろ過し、フィルター上に捕集された微生物を染色して検出する方法であって、微生物を含有する液体サンプルをろ過し、フィルター上に微生物を捕集する工程（１）と、微生物を捕集後に、染色液をろ過し、捕集された微生物を染色する工程（２）と、微生物を染色後に、洗浄液をろ過し、フィルターを洗浄する工程（３）と、を有し、工程（３）において洗浄液のろ過面を、工程（１）における液体サンプルのろ過面及び工程（２）における染色液のろ過面を包含するように、これらろ過面よりも拡大して、洗浄液をろ過することを特徴とするものである。
本発明の検出方法によれば、ファンネルとフィルター、並びにフィルターとベースとの間への染色液の滲出が抑制され、調整具とフィルターとの間に染色液が滲出しても、洗浄液で除去でき、微生物の染色以外でフィルター上に残留している余剰の染色液を除去できるので、微生物検出時のノイズを大幅に低減でき、目的とする微生物を高精度に検出できる。
以下、各工程について順次説明する。 <Microbe detection method>
Next, the microorganism detection method according to the present invention will be described.
The microorganism detection method according to the present invention uses a funnel and a filter to sequentially filter a liquid sample containing microorganisms, a staining solution for staining the microorganisms, and a cleaning solution for washing the staining solution, and collect them on the filter. A method of staining and detecting a microorganism, wherein a liquid sample containing the microorganism is filtered, and the microorganism is collected on the filter (1); after collecting the microorganism, the staining solution is filtered; A step (2) of staining the collected microorganisms, and a step (3) of filtering the washing liquid and washing the filter after staining the microorganisms. The cleaning liquid is filtered by enlarging the filtration surface so as to include the filtration surface of the liquid sample in (1) and the filtration surface of the staining liquid in step (2).
According to the detection method of the present invention, staining liquid is prevented from exuding between the funnel and the filter and between the filter and the base, and even if staining liquid exudes between the adjustment tool and the filter, it can be removed with the cleaning liquid. Since the excess staining solution remaining on the filter other than the staining of the microorganism can be removed, the noise at the time of detecting the microorganism can be greatly reduced, and the target microorganism can be detected with high accuracy.
Hereinafter, each process will be described sequentially.

（工程（１））
工程（１）においては、フィルター上の前記液体サンプルのろ過面を、後記する工程（３）における洗浄液のろ過面に包含されるように縮小する。ここで、「液体サンプルのろ過面が洗浄液のろ過面に包含される」とは、「液体サンプルのろ過面周縁部が、洗浄液のろ過面周縁部と接することなく、液体サンプルのろ過面が洗浄液のろ過面に含まれる」ことを指す。ろ過面の縮小方法は、工程（３）における「ろ過面の拡大方法」のところで説明する。
液体サンプルのろ過は、ろ過時間を短縮するために、減圧ろ過又は加圧ろ過で行うのが好ましい。 (Process (1))
In the step (1), the filtration surface of the liquid sample on the filter is reduced so as to be included in the filtration surface of the cleaning liquid in the step (3) described later. Here, “the filtration surface of the liquid sample is included in the filtration surface of the cleaning liquid” means “the filtration surface of the liquid sample is not in contact with the periphery of the filtration surface of the cleaning liquid, and the filtration surface of the liquid sample is It is included in the filtration surface. The method for reducing the filtration surface will be described in the section “Method for enlarging the filtration surface” in step (3).
Filtration of the liquid sample is preferably performed by vacuum filtration or pressure filtration in order to shorten the filtration time.

（工程（２））
工程（２）においては、フィルター上の前記染色液のろ過面を、工程（１）と同様に、工程（３）における洗浄液のろ過面に包含されるように縮小する。
通常、工程（２）は、工程（１）終了後にそのまま続けて行えば良く、このようにすることで検出方法を簡略化できる。 (Process (2))
In step (2), the filtration surface of the staining liquid on the filter is reduced so as to be included in the filtration surface of the cleaning liquid in step (3), as in step (1).
In general, the step (2) may be carried out as it is after the end of the step (1), and in this way, the detection method can be simplified.

染色液は、微生物を光学的に検出できるものであればいずれでも良く、微生物の種類や検出方法等に応じて適宜選択すれば良い。具体的には、ＣＦＤＡ（５（６）−ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｄｉａｃｅｔａｔｅ）等を使用して酵素活性を検出する蛍光検出、ＤＡＰＩ（４’，６−ｄｉａｍｉｄｉｎｏ−２−ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ）等を使用して核酸を検出する蛍光検出、ＡＴＰを検出するルシフェリン発光検出、ＦＩＳＨ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）染色による蛍光検出など、公知の染色方法で使用する染色液が例示できる。
染色液をろ過することにより、フィルター上に捕集された微生物が染色される。なお、ここで「染色液のろ過」とは、単にフィルターを通して染色液を通液させることを指し、必ずしもフィルター上に染色液中の成分を捕集することを指すものではない。 Any staining solution may be used as long as it can optically detect microorganisms, and may be appropriately selected according to the type of microorganisms, the detection method, and the like. Specifically, fluorescence detection using CFDA (5 (6) -carbofluorescein diacetate) or the like to detect enzyme activity, nucleic acid using DAPI (4 ′, 6-diamidino-2-phenylindole) or the like is detected. Examples thereof include staining solutions used in known staining methods such as fluorescence detection, luciferin luminescence detection for detecting ATP, and fluorescence detection by FISH (fluorescence in situ hybridization) staining.
By filtering the staining solution, the microorganisms collected on the filter are stained. Here, “filtering the staining solution” simply means passing the staining solution through the filter, and does not necessarily mean collecting the components in the staining solution on the filter.

染色液のろ過は、工程（１）における液体サンプルのろ過と同様に行えば良い。ただし、微生物を十分に染色するためには、フィルター上に染色液を所定時間保持しておくことが好ましい。そのためには、常圧下で染色液をファンネルに注いだ後、所定時間保持し、それから減圧又は加圧して染色液をろ過するのが好ましい。この時の、染色液をフィルター上に保持する時間は、染色液の種類に応じて適宜調整すれば良いが、通常１〜１２０分であることが好ましく、３〜３０分であることがより好ましく、５〜１５分であることが特に好ましい。 The staining liquid may be filtered in the same manner as the liquid sample in the step (1). However, in order to sufficiently stain the microorganism, it is preferable to hold the staining solution on the filter for a predetermined time. For that purpose, it is preferable to pour the staining solution under normal pressure, hold it for a predetermined time, and then filter the staining solution under reduced pressure or increased pressure. The time for holding the staining solution on the filter at this time may be appropriately adjusted according to the type of the staining solution, but is usually preferably 1 to 120 minutes, more preferably 3 to 30 minutes. 5 to 15 minutes is particularly preferable.

（工程（３））
工程（３）においては、先に述べたように、フィルター上の前記洗浄液のろ過面を、工程（１）における液体サンプルのろ過面、及び工程（２）における染色液のろ過面をいずれも包含するように拡大する。
本工程におけるろ過面の拡大方法は、上記目的を達成できるものであればいずれの方法でも良い。代表的な方法を以下に例示する。 (Process (3))
In step (3), as described above, the filtration surface of the washing liquid on the filter includes both the filtration surface of the liquid sample in step (1) and the filtration surface of the staining liquid in step (2). Enlarge as you do.
The method for enlarging the filtration surface in this step may be any method as long as the above object can be achieved. A typical method is illustrated below.

（Ｉ）ファンネルの内径拡大
ろ過面の拡大は、工程（３）において、工程（１）及び（２）で使用したファンネルよりも内径の大きいファンネルを使用することで行えば良い。本工程で使用するファンネルは、内径が異なること以外は、工程（１）及び（２）で使用するファンネルと同様のもので良い。 (I) Expansion of inner diameter of funnel The expansion of the filtration surface may be performed by using a funnel having a larger inner diameter than the funnel used in steps (1) and (2) in step (3). The funnel used in this step may be the same as the funnel used in steps (1) and (2) except that the inner diameter is different.

（ＩＩ）リング状の内径調整具の使用
本発明において、ろ過面の拡大は、前記ろ過システムで説明したリング状の調整具を使用して行なうことが好ましい。具体的には、工程（１）及び（２）においては、調整具を使用して液体サンプル及び染色液をろ過し、工程（３）においては、調整具を外して洗浄液をろ過する。工程（１）〜（３）では、同じファンネル及びベースを使用できる。
工程（１）及び（２）におけるファンネル、調整具及びフィルターの配置状態をベースと共に、前記フィルターろ過システムを引用して図６に例示する。図６（ａ）は正面図、（ｂ）は平面図である。また、工程（３）におけるファンネル、及びフィルターの配置状態をベースと共に、図７に例示する。図７（ａ）は正面図、（ｂ）は平面図である。 (II) Use of ring-shaped inner diameter adjuster In the present invention, it is preferable to enlarge the filtration surface using the ring-shaped adjuster described in the filtration system. Specifically, in the steps (1) and (2), the liquid sample and the staining liquid are filtered using an adjustment tool, and in the process (3), the adjustment liquid is removed and the cleaning liquid is filtered. In the steps (1) to (3), the same funnel and base can be used.
FIG. 6 illustrates the filter filtration system with reference to the arrangement state of the funnel, the adjustment tool, and the filter in the steps (1) and (2). 6A is a front view, and FIG. 6B is a plan view. In addition, the arrangement state of the funnel and the filter in the step (3) is illustrated in FIG. 7 together with the base. FIG. 7A is a front view, and FIG. 7B is a plan view.

工程（１）及び（２）においては、図６に示すように、ファンネル１とフィルター４との間に前記調整具２を挿入し、調整具２の内周２０がファンネルの供給口１１の内周１０よりも径方向内側に位置するように配して、調整具２の上部とファンネル１のリム押さえ部１２、並びに調整具２の下部とフィルター４の上面とをそれぞれ密着させる。そして、フィルター４の下面とベース３の開口端部３２とを密着させる。この状態で、液体サンプル及び染色液を順次ろ過する。
そして工程（３）においては、図７に示すように、前記調整具２を外して、フィルター４の上面とファンネル１のリム押さえ部１２とを密着させ、フィルター４の下面とベース３の開口端部３２とを密着させて、洗浄液をろ過する。 In steps (1) and (2), as shown in FIG. 6, the adjusting tool 2 is inserted between the funnel 1 and the filter 4, and the inner periphery 20 of the adjusting tool 2 is within the funnel supply port 11. It arrange | positions so that it may be located in a radial inside rather than the circumference | surroundings 10, and the upper part of the adjustment tool 2, the rim holding | suppressing part 12 of the funnel 1, the lower part of the adjustment tool 2, and the upper surface of the filter 4 are each closely_contact | adhered. Then, the lower surface of the filter 4 and the open end 32 of the base 3 are brought into close contact with each other. In this state, the liquid sample and the staining solution are sequentially filtered.
In step (3), as shown in FIG. 7, the adjustment tool 2 is removed, the upper surface of the filter 4 and the rim pressing portion 12 of the funnel 1 are brought into close contact, and the lower surface of the filter 4 and the open end of the base 3 The cleaning liquid is filtered by bringing the part 32 into close contact therewith.

工程（１）及び（２）においては、フィルター４の上面側は、その所定領域が調整具２と密着されており、この密着面より径方向内側の面は露出され、直径ｄ_２のろ過面４ａとなる。そして、液体サンプル及び染色液のろ過時に、これらはろ過面４ａにおいてろ過されるが、ろ過面４ａの径方向外側、すなわち調整具２とフィルター４上面との密着面に、染色液が僅かに滲み出すことがある。したがって、工程（２）終了時におけるフィルター４上面の染色液付着面は、ろ過面４ａよりも僅かに広い領域になる可能性がある。一方、調整具２を使用し、ｄ_３を好ましくはｄ_２よりも大きく、より好ましくはｄ_１と同等以上とすることで、フィルター４下面とベース３の開口端部３２との密着面においては、フィルター４を通過した染色液の滲み出しが抑制される。 In the step (1) and (2), the upper surface side of the filter 4, the predetermined regions are in close contact with the adjuster 2, the radially inner surface from the contact surface is exposed, filtration surface of the diameter d ₂ 4a. When the liquid sample and the staining liquid are filtered, they are filtered on the filtration surface 4a, but the staining liquid slightly bleeds on the radially outer side of the filtration surface 4a, that is, on the adhesion surface between the adjustment tool 2 and the upper surface of the filter 4. May be put out. Therefore, there is a possibility that the staining liquid adhesion surface on the upper surface of the filter 4 at the end of the step (2) may be a slightly wider area than the filtration surface 4a. On the other hand, the adjustment tool 2 is used, and d ₃ is preferably larger than d ₂ , more preferably equal to or greater than d ₁ , so that the contact surface between the lower surface of the filter 4 and the open end 32 of the base 3 is improved. The bleeding of the staining liquid that has passed through the filter 4 is suppressed.

これに対して、工程（３）においては、調整具２が外され、フィルター４の上面側は、その周縁部近傍がファンネル１のリム押さえ部１２と密着されており、この密着面より径方向内側の面は露出され、直径ｄ_１のろ過面４ｂとなる。この時、ｄ_１はｄ_２よりも大きく、ろ過面４ｂは、前記ろ過面４ａを包含する。したがって、洗浄液はフィルター上面及び下面の染色液付着面を確実に通過するので、微生物の染色以外でフィルター上に残留している余剰の染色液を確実に除去できる。このように、洗浄液が染色液付着面を確実に通過するようにするためには、先に述べたようにｄ_２をｄ_１よりも小さくすることが好ましい。 On the other hand, in the step (3), the adjustment tool 2 is removed, and the upper surface side of the filter 4 is in close contact with the rim pressing portion 12 of the funnel 1 in the vicinity of the peripheral edge. inner surface is exposed, the filtering surface 4b of the diameter d _1. In this case, _{d 1} is greater than _{d 2,} filtering surface 4b includes the filtering surface 4a. Therefore, since the cleaning liquid surely passes through the staining liquid adhering surfaces on the upper and lower surfaces of the filter, it is possible to reliably remove excess staining liquid remaining on the filter other than the staining of microorganisms. Thus, in order to ensure that the cleaning liquid passes through the staining liquid adhesion surface, it is preferable to make d ₂ smaller than d ₁ as described above.

（ＩＩＩ）筒状の内径調整具の使用
本発明において、ろ過面の拡大は、前記ろ過システムで説明した筒状の調整具を使用して行なうことも好ましい。例えば、図５に示したろ過システムを使用する場合、工程（１）及び（２）においては、図５（ｂ）に示すように、調整具６２を、その開口端６２３をフィルター４の上面と密着させて配置し、液体サンプル及び染色液をろ過する。そして、工程（３）においては、図５（ｃ）に示すように、調整具６２を引き上げてフィルター４の上面から離間させ、開口端６２３とフィルター４の上面との間に所定のスペースを形成して、ろ過面を拡大し、洗浄液をろ過すれば良い。 (III) Use of cylindrical inner diameter adjuster In the present invention, it is also preferable to enlarge the filtration surface using the cylindrical adjuster described in the filtration system. For example, when the filtration system shown in FIG. 5 is used, in steps (1) and (2), as shown in FIG. Place in close contact and filter the liquid sample and staining solution. Then, in step (3), as shown in FIG. 5C, the adjustment tool 62 is lifted away from the upper surface of the filter 4 to form a predetermined space between the open end 623 and the upper surface of the filter 4. Then, the filtration surface may be enlarged and the cleaning liquid may be filtered.

工程（３）において洗浄液は、微生物の染色以外でフィルター上に残留している染色液を除去でき、染色された微生物を傷つけたり破壊したりするものでなければいずれでも良く、染色液や微生物の種類に応じて適宜選択すれば良い。通常は、各種水溶液、好ましくは各種緩衝液を使用すれば良い。
また、洗浄液のろ過は、工程（１）における液体サンプルのろ過と同様に行えば良い。
そして、洗浄液のろ過の回数は特に限定されるものではなく、適宜調整し得る。例えば、一回のろ過に使用する洗浄液の量を考慮して決定すると良い。
なお、ここで「洗浄液のろ過」とは、単にフィルターを通して洗浄液を通液させることを指し、必ずしもフィルター上に洗浄液中の成分を捕集することを指すものではない。 In the step (3), any washing solution may be used as long as it can remove the staining solution remaining on the filter other than the staining of the microorganism and does not damage or destroy the stained microorganism. What is necessary is just to select suitably according to a kind. Usually, various aqueous solutions, preferably various buffers may be used.
Moreover, what is necessary is just to perform filtration of a washing | cleaning liquid similarly to filtration of the liquid sample in a process (1).
And the frequency | count of filtration of a washing | cleaning liquid is not specifically limited, It can adjust suitably. For example, it may be determined in consideration of the amount of cleaning liquid used for one filtration.
Here, “filtering the cleaning liquid” simply refers to passing the cleaning liquid through the filter, and does not necessarily mean collecting the components in the cleaning liquid on the filter.

工程（３）においては、ろ過面を拡大して洗浄液をろ過する前に、予め洗浄液をろ過しておいても良い。すなわち、工程（２）に次いで、ろ過面を拡大することなく洗浄液をろ過し、次いでろ過面を拡大してからさらに洗浄液をろ過することで、微生物の染色以外でフィルター上に残留している余剰の染色液を除去する効果が一層向上する。ろ過面の拡大前に使用する洗浄液の種類は、ろ過面の拡大後に使用するものと同様で良い。そして、ろ過面の拡大前の、洗浄液のろ過の回数は特に限定されるものではなく、適宜調整し得る。例えば、上記のろ過面の拡大後の場合と同様で良い。 In step (3), the cleaning liquid may be filtered in advance before the filtration surface is enlarged and the cleaning liquid is filtered. That is, after the step (2), the washing liquid is filtered without enlarging the filtration surface, and then the filtration surface is further enlarged and then the washing liquid is further filtered, so that the surplus remaining on the filter other than the staining of microorganisms The effect of removing the dyeing liquid is further improved. The type of cleaning liquid used before the enlargement of the filtration surface may be the same as that used after the enlargement of the filtration surface. And the frequency | count of filtration of a washing | cleaning liquid before expansion of a filtration surface is not specifically limited, It can adjust suitably. For example, it may be the same as the case after the enlargement of the filtration surface.

ろ過を行う際に、調整具、ファンネルのリム押さえ部、フィルター等を密着させる場合には、クランプ等を用いてこれらを一体に固定することが好ましい。 When performing the filtration, when the adjustment tool, the rim pressing portion of the funnel, the filter, and the like are brought into close contact with each other, it is preferable to fix them together using a clamp or the like.

工程（１）〜（３）におけるろ過は、上記の点以外は、通常のフィルターろ過を行う場合と同様に行えば良い。 The filtration in the steps (1) to (3) may be performed in the same manner as in the case of performing normal filter filtration except for the above points.

本発明においては、ろ過時に洗浄液がフィルター上面及び下面の染色液付着面を確実に通過するので、微生物の染色以外でフィルター上に残留している余剰の染色液を確実に除去できる。特に内径調整具を使用することで、効果的に余剰の染色液を除去できる。したがって、フィルター上に捕集された微生物を高い感度及び精度で検出できる。また、通常のろ過操作とほぼ同様の操作で実施できるので、微生物を簡便に検出できる。さらに、従来のファンネル及びベースを使用することも可能なので、汎用性が高く、低コストで微生物を検出できる。 In the present invention, the cleaning liquid surely passes through the staining liquid adhering surfaces on the upper and lower surfaces of the filter during filtration, so that it is possible to reliably remove excess staining liquid remaining on the filter other than microbial staining. In particular, by using an inner diameter adjuster, it is possible to effectively remove excess staining solution. Therefore, the microorganisms collected on the filter can be detected with high sensitivity and accuracy. Moreover, since it can implement by the operation substantially the same as normal filtration operation, microorganisms can be detected simply. Furthermore, since it is possible to use a conventional funnel and base, it is highly versatile and can detect microorganisms at low cost.

以下、具体的な実施例により、本発明についてさらに詳しく説明する。ただし、本発明は以下に示す実施例に何ら限定されるものではない。
[実施例１]
ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製ファンネル（ｄ_１；１６ｍｍ）と、図３に示すステンレス製調整具（Ｄ_５；２５ｍｍ、ｄ_５；１２ｍｍ、Ｒ_５１；６ｍｍ、ｒ_５１；３．５ｍｍ）を適用した図１に示すろ過システムと、ポアサイズ０．４μｍのポリエステル製フィルターを使用して、ろ過装置を組み立て、以下の試験を行った。なお、ファンネル、調整具、ベース及びフィルターは、クランプで一体に固定した。
まず、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）を分散させたＰＢＳ（ＰｈｏｓｐｈａｔｅＢｕｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅ）１００ｍｌをファンネルに注ぎ、減圧ろ過して、フィルター上に大腸菌を捕集した。
次いで、２００μｇ／ｍｌのＣＦＤＡ染色液（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｒｏｂｅｓ社製）２ｍｌをファンネルに注ぎ、そのまま室温で１０分間保持して染色してから、ＣＦＤＡ溶液を減圧ろ過し、さらに２０ｍｌのＰＢＳをファンネルに注ぎ、減圧ろ過した。
次いで、リングを取り外し、それ以外は上記と同様にろ過装置を組み立てた。そして、ＰＢＳ３０ｍｌをファンネルに注ぎ、減圧ろ過して、フィルターを洗浄した。
次いで、洗浄済みフィルターを、マイクロファインダー（アサヒビール株式会社製）で解析した。解析画像を強調処理した結果を図８に示す。図８に示すように、フィルター上に大腸菌が検出された。この時、染色ノイズは発生せず、大腸菌を正確に検出できた。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to specific examples. However, the present invention is not limited to the following examples.
[Example 1]
Manufactured by ADVANTEC funnel shown in FIG. 1 according to the; and _(d 1 16 mm), FIG stainless adjuster shown in _{_{_{3 (3.5mm D 5; 25mm,}}} d 5; 12mm, R 51;; 6mm, r 51) A filtration apparatus was assembled using a filtration system and a polyester filter having a pore size of 0.4 μm, and the following tests were performed. The funnel, adjustment tool, base, and filter were fixed together with a clamp.
First, 100 ml of PBS (Phosphate Buffered Saline) in which Escherichia coli was dispersed was poured into a funnel and filtered under reduced pressure to collect E. coli on the filter.
Next, 2 ml of a 200 μg / ml CFDA staining solution (Molecular probes) was poured into the funnel, and kept at room temperature for 10 minutes for staining. After that, the CFDA solution was filtered under reduced pressure, and further 20 ml of PBS was poured into the funnel. Filtered under reduced pressure.
Next, the ring was removed, and the filtration apparatus was assembled in the same manner as above. Then, 30 ml of PBS was poured into the funnel and filtered under reduced pressure to wash the filter.
Next, the washed filter was analyzed with a microfinder (manufactured by Asahi Breweries). The result of emphasizing the analysis image is shown in FIG. As shown in FIG. 8, E. coli was detected on the filter. At this time, staining noise was not generated, and Escherichia coli was accurately detected.

[比較例１]
調整具を使用しないこと以外は、実施例１と同様の方法で試験を行った。この時の解析画像を強調処理した結果を図９に示す。図９に示すように、ＣＦＤＡ染色液がフィルター上のリム押さえ部との接触面に染み出し、これがＰＢＳで洗浄できず、染色ノイズが発生し、そのうちのいくつかは大腸菌と誤判定されてしまった。 [Comparative Example 1]
The test was performed in the same manner as in Example 1 except that the adjuster was not used. The result of emphasizing the analysis image at this time is shown in FIG. As shown in FIG. 9, the CFDA staining solution oozes out on the contact surface with the rim presser on the filter, which cannot be washed with PBS, generates staining noise, and some of them are erroneously determined to be Escherichia coli. It was.

本発明は、飲食品の品質検査、生化学分野の各種試験、血液製剤の細菌検査などに利用可能である。 The present invention can be used for quality inspection of foods and drinks, various tests in the field of biochemistry, bacterial inspection of blood products, and the like.

本発明に係るフィルターろ過システムを例示する概略構成図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は（ａ）のＢ−Ｂ線における断面図である。BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS It is a schematic block diagram which illustrates the filter filtration system which concerns on this invention, (a) is a perspective view, (b) is sectional drawing in the BB line of (a). 本発明に係る調整具の他の実施形態を例示する斜視図である。It is a perspective view which illustrates other embodiments of an adjustment tool concerning the present invention. 本発明に係る調整具の他の実施形態を例示する平面図である。It is a top view which illustrates other embodiment of the adjustment tool which concerns on this invention. 本発明に係る他の実施形態の調整具を備えたフィルターろ過システムを例示する正面図である。It is a front view which illustrates the filter filtration system provided with the adjustment tool of other embodiments concerning the present invention. 本発明に係るフィルターろ過システムの他の実施形態を例示する概略構成図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は（ａ）のＡ−Ａ線における断面図、（ｃ）は調整具を（ｂ）の配置位置から移動させた時の断面図である。It is a schematic block diagram which illustrates other embodiment of the filter filtration system which concerns on this invention, (a) is a perspective view, (b) is sectional drawing in the AA of (a), (c) is an adjustment tool It is sectional drawing when moving from the arrangement position of (b). 本発明に係る検出方法の工程（１）及び（２）におけるファンネル、調整具、フィルター及びベースの配置状態を例示する図であり、（ａ）は正面図、（ｂ）は平面図である。It is a figure which illustrates the arrangement | positioning state of the funnel, adjustment tool, filter, and base in process (1) and (2) of the detection method which concerns on this invention, (a) is a front view, (b) is a top view. 本発明に係る検出方法の工程（３）におけるファンネル、フィルター及びベースの配置状態を例示する図であり、（ａ）は正面図、（ｂ）は平面図である。It is a figure which illustrates the arrangement state of a funnel, a filter, and a base in process (3) of a detection method concerning the present invention, (a) is a front view and (b) is a top view. 実施例１における解析画像を強調処理した結果を示す図である。It is a figure which shows the result of emphasizing the analysis image in Example 1. 比較例１における解析画像を強調処理した結果を示す図である。It is a figure which shows the result of emphasizing the analysis image in Comparative Example 1. 従来のフィルターろ過装置を使用して染色液をろ過した時の染色液の残留状態を説明する図である。It is a figure explaining the residual state of a dyeing | staining liquid when filtering a dyeing | staining liquid using the conventional filter filtration apparatus.

符号の説明Explanation of symbols

１，６１・・・ファンネル、１０・・・供給口の内周、１１，６１１・・・供給口、１２・・・リム押さえ部、２，２’，５，６２・・・内径調整具、２０・・・内径調整具の内周、３，６３・・・ベース、４・・・フィルター、４ａ・・・液体サンプル及び染色液のろ過面、４ｂ・・・洗浄液のろ過面 DESCRIPTION OF SYMBOLS 1,61 ... Funnel, 10 ... Inner periphery of supply port, 11,611 ... Supply port, 12 ... Rim holding | suppressing part, 2, 2 ', 5, 62 ... Inner diameter adjustment tool, 20 ... Inner circumference of inner diameter adjuster, 3, 63 ... Base, 4 ... Filter, 4a ... Liquid sample and staining liquid filtration surface, 4b ... Cleaning liquid filtration surface

Claims

液体をフィルターに供給する供給口を有するファンネルと、前記フィルターによる前記液体のろ過で得られたろ過液を集液するベースと、前記ファンネルの供給口内径よりも小さい内径を有し、かつ前記フィルター上のろ過面積を変更可能なリング状又は筒状の内径調整具と、を備えることを特徴とするフィルターろ過システム。 Possess a funnel having a supply port for supplying the filter liquid, a base for collecting liquid filtrate obtained by filtration of the liquid by the filter, a smaller inner diameter than the supply port inner diameter of the funnel, and the filter A filter filtration system comprising: a ring-shaped or cylindrical inner diameter adjuster capable of changing an upper filtration area .

微生物を含有する液体サンプル、該微生物を染色する染色液、該染色液を洗浄する洗浄液を順次ろ過するために用いられ、
前記内径調整具により、前記洗浄液のろ過面が、前記液体サンプル及び前記染色液のろ過面を包含するように、これらろ過面よりも拡大させることを特徴とする請求項１に記載のフィルターろ過システム。 It is used to sequentially filter a liquid sample containing microorganisms, a staining solution for staining the microorganisms, and a cleaning solution for washing the staining solution.
2. The filter filtration system according to claim 1, wherein the filtration surface of the cleaning liquid is enlarged by the inner diameter adjuster so as to include the filtration surface of the liquid sample and the staining liquid. .

請求項１又は２に記載のフィルターろ過システムに備えられるリング状又は筒状の内径調整具であって、
内径が、前記ファンネルの供給口内径の１２〜８８％であることを特徴とする内径調整具。 A ring-shaped or cylindrical inner diameter adjuster provided in the filter filtration system according to claim 1 or 2 ,
An inner diameter adjuster characterized in that the inner diameter is 12 to 88% of the inner diameter of the funnel supply port.

リング状の内径調整具であり、A ring-shaped inner diameter adjuster,
前記フィルターろ過システムに挿入した状態よりも取り外した状態のほうが、前記フィルター上のろ過面が拡大することを特徴とする請求項３に記載の内径調整具。The inner diameter adjuster according to claim 3, wherein the filtration surface on the filter is enlarged when the filter is removed from the filter filtration system than when it is inserted into the filter filtration system.

筒状の内径調整具であり、A cylindrical inner diameter adjuster,
その開口端を前記フィルターに密着させて配置した状態よりも、前記開口端を前記フィルターから離間させた状態のほうが、前記フィルター上のろ過面が拡大することを特徴とする請求項３に記載の内径調整具。The filtration surface on the filter is enlarged in a state in which the open end is separated from the filter than in a state in which the open end is placed in close contact with the filter. Inner diameter adjuster.