JP5004314B2

JP5004314B2 - Lipase inhibitor

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Publication number: JP5004314B2
Application number: JP2001195609A
Authority: JP
Inventors: 幸吉田村; 友紀曽我部; 正純宮腰
Original assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2001-06-27
Filing date: 2001-06-27
Publication date: 2012-08-22
Anticipated expiration: 2021-06-27
Also published as: JP2003012536A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なリパーゼ阻害剤に関する。更に詳述すると、リパーゼ阻害作用を通じて、飲食物、化粧品、日用雑貨など生活環境に存在する油脂類が原因となって生じる悪臭の発生抑制、化粧品および日用雑貨など肌に直接接触するものに存在する油脂類が原因となって生じる肌荒れの抑制、飲食物に存在する油脂類が原因となって生じる肥満の抑制などに有用なリパーゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
飲食品中に含有される油脂類は、環境中に存在する微生物などが産生するリパーゼにより加水分解されて、グリセロールと脂肪酸を生成する。生じた脂肪酸は酸化され、アルデヒド類等を生成し、悪臭や変敗の原因となるため飲食品の品質を保持していく上で大きな問題となっている。
【０００３】
また、皮膚においては、皮膚に存在する微生物が産生するリパーゼまたは表皮角化細胞のリパーゼの作用により皮脂類から脂肪酸が生成され、生じた脂肪酸が好中球を活性化し、活性化された好中球が活性酸素を放出し、これがニキビや皮膚炎の原因となる。
【０００４】
一方、消化酵素の一種であるリパーゼは、飲食された飲食品中の油脂類を分解することにより、消化吸収を促進している。したがって、リパーゼの作用を阻害することにより肥満症、過脂肪血症、アテローム性動脈硬化症および動脈硬化症を治療・予防することが可能となると考えられる。
【０００５】
このように飲食品、化粧品、皮膚などに対して悪影響を及ぼすリパーゼの活性を阻害するリパーゼ阻害剤としては、例えば、レモングラス、オールスパイス、シナモン、クローブ、阿仙薬、グァバ、メドウスィート、コラ・デ・カバロ、ビワ、ドッカツ、リョウキョウ、ビンロウシ、ヨウバイヒ、サンペンズ、ケツメイシなどの植物からの抽出物を利用したリパーゼ阻害剤が提案されているが（特開２００１−１２０２３７、特開２０００−１０３７４１、特開平１１−２２８３３８、特開平１０−２６５３６４、特開平５−２５５１００）、有効性および安全性の点で満足できるものは未だ開発されていないのが現状である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明は、安全性の確認されている天然物の中から、優れたリパーゼ阻害作用を有する物質を見出し、それを有効成分とした新規なリパーゼ阻害剤を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、本発明により提供される第一のリパーゼ阻害剤は、藤茶抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。本発明の第一のリパーゼ阻害剤においては、前記藤茶抽出物が、藤茶の枝葉部を極性溶媒により抽出して得られる抽出物であることが好ましい。また、本発明により提供される第二のリパーゼ阻害剤は、黄杞抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。本発明の第二のリパーゼ阻害剤においては、前記黄杞抽出物が、黄杞の枝葉部を極性溶媒により抽出して得られる抽出物であることが好ましい。
【０００８】
さらに、上記目的を達成するために、本発明により提供される第三のリパーゼ阻害剤は、ジヒドロフラボノール類を有効成分として含有することを特徴とする。本発明の第三のリパーゼ阻害剤においては、前記ジヒドロフラボノール類が、アンペロプシン、アスチルビン、ネオアスチルビン、ネオイソアスチルビンまたはイソアスチルビンであることが好ましい。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明において、「藤茶抽出物」、「黄杞抽出物」とは、それぞれ藤茶、黄杞を抽出原料として得られる抽出物を意味し、これらの抽出物には、藤茶、黄杞を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、またはこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１０】
抽出原料として使用する藤茶（学名：Ampelopsis grossedentata(Hand.-Mazz.)W.T.Wang、またはAmpelopsis cantoniensis(Hook.et Arn.)Panch.）は、ブドウ科に属する多年生のつる性植物である。藤茶の葉部は飲料として利用されている他、藤茶の根部又は全草は、黄疸性肝炎、風邪、のどの痛み、急性結膜炎症等の治療のための民間薬として利用されており、安全性の高い植物である。藤茶は、中国の中部〜南部および台湾にわたる広い地域で自生しており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料としては、藤茶の全草、枝部、葉部、枝葉部などを使用することができるが、枝葉部を使用することが好ましい。
【００１１】
抽出原料として使用する黄杞（学名：Engelhardtia chrysolepis Hance）は、クルミ科に属する常緑高木植物である。黄杞は古来より甘茶の一種として飲用されており、安全性の高い植物である。黄杞は、中国の南部から台湾にわたる地域で自生しており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料としては、黄杞の枝部、葉部、枝葉部などを使用することができるが、枝葉部を使用することが好ましい。
【００１２】
抽出原料とする藤茶および／または黄杞は、生のまま又は乾燥した後、そのまま又は粉砕機により粉砕して使用することができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。抽出原料とする藤茶および／または黄杞は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから使用してもよい。脱脂等の前処理を行なうことにより、藤茶および／または黄杞の極性溶媒による抽出処理を効率よく行なうことができる。
【００１３】
抽出処理の際には、抽出溶媒として極性溶媒を使用するのが好ましい。藤茶または黄杞に含まれるリパーゼ阻害作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。
【００１４】
好適な極性溶媒の具体例としては、水、親水性有機溶媒などを例示することができ、これらを単独で又は２種類以上を組み合わせて室温〜溶媒の沸点程度の温度で使用することができる。
【００１５】
本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１６】
本発明において抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピレンアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、イソプロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等を例示することができる。
【００１７】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と親水性有機溶媒との混合液を使用する場合には、親水性有機溶媒が低級アルコールであれば水１０重量部に対して１〜９０重量部、親水性有機溶媒が低級脂肪族ケトンであれば水１０重量部に対して１〜４０重量部、親水性有機溶媒が多価アルコールであれば水１０重量部に対して１０〜９０重量部混合することが好ましい。
【００１８】
抽出処理は、藤茶および／または黄杞に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されず、常法に従って行なうことができる。抽出処理の際には、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。
【００１９】
例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、ときどき攪拌しながら可溶性成分を溶出させる。この際、抽出条件は抽出原料等に応じて適宜調整し得る。例えば、抽出溶媒として水を用いる場合には、抽出溶媒量は抽出原料の通常１〜１０００倍量程度（重量比）、抽出時間は通常３０分〜２時間程度、抽出温度は通常４０〜９０℃程度とする。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合液を用いる場合には、抽出溶媒量は抽出原料の通常１〜１００倍量程度（重量比）、抽出時間は通常３０分〜２時間程度、抽出温度は通常４０〜８０℃程度とする。
【００２０】
抽出処理により可溶性成分を溶出させた後、ろ過して抽出残渣を除くことによって、抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２１】
得られた抽出液を脱色、脱臭、活性向上等を目的として精製する場合、その精製方法は特に限定されず、精製方法としては、例えば、活性炭処理、樹脂吸着処理、イオン交換樹脂、液−液向流分配等の方法が挙げられる。具体的には、セパビーズSP-207、ダイヤイオンHP-20（いずれも三菱化学（株）製）等の多孔性樹脂と濃縮液とを接触させる樹脂吸着精製法等を採用することができる。この場合、樹脂に吸着された有効成分は、水、エタノール等で溶出させることができる。
【００２２】
藤茶抽出物および黄杞抽出物は特有の匂いと味を有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行なうことも可能であるが、化粧料や食品に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００２３】
得られた抽出液はそのままでもリパーゼ阻害剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して使用することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができる。製剤化により粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。製剤化の際には、必要に応じてリパーゼ阻害作用を有する他の物質を添加してもよい。
【００２４】
リパーゼ阻害剤には、藤茶抽出物および黄杞抽出物のいずれか一方を有効成分として含有させてもよいし、両方を有効成分として含有させてもよい。両方を有効成分として含有させる場合、その含有比は特に限定されるものではないが、通常０．１：９９．９〜９９．９：０．１（重量比）、好ましくは５：９５〜９５：５（重量比）である。
【００２５】
藤茶抽出物および／または黄杞抽出物を有効成分とする本発明のリパーゼ阻害剤は、リパーゼ活性を効率よく阻害することができる。したがって、本発明のリパーゼ阻害剤によれば、リパーゼ阻害作用を通じて、飲食品や化粧品などに含有される油脂類の分解を防止し、飲食品や化粧品の悪臭や変敗を抑制することができる他、リパーゼ阻害作用を通じたニキビ、皮膚炎などの予防・治療、リパーゼ阻害作用を通じた肥満症、過脂肪血症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症などの予防・治療が可能となる。
【００２６】
本発明のリパーゼ阻害剤は、添加対象物の風味や使用感に対する悪影響が少ないので、広範な添加対象物に対して使用することができる。本発明のリパーゼ阻害剤の添加対象物は特に限定されず、その具体例としては、飲食品、化粧品、口腔用剤などが挙げられる。添加対象となる飲食品の具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これら飲料の濃縮液および調製用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の氷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、シュウマイの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、天ぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂および油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；錠剤状、顆粒状等の種々の形態の健康・栄養補助食品類；その他スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物等が挙げられ、添加対象となる化粧料としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック等の皮膚化粧料が挙げられる。
【００２７】
飲食品や化粧品への藤茶抽出物および／または黄杞抽出物の配合量は、飲食品や化粧品の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は、未精製の標準的な抽出物の乾燥物に換算して、飲食品の場合には通常約０．０１〜１０重量％であり、化粧品の場合には通常約０．００１〜５重量％である。
【００２８】
有効成分の抽出原料となる藤茶および／または黄杞は自然界に大量に存在しており、安定供給が可能であるので、本発明のリパーゼ阻害剤は安価に製造することができる。
【００２９】
藤茶抽出物および／または黄杞抽出物には、ジヒドロフラボノール類が含まれており、藤茶および／または黄杞の抽出物のリパーゼ阻害作用は、主としてジヒドロフラボノール類によって発揮されると考えられる。但し、藤茶抽出物および／または黄杞抽出物のリパーゼ阻害作用は、ジヒドロフラボノール類によるリパーゼ阻害作用に限定されるわけではない。藤茶抽出物にはアンペロプシンを主成分とする様々なフラボノイド類その他の成分が、黄杞抽出物にはタキシフォリン配糖体（アスチルビン（astilbin）、ネオアスチルビン（neoastilbin）、イソアスチルビン（isoastilbin）およびネオイソアスチルビン（neoisoastilbin））を主成分とする様々なフラボノイド類その他の成分が含まれており、これらの多種多様な成分が相なって、藤茶抽出物および／または黄杞抽出物の優れたリパーゼ阻害効果が発揮されるものと考えられる。
【００３０】
本発明において「ジヒドロフラボノール類」とは、ジヒドロフラボノール及びその誘導体を意味し、一般式（Ｉ）で表される化合物が含まれる。
【化１】

【００３１】
一般式（Ｉ）中、Ｒ^１およびＲ^３は各々独立して水素原子またはアルキル基を表し、Ｒ^２、Ｒ^４およびＲ^５は各々独立して水酸基、アルコキシ基または糖残基を表し、Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８は各々独立して水素原子、水酸基、アルコキシ基または糖残基を表す。
【００３２】
一般式（Ｉ）において、Ｒ^１またはＲ^３で表されるアルキル基は特に限定されるものではないが、好ましくは炭素数１〜５の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基である。その具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｔ−ペンチル基、ネオペンチル基などが挙げられるが、その中でも特にメチル基が好ましい。
【００３３】
一般式（Ｉ）において、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７またはＲ^８で表されるアルコキシ基は特に限定されるものではないが、好ましくは炭素数１〜４の直鎖状または分岐鎖状のアルコキシ基である。その具体例としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基などが挙げられるが、その中でも特にメトキシ基が好ましい。
【００３４】
一般式（Ｉ）において、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７またはＲ^８で表される糖残基は特に限定されるものではなく、単糖類であってもよいし、二糖類、三糖類、四糖類などの少糖類であってもよい。また、少糖類は、還元性少糖類であってもよいし、非還元性少糖類であってもよい。
【００３５】
単糖類の具体例としては、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、タロース、ソルボース、タガトース、プシコースなどのヘキソース、キシロース、アラビノース、リボース、リキソース、リブロース、キシルロースなどのペントースが挙げられる。これらの単糖類が有する水酸基は、水素原子、アミノ基などで置換されていてもよいし、糖に含まれる酸素原子のいずれかが硫黄原子によって置換されていてもよいし、アルドースの場合にはその炭素鎖末端のヒドロキシメチル基がカルボキシル基に酸化されていてもよい。
【００３６】
水酸基が水素で置換された糖、すなわち、デオキシ糖の具体例としては、マンノースの６位炭素原子上の水酸基が水素に置換されたラムノース（６−デオキシマンノース）、ガラクトースの６位炭素原子上の水酸基が水素に置換されたフコース（６−デオキシガラクトース）が挙げられる。
【００３７】
水酸基がアミノ基に置換された糖、すなわち、アミノ糖の具体例としては、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸などが挙げられる。
【００３８】
酸素原子のいずれかが硫黄原子によって置換された糖、すなわち、チオ糖の具体例としては、１−チオ−Ｄ−グルコースなどが挙げられる。
【００３９】
アルドースの炭素鎖末端のヒドロキシメチル基がカルボキシル基に酸化された糖、すなわち、ウロン酸の具体例としては、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、イズロン酸などが挙げられる。
【００４０】
少糖類の具体例としては、１種または２種以上の単糖類分子がグリコシド結合したものが挙げられ、例えば、二糖類の具体例としては、キシロビオース、トレハロース、レバンビオース、キトビオース、２−β−グルクロノシルグルクロン酸などのホモ二糖、スクロース、ラクトース、ビシアノース、サンブビオース、メリビオース、エピセロビオース、ツラノース、ラクツロースなどのヘテロ糖が挙げられ、三糖類の具体例としては、ラフィノース、ウンベリフェロースなどが挙げられ、四糖類の具体例としては、スタキオースなどが挙げられる。
【００４１】
少糖類を構成する単糖類分子はデオキシ糖、メチル糖、アミノ糖、チオ糖、ウロン酸などであってもよく、例えば、デオキシ糖を含む二糖類の具体例としては、ルチノース、ロビノビオースなどが挙げられ、アミノ糖を含む二糖類の具体例としては、トレハロサミンなどが挙げられ、ウロン酸を含む二糖類の具体例としては、セロビオウロン酸などが挙げられる。
【００４２】
一般式（Ｉ）において、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７またはＲ^８で表される糖残基と非糖部との結合様式は特に限定されないが、通常、糖残基は非糖部の水酸基を介して非糖部とエーテル結合している。その他の結合様式としては、例えばチオグルコシド結合などが挙げられる。
【００４３】
藤茶抽出物に含まれ、リパーゼ阻害作用を示すジヒドロフラボノール類としては、アンペロプシン（一般式（Ｉ）において、Ｒ^１およびＲ^３が水素原子であり、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８が水酸基である化合物）が挙げられる。また、黄杞抽出物に含まれ、リパーゼ阻害作用を示すジヒドロフラボノール類としては、タキシフォリン配糖体であるアスチルビン（一般式（Ｉ）において、Ｒ^１、Ｒ^３およびＲ^８が水素原子であり、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^６およびＲ^７が水酸基であり、Ｒ^５がラムノース残基（−Ｏ−Ｃ_６Ｈ_１１Ｏ_４）である化合物）、ネオアスチルビン、イソアスチルビンおよびネオイソアスチルビンが挙げられる。
【００４４】
藤茶抽出物におけるアンペロプシンの含有量は、通常３０重量％以上、好ましくは５０重量％以上である。藤茶抽出物を精製処理した場合には、アンペロプシンの含有量が８０％重量以上となるので、特に好ましい。また、黄杞抽出物における上記タキシフォリン配糖体の含有量は、通常１０重量％以上、好ましくは１５重量％以上である。黄杞抽出物を精製処理した場合には、上記タキシフォリン配糖体の含有量が７０重量％以上となるので、特に好ましい。
【００４５】
藤茶抽出物および／または黄杞抽出物からジヒドロフラボノール類を単離精製し、これをリパーゼ阻害剤の有効成分とすることができる。リパーゼ阻害剤の有効成分とするジヒドロフラボノール類は、藤茶抽出物および／または黄杞抽出物から単離精製し得るものに限定されるものではなく、その他の植物から単離精製したものまたは化学合成したものであってもよい。
【００４６】
【実施例】
以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
【００４７】
〔製造例１〕
藤茶乾燥枝葉２００ｇに５０重量％エタノール２０００ｍｌを加え、還流冷却器を用いて、８０℃にて１時間抽出を行った後、濾紙にて濾過し、抽出液を得た。得られた抽出液を減圧下に濃縮、乾燥を行い、藤茶抽出物５０ｇ（粉末）を得た（収率２５％）。
【００４８】
〔製造例２〕
藤茶乾燥枝葉２００ｇに水２０００ｍｌを加え、９０℃にて１時間抽出を行った後、濾紙にて濾過し、抽出液Ａを得た。また抽出残渣に再び水２０００ｍｌを加え、同様に９０℃で１時間加熱抽出を行った後、濾紙にて濾過し、抽出液Ｂを得た。得られた抽出液Ａ、Ｂを合わせて抽出液とした。
得られた抽出液（Ａ＋Ｂ）を多孔性樹脂（ＨＰ−２０；三菱化学（株）製）３００ｍｌを充填したガラスカラムに流して、アンペロプシンを主成分とするフラボノイド類を吸着させた。
吸着させた多孔性樹脂に６００ｍｌの水を流して洗浄した後、８０％エタノールを流して吸着成分を溶出させた。得られた溶出液を減圧下にて濃縮、乾燥し、製造例２の藤茶抽出物２４ｇ（粉末）を得た（収率１２％）。
製造例１、２で得られた藤茶抽出物について、下記条件で高速液体クロマトグラフィーを行い、各藤茶抽出物におけるアンペロプシン量を定量した。
【００４９】
［高速液体クロマトグラフィーの条件］
検出器：紫外部吸収検出器（測定波長２９０ｎｍ）
カラム充填剤：１０μｍの化学結合型オクタデシルシラン
カラム管：内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのステンレス管
カラム温度：４０℃
移動相：アセトニトリル/0.1重量％リン酸＝15/85（重量比）混液
流速：１ｍＬ／分
【００５０】
定量の結果、製造例１、２で得られた藤茶抽出物のアンペロプシン含有量は、それぞれ３８．２（重量％）、８２．５（重量％）であった。
【００５１】
〔製造例３〕
黄杞乾燥枝葉２００ｇに７０重量％アセトン２０００ｍｌを加え、還流冷却器を用いて、８０℃にて１時間抽出を行った後、濾紙にて濾過し、抽出液を得た。得られた抽出液を減圧下に濃縮、乾燥を行い、製造例２の黄杞の抽出物３２ｇ（粉末）を得た（収率１６％）。
【００５２】
〔製造例４〕
黄杞乾燥枝葉２００ｇに水２０００ｍｌを加え、９０℃にて１時間抽出を行った後、濾紙にて濾過し、抽出液Ａを得た。また抽出残渣に再び水２０００ｍｌを加え、同様に９０℃で１時間加熱抽出を行った後、濾紙にて濾過し、抽出液Ｂを得た。得られた抽出液Ａ、Ｂを合わせて抽出液とした。
得られた抽出液（Ａ＋Ｂ）を多孔性樹脂（ＨＰ−２０；三菱化学（株）製）３００ｍｌを充填したガラスカラムに流して、アスチルビンを主成分とするフラボノイド類を吸着させた。
吸着させた多孔性樹脂に６００ｍｌの水を流して洗浄した後、６０％エタノールを流して吸着成分を溶出させた。得られた溶出液を減圧下に濃縮、乾燥を行い、製造例４の黄杞抽出物８ｇ（粉末）を得た（収率４％）。
製造例３、４で得られた黄杞抽出物について、下記条件で高速液体クロマトグラフィーを行い、各藤茶抽出物におけるアスチルビン量を定量した。
【００５３】
［高速液体クロマトグラフィーの条件］
検出器：紫外部吸収検出器（測定波長２９０ｎｍ）
カラム充填剤：１０μｍの化学結合型オクタデシルシラン
カラム管：内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのステンレス管
カラム温度：４０℃
移動相：アセトニトリル/0.05重量％トリフルオロ酢酸＝20/80（重量比）混液
流速：１ｍＬ／分
【００５４】
定量の結果、製造例３で得られた黄杞抽出物のアスチルビン含有量、ネオアスチルビン含有量、ネオイソアスチルビン含有量、イソアスチルビン含有量は、それぞれ１３．１（重量％）、１．２（重量％）、１．０（重量％）、１．０（重量％）であった。また、製造例４で得られた黄杞抽出物のアスチルビン含有量、ネオアスチルビン含有量、ネオイソアスチルビン含有量、イソアスチルビン含有量は、それぞれ６４．４（重量％）、５．９（重量％）、４．９（重量％）、４．９（重量％）であった。
これらの結果を表１にまとめて示す。
【００５５】

【００５６】
〔実施例１〜４〕
製造例１、２の藤茶抽出物（実施例１、２）、製造例３、４の黄杞抽出物（実施例３，４）を５０重量％エタノールで溶解および希釈することによって、それぞれ試料濃度１０００〜１０μｇ／ｍｌの試料溶液を調整した。
得られた各試料溶液５０μｌ、リパーゼ（Candida cylindracea起源、Biocatalysts社；15.4U/mL）５０μｌ、０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（pH8.5）に溶解した5,5’-dithiobis（2-nitro-benzoic acid）（DTNB，0.1mg/mL）３４０μｌおよびエタノールに溶解したphenylmethylsulfonyl fluoride（PMSF，3.5mg/mL）１０μｌをよく混合し、３０℃で５分間静置した。この酵素反応液に、エタノールに溶解した2,3-dimercapto-1-propanol tributylate（BALB，0.3mg/mL）およびsodium dodecylsulfate（SDS，0.26mg/mL）をそれぞれ２５μｌずつ加えた後、３０℃で３０分間反応させた。アセトン５００μｌを加えて酵素反応を停止させた後、ＢＡＬＢが加水分解された量に比例する波長４１４ｎｍの吸光度を測定した。また、コントロールとして、試料溶液の代わりに５０重量％エタノールを加えた場合について、同様の操作と吸光度測定を行った。
測定結果から、下記の計算式によりリパーゼ活性阻害率を算出した。
【００５７】
【式１】
リパーゼ活性阻害率（％）＝１−［（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）］×１００
【００５８】
なお、式１中、「Ａ０」は試料溶液を添加した場合の吸光度（酵素反応開始前）、「Ａ１」は試料溶液を添加した場合の吸光度（酵素反応開始後）、「Ａ２」はコントロールの吸光度（酵素反応開始前）、「Ａ３」はコントロールの吸光度（酵素反応開始後）を表す。
【００５９】
試料溶液の試料濃度を６．２５〜１０００μｇ／ｍｌに段階的に変化させて上記リパーゼ活性阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料溶液の試料濃度（ＩＣ_５０）（μｇ／ｍＬ）を求めたところ、実施例１〜４におけるＩＣ_５０は、それぞれ２６、２０、２００、１３０（μｇ／ｍＬ）であった。
実施例１（製造例１の藤茶抽出物）および実施例２（製造例２の藤茶抽出物）に関する結果を表２に、実施例３（製造例３の黄杞抽出物）および実施例４（製造例４の黄杞抽出物）に関する結果を表３示す。
【００６０】

【００６１】

【００６２】
表２および３に示す結果から、藤茶抽出物および黄杞抽出物は強いリパーゼ阻害作用を有することが確認された。また、アンペロプシン含有量が多い藤茶抽出物（実施例２）、アスチルビン含有量が多い黄杞抽出物（実施例４）の方がより強いリパーゼ阻害作用を有することが確認された。
【００６３】
【発明の効果】
本発明により新規なリパーゼ阻害剤が提供される。本発明のリパーゼ阻害剤によれば、リパーゼ阻害作用を通じて、飲食品や化粧品などに含有される油脂類の分解を防止し、飲食品や化粧品の悪臭や変敗を抑制することができる他、リパーゼ阻害作用を通じたニキビ、皮膚炎などの予防・治療、リパーゼ阻害作用を通じた肥満症、過脂肪血症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症などの予防・治療が可能となる。また、本発明のリパーゼ阻害剤は、添加対象物となる飲食品や化粧料などの風味や使用感に対する悪影響が少ないので、広範な添加対象物に対して使用することができる。さらに、有効成分の抽出原料となる藤茶および／または黄杞は自然界に大量に存在しており、安定供給が可能であるので、本発明のリパーゼ阻害剤は安価に製造することができる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel lipase inhibitor. In more detail, through the lipase inhibitory action, the occurrence of malodor caused by fats and oils present in the living environment such as food and drinks, cosmetics, daily goods, etc., and those that come into direct contact with skin such as cosmetics and daily goods. The present invention relates to a lipase inhibitor useful for suppressing rough skin caused by oils and fats present and for suppressing obesity caused by oils and fats present in foods and drinks.
[0002]
[Prior art]
Oils and fats contained in food and drink are hydrolyzed by lipases produced by microorganisms and the like present in the environment to produce glycerol and fatty acids. The resulting fatty acid is oxidized to produce aldehydes and the like, causing bad odor and deterioration, which is a big problem in maintaining the quality of food and drink.
[0003]
In the skin, fatty acids are produced from sebum by the action of lipase produced by microorganisms present in the skin or lipase from epidermal keratinocytes, and the resulting fatty acid activates neutrophils to activate them. The sphere releases active oxygen, which causes acne and dermatitis.
[0004]
On the other hand, lipase, which is a kind of digestive enzyme, promotes digestion and absorption by degrading fats and oils in food and drink that are eaten and consumed. Therefore, it is thought that obesity, hyperlipidemia, atherosclerosis and arteriosclerosis can be treated and prevented by inhibiting the action of lipase.
[0005]
Examples of lipase inhibitors that inhibit the activity of lipases that adversely affect foods and drinks, cosmetics, skin, etc. include, for example, lemongrass, allspice, cinnamon, cloves, asen, guava, medusait, cora Lipase inhibitors using extracts from plants such as De Kavalo, Loquat, Dokkatsu, Ryoko, Binroushi, Japanese bay mackerel, Sunpens, Ketsumeishi have been proposed (JP 2001-120237, JP 2000-103741, JP-A-11-228338, JP-A-10-265364, JP-A-5-255100), and what is satisfactory in terms of effectiveness and safety has not been developed yet.
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
Therefore, an object of the present invention is to find a substance having an excellent lipase inhibitory action from natural products whose safety has been confirmed, and to provide a novel lipase inhibitor containing the substance as an active ingredient.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
In order to achieve the above object, the first lipase inhibitor provided by the present invention is characterized by containing a Fuji tea extract as an active ingredient. In the first lipase inhibitor of the present invention, the Fuji tea extract is preferably an extract obtained by branches of Fuji tea extract by a polar solvent. Moreover, the 2nd lipase inhibitor provided by this invention contains a jaundice extract as an active ingredient, It is characterized by the above-mentioned. In the second lipase inhibitor of the present invention, it is preferable that the jaundice extract is an extract obtained by extracting branches and leaves of jaundice with a polar solvent.
[0008]
Furthermore , in order to achieve the above object, the third lipase inhibitor provided by the present invention is characterized by containing dihydroflavonols as an active ingredient. In the third lipase inhibitor of the present invention, the dihydroflavonols are preferably amperopsin, astilbine, neoastilbine, neoisoastilbine or isoastilbine.
[0009]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
In the present invention, “wisteria tea extract” and “yellow tuna extract” mean extracts obtained using wisteria tea and twilight as extraction raw materials, respectively. An extract obtained by using as a raw material for extraction, a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or a crude product or a purified product thereof.
[0010]
Wisteria tea (scientific name: Ampelopsis grossedentata (Hand.-Mazz.) WTWang, or Ampelopsis cantoniensis (Hook. Et Arn.) Panch.) Used as an extraction raw material is a perennial climbing plant belonging to the vine family. The leaves of Fuji tea are used as beverages, and the root or whole plant of Fuji tea is used as a folk medicine for the treatment of jaundice hepatitis, cold, sore throat, acute conjunctival inflammation, etc. It is a highly safe plant. Fuji tea grows naturally in a wide area from central to southern China and Taiwan, and is easily available from these areas. As the raw material for extraction, the whole plant, branches, leaves, branches and leaves of wisteria tea can be used, but it is preferable to use branches and leaves.
[0011]
Twilight (scientific name: Engelhardtia chrysolepis Hance) used as an extraction raw material is an evergreen tree plant belonging to the family Walnut. Twilight has been drunk as a kind of sweet tea since ancient times and is a highly safe plant. Twilight is native to regions from southern China to Taiwan and is readily available from these regions. As extraction raw materials, branches, leaves, branches and leaves of jaundice can be used, but it is preferable to use branches and leaves.
[0012]
Wisteria tea and / or twilight as an extraction raw material can be used as it is or after being dried and then pulverized as it is or by a pulverizer. Drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer. Wisteria tea and / or yellow candy used as an extraction raw material may be used after pretreatment such as degreasing with a nonpolar solvent such as hexane or benzene. By performing pretreatment such as degreasing, extraction with a polar solvent such as wisteria and / or jaundice can be performed efficiently.
[0013]
In the extraction process, it is preferable to use a polar solvent as the extraction solvent. A component having a lipase inhibitory action contained in Fuji tea or yellow candy can be easily extracted by an extraction treatment using a polar solvent as an extraction solvent.
[0014]
Specific examples of suitable polar solvents include water, hydrophilic organic solvents and the like, and these can be used alone or in combination of two or more at a temperature from room temperature to the boiling point of the solvent.
[0015]
The water that can be used as the extraction solvent in the present invention includes pure water, tap water, well water, mineral spring water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and the like, as well as those subjected to various treatments. Examples of the treatment applied to water include heating, sterilization, sterilization, filtration, ion exchange, adjustment of osmotic pressure, buffering, and the like. Accordingly, water that can be used as the extraction solvent in the present invention includes hot water, ion-exchanged water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, and the like.
[0016]
Examples of the hydrophilic organic solvent that can be used as the extraction solvent in the present invention include lower alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propylene alcohol, and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; Examples thereof include polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as butylene glycol, propylene glycol, isopropylene glycol and glycerin.
[0017]
When using the liquid mixture of 2 or more types of polar solvents as an extraction solvent, the mixing ratio can be adjusted suitably. For example, when a mixed liquid of water and a hydrophilic organic solvent is used, if the hydrophilic organic solvent is a lower alcohol, 1 to 90 parts by weight with respect to 10 parts by weight of water, and the hydrophilic organic solvent is a lower aliphatic. It is preferable to mix 1 to 40 parts by weight with respect to 10 parts by weight of water if it is a ketone, and 10 to 90 parts by weight with respect to 10 parts by weight of water if the hydrophilic organic solvent is a polyhydric alcohol.
[0018]
The extraction treatment is not particularly limited as long as the soluble components contained in Fuji tea and / or twilight can be eluted in the extraction solvent, and can be performed according to a conventional method. In the extraction process, it is not necessary to adopt a special extraction method, and any apparatus can be used at room temperature or under reflux heating.
[0019]
For example, the extraction raw material is put into a treatment tank filled with the extraction solvent, and the soluble components are eluted with occasional stirring. At this time, the extraction conditions can be appropriately adjusted according to the extraction raw material and the like. For example, when water is used as the extraction solvent, the amount of the extraction solvent is usually about 1 to 1000 times the weight of the extraction raw material (weight ratio), the extraction time is usually about 30 minutes to 2 hours, and the extraction temperature is usually 40 to 90 ° C. To the extent. When a mixed liquid of water and ethanol is used as the extraction solvent, the amount of the extraction solvent is usually about 1 to 100 times (weight ratio) of the extraction raw material, the extraction time is usually about 30 minutes to 2 hours, and the extraction temperature. Is usually about 40 to 80 ° C.
[0020]
An eluate can be obtained by eluting soluble components by extraction and then filtering to remove the extraction residue. The obtained extract is diluted, concentrated, dried, purified, etc. according to a conventional method in order to obtain a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product of the extract, or a crude purified product or a purified product thereof. Processing may be performed.
[0021]
When purifying the obtained extract for the purpose of decolorization, deodorization, activity improvement, etc., the purification method is not particularly limited. Examples of the purification method include activated carbon treatment, resin adsorption treatment, ion exchange resin, liquid-liquid. Examples include counter-current distribution. Specifically, a resin adsorption purification method in which a porous resin such as Sepabead SP-207, Diaion HP-20 (all manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) and a concentrated liquid are brought into contact with each other can be employed. In this case, the active ingredient adsorbed on the resin can be eluted with water, ethanol or the like.
[0022]
Since the Fuji tea extract and twilight extract have a unique odor and taste, it is possible to perform purification for the purpose of decolorization, deodorization, etc. within a range that does not cause a decrease in the physiological activity. When added to cosmetics and foods, it is not used in large quantities, so there is no practical problem even if it is not purified.
[0023]
The obtained extract can be used as it is as a lipase inhibitor, but it can also be used after being formulated according to a conventional method. In the case of formulating, a pharmaceutically acceptable carrier such as dextrin and cyclodextrin and other optional auxiliaries can be added to facilitate storage and handling. It can be made into any dosage form such as powder, granule, tablet, etc. by formulation. At the time of formulation, other substances having a lipase inhibitory action may be added as necessary.
[0024]
The lipase inhibitor may contain either one of the Fuji tea extract and the yellow ginger extract as an active ingredient, or may contain both as active ingredients. When both are contained as active ingredients, the content ratio is not particularly limited, but is usually 0.1: 99.9 to 99.9: 0.1 (weight ratio), preferably 5:95 to 95. : 5 (weight ratio).
[0025]
The lipase inhibitor of the present invention comprising a wisteria tea extract and / or japonica extract as an active ingredient can efficiently inhibit lipase activity. Therefore, according to the lipase inhibitor of the present invention, through the lipase inhibitory action, the decomposition of fats and oils contained in foods and drinks and cosmetics can be prevented, and the malodor and deterioration of foods and drinks and cosmetics can be suppressed. In addition, prevention / treatment of acne and dermatitis through lipase inhibitory action, obesity, hyperlipidemia, atherosclerosis, arteriosclerosis etc. through lipase inhibitory action can be achieved.
[0026]
Since the lipase inhibitor of the present invention has little adverse effect on the flavor and feeling of use of the addition object, it can be used for a wide range of addition objects. The addition object of the lipase inhibitor of this invention is not specifically limited, As the specific example, food-drinks, cosmetics, oral preparations, etc. are mentioned. Specific examples of foods and drinks to be added include beverages such as soft drinks, carbonated drinks, nutritional drinks, fruit drinks, and lactic acid drinks (including concentrates and powders for preparation of these drinks); ice cream, ice sherbet, shaved ice Ice confectionery such as soba, udon, harusame, gyoza skin, shumai skin, Chinese noodles, instant noodles and other noodles; confectionery such as strawberries, candy, gum, chocolate, snack confectionery, biscuits, jelly, jam, cream, baked confectionery, etc. Fish and fishery processed foods such as kamaboko, ham and sausage; Dairy products such as processed milk and fermented milk; Fats and oils and fats processed foods such as salad oil, tempura oil, margarine, mayonnaise, shortening, whipped cream, dressing; sauce; Seasonings such as sauce; health and nutritional supplements in various forms such as tablets and granules; other soups, shii -Menu, salads, prepared foods, pickles, and examples of the cosmetics to be added subject, ointments, creams, milks, lotions, skin cosmetics such as packs and the like.
[0027]
The amount of Fuji tea extract and / or twilight extract to food and drink and cosmetics can be adjusted as appropriate depending on the type of food and drink and the physiological activity of the extract, etc. In terms of the dry product of unrefined standard extract, it is usually about 0.01 to 10% by weight in the case of food and drink, and usually about 0.001 to 5% by weight in the case of cosmetics. .
[0028]
Since Fuji tea and / or twilight, which are the raw materials for extracting the active ingredient, are present in large quantities in nature and can be stably supplied, the lipase inhibitor of the present invention can be produced at low cost.
[0029]
The wisteria tea extract and / or twilight extract contains dihydroflavonols, and the lipase inhibitory action of the wisteria tea and / or twilight extract is considered to be mainly exerted by the dihydroflavonols. . However, the lipase inhibitory action of the wisteria tea extract and / or jaundice extract is not limited to the lipase inhibitory action by dihydroflavonols. Fuji tea extract contains various flavonoids and other components based on ampelopsin, and jaundice extract contains taxifolin glycosides (astilbin, neoastilbin, isoastilbin and neoisotilb). It contains various flavonoids and other components that are mainly composed of stilbin (neoisoastilbin), and these various components combine to make an excellent lipase of wisteria tea extract and / or jaundice extract. It is thought that the inhibitory effect is exhibited.
[0030]
In the present invention, “dihydroflavonols” means dihydroflavonol and its derivatives, and includes compounds represented by general formula (I).
[Chemical 1]

[0031]
In general formula (I), R ¹ and R ³ each independently represent a hydrogen atom or an alkyl group, R ² , R ⁴ and R ⁵ each independently represent a hydroxyl group, an alkoxy group or a sugar residue, R ⁶ , R ⁷ and R ⁸ each independently represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, an alkoxy group or a sugar residue.
[0032]
In general formula (I), the alkyl group represented by R ¹ or R ³ is not particularly limited, but is preferably a linear or branched alkyl group having 1 to 5 carbon atoms. Specific examples thereof include methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, s-butyl group, t-butyl group, n-pentyl group, isopentyl group and t-pentyl group. And neopentyl group. Among them, a methyl group is particularly preferable.
[0033]
In the general formula (I), the alkoxy group represented by R ² , R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ , R ⁷ or R ⁸ is not particularly limited, but is preferably a linear chain having 1 to 4 carbon atoms. Or a branched alkoxy group. Specific examples thereof include a methoxy group, an ethoxy group, an n-propoxy group, an isopropoxy group, an n-butoxy group, an isobutoxy group, an s-butoxy group, and a t-butoxy group. preferable.
[0034]
In the general formula (I), the sugar residue represented by R ² , R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ , R ⁷ or R ⁸ is not particularly limited, and may be a monosaccharide or two Oligosaccharides such as saccharides, trisaccharides, and tetrasaccharides may be used. The oligosaccharide may be a reducing oligosaccharide or a non-reducing oligosaccharide.
[0035]
Specific examples of monosaccharides include hexoses such as glucose, fructose, mannose, galactose, talose, sorbose, tagatose, and psicose, and pentoses such as xylose, arabinose, ribose, lyxose, ribulose, and xylulose. The hydroxyl group of these monosaccharides may be substituted with a hydrogen atom, an amino group, etc., or any of the oxygen atoms contained in the sugar may be substituted with a sulfur atom. The hydroxymethyl group at the end of the carbon chain may be oxidized to a carboxyl group.
[0036]
Specific examples of sugars in which the hydroxyl group is substituted with hydrogen, that is, deoxy sugars include rhamnose (6-deoxymannose) in which the hydroxyl group on the 6-position carbon atom of mannose is substituted with hydrogen, on the 6-position carbon atom of galactose. An example is fucose (6-deoxygalactose) in which a hydroxyl group is substituted with hydrogen.
[0037]
Specific examples of sugars in which the hydroxyl group is substituted with an amino group, that is, amino sugars include N-acetylglucosamine, N-acetylgalactosamine, N-acetylneuraminic acid, and the like.
[0038]
Specific examples of sugars in which any oxygen atom is substituted with a sulfur atom, that is, thiosugars include 1-thio-D-glucose and the like.
[0039]
Specific examples of sugars in which the hydroxymethyl group at the carbon chain end of aldose is oxidized to a carboxyl group, that is, uronic acid, include glucuronic acid, galacturonic acid, mannuronic acid, iduronic acid and the like.
[0040]
Specific examples of oligosaccharides include those in which one or more monosaccharide molecules are glycosidically linked. For example, specific examples of disaccharides include xylobiose, trehalose, levanbiose, chitobiose, 2-β-glucose. Homo disaccharides such as clonosyl glucuronic acid, hetero sugars such as sucrose, lactose, vicyanose, sambubiose, melibiose, epicellobiose, turanose, lactulose, etc. Specific examples of trisaccharides include raffinose, umbelliferose, etc. Specific examples of tetrasaccharides include stachyose.
[0041]
The monosaccharide molecule constituting the oligosaccharide may be deoxy sugar, methyl sugar, amino sugar, thio sugar, uronic acid, etc. For example, specific examples of disaccharide containing deoxy sugar include rutinose, robinobiose and the like. Specific examples of disaccharides containing amino sugars include trehalosamine, and specific examples of disaccharides containing uronic acid include cellobiouronic acid.
[0042]
In the general formula (I), the binding mode of the sugar residue represented by R ² , R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ , R ⁷ or R ⁸ and the non-sugar part is not particularly limited, but usually the sugar residue Is ether-bonded to the non-sugar part via the hydroxyl group of the non-sugar part. Examples of other binding modes include thioglucoside bonds.
[0043]
Dihydroflavonols contained in the Fuji tea extract and exhibiting a lipase inhibitory action include amperopsin (in the general formula (I), R ¹ and R ³ are hydrogen atoms, and R ² , R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ , Compounds in which R ⁷ and R ⁸ are hydroxyl groups). In addition, dihydroflavonols contained in the jaundice extract and exhibiting lipase inhibitory action include taxifolin glycoside astilbin (in general formula (I), R ¹ , R ³ and R ⁸ are hydrogen atoms, R ² , R ⁴ , R ⁶ and R ⁷ are hydroxyl groups, and R ⁵ is a rhamnose residue (—O—C ₆ H ₁₁ O ₄ ), neoastilbine, isoastilbine and neoisoastilbine. .
[0044]
The content of amperopsin in the Fuji tea extract is usually 30% by weight or more, preferably 50% by weight or more. When the Fuji tea extract is purified, the content of amperopsin is 80% by weight or more, which is particularly preferable. The content of the taxifolin glycoside in the jaundice extract is usually 10% by weight or more, preferably 15% by weight or more. When the jaundice extract is purified, the content of the taxifolin glycoside is 70% by weight or more, which is particularly preferable.
[0045]
Dihydroflavonols can be isolated and purified from the wisteria tea extract and / or yellow ginger extract, and this can be used as an active ingredient of a lipase inhibitor. The dihydroflavonols used as the active ingredient of the lipase inhibitor are not limited to those that can be isolated and purified from the wisteria tea extract and / or yellow ginger extract. It may be synthesized.
[0046]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example is shown and this invention is demonstrated concretely, this invention is not limited to the following Example.
[0047]
[Production Example 1]
To 200 g of dried wisteria tea leaves, 2000 ml of 50 wt% ethanol was added, and extraction was performed at 80 ° C. for 1 hour using a reflux condenser, followed by filtration with filter paper to obtain an extract. The resulting extract was concentrated and dried under reduced pressure to obtain 50 g (powder) of Fuji tea extract (yield 25%).
[0048]
[Production Example 2]
2000 ml of water was added to 200 g of dried wisteria leaves and extracted at 90 ° C. for 1 hour, followed by filtration with filter paper to obtain Extract A. Further, 2000 ml of water was added again to the extraction residue, and similarly, extraction was performed by heating at 90 ° C. for 1 hour, followed by filtration with filter paper to obtain Extract B. The obtained extracts A and B were combined to make an extract.
The obtained extract (A + B) was passed through a glass column packed with 300 ml of a porous resin (HP-20; manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) to adsorb flavonoids mainly composed of amperopsin.
After washing the adsorbed porous resin with 600 ml of water, 80% ethanol was allowed to flow to elute the adsorbed components. The obtained eluate was concentrated and dried under reduced pressure to obtain 24 g (powder) of Fuji tea extract of Production Example 2.
The Fuji tea extract obtained in Production Examples 1 and 2 was subjected to high performance liquid chromatography under the following conditions to quantify the amount of amperopsin in each Fuji tea extract.
[0049]
[Conditions for high performance liquid chromatography]
Detector: UV absorption detector (measurement wavelength 290 nm)
Column packing: 10 μm chemically bonded octadecylsilane column tube: stainless steel tube with inner diameter of 4.6 mm and length of 250 mm Column temperature: 40 ° C.
Mobile phase: acetonitrile / 0.1 wt% phosphoric acid = 15/85 (weight ratio) mixed liquid flow rate: 1 mL / min
As a result of quantification, the amperopsin contents of the Fuji tea extracts obtained in Production Examples 1 and 2 were 38.2 (% by weight) and 82.5 (% by weight), respectively.
[0051]
[Production Example 3]
To 200 g of dried twilight leaves, 2000 ml of 70% by weight acetone was added, and extraction was performed at 80 ° C. for 1 hour using a reflux condenser, followed by filtration with filter paper to obtain an extract. The obtained extract was concentrated and dried under reduced pressure to obtain 32 g (powder) of jaundice extract of Production Example 2 (yield 16%).
[0052]
[Production Example 4]
After adding 2000 ml of water to 200 g of dried twilight leaves, extraction was performed at 90 ° C. for 1 hour, followed by filtration with filter paper to obtain Extract A. Further, 2000 ml of water was added again to the extraction residue, and similarly, extraction was performed by heating at 90 ° C. for 1 hour, followed by filtration with filter paper to obtain Extract B. The obtained extracts A and B were combined to make an extract.
The obtained extract (A + B) was passed through a glass column packed with 300 ml of a porous resin (HP-20; manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) to adsorb flavonoids mainly composed of astilbine.
After washing the adsorbed porous resin with 600 ml of water, the adsorbed components were eluted by flowing 60% ethanol. The obtained eluate was concentrated and dried under reduced pressure to obtain 8 g (powder) of jaundice extract of Production Example 4 (yield 4%).
The jaundice extract obtained in Production Examples 3 and 4 was subjected to high performance liquid chromatography under the following conditions to quantify the amount of astilbine in each Fuji tea extract.
[0053]
[Conditions for high performance liquid chromatography]
Detector: UV absorption detector (measurement wavelength 290 nm)
Column packing: 10 μm chemically bonded octadecylsilane column tube: stainless steel tube with inner diameter of 4.6 mm and length of 250 mm Column temperature: 40 ° C.
Mobile phase: acetonitrile / 0.05 wt% trifluoroacetic acid = 20/80 (weight ratio) mixed liquid flow rate: 1 mL / min
As a result of quantification, astilbine content, neoastilbine content, neoisoastilbine content and isoastilbine content of the jaundice extract obtained in Production Example 3 were 13.1 (% by weight) and 1.2 ( % By weight), 1.0 (% by weight), and 1.0 (% by weight). Moreover, the astilbine content, the neoastilbine content, the neoisoastilbine content, and the isoastilbine content of the jaundice extract obtained in Production Example 4 were 64.4 (% by weight) and 5.9 (% by weight), respectively. 4.9 (wt%) and 4.9 (wt%).
These results are summarized in Table 1.
[0055]

[0056]
[Examples 1 to 4]
Samples were prepared by dissolving and diluting the wisteria tea extract (Examples 1 and 2) of Production Examples 1 and 2 and the yellow ginger extract of Production Examples 3 and 4 (Examples 3 and 4) with 50 wt% ethanol, respectively. A sample solution having a concentration of 1000 to 10 μg / ml was prepared.
50 μl of each sample solution obtained, 50 μl of lipase (Candida cylindracea origin, Biocatalysts; 15.4 U / mL), 5,5′-dithiobis (2-nitro-) dissolved in 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 8.5) benzoic acid) (DTNB, 0.1 mg / mL) 340 μl and phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF, 3.5 mg / mL) 10 μl dissolved in ethanol were mixed well and allowed to stand at 30 ° C. for 5 minutes. 25 μl each of 2,3-dimercapto-1-propanol tributylate (BALB, 0.3 mg / mL) and sodium dodecylsulfate (SDS, 0.26 mg / mL) dissolved in ethanol were added to the enzyme reaction solution at 30 ° C. The reaction was allowed for 30 minutes. After the enzyme reaction was stopped by adding 500 μl of acetone, the absorbance at a wavelength of 414 nm proportional to the amount of hydrolysis of BALB was measured. As a control, the same operation and absorbance measurement were performed when 50 wt% ethanol was added instead of the sample solution.
From the measurement results, the lipase activity inhibition rate was calculated by the following formula.
[0057]
[Formula 1]
Lipase activity inhibition rate (%) = 1-[(A1-A0) / (A3-A2)] × 100
[0058]
In Formula 1, “A0” is the absorbance when the sample solution is added (before starting the enzyme reaction), “A1” is the absorbance when the sample solution is added (after starting the enzyme reaction), and “A2” is the control. Absorbance (before the start of enzyme reaction), “A3” represents the absorbance of the control (after the start of enzyme reaction).
[0059]
The lipase activity inhibition rate is measured by changing the sample concentration of the sample solution stepwise to 6.25 to 1000 μg / ml, and the sample concentration (IC ₅₀ ) (μg / mL) of the sample solution at which the inhibition rate becomes 50%. ) it was determined to, _{IC 50} in examples 1 to 4 were respectively 26,20,200,130 (μg / mL).
The results relating to Example 1 (Fujicha extract of Production Example 1) and Example 2 (Fujicha extract of Production Example 2) are shown in Table 2, and Example 3 (Yellow koji extract of Production Example 3) and Example Table 3 shows the results for 4 (the jaundice extract of Production Example 4).
[0060]

[0061]

[0062]
From the results shown in Tables 2 and 3, it was confirmed that the Fuji tea extract and jaundice extract have a strong lipase inhibitory action. In addition, it was confirmed that the Fuji tea extract (Example 2) having a high amperopsin content and the jaundice extract (Example 4) having a high astilbine content have a stronger lipase inhibitory action.
[0063]
【Effect of the invention】
The present invention provides a novel lipase inhibitor. According to the lipase inhibitor of the present invention, through the lipase inhibitory action, the decomposition of fats and oils contained in foods and drinks and cosmetics can be prevented, and the odor and deterioration of foods and drinks and cosmetics can be suppressed. Prevention / treatment of acne and dermatitis through inhibitory action, obesity, hyperlipidemia, atherosclerosis, arteriosclerosis etc. through lipase inhibitory action become possible. Moreover, since the lipase inhibitor of this invention has little bad influence with respect to flavor and feeling of use, such as food / beverage products and cosmetics used as an addition object, it can be used with respect to a wide range of addition object. Furthermore, since Fuji tea and / or yellow cocoon, which are extraction raw materials for active ingredients, are present in large quantities in nature and can be stably supplied, the lipase inhibitor of the present invention can be produced at low cost.

Claims

藤茶抽出物を有効成分として含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤（肌荒れ抑制の用途を除く）。A lipase inhibitor characterized by containing Fuji tea extract as an active ingredient (except for the purpose of suppressing rough skin) .

前記藤茶抽出物が、藤茶の枝葉部を極性溶媒により抽出して得られる抽出物であることを特徴とする請求項１記載のリパーゼ阻害剤（肌荒れ抑制の用途を除く）。The Fuji tea extract, (excluding the rough skin inhibiting applications) Fuji lipase inhibitor of claim 1, wherein the branches and leaves of the tea is an extract obtained by extracting with a polar solvent.

前記藤茶抽出物がアンペロプシンを含有し、前記藤茶抽出物における前記アンペロプシンの含有量が８０％重量以上であることを特徴とする請求項１又は２に記載のリパーゼ阻害剤（肌荒れ抑制の用途を除く）。 The lipase inhibitor (use for rough skin suppression) according to claim 1 or 2, wherein the wisteria tea extract contains amperopsin, and the content of the amperopsin in the wisteria tea extract is 80% by weight or more. Except) .

タキシフォリン配糖体の含有量が７０重量％以上である黄杞抽出物を有効成分として含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤。 A lipase inhibitor comprising a jaundice extract having a taxifolin glycoside content of 70% by weight or more as an active ingredient .