JP4999920B2

JP4999920B2 - テトラヒドロピロロピリミジンジオン類およびヒト好中球エラスターゼ阻害薬としてのそれらの使用

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Publication number: JP4999920B2
Application number: JP2009508463A
Authority: JP
Inventors: ニコラスチャールズレイ; ハリーフィンチ; クリスティンエドワーズ; エリザベスオーコナー
Original assignee: プルマジェンセラピューティクス（インフラメーション）リミテッド
Priority date: 2006-05-04
Filing date: 2007-05-03
Publication date: 2012-08-15
Anticipated expiration: 2027-05-03
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Description

本発明は、置換された３，４，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−２，５−ジオンである複素環式化合物、および治療におけるそれらの使用に関する。

ヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）は、好中球のアズール顆粒中に見出される３２ｋＤａのセリンプロテイナーゼである。それは、エラスチンに加えフィブロネクチン、ラミニン、プロテオグリカン、ＩＩＩ型およびＩＶ型コラーゲンを含む広範な範囲の細胞外マトリックスタンパク質の分解で役割を有する（Ｂｉｅｔｈ，Ｇ．ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＭａｔｒｉｘＡｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎＭｅｃｈａｍ，Ｒ．Ｐ．（編）、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮＹ，ＵＳＡ１９８６，２１７〜３０６）。ＨＮＥは、組織構造タンパク質の分解によって傷害された組織の修復および処分を通して恒常性維持で重要な役割を演じると長らく考えられていた。それは、また、細菌侵入に対する細菌体の分解による防御に関連している。マトリックス組織に対するその効果に加えて、ＨＮＥは、ＩＬ−８の遺伝子発現の上向き調節に関与しており、さらには肺の上皮細胞からのＩＬ−８放出を誘発する。喫煙曝露で誘発される慢性閉塞性肺疾患の動物モデルで、ＨＮＥの小分子阻害薬およびタンパク質阻害薬の両方とも、炎症反応および肺気腫の進行を抑制する（Ｗｒｉｇｈｔ，Ｊ．Ｌ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．ＣａｒｅＭｅｄ．２００２，１６６，９５４〜９６０；Ｃｈｕｒｇ，Ａ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．ＣａｒｅＭｅｄ．２００３，１６８，１９９〜２０７）。したがって、ＨＮＥは、好中球の流入が特有の特徴である慢性呼吸器疾患におけるマトリックス破壊および炎症反応の増幅の両方で役割を演じる可能性がある。実際、ＨＮＥは、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺気腫、肺炎および肺線維症を含むいくつかの肺疾患で役割を演じると考えられる。それは、組織再構築が関連するいくつかの心血管疾患、例えば、心不全、および急性心筋梗塞に続く虚血性組織損傷の発生にも関与している。

ＣＯＰＤは、そのすべてが気流制限の一因となる３つの異なる病理学的状態、すなわち、慢性気管支炎、肺気腫および末梢気道病変を包含する包括的用語である。一般に、この３つのすべてが、ＣＯＰＤを呈する患者に様々な程度で存在し、３つのすべてが、ＣＯＰＤ患者の気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液中で観察される好中球数の増加によって支持されるように、好中球介在性炎症のためである可能性がある（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ａ．Ｂ．；Ｄａｕｇｈｔｏｎ，Ｄ．ら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１９８９，１４０，１５２７〜１５３７）。ＣＯＰＤの主な発病決定因子は、プロテアーゼ−アンチプロテアーゼバランス（「エラスターゼ：アンチエラスターゼ仮説」としても知られる）であり、ＨＮＥと、α１−アンチトリプシン（α_１−ＡＴ）、分泌性白血球プロテアーゼ阻害因子（ＳＬＰＩ）およびプレ−エラフィンなどの内因性アンチプロテアーゼとの不均衡が、ＣＯＰＤの各種の炎症性障害をもたらすと長らく考えられていた。プロテアーゼ阻害因子α１−アンチトリプシンの遺伝子欠損を有する個体は、やがては重症度を増す肺気腫を発症する（Ｌａｕｒｒｅｌｌ，Ｃ．Ｂ．；Ｅｒｉｋｋｓｏｎ，Ｓ．、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９６３，１５，１３２〜１４０）。それゆえ、ＨＮＥの過剰は、破壊的であり、弾性の喪失および肺中での気道の肺胞付着の破壊を伴う肺組織形態の破壊（肺気腫）につながり、一方、同時に、微小血管透過性および粘液分泌過多を増大させる（慢性気管支炎）。

多量体リガンドは、適切な足場を介して一緒につなぎ留められた多数の結合領域からなる。それゆえ、個々の結合領域は単一分子中に一緒に連結され、該多量体が、多数の活性部位と逐次的に段階を追った方式で結合して高い親和性相互作用を生じさせる可能性を高める（Ｈａｎｄｌ，Ｈ．Ｌ．ら、ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ２００４，８，５６５〜５８６；Ｈａｎ，Ｙ．Ｆ．ら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．１９９９，７，２５６９〜２５７５）。また、比較的大きな解離速度をもつ多数の結合相互作用（逐次的または並行的）は、合同して、多量体リガンドに対して全体的小さな解離速度をもたらすことができる。したがって、適切なリンカーおよびリガンドからなる分子は、効能および／または作用持続時間に関して単量体リガンドの単独に優る利点を示すことが期待できる。多量体化合物は、経口で生物学的に利用可能であるとは思われず（リピンスキーの「５の法則」により予想されるように）、このことは、吸入経路による肺への投与を目標にしている場合、吸入投与の後でさえ薬物の大部分が胃腸管に入ると思われるので、有利である可能性がある。したがって、このような化合物は、吸入投与後の全身性曝露の低下、それゆえ、経口で投与される治療法に優る毒性プロフィールの改善を示すことが期待できる。

本発明は、ＨＮＥの阻害薬であり、かつＨＮＥ活性が役割を演じる疾患または状態を治療するのに有用である新規な化合物を提供する。本発明の化合物は、単量体として、または特に、リンカー骨格を介して共有結合で連結された二量体などの多量体の形態で吸入により局所的に肺へ適用する場合に使用できる。

一実施形態において、本発明は、式（Ｉ）

［式中、
Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｄは、酸素または硫黄であり、
Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_６−アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６−アルキニル、ヒドロキシ、またはＣ_１〜Ｃ_６−アルコキシもしくはＣ_２〜Ｃ_６−アルケニルオキシ（ここで、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルおよびＣ_１〜Ｃ_６−アルコキシは、さらにハロゲン、ヒドロキシおよびＣ_１〜Ｃ_４−アルコキシからなる群から選択される１〜３個の同一または異なる基で置換されていてもよい）であり、
ＲおよびＲ^４は、それぞれ独立に、式−［Ｘ］_ｍ−［Ａｌｋ^１］_ｐ−［Ｑ］_ｎ−［Ａｌｋ^２］_ｑ−［Ｘ^１］_ｋ−Ｚの基を表し、
ここで、
ｋ、ｍ、ｎ、ｐおよびｑは、独立に０または１であり、
Ａｌｋ^１およびＡｌｋ^２は、それぞれ独立に、エーテル（−Ｏ−）、チオエーテル（−Ｓ−）またはアミノ（−ＮＲ^Ａ−）（ここで、Ｒ^Ａは水素またはＣ_１〜Ｃ_３アルキルである）結合を必要に応じて含んでいてもよい、必要に応じて置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキレンまたはＣ_２〜Ｃ_６アルケニレン基を表し、
Ｑは、
（ｉ）−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ^＋（Ｒ^Ａ）−、−Ｎ（Ｒ^Ａ）−、−Ｎ^＋（Ｒ^Ａ）（Ｒ^Ｂ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^Ａ−、−ＮＲ^ＡＣ（＝Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ_２）ＮＲ^Ａ−、−ＮＲ^ＡＳ（Ｏ_２）−、−ＮＲ^ＡＣ（＝Ｏ）ＮＲ^Ｂ−、−ＮＲ^ＡＣ（＝ＮＲ^Ａ）ＮＲ^Ｂ−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｄ）ＮＲ^Ｅ−、−ＮＲ^ＥＣ（＝ＮＲ^Ｄ）−（ここで、Ｒ^Ａ、Ｒ^Ｂ、Ｒ^ＤおよびＲ^Ｅは、独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、またはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルであるか、あるいはＲ^ＡとＲ^ＢまたはＲ^ＤとＲ^Ｅが、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるさらなるヘテロ原子を含んでいてもよい５〜７個の環原子からなる単環式複素環を形成している）、または
（ｉｉ）３〜６個の環メンバーを有する必要に応じて置換された二価の単環式または二環式の炭素環または複素環基を表し、
Ｘは、−（Ｃ＝Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ_２）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^Ａ−または−Ｓ（Ｏ_２）ＮＲ^Ａ−（ここで、Ｒ^Ａは、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルである）を表し、
Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＨを表し、かつ
Ｚは、水素、または３〜６個の環メンバーを有する必要に応じて置換された単環式または二環式の炭素環または複素環基である］の化合物を提供する。

本発明には、リンカー骨格を介して共有結合で連結された２、３または４分子の上式（Ｉ）の化合物を含む多量体化合物も含まれる。

上式（Ｉ）の化合物およびその多量体は、その塩、特に薬学的に許容される塩、Ｎ−オキシド、水和物および溶媒和物の形態で調製できる。本明細書中の化合物に対する任意の特許請求の範囲、または「本発明の化合物」、「本発明に関わる化合物」、式（Ｉ）の化合物などに対する言及には、このような化合物の塩、Ｎ−オキシド、水和物および溶媒和物が含まれる。

本発明の化合物は、ＨＮＥが関与する疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺線維症、肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺気腫、喫煙で誘発される肺気腫および嚢胞性線維症を治療または予防するのに有用であり得る。

それゆえ、本発明の他の態様は、（ｉ）本発明の化合物および薬学的に許容される担体または賦形剤を含有する医薬組成物、ならびに（ｉｉ）ＨＮＥが関与する疾患または状態の治療または予防のための医薬を製造するための本発明の化合物の使用である。
（用語）
本明細書中で使用する場合、用語「（Ｃ_ａ〜Ｃ_ｂ）アルキル」（ａおよびｂは整数）は、ａ〜ｂ個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基を指す。したがって、例えばａが１でｂが６なら、該用語には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルが含まれる。

本明細書中で使用する場合、用語「（Ｃ_ａ〜Ｃ_ｂ）アルケニル」（ａおよびｂは整数）は、ａ〜ｂ個の炭素原子を有し、該当するなら立体化学がＥまたはＺの少なくとも１つの二重結合を有する直鎖または分枝鎖のアルケニル部分を指す。したがって、例えばａが２でｂが６なら、該用語には、例えば、ビニル、アリル、１−および２−ブテニル、ならびに２−メチル−２−プロペニルが含まれる。

本明細書中で使用する場合、用語「Ｃ_ａ〜Ｃ_ｂアルキニル」（ａおよびｂは整数）は、ａ〜ｂ個の炭素原子を有し、かつさらに１つの三重結合を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素基を指す。したがって、例えばａが１でｂが６なら、該用語には、例えば、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）、１−プロピニル、１−および２−ブチニル、２−メチル−２−プロピニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル，４−ペンチニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニルおよび５−ヘキシニルが含まれる。

本明細書中で使用する場合、用語「二価の（Ｃ_ａ〜Ｃ_ｂ）アルキレン基」（ａおよびｂは整数）は、ａ〜ｂ個の炭素原子および２つの未結合原子価を有する飽和炭化水素鎖を指す。

本明細書中で使用する場合、用語「二価の（Ｃ_ａ〜Ｃ_ｂ）アルケニレン基」（ａおよびｂは整数）は、２〜６個の炭素原子および少なくとも１つの二重結合を有する二価の炭化水素鎖を指す。

本明細書中で使用する場合、制限されていない用語「炭素環」は、そのすべてが炭素である１６個までの環原子を有する単環式、二環式または三環式基を指し、アリールおよびシクロアルキルを含む。

本明細書中で使用する場合、制限されていない用語「シクロアルキル」は、３〜８個の炭素原子を有する単環式の飽和炭素環式基を指し、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを含む。

本明細書中で使用する場合、制限されていない用語「アリール」は、単環式、二環式または三環式の炭素環式芳香族基を指し、共有結合で直接的に連結された２つの単環式炭素環式芳香族環を有する基を含む。このような基の例が、フェニル、ビフェニルおよびナフチルである。

本明細書中で使用する場合、制限されていない用語「ヘテロアリール」は、Ｓ、ＮおよびＯから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を含む単環式、二環式または三環式の芳香族基を指し、共有結合で直接連結された、２つのこのような単環式環、または１つのこのような単環式環と１つの単環式アリール環を有する基を含む。このような基の例が、チエニル、ベンゾチエニル、フリル、ベンゾフリル、ピロリル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、イソキサゾリル、ベンゾイソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、インドリルおよびインダゾリルである。

本明細書中で使用する場合、制限されていない用語「ヘテロシクリル」または「複素環」または「ヘテロシクロアルキル」は、上で定義したような「ヘテロアリール」を含み、その非芳香族的意味は、Ｓ、ＮおよびＯから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を含む単環式、二環式または三環式の非芳香族基、ならびに１つまたは複数のこのようなヘテロ原子を含み、別のこのような基または単環式炭素環式基に共有結合で連結された基を指す。このような基の例が、ピロリル、フラニル、チエニル、ピペリジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピリミジニル、モルホリニル、ピペラジニル、インドリル、モルホリニル、ベンゾフラニル、ピラニル、イソキサゾリル、ベンゾイミダゾリル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニル、マレイミドおよびスクシンイミド基である。

それが出現する文脈で別途指定されない限り、用語「置換された」は、本明細書中の任意の部分に適用される場合、４つまでの適合性のある置換基で置換されていることを意味し、その置換基のそれぞれは、独立に、例えば、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、シクロアルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、メルカプト、メルカプト（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルチオ、フェニル、５または６個の環原子を有する単環式ヘテロアリール、ハロ（フルオロ、ブロモおよびクロロを含む）、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、ニトリル（−ＣＮ）、オキソ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ^Ａ、−ＣＯＲ^Ａ、−ＳＯ_２Ｒ^Ａ、−ＣＯＮＨ_２、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＣＯＮＨＲ^Ａ、−ＳＯ_２ＮＨＲ^Ａ、−ＣＯＮＲ^ＡＲ^Ｂ、−ＳＯ_２ＮＲ^ＡＲ^Ｂ、−ＮＨ_２、−ＮＨＲ^Ａ、−ＮＲ^ＡＲ^Ｂ、−ＯＣＯＮＨ_２、−ＯＣＯＮＨＲ^Ａ、−ＯＣＯＮＲ^ＡＲ^Ｂ、−ＮＨＣＯＲ^Ａ、−ＮＨＣＯＯＲ^Ａ、−ＮＲ^ＢＣＯＯＲ^Ａ、−ＮＨＳＯ_２ＯＲ^Ａ、−ＮＲ^ＢＳＯ_２ＯＨ、−ＮＲ^ＢＳＯ_２ＯＲ^Ａ、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＮＲ^ＡＣＯＮＨ_２、−ＮＨＣＯＮＨＲ^Ｂ、−ＮＲ^ＡＣＯＮＨＲ^Ｂ、−ＮＨＣＯＮＲ^ＡＲ^Ｂまたは−ＮＲ^ＡＣＯＮＲ^ＡＲ^Ｂでよく、ここで、Ｒ^ＡおよびＲ^Ｂは、独立に、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_３〜Ｃ_６）シクロアルキル、フェニル、または５または６個の環原子を有する単環式ヘテロアリールであるか、あるいはＲ^ＡおよびＲ^Ｂが、同一の窒素原子に結合しているなら、ピペリジニル、モルホリニルまたはピペラジニルなどの環状アミノ環を形成する。「必要に応じた置換基」は、前述の置換基群の１つでよい。

本明細書中で使用する場合、用語「塩」には、塩基付加塩、酸付加塩および第４級塩が含まれる。酸性である本発明の化合物は、アルカリ金属水酸化物（例えば、水酸化ナトリウムおよびカリウム）、アルカリ土類金属水酸化物（例えば、水酸化カルシウム、バリウムおよびマグネシウム）などの塩基との；有機塩基（例えば、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、コリントリス（ヒドロキシメチル）アミノ−メタン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リシン、Ｎ−エチルピペリジン、ジベンジルアミンなど）との薬学的に許容される塩を含む塩を形成できる。塩基性であるそれらの化合物（Ｉ）は、無機酸（例えば、塩酸または臭化水素酸などのハロゲン化水素酸、硫酸、硝酸またはリン酸など）との、および有機酸（例えば、酢酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、グルタミン酸、乳酸、およびマンデル酸など）との薬学的に許容される塩を含む塩を形成できる。塩基性窒素を有するそれらの化合物（Ｉ）は、塩素イオン、臭素イオン、酢酸イオン、ギ酸イオン、ｐ−トルエンスルホン酸イオン、コハク酸イオン、ヘミコハク酸イオン、ナフタレン−ビススルホン酸イオン、メタンスルホン酸イオン、キシナホ酸イオンなどの薬学的に許容される対イオンを伴う第４級アンモニウム塩も形成できる。

１つまたは複数の現実のまたは潜在的なキラル中心を含む本発明の化合物は、不斉炭素原子の存在のため、各キラル中心でＲまたはＳの立体化学をもついくつかのジアステレオ異性体として存在できる。本発明には、このようなジアステレオ異性体のすべておよびそれらの混合物が含まれる。

式（Ｉ）の本発明の単量体化合物において、任意の適合性のある組合せで、原子Ｄは、ＯまたはＳでよいが、Ｏが一般に好ましい。

環Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、アリールまたはヘテロアリールの例として前に挙げた環のいずれか、特にフェニルおよび５または６個の環原子を有する単環式ヘテロアリールでよい。具体例には、２−および３−ピリジルなどのピリジル、またはピリミジン−２−イルなどのピリミジニルが含まれるが、現在のところ、Ａはフェニルであるのが好ましい。

Ｒ^１およびＲ^２は、式（Ｉ）に関して定義した水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_３−アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_３−アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_３−アルキニル、ヒドロキシまたはＣ_１〜Ｃ_３−アルコキシもしくはＣ_２〜Ｃ_３−アルケニルオキシを含む置換基型のいずれかから選択できる。このような置換基の具体例には、水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ、メチル、メトキシおよび−Ｃ≡ＣＨが含まれる。例えば、−ＡＲ^１Ｒ^２は、４−シアノフェニルまたは４−エチニルフェニルでよい。

Ｒ^３およびＲ^５も、式（Ｉ）に関して定義した置換基型のいずれかから選択できるが、本発明の化合物の１つの一般的に好ましい型において、Ｒ^５は水素であり、かつＲ^３は３−トリフルオロメチル、３−クロロまたは３−ブロモである。

現在のところ、本発明の単量体は、ＲおよびＲ^４置換基が結合領域から遠く離れて配置され、溶媒に向かって伸びている阻害薬としてＨＮＥと相互作用することができると考えられる。それゆえ、そのような基は、溶解性およびその他の薬物動態特性を調節するための部位を提供する。したがって、ＲおよびＲ^４は、広範囲に変化することができ、式（Ｉ）に関して式−［Ｘ］_ｍ−［Ａｌｋ^１］_ｐ−［Ｑ］_ｎ−［Ａｌｋ^２］_ｑ−［Ｘ^１］_ｋ−Ｚの基として定義される。その定義によれば、ｋ、ｍ、ｎ、ｐおよびｑは、すべて０でもよく、Ｚは水素でよく、その結果ＲおよびＲ^４は、それ自体水素でよい。しかし、多くの他のクラスのＲおよびＲ^４置換基は、該変数に対する値の異なる組合せを選択することによって包含される。

例えば、ＲまたはＲ^４は、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、ホルミル、アミノカルボニル、モノ−またはジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８−シクロアルキルカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルコキシカルボニル、Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルスルホニル）−アミノカルボニル、Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルスルホニル）−Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル）−アミノカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールカルボニルまたはヘテロシクロアルキルカルボニルから選択することができ、ここで、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルコキシカルボニル、ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルコキシ、ヒドロキシカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノカルボニル、アミノ、モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルカルボニルアミノ、シアノ、Ｎ−（モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル）−アミノカルボニル、Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルコキシ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル）−アミノカルボニルおよびハロゲンからなる群から選択される１〜３個の同一または異なる基で置換されていてもよい。

本発明の化合物の特定のサブクラスにおいて、Ｒ^４および／またはＲは、式−［Ｘ］_ｍ−［Ａｌｋ^１］_ｐ−［Ｑ］_ｎ−［Ａｌｋ^２］_ｑ−［Ｘ^１］_ｋ−Ｚの基であり、ここで、ｍは０であり、ｋ、ｐ、ｎおよびｑはそれぞれ１であり、Ｑは−Ｎ（Ｒ^Ａ）または−Ｎ^＋（Ｒ^Ａ）（Ｒ^Ｂ）−であり、Ｒ^Ａ、Ｒ^Ｂ、Ａｌｋ^１、Ａｌｋ^２、Ｘ_１およびＺは式（Ｉ）に関して定義した通りである。このサブクラスで、Ｘ^１は、例えば、−Ｏ−でよく、Ｚは、例えば必要に応じて置換されたフェニル、または５もしくは６個の環原子を有する単環式ヘテロアリールでよい。

本発明の化合物において、ＲおよびＲ^４の一方は、他方が水素以外の置換基であるなら、水素でよい。

ＲおよびＲ^４基の他のタイプは、式（ＶＩＩＩＡ）、（ＶＩＩＩＢ）または（ＶＩＩＩＣ）

（式中、Ｒ^４Ａは水素またはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、ｓは１または２である）を有する。

ＲおよびＲ^４のさらなるタイプは、式（ＩＸ）

を有し、式中、
Ｒ^４Ｂは、水素またはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、
Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅは、それぞれ、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、それらが結合している窒素は第４級であり、かつ正電荷を有し、さらには、Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅの任意の２つは、一緒になって、酸素または窒素から選択される第２のヘテロ原子を必要に応じて含む環を形成することができるか、あるいは、
Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅの１つは孤立電子対であり、他の基は上で定義した通りであり、かつそれらが結合している窒素は第３級であり、
ｖ１およびｖ２は、それぞれ独立に０〜５である。

ＲおよびＲ^４基の他のタイプは、以下

から選択される基であり、式中、
Ｒ^４Ｂは、水素またはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、
Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅは、それぞれ、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、それらが結合している窒素は第４級であり、かつ正電荷を有し、さらにはＲ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅの任意の２つは、一緒になって、酸素または窒素から選択される第２のヘテロ原子を必要に応じて含む環を形成することができるか、あるいは、
Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅの１つは孤立電子対であり、他の基は上で定義した通りであり、かつそれらが結合している窒素は第３級であり、
Ｒ^４ＦおよびＲ^４Ｉは、独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、
Ｒ^４ＧおよびＲ^４Ｈは、独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであるか、あるいは、Ｒ^４ＧおよびＲ^４Ｈは、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるさらなるヘテロ原子を含んでいてもよい５〜７個の環原子からなる単環式複素環を形成し、かつ
ｖ１およびｖ２は、それぞれ独立に０〜５である。

本発明の多量体化合物では、２、３または４分子の本発明の単量体化合物が、リンカー骨格を介して共有結合で連結される。リンカー骨格は、ＨＮＥ酵素と相互作用するうえで積極的な役割を演じる必要がなく、その役割は、１つまたは複数の単量体要素と酵素との間の結合性接触を可能にするだけである。それゆえ、リンカー骨格について広範な範囲の化学作用を考えることができる。さらに、単量体要素のリンカー骨格への結合点は、採用予定の特定リンカーの化学作用に従って選択することができる。現在のところ、２、３または４つの単量体分子が、式（Ｉ）で示されるそれらの各窒素原子を介して、ＲまたはＲ^４に連結されるようにリンカー骨格に連結されることが好ましい。

さらに、現在のところ、たった２つの単量体がそのように連結されることが好ましい。後者の場合、リンカー骨格は、例えば、該鎖中に２〜１２個の炭素原子を有する二価で直鎖の飽和または不飽和の炭化水素基でよく、ここで、１つまたは複数の炭素は、環中または各環中に３〜７個の環原子を有する二価の単環式または二環式の炭素環または複素環基によって、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｐ）−、−Ｎ^＋（Ｒ^Ｐ）（Ｒ^Ｑ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^Ａ−、−ＮＲ^ＡＣ（＝Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ_２）ＮＲ^Ａ−、−ＮＲ^ＡＳ（Ｏ_２）−、−ＮＲ^ＡＣ（＝Ｏ）ＮＲ^Ｂ−、−ＮＲ^ＡＣ（＝ＮＲ^Ａ）ＮＲ^Ｂ−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｄ）ＮＲ^Ｅ−、または−ＮＲ^ＥＣ（＝ＮＲ^Ｄ）−で置き換えられることができ、ここで、Ｒ^Ａ、Ｒ^Ｂ、Ｒ^ＤおよびＲ^Ｅは、独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルであり、かつＲ^ＰおよびＲ^Ｑは、独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、またはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、ＨＯ−（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）−、Ｒ^ＡＲ^ＢＮ−（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）−またはＨＯＣ（＝Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）−であるか、あるいは、Ｒ^ＡとＲ^Ｂ、またはＲ^ＤとＲ^Ｅ、またはＲ^ＰとＲ^Ｑが、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるさらなるヘテロ原子を含んでいてもよい５〜７個の環原子からなる単環式複素環を形成する。

リンカー骨格の１つまたは複数の−（ＣＨ_２）−の基が、二価の単環式または二環式の炭素環または複素環基で置き換えられている場合、前記の基は、例えば、次のもの

から選択できる。

リンカー骨格は、例えば、次の構造（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｇ）および（Ｅ）、

の１つを有することができる。

上記タイプの具体的なリンカー骨格には、本明細書中の二量体化合物の実施例中で提供されるものが含まれる。

かくして、本発明の多量体の１つの好ましいサブセットは、式Ｍ−Ｌ−Ｍ^１を有し、式中、Ｌは、例えばリンカー骨格として前に考察した類の二価のリンカー基であり、ＭおよびＭ^１は、それぞれ独立に、式（ＩＡ）

（式中、Ｄ、ＡおよびＲ^１〜Ｒ^５は、前に定義し考察した通りである）の基であり、好ましくは、ＭおよびＭ^１が同一である。

本発明の多量体の別の好ましいサブセットは、式Ｍ−Ｌ−Ｍ^１を有し、式中、Ｌは、例えばリンカー骨格として前に考察した類の二価のリンカー基であり、ＭおよびＭ^１は、それぞれ独立に、式（ＩＢ）

（式中、Ｄ、ＡおよびＲ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^５は、前に定義し考察した通りである）の基であり、ここでもまた、ＭおよびＭ^１が同一であることが一般には好ましい。

式（ＩＡ）および（ＩＢ）のこのような二量体化合物の具体例には、本明細書の実施例の化合物が含まれる。

本発明の化合物の治療上の有用性は、ヒト好中球エラスターゼの作用によって少なくとも部分的に介在されることが知られている任意の疾患に関する。例えば、本発明の化合物は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺気腫、肺炎および肺線維症を治療するのに有益であり得る。

本発明は、また、活性成分として本発明の化合物を含有する医薬製剤に関する。肺の炎症性疾患を予防および治療するために、他の化合物を本発明の化合物と組み合わせることができる。したがって、本発明は、また、治療上有効な量の本発明の化合物および１種または複数種の他の治療薬を含有する、肺の炎症性疾患を予防および治療するための医薬組成物に関する。

本発明の化合物との併用療法に適した治療薬には、（１）コルチコステロイド、例えば、フルチカゾンまたはブデソニド、（２）β２−アドレナリン受容体作用薬、例えばサルメテロールまたはフォルメテロール、（３）ロイコトリエン調節薬、例えば、モンテルカストまたはプランルカスト、（４）抗コリン薬、例えば、選択的ムスカリン−３（Ｍ３）受容体拮抗薬（チオトロピュームブロミドなど）、（５）ホスホジエステラーゼ−ＩＶ（ＰＤＥ−ＩＶ）阻害薬、例えば、ロフルミラストまたはシロミラスト、（６）コデインまたはデキストラモルファンなどの鎮咳薬、および（７）非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、イブプロフェンまたはケトプロフェンが含まれる。

第１活性成分と第２活性成分との重量比は、変えることができ、各成分の有効投与量によって決まる。一般に、それぞれの有効投与量が使用される。

本発明の化合物の予防的または治療的投与量の大きさは、もちろん、治療すべき状態の重症度の性質および個々の化合物およびその投与経路によって変化し、一般には、薬剤技術の分野で要求されるような臨床試験によって決定される。それは、また、個々の患者の年齢、体重および反応により変化する。一般に、１日当たり投与量の範囲は、単回または分割投与で、哺乳動物の体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇ、好ましくは１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇ、最も好ましくは１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜１０ｍｇの範囲内にある。一方、場合によっては、これらの限界の範囲を超える投与量を使用することが必要である可能性もある。

本発明の別の態様は、本発明の化合物および薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。用語「組成物」は、医薬組成物の場合、活性成分（群）および担体を構成する不活性成分（群）（薬学的に許容される賦形剤）を含有する製品、ならびに任意の２種以上の成分からなる組合せ、複合または凝集に、あるいは１種または複数種の成分の解離に、あるいは１種または複数種の成分のその他のタイプの反応または相互作用に直接または間接的に由来する任意の製品を包含すると解釈される。したがって、本発明の医薬組成物は、本発明の化合物、さらなる活性成分（群）および薬学的に許容される賦形剤を混合することによって作られる任意の組成物を包含する。

本発明の医薬組成物は、活性成分としての本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を含有し、薬学的に許容される担体および必要に応じてその他の治療用成分を含むこともできる。用語「薬学的に許容される塩」は、無機の塩基または酸および有機の塩基または酸を含む、薬学的に許容される非毒性の塩基または酸から調製される塩を指す。

任意の適切な投与経路を採用して、哺乳動物、特にヒトに有効な投与量の本発明の化合物を提供できる。治療的使用では、活性化合物を、任意の都合のよい適切なまたは効果的な経路で投与できる。適切な投与経路は、当業者に公知であり、経口、静脈内、直腸、非経口、局所、眼内、経鼻、口内および肺が含まれる。吸入による送達が好ましい。

吸入による投与に適した組成物は、公知であり、このような組成物での使用のために知られている担体および／または希釈剤を含むことができる。組成物は、０．０１〜９９重量％の活性化合物を含むことができる。好ましくは、単位投与量は、活性化合物を１μｇ〜１０ｍｇの量で含有する。

最も適切な投与量レベルは、当業者に公知の任意の適切な方法により決定できる。しかし、任意の個々の患者に対する具体的な量は、使用される具体的化合物の活性、患者の年齢、体重、食事、一般的健康状態および性別、投与時間、投与経路、***速度、他の薬物の使用、および治療を受けている疾患の重症度を含む種々の因子によって決まることが理解されよう。

吸入で送達する場合、活性化合物は、好ましくは微粒子の形態である。それらの微粒子は、噴霧乾燥、凍結乾燥およびミクロ化を含む各種の技術によって調製できる。

例を挙げれば、本発明の組成物は、ネブライザーからの送達のための懸濁液として、または例えば加圧式定量噴霧式吸入器（ＰＭＤＩ）中で使用するための液体噴射剤中のエアロゾルとして調製できる。ＰＭＤＩ中で使用するのに適した噴射剤は、当業者に公知であり、ＣＦＣ−１２、ＨＦＡ−１３４ａ、ＨＦＡ−２２７、ＨＣＦＣ−２２（ＣＣｌ２Ｆ２）およびＨＦＡ−１５２（ＣＨ４Ｆ２およびイソブタン）が含まれる。

本発明の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）を使用する送達のための乾燥粉末の形態である。多くのタイプのＤＰＩが知られている。

投与によって送達するための微粒子は、送達および放出を助ける賦形剤を用いて製剤することができる。例えば、乾燥粉末製剤では、微粒子を、ＤＰＩから肺への流入を助ける大きな担体粒子を用いて製剤できる。適切な担体粒子は公知であり、乳糖の粒子が含まれ、それらの粒子は、９０μｍを超える質量メディアン空気力学的直径を有することができる。

エアゾールをベースにした製剤の場合、好ましい組成物は、
本発明の化合物２４ｍｇ／キャニスター
レシチン、ＮＦＬｉｑ．Ｃｏｎｃ．１．２ｍｇ／キャニスター
トリクロロフルオロメタン、ＮＦ４．０２５ｇ／キャニスター
ジクロロジフルオロメタン、ＮＦ１２．１５ｇ／キャニスター、である。

本発明の化合物は、本発明の化合物が有用である疾患または状態の治療／予防／抑制または改善で使用される他の薬物と組み合わせて使用できる。このような他の薬物は、本発明の化合物と同時にまたは逐次的に、１つの経路でかつそのために通常的に使用される量で投与できる。本発明の化合物を１種または他の複数種の薬物と同時に使用する場合には、本発明の化合物に加えてこのような他の薬物を含有する医薬組成物が好ましい。したがって、本発明の医薬組成物には、本発明の化合物に加えて１種または複数種の他の活性成分をも含有する組成物が含まれる。

本発明の薬剤は、吸入形態で投与できる。エアゾールの発生は、例えば、圧力駆動ジェットアトマイザーまたは超音波アトマイザーを使用して、好ましくは噴射剤駆動式定量エアゾールまたは例えば吸入カプセルまたはその他の「乾燥粉末」送達システムからの噴射剤を含まないミクロ化活性化合物形態の投与を使用して行うことができる。

活性化合物は、使用する吸入器システムに応じて記載されているように投与することができる。活性化合物に加え、投与形態は、さらに、例えば、噴射剤（例えば、定量エアゾールの場合のＦｒｉｇｅｎ）、界面活性物質、乳化剤、安定剤、保存剤、風味料、増量剤（例えば、粉末吸入器の場合の乳糖）などの賦形剤、あるいは適切ならさらなる活性化合物を含有することができる。

吸入の目的のためには、患者に適切である吸入技術を使用して最適粒子径のエアゾールを発生し投与できる多数のシステムが利用可能である。特に粉末吸入器の場合には、アダプター（スペーサー、エクスパンダー）および梨型容器（例えばＮｅｂｕｌａｔｏｒ（登録商標）、Ｖｏｌｕｍａｔｉｃ（登録商標））、および定量エアゾール用のパフ噴霧（ｐｕｆｆｅｒｓｐｒａｙ）を噴出する自動デバイス（Ａｕｔｏｈａｌｅｒ（登録商標））の使用に加え、いくつかの技術的解決法を利用可能である（例えば、Ｄｉｓｋｈａｌｅｒ（登録商標）、Ｒｏｔａｄｉｓｋ（登録商標）、Ｔｕｒｂｏｈａｌｅｒ（登録商標）または例えば欧州特許公開第０５０５３２１号に記載されているような吸入器）。
（合成方法）
本発明の化合物は、適切な材料を使用して以下のスキームおよび実施例の方法に従って調製することができ、さらに、以下の具体例で例示される。さらに、本明細書中に含まれる開示によって説明される方法を利用することによって、当業者は、本発明で特許請求される本発明のさらなる化合物を容易に調製できる。しかし、実施例中で例示される化合物は、本発明と考えられる唯一の部類を構成すると解釈すべきでない。実施例は、さらに、本発明の化合物の調製についての詳細を例示する。当業者は、次の調製方法の条件および工程に関する周知の変形形態を使用してこれらの化合物を調製できることを容易に理解するであろう。

本発明の化合物は、それらの薬学的に許容される塩、例えば、本明細書中で前述した塩などの形態で単離できる。単離された塩に対応する遊離の酸または塩基の形態は、水酸化ナトリウム、炭酸カリウム、酢酸および塩酸などの適切な塩基または酸を用いる中和、および遊離された遊離の酸または塩基の有機溶媒中への抽出、それに続く蒸発によって生成させることができる。この方法で単離された遊離形態は、さらに、有機溶媒中への溶解、それに続く適切な酸または塩基の添加、それに続く蒸発、沈殿、または再結晶によって別の薬学的に許容される塩に変換できる。

本発明の化合物の調製で使用される中間体中の反応性官能基（例えば、ヒドロキシ、アミノ、チオまたはカルボキシ）を、化合物の形成につながる反応中でのそれら官能基の望ましくない関与を回避するために、保護することが必要である場合がある。通常の保護基、例えば、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｗｕｔｓの著作「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｇｒｏｕｐｓｉｎｏｒｇａｎｉｃｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ、１９９９年に記載の保護基を使用できる。

本発明の化合物は、スキーム１および２に示す経路に従って調製できる。

以下の実施例により本発明を説明する。
（全般的な実験詳細）
すべての溶媒および市販試薬は、受け入れたものをそのまま使用した。生成物をＩｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳＰＥＳｉＩＩカートリッジを使用して精製した場合、「ＩｓｏｌｕｔｅＳＰＥＳｉカートリッジ」とは、粒子形状が不規則で、５０μｍの平均径および公称６０Åの多孔度を有する未結合性活性シリカを含む充填済みポリプロピレンカラムを指す。Ｉｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳＣＸ−２カートリッジを使用した場合、「ＩｓｏｌｕｔｅＳＣＸ−２カートリッジ」とは、非エンドキャップ型のプロピルスルホン酸で官能化されたシリカの強陽イオン交換吸着剤を含む充填済みポリプロピレンカラムを指す。「ＩｓｏｌｕｔｅＡｌ−Ｎカートリッジ」とは、５０〜２００μｍの平均粒子径、１２０Åの細孔直径を有する中性アルミナを含む充填済みポリプロピレンカラムを指す。
分取ＨＰＬＣの条件：
ＨＰＬＣシステム１：
Ｃ１８−逆相カラム（粒子径が７μｍの１００×２２．５ｍｍ内径、Ｇｅｎｅｓｉｓカラム）、５ｍＬ／分の流量で、Ａ（水＋０．１％ギ酸）とＢ（アセトニトリル＋０．１％ギ酸）とをＢが１％／分で増加するグラジエントで溶離。２３０ｎｍでＵＶ検出。特記した場合、化合物はギ酸塩として得られた。
ＨＰＬＣシステム２：
Ｃ１８−逆相エンドキャップカラム（粒子径が５μｍの２５０×２１．２ｍｍＧｅｍｉｎｉカラム）、代表的には１７ｍＬ／分の流量で、Ａ（水＋０．１％ギ酸）とＢ（アセトニトリル＋０．１％ギ酸）とをＢが１％／分で増加するグラジエントで溶離。２５４ｎｍでＵＶ検出。特記した場合、化合物はギ酸塩として得られた。
ＨＰＬＣシステム３：
Ｃ１８−逆相エンドキャップカラム（粒子径が５μｍの２５０×２１．２ｍｍＧｅｍｉｎｉカラム）、代表的には１７ｍＬ／分流量で、Ａ（水）とＢ（アセトニトリル）とをＢが１％／分で増加するグラジエントで溶離。２５４ｎｍでＵＶ検出。
ＨＰＬＣシステム４：
Ｃ１８−逆相エンドキャップカラム（粒子径が５μｍの２５０×２１．２ｍｍＧｅｍｉｎｉカラム）、代表的には１７ｍＬ／分の流量で、Ａ（水）とＢ（ＭｅＯＨ）とをＢが１％／分で増加するグラジエントで溶離。２５４ｎｍでＵＶ検出。
ＨＰＬＣシステム５：
Ｃ１８−逆相カラム（粒子径が５μｍの２５０×２１．２ｍｍＬｕｎａカラム）、１５ｍＬ／分の流量で、Ａ（水＋０．１％ギ酸）とＢ（アセトニトリル＋０．１％ギ酸）とをＢが１％／分で増加するグラジエントで溶離。２５４ｎｍでＵＶ検出。特記した場合、化合物はギ酸塩として得られた。
ＬＣ−ＭＳ方法１
Ｃ１８−逆相カラム（粒子径が３μｍの３０×４．６ｍｍＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａ）を備えたＷａｔｅｒｓＰｌａｔｆｏｒｍＬＣ、Ａ（水＋０．１％ギ酸）とＢ（アセトニトリル＋０．１％ギ酸）とで溶離。グラジエント：
グラジエント−時間流量（ｍＬ／分）％Ａ％Ｂ
０．００２．０９５５
０．５０２．０９５５
４．５０２．０５９５
５．５０２．０５９５
６．００２．０９５５
検出−ＭＳ、ＥＬＳ、ＵＶ（インラインのＵＶ検出器を備えたＭＳに１００μＬのスプリットで）
ＭＳのイオン化法−エレクトロスプレー（陽および陰イオン）
ＬＣ−ＭＳ方法２
Ｃ１８−逆相カラム（粒子径が３μｍの３０×４．６ｍｍＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａ）を備えたＷａｔｅｒｓＭｉｃｒｏｍａｓｓＺＭＤ、Ａ（水＋０．１％ギ酸）とＢ（アセトニトリル＋０．１％ギ酸）とで溶離。グラジエント：
グラジエント−時間流量（ｍＬ／分）％Ａ％Ｂ
０．００２．０９５５
０．５０２．０９５５
４．５０２．０５９５
５．５０２．０５９５
６．００２．０９５５
検出−ＭＳ、ＥＬＳ、ＵＶ（インラインのＵＶ検出器を備えたＭＳに１００μＬのスプリットで）
ＭＳのイオン化法−エレクトロスプレー（陽および陰イオン）
ＬＣ−ＭＳ方法３
Ｃ１８−逆相カラム（粒子径が５μｍの１００×３．０ｍｍＨｉｇｇｉｎｓＣｌｉｐｅｕｓ）を備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓＰｌａｔｆｏｒｍＬＣＴ、Ａ（水＋０．１％ギ酸）とＢ（アセトニトリル＋０．１％ギ酸）とで溶離。グラジエント：
グラジエント−時間流量（ｍＬ／分）％Ａ％Ｂ
０．００１．０９５５
１．００１．０９５５
１５．００１．０５９５
２０．００１．０５９５
２２．００１．０９５５
２５．００１．０９５５
検出−ＭＳ、ＥＬＳ、ＵＶ（インラインのＵＶ検出器を備えたＭＳに１００μＬのスプリットで）
ＭＳのイオン化法−エレクトロスプレー（陽イオン）
ＬＣ−ＭＳ方法４
Ｃ１８−逆相カラム（粒子径が５μｍの１００×３．０ｍｍＨｉｇｇｉｎｓＣｌｉｐｅｕｓ）を備えたＷａｔｅｒｓＭｉｃｒｏｍａｓｓＺＱ２０００、Ａ（水＋０．１％ギ酸）とＢ（アセトニトリル＋０．１％ギ酸）とで溶離。グラジエント：
グラジエント−時間流量（ｍＬ／分）％Ａ％Ｂ
０．００１．０９５５
１．００１．０９５５
１５．００１．０５９５
２０．００１．０５９５
２２．００１．０９５５
２５．００１．０９５５
検出−ＭＳ、ＥＬＳ、ＵＶ（インラインのＵＶ検出器を備えたＭＳに１００μＬのスプリットで）
ＭＳのイオン化法−エレクトロスプレー（陽イオン）
実験の部で使用される省略形
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー
ＩＭＳ＝工業用メチル化スピリット
ＲＴ＝室温
Ｒｔ＝保持時間
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
次の中間体は、示した参照文献に従って調製できる。

（中間体１４）

ポリリン酸（１７．２ｇ）をＴＨＦ（９０ｍＬ）に懸濁し、３，５−ジフルオロフェニル尿素（５．４０ｇ、３１．４ミリモル）、４−シアノベンズアルデヒド（４．９４ｇ、３７．６ミリモル）およびアセト酢酸エチル（３．９７ｍＬ、３１．４ミリモル）を添加しながら機械的に撹拌した。生じた混合物を１７時間加熱還流し、次いで、室温に４８時間放置した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を水とＥｔＯＡｃとの間に分配させた。有機層を、水、炭酸ナトリウム水溶液、水、次いで食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）、濾過、濃縮した。生じたフォームを、ＤＣＭで負荷し、１７．５〜２０〜２５％ＥｔＯＡｃ／イソヘキサンで溶離するＢｉｏｔａｇｅ（商標）フラッシュクロマトグラフィーカートリッジ（９０ｇ）で２つのバッチに分けて精製した。かくして得られたフォームをイソヘキサン／Ｅｔ_２Ｏと共に磨り潰し、次いで、濾過により白色固体として集め、２：１のイソヘキサン：Ｅｔ_２Ｏでの１回の置換洗浄にかけ、真空オーブン中で乾燥した。
収量：６．６３ｇ（５３％）。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝３．５５分、ｍ／ｚ＝３９８［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体１５）

中間体１５は、４−ヨードベンズアルデヒド、アセト酢酸エチルおよび３−（トリフルオロメチル）フェニル尿素から中間体１４の調製で使用したのと同様の方法を使用して調製した。
収率：（２５％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝４．１７分、ｍ／ｚ＝５３１［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体１６）

中間体１（５．００ｇ、１１．７ミリモル）をクロロホルム（１４０ｍＬ）に溶解し、撹拌しながら臭素（１．８７ｇ、１１．７ミリモル）を滴下した。３０分後、さらに数滴の臭素を橙色が残存するまで添加した。揮発物を蒸発させると黄色フォームが得られた。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．８２分、ｍ／ｚ＝５０８／５１０［Ｍ＋Ｈ］^＋
次の中間体を同様の方法で調製した。

（中間体２２）

中間体１３（３２ｍｇ、０．０２９ミリモル）をクロロホルム（２ｍＬ）に溶解し、臭素（４滴）を添加した。溶液を室温で１時間撹拌した後、揮発物を蒸発させた。クリーム色のフォームとして生成物を得た。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．３５分、ｍ／ｚ＝１１８２［Ｍ］^＋
次の中間体を同様の方法で調製した。

（中間体２９）

中間体１（１．００ｇ、２．３３１ミリモル）を無水ＤＭＦ（２５ｍＬ）に溶解し、溶液をアルゴン下で−１０℃まで冷却した。水素化ナトリウム（６０％／ミネラルオイル懸濁物）（９３ｍｇ、２．３３１ミリモル）を添加し、反応混合物を、発泡が止まるまで撹拌した。Ｎ−Ｂｏｃ−３−ブロモプロピルアミン（６１０ｍｇ、２．５６３ミリモル）を添加し、０℃でさらに２．５時間撹拌を継続した後、飽和塩化アンモニウム水（６０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、水溶液をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）でさらに抽出した。有機抽出物を合わせ、水（５０ｍＬ）および飽和食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、蒸発させた。残留物を、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ペンタンで溶離するＩｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳｉＩＩカートリッジで精製して淡黄色オイルとして生成物を得た。
収量：７８３ｍｇ（５７％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝４．３１分、ｍ／ｚ＝５８５［Ｍ−Ｈ］⁻
（中間体３０）

中間体２９（７７６ｍｇ、１．３２ミリモル）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２３６ｍｇ、１．３２ミリモル）を添加した。溶液を室温で１．５時間撹拌し、次いで、混合物を、ＤＣＭ（８０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）および食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）した。蒸発させると淡黄色ガムが得られた。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝４．３６分、ｍ／ｚ＝５６５／５６７［Ｍ−Ｂｏｃ＋２Ｈ］^＋
（中間体３１）

中間体３０（７３１ｍｇ、１．０９９ミリモル）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に溶解し、炭酸水素ナトリウム（２７７ｍｇ、３．２９７ミリモル）および２Ｍエチルアミン／ＴＨＦ（０．８ｍＬ、１．６５ミリモル）を添加した。混合物を、８０℃で３．５時間加熱し、放冷し、濾過し、蒸発させた。残留物を、ＤＣＭ（７０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間に分配させた。有機層を、分離し、蒸発させ、粗生成物を、４０〜８０％ＥｔＯＡｃ／ペンタンで溶離するＩｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳｉＩＩカートリッジ（１０ｇ）で精製してクリーム色のフォームとして生成物を得た。
収量：２９７ｍｇ（４６％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．７１分、ｍ／ｚ＝５８２［Ｍ−Ｈ］⁻
（中間体３２）

中間体３１（２９２ｍｇ、０．５０１ミリモル）を２０％ＴＦＡ／ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解した。２時間後、揮発物を蒸発させ、残留物をＭｅＯＨに溶解して、ＭｅＯＨで前処理されたＩｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ）に負荷した。ＭｅＯＨでフラッシュ洗浄した後、生成物を２Ｍアンモニア／ＭｅＯＨで溶離した。ＵＶ活性のある画分を蒸発させると淡黄色ガムとして純粋な生成物が得られた。
収量：２２１ｍｇ（９１％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝２．３３分、ｍ／ｚ＝４８４［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体３３）

中間体３２（２１４ｍｇ、０．４４３ミリモル）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、１，１’−チオカルボニルジピリドン（５１ｍｇ、０．２２２ミリモル）を添加した。溶液を室温で４８時間放置し、次いで、樹脂に結合したアミンで１５分間処理した。濾過した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物を、０〜５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃで溶離するＩｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳｉＩＩカートリッジ（５ｇ）で精製した。生成物を含む画分を合わせて蒸発させ、残留物をＭｅＯＨに溶解し、Ｉｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ）に通し、さらにメタノールでフラッシュ洗浄した。蒸発させると白色フォームが得られた。
収量：１６０ｍｇ（３６％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．９１分、ｍ／ｚ＝１００９［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体３４）

中間体３４は、中間体１およびブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチルから、中間体２９の合成で使用したのと同様の方法を使用して調製した。
収率：（８０％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝４．３１分、ｍ／ｚ＝４８８［Ｍ＋Ｈ−ｔＢｕ］^＋
（中間体３５）

中間体３５は、中間体３４から、中間体３０の調製で使用したのと同様の方法を使用して調製した。
収率：（４１％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝４．４１分、ｍ／ｚ＝５６６／５６８［Ｍ＋Ｈ−ｔＢｕ］^＋
（中間体３６）

中間体３５（４６７ｍｇ、０．７５１ミリモル）のアセトニトリル（１５ｍＬ）溶液をＮ，Ｎ−ビス（３−アミノプロピル）メチルアミン（５４ｍｇ、０．３７５ミリモル）および炭酸水素ナトリウム（２５２ｍｇ、３．００ミリモル）で処理した。反応物を８０℃で３．５時間加熱した。混合物を放冷した後、濾過し、濾液を蒸発させた。Ｉｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳｉＩＩカートリッジ（１０ｇ）を使用し、１〜２０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃで溶離するクロマトグラフィーにより、白色固体として純粋な生成物を得た。
収量：１８２ｍｇ（４３％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．２２分、ｍ／ｚ＝１１３６［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体３７）

中間体３６（１７７ｍｇ、０．１５６ミリモル）をＤＣＭ（３０ｍＬ）とヨードメタン（８ｍＬ）との混合物に溶解した。室温で３日間放置した後、揮発物を蒸発させ、残留物をアセトニトリル（１３ｍＬ）に溶かした。ヨードメタン（４ｍＬ）および炭酸水素ナトリウム（３９ｍｇ、０．４６８ミリモル）を添加し、混合物を還流下に８０℃で加熱した。１７時間後、揮発物を蒸発させ、残留物をＤＣＭ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間に分配させた。有機相を分離し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）した。蒸発させるとベージュ色のフォームが得られた。
収量：１８１ｍｇ（９１％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．２０分、ｍ／ｚ＝１１５０［Ｍ］^＋
（中間体３８）

中間体３８は、中間体１６および０．５当量の（２−アミノエチル）｛２−［（２−アミノエチル）ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ］エチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルから、中間体３６の合成で使用したのと同様の方法で調製した。
収率：（６１％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．５８分、ｍ／ｚ＝１００９［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体３９）

中間体３９中のｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル保護基は、中間体３１の脱保護について説明したのと類似の方法を使用して除去した。
収率：（８９％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝２．１７分、ｍ／ｚ＝９０９［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体４０）

中間体３９（２１９ｍｇ、０．２４１ミリモル）と１，１’−チオカルボニルジピリドン（２８ｍｇ、０．１２１ミリモル）とのＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を室温で２４時間放置した。１，１’−チオカルボニルジピリドンのさらなる部分（２０ｍｇ、０．０８６ミリモル）を添加し、４時間後、反応混合物をアミン樹脂で処理した。混合物を、１５分間撹拌し、濾過し、ＭｅＯＨでコンディショニングしたＩｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳＣＸ−２カートリッジ（１０ｇ）に負荷した。カートリッジをＭｅＯＨでフラッシュ洗浄し、溶出液を蒸発させた。白色固体を、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃで溶離するＩｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳｉＩＩカートリッジ（１０ｇ）でのクロマトグラフィーにかけた。蒸発させると白色固体が得られた。
収量：１５０ｍｇ（６６％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．００分、ｍ／ｚ＝９５１［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体４１）

実施例２３の化合物（１３０ｍｇ、０．１１７ミリモル）のトリエチルアミン（０．５ｍＬ）とＤＭＦ（０．５ｍＬ）との溶液を脱気した後、（トリメチルシリル）アセチレン（３４μＬ、０．２３５ミリモル）、ヨウ化銅（Ｉ）（１．７ｍｇ、３モル％）およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（８．４ｍｇ、５モル％）を添加し、次いで、アルゴン下に１１５℃で２時間加熱撹拌した。冷却した混合物を希硫酸（２５ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。これらの抽出物を食塩水（１０ｍＬ）で洗浄した後、有機相を単離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、濾過し、真空で濃縮した。Ｉｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳｉＩＩカートリッジを使用し、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭのグラジエントで溶離して精製を達成した。生成物はクリーム色の固体として単離された。
収量：４８ｍｇ（３９％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝３．３６分、ｍ／ｚ＝１０５０［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体４２）

中間体１６（２００ｍｇ、０．３９４ミリモル）と（３−アミノブチル）メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３７０ｍｇ、１．８３ミリモル）とのアセトニトリル（１０ｍＬ）溶液を４０℃で２時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残留物をＭｅＯＨに溶解して、ＭｅＯＨでコンディショニングされたＩｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ）に負荷した。生成物をＭｅＯＨでフラッシュ洗浄した。
収量：２２５ｍｇ（９８％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．６３分、ｍ／ｚ＝４８４［Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ］^＋
（中間体４３）

中間体４２を、中間体３１と同様の方法で脱保護した。
収率：（９４％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝２．１１分、ｍ／ｚ＝４８４［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体４４）

中間体３（２１９ｍｇ、０．３７９ミリモル）をアセトニトリル（１３ｍＬ）に溶解し、２Ｍメチルアミン／ＴＨＦ溶液（２ｍＬ）を添加した。溶液を５０℃で３時間加熱し、次いで、溶液を室温で３日間放置した。揮発物を蒸発させ、残留物をＤＣＭ（１００ｍＬ）と水（８０ｍＬ）との間に分配させた。有機層を分離し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）した。蒸発させると白色のフォームが得られた。
収量：１７０ｍｇ（８５％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝２．６７分、ｍ／ｚ＝５２９［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体４５）

中間体４４（１６５ｍｇ、０．３１３ミリモル）とフェノキシプロピルブロミド（６７ｍｇ、０．３１３ミリモル）とのアセトニトリル（１０ｍＬ）溶液を炭酸水素ナトリウム（５３ｍｇ、０．６２６ミリモル）で処理し、反応混合物を８０℃で４日間加熱した。溶液を、ＭｅＯＨでコンディショニングしたＩｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ）上にデカントした。カートリッジをＭｅＯＨでフラッシュ洗浄し、次いで、生成物を２ＭＮＨ_３／ＭｅＯＨで溶離した。蒸発させると無色のガムが得られた。
収量：１０５ｍｇ（５１％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２．９８分、ｍ／ｚ＝６６３［Ｍ＋Ｈ］^＋
（中間体４６）

中間体４５（１００ｍｇ、０．１５１ミリモル）のクロロホルム（６ｍＬ）溶液を臭素（１０μＬ）で処理した。１時間後、臭素のさらなる部分（２０μＬ）を添加した。揮発物を蒸発させてジ臭素化生成物を得た。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．１２分、ｍ／ｚ＝８２１［Ｍ＋Ｈ］^＋
（実施例１）

中間体１６（２００ｍｇ、０．３９４ミリモル）のアセトニトリル（５ｍＬ）溶液に、２Ｍメチルアミン／ＴＨＦ溶液（１９７μＬ、０．３９４ミリモル）および炭酸水素ナトリウム（１６５ｍｇ、１．９７ミリモル）を添加した。溶液を８０℃で１６時間加熱し、次いで、混合物を濾過した。生成物をＨＰＬＣシステム１で精製し、純粋物を含む画分を合わせ、凍結乾燥した。生成物が黄色固体として得られた。
収量：６２ｍｇ（３８％）
ＬＣＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝８．６７分、ｍ／ｚ＝４１３［Ｍ＋Ｈ］^＋
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 2.73 (s, 3H), 3.78 (d, 1H), 3.83 (d, 1H), 5.44 (d, 1H), 7.67-7.82 (m, 5H), 7.85-7.90 (m, 2H), 7.91 (m, 1H), 8.19 (d, 1H) ppm.
次の実施例化合物を中間体１６およびアミンから同様の方法で調製した。

（実施例８）

ヘキサメチレンジアミン（０．１９７ミリモル）のアセトニトリル（５ｍＬ）溶液に、中間体１６（２００ｍｇ、０．３９４ミリモル）および炭酸水素ナトリウム（１６５ｍｇ、１．９７ミリモル）を添加し、反応混合物を８０℃で１６時間加熱した。混合物を室温まで冷却し、次いで、溶液を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物をＨＰＬＣシステム１で精製した。生成物を含む画分を合わせ、凍結乾燥した。生成物は白色固体として得られた。
収量：５０ｍｇ（２９％）
ＬＣＭＳ（方法３）：ｍ／ｚ＝８７９［Ｍ＋Ｈ］^＋
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1.09 (br s, 4H); 1.29 (br s, 4H); 3.02-3.20 (m, 4H); 3.79 (s, 4H); 5.44 (d, 2H); 7.68-7.92 (m, 16H); 8.19 (d, 2H) ppm.
実施例８に類似の方法で、表記の中間体および適切なジアミンから次の化合物を調製した。

（実施例２４）

中間体２８のアセトニトリル（５ｍＬ）溶液に、ＮａＨＣＯ_３（９２ｍｇ、１．１０ミリモル）および２Ｍエチルアミン／ＴＨＦ（２２０μＬ、０．４４ミリモル）を添加した。反応混合物を８０℃で３．５時間加熱した。さらなる量の２Ｍエチルアミン／ＴＨＦ（２２０μＬ、０．４４ミリモル）を添加し、混合物を８０℃で４時間加熱した。混合物を濾過し、揮発物を蒸発させた。ＨＰＬＣシステム１を使用して粗生成物を精製し、画分を合わせ、凍結乾燥して生成物を得た。ＨＰＬＣシステム１を使用して生成物をさらに精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥して、クリーム色の固体として生成物を得た。
収量：１６ｍｇ（７％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝８．６９分、ｍ／ｚ＝１０６４．０６［Ｍ］^＋
同様の方法で次の実施例化合物を調製した。

（実施例３０）

中間体２３（１９５ｍｇ、０．１４６ミリモル）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ_３（６１ｍｇ、０．７３ミリモル）および２Ｍエチルアミン／ＴＨＦ（１．５ｍＬ、２．９１７ミリモル）を添加した。反応混合物を、８０℃で４時間加熱し、次いで、濾過し、蒸発させた。残留物をＭｅＯＨ（１２ｍＬ）に溶解し、Ｋ_２ＣＯ_３（２４２ｍｇ、１．７５ミリモル）の水（５ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温で撹拌し、３０分後、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）を添加した。有機溶液を単離し、食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、蒸発させた。粗生成物を、ＨＰＬＣシステム１を使用して精製し、凍結乾燥して、淡クリーム色の固体として生成物を得た。
収量：４９ｍｇ（３１％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝８．９６分、ｍ／ｚ＝１０７８．０８［Ｍ＋Ｈ］^＋
（実施例３１）

中間体４１（４５ｍｇ、０．０４３ミリモル）のＴＨＦ（２ｍＬ）撹拌溶液に、室温でテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド溶液（１Ｍ／ＴＨＦ、４５μＬ、０．０４５ミリモル）を添加した。１．５時間後、溶媒を真空で除去し、水（２５ｍＬ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。これらの抽出物を食塩水（１０ｍＬ）で洗浄した後、有機相を単離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、濾過し、真空で濃縮した。Ｉｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳｉＩＩカートリッジを使用し、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭのグラジエントを使用して精製すると、クリーム色の固体が得られた。ＨＰＬＣシステム２を使用してさらに精製し、続いて、ＭｅＯＨで通液洗浄したＳＣＸ−２カートリッジを使用して単離した後、生成物を２Ｍアンモニア／ＭｅＯＨで回収し、オフホワイトの固体として標題化合物を得た。
収量：１７ｍｇ（４３％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝８．５３分、ｍ／ｚ＝９０６．２８［Ｍ＋Ｈ］^＋
（実施例３２）

実施例１７の化合物（５０ｍｇ、０．０５５ミリモル）のアセトニトリル（２ｍＬ）溶液に、過剰のヨードメタン（５００μＬ）および炭酸水素ナトリウム（１４ｍｇ、０．１６ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次いで、真空で蒸発させた。粗生成物をＨＰＬＣシステム１で精製した。生成物を含む画分を合わせ、凍結乾燥した。
収量：３１ｍｇ（５４％）
ＬＣＭＳ（方法３）：ｍ／ｚ＝９２２．０８［Ｍ］^＋
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1.71 (br m, 4H); 2.82 (s, 6H); 2.99-3.30 (m, 8H); 3.81 (s, 4H); 5.40 (d, 2H); 7.61-7.90 (m, 16H); 8.21 (d, 2H) ppm.
同様の方法を使用して次の実施例化合物を調製した。

（実施例３８）

中間体２８（３４７ｍｇ、０．２５６ミリモル）およびＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（１３５ｍｇ、１．５３６ミリモル）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に溶解し、炭酸水素ナトリウム（１９３ｍｇ、２．３０ミリモル）を添加した。反応混合物を８０℃で５時間加熱した後、それを濾過して蒸発させた。粗生成物を、ＨＰＬＣシステム１を使用して精製し、純粋な画分を合わせ、凍結乾燥して淡クリーム色の固体として二ギ酸塩を得た。
収量：４５ｍｇ（１４％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝５．８１分、ｍ／ｚ＝５７５．７９［Ｍ］^２＋／２
（実施例３９）

中間体３３（１５５ｍｇ、０．１５４ミリモル）をＩＭＳ（２０ｍＬ）に溶解し、ヨードメタン（４ｍＬ）を添加した。溶液を室温で３日間放置した。揮発物を蒸発させ、残留物を２Ｍアンモニア／ＥｔＯＨ（７ｍＬ）に再溶解した。反応物を５０℃で４８時間加熱し、濃縮し、残留物を、ＨＰＬＣシステム１を使用して精製し、凍結乾燥して白色固体として生成物を得た。
収量：３５ｍｇ（２３％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝９．４４分、ｍ／ｚ＝９９２．０４［Ｍ＋Ｈ］^＋
（実施例４０）

実施例４０の化合物は、中間体２４および（２−アミノエチル）トリメチルアンモニウムクロリド塩酸塩から、実施例３８の合成で使用したのと同様の方法で調製した。粗生成物を、ＨＰＬＣシステム１を使用して精製し、凍結乾燥して白色固体を得た。
収率：（２０％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝６．１７分、ｍ／ｚ＝５３９．８６［Ｍ］^２＋／２
（実施例４１）

中間体３７（１７５ｍｇ、０．１３７ミリモル）をＴＦＡ（５ｍＬ）とＤＣＭ（１５ｍＬ）との混合物で処理した。溶液を室温で３時間放置し、次いで、揮発物を蒸発させた。残留物を少量のＤＣＭに溶解し、ジエチルエーテルを添加した。沈殿したクリーム色の固体を濾過、乾燥した。
収量：１５０ｍｇ（９５％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝８．３９分、ｍ／ｚ＝１０３８．０９［Ｍ］^＋
（実施例４２）

実施例４１の化合物（１３０ｍｇ、０．１３３ミリモル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（３０ｍｇ、０．３９９ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（１４６μＬ、１．１３ミリモル）をＤＭＦ（７ｍＬ）に溶解し、ＨＡＴＵ（９４ｍｇ、０．２４９ミリモル）を添加した。溶液を室温で３０分間放置し、ＤＭＦを蒸発させた。残留物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ（３×８０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を蒸発させると淡黄色のガムが得られ、これを、ＨＰＬＣシステム１を使用して精製した。純粋な画分を凍結乾燥して、白色固体として二ギ酸塩を得た。
収量：９６ｍｇ（６１％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝５．９９分、ｍ／ｚ＝５８９．７５［Ｍ］^２＋／２
（実施例４３）

実施例４３の化合物は、中間体４０から実施例３９の合成で使用したのと同様の方法を使用して調製した。生成物を、ＨＰＬＣ生成物システム１を使用して精製し、ギ酸塩として生成物を得た。
収率：（２０％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝８．０３分、ｍ／ｚ＝９３４．４７［Ｍ＋Ｈ］^＋
（実施例４４）

実施例１７の化合物（６．２８ｇ、６．９２ミリモル）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に溶解し、３０％ブロモメタン／アセトニトリル溶液（６０ｍＬ）を添加した。溶液を、密封金属管中、８０℃で加熱した。２４時間後、溶媒をほぼ半量まで減少させ、次いで、水で希釈した。溶液を凍結乾燥してクリーム色の固体を得た。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝７．９２分、ｍ／ｚ＝９２２．３７［Ｍ］^＋
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1.71 (br m, 4H); 2.82 (s, 6H); 2.99-3.30 (m, 8H); 3.81 (s, 4H); 5.40 (d, 2H); 7.61-7.90 (m, 16H); 8.21 (d, 2H) ppm.
同様の方法で次の実施例化合物を調製した。

（実施例４８）

実施例１７の化合物（１５０ｍｇ、０．１６５ミリモル）および２−ブロモエタノール（４２０ｍｇ、１．６５ミリモル）をアセトニトリル（２ｍＬ）に溶解し、溶液を８０℃で１２０時間加熱した。揮発物を蒸発させ、生成物を、ＨＰＬＣシステム３を使用して精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥してクリーム色の固体を得た。
収量：４２ｍｇ（２５％）
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝７．６７分、ｍ／ｚ＝９５２．３４［Ｍ］^＋
中間体１７およびアルキルハライドから同様の方法を使用して次の実施例化合物を調製した。

（実施例５１）

コハク酸（５．９ｍｇ、０．０４９９ミリモル）の水（２ｍＬ）溶液を、酸化銀（Ｉ）（１１．６ｍｇ、０．０４９９ミリモル）を含むチューブに添加した。混合物を暗所で１７時間撹拌した後、実施例４４の化合物（１００ｍｇ、０．０９９７ミリモル）のＴＨＦ（２ｍＬ）とアセトニトリル（０．５ｍＬ）との溶液を添加した。撹拌を３日間継続し、次いで、混合物を濾過した。濾液を蒸発させ、残留物をＨＰＬＣシステム３で精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥して淡黄色固体を得た。
収量：２９ｍｇ（３０％）
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝７．７０分、ｍ／ｚ＝９２２．３３［Ｍ］^＋
1H NMR (400 MHz, MeOD): δ = 1.84 (br m, 8H); 2.45 (4H, s); 2.92 (s, 12H); 3.14 (m, 8H); 3.30 (m, 8H); 3.91 (ｍ、溶媒で部分的に交換される); 5.51 (s, 4H); 7.64-7.82 (m, 32H) ppm.
同様の方法で次の化合物を調製した。

ＮＭＲデータ：
実施例５２
1H NMR (400 MHz, MeOD): δ = 1.84 (br m, 8H); 2.92 (s, 12H); 3.14 (m, 8H); 3.30 (m, 8H); 3.91 (ｍ、溶媒で部分的に交換される); 5.51 (s, 4H); 6.60 (2H, s); 7.64-7.82 (m, 32H) ppm.
実施例５３
1H NMR (400 MHz, MeOD): δ = 1.84 (br m, 8H); 2.92 (s, 12H); 3.14 (m, 8H); 3.30 (m, 8H); 3.91 (ｍ、溶媒で部分的に交換される); 5.51 (s, 4H); 6.18 (2H, s); 7.64-7.82 (m, 32H) ppm.
実施例５４
1H NMR (400 MHz, MeOD): δ = 1.84 (br m, 8H); 2.92 (s, 12H); 3.14 (m, 8H); 3.30 (m, 8H); 3.91 (ｍ、溶媒で部分的に交換される); 4.22 (2H, s); 5.51 (s, 4H); 7.64-7.82 (m, 32H) ppm.
実施例５５
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1.71 (br m, 8H); 2.82 (s, 12H); 2.99-3.30 (m, 16H); 3.81 (s, 8H); 5.40 (d, 4H); 7.34 (dd, 2H); 7.61-7.90 (m, 16H); 8.12 (m, 4H); 8.81 (d, 2H) ppm.
実施例５６
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1.71 (br m, 8H); 2.56 (s, 4H); 2.82 (s, 12H); 2.99-3.30 (m, 16H); 3.81 (s, 8H); 5.40 (d, 4H); 7.61-7.90 (m, 32H); 8.21 (d, 4H) ppm.
（実施例５７）

実施例４４の化合物（１００ｍｇ、０．０９９７ミリモル）をＭｅＯＨ（５０ｍｌ）に溶解し、ＭｅＯＨでコンディショニングしたＩｓｏｌｕｔｅ（商標）ＳＣＸ−２カートリッジに負荷した。カートリッジをＭｅＯＨでフラッシュ洗浄し、次いで生成物を１．２５ＭＨＣｌ／ＭｅＯＨ（６０ｍＬ）で溶離した。溶媒を蒸発させ、生成物を、ＨＰＬＣシステム３を使用して精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥して白色固体を得た。
収量：３５ｍｇ（３７％）
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝７．７２分、ｍ／ｚ＝９２２．２２［Ｍ］^＋
（実施例５８）

実施例５７の化合物（９５６ｍｇ、０．９９８ミリモル）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に溶解し、トシル酸ナトリウム（２９０ｍｇ、１．５０ミリモル）を添加した。反応混合物をアルゴン下に８０℃で１７時間加熱した。冷却した後、固体を濾別し、濾液を蒸発させた。生成物を、０〜６％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶離するＩｓｏｌｕｔｅ（商標）Ａｌ−Ｎカートリッジ（１０ｇ）で精製し、クリーム色の固体として生成物を得た。
収量：５．０３（４６％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝７．９７分、ｍ／ｚ＝９２２．３８［Ｍ］^＋
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1.71 (br m, 4H); 2.24 (s, 3H); 2.82 (s, 6H); 2.99-3.30 (m, 8H); 3.81 (s, 4H); 5.40 (d, 2H); 7.10 (d, 2H); 7.43 (d, 2H); 7.61-7.90 (m, 16H); 8.21 (d, 2H) ppm.
（実施例５９）

実施例３２の化合物をＨＰＬＣシステム５に通した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥してオフホワイトの固体を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝７．８６分、ｍ／ｚ＝９２２．１５［Ｍ］^＋
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1.71 (br m, 4H); 2.82 (s, 6H); 2.99-3.30 (m, 8H); 3.81 (s, 4H); 5.40 (d, 2H); 7.61-7.90 (m, 16H); 8.21 (d, 2H); 8.27 (s, 1H) ppm.
（実施例６０）

実施例６０の化合物は、中間体４３から、中間体４５の合成で使用したのと同様の方法を使用して調製した。
収率：（３６％）
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝７．４９分、ｍ／ｚ＝６１８．３４［Ｍ＋Ｈ］^＋
（実施例６１）

実施例６１の化合物は、実施例６０の化合物から、実施例４４の合成で使用したのと同様の方法を使用して調製した。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝７．８７分、ｍ／ｚ＝６３２．２９［Ｍ］^＋
（実施例６２）

中間体４６（１２４ｍｇ、０．１５１ミリモル）のアセトニトリル（６ｍＬ）溶液を２Ｍエチルアミン／ＴＨＦ溶液（７５５μＬ、１．５１ミリモル）で処理した。溶液を室温で１７時間放置した。溶媒を蒸発させて得られた残留物を、ＨＰＬＣシステム２を使用して精製した。
収量：２４ｍｇ（４８％）
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝８．７４分、ｍ／ｚ＝７３８．３５／７４０．３０［Ｍ＋Ｈ］^＋
（実施例６３）

実施例６３の化合物は、実施例６２の化合物から、実施例４４の化合物の調製で使用したのと類似の方法を使用して調製した。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝９．１１分、ｍ／ｚ＝７５２．３１／７５４．３１［Ｍ］^＋
（実施例６４）

実施例６４の化合物は、実施例６０の合成中に得られた。ＨＰＬＣ（システム２）の過程で対イオンの交換が生じた。
収率：（９％）
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝８．７２分、ｍ／ｚ＝７５２．４６［Ｍ］^＋
（実施例６５）

実施例４４の化合物（５０ｍｇ、０．０４９９ミリモル）の水（１ｍＬ）とＴＨＦ（１ｍＬ）との溶液を酸化銀（Ｉ）（５．７６ｍｇ、０．０２４８ミリモル）で処理した。１８時間後、混合物を濾過し、濾液をコハク酸（２．９４ｍｇ、０．０２４８ミリモル）で処理した。１時間後に、混合物を、ＨＰＬＣシステム４を使用して精製した。生成物は白色固体として得られた。
収量：１０ｍｇ（２０％）
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝３．１９分、ｍ／ｚ＝９５４．１９［Ｍ＋Ｈ］^＋
（実施例６６）

実施例１８の化合物（３０ｍｇ、０．０３３５ミリモル）および２−ブロモエタノール（９２ｍｇ、０．７７４ミリモル）を炭酸ナトリウム（６２ｍｇ、０．７７４ミリモル）の存在するアセトニトリル（５ｍＬ）に溶解し、反応混合物を撹拌下に８０℃で４８時間加熱した。懸濁液を濾過、濃縮し、残留物を、ＨＰＬＤシステム３を使用して精製した。生成物を含む画分を合わせ、凍結乾燥して白色の綿毛状粉末を得た。
収量：１４ｍｇ（３９％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝７．８４分、ｍ／ｚ＝９８２．４２［Ｍ］^＋
（生物学的アッセイ）
本発明の化合物を、それらのＨＮＥ阻害活性について試験した。
（蛍光性ペプチド基質）
アッセイは、９６ウェルプレート中、１００μＬのアッセイ総容積で実施した。酵素（ヒト白血球エラスターゼ、ＳｉｇｍａＥ８１４０）の最終濃度は、０．０００３６単位／ウェルであった。ペプチド基質（ＭｅＯ−Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−ＶａｌＡＭＣ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ＃３２４７４５）は、１００μＭの最終濃度で使用した。ＤＭＳＯの最終濃度はアッセイ緩衝液（０．０５ＭＴｒｉｓ．ＨＣｌ、ｐＨ７．５、０．１ＭＮａＣｌ、０．１ＭＣａＣｌ_２、０．０００５％ｂｒｉｊ−３５）中、１％であった。

酵素を添加することによって酵素反応を開始した。室温で酵素反応を実施し、３０分後に５０μＬの大豆トリプシン阻害剤（ＳｉｇｍａＴ−９００３）を５０μｇ／ウェルの最終濃度で添加することによって反応を停止した。３８０ｎｍの励起および４６０ｎｍの発光フィルターを使用したＦＬＥＸｓｔａｔｉｏｎ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）で蛍光を読み取った。範囲が１０００ｎＭ〜０．０５１ｎＭの１０種の濃度からなる濃度系列から、化合物の能力を測定した。結果は、それぞれ二つ組で実施した２つの独立な実験の平均値である。
（蛍光標識化エラスチンの使用）
アッセイは、９６ウェルプレート中、１００μＬのアッセイ総容積で実施した。酵素（ヒト白血球エラスターゼ、ＳｉｇｍａＥ８１４０）の最終濃度は、０．００２単位／ウェルであった。ウシ頚部靭帯からの蛍光で標識され可溶化されたエラスチン（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ、Ｅ−１２０５６）を１５μｇ／ｍＬの最終濃度で使用した。ＤＭＳＯの最終濃度は、アッセイ緩衝液（０．１ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、０．２ｍＭアジ化ナトリウムを含む）中、２．５％であった。

酵素を添加することによって酵素反応を開始した。酵素反応は室温で実施し、１２０分後に読み取った。蛍光は、４８５ｎｍの励起および５３０ｎｍの発光フィルターを使用したＦＬＥＸｓｔａｔｉｏｎ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）で読み取った。範囲が２５０００ｎＭ〜１ｎＭの１０種の濃度からなる濃度系列から、化合物の能力を測定した。結果は、それぞれ二つ組で実施した２つの独立な実験の平均値である。

実施例２３を除く実施例のすべての化合物は、１〜５０ｎＭの範囲で活性を有した。実施例２３の化合物は、５０〜５００ｎＭの範囲で活性を有した。
（ラットにおいてＨＮＥで誘発される肺出血）
ラットへのヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）の点滴注入は、急性の肺損傷を引き起こした。この損傷の程度は、肺出血を測定することによって評価できる。完全に隔離されて飼育され、かつ受入れ時に特定の微生物との非接触を保証された雄性ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラット（１７５〜２２０ｇ）は、ＨａｒｌａｎＵＫＬｔｄ．から入手した。動物の重量を測定し、処理群にランダムに割り当てた（１群当たり７〜１２尾の動物）。

使用するビヒクルは１％ＤＭＳＯ／生理食塩水とした。阻害薬を１％ＤＭＳＯに溶解した後、０．９％生理食塩水を添加した。

各研究で動物を使用して種々の経路で肺に局所的に送達されるエラスターゼ阻害薬の効力を測定した。ヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）を投与する３０分〜６時間前に投与量を与える場合には、吸入麻酔薬イソフルラン（４％）で、あるいはＨＮＥ投与の少なくとも３０分前に予備投与量を与える場合には、ｈｙｐｎｏｒｍ：ｈｙｐｎｏｖｅｌ：水（１．５：１：２、２．７ｍＬ／ｋｇで）でラットを最終的に麻酔し、ＰｅｎｎＣｅｎｔｕｒｙミクロ噴霧器を使用する経口による気管内（ｉ．ｔ．）、または鼻孔へ液体を滴下することによる鼻腔内で投与される。動物は、ビヒクルまたは化合物を０．５ｍＬ／ｋｇの投与容積で受け入れた。

投与後に回復された動物は、最終的にｈｙｐｎｏｒｍ：ｈｙｐｎｏｖｅｌ：水（１．５：１：２、２．７ｍＬ／ｋｇで）麻酔した。十分に麻酔されたら、ＰｅｎｎＣｅｎｔｕｒｙミクロ噴霧器を使用してＨＮＥ（６００単位／ｍＬ）または無菌生理食塩水を１００μＬの容積で経口気管点滴注入により投与した。動物を温度調節された箱内に温かく保持し、終末までの継続麻酔を確実にするのに要求されるような麻酔薬の投与量まで補給した。

ＨＮＥ投与の１時間後に動物を犠牲にした（０．５ｍＬ〜１ｍＬのペントバルビトンナトリウム）。気管を曝露し、２つの気管輪の間に小さな切れ目を作り、カニューレ（ゲイジ１０、外径２〜１０ｍｍ、ＰｏｒｔｅｘＬｔｄ．）が肺に向かって気管内にほぼ２ｃｍ挿入されることを可能にした。カニューレは、綿結紮糸を用いて固定した。次いで、肺を、新鮮なヘパリン化（１０単位／ｍＬ）リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）の４ｍＬアリコートで３回洗浄した（ＢＡＬ）。得られたＢＡＬＦは、遠心分離するまで氷上に保持した。

ＢＡＬＦを、４〜１０℃に冷却された遠心機中、１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清液を棄て、細胞ペレットを１ｍＬの０．１％ＣＥＴＡＢ／ＰＢＳに再懸濁し、細胞を溶解した。細胞溶解液を、血液含有量についての分光分析を行うことができるまで凍結した。ラット全血の０．１％ＣＥＴＡＢ／ＰＢＳ溶液を作製することによって標準を調製した。

解凍された１００μＬの各溶解細胞懸濁液を９６ウェル平底プレートの別々のウェルに入れた。すべてのサンプルを二つ組で試験し、１００μＬの０．１％ＣＥＴＡＢ／ＰＢＳをブランクとしてプレートに含めた。各ウェルの内容物のＯＤを、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ２５０（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）を使用して４１５ｎｍで測定した。

０．１％ＣＥＴＡＢ／ＰＢＳ中の異なる濃度（３０、１０、７、３、１、０．３、０．１μＬ／ｍＬ）の血液のＯＤ（４１５ｎｍ）を測定することによって標準曲線を作図した。

各実験サンプル中の血液量を、標準曲線と比較して計算した。次いで、データを以下の通り解析した。
１）二つ組に対する平均ＯＤを計算した。
２）ブランクに対する値を他のすべてのサンプルに対する値から引き算した。
３）データを査定して分布の正規性を評価した。

実施例１７、１８、２６、２７、３０、３２、４０、４１、４２、４３、４９、５９、６１および６４の化合物は、上記アッセイで試験され、対照に比較して出血血液量を低下させるのに有効であることがわかった。例えば、実施例３２の化合物は、ＨＮＥの１時間前に３０ｍｇ／ｋｇでｉｔ投与すると、対照に比較して６７％の統計的に有意な出血の低下を示した。

Claims

式（Ｉ）の化合物

［式中、
Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｄは、酸素または硫黄であり、
Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_６−アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６−アルキニル、ヒドロキシ、またはＣ_１〜Ｃ_６−アルコキシもしくはＣ_２〜Ｃ_６−アルケニルオキシ（ここで、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルおよびＣ_１〜Ｃ_６−アルコキシは、さらにハロゲン、ヒドロキシおよびＣ_１〜Ｃ_４−アルコキシからなる群から選択される１〜３個の同一または異なる基で置換されていてもよい）であり、
Ｒ^５は、Ｈであり、そして
ＲおよびＲ^４は、それぞれ独立に、式−［Ｘ］_ｍ−［Ａｌｋ^１］_ｐ−［Ｑ］_ｎ−［Ａｌｋ^２］_ｑ−［Ｘ^１］_ｋ−Ｚの基を表し、
ここで、
ｋ、ｍ、ｎ、ｐおよびｑは、独立に０または１であり、
Ａｌｋ^１およびＡｌｋ^２は、それぞれ独立に、エーテル（−Ｏ−）、チオエーテル（−Ｓ−）またはアミノ（−ＮＲ^Ａ−）（ここで、Ｒ^Ａは、水素またはＣ_１〜Ｃ_３アルキルである）結合を必要に応じて含んでいてもよい必要に応じて置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキレン、またはＣ_２〜Ｃ_６アルケニレン基を表し、
Ｑは、
（ｉ）−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ^＋（Ｒ^Ａ）−、−Ｎ（Ｒ^Ａ）−、薬学的に許容される対イオンを伴う−Ｎ^＋（Ｒ^Ａ）（Ｒ^Ｂ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^Ａ−、−ＮＲ^ＡＣ（＝Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ_２）ＮＲ^Ａ−、−ＮＲ^ＡＳ（Ｏ_２）−、−ＮＲ^ＡＣ（＝Ｏ）ＮＲ^Ｂ−、−ＮＲ^ＡＣ（＝ＮＲ^Ａ）ＮＲ^Ｂ−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｄ）ＮＲ^Ｅ−、−ＮＲ^ＥＣ（＝ＮＲ^Ｄ）−（ここで、Ｒ^Ａ、Ｒ^Ｂ、Ｒ^ＤおよびＲ^Ｅは、独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルであるか、あるいはＲ^ＡとＲ^ＢまたはＲ^ＤとＲ^Ｅが、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるさらなるへテロ原子を含んでいてもよい５〜７個の環原子からなる単環式複素環を形成している）、または
（ｉｉ）３〜６員環を有する必要に応じて置換された二価の単環式または二環式の炭素環または複素環基を表し、
Ｘは、−（Ｃ＝Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ_２）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^Ａ−または−Ｓ（Ｏ_２）ＮＲ^Ａ−（ここで、Ｒ^Ａは、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたはＣ_３〜Ｃ_６シクロアルキルである）を表し、
Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＨ−を表し、かつ
Ｚは、水素、または３〜６員環を有する必要に応じて置換された単環式または二環式の炭素環または複素環基である］。
Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３が、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_３−アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_３−アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_３−アルキニル、ヒドロキシ、またはＣ_１〜Ｃ_３−アルコキシもしくはＣ_２〜Ｃ_３−アルケニルオキシである、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３が、それぞれ独立に、水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ、メチル、メトキシおよび−Ｃ≡ＣＨである、請求項１に記載の化合物。
Ａが、フェニル、ピリジルまたはピリミジニルである、請求項１から３のいずれかに記載の化合物。
Ｒ^１およびＲ^２の一方が、メチル、−Ｃ≡ＣＨまたはシアノである、請求項１から４のいずれかに記載の化合物。
−ＡＲ^１Ｒ^２が、４−シアノフェニルまたは４−エチニルフェニルである、請求項１に記載の化合物。
ＤがＯである、請求項１から６のいずれかに記載の化合物。
Ｒ^３が、３−トリフルオロメチル、３−クロロまたは３−ブロモである、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^４および／またはＲが、式−［Ｘ］_ｍ−［Ａｌｋ^１］_ｐ−［Ｑ］_ｎ−［Ａｌｋ^２］_ｑ−［Ｘ^１］_ｋ−Ｚの基であり、ここで、ｍは０であり、ｋ、ｐ、ｎおよびｑはそれぞれ１であり、Ｑは−Ｎ（Ｒ^Ａ）または薬学的に許容される対イオンを伴う−Ｎ^＋（Ｒ^Ａ）（Ｒ^Ｂ）−であり、かつＲ^Ａ、Ｒ^Ｂ、Ａｌｋ^１、Ａｌｋ^２、Ｘ^１およびＺは請求項１で定義した通りである、請求項１から８のいずれかに記載の化合物。
Ｘ^１が−Ｏ−である、請求項９に記載の化合物。
Ｚが、必要に応じて置換されたフェニル、または５もしくは６個の環原子を有する単環式ヘテロアリールである、請求項９または請求項１０に記載の化合物。
ＲおよびＲ^４の一方が、水素である、請求項９から１１のいずれかに記載の化合物。
ＲまたはＲ^４が、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、ホルミル、アミノカルボニル、モノ−またはジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８−シクロアルキルカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルコキシカルボニル、Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルスルホニル）−アミノカルボニル、Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルスルホニル）−Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル）−アミノカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールカルボニルまたはヘテロシクロアルキルカルボニルから選択され、ここで、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルコキシカルボニル、ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル，Ｃ_１〜Ｃ_４−アルコキシ、ヒドロキシカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノカルボニル、アミノ、モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルカルボニルアミノ、シアノ、Ｎ−（モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル）−アミノカルボニル、Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルコキシ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル）−アミノカルボニルおよびハロゲンからなる群から選択される１〜３個の同一または異なる基で置換されていてもよい、請求項１から８のいずれかに記載の化合物。
Ｒおよび／またはＲ^４が、式（ＶＩＩＩＡ）、（ＶＩＩＩＢ）または（ＶＩＩＩＣ）

の基（ここで、Ｒ^４Ａは、水素またはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、ｓは１または２である）を表す、請求項１から８のいずれかに記載の化合物。
Ｒおよび／またはＲ^４が、式（ＩＸ）

［式中、
Ｒ^４Ｂは、水素またはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、
Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅは、それぞれ、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、かつそれらが結合している窒素は、薬学的に許容される対イオンを伴う第４級であり、かつ正電荷を有し；さらには、Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅのいずれか２つは、一緒になって、酸素または窒素から選択される第２のへテロ原子を必要に応じて含む環を形成しているか、あるいは、
Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅの１つは、孤立電子対であり、残りの基は上で定義した通りであり、かつそれらが結合している窒素は第３級であり、かつ
ｖ１およびｖ２は、それぞれ独立に０〜５である］
の基を表す、請求項１から８のいずれかに記載の化合物。
Ｒおよび／またはＲ^４が、次のもの

［式中、
Ｒ^４Ｂは、水素またはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、
Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅは、それぞれＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、かつそれらが結合している窒素は、薬学的に許容される対イオンを伴う第４級であり、かつ正電荷を有し、さらにはＲ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅのいずれか２つは、一緒になって、酸素または窒素から選択される第２のへテロ原子を必要に応じて含む環を形成しているか、あるいは、
Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｒ^４Ｅの１つは孤立電子対であり、残りの基は上で定義した通りであり、かつそれらが結合している窒素は第３級であり、
Ｒ^４ＦおよびＲ^４Ｉは、独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、
Ｒ^４ＧおよびＲ^４Ｈは、独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであるか、またはＲ^４ＧおよびＲ^４Ｈが、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるさらなるへテロ原子を含んでいてもよい、５〜７個の環原子からなる単環式複素環を形成し、かつ
ｖ１およびｖ２は、それぞれ独立に０〜５である］
から選択される基を表す、請求項１から８のいずれかに記載の化合物。
ＲまたはＲ^４が、両方ではないが、水素である、請求項１３から１６のいずれかに記載の化合物。
ＲまたはＲ^４が、両方ではないが、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、ホルミル、アミノカルボニル、モノ−またはジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８−シクロアルキルカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルコキシカルボニル、Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルスルホニル）−アミノカルボニル、Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルスルホニル）−Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル）−アミノカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールカルボニルまたはヘテロシクロアルキルカルボニルから選択され、ここで、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルコキシカルボニル、ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル，Ｃ_１〜Ｃ_４−アルコキシ、ヒドロキシカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノカルボニル、アミノ、モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルカルボニルアミノ、シアノ、Ｎ−（モノ−およびジ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル）−アミノカルボニル、Ｎ−（Ｃ_１〜Ｃ_４−アルコキシ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル）−アミノカルボニルおよびハロゲンからなる群から選択される１〜３個の同一または異なる基で置換されていてもよい、請求項１３から１６のいずれかに記載の化合物。
リンカー骨格を介して共有結合で連結されている請求項１から１６のいずれかに記載の化合物の２、３または４個の分子を含む、多量体化合物であって、
式Ｍ−Ｌ−Ｍ ^１を有し、ここで、Ｌは二価のリンカー基であり、かつＭおよびＭ ^１は、それぞれ独立に、式（ＩＡ）

（式中、Ｄ、ＡおよびＲ ^１〜Ｒ ^５は、請求項１から１８のいずれかで定義された通りである）の基、又は式（ＩＢ）

（式中、Ｄ、ＡおよびＲ、Ｒ ^１、Ｒ ^２、Ｒ ^３およびＲ ^５は、請求項１から１８のいずれかで定義された通りである）の基であり、
リンカー基Ｌが、該鎖中に２〜１２個の炭素原子を有する二価で直鎖の飽和または不飽和の炭化水素基であり、ここで、１つまたは複数の炭素は、環中にまたは各環中に３〜７個の環原子を有する二価の単環式または二環式炭素環または複素環基によって、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ） _２ −、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ ^Ｐ）−、薬学的に許容される対イオンを伴う−Ｎ ^＋（Ｒ ^Ｐ）（Ｒ ^Ｑ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ ^Ａ −、−ＮＲ ^ＡＣ（＝Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ _２）ＮＲ ^Ａ −、−ＮＲ ^ＡＳ（Ｏ _２）−、−ＮＲ ^ＡＣ（＝Ｏ）ＮＲ ^Ｂ −、−ＮＲ ^ＡＣ（＝ＮＲ ^Ａ）ＮＲ ^Ｂ −、−Ｃ（＝ＮＲ ^Ｄ）ＮＲ ^Ｅ −または−ＮＲ ^ＥＣ（＝ＮＲ ^Ｄ）−で置き換えられていてもよく、ここで、Ｒ ^Ａ、Ｒ ^Ｂ、Ｒ ^ＤおよびＲ ^Ｅは、独立に、水素、Ｃ _１〜Ｃ _６アルキルまたはＣ _３〜Ｃ _６シクロアルキルであり、かつＲ ^ＰおよびＲ ^Ｑは、独立に、水素、Ｃ _１〜Ｃ _６アルキルもしくはＣ _３〜Ｃ _６シクロアルキル、ＨＯ−（Ｃ _１〜Ｃ _６アルキル）−、Ｒ ^ＡＲ ^ＢＮ−（Ｃ _１〜Ｃ _６アルキル）−またはＨＯＣ（＝Ｏ）−（Ｃ _１〜Ｃ _６アルキル）−であるか、あるいはＲ ^ＡとＲ ^ＢまたはＲ ^ＤとＲ ^ＥまたはＲ ^ＰとＲ ^Ｑが、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるさらなるへテロ原子を含んでいてもよい５〜７個の環原子からなる単環式複素環を形成している、多量体化合物。
請求項１から１６のいずれかに記載の２、３または４個の化合物の分子が、式（Ｉ）に示したそれらの各窒素原子を介してＲに連結されるように、リンカー骨格に連結されている、請求項１９に記載の多量体化合物。
ＭとＭ^１が同一である、請求項１９または請求項２０に記載の化合物。
リンカー基Ｌの１つまたは複数の−（ＣＨ_２）−基が、以下

から選択される二価の単環式または二環式炭素環または複素環基で置き換えられており、

は、薬学的に許容される対イオンを伴う
請求項１９に記載の化合物。
リンカー基Ｌが、次の構造（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｅ）

の１つを有し、構造（Ｂ）、（Ｄ）及び（Ｅ）は、薬学的に許容される対イオンを伴う請求項１９に記載の化合物。
リンカー基Ｌが、次の構造（Ｇ）および（Ｅ）

の１つを有し、構造（Ｈ）は、薬学的に許容される対イオンを伴う請求項１９に記載の化合物。
次の構造

のいずれかを有する化合物。
薬学的に許容される塩の形態の、請求項１〜２５のいずれかに記載の化合物。
式（Ｘ）、（Ｙ）または（Ｚ）

（式中、Ａ⁻は、薬学的に許容されるアニオンである）
を有する、請求項１９に記載の化合物。
治療で使用するための、請求項１から２７のいずれかに記載の化合物。
請求項１から２７のいずれかに記載の化合物、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含有する医薬組成物。
ＨＮＥが関与する疾患または状態の治療または予防で使用するための医薬を製造するための、請求項１から２７のいずれかに記載の化合物の使用。
疾患または状態が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺線維症、肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺気腫、喫煙誘発性肺気腫または嚢胞性線維症である、請求項３０に記載の使用。
疾患または状態が、喘息、鼻炎、乾癬、皮膚炎（アトピー性および非アトピー性）、クローン病、潰瘍性大腸炎または過敏性腸疾患である、請求項３０に記載の使用。