JP4979181B2

JP4979181B2 - グリケーション阻害剤及びその利用

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Publication number: JP4979181B2
Application number: JP2004021332A
Authority: JP
Inventors: 真帆子羽村; 正士酒井; 治長南; 理恵高橋; 徹治堀; 里夏海老名
Original assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Current assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Priority date: 2003-01-31
Filing date: 2004-01-29
Publication date: 2012-07-18
Anticipated expiration: 2024-01-29
Also published as: JP2004250445A

Description

本発明は植物の抽出物又はその成分を有効成分とし、グリケーションにより生じる各種組織障害の予防及び治療・改善効果を有する、安全性の高いグリケーション阻害剤及びその利用に関する。

近年、環境条件の悪化や生活様式の変化、社会生活の複雑化に伴うストレスの増加等により、老化が促進される要因が増えている。しかし一方で、日本人の平均寿命が延び、高齢者の占める割合が増えるとともに、若々しく健康に暮らすことの大切さが見直されてきている。従って、老化の進行を抑制することは、万人の待ち望んでいるところでもある。

老化の進行には様々な要因が関与しているが、その要因の１つに非酵素的蛋白糖化反応が挙げられている。これは、還元糖とアミノ酸又は蛋白質の結合により、蛋白質本来の機能に障害をもたらす反応であり、グリケーション（褐変反応）と呼ばれている。生体内の種々の生理機能は蛋白質が司っており、糖化された蛋白は本来の機能を発揮できず、各種の機能障害をもたらすと考えられる。このグリケーションの初期段階反応物質は、アマドリ化合物と呼ばれる蛋白質と糖の結合物であり、更にこの反応は、脱水、重合を経て蛍光性、褐色化、分子内及び分子間架橋形成を特徴とする終末糖化物質(advanced glycation end products: ＡＧＥ)になる。

これらＡＧＥは、加齢とともに生体内に蓄積し、加齢で認められる種々の組織障害、例えば、皮膚、血管壁、関節、肺等の結合組織の硬化（例えば、非特許文献１〜４参照）に関連することが示唆されており、皮膚の肥厚やしわの形成、動脈硬化、関節炎、心肺機能低下等の原因になると考えられている。また、白内障（例えば、非特許文献５参照）にも関連していると考えられている。また、グリケーションは加齢による組織障害の原因となるだけではなく、日光性弾力繊維症、アルツハイマー病、糖尿病合併症等の疾病に関与することが推測されている。例えば、日光性弾力線維症の皮膚組織にはＡＧＥの一種であるカルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）が検出されており、ＣＭＬの蓄積が深いしわや皮膚組織の硬化等の病変に関わっていることが示唆されている（例えば、非特許文献６参照）。また、アルツハイマー病におけるβ-アミロイドペプチドの脳内蓄積にＡＧＥが関与していることが示唆されている（例えば、非特許文献７参照）。

更に、糖尿病における腎障害、網膜症にＡＧＥの蓄積が関係していることも示唆されている(例えば、非特許文献８参照)。このようなＡＧＥの蓄積に対し、その元となるグリケーションを阻害する薬剤としてアミノグアニジンが知られている。この化合物は、糖尿病合併症である網膜症、腎障害、神経障害に有効であることがモデル動物で確認されており（例えば、非特許文献９参照）、糖尿病合併症の治療薬として米国で治験が進められている。しかし、アミノグアニジン服用により頭痛、悪心等の副作用が報告されており、医師の指導のもとに服用する必要がある。

Bai P. et al., Conn Tissue Res1992; 28:1-12 Sakata N. et al., Atherosclerosis 1995 ;116:63-75. Verzijl N. et al., Biochem J 2000 ;350 Pt 2:381-7. Bellmunt MJ. et al., Lung 1995;173:177-85. Prabhakaram M. et al., Mech Ageing Dev 1996 ;91(1):65-78 Mizutari K. et al., J Invest Dermatol 1997 ;108(5):797-802 Vitek MP. et al., Proc Natl Acad Sci USA 1994;91(11):4766-70 McCance DR. et al., J Clin Invest 1993; 91: 2470-8 Brownlee M., Diabetes Care 1992;15:1835-43.

従って、本発明の課題は、高いグリケーション阻害効果を有し、かつ副作用を生じさせることのない、安全性の高いグリケーション阻害剤を提供することにある。

本発明者等は、このような事情に鑑み、上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、特定の植物の抽出物が高いグリケーション阻害効果を有することを見出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、アグリモニー、アシュワガンダ、アニス、アマチャヅル、甘葉懸鈎子、銀杏、ウイキョウ、ウイッチヘーゼル、ウコン、エキナセア、エゾウコギ、エルダー、エルバ・マテ、オオバコ、オリーブ、オレガノ、オレンジ、柿、カキドオシ、カミツレ、ガラナ、含羞草、菊、ギムネマ、キャッツクロー、キャットニップ、キラウェイ、キンギンカ、グァバ、クコヨウ、くまざさ、クミクスチン、黒大豆、くわ、シナモン、ケツメイシ、ゴーヤ、コーラナッツ、ゴカヒ、ゴツコラ、コリアンダー、コンフリー、サキシマスオウ、サフラワー、サラシア・オブロンガ、サンザシ、サンシチニンジン、しそ、ジュウヤク、ジュニパーベリー、ジンジャー、杉、スギナ、ステビア、スペアミント、セイジ、セイボリー、セイヨウサンザシ、仙▲査▼、タイム、タヒボ、ダンデライオン、チャービル、チャノキ、チャボトケイソウ、チョウジ、デイジー、ディル、トチュウ、ニクズク、南姜、ネトル、ハイビスカス、白猪母邱、白花蛇舌草、ハゴロモソウ、バジル、ハス、半枝連、ヒース、ピーチ、ヒソップ、びわ、フィーバーフュー、フクギ、藤、プランタゴ・サイリュウム、ブルーベリー、ブルーマロウ、ペニーロイヤル、ベニバナ、ペパーミント、ホップ、ポリジ、ポンドアップル、マシュマロー、マジョラム、マリーゴールド、マレイン、マロウスモール、マロウブルー、ミフクラギ、ミルクシスル、メグスリノキ、メデゥスイート、モッカ、ヤエヤマアオキ、ヤクルマギク、ヤローフラワー、ユーカリ、ヨクイニン、ヨモギ、ラズベリー、ラベンダー、リンデン、ルイボス、レモングラス、レモンタイム、レモンバーベナ、レモンバーム、ローズヒップ、ローズピンクバッツ、ローズマリー、ローズレッド、ローレル、羅布麻、ワイルドストロベリーより選ばれる植物の抽出物の１種又は２種以上を含有することを特徴とするグリケーション阻害剤を提供するものである。

また、本発明は上記グリケーション阻害剤を含有する組織障害予防・治療剤並びに組織障害予防・治療効果を有する飲食品及び外用剤を提供するものである。

本発明のグリケーション阻害剤は、高いグリケーション阻害効果を有するものである。

従って、本発明のグリケーション阻害剤はグリケーション或いはグリケーションによって生じる終末糖化物質（ＡＧＥ）等の蓄積によって引き起こされる、各種組織障害の予防及び治療・改善効果を得ることができるものである。

本発明のグリケーション阻害剤（以下、単に「阻害剤」という）の有効成分は、下記の表１及び表２に示す植物の抽出物である。

これら植物の抽出物の中でも、アグリモニー、銀杏、ウイッチヘーゼル、オレガノ、セイボリー、グァバ、クミクスチン、サラシア・オブロンガ、しそ、チャノキ、ジュニパーベリー、杉、セイジ、タイム、チョウジ、甘葉懸鈎子、ハゴロモソウ、ヒース、びわ、エルバ・マテ、メグスリノキ、ユーカリ、ヨモギ、ラズベリー、羅布麻、ルイボス、レモンタイム、レモンバーム、ローズヒップ、ローズマリー、ローズレッド、ワイルドストロベリー、ガラナ、フクギより選ばれる植物の抽出物が好ましく、特に、アグリモニー、ウィッチヘーゼル、甘葉懸鈎子、ハゴロモソウ、メグスリノキ、チャノキ、サラシア・オブロンガ、ガラナより選ばれる植物の抽出物が好ましい。

これら抽出物は、１種又は２種以上で本発明の阻害剤の有効成分として使用することができる。

上記植物の抽出物の製造方法は特に制限されるものではなく、通常用いられる方法により製造することができる。また、抽出条件も特に制約はなく、例えば、上記植物の各種部位（全草、花、萼、種子、果実、葉、枝、樹皮、根皮、根茎、根等）をそのまま又は裁断、粉砕あるいは細紛した後、搾取又は溶媒で抽出することにより製造される。

このうち、溶媒を用いた抽出は、一般に使用する溶媒に合わせて常圧〜加圧下で常温〜溶媒の沸点の温度条件下で１０分〜１週間程度行えばよい。抽出に使用する溶媒としては、植物種や処理工程にあわせて通常用いられる溶媒を適宜選択して用いればよく、例えば、水やアルコール類（例えば、メタノール、無水エタノール、エタノール等の低級アルコール、又はプロピレングリコール、１,３−ブチレングリコール等の多価アルコール）、アセトン等のケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、酢酸エチルエステル等のエステル類又はキシレン、ベンゼン、クロロホルム等の有機溶媒が挙げられる。なお、食品や化粧品素材として用いる場合等、有機溶媒が残留が好ましくない場合は、特に水やエタノール等を選択することが好ましい。これらの溶媒は単独で用いることもできるが、２種類以上を任意に組み合わせて使用することもできる。

具体的には、例えば以下の方法が使用できる。すなわち、植物原体あるいは乾燥物を細砕し、抽出溶媒を５〜２０倍量加え、常圧下、室温で１週間程度静置、又は抽出溶媒の沸点付近で１０〜３０分程抽出してから濾過して得られた濾液を減圧乾固あるいは凍結乾燥して植物抽出物を得る。

上記のようにして得られた植物の抽出物はそのままの状態で使用することもできるが、必要に応じ、その効力に影響のない範囲で更に脱臭、脱色等の精製処理を加えても良い。このような精製処理としては、通常の手段を任意に選択して行えば良く、例えば濾過又はイオン交換樹脂や活性炭カラム等を用い、吸着・脱色・精製等を行なえば良い。更に、凍結乾燥又は濃縮処理等により溶液状、ペースト状、ゲル状、又は粉末状の精製物を得ることができる。

本発明の阻害剤は、上記のようにして得られた植物抽出物をそのまま、あるいは公知の医薬品担体と組合せ、製剤化することにより調製される。この阻害剤は、組織障害予防・治療剤等の医薬品や、医薬部外品として使用できるが、化粧品等の外用剤あるいは飲食品に配合することにより、組織障害予防・治療効果を有する外用剤あるいは飲食品とすることもできる。

具体的に本発明の阻害剤を含有する組織障害予防・治療剤等の医薬品や医薬部外品を調製するには、本発明の阻害剤と通常の医薬品や医薬部外品に使用される分散補助剤、賦形剤等の担体や添加剤と混合し、粉剤、液剤、カプセル剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、顆粒剤、丸剤、錠剤、トローチ剤、リモナーデ剤等の内服剤や、ゲル、乳液状、クリーム、軟膏、発布剤、入浴剤等の外用剤の形とすれば良い。

上記担体としては、マンニトール、乳糖、デキストラン等の水溶性の単糖類、オリゴ糖類又は多糖類；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース等のゲル形成性又は水溶性のセルロース類；結晶性セルロース、α―セルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム及びそれらの誘導体等の水吸収性でかつ水難溶性のセルロース類；ヒドロキシプロピル澱粉、カルボキシメチル澱粉、架橋澱粉、アミロース、アミロペクチン、ペクチン及びそれらの誘導体等の水吸収性でかつ水難溶性の多糖類；アラビアガム、トラガントガム、グリコマンナン及びそれらの誘導体等の水吸収性でかつ水難溶性のガム類；ポリビニルピロリドン、架橋ポリアクリル酸及びその塩、架橋ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチルメタクリレート及びそれらの誘導体等の架橋ビニル重合体類；リン脂質、コレステロール等のリポソーム等分子集合体を形成する脂質類糖を挙げることができる。

また、添加剤としては微生物培養代謝物、紫外線吸収／遮断剤、美白剤、メラニン色素還元／分解剤、ターンオーバーの促進作用／細胞賦活剤、収斂剤、活性酸素消去剤、抗酸化剤、過酸化脂質生成抑制剤、抗炎症剤、殺菌・消毒薬、保湿剤、頭髪用剤、酸化剤、染料剤、栄養強化剤、乳製品、保湿剤、ホルモン類、ｐＨ調整剤、キレート剤、防腐・防バイ剤、清涼剤、安定化剤、乳化剤、動・植物性蛋白質又はその分解物、動・植物性多糖類又はその分解物、動・植物性糖蛋白質又はその分解物、血流促進剤、消炎剤・抗アレルギー剤、細胞賦活剤、角質溶解剤、創傷治療剤、増泡剤、増粘剤、口腔用剤、消臭・脱臭剤、苦味料、調味料、酵素等を挙げることができる。

本発明の阻害剤は、グリケーション阻害作用を有するものであり、これを含有する組織障害予防・治療剤は、グリケーションにより生じる動脈硬化症、白内障、アルツハイマー症、腎不全、透析製アミロイドーシス、結合組織硬化に伴う各種疾患、日光弾力線維症、皮膚の肥厚等の各種組織障害の予防及び治療・改善効果を有するものである。

上記組織障害予防・治療剤の投与量としては、剤形や疾患等に合わせて適宜調整すればよいが、内服剤であれば、製剤全量中、前記植物抽出物を固形分換算で、０.５〜６０質量％（以下、単に「％」という）、好ましくは５〜６０％、特に好ましくは５〜１０％の範囲で配合すればよい。一方、外用剤であれば、製剤全量中、固形分換算で、０.０００１〜３０％、好ましくは０.００１〜２０％、特に好ましくは０.５〜２０％の範囲で配合すればよい。更に、入浴剤として使用する場合は、２００〜３００Ｌの浴湯対し外用剤と同程度の濃度になるように処方を考慮すれば良い。

一方、本発明の阻害剤を含有する化粧品等の外用剤も、本発明の阻害剤を化粧料原料等に有効量添加する以外は通常の化粧品等の外用剤を製造するのと同様に製造される。使用される化粧料原料は上記の組織障害予防・治療剤において、担体および添加剤として例示した物のうち、化粧料等の外用剤に使用が認められるものを使用することができる。

更に、本発明の阻害剤を含有する飲食品は、本発明の阻害剤を飲食品原料等に有効量添加すること以外は通常の飲食品を製造するのと同様に製造される。

これら飲食品の例としては、パン、ビスケット、ホットケーキ、麺、錠菓等のデンプンを主体とする食品、チーズ、バター、ヨーグルト等の乳製品、ガム、キャンディー、和菓子等の菓子類、ハム、ソーセージ等の畜肉食品、ちくわ、かまぼこ等の魚肉食品、魚介類食品、ドレッシング、醤油、ジャム、ふりかけ等の調味料、茶、ジュース、清涼飲料、乳酸菌飲料、酒類等の飲料等が挙げられ、これら飲食品への本発明阻害剤の配合量は、前記植物抽出物の固形分換算で０.０１〜６０％、好ましくは０.０１〜２０％、特に好ましくは０.１〜１５％程度とすれば良い。

次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。

製造例１
植物熱水抽出物の製造：
表３に記載の各植物の２５ｇを５００ｍＬの沸騰水中にて常圧下で３０分間抽出した。得られた抽出液をガーゼで濾過した後、室温まで冷却し、凍結乾燥して植物熱水抽出物（実施品１〜１１１）を得た。

製造例２
植物エタノール抽出物の製造：
表４に記載の各植物の乾燥体の２.５ｇを５０ｍＬのエタノール中にて、常圧下、室温で１週間抽出した。得られた抽出液をガーゼで濾過した後、濾液を減圧乾固して植物エタノール抽出物（実施品１１２〜２１４）を得た。

製造例３
植物含水エタノール抽出物の製造：
ウイッチヘーゼル（幹）、ローズマリー、ジュニパーベリー、ヨモギ、びわ（葉）、グァバ（葉）の各植物の２５ｇを５００ｍＬの５０％含水エタノール中にて、常圧下、室温で１週間抽出した。得られた抽出液をガーゼで濾過した後、濾液を減圧乾固して植物含水エタノール抽出物を得た。

試験例１
植物熱水抽出物のグリケーション阻害作用の測定：
グリケーションの初期段階反応物質は、アマドリ化合物と呼ばれる蛋白質と糖の結合物である。更にこの初期段階反応物質は脱水、重合を経て蛍光を持つ終末糖化物質（ＡＧＥ）を形成する。従って、ＡＧＥ量を測定することで、グリケーションの阻害作用が測定できる。

検体としては、製造例１で得られた植物熱水抽出物（実施品１〜１１１）を用い、ＡＧＥ量の測定はナカザワらの方法（Nakazawa-H et al., J. Agric. Food Chem., 48, 180-185 (2000)）を一部改変して行った。なお、既知のグリケーション阻害剤であるアミノグアニジンを本試験の陽性対照として用いた。

各検体は蒸留水で最終濃度１０、２、０.４、０.０８、０.０１６、０.００３２ｍｇ／ｍＬになるように調整し、スクリューキャップ付き試験管に５００μＬずつ分注後オートクレーブ滅菌して試料とした。また、陽性対照は、アミノグアニジンを蒸留水で２００、１００、５０、２５、１２.５、６.２５ｍＭになるように調製し、これを滅菌済みの試験管にフィルター滅菌しながら５００μＬずつ分注して調製した。なお、対照には蒸留水を用いた。

上記の検体、陽性対照および対照の各々の試験管にフィルター滅菌済みの４０ｍｇ／ｍＬの牛血清アルブミン（bovine serum albumin, fractionＶ; Sigma社製、以下、「ＢＳＡ」という）、１ＭのＤ−フラクトース（最終濃度０.５Ｍ）を含有する４００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７.４、最終濃度２００ｍＭ）を５００μＬずつ添加し、３７℃で７日間遮光下で反応させた。ブランクとしては、Ｄ−フラクトースが入っていない試験管を用意した。

反応終了後、各試験管に１０％トリクロロ酢酸溶液１ｍＬを添加、攪拌し、冷却遠心（４℃、３,０００ｒｐｍ、５分）を行った後、上清をデカントで除去し、更に沈殿を５％トリクロロ酢酸溶液２ｍＬで２回洗浄した。洗浄終了後、沈殿を２００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７.４）２ｍＬに溶解した。溶解した沈殿物２００μＬを蛍光測定用９６穴プレートに移し、蛍光プレートリーダーＳＰＥＣＴＲＡｍａｘＧＥＭＩＮＩＸＳ（モレキュラーデバイス社）を用いて、励起波長３５０ｎｍ、蛍光波長４２５ｎｍで蛍光を測定し、以下の数式１に従いグリケーション阻害率を算出した。

さらに、横軸に試料の濃度、縦軸にグリケーション阻害率をとった対数グラフを作成し、５０％阻害活性を示す濃度（ＩＣ_５０）を算出した。得られた結果を表３に示す。

（結果）
表３に示した通り、各植物抽出物は何れもＡＧＥの形成を阻害し、グリケーション阻害効果が認められた。また特に、ウイッチヘーゼル（幹）、ジュニパーベリー、ハゴロモソウ、ルイボス、ローズレッド、ウイッチヘーゼル（葉）、チャノキ（茎葉）、セイボリー、グァバ（葉）、ヒース、甘葉懸鈎子、ユーカリ、チョウジ、アグリモニー、オレガノ、ラズベリー（葉）、ワイルドストロベリー、レモンバーム、ローズマリー、タイム、ヨモギ、サラシア・オブロンガ、セイジ、銀杏（葉）、杉（葉）、レモンタイム（葉）、メグスリノキ、クミクスチン、びわ（葉）、エルバ・マテ、しそ、マンネンロウ、ローズヒップ、羅布麻のＩＣ_５０は、アミノグアニジンのＩＣ_５０、０.２８ｍｇ／ｍＬと同等、あるいはそれ以上の値を示し、優れたグリケーション阻害作用を有することが確認された。

試験例２
植物エタノール抽出物のグリケーション阻害作用の測定（１）：
検体としては、製造例２で得られた植物エタノール抽出物（実施品１１２〜２１４）を用いた。測定は試験例１の方法を一部改変して行った。即ち、各検体をエタノールで０.４ｍｇ／ｍＬになるように調整し、滅菌済みの試験管にフィルター滅菌しながら５００μＬずつ分注し、試料とした。また、陽性対照としては、アミノグアニジンを蒸留水で０.４ｍｇ／ｍＬになるように調整し、これを滅菌済みの試験管にフィルター滅菌しながら５００μＬずつ分注したものを用いた。

一方、ＢＳＡを４０ｍｇ／ｍＬ、Ｄ−ｆｒｕｃｔｏｓｅを１Ｍになるように０.４Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７.４）に溶解し、更に、この溶液５容に対し、蒸留水を４容加えた後、フィルターで滅菌処理し、ＢＳＡ−ｆｒｕｃｔｏｓｅ反応液とした。

試験は、上記ＢＳＡ−ｆｒｕｃｔｏｓｅ反応液を、オートクレーブ滅菌したねじ口試験管に無菌的に９００μＬずつ分注し、更に試料又は陽性対照を１００μＬずつ添加した。これらの試験管を遮光下で３７℃、７日間反応させた。なお、対照にはエタノールを１００μＬ添加したのみのものを用い、ブランクにはＤ−ｆｒｕｃｔｏｓｅが入っていないＢＳＡ溶液を用意した。

反応終了後、各試験管に１０％トリクロロ酢酸溶液を１ｍＬ加えて攪拌し、冷却遠心（４℃、３,０００ｒｐｍ、５分）を行った後、上清をデカントで除去し、更に沈殿を５％トリクロロ酢酸溶液２ｍＬで２回洗浄した。洗浄終了後、沈殿を２００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７.４）２ｍＬに溶解した。この溶液２００μＬを蛍光測定用９６穴プレートに移し、蛍光プレートリーダーＳＰＥＣＴＲＡｍａｘＧＥＭＩＮＩＸＳ（モレキュラーデバイス社）を用いて、励起波長３５０ｎｍ、蛍光波長４２５ｎｍで蛍光を測定し、前述の式１に従いグリケーション阻害率（メイラード反応阻害率）を算出した。得られた結果を表４に示す。

（結果）
表４に示した通り、抽出溶媒にエタノールを用いた場合でも、各植物抽出物は何れもＡＧＥの形成を阻害し、グリケーション阻害効果が認められた。また特に、ウィッチヘーゼル（幹）、ウィッチヘーゼル（葉）、ハゴロモソウ、フクギ、ガラナ、甘葉懸鈎子、チャノキ（茎葉）、アグリモニー、サラシア・オブロンガ、メグスリノキは、アミノグアニジンと同等、あるいはそれ以上の値を示し、優れたグリケーション阻害作用を有することが確認された。

試験例３
植物エタノール抽出物のグリケーション阻害作用の測定（２）：
検体としては、製造例２で得られた実施品のうち、試験例２で効果の高かったウィッチヘーゼル（幹）、ウィッチヘーゼル（葉）、ハゴロモソウ、フクギ、ガラナ、甘葉懸鈎子、チャノキ（茎葉）、アグリモニー、サラシア・オブロンガを用いた。これら検体はエタノールで０.２〜０.００２ｍｇ／ｍＬになるように調整し、試験に供した。測定は試験例２の方法に従い、グリケーション阻害率及びＩＣ_５０を算出した。得られた結果を表５に示す。

（結果）
表５に示したように、何れの植物抽出物もＡＧＥの形成を阻害し、優れたグリケーション阻害効果を示した。特に、ウィッチヘーゼル（幹）、ウィッチヘーゼル（葉）、ハゴロモソウ、フクギ、ガラナ、甘葉懸鈎子、チャノキ（茎葉）、アグリモニーはアミノグアニジンと同等、あるいはそれ以上の値を示し、低濃度であっても優れたグリケーション阻害作用を有することが確認された。

製造例４
ウィッチヘーゼル（幹）熱水抽出物の調製：
ウィッチヘーゼル（刻み乾燥樹皮）５０ｇを量りとり、沸騰水１Ｌ中に入れて３０分間煮出した。室温に放置して冷ました後、３枚重ねのガーゼで漉し、抽出液を凍結乾燥して、抽出粉末６.８ｇ（収率１３.６％）を得た。

製造例５
ウィッチヘーゼル（葉）熱水抽出物の調製：
ウィッチヘーゼル（刻み乾燥葉）５０ｇを量りとり、沸騰水１Ｌ中に入れて３０分間煮出した。室温に放置して冷ました後、３枚重ねのガーゼで漉して、抽出液を凍結乾燥して、抽出粉末７.２ｇ（収率１４.４％）を得た。

製造例６
ハゴロモソウ熱水抽出物の調製：
ハゴロモソウ（刻み乾燥全草）５０ｇを量りとり、沸騰水１Ｌ中に入れて３０分間煮出した。室温に放置して冷ました後、３枚重ねのガーゼで漉し、抽出液を凍結乾燥して、抽出粉末１０.６ｇ（収率２１.２％）を得た。

製造例７
ウィッチヘーゼル（幹）エタノール抽出物の調製：
ウィッチヘーゼル（刻み乾燥樹皮）２.５ｇを量りとり、エタノール５０ｍＬ中に浸漬し、遮光下で室温１週間放置した。濾紙で漉した後、濾液を１００ｍＬ容のナスフラスコに入れてロータリーエバポレーターで減圧乾固し、エタノール抽出物２３０ｍｇ（収率９.２％）を得た。

製造例８
ウィッチヘーゼル（葉）エタノール抽出物の調製：
ウィッチヘーゼル（刻み乾燥葉）２.５ｇを量りとり、エタノール５０ｍＬ中に浸漬し、遮光下で室温１週間放置した。濾紙で漉した後、濾液を１００ｍＬ容のナスフラスコに入れてロータリーエバポレーターで減圧乾固し、エタノール抽出物３６０ｍｇ（収率１４.４％）を得た。

製造例９
ハゴロモソウエタノール抽出物の調製：
ハゴロモソウ（刻み乾燥全草）２.５ｇを量りとり、エタノール５０ｍＬ中に浸漬し、遮光下で室温１週間放置した。濾紙で漉した後、濾液を１００ｍＬ容のナスフラスコに入れてロータリーエバポレーターで減圧乾固し、エタノール抽出物１６０ｍｇ（収率６.４％）を得た。

製造例１０
ラズベリー（果実）熱水抽出物の調製（１）：
ラズベリー（生果実）の６０ｇにイオン交換水２００ｍＬを加え、常圧下で３０分間煮沸して抽出液を得た。次いでこの抽出液を室温まで冷却した後、ろ紙で濾過し、凍結乾燥して熱水抽出物３.１４ｇ（収率５.２％）を得た。

上記で得られた熱水抽出物について試験例１と同様にグリケーション阻害作用を測定した。その結果、ラズベリー（果実）熱水抽出物のＩＣ_５０は０.１１２ｍｇ／ｍｌであった。

製造例１１
ラズベリー（果実）熱水抽出物の調製（２）：
ラズベリー（冷凍果実）の５７.８ｇにイオン交換水２００ｍＬを加え、常圧下で３０分間煮沸して抽出液を得た。次いでこの抽出液を室温まで冷却した後、ろ紙で濾過し、凍結乾燥して熱水抽出物４.８ｇ（収率８.３％）を得た。

上記で得られた熱水抽出物について試験例１と同様にグリケーション阻害作用を測定した。その結果、ラズベリー（果実）熱水抽出物のＩＣ_５０は０.１０８ｍｇ／ｍｌであった。

試験例４
動物体内における植物熱水抽出物のグリケーション阻害作用の測定：
検体としては、製造例１で得られたグアバ（葉）熱水抽出物（実施品９）およびワイルドストロベリー（葉）熱水抽出物（実施品１７）を用いた。また、動物としては、６週齢の雄性脳卒中易発症高血圧ラット（ＳＨＲ−ＳＰ／Ｉｚｍ）を１８匹用いた。ラットは１週間の予備飼育後、コントロール、グアバ（葉）熱水抽出物（ＧｖＥｘ）、ワイルドストロベリー（葉）熱水抽出物（ＷＳＥｘ）投与群の３群（各６匹）に分け、それぞれ、表６の組成の飼料を４週間与えて飼育した。これら各群のラットの１週間ごとの体重と１日あたりの摂餌量を測定した。その結果を図１および図２に示した。

４週間飼育後の各群のラットを麻酔した後、放血死させ、胸部大動脈を摘出した。摘出した大動脈を脱脂後、凍結乾燥を行い、細かく破砕した。次いで、これの一定量を取り、プロナーゼで２４時間処理した後、上清を回収し、サンプルとした。このサンプルの蛍光強度を励起波長３７０ｎｍ、発光波長４３０ｎｍで測定し、ＡＧＥ量を算出した。その結果を図３に示した。なお、蛍光強度とＡＧＥ量の関係は、例えば、文献（J. Hypartension, 17(4), 1999., p483, 左段８〜２４行目）に記載されている。

（結果）
各群のラットの１週間ごとの体重と１日あたりの摂餌量に有意な差は認められなかった。また、血管中のＡＧＥ量はコントロール群と比べＷＳＥｘ群およびＧｖＥｘ群の両方で減少していた。

以下に本発明によるグリケーション阻害剤の配合例を、典型的な実施例として挙げ説明する。

実施例１
乳液：
製造例３により得られた、ウィッチヘーゼル（幹）、ローズマリー、ジュニパーベリー、ヨモギの各植物の植物含水エタノール抽出物を用いて乳液を作成した。

（成分）（質量％）
１．スクワラン５.０
２．オリーブ油５.０
３．ホホバ油５.０
４．セチルアルコール１.５
５．グリセリンモノステアレート２.０
６．ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル３.０
７．ポリオキシエチレン（２０）ソオルビタンモノオレート２.０
８．１，３−ブチレングリコール１.０
９．グリセリン２.０
１０．植物含水エタノール抽出物５.０
１１．香料適量
１２．防腐剤適量
１３．精製水残部

得られた乳液は、使用感にも優れた極めて有用なものであった。

実施例２
顆粒浴用剤：
製造例２により得られた、ウィッチヘーゼル（幹）、ローズマリー、ヨモギの各植物の植物エタノール抽出物を用いて顆粒浴用剤を作成した。

（成分）（質量％）
１．炭酸水素ナトリウム６０.０
２．無水硫酸ナトリウム３０.０
３．ホウ砂５.０
４．植物エタノール抽出物５.０

得られた浴用剤は、使用感にも優れた極めて有用なものであった。

実施例３
薬剤：
以下に示す薬剤を混和して、その混合物を打錠した。なお、植物抽出物としては試験例３でグリケーション阻害作用を確認した実施品を使用した。

（成分）（１錠当たりの質量（ｍｇ））
１．植物抽出物１０
２．乳糖１９０
３．バレイショデンプン３９
４．微結晶セルロース３０
５．合成ケイ酸アルミニウム３０
６．ステアリン酸カルシウム１

得られた錠剤は、安定なものであり、服用し易いものであった。

実施例４
清涼飲料水：
製造例６で得られたハゴロモソウの熱水抽出物１００ｍｇと砂糖５ｇを炭酸ソーダ水１００ｍＬに混合し、清涼飲料水を製造した。

得られた清涼飲料は、淡黄色の飲料であり、清涼感のある味も良好なものであった。

実施例５
チョコレート：
湯煎で溶かしたミルクチョコレート１００ｇに製造例５で得られたハゴロモソウのエタノール抽出物１００ｍｇを添加して、よくかき混ぜた後、型に流し込んで冷やして固めた。

得られたチョコレートは、食感も良く、味も良好であり、通常のチョコレートに比べて遜色のないものであった。

本発明のグリケーション阻害剤は、高いグリケーション阻害効果を有し、グリケーション或いはグリケーションによって生じる終末糖化物質（ＡＧＥ）等の蓄積によって引き起こされる、各種組織障害の予防及び治療・改善効果を得ることができるものである。また、本発明のグリケーション阻害剤の有効成分は植物由来のため安全性が高いものである。

従って、本発明のグリケーション阻害剤は、医薬品や医薬部外品として使用することができ、また化粧品や飲食品等に配合することができるものである。

図１は、各群のラットの１週間ごとの体重を示す図面である。図２は、各群のラットの１日あたりの摂餌量を示す図面である。図３は、各群のラットの血管の蛍光強度を示す図面である。以上

Claims

抽出溶媒として水を用いて抽出されたレモンバームの抽出物を含有することを特徴とするグリケーション阻害剤。
請求項第１項記載のグリケーション阻害剤を含有する組織障害予防・治療内服剤。
請求項第１項記載のグリケーション阻害剤を含有する組織障害（ただし、老化によるものを除く）予防・治療のための外用剤。