JP4974890B2 - ペプチドが結合された、イノシン置換アンチセンスオリゴマー化合物および方法 - Google Patents
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Description
本発明は、アンチセンスオリゴマー化合物およびこのような化合物の使用方法に関し、このアンチセンスオリゴマー化合物は、(i)細胞へのこのオリゴマーの取り込みを高めるのに効果的なアルギニンリッチペプチドに結合されており、そして(ii)G塩基の列が、1個より以上のイノシン塩基によって壊れている。
アンチセンスオリゴマーは、現在臨床研究中のアンチセンス薬物の数により証明され、そしてアンチセンスオリゴマーの多くの潜在的制限が過去数年にわたって首尾よく対処されたという事実(非特許文献1、非特許文献2)によって補助されるたように、製薬として大きな可能性を提供する。新規な荷電していないオリゴマーバックボーンは、細胞への取り込みを改善して、ヌクレアーゼ分解への抵抗性を高めるために開発された(非特許文献3、非特許文献4、非特許文献5)。いくつかのオリゴマー構造(例えば、モルホリノベースの構造)に関しては、修飾されたバックボーンは、その標的核酸への高められた結合親和性を与えるとわかった(非特許文献4、非特許文献5)。
本発明の方法は、1つの局面において、実質的に荷電していないオリゴヌクレオチドアナログ化合物と該化合物の標的細胞への取り込みを高めるのに効果的なアルギニンリッチペプチドとの結合体を形成することによって該化合物の細胞取り込みを高めるための方法において改善を含み、該化合物は、該化合物が結合することが意図される標的核酸領域において、4以上連続したシトシン塩基と相補的である塩基の列を含む。この改善は、該塩基の列における連続したグアニン塩基の数を3以下に(好ましくは2以下に)制限するためにイノシン塩基で、前記化合物における該塩基の列において少なくとも1個のグアニン塩基を置換することを含む。
(a)各々のXサブユニットは、アルギニンまたはアルギニンアナログを独立して表し、該アナログは、構造R1N=C(NH2)R2の側鎖を含む陽イオン性αアミノ酸であり、ここで、R1は、HまたはRであり;R2はR、NH2、NHRまたはNR2であり、ここで、Rは低級アルキルまたは低級アルケニルであって、酸素または窒素をさらに含むことができ;R1とR2とは、一緒に環を形成し得;そして、側鎖は、R1またはR2により該アミノ酸に連結され;
(b)各々のYサブユニットは、中性アミノ酸−C(O)−(CHR)n−NH−を独立して表し、ここで(i)nが2〜7であり、そして各々のRが独立してHまたはメチルであるか、または(ii)nは1であり、そして、Rは、置換されたかまたは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびアラルキルから選択される中性の側鎖であり、ここで、該中性の側鎖は、置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、4個全ての炭素原子について多くとも1個のヘテロ原子を含み;そして
(c)各々のZサブユニットは、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリジン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリンおよびトレオニンから選択されるアミノ酸を独立して表す。
(I.定義)
「アルキル」とは、分岐状であっても、直鎖状であっても、または環状(シクロアルキル)であってもよい、炭素および水素を含む完全に飽和した一価性のラジカルをいう。アルキル基の例は、メチル、エチル、n−ブチル、t−ブチル、n−ヘプチル、イソプロピル、シクロプロピル、シクロペンチル、エチルシクロペンチルおよびシクロヘキシルである。一般に好ましいのは、1〜6個の炭素原子を有しているアルキル基(「低級アルキル」と称され、メチル、エチル、n−ブチル、i−ブチル、t−ブチル、イソアミル、n−ペンチルおよびイソペンチルにより例示される)である。一実施形態において、低級アルキルとは、C1−C4アルキルをいう。
(II.化合物−輸送体結合体)
本発明は、一つの局面では、実質的に荷電していないオリゴヌクレオチドアナログ化合物と、それに対して結合された、標的細胞へのこの化合物の取り込みを高めるのに効果的なアルギニンリッチペプチドとから構成される、治療的なオリゴマー−ペプチド結合体を含む。この化合物は、この化合物が結合することが意図される標的核酸領域において、4個以上連続したシトシン塩基と相補的である塩基の列を含む方法において、この列は、この列における連続したグアニン塩基の数を3個以下に制限するようにこの列中に配置される少なくとも1個のイノシン塩基を含む。好ましくは、塩基の列は、少なくとも2個のイノシン塩基を含み、そしてこの列における連続したグアニンの数は2以下である。
(i)標的核酸領域が開始コドンをmRNAに含む場合、置換は、mRNAによってコードされるタンパク質の翻訳を妨害する結合体の能力を高めるのに効果的である;
(ii)標的核酸領域が、プレプロセシングされたmRNA中にドナースプライス部位またはアクセプタースプライス部位を含む場合、置換は、前記標的領域でmRNAスプライシングをマスキングする結合体の能力を高めるのに効果的である;および
(iii)標的核酸領域が、ウイルス複製に関与する、ウイルスにコードされるシス作用性エレメントを含む場合、置換は、ウイルス複製をブロックする結合体の能力を、イノシン置換がない同じ結合体と比較して高めるのに効果的である。
実質的に荷電していないアンチセンスオリゴマー化合物の生体膜を通した取り込みを高めるために本発明で使用されるアルギニンリッチペプチドは、一般に、8〜13個のXサブユニット、2〜4個の連続したYサブユニット、Xサブユニットの中に単独で散在するYサブユニットを含め、XおよびYから選択される10〜15個のサブユニットからなる部分を含み、そして薬剤が連結される必要に応じたリンカーサブユニットを含む。Xは、構造R1N=C(NH2)R2の側鎖部分を含むアミノ酸サブユニットを表し(図3Aを参照のこと)、ここで、R1は、HまたはRであり;R2はR、NH2、NHRまたはNR2であり、ここで、Rは低級アルキルまたは低級アルケニルであって、酸素または窒素をさらに含むことができ;R1とR2とは、一緒に環を形成し得;そして、側鎖部分は、R1またはR2によりこのアミノ酸サブユニットに連結される。
上記の如く、1つの実施形態では、アンチセンスオリゴマー化合物は、ポリヌクレオチドの標的配列に対して塩基特異的に結合し得る合成オリゴマー(例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドアナログ)である。バックボーン構造か、環構造か、またはより低い頻度では、天然のポリヌクレオチドの塩基構造が修飾されているこの種のアナログは周知であり、そしてこれには、荷電したアナログ(例えばホスホロチオネートに結合したオリゴヌクレオチド)および荷電していないアナログ(例えば、メチルホスホネートおよびペプチド核酸)を含む。連結部分における置換に依存して、いくつかのアナログ(例えば、N3’→P5’ホスホルアミデート)は、荷電していても荷電してなくてもよい。
本発明を支持して実施され、以下に報告する研究では、化合物の細胞取り込みを高めることを目的として、4個以上のグアニン塩基の列を有する(すなわち、一続きの4個以上のシトシン塩基を有する配列を標的とする)オリゴマー化合物にアルギニンリッチペプチドを連結することが、2つの重大な課題を生じることが観察された。これらの課題はいずれも予想外であった。第一に、アルギニンリッチポリペチドの存在によって、陽イオン性イオン交換樹脂での精製プロセス中に結合体の凝集が生じた。第二に、標的に対するこの化合物のアンチセンス活性は、かなり低下していた。
c−myc遺伝子を標的とする、イノシンで置換されたPMOを、実施例4に記載される無細胞ウサギ網状赤血球溶解産物(RRL)アッセイにおいて試験した。この実施例で記載されており、図6に示されるように、イノシンによるグアニン置換の数の増加は、翻訳阻害の減少と相関した。4個のイノシンによるグアニン置換を有するPMO(配列番号10)は、翻訳の阻害が最も効果なく、一方、イノシンによるグアニン置換を1個だけ有するPMO(配列番号2および配列番号3)は、全てのイノシン含有PMOのうちで最も効果的であった。イノシン置換なしのコントロールのc−myc PMO(配列番号1)は、このアッセイにおいて最も高い阻害レベルを有した。イノシン含有PMOについて観察された翻訳阻害の減少は、3個の水素結合を有するG:C塩基対合と比較した、I:C塩基対合の間での1個の水素結合の喪失と一貫している。標的化PMOとその標的との間でのより低いTmは、RRLアッセイが測定する立体的妨害の相対的な損失で役割を果たし得る。
本発明の結合体は、脈管増殖の障害(例えば、再狭窄)の処置に有用である。脈管損傷の領域は、例えば、ステント挿入の有無にかかわらず、脈管介入(例えば、冠状動脈バルーン血管形成術)後の脈管内腔の再狭窄または再度の狭まりを含む。再狭窄は、血管形成術によって処置される病変のうちの約30%〜60%、およびこの手順後3〜6ヵ月以内にステントを用いて処置される病変のうちの約20%に起こると考えられている(例えば、Devi,N.B.ら,Cathet Cardiovasc Diagn 45(3):337−45,1998を参照のこと。狭窄症はまた、冠状動脈バイパス手術後に起こることができ、ここで、心臓手術は、血液が、詰まった動脈周辺をコース変更、すなわち「バイパス」して、心臓への血液および酸素の供給を改善するために行われる。そのような場合、狭窄症は、移植された血管セグメントで、特に交換された血管の接合部に起こり得る。狭窄症は、また、透析のために作製される吻合の接合部で起こり得る。
ペプチドを、本明細書中でSPPSと称される、Fmoc固相ペプチド合成(Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis)によって合成した。p−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂を、C末端に酸を有するペプチドの合成のために用い、その一方で、Rink Amide MBHA樹脂を、ペプチドアミドのために用いた。両方の樹脂は、Novabiochem(San Diego,CA)から入手可能である。代表的合成サイクルを、20%のピペリジンによるN末端脱保護から始めた。それから、N−α−Fmoc保護されたアミノ酸を、N,N−ジイソプロピルエチルアミン(DIEA)の存在下で2−(1H−ベンゾトリアゾール−1−イル)−1,1,3,3−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)を用いた活性化によって、成長中のペプチド鎖に連結した。アルギニン側鎖を、2,2,4,6,7−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−5−スルホニル(Pbf)保護基、トリチルを有するシステインおよびt−ブトキシカルボニル(Boc)を有するリジン側鎖を用いて保護した。所望の配列においてカルボキシからアミノの方向でアミノ酸の全てが付加されるまで、サイクルを繰り返した。ペプチジル樹脂を2.5% H2O、2.5%トリイソプロピルシラン(TIS)および95%トリフルオロ酢酸(TFA)の溶液で処理することによって、合成樹脂からの切断および側鎖の脱保護を同時に実行した。システイン残基を含んでいるペプチドに関しては、2.5%の1,2−エタンジチオール(EDT)を切断カクテルに添加した。粗製ペプチドを、10倍過剰のジエチルエーテルを使用した沈殿により単離した。Source 15S樹脂(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ)を利用している強陽イオン交換HPLCを精製のために使用し、続いてAmberchrom 300M樹脂(Tosoh Bioscience,Montgomeryville,PA)を使用した逆相脱塩を行った。脱塩されたペプチドを凍結乾燥し、そしてマトリックス支援レーザ脱離電離飛行時間型質量分析法(MALDI−TOF MS)、強い陽イオン交換高速液体クロマトグラフ(SCX HPLC)およびキャピラリー電気泳動法(CE)によって正体および純度を分析した。
本実施例は、冠状動脈バイパス移植(CABG)の臨床応用のための、c−myc遺伝子を標的とするアルギニンリッチペプチド−PMO結合体の開発を詳述する。本実施例で記載されているプロジェクトの目的は、受け入れられる収率および純度を有する、結合体の合成および精製のためのプロセスを開発することであった。さらに、結合体の分析のための方法は、結合体を特徴づけなければならず、そして合成プロセス全体にわたって、そしてクリニックにおいて使用されるいかなる製剤においても不純物を識別しなければならない。製品中に残存する遊離ペプチドの量の定量は、おそらく最も重要分析能力である。なぜなら、遊離ペプチドは、結合体または遊離PMOよりも毒性が高い可能性があるからである。
グアニンリッチ核酸配列が、Gカルテットの存在下で安定化される分子間四重鎖構造または分子内四重鎖構造を採り得ることが長く認識されてきた(図5を参照のこと)。Gカルテットは、積み重ねられた平面状の水素結合したグアニンテトラマーであり、グアニンリッチ核酸に四重鎖構造を形成させる。いくつかの生物学的に重要なGリッチ配列はインビトロにおいて生理学的条件下でGカルテットを形成し得るので、インビボでの四重鎖形成の潜在的役割が調査されている。さらに、特異的Gカルテット結合タンパク質を記載している報告の数は、現在、かなりのものである(ShaferおよびSmirnov,2000)。
ホタルルシフェラーゼ(fLUC)についてのコード配列を、Sal I部位Not I部位において、プラスミドpCi−Neo(Promega)のマルチクローニングサイトにサブクローン化し、得られたプラスミドをpCNlucrと名づけた。ヒトc−myc遺伝子のATG開始コドンを取り囲んでいる30塩基対合領域(5’−AGCCTCCCGCGACGATGCCCCTCAACGTTA−3’(配列番号29)、Genbank登録番号V00568)をpCNlucrのNhe I部位およびSal I部位にサブクローン化し、そしてpCNmyclucと名づけた。これにより、c−mycコード配列は、fLUC遺伝子のアミノ酸コード配列とフレームがあって配置された(c−myc:fLUC)。c−mycのこの領域を標的とするPMO(AVI−4126)を、配列番号1として列挙する。イノシンで置換されたグアニン残基の数および位置が様々であって、c−myc開始コドン領域を標的とする、イノシンで置換されたPMOを、配列番号2〜配列番号10として列挙する。
イノシンによる様々なグアニン置換を有する3個の異なるc−myc PMOを(RahxR)4送達ペプチドに結合させ、そして実施例4に記載の同じpCNmyclucプラスミドおよびRRL系を用いて、それらが無細胞翻訳を阻害する能力を試験した。図7に示すように、最少阻害性のPMOは、イノシン置換のないコントロールペプチドが結合されたc−myc PMO配列(配列番号14)であることが観察されたイノシン置換を有する化合物は、かなり有意に大きな翻訳阻害を示した。図7に示すのは、2個または3個のイノシン置換を有するRahxRペプチドPMO結合体(配列番号11〜配列番号13)である。ペプチドに結合されイノシンで置換されたPMOの改善された翻訳阻害は、実施例3に記載されていて、図6に示される、結合していないPMOを用いて観察される阻害低下とは極めて対照的である。アルギニンリッチペプチドがアンチセンスPMOに与える高められた立体妨害阻害は、結合していないイノシン置換されたPMOについて観察される立体妨害特性の低下を完全に克服する。図7に示される結果に基づいて、イノシン置換を有するPMOは、イノシン置換がされていないPMOよりも大きな程度まで予想外に高められる。アルギニンリッチペプチドがイノシン置換されたPMOに与える立体妨害特性を高める機構は、現在わかっていない。しかしながら、これらの改善されたアンチセンスPMOの合成および治療可能性の両方における有用性は大いにある。
Claims (32)
- 実質的に荷電していないアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物とアルギニンリッチペプチドとの結合体を調製するための方法であって、ここで、該オリゴヌクレオチド化合物は、該化合物が結合することが意図される標的核酸領域において少なくとも4個連続したシトシン塩基の列に相補的な塩基配列を含み、該方法は、
a)該オリゴヌクレオチド化合物とアルギニンリッチペプチドとの結合体を形成する工程;および
b)該塩基配列が3個以下連続するグアニン塩基を含むように、該塩基配列に少なくとも1個のイノシン塩基を含める工程
を含み、ここで、該アルギニンリッチペプチドが、少なくとも6個のXサブユニット、少なくとも2個のYサブユニットおよび多くても3個のZサブユニットを含め、Xサブユニット、Yサブユニットおよび必要に応じたZサブユニットから選択される8〜16個のサブユニットを含み、ここで、該サブユニットの50%より多くがXサブユニットであり、そしてここで
(a)各々のXサブユニットが、アルギニンまたはアルギニンアナログを独立して表し、該アナログは、構造R1N=C(NH2)R2の側鎖を含む陽イオン性αアミノ酸であり、ここで、R1は、HまたはRであり;R2はR、NH2、NHRまたはNR2であり、ここで、Rは低級アルキルまたは低級アルケニルであって、酸素または窒素をさらに含むことができ;R1とR2とは、一緒に環を形成し得;そして、該側鎖は、R1またはR2により該アミノ酸に連結され;
(b)各々のYサブユニットが、中性アミノ酸−C(O)−(CHR)n−NH−を独立して表し、ここで(i)nが2〜7であり、そして各々のRが独立してHまたはメチルであるか、または(ii)nは1であり、そして、Rは、置換されたかまたは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびアラルキルから選択される中性の側鎖であり、ここで、該中性の側鎖は、置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、4個全ての炭素原子について多くとも1個のヘテロ原子を含み;そして
(c)各々のZサブユニットが、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリンおよびトレオニンから選択されるアミノ酸を独立して表す、方法。 - 前記少なくとも1個のイノシン塩基を含むことが、前記塩基配列における連続したグアニン塩基の数を2個以下に制限する、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも2個のイノシン塩基が前記塩基配列において含まれる、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1個のイノシン塩基を含むことが、陽イオン性イオン交換樹脂への結合体の結合および該陽イオン性イオン交換樹脂からの結合体の遊離を含む精製工程中の前記結合体の水溶性を、第2の結合体が4個以上連続したグアニン塩基を含むこと以外は該結合体と同じである第2の結合体と比較して高めるのに効果的である、請求項1に記載の方法。
- 前記オリゴヌクレオチド化合物が、mRNA中の開始コドンを含む領域を標的とし、そして前記少なくとも1個のイノシン塩基を含むことは、該mRNAによってコードされるタンパク質の翻訳を妨害する前記結合体の能力を、第2の結合体が4個以上連続したグアニン塩基を含むこと以外は該結合体と同じである第2の結合体と比較して高めるのに効果的である、請求項1に記載の方法。
- 前記オリゴヌクレオチド化合物が、プレプロセシングされたmRNA中にドナースプライス部位またはアクセプタースプライス部位を含む領域を標的とし、そして前記少なくとも1個のイノシン塩基を含むことは、該標的領域でmRNAスプライシングをマスキングする前記結合体の能力を、第2の結合体が4個以上連続したグアニン塩基を含むこと以外は該結合体と同じである第2の結合体と比較して高めるのに効果的である、請求項1に記載の方法。
- 前記オリゴヌクレオチド化合物が、ウイルス複製に関与する、ウイルスにコードされるシス作用性エレメントを含む領域を標的とし、そして前記少なくとも1個のイノシン塩基を含むことは、ウイルス複製をブロックする前記結合体の能力を、第2の結合体が4個以上連続したグアニン塩基を含むこと以外は該結合体と同じである第2の結合体と比較して高めるのに効果的である、請求項1に記載の方法。
- 前記オリゴヌクレオチド化合物が、1個のサブユニットのモルホリノ窒素と隣接したサブユニットのモルホリノ3位の環外炭素との間のリン含有結合により連結されるモルホリノサブユニットから構成されるモルホリノオリゴマーである、請求項1に記載の方法。
- 治療的なオリゴマー−ペプチド結合体であって、
a)実質的に荷電していないアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物が結合することが意図される標的核酸領域において、4個以上連続したシトシン塩基の列と相補的な塩基配列を有する、実質的に荷電していないアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物であって、ここで、該塩基配列は、少なくとも1個のイノシン塩基および3個以下連続したグアニン塩基を含む、実質的に荷電していないアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物、および
b)標的細胞への該化合物の取り込みを高めるのに効果的な、該化合物に結合されたアルギニンリッチペプチドを含み、ここで前記アルギニンリッチペプチドが、少なくとも6個のXサブユニット、少なくとも2個のYサブユニットおよび多くても3個のZサブユニットを含め、Xサブユニット、Yサブユニットおよび必要に応じたZサブユニットから選択される8〜16個のサブユニットを含み、ここで、該サブユニットの50%より多くがXサブユニットであり、そしてここで
(a)各々のXサブユニットが、アルギニンまたはアルギニンアナログを独立して表し、該アナログは、構造R1N=C(NH2)R2の側鎖を含む陽イオン性αアミノ酸であり、ここで、R1は、HまたはRであり;R2はR、NH2、NHRまたはNR2であり、ここで、Rは低級アルキルまたは低級アルケニルであって、酸素または窒素をさらに含むことができ;R1とR2とは、一緒に環を形成し得;そして、該側鎖は、R1またはR2により該アミノ酸に連結され;
(b)各々のYサブユニットが、中性アミノ酸−C(O)−(CHR)n−NH−を独立して表し、ここで(i)nが2〜7であり、そして各々のRが独立してHまたはメチルであるか、または(ii)nは1であり、そして、Rは、置換されたかまたは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびアラルキルから選択される中性の側鎖であり、ここで、該中性の側鎖は、置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、4個全ての炭素原子について多くとも1個のヘテロ原子を含み;そして
(c)各々のZサブユニットが、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリンおよびトレオニンから選択されるアミノ酸を独立して表す、治療的なオリゴマー−ペプチド結合体。 - 前記塩基配列中の前記少なくとも1個のイノシン塩基の位置が、前記塩基配列中の連続したグアニン塩基の数を2個以下に制限する、請求項10に記載の結合体。
- 前記塩基配列が、少なくとも2個のイノシン塩基を含む、請求項10に記載の結合体。
- 前記オリゴヌクレオチド化合物が、1個のサブユニットのモルホリノ窒素と隣接したサブユニットのモルホリノ3位の環外炭素との間のリン含有結合により連結されるモルホリノサブユニットから構成されるモルホリノオリゴマーである、請求項10に記載の結合体。
- 前記結合体は、陽イオン性イオン交換樹脂への結合体の結合および該陽イオン性イオン交換樹脂からの結合体の遊離を含む精製工程中に、第2の結合体が4個以上連続したグアニン塩基を含むこと以外は該結合体と同じである第2の結合体と比較してより大きな水溶性を有する、請求項10に記載の結合体。
- プレプロセシングされたmRNAの前記標的核酸領域中の選択されたドナースプライス部位またはアクセプタースプライス部位での、該プレプロセシングされたmRNAのプロセシングを妨害するのに使用するための、請求項10に記載の結合体であって、該結合体は、mRNAのスプライス部位プロセシングを妨害する際に、第2の結合体が4個以上連続したグアニン塩基を含むこと以外は該結合体と同じである第2の結合体と比較してより活性である、結合体。
- 標的核酸領域がウイルス複製にとって必須のシス作用性エレメントを含むウイルスに感染した細胞におけるウイルス複製の妨害において使用するための、請求項10に記載の結合体であって、該結合体は、該ウイルス複製を妨害する際に、第2の結合体が4個以上連続したグアニン塩基を含むこと以外は該結合体と同じである第2の結合体と比較してより活性である、結合体。
- 標的核酸領域が開始コドンを含むmRNAによってコードされるタンパク質の翻訳の妨害において使用するための、請求項10に記載の結合体であって、該結合体は、該翻訳を妨害する際に、第2の結合体が4個以上連続したグアニン塩基を含むこと以外は該結合体と同じである第2の結合体と比較してより活性である、結合体。
- 前記オリゴヌクレオチド化合物が、(i)ヒトのc−myc mRNAのAUG開始部位を含む領域を標的としており、そして該オリゴヌクレオチド化合物が、(ii)配列番号2〜10からなる群から選択される標的化配列を含む、請求項18に記載の結合体。
- 前記アルギニンリッチペプチドが、配列番号16、配列番号17または配列番号18と同定される配列を含む、請求項19に記載の結合体。
- 前記アルギニンリッチペプチドが、配列番号16、配列番号17または配列番号18と同定される配列を含む、請求項10に記載の結合体。
- c−myc発現の阻害に応答性の病理学的状態を有する被験体を処置するための医薬の製造のためのオリゴマー−ペプチド結合体の使用であって、
該オリゴマー−ペプチド結合体は、
a)mRNA開始コドンを含む標的mRNA領域において、4個以上連続したシトシン塩基の列と相補的な塩基配列を有する実質的に荷電していないオリゴヌクレオチドアナログ化合物であって、ここで、該塩基配列は、少なくとも1個のイノシン塩基および3個以下連続したグアニン塩基を含む、実質的に荷電していないオリゴヌクレオチドアナログ化合物、および
b)該標的細胞への該化合物の取り込みを高めるのに効果的な、該オリゴヌクレオチドアナログ化合物に結合されたアルギニンリッチペプチド
を含み、ここで
該アルギニンリッチペプチドが、少なくとも6個のXサブユニット、少なくとも2個のYサブユニットおよび多くても3個のZサブユニットを含め、Xサブユニット、Yサブユニットおよび必要に応じたZサブユニットから選択される8〜16個のサブユニットを含み、ここで、該サブユニットの50%より多くがXサブユニットであり、そしてここで
(a)各々のXサブユニットが、アルギニンまたはアルギニンアナログを独立して表し、該アナログは、構造R1N=C(NH2)R2の側鎖を含む陽イオン性αアミノ酸であり、ここで、R1は、HまたはRであり;R2はR、NH2、NHRまたはNR2であり、ここで、Rは低級アルキルまたは低級アルケニルであって、酸素または窒素をさらに含むことができ;R1とR2とは、一緒に環を形成し得;そして、該側鎖は、R1またはR2により該アミノ酸に連結され;
(b)各々のYサブユニットが、中性アミノ酸−C(O)−(CHR)n−NH−を独立して表し、ここで(i)nが2〜7であり、そして各々のRが独立してHまたはメチルであるか、または(ii)nは1であり、そして、Rは、置換されたかまたは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびアラルキルから選択される中性の側鎖であり、ここで、該中性の側鎖は、置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、4個全ての炭素原子について多くとも1個のヘテロ原子を含み;そして
(c)各々のZサブユニットが、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリンおよびトレオニンから選択されるアミノ酸を独立して表す、使用。 - 前記オリゴヌクレオチドアナログ化合物が、1個のサブユニットのモルホリノ窒素と隣接したサブユニットのモルホリノ3位の環外炭素との間のリン含有結合により連結されるモルホリノサブユニットから構成されるモルホリノオリゴマーである、請求項22に記載の使用。
- 前記オリゴヌクレオチドアナログ化合物が、配列番号2〜配列番号10からなる群から選択される標的化配列を含む、請求項22に記載の使用。
- 前記アルギニンリッチペプチドが、配列番号16、配列番号17または配列番号18として同定される配列を含む、請求項22に記載の使用。
- 前記オリゴヌクレオチドアナログ化合物が、配列番号2〜配列番号10からなる群から選択される標的化配列を含む、請求項26に記載の使用。
- 請求項22に記載の使用であって、前記医薬が、膀胱癌を処置する際に使用するためのものであり、前記結合体を含む医薬が経尿道送達により投与されるのに適切であり、そして、シスプラチン抗癌化合物とともに使用するのに適切である、使用。
- 請求項22に記載の使用であって、前記医薬が、血管形成術手順後の血管損傷部位での冠状動脈再狭窄の危険度を減らす際に使用するためのものであり、前記結合体を含む医薬が、脈管内送達により投与されるのに適切である、使用。
- 前記結合体を含む医薬が、ステントからの放出により投与されるのに適切であり、該ステントは、血管損傷部位に配置されている、請求項29に記載の使用。
- 請求項22に記載の使用であって、前記医薬が、冠状動脈バイパス形成手術の間に配置される伏在静脈を保護する際に使用するためのものであり、前記結合体を含む医薬が、該静脈を外科的に配置する前に該静脈を該結合体にさらすことにより投与されるのに適切である、使用。
- 請求項22に記載の使用であって、前記医薬が、多嚢胞腎病を処置するためのものであり、前記結合体を含む医薬が、経口投与または非経口投与に適切である、使用。
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