JP4844922B2 - アレルギー体質改善組成物 - Google Patents

Description

本発明は、アレルギー疾患の予防あるいは治療に有効な、アレルギー体質改善組成物に関するものである。詳細には、ガラクトオリゴ糖を主成分とするアレルギー体質改善組成物に関するものである。

近年我が国では、花粉症やアトピー性皮膚炎など様々なアレルギー疾患を患う患者が著しく増加し、国民的な問題となっている。アレルギー疾患の発生機序は複雑であり、未だ解明されていない部分も多いが、免疫調節系の乱れにその原因があることが徐々にわかってきている。免疫調節にはヘルパーＴ細胞が重要な働きをするが、このヘルパーＴ細胞にはＴｈ１細胞とＴｈ２細胞の２種類があり、それぞれがサイトカインの産生を通して細胞性免疫と液性免疫を制御している。Ｔｈ１細胞とＴｈ２細胞は、それぞれの生産するサイトカインによって互いの活性化を抑制し、バランスを保っているが（Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス）、なんらかの原因でＴｈ２細胞の誘導が強くなるとアレルギーを発症する。
Ｔｈ２細胞の生産するＩＬ−４やＩＬ−１３はＢ細胞を刺激し、ＩｇＥを生産させる。ＩｇＥがアレルゲンと結合しさらに高親和性ＩｇＥＦｃレセプターに結合してマスト細胞上で架橋すると、ヒスタミンなどのケミカルメディエーターが遊離する。また血中から組織に浸潤した好酸球もＴｈ２細胞が作るサイトカインに活性化されて、各種メディエーターを分泌する。これらメディエーターが粘液分布亢進や平滑筋収縮などを起こし、アレルギー症状を誘導すると考えられている。
一般に、胎児期や新生児期の免疫系はＴｈ２細胞に偏っており、生後の成長に伴ってＴｈ１／Ｔｈ２バランスが構築されていく。このバランスの正常な発達には、細菌感染や腸内フローラからの刺激が必須と考えられている。日本を初めとする先進国における近年のアレルギー疾患罹患率の増加は、衛生環境の改善による感染症の減少や、正常な腸内フローラの形成の遅れが影響しているのではないかとの仮説が提唱されている（衛生仮説）。

アレルギー疾患への対策としては、抗ヒスタミン薬、ステロイド剤などの薬剤投与や、少量のアレルゲンを長期間投与してに反応を徐々に弱める減感作療法、アレルゲンとの接触を避けるための食事療法、マスクの着用などがあるが、これらには副作用や長期に渡る治療の必要性、ＱＯＬの低下などの問題があるため、もっと手軽な方法として、摂取することで症状を改善することのできる食品、食品素材の開発も盛んに進められている。

アレルギー症状を改善する食品としては、β−グルカンを含む食品や特定の乳酸菌を含む食品などの開発が行われている。また、イソマルトオリゴ糖やラフィノース、メリビオースなど一部のオリゴ糖についても研究が進められている（特許文献１、２、３、非特許文献１、２）。しかしながら、これらとは構成糖や結合様式が異なり、生体内での分解様式や分解されて生じる糖も異なっているガラクトオリゴ糖については報告はなく、これがアレルギー症状を改善する効果を有するかどうかは全くわかっていない。

特許文献４には、ガラクトース残基を有するオリゴ糖の、免疫調節剤としての外用薬利用について述べられている。これはこのオリゴ糖が、エラスチンペプチドによる受容体を介したリンパ球の活性化および増殖を阻害する作用に基づいているが、この方法には、常にリンパ球の周囲に十分な量の当該オリゴ糖を存在させなければならないために投与法が制限されること、炎症反応を緩和するのみで過剰な免疫反応を根本的に防止、改善するものではないことなどの問題点がある。またこの特許文献では、外用薬としての非経口的な利用が述べられているだけで、本発明に示した経口摂取による利用については全く触れられていない。
特開２００１−２８８０９３ 特開２００３−４０７７９ 特開２００５−２８１２９８ 特表２０００−５１６５９１ 第５９回日本栄養・食糧学会大会講演要旨集 ｐ１１３ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ（２００２）、８８、４２１−４２６

本発明は、日常生活の中で自然に摂取することができるアレルギー体質改善組成物を提供することを目的とする。

本発明者らは、こうした課題を解決すべく、アレルギーの発症において中心的な役割を担うＩｇＥの産生を抑制する物質を鋭意探索した結果、ガラクトオリゴ糖にＩｇＥ産生抑制機能があることを見出した。

さらにガラクトオリゴ糖の免疫調節について検討を重ねたところ、ガラクトオリゴ糖がサイトカインＩＬ−４の生産を低減させるという知見を得た。ＩＬ−４はＴｈ２細胞が生産するサイトカインであり、ナイーブＴ細胞からＴｈ２細胞自身への誘導を促進するとともに、Ｂ細胞を刺激してＩｇＥの生産を促す作用をもっている。またガラクトオリゴ糖が、ＩｇＧのサブタイプの一つでありＴｈ２側に制御されるＩｇＧ_１の生産を低減させることも判明した。

こうした検討結果より、ガラクトオリゴ糖はＴｈ２側に偏ったＴｈ１／Ｔｈ２バランスを改善することでＩｇＥの産生を抑制し、アレルギーの発症を抑え、アレルギー体質を改善する機能を持つという重要な知見を得ることができ、発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、ガラクトオリゴ糖を主成分として含有することを特徴とするアレルギー体質改善組成物に関するものである。

本発明で用いるガラクトオリゴ糖は、グルコースに複数のガラクトースが結合した構造のオリゴ糖であり、下記の一般式で表される。
Ｇａｌ−（Ｇａｌ）ｎ−Ｇｌｃ （ｎ＝１〜３、β−１，４結合）

こうしたガラクトオリゴ糖は、ラクトースにβ−ガラクトシダーゼを作用させることで生産することができ、実際に工業生産され、市販されている。ただし、本発明のガラクトオリゴ糖は生産方法を限定するものではなく、酵素法以外の方法で生産されたものでも用いることができる。

本発明で用いるガラクトオリゴ糖は必ずしも高純度の精製品である必要はなく、他の糖類との混合物なども用いることができる。例えばカップオリゴ（日新製糖（株））は、全体の７０％程度を占めるガラクトオリゴ糖（そのうち大部分が三糖であり、四糖、五糖も少量含まれる）に、原料ラクトースを初めとする二糖類とわずかな単糖類が混合した組成物であるが、本発明のアレルギー体質改善組成物として問題なく用いることができる。

本発明のガラクトオリゴ糖を主成分とするアレルギー体質改善組成物は、その形態に制限はなく、例えば塊状、粉状、液状など、使用者の必要に合わせた形態で用いることができる。また、それを用いた飲食物の具体的な例としては、甘味料、清涼飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト、パン、各種サプリメントなどをあげることができる。

本発明で用いるガラクトオリゴ糖の使用量は、年齢、体質、症状、体重、投与方法などによって影響を受けるが、通常成人では一日あたり０．１〜２０ｇが望ましい。

ガラクトオリゴ糖には整腸作用、脂質代謝改善作用、ミネラル吸収作用が認められており、特定保健用食品を初めとする健康を志向した食品に広く用いられている。また免疫系に対する効果として、腸管免疫賦活効果が本発明者らによって見出されている（特願２００５−１１９１３６）。さらにガラクトオリゴ糖はヒトの母乳中に含まれる成分でもあることから、その安全性は十分に確立されている。

次に、実施例を示して具体的に本発明を説明するが、本発明は実施例により限定されるものではない。

ガラクトオリゴ糖によるアレルギー抑制効果
卵白アルブミンをマウスの腹腔内に投与することでアレルギー状態を誘導した。血清および脾臓細胞培養液中のＩｇＥ抗体、ＩｇＧ_１抗体、各種サイトカインを定量することで、飼料に混合して与えたガラクトオリゴ糖のアレルギー体質改善効果を評価した。

（実験材料および方法）
１．実験動物の飼育 実験動物としては、６週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（東京実験動物（株））を購入して用いた。ガラクトオリゴ糖としては、カップオリゴＰ（日新製糖（株）、ガラクトオリゴ糖分７０％）を用いた。マウスは、コントロール飼料群とガラクトオリゴ糖摂取群（カップオリゴＰ５．０％添加飼料群）の２群（１群６匹）に分けた。表１に示した各群それぞれの飼料を与えて飼育した。飼料および飲水は自由摂取させた。

２．アレルギー状態の誘導 飼育開始３週間後に、卵白アルブミン（ＯＶＡ）とＩｍｊｅｃｔ Ａｌｕｍ（ＰＩＥＲＣＥ）の混合液２００μｌ（ＯＶＡ溶液：Ｉｍｊｅｃｔ Ａｌｕｍ＝３：１の割合で混合。混合液２００μｌ中のＯＶＡ含有量２０μｇ）をマウスに腹腔内投与し、アレルギー状態を誘導した。

３．解剖、採血、脾臓細胞培養 ＯＶＡ投与の２週間後にマウスをエーテル麻酔下で解剖し、後大静脈より採血した。得られた血液を遠心分離し、血清を調製した。脾臓細胞を物理的処理によって調製し、１Ｅ７ｃｅｌｌ／ｍｌに細胞数を合わせた後、４８ｗｅｌｌ培養プレートに４８０μｌ／ｗｅｌｌずつ入れて培養を行った。すべてのｗｅｌｌに５ｍｇ／ｍｌのＯＶＡ溶液を１０μｌ添加した。培地にはＲＰＭＩ１６４０培地を用いた。培養３日および７日で培養液を回収した。

４．抗体およびサイトカインの定量 ＩｇＥ抗体、ＩｇＧ_１抗体、各種サイトカインの定量は市販のキットを用いたＥＬＩＳＡ法によって行った。

５．統計解析 実験データは平均値±標準偏差で表示した。結果の統計解析はＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ−ｔの方法によって行い、ｐ≦０．０５の場合に有意な差であると判定した。

（結果）
ＩｇＥ量 図１に示したように、血清中の総ＩｇＥ量はコントロール飼料群に比べガラクトオリゴ糖摂取群で有意に低くなった（ｐ＝０．０２４）。脾臓細胞の７日間培養液を分析した結果も、同様に有意な低下を示した（ｐ＝０．０５、図２）。図３に示したように、血清中に含まれるＯＶＡに特異的なＩｇＥの量は、有意差は得られなかったものの、ガラクトオリゴ糖摂取群で低くなる傾向が見られた。

ＩｇＧ_１量 図４−６に示したように、ＩｇＧのサブタイプの一つでＴｈ２側に制御されるＩｇＧ_１の量を比較したところ、血清や脾臓細胞培養液中の総ＩｇＧ_１ではあまり明確な差がなかったが、脾臓細胞培養液に含まれるＯＶＡに特異的なＩｇＧ_１はガラクトオリゴ糖摂取群で有意に低下した（ｐ＝０．００７）。

サイトカイン量 図７−９に示したように、脾臓細胞の３日間培養液に含まれる各種サイトカインを分析したところ、Ｔｈ１側のＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２では群間に明瞭な差は認められなかったが、Ｔｈ２側のＩＬ−４はガラクトオリゴ糖摂取群で有意に低下した（ｐ＝０．０３）。

以上の結果より、ガラクトオリゴ糖がＴｈ２側に傾いたＴｈ１／Ｔｈ２バランスを改善し、ＩｇＥ抗体産生量を低減することでアレルギー体質を改善する作用を持つことが明らかになった。

飼料に添加したガラクトオリゴ糖が、ＯＶＡを腹腔内投与したマウスの血清総ＩｇＥに与える影響を示したグラフである。 飼料に添加したガラクトオリゴ糖が、ＯＶＡを腹腔内投与したマウスの脾臓細胞培養液総ＩｇＥに与える影響を示したグラフである。 飼料に添加したガラクトオリゴ糖が、ＯＶＡを腹腔内投与したマウスの血清ＯＶＡ特異的ＩｇＥに与える影響を示したグラフである。コントロール群中のある１匹のマウスの値を１０００Ｕ／ｍｌと定義し、これに基づいて他のマウスの値を換算して表した。 飼料に添加したガラクトオリゴ糖が、ＯＶＡを腹腔内投与したマウスの血清総ＩｇＧ_１に与える影響を示したグラフである。 飼料に添加したガラクトオリゴ糖が、ＯＶＡを腹腔内投与したマウスの脾臓細胞培養液総ＩｇＧ_１に与える影響を示したグラフである。 飼料に添加したガラクトオリゴ糖が、ＯＶＡを腹腔内投与したマウスの脾臓細胞培養液ＯＶＡ特異的ＩｇＧ_１に与える影響を示したグラフである。コントロール群中のある１匹のマウスの値を１０００Ｕ／ｍｌと定義し、これに基づいて他のマウスの値を換算して表した。 飼料に添加したガラクトオリゴ糖が、ＯＶＡを腹腔内投与したマウスの脾臓細胞培養液ＩＦＮ−γに与える影響を示したグラフである。 飼料に添加したガラクトオリゴ糖が、ＯＶＡを腹腔内投与したマウスの脾臓細胞培養液ＩＬ−１２に与える影響を示したグラフである。 飼料に添加したガラクトオリゴ糖が、ＯＶＡを腹腔内投与したマウスの脾臓細胞培養液ＩＬ−４に与える影響を示したグラフである。

Claims (1)

1. 下記の一般式で表されるガラクトオリゴ糖を主成分とするアレルギー体質改善組成物。
   Ｇａｌ−（Ｇａｌ）ｎ−Ｇｌｃ（ｎ＝１〜３、β−１，４結合）

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