JP4804726B2 - 走査型光学観察装置 - Google Patents
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Description
図1は、本発明の第1の実施の形態の走査型光学観察装置における走査型レーザ顕微鏡の概略構成を示している。
次に、本発明の第2の実施の形態を説明する。
次に、本発明の第3の実施の形態を説明する。
第1、第2レーザ光を合成する第1合成手段(ダイクロイックミラー9)と、
第1合成手段で合成された光路の光を走査する第1走査手段と、
第3レーザ光を走査する第2走査手段と、
第1走査手段からの光路と第2走査手段からの光路を合成する第2合成手段(ダイクロイックミラー18)と、
λ1<λ3<λ2かつλf1<λ3であって、
前記第2合成手段は、λ3のみを反射し、残りの波長(少なくともλ1、λf1、λ2)を透過する特性を有する。
3…ヘリウムネオンレーザ、4…反射ミラー
5…ダイクロイックミラー、6…レーザラインフィルタ
7…観察用赤外レーザユニット、8…反射ミラー
9…ダイクロイックミラー、10…ダイクロイックミラー
11…観察用励起レーザ光走査手段、11a.11b…ミラー
12…共焦点レンズ、13…共焦点ピンホール
14…内部蛍光検出器、15…刺激用レーザユニット
16…反射ミラー、17…刺激用レーザ光走査手段
17a.17b…ミラー、18…ダイクロイックミラー
19…ターレット、20…ダイクロイックミラー
21…反射ミラー、22…対物レンズ
23…標本、24…外部蛍光検出器
25…ダイクロイックミラー、26…反射ミラー
27…反射ミラー、28…多重染色標本
29…ダイクロイックミラー
Claims (9)
- 1光子励起波長の観察用励起レーザ光を発生する第1のレーザ光源と、
多光子励起波長の観察用励起レーザ光を発生する第2のレーザ光源と、
これら第1および第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光の光路を合成する第1の光学素子と、
前記第1の光学素子で合成された光路の観察用励起レーザ光を標本上で2次元走査する第1の走査手段と、
多光子励起波長の刺激用レーザ光を発生する第3のレーザ光源と、
前記刺激用レーザ光を標本上で2次元走査する第2の走査手段と、
前記第1および第2の走査手段からの光路の交差位置に配置され、これら第1および第2の走査手段からのレーザ光の光路を合成する第2の光学素子と
を具備し、
前記第1の光学素子は、前記第1のレーザ光源からの観察用レーザ光の波長と前記第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光の波長の一方を反射し他方を透過する波長特性であり、
前記第2の光学素子は、前記第1及び第2のレーザ光源からのそれぞれの観察用励起レーザ光の波長と前記第3のレーザ光源からの刺激用レーザ光の波長の一方を反射し他方を透過する波長特性であり、
さらに共焦点ピンホールを有する第1の蛍光検出手段を前記第1の走査手段と前記第1の光学素子との間で分岐された光路上に備え、
前記第2の光学素子は、さらに前記第1のレーザ光源の1光子励起波長または前記第2のレーザ光源の多光子励起波長のそれぞれの観察用励起レーザ光により励起され前記標本より発せられる蛍光波長を前記第1の走査手段へ向けて反射又は透過する波長特性を有し、
さらに共焦点ピンホールを有しない第2の蛍光検出手段と、
前記第2の光学素子から前記標本までの光路に挿脱可能に配置され、第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光により多光子励起され前記標本より発せられる蛍光波長を前記第2の蛍光検出手段へ向けて反射又は透過する波長特性を有する第3の光学素子と
を具備し、
前記第3の光学素子は、前記第2及び第3のレーザ光源からのそれぞれのレーザ光の波長を前記標本へ向けて反射又は透過し、前記多光子励起された蛍光の波長を前記第2の蛍光検出手段へ向けて透過又は反射する波長特性であることを特徴とする走査型光学観察装置。 - 1光子励起波長の観察用励起レーザ光を発生する第1のレーザ光源と、
多光子励起波長の観察用励起レーザ光を発生する第2のレーザ光源と、
これら第1および第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光の光路を合成する第1の光学素子と、
前記第1の光学素子で合成された光路の観察用励起レーザ光を標本上で2次元走査する第1の走査手段と、
多光子励起波長の刺激用レーザ光を発生する第3のレーザ光源と、
前記刺激用レーザ光を標本上で2次元走査する第2の走査手段と、
前記第1および第2の走査手段からの光路の交差位置に配置され、これら第1および第2の走査手段からのレーザ光の光路を合成する第2の光学素子と
を具備し、
前記第1の光学素子は、前記第1のレーザ光源からの観察用レーザ光の波長と前記第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光の波長の一方を反射し他方を透過する波長特性であり、
前記第2の光学素子は、前記第1及び第2のレーザ光源からのそれぞれの観察用励起レーザ光の波長と前記第3のレーザ光源からの刺激用レーザ光の波長の一方を反射し他方を透過する波長特性であり、
さらに共焦点ピンホールを有する第1の蛍光検出手段を前記第1の走査手段と前記第1の光学素子との間で分岐された光路上に備え、
前記第2の光学素子は、さらに前記第1のレーザ光源の1光子励起波長または前記第2のレーザ光源の多光子励起波長のそれぞれの観察用励起レーザ光により励起され前記標本より発せられる蛍光波長を前記第1の走査手段へ向けて反射又は透過する波長特性を有し、
さらに共焦点ピンホールを有しない第2の蛍光検出手段と、
前記第2の光学素子から前記標本までの光路に挿脱可能に配置され、第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光により多光子励起され前記標本より発せられる蛍光波長を前記第2の蛍光検出手段へ向けて反射又は透過する波長特性を有する第3の光学素子と
を具備し、
前記標本は、前記多光子励起された蛍光として互いに波長の異なる第1蛍光と第2蛍光を発し、
前記第3の光学素子は、前記第2及び第3のレーザ光源からのそれぞれのレーザ光の波長を前記標本へ向けて反射又は透過するとともに、前記第1蛍光及び前記第2蛍光の一方の蛍光を前記第2の蛍光検出手段へ向けて透過又は反射し、他方の蛍光を前記第2の光学素子へ向けて反射又は透過する波長特性であることを特徴とする走査型光学観察装置。 - 前記第1、第2、第3レーザ光源からのそれぞれのレーザ光の波長をλ1、λ2、λ3とし、前記標本から発生する蛍光の波長をλf1とするとき、
λ1<λ3<λ2 かつ λf1<λ3であり、
前記第2の光学素子は前記λ3の波長とそれ以外の前記λ1、λ2及びλf1の波長の一方を反射し他方を透過する特性であることを特徴とする請求項1又は2記載の走査型光学観察装置。 - 1光子励起波長の観察用励起レーザ光を発生する第1のレーザ光源と、
多光子励起波長の観察用励起レーザ光を発生する第2のレーザ光源と、
これら第1および第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光の光路を合成する第1の光学素子と、
前記第1の光学素子で合成された光路の観察用励起レーザ光を標本上で2次元走査する第1の走査手段と、
多光子励起波長の刺激用レーザ光を発生する第3のレーザ光源と、
前記刺激用レーザ光を標本上で2次元走査する第2の走査手段と、
前記第1および第2の走査手段からの光路の交差位置に配置され、これら第1および第2の走査手段からのレーザ光の光路を合成する第2の光学素子と
を具備し、
前記第1の光学素子は、前記第1のレーザ光源からの観察用レーザ光の波長と前記第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光の波長の一方を反射し他方を透過する波長特性であり、
前記第2の光学素子は、前記第1及び第2のレーザ光源からのそれぞれの観察用励起レーザ光の波長と前記第3のレーザ光源からの刺激用レーザ光の波長の一方を反射し他方を透過する波長特性であり、
さらに共焦点ピンホールを有する第1の蛍光検出手段を前記第1の走査手段と前記第1の光学素子との間で分岐された光路上に備え、
前記第2の光学素子は、さらに前記第1のレーザ光源の1光子励起波長または前記第2のレーザ光源の多光子励起波長のそれぞれの観察用励起レーザ光により励起され前記標本より発せられる蛍光波長を前記第1の走査手段へ向けて反射又は透過する波長特性を有し、
さらに共焦点ピンホールを有しない第2の蛍光検出手段と、
前記第1の走査手段から前記第2の光学素子までの光路に挿脱可能に配置され、第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光により多光子励起され前記標本より発せられる蛍光波長を前記第2の蛍光検出手段へ向けて反射又は透過する波長特性を有する第3の光学素子と
を具備し、
前記第3の光学素子は、前記第2のレーザ光源からのレーザ光の波長を前記標本へ向けて反射又は透過し、前記多光子励起された蛍光の波長を前記第2の検出手段へ向けて透過又は反射する波長特性であることを特徴とする走査型光学観察装置。 - 前記第1、第2、第3レーザ光源からのそれぞれのレーザ光の波長をλ1、λ2、λ3とし、前記標本から発生する蛍光の波長をλf1とするとき、
λ1<λ3<λ2 かつ λf1<λ3であり、
前記第2の光学素子は前記λ3の波長とそれ以外の前記λ1、λ2及びλf1の波長の一方を反射し他方を透過する特性であることを特徴とする請求項4記載の走査型光学観察装置。 - 1光子励起波長の観察用励起レーザ光を発生する第1のレーザ光源と、
多光子励起波長の観察用励起レーザ光を発生する第2のレーザ光源と、
これら第1および第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光の光路を合成する第1の光学素子と、
前記第1の光学素子で合成された光路の観察用励起レーザ光を標本上で2次元走査する第1の走査手段と、
多光子励起波長の刺激用レーザ光を発生する第3のレーザ光源と、
前記刺激用レーザ光を標本上で2次元走査する第2の走査手段と、
前記第1および第2の走査手段からの光路の交差位置に配置され、これら第1および第2の走査手段からのレーザ光の光路を合成する第2の光学素子と
を具備し、
前記第1の光学素子は、前記第1のレーザ光源からの観察用レーザ光の波長と前記第2のレーザ光源からの観察用励起レーザ光の波長の一方を反射し他方を透過する波長特性であり、
前記第2の光学素子は、前記第1及び第2のレーザ光源からのそれぞれの観察用励起レーザ光の波長と前記第3のレーザ光源からの刺激用レーザ光の波長の一方を反射し他方を透過する波長特性であり、
前記第3のレーザ光源からの多光子励起波長の刺激用レーザ光を多光子励起波長の観察用励起レーザ光として使用可能にしたことを特徴とする走査型光学観察装置。 - 共焦点ピンホールを有しない蛍光検出手段と、
前記第1の走査手段から前記標本までの間の光路に配置されて前記第3の光源からのレーザ光を前記標本に照射することにより発する蛍光を前記蛍光検出手段へ向けて反射又は透過する波長特性を有する第3の光学素子と
を具備することを特徴とする請求項6記載の走査型光学観察装置。 - 前記第3の光学素子は、前記第1のレーザ光源からのレーザ光を標本に照射する場合には光路から退避することを特徴とする請求項1、2及び4のいずれかひとつに記載の走査型光学観察装置。
- 前記第1乃至第3の光学素子は、ダイクロイックミラーであることを特徴とする請求項1、2、4及び6のいずれかに記載の走査型光学観察装置。
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