JP4785036B2

JP4785036B2 - ヒト細胞の分化促進剤及びそれを含む製品

Info

Publication number: JP4785036B2
Application number: JP2005166709A
Authority: JP
Inventors: 修一冷牟田; 敏次島内
Original assignee: Idemitsu Kosan Co Ltd
Current assignee: Idemitsu Kosan Co Ltd
Priority date: 2005-06-07
Filing date: 2005-06-07
Publication date: 2011-10-05
Anticipated expiration: 2025-06-07
Also published as: WO2006132177A1; JP2006342074A

Description

本発明は、ヒト細胞の分化促進剤及びそれを含む製品に関する。

皮膚の老化（しみ、しわ等）の治療や、にきびの治療には、外科的な手法や化学的なピーリング等が用いられている。現在、主に行われている方法は、外科的な方法、又はレチノイン酸等を使用したケミカルピーリングである。
例えば、トランス型レチノイン酸等が、表皮角化細胞の分化を誘導する事が知られており、米国では、シミ、しわ、にきびの治療用に皮膚科領域で応用されている。
しかしながら、表皮角化細胞の分化を誘導するとともに、増殖も促進してしまい皮膚炎を起こすため、日本では使用が認められていない。また、動物実験で内服による催奇原性が認められている。さらに、炎症後、色素沈着が認められるケースもある。

表皮角化細胞の分化について、ペルオキシゾーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ：ＰｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆａｒａｔｅｒＡｃｔｉｖａｔｅｄＲｅｃｅｐｔｏｒ）−γを刺激すると、表皮角化細胞の分化が誘導される事が報告されている（例えば、非特許文献１参照。）。
しかしながら、現在報告されているＰＰＡＲ−γ刺激作用を持つ薬剤は、糖尿病をターゲットとして開発された物であり、原因不明の肝障害等の重篤な副作用を持つ物も知られている。
Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００４１２３（２）３０５−３１２

本発明は上述の問題に鑑みなされたものであり、副作用の少ないヒト細胞の分化促進剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究したところ、γ−リノレン酸のグリセリド体が、ヒト細胞の分化を誘導・促進しつつ、その増殖を抑制することを見出し、本発明を完成させた。
本発明によれば、以下のヒト細胞分化促進剤及びそれを含む製品が提供される。
１．γ−リノレン酸のグリセリド体を含む、ヒト細胞の分化促進剤。
２．さらに、油脂を含む請求項１に記載の分化促進剤。
３．上記１又は２に記載の分化促進剤を含む皮膚用薬剤。
４．上記１又は２に記載の分化促進剤を含む化粧品。
５．上記１又は２に記載の分化促進剤を含む食品。

本発明のヒト細胞分化促進剤は、副作用が少なく、また、優れたヒト細胞の分化誘導・促進機能を有する。このため、表皮メラニンの排出促進作用、細胞のターンオーバーを促進する。

以下、本発明のヒト細胞分化促進剤を具体的に説明する。
本発明の分化促進剤は、有効成分としてγ−リノレン酸のグリセリド体を含む。γ−リノレン酸のグリセリド体としては、ｍｏｎｏ体、ｄｉ体及びｔｒｉ体のいずれも使用できる。好ましくはｔｒｉ体（トリγ−リノレニン）である。
ｍｏｎｏ体又はｄｉ体の場合、グリセリン由来の水酸基の他、γ−リノレン酸以外のエステル基として、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、α−リノレン酸、ジホモ−γリノレン酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸等の脂肪酸が結合したグリセリド体の誘導体でもよい。
尚、γ−リノレン酸のグリセリド体又はグリセリド体の誘導体は、１種単独で使用してもよく、また、２種以上混合して使用してもよい。

本発明の分化促進剤は、γ−リノレン酸のグリセリド体の他に、油脂を混合した油脂組成物の形態で使用することができる。油脂としては、食品用途又は製剤用途で使用されているものが限定なく使用できる。例えば、コーン油、ダイズ油、サフラワー油、綿実油、魚油等が使用できる。

γ−リノレン酸のグリセリド体と油脂の配合比率は、特に制限はなく、分化促進剤の用途に応じて適宜調整すればよいが、混合物に占めるγ−リノレン酸のグリセリド体の重量（体積）を１０重量（体積）％〜１００重量（体積）％とすることが好ましい。

γ−リノレン酸のグリセリド体又はその誘導体は、常法により合成できる。例えば、特開平８−２１４８９２号公報を参照して合成できる。尚、市販品として、ＮＵ−ＣＨＥＫ−ＰＲＥＰ，Ｉｎｃ社が販売している。

本発明の分化促進剤は、ヒトの細胞、特に、表皮角化細胞の分化を誘導する機能を有することから、表皮細胞のターンオーバーの促進やメラニンの排出を促進すること等が期待できる。従って、皮膚の老化の抑制、にきび治療用等の皮膚用治療薬として使用できる。
尚、本発明の分化促進剤は、上述したγ−リノレン酸のグリセリド体及び油脂の他に、用途に応じて必要な成分を添加することができる。以下に、分化促進剤の用途例として、皮膚用薬剤、化粧品及び食品について説明する。

１．皮膚用薬・化粧品
皮膚用薬剤や化粧品としては、外用剤や内服薬として使用できる。
外用剤として使用する場合は、上記の分化促進剤を、軟膏、ローション、クリーム又は乳液等に混和して使用する。保湿性の面から軟膏に混和することが好ましい。
軟膏等の基剤としては、流動パラフィン、セタノール、オレインアルコール、グリセリン等が使用ができる。
外用剤に占める分化促進剤の含有量（γ−リノレン酸のグリセリド体の含有量）は、使用用途、症状等によって適宜調整すればよいが、１０重量（体積）％〜９０重量（体積）％であることが好ましい。

内服薬として使用する場合は、本発明の分化促進剤を、一般に製剤上許容されている、無害の一種又は二種以上のベヒクル、担体、賦形剤、統合剤、安定剤、香味剤等に混和して、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、水剤等の内服剤とすることができる。また、無菌溶液剤や懸濁液剤等として、注射薬又は輸液としたものを用いることができる。
これらの薬剤は、従来公知の技術を用いて製造することができる。例えば、コーンスターチ、ゼラチン等の結合剤、微晶性セルロース等の賦形剤、馬鈴薯澱粉、アルギン酸ナトリウム等の膨化剤、乳糖、ショ糖等の甘味剤を配剤して、錠剤、顆粒剤等とすることができる。また、常法に従い、γ−リノレン酸のグリセリド体を含有する油脂類を、軟質ゼラチンカプセル又は硬質ゼラチンカプセル等に充填して、カプセル剤とすることができる。さらに、シクロデキストリンとの包接物とすることもできる。

２．食品
本発明の分化促進剤を添加した食品は、皮膚の老化抑制やにきびの抑制等に効果を有する機能性食品となる。
添加される食品については、特に制限はなく、例えば、ウエハース、ゼリー、ドレッシング、マーガリン等を挙げることができる。また、上記の内服薬と同様にして製剤化したものを、食品や飼料と混ぜ合わせてもよい。
食品への分化促進剤（γ−リノレン酸のグリセリド体）の添加量は、使用用途、目的等によって適宜調整すればよいが、１０重量（体積）％〜９０重量（体積）％であることが好ましい。

以下、本発明を実施例によってさらに具体的に説明する。
実施例１
ケラチノサイト細胞（三光純薬社製、ＮＨＥＫ（Ｎ）新生児***由来）を解凍後、ヌンク社製Ｔ２５フラスコで、ＣＯ_２濃度５％、３７℃にて培養した。
１日後及び３日後に、培地（三光純薬ＫＧＭ２）にて全量の培地交換を行った。６日後に、トリプシン溶液、ＥＤＴＡ溶液（いずれも三光純薬社製付着細胞継代用試薬セット）により細胞をはがし、培地に２．５×１０^４ケ細胞／ｍｌとなるよう懸濁し、１００μｌづつヌンク社製９６穴マイクロプレートに分注した。

上記の培養液について、ＣＯ_２濃度５％、３７℃にて、２昼夜培養後、アスピレーターにて培地を除去した。
その後、γ−リノレン酸トリグリセリド（ＮＵ−ＣＨＥＫ−ＰＲＥＰ，Ｉｎｃ社製、代理店：フナコシ（株））の最終濃度（培地全体に対する濃度）が５０ｐｐｍとなるように、γ−リノレン酸トリグリセリドを溶解したメタノール溶液を、培地全体の１０ｖｏｌ％となるように混合した液１００μｌをマイクロプレートに注いで、細胞を培養した。
その後、この培養液をＣＯ_２濃度５％、３７℃にて５日間培養した後、ギムザ染色を行った。染色後、顕微鏡にて観察して、ケラチノサイト細胞の分化、増殖の様子を観察した。
図１に実施例１で培養した細胞の顕微鏡写真を示す。

実施例２
γ−リノレン酸トリグリセリドの最終濃度（培地全体に対する濃度）が１００ｐｐｍとなるように変更した他は、実施例１と同様にして細胞を培養し、評価した。
図２に実施例２で培養した細胞の顕微鏡写真を示す。

比較例１
γ−リノレン酸トリグリセリドを添加しなかった他は、実施例１と同様にして細胞を培養し、評価した。
図３に比較例１で培養した細胞の顕微鏡写真を示す。

比較例２
γ−リノレン酸トリグリセリドに代えて、オレイン酸トリグリセリド（ＮＵ−ＣＨＥＫ−ＰＲＥＰ，Ｉｎｃ社製）を使用し、その最終濃度を１００ｐｐｍとした他は、実施例１と同様にして細胞を培養し、評価した。
図４に比較例２で培養した細胞の顕微鏡写真を示す。

比較例３
γ−リノレン酸トリグリセリドに代えて、リノール酸トリグリセリド（ＮＵ−ＣＨＥＫ−ＰＲＥＰ，Ｉｎｃ社製）を使用し、その最終濃度を１００ｐｐｍとした他は、実施例１と同様にして細胞を培養し、評価した。
図５に比較例３で培養した細胞の顕微鏡写真を示す。

図１−５に示すとおり、メタノールのみ（図３）、オレイン酸トリグリセリド（図４）又はリノール酸トリグリセリド（図５）を添加した系では、細胞の分化も、増殖抑制効果も認められなかった。一方、γ−リノレン酸トリグリセリドを５０ｐｐｍ又は１００ｐｐｍ添加した系（図１，２）では、細胞の分化が観測され、さらに、ケラチンの蓄積、増殖を抑制する効果が認められた。

本発明のヒト細胞分化促進剤は、美容皮膚治療（レーザー、ピーリングとの併用治療）、機能性食品、皮膚用薬剤、化粧品等に使用できる。

実施例１で培養した細胞の顕微鏡写真である。実施例２で培養した細胞の顕微鏡写真である。比較例１で培養した細胞の顕微鏡写真である。比較例２で培養した細胞の顕微鏡写真である。比較例３で培養した細胞の顕微鏡写真である。

Claims

γ−リノレン酸のトリグリセリドを有効成分として含む、ケラチノサイト細胞の分化促進剤。
さらに、油脂を含む請求項１に記載の分化促進剤。
γ−リノレン酸のトリグリセリドを有効成分として含む、ケラチノサイト細胞の分化促進皮膚用薬剤。
γ−リノレン酸のトリグリセリドを有効成分として含む、ケラチノサイト細胞の分化促進化粧品。
さらに、油脂を含む請求項４に記載の分化促進化粧品。