JP4769171B2 - Body fluid sample filtration separation apparatus and method - Google Patents

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Description

本発明は、メンブレンアッセイ法を用いた検体の簡易検査法において、検体試料から固形不純物及び／又は粘性不純物を濾過分離する装置、及び該装置を用いた試料の濾過分離方法並びに該装置を含むメンブレンアッセイキットに関する。   The present invention relates to an apparatus for filtering and separating solid impurities and / or viscous impurities from a specimen sample in a simple specimen inspection method using a membrane assay method, a method for filtering and separating a sample using the apparatus, and a membrane including the apparatus It relates to an assay kit.

近年、抗原抗体反応や酵素反応等を利用した、ウイルスや細菌等の病原体への感染、妊娠の有無、血糖値など様々な測定項目を数分から数十分の短時間で検出あるいは定量する簡易検査試薬またはキットが開発されている。病原体構成蛋白質、ヒト繊毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、血糖等が検出あるいは定量の対象である。簡易検査試薬の多くは、特別な設備を必要とせず操作も簡単で安価であるという特徴を有しており、例えば、妊娠診断のための簡易検査試薬はＯＴＣとして一般薬局で販売されている。また病原体への感染を測定する簡易検査試薬は、他の検査試薬と異なり、大病院や医療検査センター以外にも一般の病院や診療所で広く使用されている。特にインフルエンザウイルスについても、その感染の有無を患者が最初に訪れる医療機関で、患者から採取した検体についてその場で感染の有無や何型に感染しているかが判明し、症状が早期のうちに治療措置を施すことができるため、簡易検査試薬の医療における重要性は益々高まってきている。   In recent years, simple tests that detect or quantify various measurement items such as infection with pathogens such as viruses and bacteria, presence of pregnancy, blood glucose level, etc. in a few minutes to tens of minutes using antigen-antibody reactions and enzyme reactions Reagents or kits have been developed. Pathogen constituent proteins, human ciliary gonadotropin (hCG), blood glucose, and the like are targets for detection or quantification. Many of the simple test reagents are characterized by the fact that they do not require special equipment, are easy to operate, and are inexpensive. For example, simple test reagents for pregnancy diagnosis are sold as OTC at general pharmacies. Unlike other test reagents, simple test reagents for measuring infection with pathogens are widely used in general hospitals and clinics in addition to large hospitals and medical test centers. Particularly for influenza viruses, the first medical institution to check for the presence or absence of an infection reveals the presence or type of the sample collected from the patient on the spot, and the symptoms appear early. Because therapeutic measures can be taken, the importance of simple test reagents in medicine is increasing.

現在、簡易検査方法として、免疫測定法、すなわち免疫凝集法やイムノメンブレンアッセイ法、特にニトロセルロース等の膜やフィルター等のメンブレンを用いたアッセイ方法が一般に知られており、フロースルー式とラテラルフロー式メンブレンアッセイ法に大別される。前者は被検出物を含む溶液を被検出物に対する検出用物質が塗布された膜を垂直方向に通過させるものであり、後者は水平方向に展開させるものである。いずれの場合も被検出物に特異的に結合する膜固相物質、被検出物、被検出物に特異的に結合する標識物質の複合体を膜上に形成させて、標識を検出あるいは定量することで被検出物の検出あるいは定量を行うという点で共通しているが、最近ではより簡便で、より短時間での検出が可能であることから、ラテラルフロー式メンブレンアッセイ法（イムノクロマト法ともいう）が主流になっている。   Currently, immunoassay methods, that is, immunoaggregation methods and immunomembrane assay methods, particularly assay methods using membranes such as nitrocellulose and membranes, such as filters, are generally known as simple test methods. It is roughly classified into the formula membrane assay method. The former allows the solution containing the detection object to pass through the film coated with the detection substance for the detection object in the vertical direction, and the latter allows the solution to be developed in the horizontal direction. In either case, a membrane solid phase substance that specifically binds to the detected substance, a detected substance, and a complex of a labeled substance that specifically binds to the detected substance is formed on the film to detect or quantify the label. This is common in that detection or quantification of the detected substance is possible, but recently it is simpler and can be detected in a shorter period of time. Therefore, the lateral flow membrane assay method (also referred to as immunochromatography) is used. ) Has become mainstream.

このような検査を行う際に、ウイルスや細菌等の病原体に感染した体液等の検体試料又は該検体試料を希釈した溶液等から、固形不純物及び／又は粘性不純物等の不溶性の生体成分を除去し、確実に測定対象物質を取得することが求められ、その方法として、従来から遠心分離器を用いる遠心法が知られている。しかしながら遠心法を実施するには装置が大型となり、長い処理時間を必要とし、また操作が極めて煩雑であった。そこで例えば血液について比較的手軽に全血から血漿あるいは血清を分離する器具として、図２に示すようなものが知られている（特許文献１参照）。この装置は、第１の濾過材ユニットａと第２の濾過材ユニットｂとが筒状容器ｃに収納されている。全血から血漿を分離する際には、筒状容器ｃの注入口に全血を供給し、ピストンｄを注入口から挿入して圧力をかけることにより、濾過材ユニットを全血が透過するようにして、血球が分離濾過されて血漿Ａを排出口側から採取するようにしている。   When performing such tests, insoluble biological components such as solid impurities and / or viscous impurities are removed from specimen samples such as body fluids infected with pathogens such as viruses and bacteria, or solutions obtained by diluting the specimen samples. Therefore, it is required to reliably acquire a substance to be measured, and as a method therefor, a centrifugal method using a centrifuge has been conventionally known. However, in order to carry out the centrifugal method, the apparatus becomes large, requires a long processing time, and the operation is extremely complicated. Thus, for example, a device as shown in FIG. 2 is known as a device for separating plasma or serum from whole blood relatively easily (see Patent Document 1). In this apparatus, a first filter medium unit a and a second filter medium unit b are accommodated in a cylindrical container c. When plasma is separated from whole blood, whole blood is supplied to the inlet of the cylindrical container c, and the piston d is inserted from the inlet and pressure is applied so that the whole blood passes through the filter medium unit. Thus, blood cells are separated and filtered, and plasma A is collected from the outlet side.

一方で特許文献２には、端部に体液試料を導入するための容器開口を有し、変形可能な容器側面を備える筒状の体液試料収容容器と、排出口及び前記収容容器の容器開口に気密的に装着可能なホルダー開口部を有すると共に、前記ホルダー開口部と排出口との間に濾過材を収容した体液試料濾過ユニットとを有してなる体液試料分離装置が記載されており、このような濾過装置を用いたアッセイ法については例えば特許文献３にも記載されている。   On the other hand, in Patent Document 2, a cylindrical body fluid sample storage container having a container opening for introducing a body fluid sample at the end and having a deformable container side surface, a discharge port, and a container opening of the storage container are provided. There is described a body fluid sample separation device having a holder opening that can be hermetically mounted, and a body fluid sample filtration unit that contains a filter medium between the holder opening and a discharge port. An assay method using such a filtration device is also described in Patent Document 3, for example.

特開２０００−３３８１０３号公報 （第６頁、図４）JP 2000-338103 A (Page 6, FIG. 4) 特開２００４−１０９１０５号公報JP 2004-109105 A 特開２００４−０２８８７５号公報JP 2004-028875 A

前述した特許文献１の分離装置は、簡便な体液成分の前処理を可能とするものではあるが、筒状容器、ピストン等の部材は、ディスポーザブルの注射器に匹敵する加工精度及び材料を用いているために、このような反復使用が不適当な分離装置としては経済性にやや難がある。また、加工精度が低い場合には体液試料がピストンと容器の隙間から漏れる場合もある。特許文献２や３の装置を用いる場合には、体液試料を導入した後、容器にフィルターを取り付ける手間がかかり、また体液試料収納容器の側面を指で強く圧迫して圧力をかけて体液試料を濾過する必要があるため、その作業性および簡便性に難点があった。
本発明は、ディスポーザブルの濾過分離装置として、簡便かつ操作性が安定しており、かつ経済的にも有利な分離装置を提供するものである。 Although the separation apparatus of Patent Document 1 described above enables simple pretreatment of body fluid components, the cylindrical container, the piston, and other members use processing accuracy and materials comparable to disposable syringes. For this reason, there is a slight difficulty in economical efficiency as a separation apparatus in which such repeated use is inappropriate. In addition, when the processing accuracy is low, the body fluid sample may leak from the gap between the piston and the container. When using the apparatus of Patent Documents 2 and 3, after introducing the body fluid sample, it takes time to attach the filter to the container, and the side surface of the body fluid sample storage container is strongly pressed with a finger to apply pressure to apply the body fluid sample. Since it is necessary to perform filtration, the workability and convenience were problematic.
The present invention provides a disposable separation device that is simple, stable in operability, and economically advantageous as a disposable filtration separation device.

本発明者らは、前記の課題を解決するために鋭意検討を行った結果、本発明の濾過分離装置を用いた濾過分離方法で、極めて迅速かつ簡便に体液試料の濾過分離を行えることを見出し、本発明に至った。
即ち本発明は、
（I）収容容器側面（２２）及び端部に収容容器開口部（２１）を有する筒状の体液試料収容容器（２）と、
前記収容容器開口部（２１）に気密的にスライド可能な濾過ユニット外側面（３２）、体液試料を導入するための濾過ユニット開口部（３１）、並びに端面に濾液排出口（３３）、濾過フィルター収納部（３４）及び濾過フィルター（３５）を有する体液試料濾過ユニット（３）とを有する、
体液試料濾過分離装置、である。
上記体液試料濾過分離装置の収容容器（２）の収容容器開口部（２１）から、体液試料濾過ユニット（３）を収容容器（２）に気密的に装着し、希釈液と体液試料を体液試料濾過ユニット（３）に入れた後、体液濾過ユニット（３）を体液試料収容容器（２）の収容容器開口部（２１）側に引き上げることにより、収容容器（２）の中が陰圧となり、希釈検体液が濾過フィルター（３５）を通過して収容容器（２）内に濾過分離される。
（II）また、本発明は、体液試料収容容器（２）が更に開閉可能な体液試料排出口（２３）を有する、上記（I）記載の体液試料濾過分離装置、に関する。
（III）また、本発明は、体液試料が鼻腔ぬぐい液または鼻腔吸引液である、上記（I）または（II）記載の体液試料濾過分離装置、に関する。
（IV）また、本発明は、上記（I）または（II）に記載した体液試料濾過分離装置の体液試料濾過ユニット（３）を体液試料収容容器開口部（２１）に気密的にスライド可能なように装着し、体液試料濾過ユニット（３）に入れた希釈液中に採取した体液試料を溶解又は分散させたのち、体液濾過ユニット（３）を体液試料収容容器（２）の収容容器開口部（２１）側に引き上げることにより、体液試料収容容器（２）の中を陰圧とし、希釈体液試料を濾過フィルター（３５）を通過させて体液試料収容容器（２）内に移行させる体液試料の濾過分離方法、に関する。
（V）また、本発明は、更に、収容容器（２）内に移行させた体液試料を、開閉可能な体液試料排出口（２３）から排出させる事を含む、上記（IV）に記載の体液試料の濾過分離方法、に関する。
（VI）また、本発明は、体液試料が鼻腔ぬぐい液または鼻腔吸引液である、上記（IV）または（V）記載の体液試料濾過分離方法、に関する。
（VII）また、本発明は、上記（I）〜（III）のいずれか一に記載の体液試料濾過分離装置と、メンブレンアッセイ装置を含むアッセイキット、に関する。
（VIII）また、本発明は、メンブレンアッセイ装置が、ラテラルフロー式アッセイ装置である上記（VII）記載のアッセイキット、に関する。
（IX）また、本発明は、インフルエンザウイルスまたはＲＳウイルス検出用である、上記（VII）または（VIII）記載のイムノアッセイキット、に関する。 As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the present inventors have found that a filtration / separation method using the filtration / separation device of the present invention can very quickly and easily filter and separate a body fluid sample. The present invention has been reached.
That is, the present invention
(I) a cylindrical body fluid sample storage container (2) having a storage container side surface (22) and a storage container opening (21) at its end;
Filtration unit outer surface (32) slidable in an airtight manner into the container opening (21), a filtration unit opening (31) for introducing a body fluid sample, a filtrate outlet (33) on the end surface, and a filtration filter A body fluid sample filtration unit (3) having a storage part (34) and a filtration filter (35),
A body fluid sample filtration separation device;
The body fluid sample filtration unit (3) is hermetically attached to the housing container (2) from the housing container opening (21) of the housing container (2) of the body fluid sample filtration / separation apparatus, and the diluted liquid and the body fluid sample are placed in the body fluid sample. After putting in the filtration unit (3), the body fluid filtration unit (3) is pulled up to the housing container opening (21) side of the body fluid sample housing container (2), whereby the inside of the housing container (2) becomes negative pressure, The diluted specimen liquid passes through the filtration filter (35) and is separated by filtration into the storage container (2).
(II) Moreover, this invention relates to the bodily fluid sample filtration separation apparatus of the said (I) description which has a bodily fluid sample discharge port (23) which the bodily fluid sample storage container (2) can further open and close.
(III) The present invention also relates to the bodily fluid sample filtration / separation device according to (I) or (II) above, wherein the bodily fluid sample is a nasal swab or nasal aspirate.
(IV) In the present invention, the body fluid sample filtration unit (3) of the body fluid sample filtration / separation device described in (I) or (II) can be airtightly slid to the body fluid sample storage container opening (21). After the body fluid sample collected in the diluent put in the body fluid sample filtration unit (3) is dissolved or dispersed, the body fluid filtration unit (3) is opened in the housing container opening of the body fluid sample housing container (2). (21) By pulling up to the side, the body fluid sample storage container (2) has a negative pressure, and the diluted body fluid sample passes through the filtration filter (35) and is transferred into the body fluid sample storage container (2). The present invention relates to a filtration separation method.
(V) Further, the present invention further includes discharging the bodily fluid sample transferred into the containing container (2) from the openable and closable bodily fluid sample outlet (23). The present invention relates to a method for filtering and separating a sample.
(VI) The present invention also relates to the method for filtering and separating a body fluid sample according to the above (IV) or (V), wherein the body fluid sample is a nasal wipe or a nasal aspirate.
(VII) Moreover, this invention relates to the assay kit containing the bodily fluid sample filtration separation apparatus as described in any one of said (I)-(III), and a membrane assay apparatus.
(VIII) The present invention also relates to the assay kit according to (VII) above, wherein the membrane assay device is a lateral flow assay device.
(IX) The present invention also relates to the immunoassay kit according to the above (VII) or (VIII), which is for detecting influenza virus or RS virus.

本発明の体液試料濾過分離装置によれば、少量の試料であっても容易でかつ安全に濾過操作を行うことができ、検体希釈液を確実に検査試薬またはキットに供給することが可能となる。しかも、収容容器及び体液試料濾過ユニットは、高度な加工精度を要求されること無く安価な樹脂材料により製造することが可能であることから、再使用が不適当な分離装置であっても、経済的に有利に提供することが可能となる。また、陰圧を発生させて急速に濾過を行うため、目詰まりが発生しにくく、従来の濾過方法よりも操作が簡便であり、短時間に行うことが可能である。   According to the bodily fluid sample filtration / separation device of the present invention, even a small amount of sample can be easily and safely filtered, and the specimen diluent can be reliably supplied to the test reagent or kit. . Moreover, since the container and the body fluid sample filtration unit can be manufactured from an inexpensive resin material without requiring high processing accuracy, even if the separation device is inappropriate for reuse, it is economical. Can be advantageously provided. Moreover, since the negative pressure is generated and the filtration is performed rapidly, clogging is less likely to occur, the operation is simpler than the conventional filtration method, and the filtration can be performed in a short time.

本発明による濾過分離装置１の基本的な構成は、例えば図１に示すように、体液試料収容容器２と体液試料濾過ユニット３からなる構成である。体液試料収容容器２と体液試料濾過ユニット３は、両者を一体化して体液試料濾過分離装置１として供給しても良いし、それぞれを別個のユニットとして供給し、検査の際に体液試料収容容器２の内側に体液試料濾過ユニット３を挿入して用いても良い。   The basic configuration of the filtration / separation apparatus 1 according to the present invention is a configuration including a body fluid sample storage container 2 and a body fluid sample filtration unit 3, for example, as shown in FIG. The bodily fluid sample storage container 2 and the bodily fluid sample filtration unit 3 may be integrated together and supplied as the bodily fluid sample filtration / separation apparatus 1 or supplied as separate units, and the bodily fluid sample storage container 2 at the time of inspection. The body fluid sample filtration unit 3 may be inserted into the inside of the body.

体液試料収容容器２は、上面が平面で収容容器開口部２１を備えたほぼ筒状の形状を有している。収容容器開口部２１は、後述する体液成分濾過ユニット３の濾過ユニット開口部３１の外径とほぼ同一な内径を有し、体液成分濾過ユニット３の濾過ユニット外側面３２が気密的に装着可能でかつ気密的にスライド可能な形状である。
また、本発明の濾過分離装置は、濾過された体液試料をアッセイするアッセイ装置の種類によって、構造を適宜変えてもよい。例えば、体液試料濾過ユニット３に設置した濾過フィルターで濾過されて体液試料収容容器に移された希釈体液試料液を、更にアッセイ装置に滴下して供給するか、又はストリップ状の検査試薬を体液試料収容容器２の中に浸漬して検査を行なってもよい。後者の場合には特に必要ではないが、前者の場合には、体液試料収容容器２（例えば、収容容器開口部２１の反対側端部）に開閉可能な体液試料排出口２３を有することが好ましい。そしてこの場合、前記収容容器２の収容容器側面２２は、変形可能であることが好ましい。変形可能な容器側面とすることにより、前記収容容器２に収容された濾液に軽い圧力を加えて、体液試料排出口２３から導出させることもできる。さらに、前記収容容器２の容器底部に最終濾過フィルター２５を設置してもよい。このような最終濾過フィルター２５を設けることにより、前記収容容器２に収容された濾液に軽い圧力をかけて、体液試料排出口２３から排出させる時に、体液試料をさらに濾過することもできる。 The body fluid sample storage container 2 has a substantially cylindrical shape with a flat upper surface and a storage container opening 21. The container opening 21 has an inner diameter substantially the same as the outer diameter of the filtration unit opening 31 of the bodily fluid component filtration unit 3 described later, and the filtration unit outer surface 32 of the bodily fluid component filtration unit 3 can be airtightly attached. And it has a shape that allows airtight sliding.
Further, the structure of the filtration / separation device of the present invention may be appropriately changed depending on the type of assay device for assaying the filtered body fluid sample. For example, a diluted body fluid sample solution filtered through a filtration filter installed in the body fluid sample filtration unit 3 and transferred to the body fluid sample storage container is further dropped and supplied to the assay device, or a strip-shaped test reagent is supplied to the body fluid sample. The inspection may be performed by immersion in the storage container 2. In the latter case, it is not particularly necessary, but in the former case, it is preferable to have a body fluid sample discharge port 23 that can be opened and closed at the body fluid sample storage container 2 (for example, the end opposite to the storage container opening 21). . In this case, the storage container side surface 22 of the storage container 2 is preferably deformable. By adopting a deformable container side surface, a light pressure can be applied to the filtrate stored in the storage container 2 and the liquid can be led out from the body fluid sample outlet 23. Furthermore, a final filtration filter 25 may be installed at the bottom of the container 2. By providing such a final filtration filter 25, when the filtrate stored in the storage container 2 is lightly pressurized and discharged from the body fluid sample discharge port 23, the body fluid sample can be further filtered.

体液試料濾過ユニット３は、体液試料収容容器２の収容容器開口部２１に装着可能な濾過ユニット開口部３１および濾過ユニット外側面３２、並びに端面に濾液排出口３３、濾過フィルター収納部３４、及び濾過フィルター３５を有する。この収容容器開口部２１と濾過ユニット開口部３１および濾過ユニット外側面３２とは着脱可能でかつ気密的にスライドできる形状であれば、ねじ込み構造、挿入する構造などの形状のいずれでもよい。
濾液排出口３３、濾過フィルター収納部３４、及び濾過フィルター３５は、体液試料収容容器２に装着された状態において、体液試料収容容器２側の端面側に設置されていればよい。
体液試料濾過ユニット３内部の濾過フィルター収納部３４には、濾過フィルター３５が内壁に密着するように収容されている。
この体液試料濾過ユニット３は、体液試料収容容器２に装着した状態で供給してもよく、また個別のユニットとして供給してもよい。また、体液試料濾過ユニット３中に希釈液を入れて、開口部３１に蓋３６をしたものを供給してもよい。 The body fluid sample filtration unit 3 includes a filtration unit opening 31 and a filtration unit outer surface 32 that can be attached to the accommodation container opening 21 of the body fluid sample storage container 2, and a filtrate discharge port 33, a filtration filter storage 34, and a filtration at the end face. A filter 35 is provided. As long as the container opening 21, the filtration unit opening 31, and the filtration unit outer surface 32 are detachable and airtightly slidable, they may have any shape such as a screw-in structure or an insertion structure.
The filtrate discharge port 33, the filtration filter storage portion 34, and the filtration filter 35 may be installed on the end surface side on the body fluid sample storage container 2 side in a state of being mounted on the body fluid sample storage container 2.
A filtration filter 35 is housed in the filtration filter housing portion 34 inside the body fluid sample filtration unit 3 so as to be in close contact with the inner wall.
The body fluid sample filtration unit 3 may be supplied while being attached to the body fluid sample storage container 2 or may be supplied as an individual unit. Alternatively, a diluted liquid may be put into the body fluid sample filtering unit 3 and the opening 31 covered with the lid 36 may be supplied.

本発明の体液試料濾過分離装置１の体液試料収容容器２と体液試料濾過ユニット３の材料にはどちらも、ガラス、合成樹脂、天然樹脂、金属などから選択して使用することができる。例えば、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂等の合成樹脂は、加工が容易であり、また安価であり、殊に体液試料収容容器２の収容容器側面２２が変形容易な構成とするために好ましい。またこれらの材料はそれぞれの部品で適宜選択し、複合材料として使用することもできる。   Any of the materials of the body fluid sample storage container 2 and the body fluid sample filtration unit 3 of the body fluid sample filtration / separation apparatus 1 of the present invention can be selected from glass, synthetic resin, natural resin, metal, and the like. For example, a synthetic resin such as a polyethylene resin or a polypropylene resin is preferable because it is easy to process and inexpensive, and in particular, the storage container side surface 22 of the body fluid sample storage container 2 can be easily deformed. These materials can be appropriately selected for each component and used as a composite material.

前記体液試料濾過ユニット３の濾過フィルター３５および、体液試料収容容器２に場合によって設ける最終濾過フィルター２５としては、例えばセルロース、ニトロセルロース、セルロースアセテートなどのセルロース誘導体、グラスウール、グラスフィルターなどのガラス誘導体、アクリロニトリルなどの化学繊維を単独または混合した材料をフィルター状若しくは圧縮して用いることができる。これらは各種フィルター、濾過材料等の市販品の中から選択して用いることができ、濾過を行う成分や測定対象物質に対応して適宜選択して使用することができる。例えば、全血を濾過して血漿を得る場合には、グラスフィルターを用い、一般的に赤血球の直径が１０〜３０μｍ、白血球の直径が７〜８μｍ、血小板の直径が２〜４μｍであるという数字を基に、血球の直径より小さい孔径のフィルターであればよく、好ましくは１．５μｍ程度の孔径もしくは保留粒子径を有するフィルターを用いるか、完全に血球成分を除く場合は、０．２〜７μｍの孔径もしくは保留粒子径を有するフィルターを用いることができる。また、鼻腔のぬぐい液などを溶解した体液試料では、濾過対象物および測定対象物に応じて孔径もしくは保留粒子径を適宜選択し、セルロースなどの各種フィルターを必要に応じて積層して用いることができる。   Examples of the filtration filter 35 of the body fluid sample filtration unit 3 and the final filtration filter 25 optionally provided in the body fluid sample storage container 2 include cellulose derivatives such as cellulose, nitrocellulose, and cellulose acetate, glass derivatives such as glass wool and glass filters, A material in which a chemical fiber such as acrylonitrile is used alone or mixed can be used in the form of a filter or compressed. These can be selected and used from commercially available products such as various filters and filtration materials, and can be appropriately selected and used according to the component to be filtered and the substance to be measured. For example, when plasma is obtained by filtering whole blood, a glass filter is generally used, and the number of red blood cells is 10 to 30 μm, white blood cells are 7 to 8 μm, and platelets are 2 to 4 μm. Based on the above, a filter having a pore size smaller than the diameter of blood cells may be used, and preferably a filter having a pore size of about 1.5 μm or a retained particle size is used, or 0.2 to 7 μm when the blood cell component is completely removed. A filter having a pore size of or a retained particle size can be used. For body fluid samples in which nasal wipes are dissolved, the pore size or retained particle size is appropriately selected according to the object to be filtered and the object to be measured, and various filters such as cellulose may be laminated and used as necessary. it can.

本発明の体液試料濾過分離装置１を用いる分離方法は、体液試料濾過ユニット３を濾液排出口３３側から体液試料収容容器２に装着した状態もしくは個別のユニットとして供給し、前記濾過ユニット３には、希釈液を予め入れておくか、もしくは直前に入れ、これに採取した体液試料を溶解又は分散させる。この後、前記濾過ユニット３を前記収容容器２の開口部２１側に引き出すことにより、前記収容容器２の内部が陰圧となり、この圧力によって、前記濾過ユニット３に入った体液試料を含む希釈液を前記濾過ユニット３の濾過フィルター収納部３４に収められた濾過フィルター３５を通して濾過分離することができる。   In the separation method using the body fluid sample filtration / separation apparatus 1 of the present invention, the body fluid sample filtration unit 3 is supplied from the filtrate outlet 33 side to the body fluid sample storage container 2 or supplied as an individual unit. The diluting liquid is put in advance or just before, and the collected body fluid sample is dissolved or dispersed in the diluting liquid. Thereafter, the filtration unit 3 is pulled out to the opening 21 side of the storage container 2 so that the inside of the storage container 2 becomes a negative pressure, and the diluted liquid containing the body fluid sample that has entered the filtration unit 3 due to this pressure. Can be separated by filtration through a filtration filter 35 housed in the filtration filter housing portion 34 of the filtration unit 3.

さらに、体液試料収容容器２の底部に気密的に開閉可能な体液試料排出口２３を設ける場合、体液試料濾過ユニット３を濾液排出口３３側から変形可能な収容容器側面２２を有する体液試料収容容器２に装着した状態もしくは個別のユニットとして供給し、前記濾過ユニット３には、希釈液を予め入れておくか、もしくは直前に入れ、これに採取した体液試料を溶解又は分散させる。この後、前記開閉可能な体液試料排出口２３を気密的に閉じた状態で、体液試料収容容器２より体液試料濾過ユニット３を引き出す。これにより前記収容容器２の内部は陰圧となり、この圧力によって、希釈液が体液試料濾過ユニット３の濾過フィルター収納部３４に収められた濾過フィルター３５を通して濾過分離される。この後、前記排出口２３を開放し、変形可能な収容容器側面２２を軽く押して加圧することにより、濾過された希釈液をから導出できる。場合によって、体液試料収容容器２の最終濾過フィルター収納部２４および最終濾過フィルター２５を設置してもよく、これにより濾過された希釈液をさらに濾過しながら導出できる。以上のように、濾過分離装置および濾過分離方法を用いることにより、従来の濾過方法に比べて、部品点数が少なく経済的に有利であり、さらに操作性が簡便かつ安定しており、操作時間も短縮することができる。   Further, when a body fluid sample discharge port 23 that can be opened and closed airtightly is provided at the bottom of the body fluid sample storage container 2, the body fluid sample storage container having a storage container side surface 22 that can deform the body fluid sample filtration unit 3 from the filtrate discharge port 33 side. 2 is supplied as an individual unit or as a separate unit, and the diluting solution is put in the filtering unit 3 in advance or just before, and the collected body fluid sample is dissolved or dispersed therein. Thereafter, the body fluid sample filtration unit 3 is pulled out from the body fluid sample storage container 2 with the body fluid sample discharge port 23 that can be opened and closed airtightly closed. As a result, the inside of the container 2 becomes a negative pressure, and the dilute solution is filtered and separated by the pressure through the filtration filter 35 housed in the filtration filter housing part 34 of the body fluid sample filtration unit 3. Thereafter, the outlet 23 is opened, and the deformable container side surface 22 is lightly pressed and pressurized, whereby the filtered diluted liquid can be derived. In some cases, the final filtration filter storage unit 24 and the final filtration filter 25 of the body fluid sample storage container 2 may be installed, and the filtered diluted solution can be derived while further filtering. As described above, by using the filtration separation device and the filtration separation method, the number of parts is small and economically advantageous compared to the conventional filtration method, the operability is simple and stable, and the operation time is also long. It can be shortened.

本発明の装置で濾過された試料は、各種診断の試料として用いることができる。
本発明の装置で濾過を行う対象である体液試料としては、例えば全血、尿、便、鼻腔ぬぐい液、鼻腔吸引液、咽頭ぬぐい液、肺胞洗浄液、喀痰、鼓膜切開・貯留液、スワブ検体として収集された分泌物などを挙げることができる。濾過される固形物は、例えば、全血の場合、濾過される固形物は、例えば赤血球、白血球などの血球成分であり、濾過して得られる液体成分は血漿または血清に相当する成分である。各種ぬぐい液などの場合、試料に混在する生体成分が剥離または分解して凝集した細胞成分などがある。また、これらの試料中には、プロテオグリカン、糖脂質等の粘性物質をはじめ、様々な生体成分が含まれる場合や細菌などの微生物が混在する場合があり、これらの成分の一部はあるいは全てはアッセイ装置によっては、非特異的な反応を誘導する場合があり、上記の成分も本発明の装置で濾過を行う対象となる。本発明の体液試料濾過分離装置を用いると、鼻腔ぬぐい液、鼻腔吸引液のように粘稠で不溶物が多く、従来の濾過分離装置では迅速に濾過できない体液試料も迅速に濾過することができる。 The sample filtered by the apparatus of the present invention can be used as a sample for various diagnoses.
Examples of body fluid samples to be filtered with the apparatus of the present invention include whole blood, urine, feces, nasal wipes, nasal aspirate, throat swabs, alveolar lavage fluid, sputum, tympanic incision / reservoir, swab specimens And the collected secretions. For example, in the case of whole blood, the solid matter to be filtered is a blood cell component such as red blood cells and white blood cells, and the liquid component obtained by filtration is a component corresponding to plasma or serum. In the case of various wiping liquids, there are cell components in which biological components mixed in a sample are peeled or decomposed and aggregated. In addition, these samples may contain various biological components, including viscous substances such as proteoglycans and glycolipids, and may contain microbes such as bacteria. Some or all of these components Depending on the assay device, a non-specific reaction may be induced, and the above components are also targets to be filtered by the device of the present invention. When the body fluid sample filtration / separation device of the present invention is used, body fluid samples such as nasal swabs and nasal cavity suction fluids that are viscous and insoluble and can not be filtered quickly by conventional filtration / separation devices can be quickly filtered. .

体液試料の希釈液は、濾過分離された体液試料をアッセイする方法により適宜用いることができるが、通常、水、生理食塩水、緩衝液、更に必要に応じて界面活性剤や体液試料の安定剤等を添加したものである。緩衝液としては、りん酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、グッドの緩衝液等が挙げられる。   The diluted body fluid sample can be appropriately used depending on the method of assaying the filtered body fluid sample. Usually, water, physiological saline, buffer solution, and optionally a surfactant or a body fluid sample stabilizer. Etc. are added. Examples of the buffer include phosphate buffer, Tris-HCl buffer, Good's buffer, and the like.

本発明の体液試料濾過分離装置は上述のとおり様々なアッセイ方法の試料の濾過分離に用いることができるが、特に迅速さを要求されるアッセイにおいて用いると効果的である。そのようなアッセイの例としてはフロースルー式あるいはラテラルフロー式等のメンブレンを用いたアッセイが挙げられる。本発明において、メンブレンアッセイとは、後述する紙やニトロセルロース等のメンブレン上に、被検出物に特異的に結合する捕捉物質、例えば抗体を検出する場合にはその抗原となる物質を固定化し、被検出物の存在を検出しようとする試料液をメンブレン上に流し、前記捕捉物質により前記試料液中の被検出物を捕捉して、標識物質の使用（例えばサンドイッチイムノアッセイ）など何らかの方法により捕捉された被検出物を検出する方法である。本発明において、メンブレンアッセイ装置とは、被検出物に特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンを少なくとも含み、上記アッセイ方法に用いられる装置を意味する。
本発明の１つの好ましい態様として、上述した体液濾過分離装置と、メンブレンアッセイ装置とを共に含むイムノアッセイキットが挙げられる。 As described above, the body fluid sample filtration / separation apparatus of the present invention can be used for the filtration separation of samples in various assay methods, but it is particularly effective when used in assays that require rapidity. Examples of such an assay include an assay using a flow-through type or lateral flow type membrane. In the present invention, the membrane assay refers to a capture substance that specifically binds to an object to be detected on a membrane such as paper or nitrocellulose, which will be described later, for example, when detecting an antibody, a substance that becomes an antigen is immobilized, A sample solution to be detected for the presence of an object to be detected is flowed on the membrane, the object to be detected in the sample solution is captured by the capture substance, and captured by some method such as the use of a labeling substance (for example, sandwich immunoassay). This is a method for detecting a detected object. In the present invention, the membrane assay apparatus means an apparatus used in the above assay method, which includes at least a membrane on which a capture substance that specifically binds to an object to be detected is immobilized.
One preferred embodiment of the present invention is an immunoassay kit that includes both the above-described body fluid filtration / separation device and a membrane assay device.

メンブレンアッセイの例として、ラテラルフロー式メンブレンアッセイ（イムノクロマト法）について説明する。ラテラルフロー式メンブレンアッセイ法を利用するアッセイ装置の具体例は、例えば図３及び４に示されるような装置である。
図３は装置の平面図であり、図４は、図３のＩ−Ｉ’切断端面である。図３及び４において、（ａ）は調製した検体試料を滴下するために設置されたサンプル滴下パッドである。（ｂ）は標識物質が乾燥化されて保持される標識物質乾燥パッドである。（ｃ）は滴下された溶液を吸収するためのサンプル吸収パッドである。（ｄ）は被検出物に特異的に結合する捕捉物質が結合したメンブレンであり、（ｅ）、（ｆ）及び（ｇ）は被検出物に特異的に結合する捕捉物質が（ｄ）上でライン状に結合している位置を示す。さらに捕捉物質が結合している位置の下流の位置（ｈ）に標識物質を結合することができる物質、例えば被検出物と同等の反応性を有する物質又は標識物質に結合する抗体を固相してもよい。これにより標識物質が標識物質乾燥パッドから捕捉物質が結合したメンブレン上を流れたことを試験ごとに確認することができる。（ｈ）の位置には発色が認められない場合にはアッセイは無効と判断される。（ｉ）は部材を固定し、強度を増すためのプラスチック製バッキングシートである。（ｊ）はサンプル滴下パッドの一部、標識物質乾燥パッド、サンプル吸収パッド及びメンブレンを被覆する透明プラスチックラミネートである。 As an example of the membrane assay, a lateral flow membrane assay (immunochromatography method) will be described. A specific example of an assay device using a lateral flow membrane assay is a device as shown in FIGS. 3 and 4, for example.
FIG. 3 is a plan view of the apparatus, and FIG. 4 is a cut end surface taken along the line II ′ of FIG. 3 and 4, (a) is a sample dropping pad installed for dropping a prepared specimen sample. (B) is a labeling substance drying pad on which the labeling substance is dried and held. (C) is a sample absorption pad for absorbing the dropped solution. (D) is a membrane to which a capture substance that specifically binds to the object to be detected is bound, and (e), (f), and (g) are those in which the capture substance that specifically binds to the object to be detected is on (d). The position connected in a line is indicated by. Furthermore, a substance capable of binding the labeling substance to the position (h) downstream of the position where the capture substance is bound, for example, a substance having reactivity equivalent to the detection target or an antibody binding to the labeling substance is solid-phased. May be. Thus, it can be confirmed for each test that the labeling substance flows from the labeling substance drying pad on the membrane to which the trapping substance is bound. If color development is not observed at the position (h), the assay is judged invalid. (I) is a plastic backing sheet for fixing members and increasing strength. (J) is a transparent plastic laminate covering a part of the sample dropping pad, the labeling substance drying pad, the sample absorption pad and the membrane.

メンブレンアッセイ装置中のメンブレンとしては、紙やニトロセルロースなどの多孔質物質、又は繊維状マトリクス、薄層クロマトグラフに用いられるシリカ、微細顆粒セルロース、ナイロン６，６などの担体からできたメンブレンを挙げることができる。感度・特異性が高いラテラルフロー式メンブレンアッセイを行うために好ましい多孔質物質としては、微多孔質セルロースエステル、たとえばアルカンカルボン酸などの脂肪族カルボン酸とのセルロースエステルが挙げられ、特に好ましくはニトロセルロースから作られた微多孔質物質が挙げられる。また、前記セルロースエステルとニトロセルロースの混合物も好適に用いることができる。上記メンブレンの平均孔径は０．５〜１５μｍが用いられることが多い。   Examples of the membrane in the membrane assay apparatus include porous materials such as paper and nitrocellulose, or membranes made of a carrier such as a fibrous matrix, silica used for thin layer chromatography, fine granular cellulose, nylon 6,6, and the like. be able to. Preferred porous materials for conducting a lateral flow membrane assay with high sensitivity and specificity include microporous cellulose esters, for example, cellulose esters with aliphatic carboxylic acids such as alkane carboxylic acids, particularly preferably nitro Examples include microporous materials made from cellulose. Moreover, the mixture of the said cellulose ester and nitrocellulose can also be used suitably. In many cases, the average pore diameter of the membrane is 0.5 to 15 μm.

以下に、本発明をラテラルフロー法メンブレンアッセイに適用する場合の具体的な手順の一例を示す。
（１）ウイルスや細菌等に感染した疑いがある患者の咽頭、鼻腔あるいは直腸等から綿棒等の検体採取器具を用いて直接採取した検体試料を、適当な検体浮遊液に浮遊させる。あるいは患者から採取した鼻腔吸引液、尿、便等の被分析対象物から綿棒等の検体採取器具を用いて採取した検体試料を、後述するような検体浮遊液に浮遊させる。
（２）この浮遊液を、本発明の体液試料濾過分離装置を用いて濾過する。
（３）この濾過液を、メンブレンを備えたアッセイ装置中の被検出物に特異的に結合して被検出物を捕捉する捕捉物質が結合したメンブレンに滴下等により添加して、被検出物をメンブレン上に捕捉させる。この際、濾過液をサンプル滴下パッドに滴下することにより、毛細管現象により被検出物がメンブレンに流れていく。
（４）前記メンブレン上に、被検出物に特異的に結合する検出試薬である標識物質を滴下等により添加し、捕捉物質／被検出物／標識物質の複合体を形成させる。この際、標識物質はあらかじめアッセイ装置に組み込んでおいてもよい。この場合、検体試料を含む浮遊液をアッセイ装置に添加することにより、該浮遊液がアッセイ装置上を流れ、検出試薬を含むパッド部分に到達すると、検出試薬が前記浮遊液に溶解し、被検体とともにメンブレンに到達し、メンブレンの捕捉物質との間で複合体を形成する。
（５）前記複合体中の標識物質により、複合体の存在を検出することにより、検体試料中の被検出物の有無を測定する。 Below, an example of the specific procedure in the case of applying this invention to the lateral flow method membrane assay is shown.
(1) A sample sample collected directly from a pharynx, nasal cavity or rectum of a patient suspected of being infected with a virus, bacteria, etc. using a sample collection device such as a cotton swab is suspended in an appropriate sample suspension. Alternatively, a specimen sample collected from a subject to be analyzed such as a nasal aspirate, urine, or feces collected from a patient by using a specimen collection device such as a cotton swab is suspended in a specimen suspension as described later.
(2) The suspended liquid is filtered using the body fluid sample filtration / separation device of the present invention.
(3) Add this filtrate by dropping or the like to a membrane bound with a capture substance that specifically binds to the detected substance in the assay apparatus equipped with the membrane and captures the detected object. Capture on membrane. At this time, by dropping the filtrate onto the sample dropping pad, the detection object flows through the membrane by capillary action.
(4) A labeling substance, which is a detection reagent that specifically binds to the object to be detected, is added onto the membrane by dropping or the like to form a complex of the capturing substance / object to be detected / labeling substance. At this time, the labeling substance may be incorporated in the assay device in advance. In this case, by adding the suspension liquid containing the specimen sample to the assay apparatus, when the suspension liquid flows on the assay apparatus and reaches the pad portion containing the detection reagent, the detection reagent dissolves in the suspension liquid, and the analyte At the same time, it reaches the membrane and forms a complex with the trapping substance of the membrane.
(5) The presence or absence of an object to be detected in the specimen sample is measured by detecting the presence of the complex with the labeling substance in the complex.

実施例１
図１に示した本発明の体液試料濾過分離装置と図２に示す装置を用いた場合について、体液試料（鼻腔ぬぐい液）採取、体液試料の濾過、濾液を得るまでの一連の操作時間の測定を行った。
本発明の装置として、図１に示されるような、４μｍの保留粒子径を持つセルロース製の粘調液用濾紙Ｎｏ．６３（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）を濾過フィルターとして装着した体液試料濾過ユニット３を予め体液試料収容容器２に装着し、希釈液３００μＬを予め前記濾過ユニット３に入れ、蓋をした状態の体液試料濾過分離装置１を用意した。 Example 1
Measurement of a series of operation times until the body fluid sample (nasal swab) is collected, the body fluid sample is filtered, and the filtrate is obtained in the case of using the body fluid sample filtration / separation device of the present invention shown in FIG. 1 and the device shown in FIG. Went.
As an apparatus of the present invention, as shown in FIG. A body fluid sample filtration unit 3 equipped with 63 (manufactured by ADVANTEC) as a filtration filter is previously attached to the body fluid sample storage container 2, and 300 μL of the diluted solution is placed in the filtration unit 3 in advance, and the body fluid sample filtration / separation device in a state of being covered 1 was prepared.

図２に示す体液試料濾過分離装置として、１ｍＬシリンジ（ＴＥＲＵＭＯ社製）の中に、４μｍの保留粒子径を持つセルロース製の粘調液用濾紙Ｎｏ．６３（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）を濾過フィルターとして装着したものを用意し、これとは別に、希釈液３００μＬを入れた体液試料を採取するための容器（体液試料採取容器）として１．５ｍＬエッペンドルフチューブ（Ｔｒｅｆｆ社製）を、また濾液を収容するための容器（濾液収容容器）として１．５ｍＬエッペンドルフチューブ（Ｔｒｅｆｆ社製）を用意した。   As a bodily fluid sample filtration separation apparatus shown in FIG. 2, a filter paper No. 1 for cellulose viscous liquid having a reserved particle diameter of 4 μm in a 1 mL syringe (manufactured by TERRUMO). In addition to this, a filter equipped with 63 (manufactured by ADVANTEC) was prepared as a filtration filter. Separately, a 1.5 mL Eppendorf tube (Treff A 1.5 mL Eppendorf tube (manufactured by Treff) was prepared as a container (filtrate container) for containing the filtrate.

滅菌綿棒（日本綿棒社製）を用いて５人の被験者から鼻腔ぬぐい液を各２本採取した。
本発明の装置を用いた場合、採取した鼻腔ぬぐい液の１本を前記濾過ユニットに入れた希釈液３００μＬに浸して、前記濾過ユニットの内壁に押し付けながら、１０回回転させ、体液試料を希釈液に分散し、その後、前記濾過ユニットを前記収容容器より引き抜き、希釈液に分散した体液試料を濾過し、前記収容容器にその濾液を得た。 Two nasal swabs were collected from five subjects using a sterile cotton swab (manufactured by Nippon Cotton Swab Co., Ltd.).
In the case of using the apparatus of the present invention, one of the collected nasal wipes is immersed in 300 μL of the diluent contained in the filtration unit, and is rotated 10 times while being pressed against the inner wall of the filtration unit. After that, the filtration unit was pulled out from the storage container, the body fluid sample dispersed in the diluent was filtered, and the filtrate was obtained in the storage container.

図２に示す体液試料濾過分離装置を用いた場合、採取した残りの１本の鼻腔ぬぐい液を、体液試料採取容器に入れた希釈液３００μＬに浸して、前記採取容器の内壁に押し付けながら、１０回回転させ、体液試料を希釈液に分散し、その後、体液試料の分散された希釈液を前記１ｍＬシリンジに移し、濾液を収容するための濾液収容容器を用意し、ピストンを用いて体液試料を濾過し、その濾液を前記濾液収容容器に濾液を得た。
以上の装置、方法を用いて、体液試料採取から体液試料を濾過し、濾液を得るまでの一連の操作時間の測定を行った結果を下表１に示す。 When the bodily fluid sample filtration / separation apparatus shown in FIG. 2 is used, the remaining one nasal cavity wiping solution collected is immersed in 300 μL of the diluted solution in the bodily fluid sample collection container and pressed against the inner wall of the collection container. The body fluid sample is dispersed in the diluent, and then the diluted fluid in which the body fluid sample is dispersed is transferred to the 1 mL syringe, and a filtrate storage container for storing the filtrate is prepared. Filtration was performed, and the filtrate was obtained in the filtrate container.
Table 1 below shows the results of measurement of a series of operation times from the collection of the body fluid sample to the filtration of the body fluid sample and the obtaining of the filtrate using the above apparatus and method.

表１ 操作時間

Figure 0004769171
Table 1 Operation time
Figure 0004769171

以上のように本発明の体液試料濾過分離装置によれば、少ない部品数からなる経済的に有利な装置でありながら、従来の濾過分離装置を使用するよりもはるかに早い操作時間で体液試料を濾過分離することができた。   As described above, according to the bodily fluid sample filtration / separation apparatus of the present invention, a bodily fluid sample can be obtained in an operation time much faster than that using a conventional filtration / separation apparatus while being an economically advantageous apparatus having a small number of parts. It was possible to separate by filtration.

実施例２
図１に示した本発明の装置と図２に示す体液試料濾過分離装置について、標準粒子を用いて、濾過性能を確認した。
実施例１において述べたものと同じ構成を有する本発明の装置と図２に示す装置を用意した。 Example 2
About the apparatus of this invention shown in FIG. 1, and the bodily fluid sample filtration separation apparatus shown in FIG. 2, the filtration performance was confirmed using the standard particle.
An apparatus of the present invention having the same configuration as that described in Example 1 and the apparatus shown in FIG. 2 were prepared.

本発明の装置を用いた場合、標準粒子８μｍ（ＤＵＫＥ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）を濾過ユニット３に入れた希釈液３００μＬに１５μＬ添加し、その後、前記濾過ユニット３を収容容器２より引き抜き、標準粒子分散液を濾過し、収容容器２にその濾液を得た。
図２に示す体液試料濾過分離装置を用いた場合、標準粒子８μｍ（ＤＵＫＥ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）を体液試料採取容器に入れた希釈液３００μＬに１５μＬ添加し、その後、標準粒子の分散された希釈液を前記１ｍＬシリンジに移し、ピストンを用いて標準粒子分散液を濾過し、その濾液を濾液収容容器に得た。
各濾液の吸光度ＯＤ630nmを分光光度計（ＨＩＴＡＣＨＩ Ｕ−３０１０）で測定し、濾過前後の吸光度ＯＤ630nmから透過率を算出した結果を以下に示す。 When the apparatus of the present invention is used, 15 μL of standard particles 8 μm (manufactured by DUKE Scientific Corporation) is added to 300 μL of the diluted solution in the filtration unit 3, and then the filtration unit 3 is pulled out from the storage container 2, and the standard particle dispersion The filtrate was obtained in the container 2.
When the body fluid sample filtration / separation apparatus shown in FIG. 2 is used, 15 μL of standard particles 8 μm (manufactured by DUKE Scientific Corporation) is added to 300 μL of the diluent contained in the body fluid sample collection container, and then the diluted solution in which the standard particles are dispersed is added. It moved to the said 1 mL syringe, the standard particle dispersion liquid was filtered using the piston, and the filtrate was obtained in the filtrate container.
The absorbance OD 630 nm of each filtrate was measured with a spectrophotometer (HITACHI U-3010), and the transmittance was calculated from the absorbance OD 630 nm before and after filtration.

表２ 標準粒子を用いた濾過性能確認試験

Figure 0004769171
以上のように本発明の体液試料濾過分離装置が、従来の濾過分離装置を使用するのと同様の濾過性能を有することが確認できた。 Table 2 Filtration performance confirmation test using standard particles
Figure 0004769171
As described above, it was confirmed that the body fluid sample filtration / separation device of the present invention has the same filtration performance as that of using the conventional filtration / separation device.

実施例３
ラテラルフロー式メンブレンアッセイによる鼻腔吸引液中のインフルエンザウイルス及びＲＳウイルスの検出
１．モノクローナル抗体の作製
（１）抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰ（Ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ；核蛋白）モノクローナル抗体（マウス）の作製
精製Ａ型インフルエンザウイルス抗原を免疫し、一定期間維持したＢＡＬＢ／ｃマウスから脾臓を摘出し、ケラーらの方法（Kohler et al., Nature, vol, 256, p495-497(1975)）によりマウスミエローマ細胞（Ｐ３×６３）と融合した。得られた融合細胞（ハイブリドーマ）を、３７℃インキュベーター中で維持し、Ａ型インフルエンザウイルスＮＰ抗原固相プレートを用いたＥＬＩＳＡにより上清の抗体活性を確認しながら細胞の純化（単クローン化）を行った。取得した該細胞２株をそれぞれプリスタン処理したＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔投与し、約２週間後、抗体含有腹水を採取した。得られた腹水をそれぞれＰｒｏｔｅｉｎＡカラムクロマトグラフィー（アマシャム社製）を用いたアフィニティ精製によってＩｇＧを精製し、２種類の精製抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体を得た。 Example 3
Detection of influenza virus and RS virus in nasal aspirate by lateral flow membrane assay Preparation of monoclonal antibody (1) Preparation of anti-influenza A virus NP (Nucleoprotein; nucleoprotein) monoclonal antibody (mouse) Immunized with purified influenza A virus antigen, and the spleen was removed from BALB / c mice maintained for a certain period of time. It was fused with mouse myeloma cells (P3 × 63) by the method of Keller et al. (Kohler et al., Nature, vol, 256, p495-497 (1975)). The obtained fused cells (hybridomas) are maintained in a 37 ° C. incubator, and purification of the cells (monocloning) is performed while confirming the antibody activity of the supernatant by ELISA using an influenza A virus NP antigen solid phase plate. went. The obtained two cell lines were each intraperitoneally administered to pristane-treated BALB / c mice, and about 2 weeks later, antibody-containing ascites was collected. IgG was purified from the obtained ascites by affinity purification using Protein A column chromatography (Amersham) to obtain two types of purified anti-influenza A virus NP monoclonal antibodies.

（２）抗Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体（マウス）
精製Ｂ型インフルエンザウイルス抗原を免疫源としてＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫し、上記抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体と全く同様にして、２種類の精製抗Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体を得た。 (2) Anti-influenza B virus NP monoclonal antibody (mouse)
BALB / c mice were immunized using the purified influenza B virus antigen as an immunogen, and two types of purified anti-B influenza virus NP monoclonal antibodies were obtained in exactly the same manner as the anti-influenza A virus NP monoclonal antibody.

（３）ＲＳウイルスＦＰモノクローナル抗体（マウス）
ヒトＲＳウイルスのＦＰ（Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ）のアミノ酸配列の一部を合成したポリペプチドを免疫源としてＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫し、上記抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体と全く同様にして、２種類の精製抗ＲＳウイルスＦＰモノクローナル抗体を得た。 (3) RS virus FP monoclonal antibody (mouse)
BALB / c mice were immunized using a polypeptide obtained by synthesizing a part of the amino acid sequence of human RS virus FP (Fusion Protein) as an immunogen, and two kinds of antibodies were obtained in exactly the same manner as the anti-influenza A virus NP monoclonal antibody. A purified anti-RS virus FP monoclonal antibody was obtained.

２．標識抗インフルエンザウイルス抗体（標識物質）の作製
（１）ラテックス標識抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体の調製
抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体のうち１種類を５０ｍＭ ＭＥＳ（2-Morpholinoethanesulfonic acid,monohydrate；同仁化学社）緩衝液（ｐＨ６．０）溶液で透析後、赤色ポリスチレンラテックス粒子（粒径０．３９４μｍ，表面修飾基はカルボキシル基；メルク社）と混合し、反応させた。次に、ＥＤＡＣ（N-(3-Dimethlaminopropyl)-N’-ethylcarbodiimide hydrochloride；Ｓｉｇｍａ社）を最終濃度０．１％になるように添加した後、２時間反応させた。洗浄後、最終浮遊液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ， １（Ｗ／Ｖ）％ ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン））中に浮遊し、超音波分散装置（オリンパス社）にかけ、ラテックス粒子を分散させてラテックス標識抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体を調製した。 2. Preparation of labeled anti-influenza virus antibody (labeling substance) (1) Preparation of latex-labeled anti-influenza A virus antibody One type of anti-influenza A virus NP monoclonal antibody is 50 mM MES (2-Morpholinoethanesulfonic acid, monohydrate; Dojin Chemical) ) After dialysis with a buffer solution (pH 6.0), the mixture was mixed with red polystyrene latex particles (particle size: 0.394 μm, surface modifying group was carboxyl group; Merck) and reacted. Next, EDAC (N- (3-Dimethlaminopropyl) -N′-ethylcarbodiimide hydrochloride; Sigma) was added to a final concentration of 0.1%, followed by reaction for 2 hours. After washing, the suspension is suspended in a final suspension (50 mM Tris, 1 (W / V)% BSA (bovine serum albumin)), and is applied to an ultrasonic dispersion device (Olympus) to disperse latex particles and latex-labeled anti-A type Influenza virus antibodies were prepared.

（２）ラテックス標識抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体の調製
抗Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体のうち１種類を５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）溶液で透析後、青色ポリスチレンラテックス粒子（粒径０．３９４μｍ，表面修飾基はカルボキシル基；メルク社）と混合し、反応させ、ラテックス標識抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体と同様に処理して、ラテックス標識抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体を調製した。 (2) Preparation of Latex Labeled Anti-Influenza B Virus Antibody One type of anti-influenza B virus NP monoclonal antibody was dialyzed with 50 mM MES buffer (pH 6.0) solution, and then blue polystyrene latex particles (particle size: 0.394 μm) , The surface modifying group was mixed with a carboxyl group; Merck), reacted, and treated in the same manner as the latex-labeled anti-type A influenza virus antibody to prepare a latex-labeled anti-type B influenza virus antibody.

（３）ラテックス粒子標識抗ＲＳウイルス抗体の調製
抗ＲＳウイルスＦＰモノクローナル抗体のうち１種類を５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）溶液で透析後、緑色ポリスチレンラテックス粒子（粒径０．３９４μｍ，表面修飾基はカルボキシル基；メルク社）と混合し、反応させ、ラテックス標識抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体と同様に処理して、ラテックス粒子標識抗ＲＳウイルス抗体を調製した。 (3) Preparation of latex particle-labeled anti-RS virus antibody One type of anti-RS virus FP monoclonal antibody was dialyzed with 50 mM MES buffer (pH 6.0) solution, and then green polystyrene latex particles (particle size 0.394 μm, surface modification) The group was mixed with a carboxyl group (Merck), reacted, and treated in the same manner as the latex labeled anti-influenza A virus antibody to prepare a latex particle labeled anti-RS virus antibody.

３．ラテックス粒子標識抗体の乾燥化
（１）ラテックス粒子標識抗体の混合
上記２．（１）、（２）、（３）で作製したラテックス粒子標識抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体、ラテックス粒子標識抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体及びラテックス粒子標識抗ＲＳウイルス抗体をラテックス濃度がそれぞれ等量になるように、上記２．（１）記載の最終浮遊液で希釈後、室温下にて１５０ｒｐｍで５分間撹拌して等量混合した。
（２）ラテックス粒子標識抗体乾燥パッドの作製
３．（１）で作製したラテックス標識抗体を陽圧噴霧装置（ＢｉｏＪｅｔ；ＢｉｏＤｏｔ社）を用いてリール状に巻いた幅１５ｍｍのセルロース不織布全面に噴霧した。噴霧後、５０℃の温風を６０分間吹きつけ乾燥させ、ラテックス標識抗体パッドを作製した。 3. 2. Drying of latex particle labeled antibody (1) Mixing of latex particle labeled antibody Latex particle-labeled anti-type A influenza virus antibody, latex particle-labeled anti-type B influenza virus antibody and latex particle-labeled anti-RS virus antibody prepared in (1), (2) and (3) have the same latex concentration. As described in 2. above. (1) After diluting with the final suspension as described, the mixture was stirred at 150 rpm for 5 minutes at room temperature and mixed in equal amounts.
(2) Production of latex particle-labeled antibody dry pad The latex labeled antibody prepared in (1) was sprayed on the whole surface of a cellulose nonwoven fabric having a width of 15 mm wound in a reel shape using a positive pressure spraying device (BioJet; BioDot). After spraying, warm air at 50 ° C. was blown for 60 minutes to dry, thereby preparing a latex-labeled antibody pad.

４．メンブレン固相用抗体の調製
（１）固相用抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体の調製
上記１．（１）で作製した精製抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体のうち標識に用いなかった方を０．２２μｍ濾過し、ミリＱ水で希釈して固相用抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体を調製した。
（２）固相用抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体の調製
上記１．（２）で作製した精製抗Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体のうち標識に用いなかった方を０．２２μｍ濾過し、ミリ水で希釈して固相用抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体を調製した。
（３）固相用抗ＲＳウイルス抗体の調製
上記１．（３）で作製した精製抗ＲＳウイルスＦＰモノクローナル抗体のうち標識に用いなかった方を０．２２μｍ濾過し、ミリ水で希釈して固相用抗ＲＳウイルス抗体を調製した。 4). Preparation of antibody for membrane solid phase (1) Preparation of anti-influenza A virus antibody for solid phase Of the purified anti-influenza A virus NP monoclonal antibody prepared in (1), the one not used for labeling was filtered at 0.22 μm and diluted with milliQ water to prepare a solid phase anti-influenza A virus antibody.
(2) Preparation of anti-influenza B virus antibody for solid phase The purified anti-influenza B virus NP monoclonal antibody prepared in (2), which was not used for labeling, was 0.22 μm filtered and diluted with milli-water to prepare a solid phase anti-influenza B virus antibody.
(3) Preparation of anti-RS virus antibody for solid phase Of the purified anti-RS virus FP monoclonal antibody prepared in (3), the one not used for labeling was filtered by 0.22 μm and diluted with milliwater to prepare a solid phase anti-RS virus antibody.

５．Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルス及びＲＳウイルス検出用ラテラルフロー式メンブレンアッセイ装置の作製
Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルス及びＲＳウイルス検出用ラテラルフロー式メンブレンアッセイ装置は、図３及び図４に示すものと同様の構成のものを用いた。
メンブレンは、幅３ｃｍ×長さ１０ｃｍのニトロセルロースメンブレン（孔径１２μｍ；ワットマン社製）シート（白色）を用いた（図３及び図４の（ｄ））。その長軸側の一端（この端を上流端、反対側を下流端とする）から６ｍｍ離れた（ｅ）の位置に固相用抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体を陽圧噴霧装置（ＢｉｏＪｅｔ；ＢｉｏＤｏｔ社）を用いて線状に塗布し、１０ｍｍ離れた（ｆ）の位置に固相用抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体を陽圧噴霧装置（ＢｉｏＪｅｔ；ＢｉｏＤｏｔ社）を用いて線状に塗布し、１４ｍｍ離れた（ｇ）の位置に固相用抗ＲＳウイルス抗体を陽圧噴霧装置（ＢｉｏＪｅｔ；ＢｉｏＤｏｔ社）を用いて線状に塗布した。２２ｍｍ離れた（ｈ）の位置に抗マウスＩｇＧ抗体を陽圧噴霧装置（ＢｉｏＪｅｔ；ＢｉｏＤｏｔ社）を用いて線状に塗布した。塗布後、５０℃の温風を９０分間吹き付けて乾燥した。 5. Production of Lateral Flow Membrane Assay Device for Detection of Influenza A and B Virus and RS Virus Lateral Flow Membrane Assay Device for Detection of Influenza A and B Virus and RS Virus is the same as that shown in FIGS. The thing of the structure of was used.
The membrane used was a nitrocellulose membrane (pore size 12 μm; manufactured by Whatman) sheet (white) having a width of 3 cm and a length of 10 cm (FIG. 3 and FIG. 4D). A positive pressure spray device (BioJet; BioDot) for anti-influenza A virus antibody for solid phase at a position (e) 6 mm away from one end on the long axis side (this end is the upstream end and the opposite side is the downstream end) ) And applied linearly to the position of (f) 10 mm apart using a positive pressure spray device (BioJet; BioDot) and 14 mm away. The solid-phase anti-RS virus antibody was applied linearly at the position (g) using a positive pressure spray device (BioJet; BioDot). The anti-mouse IgG antibody was applied in a linear form at a position (h) 22 mm apart using a positive pressure spray device (BioJet; BioDot). After application, hot air of 50 ° C. was blown for 90 minutes to dry.

次に、部材を固定し、かつ強度を増すため、メンブレンの抗体塗布面（この面を上面とする）の反対側（この面を下面とする）にプラスチック製バッキングシート（ＢｉｏＤｏｔ社製）を接着した（図４の（ｉ））。
次に、上記３（２）で作製したラテックス粒子標識抗体乾燥パッド（図３及び図４の（ｂ））を幅１５ｍｍ×長さ１０ｃｍに切断し、メンブレンの上面に、メンブレンの上流端が２ｍｍ重なる様に配置して貼り付け、さらに幅２３ｍｍ×長さ１０ｃｍのセルロースろ紙（ワットマン社）をラテックス粒子標識抗体乾燥パッドの上面に１３ｍｍ重なる様に配置して貼り付け、サンプル滴下パッド（図３及び図４の（ａ））とした。
次に、幅３０ｍｍ×長さ１０ｃｍのセルロースろ紙（ワットマン社）をメンブレンの上面に、メンブレンの下流端と５ｍｍ重なる様に配置して貼り付け、サンプル吸収パッド（図３及び図４の（ｃ））とした。
次にサンプル滴下パッドの上流端の幅５ｍｍを除いて、上面全面を透明プラスチックラミネート（Ａｄｈｅｓｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社）で被覆した（図４の（ｊ））。
最後に長軸方向に沿って、５ｍｍずつ切断し、図３及び図４に示すメンブレンアッセイ装置を作製した。 Next, in order to fix the member and increase the strength, a plastic backing sheet (manufactured by BioDot) is bonded to the opposite side (this surface is the lower surface) of the antibody application surface (this surface is the upper surface) of the membrane. ((I) of FIG. 4).
Next, the latex particle-labeled antibody drying pad (FIG. 3 and FIG. 4 (b)) prepared in 3 (2) above was cut into a width of 15 mm × length of 10 cm, and the upstream end of the membrane was 2 mm on the upper surface of the membrane. Place and paste a cellulose filter paper (Whatman) having a width of 23 mm and a length of 10 cm so as to overlap the top surface of the latex particle-labeled antibody drying pad by 13 mm, and apply a sample dropping pad (see FIG. 3 and FIG. 3). It was set as (a) of FIG.
Next, cellulose filter paper (Whatman) having a width of 30 mm and a length of 10 cm is placed on the upper surface of the membrane so as to overlap with the downstream end of the membrane by 5 mm, and a sample absorption pad ((c) in FIGS. 3 and 4). ).
Next, the entire upper surface was covered with a transparent plastic laminate (Adhesive Research) except for a width of 5 mm at the upstream end of the sample dropping pad ((j) in FIG. 4).
Finally, the membrane assay apparatus shown in FIGS. 3 and 4 was produced by cutting along the long axis direction by 5 mm.

６．体液試料濾過分離装置の作製
図１に示す本発明の装置として、４μｍの保留粒子径を持つセルロース製の粘調液用濾紙Ｎｏ．６３（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）を濾過フィルターとして装着した体液試料濾過ユニットと体液試料収容容器を用意した。
図２に示す体液試料濾過分離装置として、１ｍＬシリンジ（ＴＥＲＵＭＯ社製）の中に、４μｍの保留粒子径を持つセルロース製の粘調液用濾紙Ｎｏ．６３（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）を濾過フィルターとして装着したものを用意した。 6). Production of Body Fluid Sample Filtration Separation Device As a device of the present invention shown in FIG. A body fluid sample filtration unit and a body fluid sample storage container equipped with 63 (ADVANTEC) as a filtration filter were prepared.
As a bodily fluid sample filtration separation apparatus shown in FIG. 2, a filter paper No. 1 for cellulose viscous liquid having a reserved particle diameter of 4 μm in a 1 mL syringe (manufactured by TERRUMO). 63 (made by ADVANTEC) was prepared as a filtration filter.

７．Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルス及びＲＳウイルスの検出
（１）検体の採取と検体試料の調製
臨床的にＡ型またはＢ型インフルエンザウイルスあるいはＲＳウイルス感染が疑われる患者から鼻腔吸引液を採取した。まず、そのうち一部を２ｍＬのウイルス分離用培地に浮遊し、この浮遊液を用いてＲＴ−ＰＣＲ法により検体中にＡ型またはＢ型インフルエンザウイルス遺伝子あるいはＲＳウイルス遺伝子が存在するかを確認した。なおＲＴ−ＰＣＲ法は特定の遺伝子部位を増幅する方法であり、一般的に抗原抗体反応を利用した検査法と比較して高感度な方法であることが知られており、信頼性の高い方法である。Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルス遺伝子検出のためのＲＴ−ＰＣＲ法は、清水の方法（感染症学雑誌、第７１巻、第６号、ｐ５２２−５２６）で実施した。またＲＳウイルス遺伝子検出のためのＲＴ−ＰＣＲ法はＳｔｏｃｋｔｏｎ等の方法（Journal of Clinical Microbiology、第３６巻、ｐ２９９０−２９９５、１９９８年）で実施した。その結果より、Ａ型インフルエンザウイルス遺伝子が検出された鼻腔吸引液を５検体、Ｂ型インフルエンザウイルス遺伝子が検出された鼻腔吸引液を５検体、ＲＳウイルス遺伝子が検出された鼻腔吸引液を５検体及びいずれの遺伝子も検出されなかった鼻腔吸引液を５検体それぞれ選び出し、以後の試験に用いた。 7). Detection of influenza A and B viruses and RS virus (1) Sample collection and sample preparation Nasal aspirate was collected from patients clinically suspected of infection with influenza A or B virus or RS virus. First, a part of the suspension was suspended in 2 mL of virus isolation medium, and using this suspension, it was confirmed by RT-PCR method whether the A-type or B-type influenza virus gene or RS virus gene was present in the specimen. The RT-PCR method is a method for amplifying a specific gene site, and is generally known to be a highly sensitive method compared to a test method using an antigen-antibody reaction, and is a highly reliable method. It is. The RT-PCR method for detecting influenza A and B virus genes was performed by the method of Shimizu (Journal of Infectious Diseases, Vol. 71, No. 6, p522-526). The RT-PCR method for RS virus gene detection was carried out by the method of Stockton et al. (Journal of Clinical Microbiology, Vol. 36, p2990-2995, 1998). As a result, 5 samples of nasal aspirates from which influenza A virus genes were detected, 5 samples of nasal aspirate from which influenza B virus genes were detected, 5 samples of nasal aspirates from which RS virus genes were detected, and 5 samples Five specimens of nasal aspirate from which no gene was detected were selected and used in subsequent tests.

選択した鼻腔吸引液に２本の滅菌綿棒（日本綿棒社製）を１０秒間浸した後に引き上げ、１本を図１に示す本発明の装置の体液試料濾過ユニット３にあらかじめ分注した検体浮遊液（２０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）、０．５（Ｗ／Ｖ）％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１．０（Ｗ／Ｖ）％ウシ血清アルブミン）０．３ｍＬ中に浮遊した。残りの１本を１．５ｍＬエッペンチューブ検体浮遊液０．３ｍＬ中に浮遊した。その後、本発明の装置を用いた場合には前記濾過ユニットを前記収容容器より引き抜き、収容容器に得た濾液を体液試料とした。一方、図２に示す体液試料濾過分離装置を用いた場合には１．５ｍＬエッペンチューブに分注した検体浮遊液０．３ｍＬ中に浮遊した前記試料を前記１ｍＬシリンジに移し、濾液を収容するための濾液収容容器を用意し、ピストンを用いて濾過し、その濾液を体液試料とした。   Two sterilized cotton swabs (manufactured by Nippon Cotton Swab Co., Ltd.) are soaked in the selected nasal aspirate solution for 10 seconds, and then lifted up. It was suspended in 0.3 mL (20 mM MES buffer (pH 6.0), 0.5 (W / V)% Triton X-100, 50 mM NaCl, 1.0 (W / V)% bovine serum albumin). The remaining one was suspended in 0.3 mL of a 1.5 mL Eppendorf tube specimen suspension. Thereafter, when the apparatus of the present invention was used, the filtration unit was pulled out from the storage container, and the filtrate obtained in the storage container was used as a body fluid sample. On the other hand, when the body fluid sample filtration / separation apparatus shown in FIG. 2 is used, the sample suspended in 0.3 mL of the sample suspension dispensed in the 1.5 mL Eppendorf tube is transferred to the 1 mL syringe to accommodate the filtrate. A filtrate container was prepared and filtered using a piston, and the filtrate was used as a body fluid sample.

（２）メンブレンアッセイ法による検出
図１に示す本発明の装置にて濾過して調製した体液試料と図２に示す体液試料濾過分離装置を用いて濾過して調製した体液試料に、それぞれ上記５．で作製したインフルエンザ及びＲＳウイルス検出用ラテラルフロー式メンブレンアッセイ装置のサンプル滴下パッド側を浸した。５分後、アッセイ装置を上記体液試料から引き上げて試験を終了させた後、アッセイ装置を観察し、図３あるいは図４の（ｈ）の位置（コントロールライン）に発色が認められた場合を有効とし、（ｅ）の位置に標識に用いた着色ラテックスの色調の発色（この場合、赤色）が認められた場合にはＡ型インフルエンザウイルス陽性、（ｆ）の位置に着色ラテックスの色調の発色（この場合、青色）が認められた場合にはＢ型インフルエンザウイルス陽性、（ｇ）の位置に着色ラテックスの色調の発色（この場合、緑色）が認められた場合はＲＳウイルス陽性、いずれの位置にも発色が認められない場合は陰性と判定した。また（ｈ）の位置に発色が認められない場合を無効とした。
試験の結果を表３に示す。 (2) Detection by membrane assay method The body fluid sample prepared by filtration using the apparatus of the present invention shown in FIG. 1 and the body fluid sample prepared by filtration using the body fluid sample filtration separation apparatus shown in FIG. . The sample dropping pad side of the lateral flow membrane assay device for detection of influenza and RS virus prepared in 1 was immersed. After 5 minutes, the assay device is lifted from the body fluid sample and the test is completed. Then, the assay device is observed, and the case where color development is recognized at the position (control line) in (h) of FIG. 3 or FIG. 4 is effective. When the color tone of the colored latex used for labeling (in this case, red) is recognized at the position (e), the influenza A virus is positive, and the color latex color tone (f) ( In this case, when blue) is recognized, influenza B virus is positive, and when color development of colored latex (green in this case) is observed at position (g), RS virus is positive at any position. If no color development was observed, it was judged as negative. The case where no color development was observed at the position (h) was regarded as invalid.
The results of the test are shown in Table 3.

表３ イムノクロマト法による試験結果

Figure 0004769171
Table 3 Test results by immunochromatography
Figure 0004769171

判定内容の説明
Ａ型インフルエンザ陽性数：ＲＴ−ＰＣＲにてＡ型インフルエンザウイルス遺伝子が検出された鼻腔吸引液から調製された検体試料数（５検体：分母）と、各方法でＡ型インフルエンザ陽性と判断された数（分子）。
Ｂ型インフルエンザ陽性数：ＲＴ−ＰＣＲにてＢ型インフルエンザウイルス遺伝子が検出された鼻腔吸引液から調製された検体試料（５検体：分母）と、各方法でＢ型インフルエンザ陽性と判断された数（分子）。
ＲＳウイルス陽性数：ＲＴ−ＰＣＲにてＲＳウイルス遺伝子が検出された鼻腔吸引液から調製された検体試料（５検体：分母）と、各方法でＲＳウイルス陽性と判断された数（分子）。
陰性数：ＲＴ−ＰＣＲにて陰性と判定された検体試料（５検体：分母）と、各方法で陰性と判断された数（分子）。
無効数：図３及び図４における（ｈ）の位置に発色が認められなかった検体試料数 Description of determination contents Type A influenza positive number: Number of specimen samples (5 specimens: denominator) prepared from nasal aspirate fluid in which influenza A virus gene was detected by RT-PCR, Determined number (numerator).
Number of influenza B positive: Specimen sample (5 specimens: denominator) prepared from nasal aspirate from which influenza B virus gene was detected by RT-PCR, and number determined as positive for influenza B by each method ( molecule).
RS virus positive number: Specimen sample (5 specimens: denominator) prepared from nasal aspirate from which RS virus gene was detected by RT-PCR, and number (molecule) determined to be RS virus positive by each method.
Negative number: Specimen sample determined to be negative by RT-PCR (5 specimens: denominator) and number (numerator) determined negative by each method.
Invalid number: Number of specimen samples in which color development was not recognized at the position (h) in FIG. 3 and FIG.

図２の体液試料濾過分離装置を使用して無効と判定されたケースは、いずれも体液試料が十分量ではなく、標識物質が５分以内に図３及び４の（ｈ）の位置まで到達しなかったために発色が認められなかった場合であった。体液試料の減少は濾過フィルターが目詰まりを起こし、試料全量をろ過できなかったためであると考えられる。
本発明による体液試料濾過分離装置を用いることにより、目詰まりを起こさずに、迅速かつ精度よくラテラルフロー式イムノアッセイを行うことができた。 In all cases where the body fluid sample filtration / separation apparatus shown in FIG. 2 was determined to be invalid, the body fluid sample was not sufficient, and the labeling substance reached the position (h) in FIGS. 3 and 4 within 5 minutes. This was the case when no color development was observed. The decrease in the body fluid sample is thought to be because the filtration filter was clogged and the entire sample could not be filtered.
By using the body fluid sample filtration / separation apparatus according to the present invention, it was possible to perform a lateral flow immunoassay quickly and accurately without causing clogging.

体液試料収容容器２と体液試料濾過ユニット３から構成される、本発明の体液試料濾過分離装置１の断面図である。1 is a cross-sectional view of a body fluid sample filtration / separation device 1 according to the present invention, which is composed of a body fluid sample storage container 2 and a body fluid sample filtration unit 3. ピストンを用いた従来の体液試料濾過装置の断面図である。It is sectional drawing of the conventional bodily fluid sample filtration apparatus using a piston. ラテラルフロー式メンブレンアッセイ装置の模式平面図である。It is a model top view of a lateral flow type membrane assay device. 図３のアッセイ装置のＩ−Ｉ’切断端面である。FIG. 4 is an I-I ′ cut end face of the assay device of FIG. 3.

符号の説明Explanation of symbols

１：体液試料濾過分離装置
２：体液試料収容容器
２１：収容容器開口部
２２：収容容器側面
２３：検体適下口
２４：最終濾過フィルター収納部
２５：最終濾過フィルター
３：体液試料濾過ユニット
３１：濾過ユニット開口部
３２：濾過ユニット外側面
３３：濾液排出口
３４：濾過フィルター収納部
３５：濾過フィルター
３６：蓋
ａ：ろ過材ユニット１
ｂ：ろ過材ユニット２
ｃ：筒状容器
ｄ：ピストン
Ａ：血漿
（ａ）：サンプル滴下パッド
（ｂ）：ラテックス粒子標識抗体乾燥パッド（標識物質乾燥パッド）
（ｃ）：サンプル吸収パッド
（ｄ）：ニトロセルロースメンブレン
（ｅ）〜（ｇ）：被検出物に特異的に結合する捕捉物質が（ｄ）上でライン状に結合している位置
（ｈ）：標識物質を結合することができる物質が（ｄ）上でライン状に結合している位置
（ｉ）：バッキングシート
（ｊ）：透明プラスチックラミネート 1: Body fluid sample filtration / separation device 2: Body fluid sample storage container 21: Storage container opening 22: Side surface of storage container 23: Sample lower opening 24: Final filtration filter storage section 25: Final filtration filter 3: Body fluid sample filtration unit 31: Filtration unit opening 32: Filtration unit outer surface 33: Filtrate outlet 34: Filtration filter storage unit 35: Filtration filter 36: Lid a: Filtration material unit 1
b: Filter medium unit 2
c: cylindrical container d: piston A: plasma (a): sample dropping pad (b): latex particle-labeled antibody drying pad (labeling substance drying pad)
(C): Sample absorption pad (d): Nitrocellulose membrane (e) to (g): Position where the capture substance that specifically binds to the detection target is bound in a line on (d) (h) : Position where the substance capable of binding the labeling substance is bound in a line on (d) (i): Backing sheet (j): Transparent plastic laminate

Claims (9)

収容容器側面（２２）及び端部に収容容器開口部（２１）を有する筒状の体液試料収容容器（２）と、
前記収容容器開口部（２１）に気密的に、且つ前記筒の軸方向にスライド可能な濾過ユニット外側面（３２）、体液試料を導入するための濾過ユニット開口部（３１）、並びに端面に濾液排出口（３３）、濾過フィルター収納部（３４）及び濾過フィルター（３５）を有する体液試料濾過ユニット（３）とを有する、
体液試料濾過分離装置。 A cylindrical body fluid sample storage container (2) having a storage container side surface (22) and a storage container opening (21) at its end;
A filtration unit outer surface (32) slidable in an axial direction of the cylinder in an airtight manner in the container opening (21), a filtration unit opening (31) for introducing a body fluid sample, and a filtrate on an end surface A body fluid sample filtration unit (3) having a discharge port (33), a filtration filter housing part (34) and a filtration filter (35),
Body fluid sample filtration separation device. 体液試料収容容器（２）が更に開閉可能な体液試料排出口（２３）を有する、請求項１記載の体液試料濾過分離装置。 The bodily fluid sample filtration separation device according to claim 1, wherein the bodily fluid sample storage container (2) further has a bodily fluid sample discharge port (23) that can be opened and closed. 体液試料が鼻腔ぬぐい液または鼻腔吸引液である、請求項１または２記載の体液試料濾過分離装置。 The bodily fluid sample filtration separation device according to claim 1 or 2, wherein the bodily fluid sample is a nasal wipe or a nasal aspirate. 請求項１または２に記載した体液試料濾過分離装置の体液試料濾過ユニット（３）を体液試料収容容器開口部（２１）に気密的に、且つ前記筒の軸方向にスライド可能なように装着し、体液試料濾過ユニット（３）に入れた希釈液中に採取した体液試料を溶解又は分散させたのち、体液濾過ユニット（３）を体液試料収容容器（２）の収容容器開口部（２１）側に引き上げることにより、体液試料収容容器（２）の中を陰圧とし、希釈体液試料を濾過フィルター（３５）を通過させて体液試料収容容器（２）内に移行させる体液試料の濾過分離方法。 The bodily fluid sample filtration unit (3) of the bodily fluid sample filtration / separation device according to claim 1 or 2 is attached to the bodily fluid sample storage container opening (21) so as to be slidable in the axial direction of the cylinder. After the body fluid sample collected in the dilute solution placed in the body fluid sample filtration unit (3) is dissolved or dispersed, the body fluid filtration unit (3) is placed on the side of the body container opening (21) of the body fluid sample housing container (2). The body fluid sample storage container (2) is brought to a negative pressure by pulling it up, and the diluted body fluid sample is passed through the filtration filter (35) and transferred into the body fluid sample storage container (2). 更に、収容容器（２）内に移行させた体液試料を、開閉可能な体液試料排出口（２３）から排出させる事を含む、請求項４に記載の体液試料の濾過分離方法。 The method for filtering and separating a body fluid sample according to claim 4, further comprising discharging the body fluid sample transferred into the storage container (2) from a body fluid sample outlet (23) that can be opened and closed. 体液試料が鼻腔ぬぐい液または鼻腔吸引液である、請求項４または５記載の体液試料濾過分離方法。 The method for filtering and separating a body fluid sample according to claim 4 or 5, wherein the body fluid sample is a nasal wipe or a nasal aspirate. 請求項１〜３のいずれか一項に記載の体液試料濾過分離装置と、メンブレンアッセイ装置を含むアッセイキット。 An assay kit comprising the body fluid sample filtration / separation device according to any one of claims 1 to 3 and a membrane assay device. メンブレンアッセイ装置が、ラテラルフロー式アッセイ装置である請求項７記載のアッセイキット。 The assay kit according to claim 7, wherein the membrane assay device is a lateral flow assay device. インフルエンザウイルスまたはＲＳウイルス検出用である、請求項７または８記載のアッセイキット。 The assay kit according to claim 7 or 8, which is used for detection of influenza virus or RS virus.
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