JP4756284B2 - グルコース及びアスコルビン酸の測定装置 - Google Patents
グルコース及びアスコルビン酸の測定装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4756284B2 JP4756284B2 JP2008027657A JP2008027657A JP4756284B2 JP 4756284 B2 JP4756284 B2 JP 4756284B2 JP 2008027657 A JP2008027657 A JP 2008027657A JP 2008027657 A JP2008027657 A JP 2008027657A JP 4756284 B2 JP4756284 B2 JP 4756284B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ascorbic acid
- glucose
- concentration
- electrode
- measurement
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
(1) グルコース及びアスコルビン酸含有試料溶液中のグルコース及び/又はアスコルビン酸濃度を、該試料溶液がグルコース酸化酵素と接触することにより発生する電極電流の測定とルミノールを使用する発光強度の測定とを同時に行うことにより測定する装置であって、上記試料溶液を収容し、グルコース酸化酵素反応とともにルミノール発光反応を行う容器、該容器内に配置されたフェロセンあるいはその誘導体で修飾された電極、電極に発生した電流を計測する電気化学制御部、及びグルコース酸化反応に伴い生じる過酸化水素が、電極上で酸化されたフェロセンから生じたフェリシウムカチオンを触媒として、ルミノールと反応することにより生じた発光強度を測定する発光測定部を有することを特徴とする、グルコース及びアスコルビン酸を含む試料溶液中のグルコース濃度及び/又はアスコルビン酸濃度を計測する装置。
(2) 計測された電極電流と発光強度から、以下の関係式により、試料中のグルコース濃度及び/又はアスコルビン酸濃度を求めることを特徴とする、上記(1)に記載の装置。
I=a[G]+b[A]
L=c[G]−d[A]
(但し、上記式中、Iは測定電流値、Lは発光強度、[G]はグルコース濃度、[A]はアスコルビン酸濃度を表し、a、b、c、及びdは、予め、0〜1.0mMの各濃度のアスコルビン酸を含むグルコース(1.0mM)溶液を使用して各アスコルビン酸濃度に対応する上記電極電流及び発光強度を測定し、上記グルコース溶液中におけるアスコルビン酸の各濃度と測定電流値及び発光強度との関係から求められる正の整数である。)
(3) グルコース酸化酵素が、電極に固定化されていることを特徴とする、上記(1)又は(2)に記載の装置。
したがって、本発明は、グルコースとアスコルビン酸が共存する試料、例えば果汁中のグルコース及びアスコルビン酸の分析に有利であり、その製品の品質管理等に有用である。
試料中にグルコースが存在する場合、試料中のグルコースはグルコース酸化酵素により、酸化されるとともに過酸化水素が生成し、該過酸化水素は、電極上で酸化されて電極電流を発生する。この電極電流値はグルコース濃度に比例するから、この電流値を測定すれば、グルコース濃度を測定可能であるが、アスコルビン酸が試料中に共存する場合においては、上記電極においてアスコルビン酸も濃度依存的に酸化されてしまい、測定される電流値を増大させてしまう。
本発明によれば、この電極電流値に反映されるアスコルビン酸の影響を発光強度測定法の併用により排除できる。
このフェロセンあるいはその誘導体としては、吸着、化学結合等により薄膜を形成し得るものであれば特に制限はなく、例えば、電極材料として金を用いる場合、金に結合性を示す、SH基を末端に有するフェロセニルアルカンチオール等が好都合に利用される。また、白金、酸化スズ等の電極上に強固な薄膜を作製するにはフェロセニル基を有する高分子、ポリビニルフェロセン等が好都合に利用される。
まず、フェロセンあるいはその誘導体で修飾した電極を作製した後、上記修飾電極、参照電極等を透明な容器に挿入する。溶液中にグルコース酸化酵素、ルミノールを含む中性(pH 6-9程度)の緩衝液を加え、上記修飾電極にフェロセンを酸化するのに充分な正の電位を印加し、電極近傍に電気化学発光を検知するための素子、例えば光電子倍増管を設置する。溶液中には空気または酸素を飽和させ、適当な装置により撹拌することが好ましい。
I =a[G]+b[A]
L =c[G]−d[A]
(但し、上記式中、Iは測定電流値、Lは発光強度、[G]はグルコース濃度、[A]はアスコルビン酸濃度を表し、a、b、c及びdはそれぞれ正の定数を表す。)
硝子や金属酸化物を基板材料とする場合には適当なシランカプラーを用いることで、表面に反応性のアミノ基、カルボキシル基などを導入できるので、これを利用してフェロセン基を導入することが可能である。実験的に予めa,b,c,dの定数を求めておくことは容易であり、これらを求めておけば、未知試料中のグルコースとアスコルビン酸との両者の濃度を電流応答と発光強度とから決定することができる。グルコース酸化酵素を修飾電極表面上に同時に固定しておけば、測定ごとに酵素を添加しなくても上記の測定は可能となる。
該装置は、少なくとも、センサー部(1)、攪拌器(2)、電気化学制御部3、データ記録部(4)および発光測定部(5)からなる。該センサー部(1)は、測定溶液(1−4)を収納した容器(1−7)、及び該容器内に配置可能に設けたフェロセン修飾電極(1−1)、参照電極(1−2)、白金線又は白金箔からなる対極(1−3)、試料注入部(1−7)を備え、収容容器には攪拌子が投入されている。
計測装置の容器(1−7)に、グルコース酸化酵素、ルミノールを含有する測定溶液(1−4)を収容し、該容器内にフェロセン修飾電極(1−1)、参照電極(1−2)、白金線又は白金箔からなる対極(1−3)を配置し、さらに、上記参照電極(1−2)を介してフェロセン修飾電極(1−1)に所定の電位を印加する。該測定溶液は空気又は酸素により飽和させ、攪拌機(2)により攪拌子1を回転させて攪拌する。次いでグルコース及びアスコルビン酸を含有する試料溶液を試料注入部(1−5)から測定溶液中に注下し、攪拌及び遮光条件下、反応させる。
次に実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
直径10mmの金ディスク基板を1.0 mMのフェロセニルウンデカンチオールのヘキサン溶液に1時間浸せきし、金電極表面にフェロセン基を導入した。この電極基板を、支持電解質である過塩素酸ナトリウム(0.1M)、ルミノール(100μM)、グルコース酸化酵素(1mg/ml)を含むpH7.7のリン酸緩衝液に浸せきし、撹拌を行う。ここに0-1.0mMの各濃度のアスコルビン酸を含むグルコース(1.0mM)溶液を添加し、同時に金電極に+0.6V(対銀-塩化銀電極)の電位を印加し、電流応答と発光強度を同時に測定した結果をそれぞれ図1、図2に示す。図1から分かるように電流値はアスコルビン酸の濃度の増加とともに増大した。これは修飾金基板において表面固定フェロセン基の酸化に伴う電流、ルミノールの酸化電流、そして添加したアスコルビン酸が酸化される電流が併せて観察される結果を示している。
グルコース酸化酵素50mgを1mlのリン酸緩衝液(pH6.4)に溶解したものを、200 mg の脂質[N-(a-トリメチルアンモニオアセチル)-ジドデシル-D-グルタメートクロリド]を20mlの水溶液と混合し、冷蔵庫中(4度C)で一晩置き、脂質修飾酵素の沈殿を形成させる。脂質修飾酵素の沈殿を遠心分離し、水で洗浄する操作を繰り返し、沈殿の精製を行い脂質修飾酵素を得た。該酵素は凍結乾燥し保存可能である。
1−1 修飾電極
1−2 参照電極
1−3 対極(白金線または白金箔)
1−4 測定溶液
1−5 試料注入部
1−6 攪拌子
1−7 容器
2 攪拌器
3 電気化学制御部
4 データ記録部
5 発光測定部
Claims (3)
- グルコース及びアスコルビン酸含有試料溶液中のグルコース及び/又はアスコルビン酸濃度を、該試料溶液がグルコース酸化酵素と接触することにより発生する電極電流の測定とルミノールを使用する発光強度の測定とを同時に行うことにより測定する装置であって、上記試料溶液を収容し、グルコース酸化酵素反応とともにルミノール発光反応を行う容器、該容器内に配置されたフェロセンあるいはその誘導体で修飾された電極、電極に発生した電流を計測する電気化学制御部、及びグルコース酸化反応に伴い生じる過酸化水素が、電極上で酸化されたフェロセンから生じたフェリシウムカチオンを触媒として、ルミノールと反応することにより生じた発光強度を測定する発光測定部を有することを特徴とする、グルコース及びアスコルビン酸を含む試料溶液中のグルコース濃度及び/又はアスコルビン酸濃度を計測する装置。
- 計測された電極電流と発光強度から、以下の関係式により、試料中のグルコース濃度及び/又はアスコルビン酸濃度を求めることを特徴とする、請求項1に記載の装置。
I=a[G]+b[A]
L=c[G]−d[A]
(但し、上記式中、Iは測定電流値、Lは発光強度、[G]はグルコース濃度、[A]はアスコルビン酸濃度を表し、a、b、c、及びdは、予め、0〜1.0mMの各濃度のアスコルビン酸を含むグルコース(1.0mM)溶液を使用して各アスコルビン酸濃度に対応する上記電極電流及び発光強度を測定し、上記グルコース溶液中におけるアスコルビン酸の各濃度と測定電流値及び発光強度との関係から求められる正の整数である。)
- グルコース酸化酵素が、電極に固定化されていることを特徴とする、請求項1又は2に記載の装置。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008027657A JP4756284B2 (ja) | 2008-02-07 | 2008-02-07 | グルコース及びアスコルビン酸の測定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008027657A JP4756284B2 (ja) | 2008-02-07 | 2008-02-07 | グルコース及びアスコルビン酸の測定装置 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003376230A Division JP4154485B2 (ja) | 2003-11-05 | 2003-11-05 | グルコース及びアスコルビン酸の測定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008180723A JP2008180723A (ja) | 2008-08-07 |
JP4756284B2 true JP4756284B2 (ja) | 2011-08-24 |
Family
ID=39724705
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008027657A Expired - Fee Related JP4756284B2 (ja) | 2008-02-07 | 2008-02-07 | グルコース及びアスコルビン酸の測定装置 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4756284B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102053085B (zh) * | 2009-10-28 | 2013-03-20 | 中国科学院高能物理研究所 | 四氧化三铁纳米颗粒催化化学发光检测葡萄糖的方法 |
CN102590190A (zh) * | 2012-01-31 | 2012-07-18 | 桂林理工大学 | Fe2+-H2O2-亚甲基蓝化学发光体系测定绿原酸的方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK0533764T3 (da) * | 1990-06-12 | 1997-09-29 | British Tech Group | Antioxidantassay |
JP3267936B2 (ja) * | 1998-08-26 | 2002-03-25 | 松下電器産業株式会社 | バイオセンサ |
JP2001133436A (ja) * | 1999-11-01 | 2001-05-18 | Microtec Nition:Kk | マトリックス型電気化学発光用基板 |
JP2002189014A (ja) * | 2000-12-20 | 2002-07-05 | Sankyo Co Ltd | 酵素電極 |
JP4102968B2 (ja) * | 2001-10-30 | 2008-06-18 | 東洋紡績株式会社 | バイオセンサ |
JP3759061B2 (ja) * | 2002-03-25 | 2006-03-22 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 表面プラズモン共鳴センサ |
-
2008
- 2008-02-07 JP JP2008027657A patent/JP4756284B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2008180723A (ja) | 2008-08-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP3618759B2 (ja) | 電気化学発光性酵素バイオセンサー | |
Smit et al. | Cyanide detection using a substrate-regenerating peroxidase-based biosensor | |
Nanjo et al. | Enzyme electrode for L-amino acids and glucose | |
Labuda et al. | Voltammetric detection of the DNA interaction with copper complex compounds and damage to DNA | |
US20060121547A1 (en) | Diffusion layer for an enzyme-based sensor application | |
EP2228645B1 (en) | Method, device and apparatus for measuring the concentration of creatinine, and method, device and apparatus for measuring the amount of salt using the same | |
KR101698988B1 (ko) | 전자전달 매개체의 산화환원 순환을 이용한 바이오센서 | |
RU2007141387A (ru) | Окисляемые виды соединений в качестве внутреннего стандарта в контрольных растворах для биосенсоров | |
WO1993014185A1 (en) | Convenient determination of trace lead in whole blood and other fluids | |
WO2005078118A1 (en) | Oxidizable species as an internal reference for biosensors and method of use | |
US20140329254A1 (en) | Biosensor using redox cycling | |
JP2001194298A (ja) | 表面プラズモン共鳴酵素センサーおよび表面プラズモン共鳴の測定方法 | |
Li et al. | A single-layer structured microbial sensor for fast detection of biochemical oxygen demand | |
JP2007333714A (ja) | 超微量ヒスタミン計測用電気化学バイオセンサ | |
Casero et al. | Peroxidase enzyme electrodes as nitric oxide biosensors | |
Deng et al. | Self-gelatinizable copolymer immobilized glucose biosensor based on Prussian Blue modified graphite electrode | |
JPH05507195A (ja) | 基質再生型バイオセンサー | |
JP6128578B2 (ja) | エンドトキシンの濃度測定方法およびエンドトキシンの濃度測定装置 | |
JP4756284B2 (ja) | グルコース及びアスコルビン酸の測定装置 | |
Aboul-Enein et al. | Chemiluminescence-based (bio) sensors—an overview | |
JP4154485B2 (ja) | グルコース及びアスコルビン酸の測定方法 | |
JP2005118014A (ja) | 分析方法およびそれに用いる試薬 | |
Zheng et al. | Sensitive chemically amplified electrochemical detection of ruthenium tris-(2, 2′-bipyridine) on tin-doped indium oxide electrode | |
JP3867081B2 (ja) | 酸化還元指示薬としてのアミン−n−オキサイドによるアナライトの蛍光測定 | |
JPWO2005056824A1 (ja) | 硫酸抱合型胆汁酸の検出方法、それに用いられる試験紙およびバイオセンサ |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20101012 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101203 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101220 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110517 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110518 |
|
R150 | Certificate of patent (=grant) or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140610 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140610 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |