JP4629964B2 - ウシの消化器疾患治療剤 - Google Patents
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<HuIFN−α標品及びHuIFN−α製剤の調製>
後述の実施例1に記載の方法に基づき、BALL−1細胞由来のHuIFN−α(以下、「BALL−1インターフェロン」と略記する場合がある)の精製品(比活性2×108国際単位/mg蛋白質)を、また、実施例2の方法に基づき、組換え型サブタイプα8(比活性2×108国際単位/mg蛋白質)及び組換え型サブタイプα2(比活性7×107国際単位/mg蛋白質)の精製標品を、それぞれ調製した。また、これらとは別に、常法により、人抹梢血から分離した白血球にセンダイウイルスを作用させて誘発させたHuIFN−α(以下、「白血球インターフェロン」と略記する場合がある。)をケー・カンテル(K.Cantell)等、『ザ ジャーナル オブ ジェネラル バイロロジー(The Journal of General Virology)』、第39巻、第541〜543頁(1978年)に記載された方法に準じて精製し、比活性約2×106国際単位/mg蛋白質の部分精製白血球インターフェロンを得た。次いで、この部分精製HuIFNを、後述の実施例1と同様に、モノクローナル抗HuIFN−α抗体を用いる抗体クロマトグラフィーによりさらに精製した後、ヒトアルブミン約0.1mg/mlを含有する燐酸緩衝液(pH7.0)で平衡化させたゲル濾過クロマトグラフィーを適用することにより、精製白血球インターフェロン(比活性約2×108国際単位/mg蛋白質)溶液を得た。これら2種類のHuIFNと、組換え型サブタイプα8及び組換え型サブタイプα2を使用して、後述の実施例5の方法に準じて、無水結晶マルトース(株式会社林原商事販売、商標『ファイントース』)を賦形剤として使用し、各々200国際単位/gのHuIFN−αを含有する粉末状の製剤を調製した。なお、組換え型サブタイプα8及び組換え型サブタイプα2に付いては、サブタイプα8とサブタイプα2を質量比で、10:0、9:1、8:2、4:6、2:8、1:9、0:10含有する7種類の粉末状の製剤を調製した。
ロタウイルスに感染し、且つ、下痢症状を呈するウシ100頭に、実験1で調製した、HuIFN−α製剤を、消化器疾患治療剤として一日1回、経口投与し、その経過を観察することにより、この発明による治療剤の治療効果と副作用を評価した。
上記知見に基づき、ロタウイルスの感染の影響を最も強く受け、畜産業において経済性の点で最も問題とされている、生後間もない子ウシに対する、本発明の治療剤の治療効果を確認するための実験を行った。すなわち、ロタウイルスの感染が確認され、且つ、下痢の症状を呈している生後6ヶ月以内の子ウシ140頭(雄雌各70頭)に対して、実験2と同一のプロトコールで、HuIFN製剤(200国際単位/g)を投与し、実験2と同一の効果の評価方法により、その効果と副作用を評価した。なお、本実験では、実験2で最も高い奏功率を示したBALL−1インターフェロン製剤を使用し、投与量は、0.5国際単位/kg体重と20国際単位/kg体重とした。対照群として無水結晶マルトース0.1gを1日1回ウシに経口投与した。BALL−1インターフェロン製剤投与群は各60頭の子ウシ(雄雌各30頭)を使用し、対照群は20頭の子ウシ(雄雌各10頭)を使用した。その平均総合臨床スコアの推移を表3に、平均便性状スコアの推移を表4に、治療効果判定の結果を表5に示した。
0.01M燐酸緩衝液(pH7.0)を含む生理食塩水に、ウシ血清アルブミンを0.1%となるように溶解した溶液、この溶液に、実施例1で調製したBALL−1細胞由来の部分精製HuIFN−α、精製HuIFN−α、実験1で調製したヒト白血球由来の部分精製HuIFN−α、精製HuIFN−α、又は、後述する実施例2で調製した精製したサブタイプα2或いはサブタイプα8の何れか1種を、1×106国際単位/mlになるよう溶解した溶液を調製した。かくして得られる7種類の溶液を生後2乃至3年と推定される健常なウシ5匹/群からなる7群に対して、体重kg当たり、この発明における最大投与量の2万倍に当たる1×106国際単位のHuIFNに相当する量の生理食塩水を皮下若しくは経口投与し、投与後の経過を観察した。さらに、対照群には、HuIFNを溶解しなかったこと以外、前記と同様に調製した同量の生理食塩水を同じ経路で投与した。
特許文献3の実験1−1(a)及び実験1−1(b)の方法に準じて、組換え型サブタイプα8(比活性、約3×108国際単位/mg蛋白質)及び組換え型サブタイプα2(比活性、約8×107国際単位/mg蛋白質)の精製標品を調製した。
Claims (5)
- 有効成分が本質的にヒトリンパ芽球様細胞株であるBALL−1細胞由来のヒトインターフェロンαからなり、当該ヒトインターフェロンαは、BALL−1細胞にセンダイウイルスを作用させて誘発されるヒトインターフェロンαをモノクローナル抗ヒトインターフェロンα抗体を用いるアフィニティークロマトグラフィーによって精製して得られるヒトインターフェロンαであって、インターフェロンα蛋白総質量中にサブタイプα2を約75質量%とサブタイプα8を約25質量%含有し、賦形剤がマルトースを主体とし、かつ、インターフェロンαを約200国際単位/g含有してなる、ウシのロタウイルス感染に伴う下痢を発症したウシの平均便性状スコアを1.0未満にする便性改善に用いる経口用剤。
- 0.1乃至50国際単位/kgウシ体重/回の投薬単位形態であることを特徴とする請求項1に記載の経口用剤。
- インターフェロンα蛋白を約1ng/g含有することを特徴とする請求項2記載の経口用剤。
- 散剤、トローチ剤、顆粒剤或いは錠剤の形態であることを特徴とする請求項1乃至3のいずれかに記載の経口用剤。
- 有効成分が本質的にヒトリンパ芽球様細胞株であるBALL−1細胞由来のヒトインターフェロンαからなり、当該ヒトインターフェロンαは、BALL−1細胞にセンダイウイルスを作用させて誘発されるヒトインターフェロンαをモノクローナル抗ヒトインターフェロンα抗体を用いるアフィニティークロマトグラフィーによって精製して得られるヒトインターフェロンαであって、インターフェロンα蛋白総質量中にサブタイプα2を約75質量%とサブタイプα8を約25質量%含有し、賦形剤がマルトースを主体とし、かつ、インターフェロンαを約200国際単位/g含有する経口用剤をウシに経口投与することを特徴とするウシのロタウイルス感染に伴う下痢を発症したウシの平均便性状スコアを1.0未満にするウシの便性改善方法。
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