JP4606901B2 - Diagnostic method for arteriosclerosis - Google Patents
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Description
本発明は、対象における動脈硬化の重症度の診断方法に関する。 The present invention relates to a method for diagnosing the severity of arteriosclerosis in a subject.
低密度リポ蛋白（LDL）は血液中におけるコレステロール運搬の主役であり、動脈硬化性疾患の危険因子であるが、LDLの中でも特に粒子サイズが小さく平均的なLDLより高比重な、小粒子低比重リポ蛋白（以下、「小粒子LDL」という）は動脈硬化惹起性が通常のLDLより高くなることが知られている。 Low density lipoprotein (LDL) plays a major role in the transport of cholesterol in the blood and is a risk factor for arteriosclerotic disease. Among LDL, it has a small particle size and a specific gravity that is smaller than the average LDL. It is known that lipoproteins (hereinafter referred to as “small particle LDL”) have higher arteriosclerosis properties than normal LDL.
従来の小粒子LDL測定法としては、超遠心法、高速液体クロマトグラフィー法、電気泳動法、を用いる方法などがある。超遠心法は比重の差を利用して小粒子LDLを分離し、そのコレステロール量や蛋白量を定量する方法であり、高速液体クロマトグラフィー法はゲルろ過カラムを用いてリポ蛋白粒子サイズにより分離、分析する方法である。一般的に用いられてきた電気泳動法は、ポリアクリルアミドゲルを用いてLDLの移動度や粒子直径を測る方法で、小粒子LDLは粒子サイズ25.5nm以下（JAMA, 260, p.1917-21, 1988等）または、LDLの相対移動度（VLDLからLDLまでの移動距離をVLDLからHDLまでの移動距離で除したもの）が0.4以上である（動脈硬化, 25, p.67-70, 1997）。このLDL粒子サイズの測定により、小粒子LDLを主に有するヒトでは通常サイズのLDLを主に有するヒトに比べて冠動脈疾患の発症のリスクが3倍高くなることが報告されている。しかし、粒子サイズの測定では動脈硬化の重症度との関連性を把握することはできない。 Examples of conventional small particle LDL measurement methods include ultracentrifugation, high performance liquid chromatography, and electrophoresis. Ultracentrifugation is a method that separates small particle LDL using the difference in specific gravity, and quantifies the amount of cholesterol and protein. High-performance liquid chromatography uses a gel filtration column to separate by the size of lipoprotein particles. It is a method of analysis. A commonly used electrophoresis method is to measure the mobility and particle diameter of LDL using polyacrylamide gel. Small particle LDL has a particle size of 25.5 nm or less (JAMA, 260, p.1917-21, 1988) or LDL relative mobility (movement distance from VLDL to LDL divided by movement distance from VLDL to HDL) is 0.4 or more (arteriosclerosis, 25, p.67-70, 1997) . According to the measurement of the LDL particle size, it has been reported that a person mainly having small LDL has a three times higher risk of developing coronary artery disease than a person mainly having LDL of normal size. However, the measurement of particle size cannot determine the relationship with the severity of arteriosclerosis.
本発明は、動脈硬化の重症度、冠動脈疾患に罹患している患者における心筋梗塞、安定狭心症を起こす危険性の評価方法の提供を目的とする。 An object of the present invention is to provide a method for evaluating the severity of arteriosclerosis and the risk of causing myocardial infarction and stable angina in patients suffering from coronary artery disease.
本発明者らは鋭意検討した結果、小粒子LDL値が動脈硬化の進展度、重症度を示す冠動脈狭窄の病変枝数および冠動脈造影による重症度スコア（Gensini score）と関連性が高いことを見いだした。従来の冠動脈造影検査では患者に苦痛を与え、時間、費用の面からも負担の大きいものであったが、本発明ではこれらの判断を簡便に行うことができる。 As a result of intensive studies, the present inventors have found that small particle LDL levels are highly related to the degree of progression of arteriosclerosis, the number of lesions of coronary artery stenosis indicating severity, and the severity score (Gensini score) by coronary angiography. It was. In the conventional coronary angiography examination, the patient is painful, and the burden is great in terms of time and cost. However, in the present invention, these determinations can be easily made.
また、本発明者らは小粒子LDLを定量することにより、動脈硬化性疾患の重症度が高い患者において、血行再建術等の侵襲的治療の必要性を判断することができることを見いだした。 In addition, the present inventors have found that by quantifying small particle LDL, it is possible to determine the necessity of invasive treatment such as revascularization in patients with high severity of arteriosclerotic disease.
すなわち、本発明は動脈硬化性疾患の患者検体中の小粒子LDLを測定することにより、動脈硬化の重症度を判断する方法、および冠動脈疾患を起こしている被験者における心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントを起こす危険性を判断する方法を提供するものである。動脈硬化の重症度および心血管イベントを起こす危険性を判断する方法としては、小粒子LDLの測定値を単独で用いても良いし、小粒子LDLの測定値をLDL測定値で除したもの（小粒子LDL／LDL）あるいは小粒子LDLの測定値を高比重リポ蛋白質（HDL）測定値で除したもの（小粒子LDL／HDL）も好適に用いることができる。本発明における小粒子LDLの測定値としては小粒子LDL中コレステロール、中性脂肪または蛋白質を用いることができる。 That is, the present invention relates to a method for determining the severity of arteriosclerosis by measuring small particle LDL in a patient sample of arteriosclerotic disease, and myocardial infarction and unstable angina in subjects with coronary artery disease. A method for determining the risk of causing a cardiovascular event such as the above is provided. To determine the severity of arteriosclerosis and the risk of cardiovascular events, small particle LDL measurements may be used alone or small particle LDL measurements divided by LDL measurements ( Small particle LDL / LDL) or small particle LDL measurement value divided by high specific gravity lipoprotein (HDL) measurement value (small particle LDL / HDL) can also be suitably used. As the measurement value of the small particle LDL in the present invention, cholesterol, neutral fat or protein in the small particle LDL can be used.
本発明は具体的には以下の方法およびキットを提供する。
（１）被検試料中の小粒子低比重リポ蛋白、または小粒子低比重リポ蛋白と低比重リポ蛋白との比率、または小粒子低比重リポ蛋白と高比重リポ蛋白との比率を測定することを含み、被検試料中の小粒子低比重リポ蛋白量、小粒子低比重リポ蛋白と低比重リポ蛋白との比率、または小粒子低比重リポ蛋白と高比重リポ蛋白との比率の増加が、該試料を提供した被験者の動脈硬化の重症度の増加を示すことを特徴とする、動脈硬化の重症度を判断する方法、
（２）被検試料中の小粒子低比重リポ蛋白、または小粒子低比重リポ蛋白と低比重リポ蛋白との比率、または小粒子低比重リポ蛋白と高比重リポ蛋白との比率を測定することを含み、被検試料中の小粒子低比重リポ蛋白量、小粒子低比重リポ蛋白と低比重リポ蛋白との比率、または小粒子低比重リポ蛋白と高比重リポ蛋白との比率の増加が、該試料を提供した冠動脈疾患を起こしている被験者における心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントを起こす危険性の存在を示すことを特徴とする、冠動脈疾患を起こしている被験者における心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントを起こす危険性を判断する方法、
（３）前記小粒子低比重リポ蛋白の定量が小粒子低比重リポ蛋白中コレステロールまたは中性脂肪または蛋白質を測定することにより行われることを特徴とする（１）または（２）の方法、
（４）前記小粒子低比重リポ蛋白の定量が、被検試料中の小粒子低比重リポ蛋白をそれ以外の低比重リポ蛋白と分離する第１工程と、分離した小粒子低比重リポ蛋白中のコレステロール、中性脂肪または蛋白質を測定する第２工程から成る、（３）の方法、
（５）小粒子低比重リポ蛋白中のコレステロール、中性脂肪または蛋白質の測定用試薬を含む動脈硬化の重症度を判断するための小粒子低比重リポ蛋白測定用キット。
Specifically, the present invention provides the following methods and kits.
(1) Measuring the small particle low density lipoprotein, the ratio of small particle low density lipoprotein and low density lipoprotein, or the ratio of small particle low density lipoprotein and high density lipoprotein in the test sample. An increase in the amount of small particle low density lipoprotein, the ratio of small particle low density lipoprotein and low density lipoprotein, or the ratio of small particle low density lipoprotein and high density lipoprotein, A method for determining the severity of arteriosclerosis, characterized by showing an increase in the severity of arteriosclerosis in the subject who provided the sample,
(2) Measuring the small particle low density lipoprotein, the ratio of small particle low density lipoprotein and low density lipoprotein, or the ratio of small particle low density lipoprotein and high density lipoprotein in the test sample. An increase in the amount of small particle low density lipoprotein, the ratio of small particle low density lipoprotein and low density lipoprotein, or the ratio of small particle low density lipoprotein and high density lipoprotein, A myocardial infarction in a subject with coronary artery disease, characterized by the presence of a risk of causing a cardiovascular event such as myocardial infarction or unstable angina in a subject with coronary artery disease provided with the sample How to determine the risk of cardiovascular events such as or unstable angina,
(3) The method of (1) or (2), wherein the quantification of the small particle low density lipoprotein is performed by measuring cholesterol or neutral fat or protein in the small particle low density lipoprotein,
(4) The first step of quantifying the small particle low density lipoprotein in the test sample separates the small particle low density lipoprotein from the other low density lipoprotein, and the separated small particle low density lipoprotein Comprising the second step of measuring cholesterol, neutral fat or protein of (3),
(5) A small particle low density lipoprotein measurement kit for determining the severity of arteriosclerosis, which comprises a reagent for measuring cholesterol, neutral fat or protein in small particle low density lipoprotein.
実施例１および２に示すように、小粒子低比重リポ蛋白の量、または小粒子低比重リポ蛋白と低比重リポ蛋白との比率、または小粒子低比重リポ蛋白と高比重リポ蛋白との比率は、動脈硬化の重症度と相関しており、本発明の方法により、動脈硬化の重症度を判定することができる。また、実施例３に示すように、安定冠動脈疾患に罹患している被験者において、心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントの発生と小粒子低比重リポ蛋白の量、または小粒子低比重リポ蛋白と低比重リポ蛋白との比率、または小粒子低比重リポ蛋白と高比重リポ蛋白との比率が相関しており、本発明の方法により、心血管イベントを起こす危険性を判断することができ、また血行再建術等の治療の必要性を判断することができる。 As shown in Examples 1 and 2, the amount of small particle low density lipoprotein, the ratio of small particle low density lipoprotein and low density lipoprotein, or the ratio of small particle low density lipoprotein and high density lipoprotein Is correlated with the severity of arteriosclerosis, and the method of the present invention can determine the severity of arteriosclerosis. In addition, as shown in Example 3, in subjects suffering from stable coronary artery disease, occurrence of cardiovascular events such as myocardial infarction and unstable angina and the amount of small particle low density lipoprotein, or small particle low The ratio of specific gravity lipoprotein and low density lipoprotein, or the ratio of small particle low density lipoprotein and high density lipoprotein is correlated, and the method of the present invention is used to determine the risk of causing a cardiovascular event. And the necessity of treatment such as revascularization can be determined.
本発明の方法において、小粒子低比重リポ蛋白、または小粒子低比重リポ蛋白と低比重リポ蛋白との比率、または小粒子低比重リポ蛋白と高比重リポ蛋白との比率を動脈硬化の重症度判断等の指標として用いるため、被検体中の小粒子低比重リポ蛋白（sLDL）、低比重リポ蛋白（LDL）および高比重リポ蛋白（HDL）を測定する必要がある。本発明の方法で用いる被検試料は、血液、血清または血しょうである。 In the method of the present invention, the small particle low density lipoprotein, the ratio of the small particle low density lipoprotein and the low density lipoprotein, or the ratio of the small particle low density lipoprotein and the high density lipoprotein is defined as the severity of arteriosclerosis. In order to use it as an indicator for judgment and the like, it is necessary to measure small particle low density lipoprotein (sLDL), low density lipoprotein (LDL) and high density lipoprotein (HDL) in a subject. The test sample used in the method of the present invention is blood, serum or plasma.
測定には、各リポ蛋白を分画し、それぞれのリポ蛋白を粒子サイズや密度を指標に定量すればよい。粒子サイズの直径は、報告者により異なるがLDLが22nm〜28nm(19nm〜30nm)、HDLが直径７〜10nmである。比重は、LDLが1.019〜1.063、HDLが1.063〜1.21である。LDL粒子直径はグラジエントゲル電気泳動（GGE）(JAMA, 260, p.1917-21, 1988)、NMR（HANDBOOK OF LIPOPROTEIN TESTING 2nd Edition、 Nader Rifai他編、p.609-623、AACC PRESS：TheFats of Life Summer 2002、LVDD 15 YEAR ANNIVERSARY ISSUE、Volume AVI No.3、p.15-16）により測定でき、比重は超遠心分離による分析(Atherosclerosis, 106, p.241-253, 1994: Atherosclerosis, 83, p.59, 1990)に基づいて決定できる。 For the measurement, each lipoprotein is fractionated, and each lipoprotein may be quantified using the particle size or density as an index. The diameter of the particle size varies depending on the reporter, but LDL is 22 nm to 28 nm (19 nm to 30 nm), and HDL is 7 to 10 nm in diameter. The specific gravity is 1.019 to 1.063 for LDL and 1.063 to 1.21 for HDL. LDL particle diameters gradient gel electrophoresis (GGE) (JAMA, 260, p.1917-21, 1988), NMR (HANDBOOK OF LIPOPROTEIN TESTING 2 nd Edition, Nader Rifai other eds, p.609-623, AACC PRESS: TheFats of Life Summer 2002, LVDD 15 YEAR ANNIVERSARY ISSUE, Volume AVI No.3, p.15-16), specific gravity is analyzed by ultracentrifugation (Atherosclerosis, 106, p.241-253, 1994: Atherosclerosis, 83 , p.59, 1990).
リポ蛋白の定量法として、種々の方法が知られており、これらの公知の方法を用いて定量すればよい。例えば、超遠心法、電気泳動法、高速液体クロマトグラフィーを用いる方法などがある。超遠心法は比重の差を利用して小粒子LDLを分離し、そのコレステロール量や蛋白量を定量する方法である（Atherosclerosis, 48 p.33-49, 1993: Atherosclerosis,106, p.241-253, 1994等）。電気泳動法はポリアクリルアミドゲルを用いてLDLの移動度や粒子直径を測る方法であり（JAMA, 260, p.1917-21, 1988等、動脈硬化, 25, p.67-70, 1997）、さらに、アガロース電気泳動において泳動後のゲルを脂質染色し、その染色パターンをコンピューター解析しリポ蛋白を定量する方法がある（特開2000-356641号公報）。 Various methods are known for quantifying lipoproteins, and these methods may be used for quantification. Examples include ultracentrifugation, electrophoresis, and high-performance liquid chromatography. Ultracentrifugation is a method of separating small particle LDL using the difference in specific gravity and quantifying the amount of cholesterol and protein (Atherosclerosis, 48 p.33-49, 1993: Atherosclerosis, 106, p.241- 253, 1994 etc.). Electrophoresis is a method of measuring the mobility and particle diameter of LDL using polyacrylamide gel (JAMA, 260, p.1917-21, 1988, etc., arteriosclerosis, 25, p.67-70, 1997) Furthermore, there is a method in which the gel after electrophoresis in agarose electrophoresis is lipid-stained, and the staining pattern is computer-analyzed to quantitate lipoproteins (Japanese Patent Laid-Open No. 2000-356641).
また、sLDL、LDLおよびHDLに含まれるコレステロール、中性脂肪（トリグリセリド）またはタンパク質を測定してもよい。これらの方法は、直接粒子状のリポ蛋白を測定するものではないが、被検体のリポ蛋白濃度を反映している。例えば、コレステロールの定量方法として、分画とコレステロール定量の2つの操作から求める方法と総コレステロール、HDLコレステロール、トリグリセリド値により求めるFriedewald式による演算方法がある。また、分画操作を要しないLDLコレステロール定量方法があり（特開平11-318496号公報）、第１工程で試料中のLDL以外のリポ蛋白中コレステロールを選択的に消去し（消去とはエステル型コレステロールを分解し、その分解物が第２工程に検出されないようにすることを意味する）、第２工程でLDLコレステロールを定量することができる。さらに、１回の測定でHDLコレステロールと総コレステロールおよびLDLコレステロールと総コレステロールを連続的に測定する方法もあり（特表2003-501630号公報）、試料を１本の試験用チューブに入れ、試料中の非HDLコレステロールと抗アポB抗体の複合体を形成させ、複合体を形成していないリポ蛋白質、つまりHDLを測定する。次いで複合体を界面活性剤を用いて解離させ、残った非HDLコレステロールを酵素的に測定するものであり、２回の測定値をトータルすることにより総コレステロール値を得ることができる。リポ蛋白中のタンパク質を用いる方法においては、HDL中のアポ蛋白A-I、アポ蛋白A-II、LDL中のアポ蛋白B-100を測定すればよく、それぞれのアポ蛋白を特異的に認識する抗体を用いた免疫測定法により測定することができる。 Further, cholesterol, neutral fat (triglyceride) or protein contained in sLDL, LDL and HDL may be measured. These methods do not directly measure particulate lipoprotein, but reflect the lipoprotein concentration of the subject. For example, as a method for quantifying cholesterol, there are a method obtained from two operations of fractionation and cholesterol quantification and a calculation method based on the Friedewald equation obtained from total cholesterol, HDL cholesterol and triglyceride values. In addition, there is a method for LDL cholesterol quantification that does not require fractionation (Japanese Patent Laid-Open No. 11-318496). In the first step, cholesterol in lipoproteins other than LDL in the sample is selectively eliminated (deletion is an ester type). LDL cholesterol can be quantified in the second step, which means that cholesterol is degraded and the degradation product is not detected in the second step). In addition, there is also a method of measuring HDL cholesterol and total cholesterol and LDL cholesterol and total cholesterol continuously in one measurement (Japanese Patent Publication No. 2003-501630), and put the sample in a single test tube. A non-HDL cholesterol and anti-apo B antibody complex is formed, and the lipoprotein that does not form the complex, that is, HDL, is measured. Subsequently, the complex is dissociated using a surfactant, and the remaining non-HDL cholesterol is enzymatically measured. The total cholesterol value can be obtained by totaling the two measured values. In the method using a protein in lipoprotein, it is only necessary to measure apoprotein AI in HDL, apoprotein A-II, and apoprotein B-100 in LDL, and an antibody that specifically recognizes each apoprotein. It can be measured by the immunoassay used.
ただし、上記の方法においては、LDLおよびHDLは正確に定量することが可能であるが、小粒子LDLとLDLを充分に分別定量できない場合がある。従って、小粒子LDLは別途他の方法で定量することが望ましい。なお、小粒子LDLは、一般的にはLDL画分のうち直径が約22.0〜約25.5nmの亜分画、比重1.040〜1.063の亜分画を指す。LDLを大きさにより亜分画に分けているのは、LDLのうち粒子径が小さいものが動脈硬化惹起性が高く、LDLの中でもより悪性度が高いので、LDLの中でも小さいものを分別測定する必要があったからである。LDL内で直径分布や比重分布は連続しており、比重がどの程度以上のものが特に悪性度が高いというように明確に区別できるものではない。従って、上記の比重1.040〜1.063という値も小粒子LDLの特性として確立したものではなく、広く用いられており確立した値といえるLDLの比重範囲1.019〜1.063を中央点で分けたものである。例えば、別の報告では1.044〜1.060に分画される（Atherosclerosis:106 241-253 1994）。小粒子LDLの比重をどの範囲にするかは、報告者により若干の違いがあるが、いずれもその範囲で分別した場合の小粒子LDLの存在が臨床的な悪性度と関連している。 However, in the above method, LDL and HDL can be accurately quantified, but small particles LDL and LDL may not be sufficiently separately quantified. Therefore, it is desirable to quantify the small particle LDL by another method. Small particle LDL generally refers to a subfraction having a diameter of about 22.0 to about 25.5 nm and a specific gravity of 1.040 to 1.063 among LDL fractions. LDL is divided into sub-fractions according to size because LDL with a small particle size is more prone to arteriosclerosis and is more malignant than LDL. Because there was a need. The diameter distribution and specific gravity distribution are continuous in the LDL, and it is not clearly distinguishable that the specific gravity is higher than that of the malignancy. Therefore, the value of the specific gravity of 1.040 to 1.063 is not established as the characteristics of the small particle LDL, but the specific gravity range of 1.019 to 1.063 of the LDL which is widely used and can be regarded as an established value is divided by the central point. For example, in another report it is fractionated between 1.044 and 1.060 (Atherosclerosis: 106 241-253 1994). The range of specific gravity of small particle LDL varies slightly depending on the reporter, but the presence of small particle LDL when classified in that range is associated with clinical malignancy.
小粒子LDLの定量法としていくつかの方法（臨床病理，25，ｐ．406-413，2004、特開2004-264051、Atherosclerosis，125，231-242，1996等）があるが、これらを好適に用いることができる。 There are several methods for quantifying small particle LDL (Clinical Pathology, 25, p. 406-413, 2004, Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-264051, Atherosclerosis, 125, 231-242, 1996, etc.). Can be used.
例えば、臨床病理，25，ｐ．406-413，2004の記載に従って、以下のようにして小粒子LDL中コレステロールの測定を行うことができる。血清を試料とし、ポリアニオンと二価陽イオンからなる分離剤と混合した場合、通常サイズのLDLの他、VLDL、カイロミクロンなどは凝集物を形成し、遠心分離やフィルター等により反応系から除去される。反応液中には凝集物を形成しない小粒子LDLおよびHDLが残る。この反応液にLDLコレステロール直接測定法の原理を利用した2試薬系の自動分析装置対応の試薬を作用させる。第１反応ではLDL以外のリポタンパク質に作用する界面活性剤の存在下でコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼを作用させ、生じた過酸化水素を消去することにより、反応液中のHDLコレステロールのみが消去される。続く第２反応では試料中の小粒子LDL中コレステロールの測定を行う。これは、例えば、少なくともLDLに作用する界面活性剤を加え、第１工程で加えたコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼの作用により生じた過酸化水素を定量することにより行うことができる。記載の方法に従って健常人の小粒子LDL中コレステロールを測定した場合、その平均値は約20mg/dLとなった（n=360）。 For example, clinical pathology, 25, p. According to the description in 406-413, 2004, cholesterol in small particle LDL can be measured as follows. When serum is used as a sample and mixed with a separation agent consisting of a polyanion and a divalent cation, VLDL, chylomicron, etc. form aggregates in addition to LDL of normal size, and are removed from the reaction system by centrifugation or filters. The Small particles LDL and HDL that do not form aggregates remain in the reaction solution. A reagent corresponding to a two-reagent automatic analyzer using the principle of the direct measurement method of LDL cholesterol is allowed to act on this reaction solution. In the first reaction, cholesterol esterase and cholesterol oxidase are allowed to act in the presence of a surfactant that acts on lipoproteins other than LDL, and the generated hydrogen peroxide is eliminated, so that only HDL cholesterol in the reaction solution is eliminated. . In the subsequent second reaction, cholesterol in the small particle LDL in the sample is measured. This can be performed, for example, by adding at least a surfactant that acts on LDL and quantifying hydrogen peroxide generated by the action of cholesterol esterase and cholesterol oxidase added in the first step. When cholesterol in a small particle LDL of a healthy person was measured according to the method described, the average value was about 20 mg / dL (n = 360).
また、上記方法による通常LDLと小粒子LDLの分離の後、小粒子LDL中タンパク質を測定する場合、第２工程で用いられる抗ヒトアポＢ抗体を作用させる方法としていくつかの方法（特許第2638137号公報，特開平02-64458号公報）等があり、これらを好適に用いることができる。 Further, after the separation of normal LDL and small particle LDL by the above method, when measuring the protein in small particle LDL, several methods (Patent No. 2638137) can be used as a method of allowing the anti-human apo B antibody used in the second step to act (Japanese Patent Laid-Open No. 02-64458), and the like can be suitably used.
小粒子LDL中中性脂肪を測定する場合、第２工程で用いられる分画操作を要しないLDL中の中性脂肪測定方法としていくつかの方法（WO00/43537号公報）等があり、これらを好適に用いることができる。 When measuring small-particle LDL neutral fat, there are several methods (WO00 / 43537) for measuring neutral fat in LDL that do not require fractionation used in the second step. It can be used suitably.
上記の種々の方法により、被検体中の小粒子低比重リポ蛋白（sLDL）、低比重リポ蛋白（LDL）および高比重リポ蛋白濃度（HDL）濃度を測定することができ、小粒子低比重リポ蛋白の定量値、小粒子低比重リポ蛋白定量値と低比重リポ蛋白定量値との比率、または小粒子低比重リポ蛋白定量値と高比重リポ蛋白定量値との比率を指標に被験体と疾患との関係を判定することができる。 By the above-mentioned various methods, small particle low density lipoprotein (sLDL), low density lipoprotein (LDL) and high density lipoprotein concentration (HDL) concentration in a subject can be measured. Subject and disease using as an index the quantitative value of protein, the ratio of small particle low-density lipoprotein quantitative value and low-density lipoprotein quantitative value, or the ratio of small particle low-density lipoprotein quantitative value and high-density lipoprotein quantitative value Can be determined.
本発明の方法は、動脈硬化の重症度を判断する方法であるが、該方法は、動脈硬化の重症度をスクリーニングする方法でもあり、また、重症度が低いか、重症度が中程度か、あるいは重症度が高い動脈硬化を鑑別して検出する方法でもある。 The method of the present invention is a method for determining the severity of arteriosclerosis, but the method is also a method for screening the severity of arteriosclerosis, and is low in severity or moderate in severity. Alternatively, it may be a method of detecting and detecting arteriosclerosis having high severity.
また、本発明の方法は、冠動脈疾患を起こしている被験者における心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントを起こす危険性を判断する方法であるが、該方法は、心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントの発生確率を検出する方法でもあり、例えば、確率が低い、中程度、または高いと判断できる。また、測定値とイベントが発生する頻度を関連付けることにより、確率を数値で示すことも可能である。 The method of the present invention is a method for determining the risk of causing a cardiovascular event such as myocardial infarction or unstable angina in a subject having coronary artery disease. It is also a method for detecting the occurrence probability of a cardiovascular event such as angina pectoris. For example, it can be determined that the probability is low, medium, or high. It is also possible to indicate the probability numerically by associating the measured value with the frequency of occurrence of the event.
本発明の方法により、動脈硬化の進展度もしくは重症度ならびに冠動脈疾患を起こしている被験者における心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントを起こす危険性を評価判定することができる。本発明で、動脈とは、冠動脈、脳動脈、末梢動脈のいずれも包含するが、好適には冠動脈における進展度または重症度を判定することができる。動脈硬化の進展度または重症度は、動脈硬化の重症度、進展度を示す指標である冠動脈の病変枝数と相関している。小粒子低比重リポ蛋白の定量値、小粒子低比重リポ蛋白定量値と低比重リポ蛋白定量値との比率、または小粒子低比重リポ蛋白定量値と高比重リポ蛋白定量値との比率は冠動脈の病変枝数と相関しており、これらの値を指標に動脈硬化の進展度または重症度を判定することができる。小粒子低比重リポ蛋白の定量値が冠動脈疾患に罹患していない健常人よりも増加している場合、例えば、健常人に対して値が約1.5倍、約1.75倍または約２倍以上である場合、または小粒子低比重リポ蛋白定量値と低比重リポ蛋白定量値との比率もしくは小粒子低比重リポ蛋白定量値と高比重リポ蛋白定量値との比率が冠動脈疾患に罹患していない健常人よりも増加している場合に動脈硬化が進展しているまたは動脈硬化の重症度が高いと判断することができる。例えば、健常人の小粒子低比重リポ蛋白中コレステロールの平均値は20mg/dLであるが、血清中の小粒子低比重リポ蛋白中コレステロールの定量値が30、35または40mg/dLを超える場合、冠動脈の病変枝数は１、２または３を超える。従って、血清中の小粒子低比重リポ蛋白中コレステロールの定量値が30、35または40mg/dLを超える場合、すなわち健常人の値に対して約1.5倍、約1.75倍または約２倍以上である場合、動脈硬化が進展しており、または動脈硬化が重症であると判定し得る。同様に、血清中の小粒子低比重リポ蛋白中コレステロール定量値と低比重リポ蛋白コレステロール定量値との比率（小粒子LDL-C/LDL-C比（百分率％））が30％または35％以上のとき、動脈硬化が進展しており、または動脈硬化が重症であると判定し得、血清中の小粒子低比重リポ蛋白中コレステロール定量値と高比重リポ蛋白コレステロール定量値との比率（小粒子LDL-C/HDL-C比）が0.6、0.8、1.0または1.2以上のとき、動脈硬化が進展しており、または動脈硬化が重症であると判定し得る。 According to the method of the present invention, the degree of progression or severity of arteriosclerosis and the risk of causing a cardiovascular event such as myocardial infarction or unstable angina in a subject having coronary artery disease can be evaluated and determined. In the present invention, arteries include any of coronary arteries, cerebral arteries, and peripheral arteries, but preferably the degree of progression or severity in coronary arteries can be determined. The degree or severity of arteriosclerosis correlates with the number of lesion branches in the coronary artery, which is an index indicating the degree and degree of arteriosclerosis. The quantitative value of small particle low density lipoprotein, the ratio of small particle low density lipoprotein quantitative value and low specific gravity lipoprotein quantitative value, or the ratio of small particle low density lipoprotein quantitative value and high specific gravity lipoprotein quantitative value is coronary artery The degree of progression or severity of arteriosclerosis can be determined using these values as an index. When the quantitative value of small-particle low-density lipoprotein is higher than that of healthy people who do not suffer from coronary artery disease, for example, the value is about 1.5 times, about 1.75 times or about 2 times or more that of healthy people Healthy subjects who do not suffer from coronary artery disease, or the ratio of the small particle low-density lipoprotein quantitative value or the ratio of the small particle low-density lipoprotein quantitative value to the small particle low-density lipoprotein quantitative value It can be determined that the arteriosclerosis has progressed or the severity of the arteriosclerosis is high. For example, when the average value of cholesterol in small particle low density lipoprotein of healthy individuals is 20 mg / dL, but the quantitative value of cholesterol in small particle low density lipoprotein in serum exceeds 30, 35 or 40 mg / dL, The number of coronary artery lesions exceeds 1, 2 or 3. Therefore, when the quantitative value of cholesterol in small particle low density lipoprotein in serum exceeds 30, 35, or 40 mg / dL, that is, about 1.5 times, about 1.75 times, or more than about 2 times that of healthy people If so, it may be determined that arteriosclerosis has progressed or that arteriosclerosis is severe. Similarly, the ratio of small-particle low-density lipoprotein cholesterol quantification value in serum to low-density lipoprotein cholesterol quantification value (small particle LDL-C / LDL-C ratio (percentage%)) is 30% or 35% or more At this time, it can be determined that arteriosclerosis has progressed or arteriosclerosis is severe, and the ratio of small-particle low-density lipoprotein cholesterol quantification value to high-density lipoprotein cholesterol quantification value in serum (small particle When the LDL-C / HDL-C ratio) is 0.6, 0.8, 1.0, or 1.2 or more, it can be determined that arteriosclerosis has progressed or arteriosclerosis is severe.
さらに、動脈硬化の進展度または重症度は、冠動脈造影検査によるGensini scoreと相関しており、Gensini score が23.5以上の場合、動脈硬化が進展しており、または動脈硬化が重症であるとされる。小粒子低比重リポ蛋白の定量値、小粒子低比重リポ蛋白定量値と低比重リポ蛋白定量値との比率、または小粒子低比重リポ蛋白定量値と高比重リポ蛋白定量値との比率はGensini scoreと相関しており、これらの値を指標に動脈硬化の進展度または重症度を判定することができる。例えば、血清中の小粒子低比重リポ蛋白中コレステロールの定量値が約40mg/dLを超える場合、動脈硬化が進展しており、または動脈硬化が重症であると判定し得る。同様に、血清中の小粒子低比重リポ蛋白定量値と高比重リポ蛋白定量値との比率（小粒子LDL-C/HDL-C比）が0.8、0.9または1.0以上のとき、動脈硬化が進展しており、または動脈硬化が重症であると判定し得る。 Furthermore, the degree or severity of arteriosclerosis correlates with the Gensini score obtained by coronary angiography. If the Gensini score is 23.5 or higher, arteriosclerosis has progressed or arteriosclerosis is considered to be severe. . The quantitative value of small particle low density lipoprotein, the ratio of small particle low density lipoprotein quantitative value and low specific gravity lipoprotein quantitative value, or the ratio of small particle low density lipoprotein quantitative value and high specific gravity lipoprotein quantitative value is Gensini. It is correlated with score, and the progression degree or severity of arteriosclerosis can be determined using these values as indices. For example, when the quantitative value of cholesterol in small particle low density lipoprotein in serum exceeds about 40 mg / dL, it can be determined that arteriosclerosis has progressed or arteriosclerosis is severe. Similarly, arteriosclerosis progresses when the ratio of small particle low density lipoprotein quantitative value and high specific gravity lipoprotein quantitative value (small particle LDL-C / HDL-C ratio) in serum is 0.8, 0.9 or 1.0 or more Or arteriosclerosis can be determined to be severe.
さらに、小粒子低比重リポ蛋白の定量値、小粒子低比重リポ蛋白定量値と低比重リポ蛋白定量値との比率、または小粒子低比重リポ蛋白定量値と高比重リポ蛋白定量値との比率を指標に冠動脈疾患を起こしている被験者での心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントを起こす危険性を評価・判断することが可能であり、また前記被験者の血行再建術等の治療の必要性を判断することができる。小粒子低比重リポ蛋白の定量値が冠動脈疾患に罹患していない健常人よりも増加している場合、例えば、健常人に対して値が約1.5倍、約1.75倍または約２倍以上である場合、または小粒子低比重リポ蛋白定量値と低比重リポ蛋白定量値との比率もしくは小粒子低比重リポ蛋白定量値と高比重リポ蛋白定量値との比率が冠動脈疾患に罹患していない健常人よりも増加している場合に心血管イベントを起こす危険性があると判断することができ、さらに血行再建術等の治療が必要であると判断することができる。動脈硬化が進展しているまたは動脈硬化の重症度が高いと判断することができる。例えば、血清中の小粒子低比重リポ蛋白中コレステロールの定量値が30、35または40mg/dLを超える場合、すなわち健常人の値に対して約1.5倍、約1.75倍または約２倍以上である場合、血清中の小粒子低比重リポ蛋白中コレステロール定量値と低比重リポ蛋白コレステロール定量値との比率（小粒子LDL-C/LDL-C比（百分率％））が30％または35％以上のとき、あるいは、血清中の小粒子低比重リポ蛋白中コレステロール定量値と高比重リポ蛋白コレステロール定量値との比率（小粒子LDL-C/HDL-C比）が0.6、0.8、1.0または1.2以上のとき、冠動脈疾患を起こしている被験者に心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントを起こす危険性があると判断することができ、また前記被験者に血行再建術等の治療の必要性があると判断できる。 Furthermore, the quantitative value of small particle low density lipoprotein, the ratio of small particle low density lipoprotein quantitative value and low specific gravity lipoprotein quantitative value, or the ratio of small particle low density lipoprotein quantitative value and high specific gravity lipoprotein quantitative value It is possible to evaluate and judge the risk of causing cardiovascular events such as myocardial infarction and unstable angina in subjects who have coronary artery disease using the index, and treatment such as revascularization of the subject Can be judged. When the quantitative value of small-particle low-density lipoprotein is higher than that of healthy people who do not suffer from coronary artery disease, for example, the value is about 1.5 times, about 1.75 times or about 2 times or more that of healthy people Healthy subjects who do not suffer from coronary artery disease, or the ratio of the small particle low-density lipoprotein quantitative value or the ratio of the small particle low-density lipoprotein quantitative value to the small particle low-density lipoprotein quantitative value It can be determined that there is a risk of causing a cardiovascular event when the increase is greater than that, and it can be determined that treatment such as revascularization is necessary. It can be determined that arteriosclerosis is progressing or the severity of arteriosclerosis is high. For example, when the quantitative value of cholesterol in small particle low density lipoprotein in serum exceeds 30, 35, or 40 mg / dL, that is, about 1.5 times, about 1.75 times, or more than about 2 times that of healthy people If the ratio of serum small particle low density lipoprotein cholesterol quantification value to low density lipoprotein cholesterol quantification value (small particle LDL-C / LDL-C ratio (percentage%)) is 30% or more than 35% Or the ratio of the low-density lipoprotein cholesterol quantification value in serum to the high-density lipoprotein cholesterol quantification value (small particle LDL-C / HDL-C ratio) is 0.6, 0.8, 1.0 or 1.2 or more Sometimes, it can be determined that a subject having coronary artery disease has a risk of causing a cardiovascular event such as myocardial infarction or unstable angina, and the subject has a need for treatment such as revascularization. It can be judged that there is.
上記記載において、小粒子低比重リポ蛋白の定量値、小粒子低比重リポ蛋白定量値と低比重リポ蛋白定量値との比率、または小粒子低比重リポ蛋白定量値と高比重リポ蛋白定量値との比率に関する値は、一例であり、上記値には限定されない。 In the above description, the quantitative value of the small particle low density lipoprotein, the ratio of the small particle low density lipoprotein quantitative value and the low density lipoprotein quantitative value, or the small particle low density lipoprotein quantitative value and the high density lipoprotein quantitative value, The value regarding the ratio is an example, and is not limited to the above value.
以下、本発明の詳細について実施例に基づき具体的に説明するが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, although the detail of this invention is concretely demonstrated based on an Example, this invention is not limited to the following Example.
［実施例１］
冠動脈造影検査を受け冠動脈疾患と診断された入院連続患者177名を、動脈硬化性狭窄病変をきたした主要冠動脈（右冠動脈・左前下行枝・左回旋枝）の枝数から，有意狭窄のない0枝群，一枝群，二枝群，三枝群にわけ、小粒子LDL中コレステロール値、LDLコレステロール値、平均LDL粒子サイズ、小粒子LDL中コレステロールとLDLコレステロールとの比（小粒子LDL中コレステロール／LDLコレステロール）、および小粒子LDL中コレステロールとHDLコレステロールとの比（小粒子LDL中コレステロール／HDLコレステロール）の測定を行った。
[Example 1]
Based on the number of branches of the main coronary artery (right coronary artery, left anterior descending branch, left circumflex branch) with sclerotic stenosis, 177 consecutive hospitalized patients who were diagnosed with coronary artery disease under coronary angiography examination showed no significant stenosis. Divided into branch group, one branch group, two branch group, three branch group, small particle LDL cholesterol value, LDL cholesterol value, average LDL particle size, ratio of small particle LDL cholesterol to LDL cholesterol (small particle LDL cholesterol / LDL Cholesterol) and the ratio of cholesterol in small particle LDL to HDL cholesterol (cholesterol in small particle LDL / HDL cholesterol) were measured.
被検試料として血清を用い、平均LDL粒子サイズはグラジエントゲル電気泳動（JAMA，260，ｐ．1917-21，1988）を用いて測定した。LDLコレステロールの測定は第１工程でLDL以外のリポ蛋白をコレステロールエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、カタラーゼ酵素を用いて消去し、第２工程でコレステロールエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ酵素を用いてLDLコレステロールを測定する方法（特開平11-318496号）を用いた。HDLコレステロールの測定は、第１工程でHDL以外のリポ蛋白をコレステロールエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、カタラーゼ酵素を用いて消去し、第２工程でコレステロールエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ酵素を用いてHDLコレステロールを測定する方法（特許3288033号）を用いた。小粒子LDLコレステロールの測定は、ポリアニオンと二価陽イオンからなる分離剤を用いてLDLを通常サイズのLDLと小粒子LDLに分離する工程と、分離後の小粒子LDL中コレステロールを測定する工程からなる方法（臨床病理，25，ｐ．406-413，2004）を用いた。 Serum was used as a test sample, and the average LDL particle size was measured using gradient gel electrophoresis (JAMA, 260, p. 1917-21, 1988). LDL cholesterol is measured by eliminating lipoproteins other than LDL using cholesterol esterase, cholesterol oxidase, and catalase enzymes in the first step, and measuring LDL cholesterol using cholesterol esterase, cholesterol oxidase, and peroxidase enzymes in the second step. (Japanese Patent Laid-Open No. 11-318496) was used. HDL cholesterol is measured by eliminating lipoproteins other than HDL using cholesterol esterase, cholesterol oxidase, and catalase enzymes in the first step, and measuring HDL cholesterol using cholesterol esterase, cholesterol oxidase, and peroxidase enzymes in the second step. The method (Japanese Patent No. 3280333) was used. Small particle LDL cholesterol is measured by separating LDL into normal size LDL and small particle LDL using a separating agent consisting of polyanion and divalent cation, and measuring cholesterol in small particle LDL after separation. (Clinical Pathology, 25, p. 406-413, 2004).
その結果を図１に示す。 The result is shown in FIG.
冠動脈の病変枝数は動脈硬化の重症度、進展度を示す指標であるが、図１に示すように、ANOVA解析の結果、従来動脈硬化の危険因子として知られるLDLコレステロール値の測定では病変枝数との関連が認められず（ａ）、さらにより強い催動脈硬化作用を持つと言われる小粒子LDLについても、平均LDL粒子サイズでは全く関連が認められなかった（ｂ）。しかしながら、小粒子LDL中コレステロールの定量値を求めた場合、各群において有意な差が認められた（ｃ）。また、小粒子LDL中コレステロール／LDLコレステロール比（ｄ）、小粒子LDL中コレステロール／HDLコレステロール比（ｅ）を用いても重症度との関連が認められた。以上の記載は小粒子LDL測定値または小粒子LDL／LDL比または小粒子LDL／HDL比を求めることにより、動脈硬化の進展度、重症度を判断することができることを示すものである。 The number of lesions in the coronary arteries is an index indicating the severity and progression of arteriosclerosis. As shown in FIG. 1, as a result of ANOVA analysis, in the measurement of LDL cholesterol level, which is conventionally known as a risk factor for arteriosclerosis, There was no correlation with the number (a), and even for small particle LDL, which is said to have a stronger pro-arteriosclerotic effect, no correlation was observed with the average LDL particle size (b). However, when the quantitative value of cholesterol in small particle LDL was determined, a significant difference was observed in each group (c). Further, even when the small particle LDL cholesterol / LDL cholesterol ratio (d) and the small particle LDL cholesterol / HDL cholesterol ratio (e) were used, an association with the severity was observed. The above description shows that the degree of progression and severity of arteriosclerosis can be determined by determining the small particle LDL measurement value, the small particle LDL / LDL ratio, or the small particle LDL / HDL ratio.
［実施例２］
急性冠症候群にも糖尿病にも該当しない、すなわち糖尿病のない安定冠動脈疾患患者124名で冠動脈造影検査を行い、Gensini scoreによって点数化したものを冠動脈狭窄重症度の指標として４分割し、LDLコレステロール値、LDL粒子サイズ、小粒子LDL中コレステロール値および小粒子LDL中コレステロール／HDLコレステロール比の測定を行った。被検試料として血清を用い、LDL粒子サイズ、LDLコレステロール、HDLコレステロール、小粒子LDL中コレステロールの測定は実施例1と同様の方法を用いた。その結果を図２に示す。
[Example 2]
Coronary angiography examination was performed on 124 patients with stable coronary artery disease who did not fall into acute coronary syndrome or diabetes, that is, without diabetes, and scored by Gensini score was divided into 4 as an index of coronary stenosis severity, and LDL cholesterol level LDL particle size, small particle LDL cholesterol level, and small particle LDL cholesterol / HDL cholesterol ratio were measured. Serum was used as a test sample, and LDL particle size, LDL cholesterol, HDL cholesterol, and cholesterol in small particle LDL were measured using the same method as in Example 1. The result is shown in FIG.
ANOVA解析で群間比較を行った結果、ｐ＜0.0083のときLDLコレステロール値（ａ）およびLDL粒子サイズ（ｂ）では有意差が認められなかったが、小粒子LDL中コレステロール値ではＱ１群に比べ重症群（Ｑ３、Ｑ４群）で明らかな差が認められた（ｃ）。同様に、小粒子LDL中コレステロール／HDLコレステロール比（ｄ）でも明らかな差が認められた。このことは、小粒子LDLの測定または小粒子LDL／HDL比を用いることにより動脈硬化の重症度を判断することができることを示すものである。 As a result of comparison between groups by ANOVA analysis, when p <0.0083, there was no significant difference in LDL cholesterol level (a) and LDL particle size (b), but in small particle LDL cholesterol level compared to Q1 group A clear difference was observed in the severe group (Q3, Q4 group) (c). Similarly, a clear difference was also observed in the cholesterol / HDL cholesterol ratio (d) in the small particle LDL. This indicates that the severity of arteriosclerosis can be determined by measuring small particle LDL or using the small particle LDL / HDL ratio.
［実施例３］
冠動脈疾患の入院患者301名を、異型狭心症(VAP)、安定冠動脈疾患で血行再建術の必要のない例(S-N)、安定冠動脈疾患で血行再建を要した例(Revasc)と急性冠動脈疾患(ACS)に分類し、LDLコレステロール値、LDL粒子サイズ、小粒子LDL中コレステロール値および小粒子LDL中コレステロール／HDLコレステロール比の測定を行った。被検試料として血清を用い、LDL粒子サイズ、LDLコレステロール、HDLコレステロール、小粒子LDL中コレステロールの測定は実施例1と同様の方法を用いた。その結果を図３に示す。
[Example 3]
In 301 hospitalized patients with coronary artery disease, patients with variant angina (VAP), stable coronary artery disease without revascularization (SN), stable coronary artery disease with revascularization (Revasc), and acute coronary artery disease (ACS), LDL cholesterol level, LDL particle size, small particle LDL cholesterol level and small particle LDL cholesterol / HDL cholesterol ratio were measured. Serum was used as a test sample, and LDL particle size, LDL cholesterol, HDL cholesterol, and cholesterol in small particle LDL were measured using the same method as in Example 1. The result is shown in FIG.
ANOVA解析で群間比較を行った結果、図３に示すようにLDLコレステロール値（ａ）、およびLDL粒子サイズ（ｂ）ではVAP群とRevasc群に有意差は認められなかった。一方、小粒子LDL中コレステロール値ではVAP群、S-N群とRevasc群およびACS群との間に有意差が認められた（ｃ）。また、小粒子LDL中コレステロール／LDLコレステロール比ではVAP群、S-N群とRevasc群との間に（ｄ）、小粒子LDL中コレステロール／HDLコレステロール比ではVAP群、S-N群とRevasc群およびACS群との間に有意差が認められた（ｅ）。このことは、小粒子LDL測定値または小粒子LDL／LDL比または小粒子LDL／HDL比が、動脈硬化の重症度を判断するための方法、および冠動脈疾患を起こしている被験者での心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントを起こす危険性を判断し、血行再建術等の治療の必要性を判断するための方法となることを示すものである。 As a result of comparison between groups by ANOVA analysis, as shown in FIG. 3, there was no significant difference between the VAP group and the Revasc group in the LDL cholesterol level (a) and the LDL particle size (b). On the other hand, in the small-particle LDL cholesterol level, significant differences were observed between the VAP group, the S-N group, the Revasc group, and the ACS group (c). In addition, in the small particle LDL cholesterol / LDL cholesterol ratio (d) between the VAP group, SN group and Revasc group, and in the small particle LDL cholesterol / HDL cholesterol ratio, the VAP group, SN group, Revasc group and ACS group A significant difference was observed between (e). This is because small particle LDL measurements or small particle LDL / LDL ratios or small particle LDL / HDL ratios are used to determine the severity of arteriosclerosis, as well as myocardial infarction in subjects with coronary artery disease, It shows that it is a method for judging the risk of causing cardiovascular events such as unstable angina and judging the necessity of treatment such as revascularization.
［実施例４］
血清を試料とし、本発明法に基づき小粒子LDL中コレステロールおよび小粒子LDL中蛋白質の測定を行った。被検試料として血清を用い、小粒子LDL中コレステロールの測定は実施例1と同様の方法を用いた。小粒子LDL中蛋白質の測定は、ポリアニオンと二価陽イオンからなる分離剤を用いてLDLを通常サイズのLDLと小粒子LDLに分離する工程と、分離後の小粒子LDL中アポ蛋白B-100を抗ヒトアポB-100抗体を用いて測定する工程からなる方法を用いた。結果を図４に示す。図４に示すように、小粒子LDL中コレステロールと小粒子LDL中蛋白質は良好な相関性を示す。従って、本発明は小粒子LDL中蛋白質を測定することによっても実施可能である。
[Example 4]
Using serum as a sample, cholesterol in small particle LDL and protein in small particle LDL were measured based on the method of the present invention. Serum was used as a test sample, and cholesterol in small particle LDL was measured using the same method as in Example 1. The measurement of protein in small particle LDL consists of separating LDL into normal size LDL and small particle LDL using a separating agent consisting of polyanion and divalent cation, and apoprotein B-100 in small particle LDL after separation. Was measured using an anti-human apo B-100 antibody. The results are shown in FIG. As shown in FIG. 4, the cholesterol in the small particle LDL and the protein in the small particle LDL show a good correlation. Therefore, the present invention can also be carried out by measuring the protein in the small particle LDL.
［実施例５］
血清を試料とし、本発明法に基づき小粒子LDL中コレステロールおよび小粒子LDL中中性脂肪の測定を行った。被検試料として血清を用い、小粒子LDL中コレステロールの測定は実施例1と同様の方法を用いた。小粒子LDL中中性脂肪の測定は、ポリアニオンと二価陽イオンからなる分離剤を用いてLDLを通常サイズのLDLと小粒子LDLに分離する工程と、分離後の小粒子LDL中中性脂肪を測定する工程からなる方法を用いた。結果を図５に示す。図５に示すように、小粒子LDL中コレステロールと小粒子LDL中中性脂肪は良好な相関性を示す。従って、本発明は小粒子LDL中中性脂肪を測定することによっても実施可能である。
[Example 5]
Using serum as a sample, cholesterol in small particle LDL and neutral fat in small particle LDL were measured based on the method of the present invention. Serum was used as a test sample, and cholesterol in small particle LDL was measured using the same method as in Example 1. Small particle LDL neutral fat is measured by separating LDL into normal size LDL and small particle LDL using a separating agent consisting of polyanion and divalent cation, and small particle LDL neutral fat after separation. A method comprising a step of measuring The results are shown in FIG. As shown in FIG. 5, the cholesterol in the small particle LDL and the neutral fat in the small particle LDL show a good correlation. Therefore, the present invention can also be implemented by measuring small particle LDL neutral fat.
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