JP4587903B2 - Measuring instrument, measuring kit using the same, measuring method and measuring apparatus - Google Patents

Measuring instrument, measuring kit using the same, measuring method and measuring apparatus Download PDF

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本発明は、生体、食品、土壌等の分析対象試料に含有される測定対象物を測定するための測定器具に係り、特に、試料中の測定対象物が流路に沿って移動可能なフローセル型反応容器を含む測定器具及びこれを用いた測定用キット、測定方法並びに測定装置の改良に関する。   The present invention relates to a measuring instrument for measuring a measurement object contained in a sample to be analyzed such as a living body, food, and soil, and in particular, a flow cell type in which the measurement object in a sample can move along a flow path. The present invention relates to an improvement of a measuring instrument including a reaction vessel, a measuring kit using the measuring instrument, a measuring method, and a measuring apparatus.

水晶振動子等の圧電振動子を用いる定量分析および定性分析が知られている。本方法は、抗原−抗体間の相互作用や相補的核酸間の相互作用を利用して水晶振動子上に複合体を生成させ、複合体生成に伴う質量変化を水晶振動子の振動数の変化として捉える方法である。これまでも、例えば水晶振動子上に固定化したプロテインAを用いて試料中のIgGを検出する方法(例えば、非特許文献1を参照)や、水晶振動子上に固定化したプローブDNAを用いて試料中の標的核酸を検出する方法(例えば、特許文献1を参照)等が報告されている。
また、流動状態における細胞接着、血液凝固などの生体反応を簡便に測定するための水晶振動子センサーを固定化したフローセルが知られている(例えば、特許文献2を参照)。
更に、フローセル以外における免疫測定法において、標識物質として磁性粒子を用い、水晶振動子上に固定された磁性粒子量を水晶振動子の発振周波数の変化を測定することにより定量する方法も知られている(例えば、特許文献3を参照)。
更にまた、圧電振動子を検出部位に組み込んだイムノクロマトグラフィー用測定器具も報告されている(例えば、特許文献4を参照)。この特許文献4には、フローセルにおける免疫測定法において、標識物質として不溶性担体を用い、圧電振動子としての水晶振動子上に固定化された不溶性担体量を水晶振動子の発振周波数の変化を測定することにより定量する方法が開示されている。
しかしながら、これらの水晶振動子の発振周波数の変化を測定する免疫測定法は、微量の抗原または抗体を測定する場合に検出感度が充分でないという技術的課題を有していた。従って、従来の水晶振動子を用いた免疫測定法は、非特許文献1、特許文献1に示すように、その適用範囲が蛋白質等の高分子に限られていた。
例えば特許文献2に示すフローセル型にあっては、水晶振動子センサーの表面近傍を流れてきたアナライト分子のみ検出するため、フローセル型反応容器の場合、殆どの試料中のアナライト分子はセンサー膜上のリガンド分子と反応できないまま水晶振動子表面上を通過してしまい、溶液中のアナライト分子の一部しか検出出来ず、センサー本来の感度が発揮できずに検出感度が充分に得られないという懸念がある。
更に、特許文献3に示すフローセル型以外における免疫測定法において、標識物質として磁性粒子を用いる方式を採用したとしても、反応効率の点で未だ不十分であり、センサー本来の感度が得られないという懸念がある。
更にまた、特許文献4に示すフローセルにおける免疫測定法において、標識物質として不溶性担体を用いたとしても、反応効率の点で未だ不十分であり、センサー本来の感度が得られないという懸念がある。
近年、検査方法の迅速化、多様化または環境分野、食品分野の検査の流れから、被検者の近傍での試料の採取から測定結果の出力を行うポイント オブ ケア テスティング(POCT)が盛んになってきており、POCTに対応可能な簡便で高感度な測定器具及びこれを用いた測定用キット、測定方法並びに測定装置の開発が望まれている。
Quantitative analysis and qualitative analysis using a piezoelectric vibrator such as a quartz vibrator are known. In this method, a complex is generated on a quartz resonator using the interaction between antigen and antibody and the interaction between complementary nucleic acids, and the mass change associated with the complex formation is changed by the change in the frequency of the quartz resonator. It is a method to grasp as. Until now, for example, a method of detecting IgG in a sample using protein A immobilized on a crystal resonator (see, for example, Non-Patent Document 1) or a probe DNA immobilized on a crystal resonator has been used. A method for detecting a target nucleic acid in a sample (see, for example, Patent Document 1) has been reported.
In addition, a flow cell is known in which a quartz vibrator sensor for simply measuring biological reactions such as cell adhesion and blood coagulation in a fluid state is fixed (see, for example, Patent Document 2).
Furthermore, in immunoassay methods other than flow cells, a method is known in which magnetic particles are used as a labeling substance, and the amount of magnetic particles fixed on the crystal resonator is quantified by measuring changes in the oscillation frequency of the crystal resonator. (For example, see Patent Document 3).
Furthermore, a measurement instrument for immunochromatography in which a piezoelectric vibrator is incorporated in a detection site has also been reported (see, for example, Patent Document 4). In this patent document 4, in an immunoassay method in a flow cell, an insoluble carrier is used as a labeling substance, and the amount of insoluble carrier immobilized on a quartz vibrator as a piezoelectric vibrator is measured for a change in the oscillation frequency of the quartz vibrator. A method of quantifying by doing so is disclosed.
However, the immunoassay method for measuring the change in the oscillation frequency of these crystal resonators has a technical problem that the detection sensitivity is not sufficient when measuring a very small amount of antigen or antibody. Therefore, as shown in Non-Patent Document 1 and Patent Document 1, the application range of conventional immunoassay methods using a crystal resonator has been limited to polymers such as proteins.
For example, in the flow cell type shown in Patent Document 2, only the analyte molecules flowing near the surface of the crystal resonator sensor are detected. Therefore, in the case of a flow cell type reaction vessel, the analyte molecules in most samples are sensor membranes. It passes over the surface of the crystal unit without reacting with the above ligand molecules, and only a part of the analyte molecules in the solution can be detected, and the sensitivity inherent to the sensor cannot be exhibited, so that sufficient detection sensitivity cannot be obtained. There is a concern.
Furthermore, in the immunoassay method other than the flow cell type shown in Patent Document 3, even if a method using magnetic particles as a labeling substance is adopted, it is still insufficient in terms of reaction efficiency, and the original sensitivity of the sensor cannot be obtained. There are concerns.
Furthermore, in the immunoassay method in the flow cell shown in Patent Document 4, even if an insoluble carrier is used as a labeling substance, there is a concern that the reaction efficiency is still insufficient and the sensor's original sensitivity cannot be obtained.
In recent years, point-of-care testing (POCT), in which sample results are collected in the vicinity of a subject and output of measurement results, has become popular due to the rapid and diversified inspection methods and the flow of inspections in the environmental and food fields. Therefore, it is desired to develop a simple and highly sensitive measuring instrument that can handle POCT, a measuring kit, a measuring method, and a measuring apparatus using the measuring instrument.

「アナリティカル・ケミストリー(Analytical Chemistry)」,アメリカ化学会,1987年,第59巻,第23号,2760−2763頁“Analytical Chemistry”, American Chemical Society, 1987, Vol. 59, No. 23, pages 2760-2766 特開平1−35269号公報JP-A-1-35269 特開平8-75628号公報JP-A-8-75628 特開平7−225233号公報JP 7-225233 A 国際公開第2005/015217号公報International Publication No. 2005/015217

本発明は、以上の技術的課題を解決するためになされたものであって、フローセル型反応容器内において、試料に含まれる測定対象物を高感度で正確に測定可能な測定器具及びこれを用いた測定用キット、測定方法並びに測定装置を提供することにある。   The present invention has been made to solve the above technical problem, and uses a measuring instrument capable of measuring a measurement target contained in a sample with high sensitivity and accuracy in a flow cell type reaction vessel. Another object of the present invention is to provide a measuring kit, a measuring method, and a measuring apparatus.

すなわち、本発明は以下の(1)〜(20)に関する。
(1) 本発明は、試料中の測定対象物及び測定対象物類似物と磁性粒子とが結合してなる標識体が流路に沿って移動可能なフローセル型反応容器を含む測定器具であって、フローセル型反応容器の流路には、試料が添加される試料添加部位と、この試料添加部位の下流側に設けられて測定対象物が検出可能な検出部位とを設け、検出部位は、測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するトラッパーが保持された圧電振動子を有し、磁力発生部材による磁場作用域に前記圧電振動子を配置したものである。
(2) そして、前記(1)記載の測定器具において、フローセル型反応容器の流路のうち少なくとも検出部位の上流側には測定対象物類似物と磁性粒子とが結合してなる標識体が供給される標識体供給部位を備えることが好ましい。
That is, the present invention relates to the following (1) to (20).
(1) The present invention is a measuring instrument including a flow cell type reaction vessel in which a measurement object in a sample and a label formed by combining a measurement object analog and magnetic particles can move along a flow path. The flow cell type reaction container has a sample addition site to which a sample is added and a detection site that is provided downstream of the sample addition site and is capable of detecting the measurement object. It has a piezoelectric vibrator holding a trapper that specifically binds to a measurement object and a measurement object analogue, and the piezoelectric vibrator is arranged in a magnetic field action region by a magnetic force generation member.
(2) Then, in the (1) Measurement device according to the upstream side of at least the detection region of the flow path of a flow cell-type reaction vessel, marked body and the measuring object like magnetic particles formed by bonding the It is preferable to provide a label supply part to be supplied.

(3) また、本発明の別の態様は、試料中の測定対象物並びに、測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するバインダーと磁性粒子とが結合してなる標識体が流路に沿って移動可能なフローセル型反応容器を含む測定器具であって、フローセル型反応容器の流路には、試料が添加される試料添加部位と、この試料添加部位の下流側に設けられて測定対象物が検出可能な検出部位とを設け、検出部位は、測定対象物類似物が保持された圧電振動子を有し、磁力発生部材による磁場作用域に前記圧電振動子を配置したものである。
(4) そして、前記記載の測定器具において、フローセル型反応容器の流路のうち少なくとも検出部位の上流側には、測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するバインダーと磁性粒子とが結合してなる標識体が供給される標識体供給部位を備えることが好ましい。
(3) Further, another aspect of the present invention, the measuring object in the sample as well as labels for the binder and magnetic particles to specifically bind to the measurement object and the measurement object analogs formed by bonding the flow A measuring instrument including a flow cell type reaction vessel movable along a path, wherein a flow cell of the flow cell type reaction vessel is provided with a sample addition site to which a sample is added and a downstream side of the sample addition site. A detection part capable of detecting the measurement object, and the detection part has a piezoelectric vibrator holding the measurement object analogue, and the piezoelectric vibrator is arranged in a magnetic field action region by a magnetic force generation member. is there.
(4) In the measurement instrument described above, at least upstream of the detection site in the flow cell of the flow cell type reaction vessel, a binder and magnetic particles that specifically bind to the measurement object and the measurement object analog It is preferable to provide a labeled body supply site to which a labeled body formed by binding is supplied.

(5) 更に、(2)又は(4)記載の測定器具においては、標識体供給部位はフローセル型反応容器の流路のうち試料添加部位の下流側に設けられるものであってもよい。
(6) そして(2)又は(4)記載の測定器具においては、標識体供給部位は試料添加部位を兼ねるものであってもよい。
(7) 更にまた、(1)乃至(6)いずれかに記載の測定器具においては、フローセル型反応容器の流路のうち検出部位の下流側には、吸収部位を備えるものであってもよい。
(8) そしてまた、(1)乃至(7)いずれかに記載の測定器具において、圧電振動子が水晶振動子である態様がある。
(9) また、(1)乃至(8)記載の測定器具において、磁力発生部材はフローセル型反応容器の流路外で、且つ、磁力発生部材は圧電振動子のトラッパー又は測定対象物類似物が保持された面とは反対側に設けられる態様がある。
(5) Furthermore, in the measuring instrument according to (2) or (4), the label supply site may be provided downstream of the sample addition site in the flow cell of the flow cell type reaction container.
(6) In the measuring instrument described in (2) or (4), the labeled body supply site may also serve as the sample addition site.
(7) Furthermore, in the measuring instrument according to any one of (1) to (6), an absorption site may be provided on the downstream side of the detection site in the flow path of the flow cell type reaction container. .
(8) In addition, in the measuring instrument according to any one of (1) to (7), there is an aspect in which the piezoelectric vibrator is a quartz crystal vibrator.
(9) Further, in the measuring instrument according to any one of (1) to (8), the magnetic force generating member is outside the flow path of the flow cell type reaction vessel, and the magnetic force generating member is a trapper of a piezoelectric vibrator or a similar object to be measured. There exists an aspect provided in the opposite side to the surface hold | maintained.

(10) 更に、(1)乃至(9)いずれかに記載の測定器具において、フローセル型反応容器は複数の流路を備えることがある。
(11) 更にまた、(1)乃至(9)いずれかに記載の測定器具において、フローセル型反応容器の流路に予め標識体が移動可能に保持されていることがある。
(12) また、本発明は、(1)乃至(10)いずれかに記載の測定器具及び標識体を含む測定用キットをも対象とする。
(10) Furthermore, in the measuring instrument according to any one of (1) to (9), the flow cell type reaction container may include a plurality of flow paths.
(11) Furthermore, in the measuring instrument according to any one of (1) to (9), the marker may be held in advance in the flow path of the flow cell type reaction container.
(12) Moreover, this invention also makes object the measurement kit containing the measuring instrument and marker in any one of (1) thru | or (10).

(13) また、本発明は、これらの測定器具、測定用キットに限られず、測定方法をも対象とする。
つまり、本発明に係る測定方法は、試料中の測定対象物と測定対象物類似物と磁性粒子とが結合してなる標識体とをフローセル型反応容器の流路に沿って移動させ、該流路下流の磁力発生部材による磁場作用域に配置されている圧電振動子上に保持されている測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するトラッパーに供給し、トラッパー−標識体からなる複合体を生成させる工程と、圧電振動子上に生成したトラッパー−標識体からなる複合体の量を、圧電振動子に磁場を発生させた状態で圧電振動子の振動数の変化量として測定する振動数測定工程と、この振動数測定工程で測定した圧電振動子の振動数の変化量と予め既知濃度の試料を用いて作成した検量線とから試料中の測定対象物の濃度を決定する濃度決定工程とを備えたものである。
(13) Further, the present invention is not limited to these measuring instruments and measuring kits, but also covers measuring methods.
That is, the measurement method according to the present invention moves the measurement object in the sample and the label formed by binding the measurement object analogue and the magnetic particles along the flow path of the flow cell type reaction vessel, Supplied to the trapper that specifically binds to the measurement object and the measurement object analog held on the piezoelectric vibrator arranged in the magnetic field action region by the magnetic force generation member downstream of the flow path, and from the trapper-labeling body And the amount of the trapper-marker composite produced on the piezoelectric vibrator is measured as the amount of change in the vibration frequency of the piezoelectric vibrator while the magnetic field is generated in the piezoelectric vibrator. The concentration of the measurement object in the sample is determined from the frequency measurement step to be performed, the amount of change in the vibration frequency of the piezoelectric vibrator measured in the frequency measurement step, and a calibration curve prepared in advance using a sample of a known concentration. Concentration determination process It is intended.

(14) また、本発明に係る別の測定方法は、試料中の測定対象物と、測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するバインダーと磁性粒子とが結合してなる標識体とをフローセル型反応容器の流路に沿って移動させ、該流路下流の磁力発生部材による磁場作用域に配置されている圧電振動子上に保持されている測定対象物類似物に供給し、測定対象物類似体−標識体からなる複合体を生成させる工程と、圧電振動子上に生成した測定対象物類似物−標識体からなる複合体の量を、圧電振動子に磁場を発生させた状態で圧電振動子の振動数の変化量として測定する振動数測定工程と、この振動数測定工程で測定した圧電振動子の振動数の変化量と予め既知濃度の試料を用いて作成した検量線とから試料中の測定対象物の濃度を決定する濃度決定工程とを備えたものである。 (14) In addition, another measurement method according to the present invention includes a label formed by binding a measurement object in a sample, a binder that specifically binds to the measurement object and the measurement object analog, and magnetic particles. Are moved along the flow path of the flow cell type reaction vessel, and supplied to the measurement object analogue held on the piezoelectric vibrator arranged in the magnetic field action region by the magnetic force generation member downstream of the flow path, The step of generating a complex consisting of the measurement object analog-labeled body and the amount of the complex consisting of the measurement object analog-labeled body generated on the piezoelectric vibrator generated a magnetic field in the piezoelectric vibrator. Frequency measurement process for measuring the change in the vibration frequency of the piezoelectric vibrator in the state, and a calibration curve prepared using a sample having a known concentration in advance and the change in the vibration frequency of the piezoelectric vibrator measured in the vibration measurement process. Determine the concentration of the measurement object in the sample from A concentration determining step.

(15) (13)又は(14)記載の測定方法において、複合体を生成させる工程と振動数測定工程との間にさらに複合体を洗浄する工程を含むようにしてもよい。
(16) また、(13)又は(14)記載の測定方法において、試料と標識体とをフローセル型反応容器の流路に沿って移動させ、該流路下流に配置されている圧電振動子上に保持されているトラッパー又は測定対象物類似物に供給するに際して、試料と標識体とを同時又は前後して順に流路に添加するようにしてもよい。
(17) 更に、(13)乃至(15)のいずれかに記載の測定方法において、標識体がフローセル型反応容器の流路に予め保持されており、試料の添加により共に移動するようにしてもよい。
(18) 更にまた、(13)乃至(17)のいずれかに記載の測定方法において、圧電振動子が水晶振動子であってもよい。
(15) The measurement method according to (13) or (14) may further include a step of washing the complex between the step of generating the complex and the frequency measurement step.
(16) Further, in the measurement method according to (13) or (14), the sample and the label are moved along the flow path of the flow cell type reaction vessel, and the piezoelectric vibrator arranged on the downstream side of the flow path The sample and the label may be added to the flow path at the same time or before and after the sample is supplied to the trapper or the measurement object analog held on the substrate.
(17) Further, in the measurement method according to any one of (13) to (15), the labeled body is held in advance in the flow path of the flow cell type reaction vessel, and may be moved together by the addition of the sample. Good.
(18) Furthermore, in the measurement method according to any one of (13) to (17), the piezoelectric vibrator may be a quartz crystal vibrator.

(19) また、本発明は、(1)乃至(11)いずれかに記載の測定器具又は(12)記載の測定用キットと、この測定器具の圧電振動子の振動数を測定する振動数測定手段とを備えた測定装置をも対象とする。
(20) そして、(19)記載の測定装置において、更に振動数測定手段で測定した圧電振動子の振動数の変化量と予め作成した検量線とから試料中の測定対象物の濃度を決定する濃度決定手段を備えるようにしてもよい。
(19) Further, the present invention provides a frequency measurement for measuring the frequency of the measurement instrument according to any one of (1) to (11) or the measurement kit according to (12) and the piezoelectric vibrator of the measurement instrument. And a measuring device provided with means.
(20) Then, in the measuring apparatus according to (19), the concentration of the measurement object in the sample is determined from the amount of change in the vibration frequency of the piezoelectric vibrator measured by the vibration frequency measuring means and a calibration curve prepared in advance. You may make it provide a density | concentration determination means.

本発明に係る測定器具によれば、フローセル型反応容器の流路に試料添加部位と検出部位とを設け、この検出部位の構造として、測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するトラッパー又は測定対象物と競合的に反応する測定対象物類似物が保持された圧電振動子を具備させ、磁力発生部材による磁場作用域に前記圧電振動子を配置するようにしたので、例えば試料中に磁性粒子を含む標識体を供給するようにすれば、圧電振動子表面に標識体を磁気的に引き寄せ、もって、トラッパーへの測定対象物の捕獲、又は測定対象物への標識体の捕獲又は測定対象物類似物と標識体との反応を促すことが可能になり、その分、測定対象物の測定感度を直接的又は間接的に向上させることができる。
また、本発明に係る測定器具及び標識体を含めて測定用キットとすれば、測定対象物の測定を極めて簡単に行うことができる。
更に、本発明に係る測定方法及びその装置によれば、フローセル型反応容器にて測定対象物の測定感度を向上させることが可能になるため、その分、測定データの信頼性をより高めることができる。
According to the measuring instrument of the present invention, the sample addition site and the detection site are provided in the flow path of the flow cell type reaction vessel, and the structure of this detection site specifically binds to the measurement object and the measurement object analog. A piezoelectric vibrator holding a measurement object analog that competitively reacts with a trapper or a measurement object is provided, and the piezoelectric vibrator is disposed in a magnetic field action region by a magnetic force generation member. If a label containing magnetic particles is supplied to the surface of the piezoelectric vibrator, the label is magnetically attracted to the surface of the piezoelectric vibrator, so that the measurement object can be captured on the trapper, or the label can be captured on the measurement object. It becomes possible to promote the reaction between the measurement object analog and the label, and the measurement sensitivity of the measurement object can be improved directly or indirectly.
Moreover, if it is set as the measurement kit including the measuring instrument and the label | marker body which concern on this invention, a measurement object can be measured very easily.
Furthermore, according to the measurement method and the apparatus thereof according to the present invention, it becomes possible to improve the measurement sensitivity of the measurement object in the flow cell type reaction vessel, and accordingly, the reliability of the measurement data can be further increased. it can.

<本発明の実施の形態の概要説明>
本発明に係る測定器具の代表的態様は、図1(a)(b)に示すように、試料中の測定対象物及び所定の標識体(具体的には測定対象物類似物と磁性粒子とが結合してなる標識体)が流路3に沿って移動可能なフローセル型反応容器2を含む測定器具1であって、フローセル型反応容器2の流路3には、試料が添加される試料添加部位4と、この試料添加部位4の下流側に設けられて測定対象物が検出可能な検出部位5とを設け、検出部位5としては、測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するトラッパーが保持された圧電振動子6を有し、磁力発生部材7による磁場作用域に前記圧電振動子6を配置したものであることを特徴とする。
<Overview of the embodiment of the present invention>
As shown in FIGS. 1 (a) and 1 (b), a typical embodiment of a measuring instrument according to the present invention is a measuring object and a predetermined label (specifically, a measuring object analog and magnetic particles in a sample). Is a measuring instrument 1 including a flow cell type reaction vessel 2 that can move along the flow channel 3, and a sample is added to the flow channel 3 of the flow cell type reaction vessel 2. A sample addition site 4 and a detection site 5 provided downstream of the sample addition site 4 and capable of detecting the measurement object are provided. The detection site 5 is specific to the measurement object and the measurement object analog. And a piezoelectric vibrator 6 holding a trapper that is coupled to the magnetic field generating member 7, and the piezoelectric vibrator 6 is disposed in a magnetic field acting region by a magnetic force generating member 7.

また、本発明に係る測定器具の他の代表的態様は、図1(a)(b)に示すように、試料中の測定対象物及び所定の標識体(具体的には測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するバインダーと磁性粒子とが結合してなる標識体)が流路3に沿って移動可能なフローセル型反応容器2を含む測定器具1であって、フローセル型反応容器2の流路3には、試料が添加される試料添加部位4と、この試料添加部位4の下流側に設けられて測定対象物が検出可能な検出部位5とを設け、検出部位5としては、測定対象物類似物が保持された圧電振動子6を有し、磁力発生部材7による磁場作用域に前記圧電振動子6を配置したものであることを特徴とする。 Further, as shown in FIGS. 1 (a) and 1 (b), other representative embodiments of the measuring instrument according to the present invention include a measurement object and a predetermined label (specifically, the measurement object and measurement) in the sample. A measurement instrument 1 including a flow cell type reaction vessel 2 in which a binder formed by binding a binder that specifically binds to an object analog and magnetic particles is movable along a flow path 3, and comprising a flow cell type reaction The flow path 3 of the container 2 is provided with a sample addition site 4 to which a sample is added and a detection site 5 provided downstream of the sample addition site 4 and capable of detecting a measurement object. Has a piezoelectric vibrator 6 holding a similar object to be measured, and the piezoelectric vibrator 6 is arranged in a magnetic field acting region by a magnetic force generating member 7.

このような技術的手段において、本発明に係る測定器具1はフローセル型反応容器2を含む態様を前提とする。
また、前者の測定器具1は圧電振動子6に測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するトラッパー11(図3,図6参照)が保持されているのに対し、後者の測定器具1は圧電振動子6に測定対象物10と競合的に反応する測定対象物類似物13(図5参照)が保持されている。
そして、前者の測定器具1の好ましい態様としては、フローセル型反応容器2の流路3のうち少なくとも検出部位5の上流側には、図2(a)(b)及び図6に示すように、測定対象物類似物12cと磁性粒子12aとが結合してなる標識体12が試料中に供給される標識体供給部位8を備えることが好ましい。
尚、図3は、前者の測定器具1の参考態様を示すもので、フローセル型反応容器の流路3のうち少なくとも検出部位5の上流側にて、測定対象物10に特異的に結合するバインダー12bと磁性粒子12aとを結合してなる標識体12が試料中に供給するものである。
一方、後者の測定器具1の好ましい態様としては、図2(a)(b)及び図5に示すように、フローセル型反応容器2の流路3のうち少なくとも検出部位5の上流側には、測定対象物10に特異的に結合するバインダー12bを磁性粒子12aに結合した標識体12が試料中に供給される標識体供給部位8を備えることが好ましい。
In such technical means, the measuring instrument 1 according to the present invention is premised on an aspect including a flow cell type reaction vessel 2.
Further, the former measuring instrument 1 holds a trapper 11 (see FIGS . 3 and 6 ) that specifically binds to the measurement object and the measurement object analog to the piezoelectric vibrator 6, whereas the latter measurement. The instrument 1 holds a measurement object analog 13 (see FIG. 5) that reacts competitively with the measurement object 10 on the piezoelectric vibrator 6.
And as a preferable aspect of the former measuring instrument 1, as shown in FIG. 2 (a) (b) and FIG. 6 , at least upstream of the detection site 5 in the flow path 3 of the flow cell type reaction vessel 2, It is preferable to provide a labeled body supply portion 8 to which a labeled body 12 formed by binding the measurement object analog 12c and the magnetic particle 12a is supplied into the sample.
FIG. 3 shows a reference embodiment of the former measuring instrument 1, and is a binder that specifically binds to the measurement object 10 at least upstream of the detection site 5 in the flow path 3 of the flow cell type reaction vessel. A label 12 formed by combining 12b and magnetic particles 12a is supplied into the sample.
On the other hand, as a preferable aspect of the latter measuring instrument 1, as shown in FIGS. 2 (a), (b) and FIG. 5, at least upstream of the detection site 5 in the flow path 3 of the flow cell type reaction vessel 2, It is preferable to provide a labeled body supply portion 8 in which a labeled body 12 in which a binder 12b that specifically binds to the measurement object 10 is bound to the magnetic particle 12a is supplied into the sample.

この標識体供給部位8としては、標識体12を供給可能な部位であれば適宜選定して差し支えない。
更に、測定器具1の好ましい態様としては、フローセル型反応容器2の流路3のうち検出部位5の下流側には未反応成分が吸収可能な吸収部位9を備えることが好ましい。
また、圧電振動子6としては代表的には水晶振動子が挙げられる。
更に、磁力発生部材7としては、磁力を発生する部材を広く含むが、代表的には永久磁石、電磁石等の磁石が用いられる。
The label supply part 8 may be appropriately selected as long as the label 12 can be supplied.
Furthermore, as a preferable aspect of the measuring instrument 1, it is preferable to provide an absorption site 9 capable of absorbing unreacted components on the downstream side of the detection site 5 in the flow path 3 of the flow cell type reaction vessel 2.
A typical example of the piezoelectric vibrator 6 is a quartz crystal vibrator.
Furthermore, the magnetic force generating member 7 includes a wide range of members that generate magnetic force, but typically, a magnet such as a permanent magnet or an electromagnet is used.

<要素説明>
次に、本実施の形態で用いられる各要素の概念について説明する。
試料
本実施の形態において使用できる試料には特に制限はないが、例えば全血、血漿、血清、髄液、唾液、羊水、尿、汗、膵液、涙等の生体試料が挙げられる。また、これらの試料あるいは、便、食品、土壌由来のものに水性媒体を添加して希釈したり、濃縮したり、抽出したものも試料として使用することができる。
<Element description>
Next, the concept of each element used in the present embodiment will be described.
Sample The sample that can be used in the present embodiment is not particularly limited, and examples thereof include biological samples such as whole blood, plasma, serum, spinal fluid, saliva, amniotic fluid, urine, sweat, pancreatic juice, and tears. In addition, these samples or those derived from stool, food, or soil can be used as samples by diluting, concentrating, or extracting by adding an aqueous medium.

水性媒体
水性媒体としては、前述の試料や標識体を溶解するものであれば特に制限はないが、例えば脱イオン水、蒸留水、緩衝液等が挙げられるが、緩衝液が好ましい。緩衝液に用いる緩衝剤は緩衝能を有するものならば特に限定されないが、pH1〜11の例えば乳酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、フタル酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、トリエタノールアミン緩衝剤、ジエタノールアミン緩衝剤、リジン緩衝剤、バルビツール緩衝剤、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン緩衝剤、イミダゾール緩衝剤、リンゴ酸緩衝剤、シュウ酸緩衝剤、グリシン緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、グリシン緩衝剤、グッド緩衝剤等が挙げられる。グッド緩衝剤としては、例えば2−モルホリノエタンスルホン酸(MES)、ビス(2−ヒドロキシエチル)イミノトリス(ヒドロキシメチル)メタン(Bis−Tris)、N−(2−アセトアミド)イミノ二酢酸(ADA)、ピペラジン−N,N’−ビス(2−エタンスルホン酸)(PIPES)、N−(2−アセトアミド)−2−アミノエタンスルホン酸(ACES)、3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(MOPSO)、N,N−ビス(2−ヒドロキシエチル)−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、3−モルホリノプロパンスルホン酸(MOPS)、N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]−2−アミノエタンスルホン酸(TES)、2−[4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジニル]エタンスルホン酸(HEPES)、3−[N,N−ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(DIPSO)、N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]−2−ヒドロキシ−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPSO)、ピペラジン−N,N’−ビス(2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)(POPSO)、3−[4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジニル]−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(HEPPSO)、3−[4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジニル]プロパンスルホン酸[(H)EPPS]、N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]グリシン(Tricine)、N,N−ビス(2−ヒドロキシエチル)グリシン(Bicine)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、N−シクロヘキシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N−シクロヘキシル−3−アミノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(CAPSO)、N−シクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)等が挙げられる。緩衝液の濃度は測定に適した濃度であれば特に制限はされないが、0.001〜2.0mol/Lが好ましく、0.005〜1.0mol/Lがより好ましく、0.01〜0.1mol/Lが特に好ましい。
また、食品や土壌については、これらを前処理したものも試料として使用することができる。ここで、食品や土壌の前処理とは、例えば食品や土壌中の成分の適当な溶媒による抽出、化学的修飾等が挙げられる。溶媒としては例えば、前述の水性媒体、アセトリトリル、ヘキサン、メタノール、エタノール、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン等の有機溶媒等が挙げられる。
化学的修飾としては例えば、食品や土壌中の成分の化学試薬による構造変換等が挙げられる。
The aqueous medium is not particularly limited as long as it dissolves the above-described sample or label. Examples thereof include deionized water, distilled water, and a buffer solution, but a buffer solution is preferable. The buffer used for the buffer is not particularly limited as long as it has a buffering capacity, but has a pH of 1 to 11, for example, lactate buffer, citrate buffer, acetate buffer, succinate buffer, phthalate buffer, phosphate buffer. Agent, triethanolamine buffer, diethanolamine buffer, lysine buffer, barbitur buffer, tris (hydroxymethyl) aminomethane buffer, imidazole buffer, malic acid buffer, oxalic acid buffer, glycine buffer, boron An acid buffer, a carbonate buffer, a glycine buffer, a Good buffer, etc. are mentioned. Examples of the good buffer include 2-morpholinoethanesulfonic acid (MES), bis (2-hydroxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane (Bis-Tris), N- (2-acetamido) iminodiacetic acid (ADA), Piperazine-N, N′-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES), N- (2-acetamido) -2-aminoethanesulfonic acid (ACES), 3-morpholino-2-hydroxypropanesulfonic acid (MOPSO) N, N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES), 3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPS), N- [tris (hydroxymethyl) methyl] -2-aminoethanesulfonic acid (TES), 2- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES), 3 -[N, N-bis (2-hydroxyethyl) amino] -2-hydroxypropanesulfonic acid (DIPSO), N- [tris (hydroxymethyl) methyl] -2-hydroxy-3-aminopropanesulfonic acid (TAPSO) Piperazine-N, N′-bis (2-hydroxypropanesulfonic acid) (POPSO), 3- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] -2-hydroxypropanesulfonic acid (HEPPSO), 3- [4- (2-Hydroxyethyl) -1-piperazinyl] propanesulfonic acid [(H) EPPS], N- [Tris (hydroxymethyl) methyl] glycine (Tricine), N, N-bis (2-hydroxyethyl) Glycine (Bicine), N-tris (hydroxymethyl) methyl-3-aminopropanesulfonic acid (TAPS), N Cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid (CHES), N- cyclohexyl-3-amino-2-hydroxy propane sulfonic acid (CAPSO), and the like N- cyclohexyl-3-amino propane sulfonic acid (CAPS) and the like. The concentration of the buffer solution is not particularly limited as long as it is suitable for measurement, but is preferably 0.001 to 2.0 mol / L, more preferably 0.005 to 1.0 mol / L, and 0.01 to 0.00. 1 mol / L is particularly preferable.
Moreover, about foodstuffs and soil, what pre-processed these can also be used as a sample. Here, the pretreatment of food and soil includes, for example, extraction of ingredients in food and soil with an appropriate solvent, chemical modification, and the like. Examples of the solvent include the above-mentioned aqueous medium, organic solvents such as acetolitol, hexane, methanol, ethanol, dichloromethane, chloroform, and acetone.
Examples of the chemical modification include structural conversion of components in food and soil with chemical reagents.

測定対象物
本実施の形態における測定対象物としては、特定の物質と結合するもので有れば特に制限はなく、例えば抗原抗体反応を用いて測定される成分、酵素反応を用いて測定される成分、その他の特異的反応により測定される成分等が挙げられるが、抗原抗体反応を用いて測定される成分が好ましい。
抗原抗体反応により測定される成分としては例えば、IgG、IgM、IgA、IgE、アポ蛋白AI、アポ蛋白AII、アポ蛋白B、アポ蛋白E、リウマチファクター、D−ダイマー、酸化LDL、糖化LDL、グリコアルブミン、T3、T4、薬剤(抗テンカン剤等)、C−反応性蛋白(CRP)、サイトカイン類、α−フェトプロテイン(AFP)、癌胎児性抗原(CEA)、CA19−9、CA−125、PIVKA−II(Protein induced by vitamin K absence-II)、副甲状腺ホルモン(PTH)、ヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG)、甲状腺刺激ホルモン(TSH)、インスリン、C−ペプタイド、エストロゲン、抗GAD抗体、ペプシノーゲン、インフルエンザA型抗原、インフルエンザB型抗原、コロナウイルス抗原、HBV抗原、抗HBV抗体、HCV抗原、抗HCV抗体、HTLV−I抗原、抗HTLV−I抗体、HIV抗体、結核抗体、マイコプラズマ抗体、ヘモグロビンA1c、心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)、脳性ナトリウム利尿ペプチド(BNP)、トロポニンT、トロポニンI、クレアチニンキナーゼ−MB(CK−MB)、ミオグロビン、H−FABP(ヒト心臓由来脂肪酸結合蛋白)、DON、NIV、T2等のカビ毒類、ビスフェノールA、ノニルフェノール、フタル酸ジブチル、ポリ塩素化ビフェニル(PCB)類、ダイオキシン類、p,p’−ジクロロジフェニルトリクロロエタン、トリブチルスズ等の内分泌撹乱物質類、大腸菌等の菌類、卵、乳、小麦、そば、落花生等の食物アレルギー物質やコナヒョウダニやトヤヒョウダニ等のダニ類等のアレルギー物質、抗アレルギー物質抗体等が挙げられる。
酵素反応を用いて測定される生体成分としては例えば、グルコース、1,5−アンヒドログルシトール、ヘモグロビンA1c、グリコアルブミン、フコース、尿素、尿酸、アンモニア、クレアチニン、総コレステロール、遊離コレステロール、高密度リポタンパク中のコレステロール(HDL−C)、低密度リポタンパク中のコレステロール(LDL−C)、超低密度リポタンパク中のコレステロール(VLDL−C)、レムナント様リポタンパク中のコレステロール(RLP−C)、トリグリセライド、リン脂質、総蛋白、アルブミン、グロブリン、ビリルビン、胆汁酸、シアル酸、乳酸、ピルビン酸、遊離脂肪酸、セルロプラスミン、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)、クレアチンホスホキナーゼ(CPK)、ホスホキナーゼ(PK)、アミラーゼ、リパーゼ、コリンエステラーゼ、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼ、L−乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)、アルドラーゼ、アルカリフォスファターゼ、酸フォスファターゼ、N−アセチルグルコサミニダーゼ、グアナーゼ、モノアミンオキシダーゼ等が挙げられる。
その他の特異的結合により測定される成分としては、核酸、レクチン等を用いる方法があげられ、例えばras等のガン遺伝子、p53等のガン抑制遺伝子等をコードするDNAまたはRNA、ペプチド核酸、アプタマー、糖蛋白質等が挙げられる。
Object to be measured The object to be measured in this embodiment is not particularly limited as long as it binds to a specific substance. For example, it is measured using a component measured using an antigen-antibody reaction or an enzyme reaction. Although the component, the component measured by another specific reaction, etc. are mentioned, The component measured using an antigen antibody reaction is preferable.
Components measured by antigen-antibody reaction include, for example, IgG, IgM, IgA, IgE, apoprotein AI, apoprotein AII, apoprotein B, apoprotein E, rheumatoid factor, D-dimer, oxidized LDL, glycated LDL, glyco Albumin, T3, T4, drugs (such as anti-tencan drugs), C-reactive protein (CRP), cytokines, α-fetoprotein (AFP), carcinoembryonic antigen (CEA), CA19-9, CA-125, PIVKA -II (Protein induced by vitamin K absence-II), parathyroid hormone (PTH), human chorionic gonadotropin (hCG), thyroid stimulating hormone (TSH), insulin, C-peptide, estrogen, anti-GAD antibody, pepsinogen, influenza A type antigen, influenza B type antigen, coronavirus antigen, HBV antigen, anti-HBV antibody HCV antigen, anti-HCV antibody, HTLV-I antigen, anti-HTLV-I antibody, HIV antibody, tuberculosis antibody, mycoplasma antibody, hemoglobin A1c, atrial natriuretic peptide (ANP), brain natriuretic peptide (BNP), troponin T , Troponin I, creatinine kinase-MB (CK-MB), myoglobin, H-FABP (human heart-derived fatty acid binding protein), DON, NIV, T2 and other mold toxins, bisphenol A, nonylphenol, dibutyl phthalate, polychlorine Endocrine disruptors such as biphenyl (PCB), dioxins, p, p'-dichlorodiphenyltrichloroethane, tributyltin, fungi such as E. coli, food allergens such as eggs, milk, wheat, buckwheat, peanuts, Allergies such as ticks Quality, anti-allergic agent antibodies, and the like.
Examples of biological components measured using an enzyme reaction include glucose, 1,5-anhydroglucitol, hemoglobin A1c, glycoalbumin, fucose, urea, uric acid, ammonia, creatinine, total cholesterol, free cholesterol, high density Cholesterol in lipoprotein (HDL-C), cholesterol in low density lipoprotein (LDL-C), cholesterol in very low density lipoprotein (VLDL-C), cholesterol in remnant-like lipoprotein (RLP-C) , Triglyceride, phospholipid, total protein, albumin, globulin, bilirubin, bile acid, sialic acid, lactic acid, pyruvate, free fatty acid, ceruloplasmin, alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), creatine Phosphokinase (CPK), phosphokinase (PK), amylase, lipase, cholinesterase, γ-glutamyl transpeptidase, leucine aminopeptidase, L-lactate dehydrogenase (LDH), aldolase, alkaline phosphatase, acid phosphatase, N-acetylglucosaminidase, Examples include guanase and monoamine oxidase.
Examples of other components to be measured by specific binding include methods using nucleic acids, lectins and the like. For example, DNAs or RNAs encoding cancer genes such as ras, tumor suppressor genes such as p53, peptide nucleic acids, aptamers, Examples include glycoproteins.

フローセル型反応容器
フローセル型反応容器2としては、試料、標識体12が流れる流路3を有するものを広く含むものであり、イムノクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、マイクロ化学システム等に適用されている。イムノクロマトグラフィーにおいては、試料添加部位に添加された試料溶液は、毛細現象によりメンブレン中を移動し、検出部位で測定される。液体クロマトグラフィーにおいては、ポンプにより液体が流れるフローセル中に設置された試料添加部位に測定対象物を含んだ試料を注入し、検出部位で測定される。マイクロ化学システムは、ガラスやプラスチック等の基板上に微細加工技術を利用して微小な流路を加工し、半導体集積回路のように化学装置を集積化した分析化学センサーであるが、基板上に設置された試料添加部位に試料を添加すると、流路中を移動し、流路の末端に設置された検出部位にて測定される。
また、フローセル型反応容器2の材質としては、プラスチック、シリカ、セラミックス、ガラス、金属、グラファイト、樹脂、多孔質メンブレン等が挙げられる。
Flow cell type reaction vessel The flow cell type reaction vessel 2 widely includes those having a flow path 3 through which a sample and a labeled body 12 flow, and is applied to immunochromatography, liquid chromatography, microchemical systems, and the like. In immunochromatography, the sample solution added to the sample addition site moves through the membrane by capillary action and is measured at the detection site. In liquid chromatography, a sample containing a measurement object is injected into a sample addition site installed in a flow cell through which a liquid flows by a pump, and measurement is performed at a detection site. A micro chemical system is an analytical chemical sensor that integrates chemical devices such as semiconductor integrated circuits by processing minute flow paths on a substrate such as glass or plastic using micro processing technology. When a sample is added to the installed sample addition site, the sample moves in the channel and is measured at the detection site installed at the end of the channel.
Examples of the material of the flow cell type reaction vessel 2 include plastic, silica, ceramics, glass, metal, graphite, resin, and porous membrane.

流路
フローセル型反応容器2に設置される流路3としては、試料と共に測定対象物、標識体が吸着せずに流れ、少なくとも試料添加部位4と検出部位5とを形成可能としたものであればよく、材質としてはプラスチック、シリカ、セラミックス、ガラス、金属、グラファイト、多孔質メンブレン等が好ましい。また、流路径としては、好ましくは1nm〜10cm、より好ましくは100nm〜1cm、特に好ましくは1μm〜2mmである。
また、フローセル型反応容器2の流路3としては少なくとも一つあればよいが、測定範囲を拡大するという観点からすれば、複数ラインの流路3を備え、各ラインの流路3に試料添加部位4と検出部位5とを少なくとも設けるようにしてもよい。
The flow path 3 installed in the flow path flow cell type reaction vessel 2 should be capable of forming at least the sample addition site 4 and the detection site 5 by allowing the measurement object and the label to flow together with the sample without adsorbing. The material is preferably plastic, silica, ceramics, glass, metal, graphite, porous membrane or the like. The channel diameter is preferably 1 nm to 10 cm, more preferably 100 nm to 1 cm, and particularly preferably 1 μm to 2 mm.
In addition, at least one flow path 3 of the flow cell type reaction vessel 2 is sufficient, but from the viewpoint of expanding the measurement range, a plurality of flow paths 3 are provided, and a sample is added to the flow path 3 of each line. You may make it provide the site | part 4 and the detection site | part 5 at least.

試料添加部位
試料添加部位4は試料をフローセル型反応容器2に添加するための部位である。
この試料添加部位4の材質としては例えばガラス繊維、セルロース、ナイロン、架橋デキストラン、各種のクロマトグラフィー用紙、ニトロセルロース等が挙げられ、ニトロセルロースが好ましい。
標識体供給部位
標識体供給部位8は標識体12をフローセル型反応容器2に供給する部位である。
この標識体供給部位8の材質としては、試料添加部位4の材質と同一又は異なっていてもよく、例えばガラス繊維、セルロース、ナイロン、架橋デキストラン、各種のクロマトグラフィー用紙、ニトロセルロース等が挙げられ、ニトロセルロースが好ましい。
例えば標識体供給部位8として、フローセル型反応容器2の流路3に予め標識体12を移動可能に保持するように設置すれば、流路3の一部に標識体12を保持しておき、添加された試料と共に移動させることができる。
また、標識体供給部位8のレイアウトについては、フローセル型反応容器2の流路3のうち試料添加部位4の下流側に別個に設けてもよいし、あるいは、試料添加部位4を兼ねるようにしてもよい。
Sample addition site The sample addition site 4 is a site for adding a sample to the flow cell type reaction vessel 2.
Examples of the material of the sample addition site 4 include glass fiber, cellulose, nylon, cross-linked dextran, various chromatographic papers, nitrocellulose and the like, and nitrocellulose is preferable.
Label supply site The label supply site 8 is a site for supplying the label 12 to the flow cell type reaction vessel 2.
The material of the label supply part 8 may be the same as or different from the material of the sample addition part 4, and examples thereof include glass fiber, cellulose, nylon, crosslinked dextran, various chromatographic papers, and nitrocellulose. Nitrocellulose is preferred.
For example, if the label 12 is movably held in the flow path 3 of the flow cell type reaction vessel 2 as the label supply site 8, the label 12 is held in a part of the flow path 3, It can be moved with the added sample.
In addition, the layout of the label supply site 8 may be provided separately on the downstream side of the sample addition site 4 in the flow path 3 of the flow cell type reaction vessel 2 or may also serve as the sample addition site 4. Also good.

標識体
本実施の形態における標識体12は、磁性粒子12aとバインダー12bとが又は磁性粒子12aと測定対象物類似物12cとが結合して形成されるものである(図3,図6参照)。
−磁性粒子−
本実施の形態における磁性粒子は、フェライトやマグネタイト(磁鉄鉱、FeSO)を主成分とし、質量が大きく磁石に効率良く反応するものが好ましい。磁性粒子の粒子径としては、1〜100000nmが好ましく、10〜10000nmがより好ましく、100〜5000nmが特に好ましい。標識体として流路中に供給される磁性粒子の濃度としては、0.001%〜10%が好ましく、0.01%〜5%がより好ましく、0.1%〜1%が特に好ましい。磁性粒子表面には、牛血清アルブミン等の親水性蛋白質や、ポリエチレングリコール(PEG)やポリビニルピロリドン(PVA)等の高分子化合物をコーティングしてあるものが使用できる。
Label body The label body 12 in the present embodiment is formed by combining the magnetic particles 12a and the binder 12b or the magnetic particles 12a and the measurement object analogue 12c (see FIGS. 3 and 6). .
-Magnetic particles-
The magnetic particles in the present embodiment are preferably those having ferrite or magnetite (magnetite, Fe 3 SO 4 ) as a main component and having a large mass and reacting efficiently with a magnet. The particle diameter of the magnetic particles is preferably 1 to 100,000 nm, more preferably 10 to 10,000 nm, and particularly preferably 100 to 5000 nm. As a density | concentration of the magnetic particle supplied in a flow path as a labeling body, 0.001%-10% are preferable, 0.01%-5% are more preferable, 0.1%-1% are especially preferable. The surface of the magnetic particles may be coated with a hydrophilic protein such as bovine serum albumin or a polymer compound such as polyethylene glycol (PEG) or polyvinylpyrrolidone (PVA).

−バインダー−
本実施の形態におけるバインダーは、流路3中に移動可能な状態で存在し、磁性粒子と結合することができ、かつ、測定対象物に特異的に結合するものであれば特に制限はないが、例えば、抗体と該抗原に特異的に結合する抗体やアプタマー、糖類と該糖類に対するレクチン、DNAと該DNAに相補的なDNA等が挙げられ、それぞれ一方のものが使用できる。
−測定対象物類似物−
測定対象物類似物としては、バインダー又はトラッパー(後述)に対して、試料中の測定対象物と競合的に反応するものであれば特に制限はなく、例えば、測定対象物それ自体、バインダーまたはトラッパーに対する認識部位を含有する物質等が挙げられる。
-Binder-
The binder in the present embodiment is not particularly limited as long as it exists in a movable state in the flow path 3 and can bind to the magnetic particles and specifically bind to the measurement object. Examples thereof include antibodies and aptamers that specifically bind to an antibody and the antigen, saccharides and lectins for the saccharides, DNA and DNA complementary to the DNA, and one of them can be used.
-Analogue to be measured-
The measurement object analog is not particularly limited as long as it reacts competitively with the measurement object in the sample with respect to the binder or trapper (described later). For example, the measurement object itself, the binder or the trapper And a substance containing a recognition site for.

−磁性粒子とバインダーとの結合方法−
本実施の形態において、磁性粒子とバインダーとは物理的に結合してもよいが、化学的に結合してもよい。物理的結合としては、例えば物理吸着等の非共有結合が挙げられる。化学的結合としては、例えば共有結合が挙げられる。非共有結合としては、例えば静電的結合、水素結合、疎水結合、配位結合等が挙げられる。磁性粒子とバインダーとを共有結合により結合させて標識体を調製する方法としては、例えばグルタルアルデヒド等の2価性の架橋剤を用いて、架橋剤を介して標識物質とバインダーを結合させる方法が挙げられる。
−磁性粒子と測定対象物類似物との結合方法−
本実施の形態において、磁性粒子と測定対象物類似物とは物理的に結合してもよいが、化学的に結合してもよい。物理的結合、化学的結合としては、例えば前述の結合が挙げられる。標識物質と測定対象物類似物とを共有結合により結合させて標識体を調製する方法としては、例えば前述のグルタルアルデヒド等の2価性の架橋剤を用いる方法が挙げられる。
-Bonding method of magnetic particles and binder-
In the present embodiment, the magnetic particles and the binder may be physically bonded or chemically bonded. Examples of physical bonds include non-covalent bonds such as physical adsorption. Examples of the chemical bond include a covalent bond. Examples of non-covalent bonds include electrostatic bonds, hydrogen bonds, hydrophobic bonds, and coordinate bonds. As a method of preparing a label by covalently binding magnetic particles and a binder, for example, a method of binding a labeling substance and a binder via a crosslinking agent using a bivalent crosslinking agent such as glutaraldehyde is used. Can be mentioned.
-How to bond magnetic particles and measurement object analogues-
In the present embodiment, the magnetic particle and the measurement target object analogue may be physically coupled, but may be chemically coupled. Examples of the physical bond and the chemical bond include the aforementioned bonds. Examples of a method for preparing a labeled body by covalently bonding a labeling substance and a measurement object analogue include a method using a bivalent cross-linking agent such as the aforementioned glutaraldehyde.

検出部位
検出部位5としては、センサーである圧電振動子6を有するものであれば特に制限はなく、圧電振動子6としては水晶振動子が好ましい。
−圧電振動子(水晶振動子)−
この圧電振動子6は、圧電効果を有する結晶からなるものであれば特に制限はなく、結晶としては、例えば水晶、ロッシェル塩、電子石などの結晶、タンタル酸リチウム(LiTaO)、ニオブ酸リチウム(LiNbO)などの酸化物単結晶や、酸化亜鉛(ZnO)等が挙げられ、水晶が好ましい。
ここで、水晶振動子は例えば厚み滑り振動モードを有するATカット水晶振動子で、特に基本共振周波数が5〜50MHzで発振するものが好ましい。また、水晶振動子としては1つでも差し支えないが、複数用いるようにしても差し支えない。
The detection part detection part 5 is not particularly limited as long as it has a piezoelectric vibrator 6 that is a sensor, and the piezoelectric vibrator 6 is preferably a crystal vibrator.
−Piezoelectric vibrator (quartz crystal vibrator) −
The piezoelectric vibrator 6 is not particularly limited as long as it is made of a crystal having a piezoelectric effect. Examples of the crystal include crystals such as quartz, Rochelle salt, and electron stone, lithium tantalate (LiTaO 2 ), and lithium niobate. Examples include oxide single crystals such as (LiNbO 3 ), zinc oxide (ZnO), and the like, and quartz is preferable.
Here, the crystal resonator is, for example, an AT-cut crystal resonator having a thickness-shear vibration mode, and in particular, one that oscillates at a fundamental resonance frequency of 5 to 50 MHz is preferable. Further, although one crystal unit may be used, a plurality of crystal units may be used.

トラッパー
本実施の形態において、トラッパーは圧電振動子6上に固定的に保持され、かつ、測定対象物に特異的に結合するものであれば特に制限はない。例えば抗原と該抗原に特異的に結合する抗体やアプタマー、糖類と該糖類に対するレクチン、DNAと該DNAに相補的なDNA等が挙げられ、それぞれ一方のものが使用できる。
Trapper In the present embodiment, the trapper is not particularly limited as long as it is fixedly held on the piezoelectric vibrator 6 and specifically binds to the measurement object. For example, an antigen and an antibody or aptamer that specifically binds to the antigen, a saccharide and a lectin against the saccharide, a DNA and a DNA complementary to the DNA, and the like can be used.

トラッパー又は測定対象物類似物の圧電振動子上への固定化方法
圧電振動子6(例えば水晶振動子)上へトラッパー11又は測定対象物類似物13を固定化する方法としては、例えば物理的または化学的に結合する方法等が挙げられる。物理的結合としては、例えば物理吸着等の非共有結合が挙げられる。化学的結合としては、例えば共有結合が挙げられる。非共有結合としては、例えば静電的結合、水素結合、疎水結合、配位結合等が挙げられる。具体的には、水晶振動子上の金電極に、ジチオジプロピオン酸を作用させ金―硫黄結合を形成した後にカルボキシル基を活性化させるSAM(Self-Assembled Monolayer)―アミノカップリング法により、固定化物質を結合させることによって固定化する方法が好ましい。
A method for immobilizing the trapper or the measurement object analogue onto the piezoelectric vibrator As a method for immobilizing the trapper 11 or the measurement object analogue 13 onto the piezoelectric vibrator 6 (for example, a crystal vibrator), for example, physical or Examples include a chemical bonding method. Examples of physical bonds include non-covalent bonds such as physical adsorption. Examples of the chemical bond include a covalent bond. Examples of non-covalent bonds include electrostatic bonds, hydrogen bonds, hydrophobic bonds, and coordinate bonds. Specifically, the gold electrode on the quartz crystal is fixed by the SAM (Self-Assembled Monolayer) -amino coupling method, in which dithiodipropionic acid is allowed to act to form a gold-sulfur bond and then the carboxyl group is activated. A method of immobilizing by binding a chemical substance is preferred.

磁石
本実施の形態で使用する磁力発生部材7としては、圧電振動子6(例えば水晶振動子)表面に磁性粒子を含有する標識体を磁気的に引き寄せることができれば、永久磁石、電磁石など特に制限はないが、必要に応じて、磁場作用域を可逆的に生成し得る態様が好ましい。例えば永久磁石であれば磁石を取り外し自在にするほか、水晶振動子表面に対する磁石の位置を可変とすることで磁場作用域を変化させるようにすればよく、電磁石であれば励磁コイルへの通電をオンオフするようにすればよい。また、磁力発生部材7による磁場作用域の範囲としては、水晶振動子を含む検出部位付近の局所的な範囲であることが好ましい。
そして、この磁力発生部材7のレイアウトについては流路中でも差し支えないが、試料の流れを損なわないという観点からすれば、フローセル型反応容器2の流路3外に設けることが好ましい。
Magnets The magnetic force generating member 7 used in the present embodiment is not particularly limited as long as a marker containing magnetic particles can be magnetically attracted to the surface of the piezoelectric vibrator 6 (for example, a quartz vibrator). However, it is preferable that the magnetic field application region can be generated reversibly if necessary. For example, in the case of a permanent magnet, the magnet can be removed, and the magnetic field application range can be changed by changing the position of the magnet with respect to the surface of the crystal unit. What is necessary is just to make it turn on and off. In addition, the range of the magnetic field application region by the magnetic force generation member 7 is preferably a local range in the vicinity of the detection site including the crystal resonator.
The layout of the magnetic force generating member 7 may be provided in the flow path, but is preferably provided outside the flow path 3 of the flow cell type reaction vessel 2 from the viewpoint of not impairing the flow of the sample.

吸収部位
吸収部位9は、未反応の試料、標識体を吸収するためにフローセル型反応容器2に設けられる部位であり、試料添加部位4及び検出部位5の下流側に位置することが好ましい。
この吸収部位9は未反応成分(未反応の試料や標識体)を吸収可能な部位であればよく、検出部位5を通過した未反応成分を吸収処理することができ、その分、未反応成分による検出部位5への影響を低減することができる。
該吸収部位9としては、吸収性高分子化合物を使用することができる。この高分子化合物としては、例えばセルロース、グラスファイバー、コットン、ポリウレタン等が挙げられる。また、この吸収部位9はポンプなどによる強制排出手段を用いることもできる。
The absorption site absorption site 9 is a site provided in the flow cell type reaction vessel 2 to absorb the unreacted sample and label, and is preferably located downstream of the sample addition site 4 and the detection site 5.
The absorption site 9 only needs to be a site that can absorb unreacted components (unreacted sample or label), and can absorb the unreacted components that have passed through the detection site 5. The influence on the detection site 5 due to can be reduced.
As the absorption site 9, an absorptive polymer compound can be used. Examples of the polymer compound include cellulose, glass fiber, cotton, and polyurethane. In addition, the absorption part 9 can use a forced discharging means such as a pump.

洗浄液
洗浄液としては、圧電振動子6上で反応できなかった試料成分、標識体を洗い流せるものであれば特に制限はないが、水性媒体が好ましい。中でも、前述の水性媒体、特に緩衝液に界面活性剤を含有したものがより好ましい。緩衝液に用いる緩衝剤は緩衝能力を有するものであれば特に制限されず、例えば前述の緩衝剤等が挙げられる。界面活性剤は界面活性効果を有するものであれば特に制限されないが、例えば、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン性界面活性剤等があげられ、非イオン性界面活性剤が好ましい。非イオン性界面活性剤としては、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(Tween20)やポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル(TritonX-100)等が挙げられる。界面活性剤の濃度としては、特に制限はないが、0.001〜20%が好ましく、0.01〜10%がより好ましく、0.05〜1%が特に好ましい。
The cleaning liquid is not particularly limited as long as it can wash the sample component and the label that cannot react on the piezoelectric vibrator 6, but an aqueous medium is preferable. Among them, the above-mentioned aqueous medium, particularly a buffer solution containing a surfactant is more preferable. The buffer used for the buffer solution is not particularly limited as long as it has a buffering capacity, and examples thereof include the above-described buffers. The surfactant is not particularly limited as long as it has a surfactant effect, and examples thereof include a cationic surfactant, an anionic surfactant, an amphoteric surfactant, and a nonionic surfactant. Nonionic surfactants are preferred. Examples of the nonionic surfactant include polyoxyethylene sorbitan monolaurate (Tween 20) and polyoxyethylene octyl phenyl ether (Triton X-100). The concentration of the surfactant is not particularly limited, but is preferably 0.001 to 20%, more preferably 0.01 to 10%, and particularly preferably 0.05 to 1%.

フローセル型反応容器における温度制御
フローセル型反応容器2の反応液の温度を制御する方法としては、該フローセル型反応容器2の下面から全体を加温することで温度が制御できれば特に制限は無いが、例えばペルチェ素子を用いた温度制御が挙げられる。
Temperature control in the flow cell type reaction vessel The method for controlling the temperature of the reaction liquid in the flow cell type reaction vessel 2 is not particularly limited as long as the temperature can be controlled by heating the entire bottom surface of the flow cell type reaction vessel 2, For example, temperature control using a Peltier element can be mentioned.

<測定器具の動作原理>
このような測定器具1のうち、トラッパー11が保持された圧電振動子6を備えた態様にあっては、図4に示すように、トラッパー11と標識体12とで測定対象物10を挟むようなサンドイッチ反応の場合には、圧電振動子6上に固定化されるトラッパー11は、測定対象物10に結合し、測定対象物10及び標識体12が関与するサンドイッチ反応により、サンドイッチ型複合体(トラッパー−測定対象物−標識体)を生成する。
<Operation principle of measuring instrument>
Among such measuring instruments 1, in the aspect provided with the piezoelectric vibrator 6 holding the trapper 11, the measurement object 10 is sandwiched between the trapper 11 and the marker 12 as shown in FIG. 4. In the case of a sandwich reaction, the trapper 11 immobilized on the piezoelectric vibrator 6 is bonded to the measurement object 10, and a sandwich-type complex (by the sandwich reaction involving the measurement object 10 and the label 12) ( Trapper-measurement object-labeled body).

また、測定器具1のうち、測定対象物類似物13が保持された圧電振動子6を備えた態様にあっては、図5に示すように、圧電振動子6上に固定化される測定対象物類似物13が標識体12に対して測定対象物10と競合的に反応する場合には、圧電振動子6上には測定対象物類似物13−標識体12からなる複合体が形成される。
本態様においては、測定対象物類似物13は測定対象物10と競合的に反応するものであるから、測定対象物類似物13との間で反応が促進されれば、その分、試料中の測定対象物10が少ないことを意味し、その逆の反応傾向であれば、試料中の測定対象物10が多いことを意味する。
Moreover, in the aspect provided with the piezoelectric vibrator 6 in which the measurement object analogue 13 is held in the measuring instrument 1, as shown in FIG. 5, the measurement target fixed on the piezoelectric vibrator 6. When the object analog 13 competitively reacts with the measurement object 10 with respect to the label 12, a complex composed of the measurement object analog 13 -label 12 is formed on the piezoelectric vibrator 6. .
In this embodiment, since the measurement object analog 13 reacts competitively with the measurement object 10, if the reaction is promoted with the measurement object analog 13, the corresponding amount in the sample is increased. This means that there are few measurement objects 10, and if the reaction tendency is the opposite, it means that there are many measurement objects 10 in the sample.

尚、図6のように、圧電振動子6上に固定化されるトラッパー11に対して、測定対象物10と、測定対象物類似物12cと磁性粒子12aが結合してなる標識体12とが競合的に反応するような場合には、圧電振動子6上には、トラッパー―測定対象物からなる複合体及びトラッパー−標識体(測定対象物類似物を含有)からなる複合体が形成される。 As shown in FIG. 6, the measurement object 10 and the marker 12 formed by combining the measurement object analog 12 c and the magnetic particles 12 a are connected to the trapper 11 fixed on the piezoelectric vibrator 6. In the case of competitive reaction, a complex composed of a trapper-measurement object and a trapper-labeled object (including a measurement object analog) is formed on the piezoelectric vibrator 6. .

<測定器具を用いた測定方法>
次に、上述した測定器具1を用いて測定対象物を測定する測定方法について説明する。
先ず、トラッパー11が保持された圧電振動子6を備えた測定器具1を用いて試料中の測定対象物10を測定するには、図7(a)(b)に示すように、試料及び標識体12を流路3を通じて検出部位5に供給し、圧電振動子6上にトラッパー−測定対象物−標識体又はトラッパー−標識体からなる複合体を生成する生成工程と、この生成工程にて圧電振動子6上に生成した前記複合体の量を圧電振動子6の振動数の変化量として測定する振動数測定工程と、この振動数測定工程で測定した圧電振動子6の振動数の変化量と予め作成した検量線とから試料中の測定対象物10の濃度を決定する濃度決定工程とを備えるようにすればよい。
特に、検出部位5での複合体の量を正確に把握するには、供給工程と振動数測定工程との間に検出部位5の洗浄工程を含み、検出部位5での不要成分を除去することが好ましい。
ここでいう洗浄工程を効率的に行うには、洗浄液を流すという工程の前若しくは同時に、磁力発生部材7を外しあるいは消磁し、非特異的に圧電振動子6表面に結合した未反応の標識体を洗い流すことが好ましい。
<Measurement method using measuring instrument>
Next, the measuring method which measures a measuring object using the measuring instrument 1 mentioned above is demonstrated.
First, in order to measure the measuring object 10 in the sample using the measuring instrument 1 including the piezoelectric vibrator 6 holding the trapper 11, as shown in FIGS. The body 12 is supplied to the detection site 5 through the flow path 3 to generate a trapper-measurement object-labeled body or a trapper-labeled body complex on the piezoelectric vibrator 6; A frequency measurement step of measuring the amount of the composite produced on the vibrator 6 as a change amount of the vibration frequency of the piezoelectric vibrator 6, and a change amount of the vibration frequency of the piezoelectric vibrator 6 measured in the vibration measurement step. And a concentration determination step for determining the concentration of the measurement object 10 in the sample from the calibration curve prepared in advance.
In particular, in order to accurately grasp the amount of the complex at the detection site 5, a cleaning step for the detection site 5 is included between the supplying step and the frequency measurement step, and unnecessary components at the detection site 5 are removed. Is preferred.
In order to perform the cleaning step here efficiently, before or simultaneously with the step of flowing the cleaning solution, the magnetic force generating member 7 is removed or demagnetized, and the unreacted label body non-specifically bound to the surface of the piezoelectric vibrator 6 is used. It is preferable to wash away.

また、測定対象物類似物13が保持された圧電振動子6を備えた測定器具1を用いて試料中の測定対象物10を測定するには、図7(a)(b)に示すように、試料及び標識体12を流路3を通じて検出部位5に供給し、圧電振動子6上に測定対象物類似物−標識体からなる複合体を生成する生成工程と、この生成工程にて圧電振動子6上に生成した前記の量を圧電振動子6の振動数の変化量として測定する振動数測定工程と、この振動数測定工程で測定した圧電振動子の振動数の変化量と予め作成した検量線とから試料中の測定対象物の濃度を決定する濃度決定工程とを備えるようにすればよい。
尚、本態様においても、供給工程と振動数測定工程との間に検出部位5の洗浄工程を含むことが好ましい。
Further, in order to measure the measuring object 10 in the sample using the measuring instrument 1 including the piezoelectric vibrator 6 holding the measuring object analog 13, as shown in FIGS. The sample and the label 12 are supplied to the detection site 5 through the flow path 3 to generate a complex consisting of the measurement object analog-label on the piezoelectric vibrator 6, and the piezoelectric vibration in this generation process. A frequency measurement step for measuring the amount generated on the child 6 as a change amount of the vibration frequency of the piezoelectric vibrator 6 and a change amount of the vibration frequency of the piezoelectric vibrator measured in the vibration measurement step are prepared in advance. A concentration determination step for determining the concentration of the measurement object in the sample from the calibration curve may be provided.
In this embodiment as well, it is preferable to include a cleaning step for the detection site 5 between the supply step and the frequency measurement step.

更に、この種の測定方法のうち、標識体供給部位8が試料添加部位4を兼ねる態様においては、供給工程は、試料と標識体12とが試料添加部位4から同時又は前後して順に添加されるものであればよい。
また、この種の測定方法のうち、標識体供給部位8がフローセル型反応容器2の流路3に標識体12を予め移動可能に保持する態様においては、供給工程は、試料が試料添加部位4から添加され、標識体供給部位8に予め保持されている標識体12が試料と共に移動するものであればよい。
Furthermore, in this type of measurement method, in the embodiment in which the label supply site 8 also serves as the sample addition site 4, in the supply step, the sample and the label 12 are added sequentially from the sample addition site 4 or sequentially. Anything is acceptable.
In this type of measurement method, in a mode in which the labeled body supply site 8 holds the labeled body 12 in advance in the flow path 3 of the flow cell type reaction vessel 2, the supply step includes the sample addition site 4. In other words, the labeling body 12 that is added to the labeling body and held in advance in the labeling body supply site 8 may be moved together with the sample.

また、このような測定方法を具現化する測定装置の発明としては、図7(b)に示すように、試料及び標識体12を流路3を通じて検出部位5に供給する上述した測定器具1と、この測定器具1の検出部位5の圧電振動子6上に生成したトラッパー−測定対象物−標識体からなる複合体、トラッパー−標識体からなる複合体又は測定対象物類似物−標識体からなる複合体の量を圧電振動子6の振動数の変化量として測定する振動数測定手段15と、この振動数測定手段15で測定した圧電振動子6の振動数の変化量と予め作成した検量線とから試料中の測定対象物10の濃度を決定する濃度決定手段16とを備えたものが挙げられる。
このような測定装置においては、測定器具1と振動数測定手段15、濃度決定手段16とは別個に設けられてもよいし、測定器具1に、振動数測定手段15及び濃度決定手段16を組み込むことで一体的に設けるようにしてもよい。
Further, as an invention of a measuring apparatus that embodies such a measuring method, as shown in FIG. 7B, the measuring instrument 1 that supplies the sample and the label 12 to the detection site 5 through the flow path 3 , A trapper-measurement object-composite complex formed on the piezoelectric vibrator 6 at the detection site 5 of the measurement instrument 1, a trapper-label complex, or a measurement object analog-label object. Frequency measurement means 15 for measuring the amount of the complex as the change amount of the vibration frequency of the piezoelectric vibrator 6, and the change amount of the vibration frequency of the piezoelectric vibrator 6 measured by the vibration frequency measurement means 15 and a calibration curve prepared in advance. And a concentration determining means 16 for determining the concentration of the measurement object 10 in the sample.
In such a measuring apparatus, the measuring instrument 1, the frequency measuring means 15 and the concentration determining means 16 may be provided separately, or the frequency measuring means 15 and the concentration determining means 16 are incorporated in the measuring instrument 1. Thus, it may be provided integrally.

以下、添付図面に示す実施の形態に基づいて本発明をより詳細に説明する。
◎実施の形態1
図8は本発明が適用される測定装置の実施の形態1を示す説明図である。
同図において、測定装置は、試料中の測定対象物を測定するための測定器具20と、この測定器具20からのセンサー出力に基づいて解析処理する解析処理装置100とを備えている。
Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on embodiments shown in the accompanying drawings.
Embodiment 1
FIG. 8 is an explanatory view showing Embodiment 1 of the measuring apparatus to which the present invention is applied.
In the figure, the measurement apparatus includes a measurement instrument 20 for measuring a measurement object in a sample, and an analysis processing apparatus 100 that performs an analysis process based on a sensor output from the measurement instrument 20.

<測定器具の概要>
本実施の形態において、測定器具20は、図8及び図9に示すように、試料中の測定対象物が流路22に沿って移動可能なフローセル型反応容器21を有している。このフローセル型反応容器21はQCM(Quartz Crystal Microbalanceの略)センサー23のセンサー基板24を容器底部とし、このセンサー基板24上に所定隙間の流路22が確保されるようにカバー30で密封したものである。
そして、フローセル型反応容器21のカバー30のうち流路22の上流側に位置する部位には液体流入用開口31が開設されると共に、流路22の下流側に位置する部位には液体流出用開口32が開設されている。
本実施の形態では、一方の液体流入用開口31にはチューブ33を介して試料容器34が接続されて試料添加部位Aとして機能し、他方の液体流出用開口32にはチューブ35を介してシリンジポンプ36が接続されて吸収部位Dとして機能するようになっている。尚、本実施の形態では、試料添加部位Aから標識体が試料と同時若しくは試料添加後に供給されるようになっている。
<Outline of measuring instrument>
In the present embodiment, the measuring instrument 20 has a flow cell type reaction vessel 21 in which a measurement object in a sample can move along a flow path 22 as shown in FIGS. This flow cell type reaction vessel 21 has a sensor substrate 24 of a QCM (Quartz Crystal Microbalance) sensor 23 as the bottom of the vessel, and is sealed with a cover 30 so that a predetermined gap channel 22 is secured on the sensor substrate 24. It is.
A liquid inflow opening 31 is formed in a portion of the cover 30 of the flow cell type reaction vessel 21 located on the upstream side of the flow path 22, and a portion for liquid outflow is located on the downstream side of the flow path 22. An opening 32 is opened.
In the present embodiment, a sample container 34 is connected to one liquid inflow opening 31 via a tube 33 and functions as a sample addition site A, and the other liquid outflow opening 32 via a tube 35 is a syringe. A pump 36 is connected to function as the absorption site D. In the present embodiment, the label is supplied from the sample addition site A at the same time as the sample or after the sample is added.

更に、本実施の形態では、QCMセンサー23はセンサー基板24表面に水晶振動子25を実装したものであり、流路22のうちこの水晶振動子25の表面に対応した部位を検出部位Cとして機能するようにしたものである。
そして、この水晶振動子25の表面にはトラッパー又は測定対象物類似物が例えば固定的に保持されている。
更に、センサー基板24の裏面のうち水晶振動子25が実装された位置に例えば永久磁石からなる磁石40が設置されている。この磁石40は取り外し自在になっており、磁石40を設置したときには、磁石40による磁場作用域に水晶振動子25の表面部が配置されるように位置調整されている。
更にまた、本実施の形態では、センサー基板24は、例えばペルチェ素子52で一定温度に保たれた例えばアルミニウム製の恒温ブロック51上に設置されていて、温度変化による水晶振動子25の共振周波数変化を防止するように配慮されている。
Further, in the present embodiment, the QCM sensor 23 has a crystal resonator 25 mounted on the surface of the sensor substrate 24, and a portion of the flow path 22 corresponding to the surface of the crystal resonator 25 functions as a detection portion C. It is what you do.
A trapper or a measurement object analogue is fixedly held on the surface of the crystal unit 25, for example.
Further, a magnet 40 made of, for example, a permanent magnet is installed on the back surface of the sensor substrate 24 at a position where the crystal unit 25 is mounted. The magnet 40 is detachable. When the magnet 40 is installed, the position of the magnet 40 is adjusted so that the surface portion of the crystal unit 25 is disposed in the magnetic field application region of the magnet 40.
Furthermore, in the present embodiment, the sensor substrate 24 is installed on a constant temperature block 51 made of, for example, aluminum, which is maintained at a constant temperature by, for example, a Peltier element 52, and the resonance frequency change of the crystal resonator 25 due to temperature change. Care is taken to prevent this.

<解析処理装置の概要>
本実施の形態において、解析処理装置100は、水晶振動子25の共振特性を測定する振動数測定回路と、この振動数測定回路からの情報に基づいて試料中の測定対象物の濃度を演算する濃度演算回路とを備えていればよい。
本実施の形態では、振動数測定回路及び濃度演算回路としては、例えばネットワークアナライザ101を用いて水晶振動子25の共振特性を測定し、測定した共振特性のデータをパーソナルコンピュータ102に取り込んで演算により水晶振動子25の共振周波数を求め、さらに検量線を用いて共振周波数から濃度への計算を行う構成が挙げられる。尚、パーソナルコンピュータ102には濃度演算結果を表示する表示装置103が組み込まれていることが好ましい。
<Outline of analysis processing device>
In the present embodiment, the analysis processing apparatus 100 calculates the concentration of the measurement object in the sample based on the frequency measurement circuit that measures the resonance characteristics of the crystal unit 25 and the information from the frequency measurement circuit. What is necessary is just to provide the density | concentration calculation circuit.
In the present embodiment, as the frequency measurement circuit and the concentration calculation circuit, for example, the resonance characteristic of the crystal unit 25 is measured using the network analyzer 101, and the measured resonance characteristic data is taken into the personal computer 102 and calculated. There is a configuration in which the resonance frequency of the crystal unit 25 is obtained and the calculation from the resonance frequency to the concentration is performed using a calibration curve. The personal computer 102 preferably includes a display device 103 that displays the density calculation result.

<QMCセンサーの詳細>
−水晶振動子−
本実施の形態において、水晶振動子25は例えば厚み滑り振動モードを有するATカット水晶振動子で、特に基本共振周波数が5〜50MHzで発振するものが好ましい。また、水晶振動子25としては本実施の形態のように1つでも差し支えないが、複数用いるようにしても差し支えない。
更に、水晶振動子25の等価回路は、図10に示すように、インダクタンスLxと容量Cxと損失抵抗Rxの直列共振回路と、電極容量等による並列容量Cpとの並列接続で表せる。この時、水晶振動子のアドミッタンスYは、式1および式2で求めることが出来る。
Y=j・ω・Cp+1/(J・ω・Lx+1/(J・ω・Cx)+Rx) (式1)
ω=2・π・fo (式2)
ここで、Jは複素数√(−1)、ωは角周波数、foは共振周波数、πは円周率を表す。
<Details of QMC sensor>
-Crystal resonator-
In the present embodiment, the crystal resonator 25 is, for example, an AT-cut crystal resonator having a thickness-shear vibration mode, and is preferably one that oscillates at a fundamental resonance frequency of 5 to 50 MHz. Further, one crystal unit 25 may be used as in the present embodiment, but a plurality of crystal units 25 may be used.
Furthermore, as shown in FIG. 10, an equivalent circuit of the crystal unit 25 can be expressed by a parallel connection of a series resonance circuit of an inductance Lx, a capacitance Cx, and a loss resistance Rx, and a parallel capacitance Cp such as an electrode capacitance. At this time, the admittance Y of the crystal resonator can be obtained by Expression 1 and Expression 2.
Y = j · ω · Cp + 1 / (J · ω · Lx + 1 / (J · ω · Cx) + Rx) (Formula 1)
ω = 2 · π · fo (Formula 2)
Here, J is a complex number √ (−1), ω is an angular frequency, fo is a resonance frequency, and π is a circular ratio.

−センサー基板−
センサー基板24の構造としては適宜選定して差し支えないが、図11(a)(b)に一例を示す。
同図において、センサー基板24は例えばガラスエポキシ製の両面配線プリント基板61を用い、上面には、水晶振動子25の電極65、66と接続をするための2つの電極接続用ランドパターン62と、水晶振動子25の振動部分がプリント基板と接触しないようにするための台座用のコの字型パターン63とが配置されている。水晶振動子25は、電極接続用ランドパターン62の上に水晶振動子25の電極接続部が乗るように配置され、例えば導電性シリコーン樹脂で電気的な接続がなされている。さらに、水晶振動子25及びセンサー基板24間に試料溶液が染み込んで表電極65と裏電極66とがショートするのを防止するため、水晶振動子25の周囲は例えばシリコーン接着剤64で封止されている。電極接続用ランドパターン62からの配線67は、試料溶液によるショートを避ける為、スルーホールを通じて両面配線プリント基板61の下面に引き出され、接続端子68まで延びている。
更に、表電極65と裏電極66とは、図12(a)(b)に示すように、共に裏面で両面配線プリント基板61の電極接続用ランドパターン62に接続できるように接続部69aが設けられており、引き出し電極69で電気的に接続されている。表電極65は水晶振動子25の一側面を経由して裏面の接続部へと引き出し電極69で引き回されている。
-Sensor board-
The structure of the sensor substrate 24 may be selected as appropriate, but an example is shown in FIGS.
In the figure, the sensor substrate 24 uses a double-sided printed circuit board 61 made of, for example, glass epoxy, and two electrode connecting land patterns 62 for connecting to the electrodes 65 and 66 of the crystal unit 25 on the upper surface, A U-shaped pattern 63 for a pedestal for preventing the vibrating portion of the crystal unit 25 from coming into contact with the printed circuit board is disposed. The crystal unit 25 is arranged such that the electrode connection part of the crystal unit 25 is placed on the electrode connection land pattern 62, and is electrically connected, for example, with a conductive silicone resin. Further, in order to prevent the sample solution from seeping between the crystal unit 25 and the sensor substrate 24 and short-circuiting the front electrode 65 and the back electrode 66, the periphery of the crystal unit 25 is sealed with, for example, a silicone adhesive 64. ing. The wiring 67 from the electrode connecting land pattern 62 is drawn to the lower surface of the double-sided printed circuit board 61 through a through hole and extends to the connection terminal 68 in order to avoid a short circuit due to the sample solution.
Further, as shown in FIGS. 12A and 12B, the front electrode 65 and the back electrode 66 are both provided with connection portions 69a so that they can be connected to the electrode connection land pattern 62 of the double-sided printed circuit board 61 on the back surface. And is electrically connected by the extraction electrode 69. The front electrode 65 is routed by the extraction electrode 69 to the connection portion on the back surface through one side surface of the crystal unit 25.

−フローセル型反応容器表面への水晶振動子固定化方法−
本実施の形態では、センサー基板24がフローセル型反応容器21の一部を構成しているが、これに限られるものではなく、フローセル型反応容器21表面にセンサー基板24を固定するには、接着剤を用いた化学的な方法などで行うようにすればよい。使用する接着剤としては、電気的接続にはシリコーン導電性接着剤、エポキシ導電性接着剤、異方性導電フィルム(ACF)、異方性導電ペースト(ACP)等が、また防水と固定にはシリコーン接着剤、エポキシ接着剤等が使用される。
-Immobilization method of quartz crystal on the surface of flow cell type reaction vessel-
In the present embodiment, the sensor substrate 24 constitutes a part of the flow cell type reaction vessel 21. However, the present invention is not limited to this, and in order to fix the sensor substrate 24 to the surface of the flow cell type reaction vessel 21, an adhesive is used. What is necessary is just to carry out by the chemical method etc. which used the agent. The adhesive used is silicone conductive adhesive, epoxy conductive adhesive, anisotropic conductive film (ACF), anisotropic conductive paste (ACP), etc. for electrical connection, and waterproof and fixing Silicone adhesives, epoxy adhesives, etc. are used.

<測定装置による測定方法>
図8及び図9に示すように、測定器具20の試料添加部位Aに試料及び標識体を添加し、試料中の測定対象物及び標識体が測定器具20のフローセル型反応容器21の流路22を移動し、該試料及び該標識体とを検出部位Cである水晶振動子25上のトラッパー又は測定対象物類似物に供給し、必要があれば前述の洗浄液で洗浄し、トラッパー又は測定対象物類似物と特異的に結合させて生じた複合体の量を水晶振動子の振動数の変化量として検出し、解析処理装置100を介して測定対象物の試料中の濃度を測定する。
<Measurement method using measuring device>
As shown in FIGS. 8 and 9, the sample and the labeled body are added to the sample addition site A of the measuring instrument 20, and the measurement object and the labeled body in the sample are the flow path 22 of the flow cell type reaction vessel 21 of the measuring instrument 20. , And the sample and the label are supplied to the trapper or measurement object analogue on the crystal unit 25 which is the detection site C, and if necessary, washed with the above-described cleaning solution, and the trapper or measurement object. The amount of the complex produced by specifically binding to the similar substance is detected as the amount of change in the vibration frequency of the crystal resonator, and the concentration of the measurement object in the sample is measured via the analysis processing apparatus 100.

このような測定過程において、試料中の測定対象物と水晶振動子25上のトラッパー(固定化物質)又は試料中の測定対象物と反応液中の標識体とが反応する条件としては、特異的反応を行うことが出来る条件であれば特に制限はないが、反応温度としては、通常0℃〜100℃、好ましくは10〜60℃、より好ましくは20〜40℃で行われる。また、測定時間としては、通常10秒〜10時間、好ましくは30秒〜5時間、より好ましくは1分〜1時間で行われる。
更に、検量線作製のための既知濃度の標準物質を用いた測定は、同一の測定器具20を用いて個別に繰り返し行ってもよいが、測定器具20を複数組み合わせて構成した装置を用いて、試料中の測定対象物の測定と既知濃度の標準物質の測定とを同時に行うことが好ましい。
In such a measurement process, the conditions under which the measurement object in the sample and the trapper (immobilized substance) on the crystal resonator 25 or the measurement object in the sample react with the label in the reaction solution are specific. The reaction temperature is not particularly limited as long as the reaction can be performed, but the reaction temperature is generally 0 ° C to 100 ° C, preferably 10 to 60 ° C, more preferably 20 to 40 ° C. The measurement time is usually 10 seconds to 10 hours, preferably 30 seconds to 5 hours, more preferably 1 minute to 1 hour.
Furthermore, the measurement using a standard substance with a known concentration for preparing a calibration curve may be repeated individually using the same measuring instrument 20, but using an apparatus configured by combining a plurality of measuring instruments 20, It is preferable to simultaneously perform measurement of the measurement object in the sample and measurement of a standard substance having a known concentration.

このような測定過程では、水晶振動子25表面での反応の態様としては、図4ないし図6に示す状態が得られるが、標識体がフローセル型反応容器21の流路22を移動する際に、検出部位Cの水晶振動子25上では磁石40による磁場により、標識体(磁性粒子を含む)が水晶振動子25表面に引き寄せられ、これに伴って、水晶振動子25上のトラッパー又は測定対象物類似物との間で効率的に反応(例えば抗原抗体反応)が促進され、測定対象物を高感度に測定することができる。
このことは、後述する実施例にて裏付けられる。
In such a measurement process, the state shown in FIGS. 4 to 6 is obtained as a reaction mode on the surface of the crystal unit 25. However, when the marker moves through the flow path 22 of the flow cell type reaction vessel 21, the state shown in FIGS. The marker (including magnetic particles) is attracted to the surface of the crystal unit 25 by the magnetic field of the magnet 40 on the crystal unit 25 of the detection site C, and accordingly, the trapper or the measurement target on the crystal unit 25 is detected. A reaction (for example, an antigen-antibody reaction) is efficiently promoted with an object analog, and the measurement object can be measured with high sensitivity.
This is supported by the examples described later.

◎実施の形態2
図13は本発明が適用された測定装置の実施の形態2を示す。
同図において、測定装置の基本的構成は実施の形態1と略同様に測定器具20と解析処理装置100とを備えているが、実施の形態1と異なり、POCT(ポイント オブ ケア テスティング)への対応を考慮して、小型で簡便な構成となるよう設計されている。尚、実施の形態1と同様な構成要素については実施の形態1と同様な符号を付してここではその詳細な説明を省略する。
本実施の形態において、装置全体は、測定器具20に解析処理装置100を組み込んだものであり、測定器具使い捨て部S1と、測定器具解析処理部S2の二つの要素から構成されている。測定器具使い捨て部S1は、QCMセンサー23(水晶振動子25を実装したセンサー基板24)、プラスティック製の上部カバー71及び下部カバー72、各種メンブレン81〜83を備えている。
Embodiment 2
FIG. 13 shows Embodiment 2 of the measuring apparatus to which the present invention is applied.
In the figure, the basic configuration of the measuring apparatus is provided with a measuring instrument 20 and an analysis processing apparatus 100 in substantially the same way as in the first embodiment, but unlike in the first embodiment, the point of care testing (POCT) is performed. In consideration of the above, it is designed to be a small and simple configuration. Components similar to those in the first embodiment are denoted by the same reference numerals as those in the first embodiment, and detailed description thereof is omitted here.
In the present embodiment, the entire apparatus is obtained by incorporating the analysis processing apparatus 100 into the measurement instrument 20, and is composed of two elements, a measurement instrument disposable part S1 and a measurement instrument analysis processing part S2. The measuring instrument disposable part S1 includes a QCM sensor 23 (sensor substrate 24 on which the crystal unit 25 is mounted), an upper cover 71 and a lower cover 72 made of plastic, and various membranes 81 to 83.

上部カバー71は流路22部分がくり抜かれたものであって、センサー基板24の上に載置され、両者の間に出来る隙間を流路22として用いるようになっている。そして、本例では、図13及び図14示すように、流路22部分が長く確保されており、流路22の一方の側には、試料添加部位Aとして機能する試料保持メンブレン81と、この試料保持メンブレン81に隣接して標識体保持部位Bとして機能する標識体保持メンブレン82が挟み込まれている。更に、上部カバー71の試料添加部位A付近には、ピペット等で試料溶液を添加するための開口部75が設けられており、本例では、この開口部75は補助的な試料容器としても機能する。また、流路22のもう一方の側には、検出部位Cの下流側に吸収用メンブレン83が挟み込まれており、吸収部位Dとして機能するようになっている。 The upper cover 71 is formed by hollowing out the flow path 22 portion, and is placed on the sensor substrate 24, and a gap formed between them is used as the flow path 22. In the present embodiment, as shown in FIGS. 13 and 14, the channel 22 portion being secured longer, on one side of the flow path 22 includes a sample-holding membrane 81 which serves as a sample addition site A, A label holding membrane 82 that functions as a label holding site B is sandwiched adjacent to the sample holding membrane 81. Further, an opening 75 for adding a sample solution with a pipette or the like is provided near the sample addition site A of the upper cover 71. In this example, the opening 75 also functions as an auxiliary sample container. To do. Further, on the other side of the flow path 22, an absorption membrane 83 is sandwiched on the downstream side of the detection site C so as to function as the absorption site D.

ここで、標識体保持部位Bは、標識体を移動可能なようにフローセル型反応容器21の流路22に保持するための部位である。
本実施の形態において、標識体保持部位Bの標識体保持メンブレン82の材質としては、試料添加部位Aの試料保持メンブレン81の材質と同一または異なってよく、例えばガラス繊維、セルロース、ナイロン、架橋デキストラン、各種のクロマトグラフィー用紙、ニトロセルロース等があげられ、ニトロセルロースが好ましい。
また、吸収部位Dの吸収用メンブレン83としては、吸水性高分子化合物を使用することができる。該高分子化合物としては例えば、セルロース、グラスファイバー、コットン、ポリウレタン等が挙げられる。
Here, the labeled body holding portion B is a portion for holding the labeled body in the flow path 22 of the flow cell type reaction vessel 21 so that the labeled body can be moved.
In the present embodiment, the material of the label holding membrane 82 at the label holding site B may be the same as or different from the material of the sample holding membrane 81 at the sample addition site A. For example, glass fiber, cellulose, nylon, crosslinked dextran , Various chromatographic papers, nitrocellulose and the like, and nitrocellulose is preferred.
Moreover, as the absorption membrane 83 of the absorption site D, a water-absorbing polymer compound can be used. Examples of the polymer compound include cellulose, glass fiber, cotton, polyurethane and the like.

更に、センサー基板24の下面の水晶振動子25が実装された位置には磁石40(例えば長方形フェライト磁石)が設置されており、この磁石40による磁場作用域に水晶振動子25の表面が配置されるようになっている。
更にまた、センサー基板24及び水晶振動子25の実装方法や、電極引き出し方法等は実施の形態1と略同様の方法が用いられている。センサー基板24は、上部カバー71と下部カバー72とに挟まれた状態で、接着あるいははめ込み式で組み立てられている。また、水晶振動子25は、上下カバー71,72により密閉された空間に配置されるため、環境の温度変化や風などに対する影響を受け難い。
Further, a magnet 40 (for example, a rectangular ferrite magnet) is installed at a position where the crystal resonator 25 is mounted on the lower surface of the sensor substrate 24, and the surface of the crystal resonator 25 is disposed in a magnetic field application region by the magnet 40. It has become so.
Furthermore, the mounting method of the sensor substrate 24 and the crystal resonator 25, the electrode drawing method, and the like are substantially the same as those in the first embodiment. The sensor substrate 24 is assembled by bonding or fitting in a state sandwiched between the upper cover 71 and the lower cover 72. Further, since the crystal unit 25 is disposed in a space sealed by the upper and lower covers 71 and 72, it is difficult to be affected by environmental temperature changes and wind.

また、測定器具使い捨て部S1と測定器具解析処理部S2とは、コネクター85により機械的に接続、取り外しが可能となっている。同時に、水晶振動子25からの配線もコネクター85を介して測定器具解析処理部S2へ接続されている。
本実施の形態において、測定器具解析処理部S2(100)は、実施の形態1と同様に、振動数測定回路及び濃度演算回路とを備えているが、振動数測定回路として、水晶振動子25を水晶発振回路111に接続して共振周波数近傍で発振させ、その発振周波数を周波数カウンター112で測定する構成が挙げられる。この構成の場合、濃度演算回路としてはパーソナルコンピュータやマイクロプロセッサーや論理演算回路などの制御装置113を用いることができる。
つまり、本実施の形態では、水晶振動子25の共振周波数の測定は、実施の形態1と異なり、水晶発振回路111を用いて水晶振動子25を発振させると、共振周波数よりわずかに高い周波数で発振するので、これを共振周波数と見なすことができる。そして、周波数カウンター112で前記発振出力を測定することで共振周波数を取得し、CPU等を利用した制御装置113において、検量線データを用いて共振周波数から測定対象物の濃度に変換し、結果を表示装置114に表示することが出来る。
Further, the measuring instrument disposable part S1 and the measuring instrument analysis processing part S2 can be mechanically connected and detached by a connector 85. At the same time, the wiring from the crystal unit 25 is also connected to the measuring instrument analysis processing unit S2 via the connector 85.
In the present embodiment, the measurement instrument analysis processing unit S2 (100) includes a frequency measurement circuit and a concentration calculation circuit, as in the first embodiment. Is connected to the crystal oscillation circuit 111 to oscillate near the resonance frequency, and the oscillation frequency is measured by the frequency counter 112. In the case of this configuration, a control device 113 such as a personal computer, a microprocessor, or a logic operation circuit can be used as the concentration operation circuit.
That is, in the present embodiment, unlike the first embodiment, the measurement of the resonance frequency of the crystal resonator 25 is performed at a frequency slightly higher than the resonance frequency when the crystal resonator 25 is oscillated using the crystal oscillation circuit 111. Since it oscillates, it can be regarded as a resonance frequency. Then, the resonance frequency is obtained by measuring the oscillation output by the frequency counter 112, and the control device 113 using a CPU or the like uses the calibration curve data to convert the resonance frequency to the concentration of the measurement object, and the result. It can be displayed on the display device 114.

図15は水晶発振回路111の一例を示すもので、CMOSインバータを用いたコルピッツ型水晶発振回路である。本例では、水晶振動子25の表電極65及び裏電極66からの配線はセンサー基板24の配線を介して水晶発振回路111に接続されている。水晶振動子25は入力コンデンサー221と出力コンデンサー222を介してグランドに接続してπ型帰還回路を形成し、CMOSインバーター224よりなる増幅回路の入力と出力間にこの帰還回路を挿入することで信号を帰還させて発振させている。CMOSインバーター224は入出力間を数KΩから数MΩの帰還抵抗223で接続することで反転増幅器として用いている。   FIG. 15 shows an example of the crystal oscillation circuit 111, which is a Colpitts-type crystal oscillation circuit using a CMOS inverter. In this example, the wiring from the front electrode 65 and the back electrode 66 of the crystal unit 25 is connected to the crystal oscillation circuit 111 through the wiring of the sensor substrate 24. The crystal unit 25 is connected to the ground via the input capacitor 221 and the output capacitor 222 to form a π-type feedback circuit, and this feedback circuit is inserted between the input and output of the amplifier circuit composed of the CMOS inverter 224 to provide a signal. Oscillates with feedback. The CMOS inverter 224 is used as an inverting amplifier by connecting the input and output with a feedback resistor 223 of several KΩ to several MΩ.

本実施の形態によれば、実施の形態1と同様な高感度の測定結果が得られることに加えて、測定装置の使用が終了した場合には、測定器具使い捨て部S1を廃棄し、新たな測定器具使い捨て部S1を装置器具解析処理部S2に接続し、次の検査ジョブを行うようにすればよい。このため、本実施の形態に係る測定装置においては、実施の形態1に比べて、シリンジポンプ36やネットワークアナライザ等の大型の装置類が不要となり、POCT等に適した小型の測定装置を実現することが可能である。   According to the present embodiment, in addition to obtaining the same highly sensitive measurement result as in the first embodiment, when the use of the measuring device is finished, the measuring instrument disposable part S1 is discarded and a new one is disposed. The measuring instrument disposable part S1 may be connected to the apparatus instrument analysis processing part S2 to perform the next inspection job. For this reason, the measuring apparatus according to the present embodiment does not require large devices such as the syringe pump 36 and the network analyzer as compared with the first embodiment, and realizes a small measuring apparatus suitable for POCT and the like. It is possible.

◎実施の形態3
実施の形態1,2に係る測定装置はQCMセンサー23として単一の水晶振動子を用いたモデルである。これらのモデルは、水晶振動子25自体の周波数ドリフトが比較的少なく、複合体結合による周波数変化量に比較して無視できる程度であれば特に問題はない。
ここで周波数ドリフトとは、目的物質の特異的な結合に基づく周波数変化以外の周波数変動を意味し、例えば添加した試料溶液が水晶振動子25に接触することで振動子自体、あるいは周囲の温度が変化し、それにともなって共振周波数が変化したり、試料溶液中に含まれる目的物質以外の成分がセンサー膜に結合して周波数変化を起こす場合などのような、意図しない周波数変動の事である。
実施の形態1,2において、もし、このような周波数ドリフトが存在すると、ドリフト成分が測定値に加算されるため、測定値に誤差を生じてしまう懸念がある。
このようなドリフト現象による測定誤差を減らすためには、リファレンス水晶振動子を用いる方法が考えられる。
リファレンス水晶振動子という名称に対し、目的物質を検出する水晶振動子25をテスト水晶振動子と呼ぶことにする。
流路22中の検出部位Cに、このリファレンス水晶振動子をテスト水晶振動子に併設し、それぞれの共振周波数の変化を測定して、テスト水晶振動子の周波数変化から、リファレンス水晶振動子の周波数変化を差し引くことでドリフト成分の影響を取り除き、測定誤差を少なくすることが可能である。
Embodiment 3
The measuring apparatus according to the first and second embodiments is a model using a single crystal resonator as the QCM sensor 23. These models have no particular problem as long as the crystal resonator 25 itself has a relatively small frequency drift and is negligible compared to the amount of frequency change due to complex coupling.
Here, the frequency drift means a frequency fluctuation other than a frequency change based on specific binding of the target substance. For example, when the added sample solution comes into contact with the crystal oscillator 25, the oscillator itself or the ambient temperature is changed. This is an unintentional frequency fluctuation such as when the resonance frequency changes, and a component other than the target substance contained in the sample solution is coupled to the sensor film to cause a frequency change.
In the first and second embodiments, if such a frequency drift exists, the drift component is added to the measurement value, so that there is a concern that an error may occur in the measurement value.
In order to reduce the measurement error due to such a drift phenomenon, a method using a reference crystal resonator can be considered.
In contrast to the name of the reference crystal resonator, the crystal resonator 25 that detects the target substance is referred to as a test crystal resonator.
The reference crystal resonator is provided in the detection part C in the flow path 22 in addition to the test crystal resonator, the change in the resonance frequency of each is measured, and the frequency of the reference crystal resonator is determined from the frequency change of the test crystal resonator. By subtracting the change, it is possible to remove the influence of the drift component and reduce the measurement error.

次に、図を用いてリファレンス水晶振動子を用いたモデルについて説明する。
図16はリファレンス水晶振動子を用いた実施の形態3の構成を示す図である。
本実施の形態に係る測定装置は、基本的には実施の形態2にリファレンス水晶振動子を追加したもので、さらに追加したリファレンス水晶振動子の共振周波数を計測し、差を求めるように測定器具解析処理部S2(解析処理装置100)の測定回路120に改良を加えたものである。
従って、本実施の形態の説明においては、実施の形態2と異なる部分を中心に説明を行う。
本実施の形態においては、流路22中の検出部位Cに設けたテスト水晶振動子251に対し、試料溶液の流れの下流にリファレンス水晶振動子252が設置されている。
リファレンス水晶振動子252の実装方法は、テスト水晶振動子251と同様の方法を用いることができる。
リファレンス水晶振動子252からの配線は、センサー基板24の配線パターンに通じ、コネクター85を介して測定器具解析処理部S2の測定回路120に接続されている。
Next, a model using a reference crystal resonator will be described with reference to the drawings.
FIG. 16 is a diagram showing a configuration of the third embodiment using a reference crystal resonator.
The measurement apparatus according to the present embodiment is basically a reference crystal resonator added to the second embodiment, and further measures the resonance frequency of the added reference crystal resonator and obtains the difference. The measurement circuit 120 of the analysis processing unit S2 (analysis processing device 100) is improved.
Therefore, in the description of the present embodiment, the description will focus on the parts different from the second embodiment.
In the present embodiment, a reference crystal resonator 252 is installed downstream of the flow of the sample solution with respect to the test crystal resonator 251 provided at the detection site C in the flow path 22.
As a method for mounting the reference crystal resonator 252, the same method as that for the test crystal resonator 251 can be used.
The wiring from the reference crystal resonator 252 leads to the wiring pattern of the sensor substrate 24 and is connected to the measurement circuit 120 of the measurement instrument analysis processing unit S2 via the connector 85.

また、磁場を付与する磁石40は、リファレンス水晶振動子252とテスト水晶振動子251とに対し個別に設けているが、1個の磁石を用いて、それぞれの水晶振動子251,252の電極表面に磁界が集中するように磁石の形状や設置位置などを調整して用いてもよい。
リファレンス水晶振動子252とテスト水晶振動子251の位置関係は、試料溶液の流れに対して直列でも並列でもよく、直列の場合には上流下流のどちらでもよい。
但し、テスト水晶振動子251とリファレンス水晶振動子252とをなるべく近くに配置することで、両者が同じようにドリフトの影響を受けるようにした方がドリフトのキャンセルがより完全になる点で好ましい。
In addition, the magnet 40 for applying a magnetic field is provided separately for the reference crystal resonator 252 and the test crystal resonator 251, but the electrode surface of each crystal resonator 251, 252 is formed using one magnet. The magnetic shape and installation position may be adjusted so that the magnetic field concentrates on the screen.
The positional relationship between the reference crystal resonator 252 and the test crystal resonator 251 may be in series or parallel to the flow of the sample solution, and in the case of being in series, it may be either upstream or downstream.
However, it is preferable that the cancellation of the drift becomes more complete by arranging the test crystal resonator 251 and the reference crystal resonator 252 as close as possible so that both are similarly affected by the drift.

図17は測定回路120の構成を示す図である。
テスト水晶振動子251とリファレンス水晶振動子252とに対応してそれぞれ個別の水晶発振回路121,122と周波数カウンター123,124とに接続されており、両水晶振動子251,252の共振周波数を同時連続的に測定する構成となっている。
水晶発振回路121,122には実施の形態2で用いたコルピッツ型水晶発振回路を用いることができる。測定した両者の共振周波数は、制御装置125内で差を演算することでドリフト成分の差し引きが行われるよう構成されている。尚、符号126は制御装置125による演算結果を表示する表示装置である。
本構成では、両者の発振周波数を周波数カウンター123,124で求めた後に、差を演算しているが、論理回路を用いて2つの水晶発振回路121,122の出力から直接、差周波数を作りだし、差周波数をカウンターで計測する方法を用いてもよい。
FIG. 17 is a diagram illustrating the configuration of the measurement circuit 120.
Corresponding to the test crystal oscillator 251 and the reference crystal oscillator 252, the crystal oscillators 121 and 122 and the frequency counters 123 and 124 are connected to the crystal oscillators 251 and 252, respectively. It is configured to continuously measure.
As the crystal oscillation circuits 121 and 122, the Colpitts crystal oscillation circuit used in the second embodiment can be used. The measured resonance frequency is calculated by calculating a difference in the control device 125 so that the drift component is subtracted. Reference numeral 126 denotes a display device that displays a calculation result by the control device 125.
In this configuration, the difference is calculated after the oscillation frequencies of the two are obtained by the frequency counters 123 and 124, but the difference frequency is created directly from the outputs of the two crystal oscillation circuits 121 and 122 using a logic circuit. A method of measuring the difference frequency with a counter may be used.

図18は、測定回路120の別の構成を示す図である。
この例は、リファレンス水晶振動子252とテスト水晶振動子251とを切替回路130で切替ながら1つの水晶発振回路131で交互に発振させて周波数を測定するものである。
切替回路130には、電磁リレーやアナログスイッチ等の電子的なリレーを用いることができる。
切替は、制御装置133内で発生させた切替信号により行う。
切替のタイミングは、数0.1秒から数10秒の範囲が可能だが、切替時間が短いと周波数カウンター132の計測精度が悪くなり、逆に切替時間が長いと発振させていない側の共振周波数変化の様子がわからなくなるので通常1秒から数秒程度が適している。尚、符号134は制御装置133による演算結果を表示する表示装置である。
FIG. 18 is a diagram illustrating another configuration of the measurement circuit 120.
In this example, the reference crystal resonator 252 and the test crystal resonator 251 are switched by the switching circuit 130 and are alternately oscillated by one crystal oscillation circuit 131 to measure the frequency.
The switching circuit 130 can be an electronic relay such as an electromagnetic relay or an analog switch.
Switching is performed by a switching signal generated in the control device 133.
The switching timing can range from several 0.1 seconds to several tens of seconds. However, if the switching time is short, the measurement accuracy of the frequency counter 132 deteriorates. Conversely, if the switching time is long, the resonance frequency on the non-oscillating side Usually, about 1 to several seconds is suitable because the state of change is not understood. Reference numeral 134 denotes a display device that displays a calculation result by the control device 133.

次に、リファレンス水晶振動子252に用いるセンサー膜について説明する。
図19はリファレンス水晶振動子252とテスト水晶振動子251とのセンサー膜を示した図である。尚、同図において、T1,T2はテスト水晶振動子251の表裏電極、R1,R2はリファレンス水晶振動子252の表裏電極を示す。
テスト水晶振動子251には複合体を捕獲するためのテスト抗体261が担持されている。一方、リファレンス水晶振動子252には、複合体を捕獲しないようなセンサー膜262が形成されている。例えば、非特異吸着を防ぐ効果のあるBSA(牛血清アルブミン)を担持しておく。
本実施の形態での測定手順については、実施の形態2と全く同様である。
本実施の形態によれば、非特異吸着や温度変化などの他にも予期せぬ原因に基づくドリフトをキャンセルした測定が可能であるため、測定精度の向上が期待できる。
Next, a sensor film used for the reference crystal resonator 252 will be described.
FIG. 19 is a diagram showing sensor films of the reference crystal resonator 252 and the test crystal resonator 251. In the figure, T1 and T2 indicate front and back electrodes of the test crystal resonator 251 and R1 and R2 indicate front and back electrodes of the reference crystal resonator 252.
The test crystal oscillator 251 carries a test antibody 261 for capturing the complex. On the other hand, the reference crystal resonator 252 is formed with a sensor film 262 that does not capture the complex. For example, BSA (bovine serum albumin) having an effect of preventing nonspecific adsorption is carried.
The measurement procedure in this embodiment is exactly the same as that in the second embodiment.
According to this embodiment, in addition to non-specific adsorption and temperature change, it is possible to perform measurement in which drift based on an unexpected cause is cancelled. Therefore, improvement in measurement accuracy can be expected.

◎変形形態1
実施の形態3では、テスト水晶振動子251とリファレンス水晶振動子252とに別体の水晶振動子を用いたが、例えば一つの水晶基板上に2組の電極を設けた2チャンネル水晶振動子を用いることも出来る。
図20(a)(b)に測定器具の変形形態の概要を示し、図21は2チャンネル水晶振動子250の構造の一例を示す。
同図において、1つの水晶基板255上に2組の電極を設けて、それぞれテスト電極T(裏表)、リファレンス電極R(裏表)とする。それぞれの電極の表電極は水晶の端面を経由して水晶基板裏側に配線を引き回され、引き出し電極TT1、TR1に接続されている。一方、裏電極は裏面で引き出し電極TT2、TR2に接続されている。
このように、1枚の水晶基板255に2組の電極T,Rを形成し、それぞれ個別に配線を引き出すことで2個の水晶振動子を用いた場合と同様に、それぞれの固有の共振周波数を有する2つの振動子として機能する。
従って、2チャンネル水晶振動子250の一方の電極Tをテスト水晶振動子251として用い、もう一方の電極Rをリファレンス水晶振動子252として用いることができる。
以降、この形式をリファレンス型2チャンネル水晶振動子と呼ぶことにする。
◎ Deformation 1
In the third embodiment, separate crystal resonators are used for the test crystal resonator 251 and the reference crystal resonator 252. For example, a two-channel crystal resonator in which two sets of electrodes are provided on one crystal substrate is used. It can also be used.
20A and 20B show an outline of a modified form of the measuring instrument, and FIG. 21 shows an example of the structure of the two-channel crystal resonator 250. FIG.
In the figure, two sets of electrodes are provided on one crystal substrate 255, which are used as a test electrode T (back side) and a reference electrode R (back side), respectively. The front electrode of each electrode is connected to the extraction electrodes TT1 and TR1 by routing the wiring to the back side of the crystal substrate via the end face of the crystal. On the other hand, the back electrode is connected to the lead electrodes TT2 and TR2 on the back surface.
In this way, as in the case where two crystal resonators are used by forming two sets of electrodes T and R on one crystal substrate 255 and pulling out the wirings individually, each resonance frequency is unique. It functions as two vibrators having
Accordingly, one electrode T of the two-channel crystal resonator 250 can be used as the test crystal resonator 251 and the other electrode R can be used as the reference crystal resonator 252.
Hereinafter, this format is referred to as a reference type two-channel crystal resonator.

図22はリファレンス型2チャンネル水晶振動子250のテスト水晶振動子251とリファレンス水晶振動子252のセンサー膜を示した図である。テスト水晶振動子251として機能するテスト電極T(表)には複合体を捕獲するためのテスト抗体261が担持されて、一方、リファレンス水晶振動子252として機能するリファレンス電極R(表)には、複合体を捕獲しないようなセンサー膜262、例えば、非特異吸着を防ぐ効果のあるBSA(牛血清アルブミン)を担持しておく。リファレンス型2チャンネル水晶振動子250は、リファレンス水晶振動子252とテスト水晶振動子251が同一の水晶基板上に形成されているので、それぞれの振動領域が受けるドリフトの影響も共通の要素が大きく、ドリフト除去能力に優れている。
このように、2つの個別の水晶振動子を用いる代わりにリファレンス型2チャンネル水晶振動子250を用いた場合の例で、2つの個別水晶振動子を用いる場合に比較してドリフト除去能力に優れているため、さらに高い精度と検出限界が必要な場合に適している
また、リファレンス型2チャンネル水晶振動子250を2つ用いて、複数の目的物質を検出する構成も可能である。例えば第1のリファレンス型2チャンネル水晶振動子250でA型インフルエンザウイルスを検出し、第2のリファレンス型2チャンネル水晶振動子250でB型インフルエンザウイルスを検出することができる。
FIG. 22 is a diagram showing a test crystal resonator 251 of the reference type two-channel crystal resonator 250 and a sensor film of the reference crystal resonator 252 . The test electrode T (table) that functions as the test crystal resonator 251 carries a test antibody 261 for capturing the complex, while the reference electrode R (table) that functions as the reference crystal resonator 252 includes A sensor film 262 that does not capture the complex, for example, BSA (bovine serum albumin) that has an effect of preventing nonspecific adsorption is supported. In the reference type 2-channel crystal unit 250, the reference crystal unit 252 and the test crystal unit 251 are formed on the same crystal substrate. Excellent drift removal capability.
As described above, in the case of using the reference type two-channel crystal resonator 250 instead of using two individual crystal resonators, the drift removal capability is excellent as compared with the case of using two individual crystal resonators. Therefore, it is suitable when higher accuracy and detection limit are required .
Further, a configuration in which a plurality of target substances are detected using two reference type two-channel crystal resonators 250 is also possible. For example, an influenza A virus can be detected by the first reference type 2-channel crystal resonator 250, and an influenza B virus can be detected by the second reference-type 2-channel crystal resonator 250.

◎変形形態2
図23(a)(b)は変形形態2を示す。
同図において、本例は、3チャンネル水晶振動子を使った例で、3チャンネル水晶振動子のうち1つのチャンネル、例えばテスト水晶振動子253をコントロール水晶振動子254として用いることで、検査結果の信頼性を向上させる場合に適している。
つまり、3チャンネル水晶振動子を用いて、チャンネル1はテスト水晶振動子251、チャンネル2はリファレンス水晶振動子252、チャンネル3にはコントロール水晶振動子254として用いることも可能である。
ここで、コントロール水晶振動子254とは、複合体を形成していない磁性粒子を特異的に検出するセンサー膜が形成された水晶振動子であり、磁性粒子が流路中を流れたかどうかを検出し、測定自体が正常に完了したかどうか、つまり測定の可否を示す指標として用いることもできる。
◎ Deformation 2
23 (a) and 23 (b) show a second modification.
In this figure, this example is an example using a three-channel crystal resonator, and by using one of the three-channel crystal resonators, for example, a test crystal resonator 253 as the control crystal resonator 254, Suitable for improving reliability.
That is, it is possible to use a three-channel crystal resonator, channel 1 as a test crystal resonator 251, channel 2 as a reference crystal resonator 252, and channel 3 as a control crystal resonator 254.
Here, the control crystal unit 254 is a crystal unit on which a sensor film that specifically detects magnetic particles that do not form a complex is formed, and detects whether the magnetic particles have flowed through the flow path. However, it can also be used as an index indicating whether or not the measurement itself is normally completed, that is, whether or not the measurement is possible.

図24は3チャンネル水晶振動子の構造を示す図である。
3チャンネル水晶振動子は、1つの水晶基板255上に3組の電極を設けて、それぞれテスト電極A(裏表)、リファレンス電極R(裏表)、テスト電極B(裏表)とし、夫々をテスト水晶振動子251,リファレンス水晶振動子252,テスト水晶振動子253として機能させるものである。それぞれの電極の表電極は水晶の端面を経由して水晶基板裏側に配線を引き回され、引き出し電極TA1、TR1、TB1に接続されている。一方、裏電極は裏面で引き出し電極TA2、TR2、TB2に接続されている。
尚、コントロール水晶振動子254とリファレンス水晶振動子252の位置が変形形態2の説明とは逆になっているが、各水晶振動子の位置は検出する目的物質の特性や、流路の構造などで最適な配置が考えられ、特定の位置に配置すべきものではない。
更に、ライン数を3以上に増やすことも容易に可能であり、多検体および多測定対象物の同時計測が可能となる。
FIG. 24 is a diagram showing the structure of a three-channel crystal resonator.
The three-channel crystal unit is provided with three sets of electrodes on one crystal substrate 255, which are used as a test electrode A (back side), a reference electrode R (back side), and a test electrode B (back side), respectively. It is made to function as a child 251, a reference crystal resonator 252, and a test crystal resonator 253. The front electrode of each electrode is routed to the back side of the crystal substrate via the end face of the crystal and is connected to the extraction electrodes TA1, TR1, and TB1. On the other hand, the back electrode is connected to the lead electrodes TA2, TR2, TB2 on the back surface.
Note that the positions of the control crystal unit 254 and the reference crystal unit 252 are opposite to those described in the second modification. The optimal placement is conceivable and should not be placed at a specific location.
Furthermore, it is possible to easily increase the number of lines to 3 or more, and simultaneous measurement of multiple samples and multiple measurement objects becomes possible.

以上に示した様に、実施の形態3においては、リファレンス水晶振動子252を組み合わせることで、高い精度及び検出限界を実現することが可能である。
また、マルチチャンネル水晶振動子を複数の目的物質の検出に用いることもできる。
例えば3チャンネル水晶振動子を用い、チャンネル1でA型インフルエンザウイルスを検出し、チャンネル2でB型インフルエンザウイルスを検出し、チャンネル3はリファレンス水晶振動子252として用いる方法などが考えられる。
チャンネルを増やせばさらに多くの目的物質の検出に用いることができる。
As described above, in the third embodiment, high accuracy and a detection limit can be realized by combining the reference crystal resonator 252.
In addition, a multi-channel crystal resonator can be used for detecting a plurality of target substances.
For example, a method using a 3-channel crystal resonator, detecting influenza A virus in channel 1, detecting influenza B virus in channel 2, and using channel 3 as a reference crystal resonator 252 can be considered.
If the number of channels is increased, more target substances can be detected.

◎実施の形態4
本実施の形態に係る測定器具は、複数の測定対象物や検査の目的に応じて、個別水晶振動子と多チャンネル水晶振動子とを使い分けることで、柔軟に対応できるものであり、以下模式図を用いて説明する。
図25(a)(b)は複数ラインの流路を具備する測定器具を示す。
本例は、フローセル型反応容器21に複数ライン(例えば2ライン)の流路22a,22bを設け、夫々の流路22a,22bに試料添加部位A(標識体添加部位を兼用)、検出部位C及び吸収部位Dを夫々設けたものである。
そして、一方の流路22aの検出部位Cにはテスト水晶振動子251を配設すると共に、他方の流路22bの検出部位Cにはリファレンス水晶振動子252を配設するものであり、夫々の水晶振動子251,252には所定のセンサー膜が形成され、各水晶振動子251,252の裏面電極側の流路外には、磁場形成用の磁石40が配置されている。
Embodiment 4
The measuring instrument according to the present embodiment can flexibly cope with the use of individual crystal resonators and multi-channel crystal resonators according to a plurality of measurement objects and inspection purposes. Will be described.
FIGS. 25A and 25B show a measuring instrument having a plurality of lines of flow paths.
In this example, a flow cell type reaction vessel 21 is provided with a plurality of lines (for example, two lines) of flow paths 22a and 22b, and a sample addition site A (also used as a labeling substance addition site) and a detection site C are provided in each of the flow paths 22a and 22b. And an absorption site D.
A test crystal resonator 251 is disposed in the detection portion C of one flow path 22a, and a reference crystal resonator 252 is disposed in the detection portion C of the other flow path 22b. A predetermined sensor film is formed on the quartz vibrators 251 and 252, and a magnetic field forming magnet 40 is disposed outside the flow path on the back electrode side of each quartz vibrator 251 and 252.

2ラインの流路の具体的な構造としては、各実施の形態で示すように、センサー基板24とプラスチック製カバー23の張り合わせ構造を用いることができる。プラスチック製カバー23には2ライン分の流路部分がくり抜かれており、一方、センサー基板24は、それぞれのライン内の検出部位に2つの水晶振動子251,252が実装され、それぞれの水晶振動子251,252からの電極配線は、センサー基板24内の配線を通して、測定回路(図示せず)に接続され、それぞれの共振周波数変化から測定対象物の定量が可能である。測定回路としては、実施の形態2で説明した方法を用いることが可能である。
本実施の形態としては、先述の片方のラインをリファレンス水晶振動子として使用する態様以外に、両方のラインにテスト水晶振動子を具備する態様もあり得る。両方のラインにテスト水晶振動子を具備する態様においては、2つの検体における同一測定対象物の同時測定や同一検体における2種類の測定対象物の同時測定が可能である。
As a specific structure of the two-line flow paths, a laminated structure of the sensor substrate 24 and the plastic cover 23 can be used as shown in each embodiment. The plastic cover 23 is hollowed out for two lines. On the other hand, the sensor substrate 24 has two crystal resonators 251 and 252 mounted at the detection sites in the respective lines, and each crystal vibration. The electrode wiring from the children 251 and 252 is connected to a measurement circuit (not shown) through the wiring in the sensor substrate 24, and the measurement object can be quantified from the change in the respective resonance frequencies. As the measurement circuit, the method described in Embodiment Mode 2 can be used.
As the present embodiment, in addition to the above-described embodiment in which one of the lines is used as a reference crystal resonator, there may be an embodiment in which a test crystal resonator is provided on both lines. In an aspect in which the test crystal resonators are provided on both lines, the same measurement object in two samples can be measured simultaneously, or two types of measurement objects in the same sample can be measured simultaneously.

◎変形形態1
図26は実施の形態4に係る測定器具の変形形態1を示すものである。
同図において、本例に係る測定器具は、実施の形態4と略同様であるが、フローセル型反応容器21に2ラインの流路22a,22bを含む態様の測定器具20の各流路22a,22bに標識体保持部位Bを追加した例である。
各ラインの流路22a,22bの検出部位Cにある水晶振動子は、一方がテスト水晶振動子251で、他方がリファレンス水晶振動子252であってもよいし、両方がテスト水晶振動子251でもよい。
◎ Deformation 1
FIG. 26 shows a first modification of the measuring instrument according to the fourth embodiment.
In the figure, the measuring instrument according to the present example is substantially the same as that of the fourth embodiment, but each flow path 22a, This is an example in which a label holding site B is added to 22b.
One of the crystal resonators in the detection part C of the flow paths 22a and 22b of each line may be the test crystal resonator 251 and the other may be the reference crystal resonator 252 or both may be the test crystal resonator 251. Good.

◎変形形態2
図27(a)(b)は実施の形態4に係る測定器具の変形形態2を示すものである。
同図において、本例に係る測定器具は、変形形態1(図26)と略同様であるが、フローセル型反応容器21に2ラインの流路22a,22bを含む態様の測定器具20の各流路22a,22bに対し試料添加部位Aを一体化したもので、同一試料溶液中の測定対象物を測定する例である。
本例において、各流路22a,22b中の水晶振動子は、一方がテスト水晶振動子251で他方がリファレンス水晶振動子252であってもよいし、両方がテスト水晶振動子251でもよい。ここで、片方がリファレンス水晶振動子252である場合は、試料添加部位Aを一体化させることにより、テスト水晶振動子251と限りなく同程度のドリフト現象の影響を受けるため、試料添加部位Aが別々に配置された場合よりも更に高い精度および検出限界を実現することが可能である。両方がテスト水晶振動子251の場合には、試料添加部位Aがライン個別の場合に比べて、同一試料溶液内の異なる測定対象物を測定するために各々のラインに個別に試料溶液を添加する必要があるが、本構成の場合は一箇所に添加することで2つのラインに同時に試料溶液を展開することが可能となる。
◎ Deformation 2
27 (a) and 27 (b) show a second modification of the measuring instrument according to the fourth embodiment.
In this figure, the measuring instrument according to the present example is substantially the same as that of the modified embodiment 1 (FIG. 26), but each flow of the measuring instrument 20 in a mode in which the flow cell type reaction vessel 21 includes two lines of flow paths 22a and 22b. This is an example in which a sample addition site A is integrated with the paths 22a and 22b, and a measurement object in the same sample solution is measured.
In this example, one of the crystal resonators in each of the flow paths 22a and 22b may be the test crystal resonator 251 and the other may be the reference crystal resonator 252 or both may be the test crystal resonator 251. Here, when one side is the reference crystal resonator 252, the sample addition site A is influenced by the drift phenomenon as much as the test crystal resonator 251 by integrating the sample addition site A. It is possible to achieve higher accuracy and detection limits than when they are arranged separately. In the case where both are test crystal resonators 251, the sample solution is individually added to each line in order to measure different measurement objects in the same sample solution as compared with the case where the sample addition site A is an individual line. Although it is necessary, in the case of this configuration, it is possible to simultaneously develop the sample solution in two lines by adding it in one place.

◎変形形態3
図28(a)(b)は実施の形態4に係る測定器具の変形形態3を示すものである。
同図において、本例は、3ライン型測定器具の例で、ライン1の流路22aの検出部位にはテスト水晶振動子A251、ライン2の流路22bにはテスト水晶振動子B253、ライン3の流路22cにはリファレンス水晶振動子252を配置することで、2種類の測定対象物についてドリフト成分の影響を取り除き、測定誤差を少なすることを可能としたものである。
◎ Deformation 3
28 (a) and 28 (b) show a third modification of the measuring instrument according to the fourth embodiment.
In this figure, this example is an example of a three-line type measuring instrument. A test crystal resonator A251 is provided at the detection portion of the flow path 22a of line 1, and a test crystal resonator B253 is provided at the flow path 22b of line 2. By disposing a reference crystal resonator 252 in the flow path 22c, the influence of the drift component can be removed from the two types of measurement objects, and the measurement error can be reduced.

◎変形形態4
図29(a)(b)は実施の形態4に係る測定器具の変形形態4を示すものである。
同図において、本例は、3ライン型測定器具の例で、ライン1の流路22aの検出部位にはテスト水晶振動子251、ライン2の流路22bにはコントロール水晶振動子254、ライン3の流路22cにはリファレンス水晶振動子252を配置することで、精度と検出限界を高め、さらに測定中に磁性粒子が正常に流路中を流れたかどうかを検出し、測定自体の可否の判断を行うことが可能である。
具体的な構造については、変形形態1(図26参照)の2ライン型に更にラインが追加され、しかも、各流路22a〜22cに対し試料添加部位Aが共通化された構造である。
また、本図に示された測定器具を用いれば、検出部位における3つの水晶振動子を全てテスト水晶振動子とすることにより、3つの検体中の同一測定対象物の同時測定や同一検体における3つの測定対象物の同時測定が可能となる。更に、3つのラインのうちの一つのラインをリファレンス水晶振動子252を具備するリファレンスラインとして使用して、異なる2種類の測定対象物もしくは1種類の測定対象物を2検体分同時に測定することも可能である。
ライン数を3以上に増やすことも容易に可能であり、多検体および多測定対象物の同時計測が可能となる。また、複数ラインの1つをリファレンスラインとして用いることで、実施の形態3で説明したような方法で、ドリフト現象による誤差をキャンセルし、精度と検出限界を向上することが可能である。
◎ Deformation 4
29 (a) and 29 (b) show a fourth modification of the measuring instrument according to the fourth embodiment.
In this figure, this example is an example of a three-line type measuring instrument. A test crystal oscillator 251 is provided at the detection site of the flow path 22a of line 1, and a control crystal oscillator 254 and line 3 are provided at the flow path 22b of line 2. By arranging a reference crystal resonator 252 in the flow path 22c, the accuracy and the detection limit are increased, and further, it is detected whether the magnetic particles have normally flowed through the flow path during the measurement, and the determination of whether the measurement itself is possible or not. Is possible.
The specific structure is a structure in which a line is further added to the two-line type of modification 1 (see FIG. 26), and the sample addition site A is made common to the flow paths 22a to 22c.
Further, by using the measuring instrument shown in this figure, all three quartz crystal resonators in the detection region are used as test quartz crystal resonators, so that the same measurement object in three samples can be simultaneously measured or 3 in the same sample. Simultaneous measurement of two measurement objects becomes possible. Furthermore, two different types of measurement objects or one type of measurement object can be measured simultaneously for two samples by using one of the three lines as a reference line having a reference crystal resonator 252. Is possible.
The number of lines can be easily increased to 3 or more, and simultaneous measurement of multiple samples and multiple measurement objects is possible. Further, by using one of the plurality of lines as a reference line, the error due to the drift phenomenon can be canceled and the accuracy and the detection limit can be improved by the method described in the third embodiment.

◎実施例1
図8に示す実施の形態1モデルを実施例1とし、磁石40による影響(磁気濃縮)を調べた。
本実施例では、標識体としては、ストレプトアビジンを表面に固定化した磁性粒子(本例では、BD(ベクトンディッキンソン社)社製IMag−DMを使用)を用い、一方、水晶振動子の電極表面のトラッパーとしては、ストレプトアビジンと特異的に結合するアビジン化BSA(牛血清アルブミン)を固定化したものを用い、フローセル型反応容器21の流路22に水晶振動子25を設置して、フローセル型反応容器21に前述の磁性粒子溶液を濃度を変えて流した時の水晶振動子25の共振周波数変化から、磁気濃縮の効果を明らかにした。
また、QCMセンサー23には37.5MHzの共振周波数を有する矩形形状のATカット水晶振動子を用いた。
更に、流路22のサイズは、およそ幅3.5mm、高さ0.2mmである。実装後の水晶振動子の高さはおよそ0.1mm程度なので、検出部位での流路の高さはおよそ0.1mmになる。
Example 1
The model of Embodiment 1 shown in FIG. 8 was taken as Example 1, and the influence (magnetic concentration) due to the magnet 40 was examined.
In this example, as the label, magnetic particles having streptavidin immobilized on the surface (in this example, IMag-DM manufactured by BD (Becton Dickinson)) is used, while the electrode surface of the crystal unit is used. As a trapper, a fixed avidinized BSA (bovine serum albumin) that specifically binds to streptavidin is used, and a crystal resonator 25 is installed in the flow path 22 of the flow cell type reaction vessel 21 to obtain a flow cell type. The effect of magnetic concentration was clarified from the change in the resonance frequency of the quartz crystal resonator 25 when the magnetic particle solution described above was allowed to flow through the reaction vessel 21 at different concentrations.
The QCM sensor 23 is a rectangular AT-cut quartz crystal having a resonance frequency of 37.5 MHz.
Furthermore, the size of the flow path 22 is approximately 3.5 mm in width and 0.2 mm in height. Since the height of the crystal unit after mounting is about 0.1 mm, the height of the flow path at the detection site is about 0.1 mm.

測定は、試料容器34に濃度の異なる磁性粒子懸濁液を滴下し、シリンジポンプ36を用いて試料溶液をフローセル型反応容器21内に吸引することで、試料溶液を順次QCMセンサー23と反応させるように行なった。
更に、センサー基板24の裏面のうち水晶振動子25が実装された位置にフェライト磁石(6.0mm×4.0mm、高さ2.0mm)が設置されている。水晶振動子25表面での磁束密度は約50mTであった。磁石は、取り外し可能となっており、磁石を設置したときの周波数変化と、磁石を設置しない場合の周波数変化の両方を測定できるようにした。
また、共振周波数変化の測定には、ネットワークアナライザー(アンリツ社製MS4630B)を用いた。共振周波数の37.5MHz付近を中心に、周波数幅100KHzをスイープしたときの水晶振動子25の周波数対アドミッタンス特性を測定し、最小二乗法により水晶振動子25の等価回路定数を求め、等価回路定数からさらに共振周波数を求めた。
In the measurement, magnetic particle suspensions having different concentrations are dropped into the sample container 34, and the sample solution is sucked into the flow cell type reaction container 21 using the syringe pump 36, whereby the sample solution is reacted with the QCM sensor 23 sequentially. It was done as follows.
Further, a ferrite magnet (6.0 mm × 4.0 mm, height 2.0 mm) is installed on the back surface of the sensor substrate 24 at a position where the crystal resonator 25 is mounted. The magnetic flux density on the surface of the crystal unit 25 was about 50 mT. The magnet is removable, so that both the frequency change when the magnet is installed and the frequency change when the magnet is not installed can be measured.
Further, a network analyzer (MS4630B manufactured by Anritsu Co., Ltd.) was used for measurement of changes in resonance frequency. The frequency vs. admittance characteristics of the crystal unit 25 when a frequency width of 100 KHz is swept around the resonance frequency of about 37.5 MHz are measured, and the equivalent circuit constant of the crystal unit 25 is obtained by the least square method. Further, the resonance frequency was obtained.

水晶振動子25のアドミッタンスYは複素数で表現されるので、ネットワークアナライザーで取得したアドミッタンスYの実数部分と虚数部分のデータをパーソナルコンピュータ(PC)に取り込み、測定値と計算値の誤差の二乗が最小になるような等価定数Lx、Cx、Rx、Cpを決定し、式3より共振周波数を求めた。
fo=1/(2・π・(Lx・Cx)1/2) (式3)
この様にして求めた共振周波数変化は、あらかじめ既知の濃度の試料溶液を用いて得た検量線データを用いて、測定対象物の濃度に変換し、表示装置に結果を表示することが出来る。
また、水晶振動子のサイズは、2.2mm×4.5mmで、膜厚約150nmの金電極をRFスパッタ法で形成した。
次に、トラッパーの水晶振動子への固定化について説明する。
固定化に先立ち、水晶振動子の表面の金電極を水酸化ナトリウム溶液と塩酸溶液を用いて洗浄し、次に100μg/mLのビオチン化BSA水溶液約15μLを表電極上に滴下し、湿潤箱の中に約1時間保持して固定化した。次に、非特異吸着を防ぐため、1%濃度のBSA(牛血清アルブミン)水溶液を15μL滴下して、湿潤箱中に約1時間保持してブロッキングを行なった。
Since the admittance Y of the crystal unit 25 is expressed by a complex number, the data of the real part and imaginary part of the admittance Y acquired by the network analyzer is taken into a personal computer (PC), and the square of the error between the measured value and the calculated value is minimized. Equivalent constants Lx, Cx, Rx, and Cp were determined, and the resonance frequency was obtained from Equation 3.
fo = 1 / (2 · π · (Lx · Cx) 1/2 ) (Formula 3)
The resonance frequency change thus obtained can be converted into the concentration of the measurement object using calibration curve data obtained in advance using a sample solution having a known concentration, and the result can be displayed on the display device.
Further, the size of the crystal resonator was 2.2 mm × 4.5 mm, and a gold electrode having a film thickness of about 150 nm was formed by RF sputtering.
Next, immobilization of the trapper on the crystal resonator will be described.
Prior to immobilization, the gold electrode on the surface of the crystal unit was washed with a sodium hydroxide solution and a hydrochloric acid solution, and then about 15 μL of 100 μg / mL biotinylated BSA aqueous solution was dropped on the surface electrode. It was retained for about 1 hour and immobilized. Next, in order to prevent non-specific adsorption, 15 μL of a 1% BSA (bovine serum albumin) aqueous solution was dropped and kept in a wet box for about 1 hour for blocking.

図30は水晶振動子25表面に固定化したトラッパーへ標識体を反応させたときの模式図である。水晶振動子25の表面金電極上に、ビオチン化BSA(シグマ社製A8549)と、ブロッキング用BSAとが固定化されている。ここへ、ストレプトアビジンを表面に固定化した磁性粒子が結合して、水晶振動子25の共振周波数を変化させる。ビオチン化BSAは、BSA1分子に付き、16分子のビオチンが固定化されている。
以上説明した測定系と、センサー基板とを用いて、磁性粒子の反応実験を行なった。実験に使用した試料溶液は、前述の市販の磁性粒子懸濁液をPBSバッファーで40倍から5120倍まで、2倍間隔で希釈した試料溶液を用意し、これをフローセルに100μLずつ、流速20μL/minで順次流して、その時の周波数変化を計測した。最初に濃縮用の磁石を外した状態で測定を行い、次に磁石を設置した状態で測定を行なった。
FIG. 30 is a schematic diagram when the labeling body is reacted with the trapper immobilized on the surface of the crystal unit 25. Biotinylated BSA (Sigma A8549) and blocking BSA are immobilized on the surface gold electrode of the crystal unit 25. Here, magnetic particles having streptavidin immobilized on the surface are bonded to change the resonance frequency of the crystal unit 25. Biotinylated BSA has 16 molecules of biotin immobilized on one BSA molecule.
Using the measurement system described above and the sensor substrate, a magnetic particle reaction experiment was performed. The sample solution used in the experiment was prepared by diluting the above-mentioned commercially available magnetic particle suspension with PBS buffer from 40-fold to 5120-fold at 2-fold intervals. The frequency change at that time was measured by sequentially flowing in min. First, the measurement was performed with the concentration magnet removed, and then the measurement was performed with the magnet installed.

図31は、磁石を外した状態で希釈した試料(ストレプトアビジンを表面に固定化した磁性粒子)溶液を順次流した時の典型的な周波数変化の様子を示した図である。タイミングt1で5120倍希釈の試料溶液を、t2で2560倍希釈の試料溶液を流し、以降、タイミングt9まで、夫々5分間隔で試料溶液を流している。試料溶液の濃度が低い、タイミングt1からt5では周波数変化は観察されないが、タイミングt6からは周波数変化が観察され、以降試料溶液の濃度が高くなるにしたがって周波数の変化が大きくなっている。各タイミングで、試料溶液の濃度が変化して周波数が変化し始めるが、その点での1分間あたりの周波数変化が、トラッパーに結合する磁性粒子量に比例すると考えて、濃度依存性を求めた。   FIG. 31 is a diagram showing a typical change in frequency when a sample solution (magnetic particles having streptavidin immobilized on the surface) diluted with the magnet removed is sequentially flowed. The sample solution diluted 5120 times at the timing t1 and the sample solution diluted 2560 times at the time t2, and then the sample solution are supplied at intervals of 5 minutes until the timing t9. Although the change in frequency is not observed at timings t1 to t5 when the concentration of the sample solution is low, the change in frequency is observed from timing t6. Thereafter, the change in frequency increases as the concentration of the sample solution increases. At each timing, the concentration of the sample solution changes and the frequency starts to change, and the concentration dependence was calculated by assuming that the frequency change per minute at that point is proportional to the amount of magnetic particles bound to the trapper. .

図32に濃度依存性の結果を示す。
同図において、磁性粒子の濃度は試料溶液中に含まれる市販磁性粒子懸濁液をv/v%で表示しており、40倍希釈が2.5v/v%に相当する。縦軸は、周波数変化率で表示してある。
磁石を外した場合、磁性粒子が0.3125v/v%(320倍希釈)以下では検出できず、0.625v/v%(160倍希釈)から測定可能となるのに対し、磁石を設置した場合、0.015v/v%(640倍希釈)から測定可能となり、およそ4倍程度の感度差が認められた。
また、本実施例では、水晶振動子25部分での流路の高さはおよそ0.1mmと非常に薄いため、フローセルを流れる全磁性粒子のうち、多くの磁性粒子が、センサー表面から距離的に近い場所を流れることとなり、磁気濃縮の効果が出にくい条件である。それにもかかわらず、明らかに4倍程度の感度増加が確認された。従って、フローセルの流路が厚くなるような応用においては、より高い濃縮効果が期待できる。また、磁石の強度を強くすることで、さらに磁気濃縮効果が向上することが期待できる。
本実施例では、磁気濃縮の効果を端的に示すために、あえてサンドイッチ反応によらず、磁性粒子を直接QCMセンサー23で検出したものであるが、サンドイッチ反応を用いた場合も当然、磁気濃縮効果が期待できる。
FIG. 32 shows the result of concentration dependency.
In the figure, the concentration of magnetic particles is represented by v / v% of a commercially available magnetic particle suspension contained in the sample solution, and 40-fold dilution corresponds to 2.5 v / v%. The vertical axis represents the frequency change rate.
When the magnet is removed, the magnetic particles cannot be detected below 0.3125 v / v% (320 times dilution) and can be measured from 0.625 v / v% (160 times dilution). In this case, it was possible to measure from 0.015 v / v% (640-fold dilution), and a sensitivity difference of about 4 times was recognized.
In the present embodiment, the height of the flow path at the quartz crystal resonator 25 is as thin as about 0.1 mm, so that many of the magnetic particles flowing through the flow cell are distant from the sensor surface. It is a condition where the effect of magnetic concentration is difficult to be produced. Nevertheless, a sensitivity increase of about 4 times was confirmed. Therefore, a higher concentration effect can be expected in applications where the flow path of the flow cell is thick. Moreover, it can be expected that the magnetic concentration effect is further improved by increasing the strength of the magnet.
In this example, in order to show the effect of magnetic concentration in a simple manner, the magnetic particles are directly detected by the QCM sensor 23 without using the sandwich reaction. Can be expected.

◎実施例2
図13に示す実施の形態モデルを実施例2として用い、この実施例2の測定の手順を、インフルエンザA型抗原の検査を例に説明する。
インフルエンザA型抗原の検出には、患者から採取したウイルスを含む検体を界面活性剤等を用いて核タンパク質を溶出させ、この核タンパク質をサンドイッチ反応を利用してQCMセンサー23で検出する方法を用いる。
磁性粒子には、粒径が50nmから3000nm程度の磁性粒子を用い、その表面にA型インフルエンザウイルスの核タンパクと特異的に結合する抗体を固定化する。一方、水晶振動子25の電極表面にもA型インフルエンザウイルスの核タンパクと特異的に結合する抗体をトラッパーとして固定化しておく。
検査は患者から採取した鼻空ぬぐい液、あるいは鼻空吸引液、あるいはうがい液に0.1%から数%程度の界面活性剤を加えて核タンパク質を可溶化したのち、試料溶液を一定量、試料添加用開口部75に添加する。添加した試料溶液は、試料保持メンブレン81に吸収され、続けて、隣接して設けた標識体保持メンブレン82へ展開してゆく。標識体保持メンブレン82において、試料溶液中の核タンパク質が標識体と複合体を形成し、さらに流路22に展開してゆき、水晶振動子25の電極表面に固定化した例えばトラッパー(固定化物質)11へ達する。ここで、複合体は固定化物質と結合して、水晶振動子25の共振周波数変化をもたらす。試料溶液はさらに流路22中に展開して、吸収用メンブレン83に達して、流路22中の試料溶液が吸収用メンブレン83に吸収される。
Example 2
The embodiment model shown in FIG. 13 will be used as Example 2, and the measurement procedure of Example 2 will be described using an influenza A antigen test as an example.
For detection of influenza A antigen, a method is used in which a nucleoprotein is eluted from a specimen containing a virus collected from a patient using a surfactant and the nucleoprotein is detected by the QCM sensor 23 using a sandwich reaction. .
As the magnetic particles, magnetic particles having a particle size of about 50 nm to 3000 nm are used, and an antibody that specifically binds to the nucleoprotein of influenza A virus is immobilized on the surface thereof. On the other hand, an antibody that specifically binds to the nucleoprotein of influenza A virus is also immobilized on the electrode surface of the quartz oscillator 25 as a trapper.
The test is performed by solubilizing the nucleoprotein by adding 0.1% to several percent of surfactant to the nasal rinse or nasal aspirate or gargle collected from the patient. Add to the sample addition opening 75. The added sample solution is absorbed by the sample holding membrane 81 and then developed to the label holding membrane 82 provided adjacent thereto. In the labeled body holding membrane 82, the nucleoprotein in the sample solution forms a complex with the labeled body, and further expands in the flow path 22, and is immobilized on the electrode surface of the crystal resonator 25, for example, a trapper (immobilized substance). ) 11 is reached. Here, the composite is combined with the immobilizing substance, and the resonance frequency of the crystal unit 25 is changed. The sample solution further develops in the flow path 22 and reaches the absorption membrane 83, and the sample solution in the flow path 22 is absorbed by the absorption membrane 83.

図33は、測定中に水晶振動子25の共振周波数がどのように変化するか示した図である。横軸は経過時間で、時間0から周波数測定を開始し、試料溶液を添加する以前は、水晶振動子25は大気中での共振周波数faで発振している。次に時間T1で試料液体を添加すると、試料溶液が流路22を展開して、時間T2で水晶振動子25に達する。本実施例で用いた37.5MHzの水晶振動子25の場合、水晶振動子25が試料液体に接触すると、試料溶液の粘性により20KHz程度、急激に周波数が低下し、その後、複合体の結合により数10Hz〜数100Hz程度の周波数低下が生じる。接触直後の周波数低下は液体の粘性によるものなので複合体の結合量とは無関係である。試料溶液は吸収用メンブレン83に吸収されて、やがて時間T3で水晶振動子25の電極表面上から試料溶液が引き抜かれると、電極表面の一部が大気に晒されるため、共振周波数が上昇し、大気中の共振周波数付近まで周波数が上昇する。
複合体の結合による周波数変化量の取得は、接触によって周波数が低下した後の一定時間Tw後から、さらに一定時間Tm経過した時の周波数低下Δfmを用いる。周波数低下量Δfmと、試料溶液に含まれるウイルス中の核タンパクの量、あるいは、ウイルス量との関係は、測定器具解析処理部S2の制御装置113内に記憶させた検量線データを用いて、周波数低下量からウイルス量あるいは、核タンパク含有量を計算し、たとえば、ウイルス量ならpfu/mL等の単位を用いて表示装置114に表示することが出来る。
FIG. 33 is a diagram showing how the resonance frequency of the crystal unit 25 changes during measurement. The abscissa is the elapsed time, and frequency measurement starts from time 0. Before the sample solution is added, the crystal unit 25 oscillates at the resonance frequency fa in the atmosphere. Next, when the sample liquid is added at time T1, the sample solution develops the flow path 22, and reaches the crystal unit 25 at time T2. In the case of the 37.5 MHz crystal resonator 25 used in this example, when the crystal resonator 25 comes into contact with the sample liquid, the frequency rapidly decreases by about 20 KHz due to the viscosity of the sample solution. A frequency drop of about several tens Hz to several hundreds Hz occurs. The frequency drop immediately after contact is due to the viscosity of the liquid and is therefore independent of the amount of complex binding. When the sample solution is absorbed by the absorption membrane 83 and eventually the sample solution is pulled out from the electrode surface of the crystal unit 25 at time T3, a part of the electrode surface is exposed to the atmosphere, so that the resonance frequency increases. The frequency rises to near the resonance frequency in the atmosphere.
The acquisition of the frequency change amount due to the binding of the complex uses the frequency decrease Δfm when a certain time Tm has passed after a certain time Tw after the frequency is lowered by the contact. The relationship between the frequency drop amount Δfm and the amount of nucleoprotein in the virus contained in the sample solution or the amount of virus is determined using calibration curve data stored in the control device 113 of the measuring instrument analysis processing unit S2. The amount of virus or the content of nucleoprotein is calculated from the frequency reduction amount, and for example, the amount of virus can be displayed on the display device 114 using a unit such as pfu / mL.

◎実施例3
図34は図16に示す実施の形態3モデルを実施例3とし、本実施例における測定時のテスト水晶振動子251とリファレンス水晶振動子252の周波数変化の様子を示した図である。
横軸は経過時間で、時間0から周波数測定を開始し、試料液体を添加する以前は、テスト水晶振動子は共振周波数faTで、リファレンス水晶振動子252はfaRで発振している。
次に時間T1で試料液体を添加すると、試料液体が流路を展開して、時間T2でテスト水晶振動子251に達し、すこし遅れてT2’でリファレンス水晶振動子に達する。
試料液体が水晶振動子251に達すると、およそ20KHz程度の周波数低下を生じ、その後、テスト水晶振動子には目的物質を含む複合体がセンサー膜に結合して周波数が低下する。
一方、リファレンス水晶振動子には、複合体は捕獲されず、ドリフト現象による周波数変化だけが現れる。
このドリフト現象による周波数変化が、テスト水晶振動子にも同様に生じていると考え、両者の差を取ることで、目的物質を含む複合体による周波数変化だけ取り出すことができる。
Example 3
FIG. 34 is a diagram showing changes in frequency of the test crystal resonator 251 and the reference crystal resonator 252 at the time of measurement in the present example, with the third embodiment model shown in FIG.
The horizontal axis is the elapsed time, and frequency measurement starts from time 0. Before the sample liquid is added, the test crystal resonator oscillates at the resonance frequency faT and the reference crystal resonator 252 oscillates at faR.
Next, when the sample liquid is added at time T1, the sample liquid expands the flow path, reaches the test crystal resonator 251 at time T2, and reaches the reference crystal resonator at T2 ′ with a slight delay.
When the sample liquid reaches the crystal unit 251, a frequency decrease of about 20 KHz occurs, and then the composite containing the target substance is bonded to the sensor film in the test crystal unit and the frequency is decreased.
On the other hand, in the reference crystal resonator, the complex is not captured, and only the frequency change due to the drift phenomenon appears.
The frequency change due to the drift phenomenon is considered to occur in the test crystal resonator as well, and by taking the difference between the two, only the frequency change due to the complex containing the target substance can be extracted.

実際の、複合体の結合による周波数変化量の取得は、例えば、試料溶液の接触による周波数低下を検出してから一定時間Tw後のテスト水晶振動子251とリファレンス水晶振動子252の周波数差をΔfm1とし、さらに一定時間Tm後の周波数差をΔfm2とし、求める周波数低下量ΔfmはこのΔfm2からΔfm1を引いた周波数として求めることができる。水晶振動子に生じるドリフト現象は、たとえば非特異吸着や、水晶振動子25自体に影響を及ぼす温度のように、水晶振動子25に試料液体が接触してからの時間に依存する要因に起因するが、テスト水晶振動子251とリファレンス水晶振動子252に試料溶液が接触する時間差は実際には1秒以下であり、一定時間Tmの数分〜数十分に比較して短いのでΔfm1とΔfm2は、それぞれ同時刻での周波数測定値を用いても差し支えない。
上記、周波数変化量の取得においては、2点間(T3からT4)の周波数データのみを用いて差分Δfmを求めたが、周波数低下量(Δfm2−Δfm1)を連続的に求めて、カーブフィティングの手法を用いて、一定時間後の低下量Δfmを推定で求めてもよい。
本実施例によれば、非特異吸着や温度変化などの他にも予期せぬ原因に基づくドリフトをキャンセルした測定が可能であるため、測定精度の向上が期待できる。
The actual acquisition of the frequency change amount due to the binding of the complex is, for example, by calculating the frequency difference between the test crystal resonator 251 and the reference crystal resonator 252 after a certain time Tw after detecting the frequency drop due to the contact with the sample solution by Δfm1. Further, the frequency difference after a certain time Tm is Δfm2, and the obtained frequency decrease amount Δfm can be obtained as a frequency obtained by subtracting Δfm1 from this Δfm2. The drift phenomenon that occurs in the crystal unit is caused by factors that depend on the time after the sample liquid comes into contact with the crystal unit 25, such as non-specific adsorption or a temperature that affects the crystal unit 25 itself. However, the time difference between the sample solution contacting the test crystal resonator 251 and the reference crystal resonator 252 is actually 1 second or less, and is shorter than a few minutes to several tens of the fixed time Tm, so Δfm1 and Δfm2 are The frequency measurement values at the same time may be used.
In acquiring the frequency change amount, the difference Δfm is obtained using only the frequency data between two points (T3 to T4), but the frequency drop amount (Δfm2−Δfm1) is continuously obtained to perform curve fitting. The decrease amount Δfm after a certain time may be obtained by estimation using the above method.
According to the present embodiment, in addition to non-specific adsorption and temperature change, it is possible to perform measurement in which drift based on an unexpected cause is canceled, so that improvement in measurement accuracy can be expected.

本発明により、生体、食品、土壌等の分析対象試料に含有される測定対象物を測定するために有効な測定器具及びこれを用いた測定方法並びに測定装置を提供することができる。   INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to provide a measuring instrument effective for measuring a measurement object contained in a sample to be analyzed such as a living body, food, and soil, a measuring method and a measuring apparatus using the measuring instrument.

(a)は本発明に係る測定器具の基本的構成を示す平面説明図,(b)は(a)中M方向から見た矢視図である。(A) is plane explanatory drawing which shows the fundamental structure of the measuring instrument based on this invention, (b) is the arrow line view seen from M direction in (a). 本発明に係る測定器具の好ましい態様を示す平面説明図、(b)は(a)中M方向から見た矢視図である。Plan explanatory drawing which shows the preferable aspect of the measuring instrument which concerns on this invention, (b) is the arrow line view seen from M direction in (a). 本発明に係る測定器具の検出部位の詳細を示す説明図である。It is explanatory drawing which shows the detail of the detection site | part of the measuring instrument which concerns on this invention. 本発明に係る測定器具の測定原理(1)を示す説明図である。It is explanatory drawing which shows the measurement principle (1) of the measuring instrument which concerns on this invention. 本発明に係る測定器具の測定原理(2)を示す説明図である。It is explanatory drawing which shows the measurement principle (2) of the measuring instrument which concerns on this invention. 本発明に係る測定器具の測定原理(3)を示す説明図である。It is explanatory drawing which shows the measurement principle (3) of the measuring instrument which concerns on this invention. (a)は本発明に係る測定器具を用いた測定方法を示す説明図、(b)はその測定方法を具現化する測定装置を示す説明図である。(A) is explanatory drawing which shows the measuring method using the measuring instrument based on this invention, (b) is explanatory drawing which shows the measuring apparatus which embodies the measuring method. 本発明が適用された測定装置の実施の形態1を示す説明図である。It is explanatory drawing which shows Embodiment 1 of the measuring apparatus to which this invention was applied. 実施の形態1で用いられる測定器具の平面模式図である。3 is a schematic plan view of a measuring instrument used in Embodiment 1. FIG. 実施の形態1で用いられる水晶振動子の等価回路を示す説明図である。3 is an explanatory diagram showing an equivalent circuit of a crystal resonator used in Embodiment 1. FIG. (a)は実施の形態1で用いられるセンサー基板を示す平面説明図、(b)は(a)中M方向から見た矢視図である。(A) is plane explanatory drawing which shows the sensor board | substrate used in Embodiment 1, (b) is the arrow line view seen from M direction in (a). (a)は実施の形態1で用いられる水晶振動子を示す平面説明図、(b)は(a)中M−M線断面説明図である。(A) is plane explanatory drawing which shows the crystal oscillator used in Embodiment 1, (b) is MM sectional view explanatory drawing in (a). 本発明が適用された測定装置の実施の形態2を示す説明図である。It is explanatory drawing which shows Embodiment 2 of the measuring apparatus to which this invention was applied. 実施の形態2で用いられる測定器具の平面模式図である。6 is a schematic plan view of a measuring instrument used in Embodiment 2. FIG. 実施の形態2で用いられる水晶発振回路を示す説明図である。FIG. 6 is an explanatory diagram showing a crystal oscillation circuit used in a second embodiment. 本発明が適用された測定装置の実施の形態3を示す説明図である。It is explanatory drawing which shows Embodiment 3 of the measuring apparatus to which this invention was applied. 実施の形態3で用いられる水晶発振回路を示す説明図である。6 is an explanatory diagram illustrating a crystal oscillation circuit used in Embodiment 3. FIG. 実施の形態3で用いられる水晶発振回路の変形形態を示す説明図である。FIG. 10 is an explanatory diagram showing a modification of the crystal oscillation circuit used in the third embodiment. 実施の形態3で用いられる水晶振動子センサー膜の構成例を示す説明図である。FIG. 10 is an explanatory diagram illustrating a configuration example of a crystal resonator sensor film used in a third embodiment. (a)は実施の形態3に係る測定装置の変形形態1で用いられる測定器具を示す平面模式図、(b)は(a)中M方向から見た矢視図である。(A) is a plane schematic diagram which shows the measuring instrument used with the modification 1 of the measuring apparatus which concerns on Embodiment 3, (b) is the arrow line view seen from M direction in (a). 変形形態1で用いられる2チャンネル型水晶振動子を示す説明図である。FIG. 6 is an explanatory diagram showing a two-channel type crystal resonator used in modification 1. 図21に示す2チャンネル水晶振動子センサー膜の構成例を示す説明図である。It is explanatory drawing which shows the structural example of the 2 channel crystal oscillator sensor film | membrane shown in FIG. 実施の形態3で用いられる測定装置の変形形態2を示す平面模式図、(b)は(a)中M方向から見た矢視図である。The plane schematic diagram which shows the deformation | transformation form 2 of the measuring apparatus used in Embodiment 3, (b) is an arrow view seen from M direction in (a). 変形形態2で用いられる水晶振動子を示す説明図である。10 is an explanatory diagram showing a crystal resonator used in Modification 2. FIG. 本発明が適用された測定装置の実施の形態4で用いられる測定器具を示す平面模式図、(b)は(a)中M方向から見た矢視図である。The plane schematic diagram which shows the measuring instrument used in Embodiment 4 of the measuring apparatus to which this invention was applied, (b) is the arrow line view seen from M direction in (a). 実施の形態4に係る測定器具の変形形態1を示す平面模式図、(b)は(a)中M方向から見た矢視図である。The plane schematic diagram which shows the deformation | transformation form 1 of the measuring instrument which concerns on Embodiment 4, (b) is the arrow line view seen from M direction in (a). 実施の形態4に係る測定器具の変形形態2を示す平面模式図、(b)は(a)中M方向から見た矢視図である。The plane schematic diagram which shows the deformation | transformation form 2 of the measuring instrument which concerns on Embodiment 4, (b) is the arrow line view seen from M direction in (a). 実施の形態4に係る測定器具の変形形態3を示す平面模式図、(b)は(a)中M方向から見た矢視図である。The plane schematic diagram which shows the deformation | transformation form 3 of the measuring instrument which concerns on Embodiment 4, (b) is the arrow line view seen from M direction in (a). 実施の形態4に係る測定器具の変形形態4を示す平面模式図、(b)は(a)中M方向から見た矢視図である。The plane schematic diagram which shows the deformation | transformation form 4 of the measuring instrument which concerns on Embodiment 4, (b) is the arrow line view seen from M direction in (a). 実施例1における水晶振動子上での反応の模式図である。3 is a schematic diagram of a reaction on a crystal resonator in Example 1. FIG. 実施例1における水晶振動子上での典型的な周波数変化を示す説明図である。FIG. 6 is an explanatory diagram illustrating a typical frequency change on the crystal resonator in the first embodiment. 実施例1の測定結果を示す説明図である。FIG. 6 is an explanatory diagram showing measurement results of Example 1. 実施例2における水晶振動子の周波数変化を示す説明図である。FIG. 6 is an explanatory diagram showing a change in frequency of a crystal resonator in Example 2. 実施例3における水晶振動子の周波数変化を示す説明図である。FIG. 6 is an explanatory diagram showing a change in frequency of a crystal resonator in Example 3.

符号の説明Explanation of symbols

1…測定器具,2…フローセル型反応容器,3…流路,4…試料添加部位,5…検出部位,6…圧電振動子,7…磁力発生部材,8…標識体供給部位,9…吸収部位,10…測定対象物,11…トラッパー,12…標識体,12a…磁性粒子,12b…バインダー,12c…測定対象物類似物,13…測定対象物類似物,15…振動数測定手段,16…濃度決定手段
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 ... Measuring instrument, 2 ... Flow cell type | mold reaction container, 3 ... Flow path, 4 ... Sample addition site | part, 5 ... Detection site | part, 6 ... Piezoelectric vibrator, 7 ... Magnetic force generation member, 8 ... Label body supply site, 9 ... Absorption Part: 10 ... Measurement object, 11 ... Trapper, 12 ... Label, 12a ... Magnetic particle, 12b ... Binder, 12c ... Measurement object analogue, 13 ... Measurement object analogue, 15 ... Frequency measuring means, 16 ... Density determination means

Claims (20)

試料中の測定対象物及び測定対象物類似物と磁性粒子とが結合してなる標識体が流路に沿って移動可能なフローセル型反応容器を含む測定器具であって、
フローセル型反応容器の流路には、試料が添加される試料添加部位と、この試料添加部位の下流側に設けられて測定対象物が検出可能な検出部位とを設け、
検出部位は、測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するトラッパーが保持された圧電振動子を有し、磁力発生部材による磁場作用域に前記圧電振動子を配置したものであることを特徴とする測定器具。
A measuring instrument including a flow cell type reaction vessel in which a measurement object in a sample and a label formed by combining a measurement object analog and a magnetic particle are movable along a flow path,
In the flow cell of the flow cell type reaction vessel, a sample addition site to which a sample is added and a detection site that is provided downstream of the sample addition site and is capable of detecting the measurement object are provided.
Detection site, it measurement object and has a piezoelectric vibrator trapper is held to specifically bind to the measurement object analogs is obtained by arranging the piezoelectric vibrator to a magnetic field acting area by the magnetic force generating member Measuring instrument characterized by.
請求項1記載の測定器具において、
フローセル型反応容器の流路のうち少なくとも検出部位の上流側には測定対象物類似物と磁性粒子とが結合してなる標識体が供給される標識体供給部位を備えることを特徴とする測定器具。
The measuring instrument according to claim 1,
A measurement comprising a labeled body supply portion to which a labeled body formed by binding a measurement target substance analog and magnetic particles is provided at least upstream of the detection site in the flow path of the flow cell type reaction container. Instruments.
試料中の測定対象物並びに、測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するバインダーと磁性粒子とが結合してなる標識体が流路に沿って移動可能なフローセル型反応容器を含む測定器具であって、
フローセル型反応容器の流路には、試料が添加される試料添加部位と、この試料添加部位の下流側に設けられて測定対象物が検出可能な検出部位とを設け、
検出部位は、測定対象物類似物が保持された圧電振動子を有し、磁力発生部材による磁場作用域に前記圧電振動子を配置したものであることを特徴とする測定器具。
Measuring object in the sample as well, including the measurement object and the measurement object analogs specifically movable labels binder to bind the magnetic particles formed by bonding along the flow path of a flow cell-type reaction vessel A measuring instrument,
In the flow cell of the flow cell type reaction vessel, a sample addition site to which a sample is added and a detection site that is provided downstream of the sample addition site and is capable of detecting the measurement object are provided.
The detection part has a piezoelectric vibrator holding a measurement object similar substance, and the piezoelectric vibrator is arranged in a magnetic field action region by a magnetic force generating member.
請求項3記載の測定器具において、
フローセル型反応容器の流路のうち少なくとも検出部位の上流側には、測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するバインダーと磁性粒子とが結合してなる標識体が供給される標識体供給部位を備えることを特徴とする測定器具。
The measuring instrument according to claim 3,
A label to which a label formed by binding a binder that specifically binds to a measurement object and a measurement object analog and magnetic particles is supplied at least upstream of the detection site in the flow cell type reaction vessel. A measuring instrument comprising a body supply site.
請求項2又は4記載の測定器具において、
標識体供給部位はフローセル型反応容器の流路のうち試料添加部位の下流側に設けられるものであることを特徴とする測定器具。
The measuring instrument according to claim 2 or 4,
The measuring instrument, wherein the label supply part is provided downstream of the sample addition part in the flow path of the flow cell type reaction vessel.
請求項2又は4記載の測定器具において、
標識体供給部位は試料添加部位を兼ねることを特徴とする測定器具。
The measuring instrument according to claim 2 or 4,
The measuring instrument characterized in that the labeled body supply site also serves as the sample addition site.
請求項1乃至6のいずれかに記載の測定器具において、
フローセル型反応容器の流路のうち検出部位の下流側には、吸収部位を備えることを特徴とする測定器具。
The measuring instrument according to any one of claims 1 to 6,
A measuring instrument comprising an absorption site on the downstream side of the detection site in the flow path of the flow cell type reaction vessel.
請求項1乃至7のいずれかに記載の測定器具において、
圧電振動子が水晶振動子であることを特徴とする測定器具。
The measuring instrument according to any one of claims 1 to 7,
A measuring instrument, wherein the piezoelectric vibrator is a quartz crystal vibrator.
請求項1乃至8のいずれかに記載の測定器具において、
磁力発生部材はフローセル型反応容器の流路外で、且つ、磁力発生部材は圧電振動子のトラッパー又は測定対象物類似物が保持された面とは反対側に設けられることを特徴とする測定器具。
The measuring instrument according to any one of claims 1 to 8,
The magnetic force generating member is provided outside the flow path of the flow cell type reaction vessel, and the magnetic force generating member is provided on the side opposite to the surface holding the trapper of the piezoelectric vibrator or the similar object to be measured. .
請求項1乃至9のいずれかに記載の測定器具において、
フローセル型反応容器は複数の流路を備えることを特徴とする測定器具。
The measuring instrument according to any one of claims 1 to 9,
A flow cell type reaction vessel is provided with a plurality of flow paths.
請求項1乃至10のいずれかに記載の測定器具において、
該流路に予め標識体が移動可能に保持されていることを特徴とする測定器具。
The measuring instrument according to any one of claims 1 to 10,
A measuring instrument, wherein a marker is movably held in the flow path in advance.
請求項1乃至10のいずれかに記載の測定器具及び標識体を含むことを特徴とする測定用キット。   A measuring kit comprising the measuring instrument according to any one of claims 1 to 10 and a marker. 試料中の測定対象物と測定対象物類似物と磁性粒子とが結合してなる標識体とをフローセル型反応容器の流路に沿って移動させ、該流路下流の磁力発生部材による磁場作用域に配置されている圧電振動子上に保持されている測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するトラッパーに供給し、トラッパー−標識体からなる複合体を生成させる工程と、
圧電振動子上に生成したトラッパー−標識体からなる複合体の量を、圧電振動子に磁場を発生させた状態で圧電振動子の振動数の変化量として測定する振動数測定工程と、
この振動数測定工程で測定した圧電振動子の振動数の変化量と予め既知濃度の試料を用いて作成した検量線とから試料中の測定対象物の濃度を決定する濃度決定工程とを備えたことを特徴とする測定方法。
The measurement object in the sample and the label formed by combining the measurement object analogue and the magnetic particles are moved along the flow path of the flow cell type reaction vessel, and the magnetic field action by the magnetic force generation member downstream of the flow path. Supplying a trapper that specifically binds to a measurement object and a measurement object analog held on a piezoelectric vibrator disposed in a region, and generating a trapper-labeled complex;
A frequency measurement step of measuring the amount of the trapper-marker complex generated on the piezoelectric vibrator as a change in the frequency of the piezoelectric vibrator in a state where a magnetic field is generated in the piezoelectric vibrator;
A concentration determination step for determining the concentration of the measurement object in the sample from the amount of change in the vibration frequency of the piezoelectric vibrator measured in the frequency measurement step and a calibration curve prepared in advance using a sample of a known concentration; A measuring method characterized by the above.
試料中の測定対象物と、測定対象物および測定対象物類似物に特異的に結合するバインダーと磁性粒子とが結合してなる標識体とをフローセル型反応容器の流路に沿って移動させ、該流路下流の磁力発生部材による磁場作用域に配置されている圧電振動子上に保持されている測定対象物類似物に供給し、測定対象物類似体−標識体からなる複合体を生成させる工程と、
圧電振動子上に生成した測定対象物類似物−標識体からなる複合体の量を、圧電振動子に磁場を発生させた状態で圧電振動子の振動数の変化量として測定する振動数測定工程と、
この振動数測定工程で測定した圧電振動子の振動数の変化量と予め既知濃度の試料を用いて作成した検量線とから試料中の測定対象物の濃度を決定する濃度決定工程とを備えたことを特徴とする測定方法。
Move the measurement object in the sample, and the label formed by binding the magnetic particles with the binder that specifically binds to the measurement object and the measurement object analog, along the flow path of the flow cell type reaction vessel, Supply to the measurement object analog held on the piezoelectric vibrator arranged in the magnetic field action region by the magnetic force generation member downstream of the flow path, and generate a complex consisting of the measurement object analog-labeled body Process,
A frequency measurement process for measuring the amount of the complex consisting of the measurement object analog-labeled body generated on the piezoelectric vibrator as a change amount of the vibration frequency of the piezoelectric vibrator in a state where a magnetic field is generated in the piezoelectric vibrator. When,
A concentration determination step for determining the concentration of the measurement object in the sample from the amount of change in the vibration frequency of the piezoelectric vibrator measured in the frequency measurement step and a calibration curve prepared in advance using a sample of a known concentration; A measuring method characterized by the above.
請求項13又は14記載の測定方法において、
該複合体を生成させる工程と振動数測定工程との間にさらに複合体を洗浄する工程を含むことを特徴とする測定方法。
The measurement method according to claim 13 or 14,
The measuring method characterized by including the process of further wash | cleaning a composite_body | complex between the process of producing | generating this composite_body | complex, and a frequency measurement process.
請求項13乃至15のいずれかに記載の測定方法において、
試料と標識体とをフローセル型反応容器の流路に沿って移動させ、該流路下流に配置されている圧電振動子上に保持されているトラッパー又は測定対象物類似物に供給するに際して、試料と標識体とを同時又は前後して順に流路に添加することを特徴とする測定方法。
The measurement method according to any one of claims 13 to 15,
When the sample and the label are moved along the flow path of the flow cell type reaction vessel and supplied to the trapper or the measurement object analog held on the piezoelectric vibrator arranged downstream of the flow path, the sample And the labeled body are added to the flow path simultaneously or before and after and sequentially.
請求項13乃至15のいずれかに記載の測定方法において、
標識体がフローセル型反応容器の流路に予め保持されており、試料の添加により共に移動することを特徴とする測定方法。
The measurement method according to any one of claims 13 to 15,
A measuring method, wherein a labeling body is held in advance in a flow path of a flow cell type reaction vessel and moves together by adding a sample.
請求項13乃至17のいずれかに記載の測定方法において、
圧電振動子が水晶振動子であることを特徴とする測定方法。
The measurement method according to any one of claims 13 to 17,
A measuring method, wherein the piezoelectric vibrator is a quartz crystal vibrator.
請求項1乃至11のいずれかに記載の測定器具又は請求項12記載の測定用キットと、
この測定器具の圧電振動子の振動数を測定する振動数測定手段とを備えたことを特徴とする測定装置。
A measuring instrument according to any one of claims 1 to 11 or a measuring kit according to claim 12,
A measuring apparatus comprising: a frequency measuring means for measuring a frequency of a piezoelectric vibrator of the measuring instrument.
請求項19記載の測定装置において、
さらに該振動数測定手段で測定した圧電振動子の振動数の変化量と予め作成した検量線とから試料中の測定対象物の濃度を決定する濃度決定手段を備えたことを特徴とする測定装置。
The measuring device according to claim 19, wherein
And a concentration determining means for determining the concentration of the measurement object in the sample from the amount of change in the vibration frequency of the piezoelectric vibrator measured by the frequency measuring means and a calibration curve prepared in advance. .
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Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0708346D0 (en) * 2007-04-30 2007-06-06 Attana Ab Sensor
WO2009072457A1 (en) * 2007-12-03 2009-06-11 Tokyo Institute Of Technology Biosensing method using coated magnetic microparticles and biosensing device to be used in the method
JP5160583B2 (en) * 2009-06-16 2013-03-13 日本電波工業株式会社 Sensing device and sensing method
JP5160584B2 (en) * 2009-06-24 2013-03-13 日本電波工業株式会社 Sensing device
JP5240794B2 (en) 2009-06-30 2013-07-17 日本電波工業株式会社 Sensing device
JP5491111B2 (en) * 2009-09-17 2014-05-14 セイコー・イージーアンドジー株式会社 Micro sensing device
WO2011102065A1 (en) * 2010-02-17 2011-08-25 株式会社 村田製作所 Method of detection using mass detection sensor
JP5102334B2 (en) * 2010-06-25 2012-12-19 日本電波工業株式会社 Sensing device
US9086338B2 (en) 2010-06-25 2015-07-21 Nihon Dempa Kogyo Co., Ltd. Sensing device
JP2013238541A (en) * 2012-05-16 2013-11-28 Toshiba Corp Optical waveguide type measurement system and measurement method for glycosylated hemoglobin
JP2014006208A (en) * 2012-06-27 2014-01-16 Nippon Dempa Kogyo Co Ltd Sensing method
JP6216627B2 (en) * 2013-11-25 2017-10-18 日本電波工業株式会社 Sensing method
JP2015025820A (en) * 2014-11-04 2015-02-05 株式会社東芝 Optical waveguide type measurement system and measurement method for glycosylated hemoglobin
JP6582046B2 (en) * 2015-05-29 2019-09-25 京セラ株式会社 Detection method and detection apparatus
US11079370B2 (en) * 2015-07-30 2021-08-03 Kyocera Corporation Measurement method and measurement device

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002162399A (en) * 2000-11-22 2002-06-07 Hitachi Ltd Method and device for analyzing sample
WO2004001416A1 (en) * 2002-06-19 2003-12-31 Biosensor Applications Sweden Ab (Publ) Coated metal surface on solid support useful in analyte detection by displacement
WO2005015217A1 (en) * 2003-08-11 2005-02-17 Kyowa Medex Co., Ltd. Tool for measuring object to be measured, measuring device, and measuring method

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4847193A (en) * 1987-06-18 1989-07-11 Gene-Trak Systems Signal amplification in an assay employing a piezoelectric oscillator
FR2679660B1 (en) * 1991-07-22 1993-11-12 Pasteur Diagnostics METHOD AND MAGNETIC DEVICE FOR IMMUNOLOGICAL ANALYSIS ON A SOLID PHASE.
JPH0552849A (en) * 1991-08-28 1993-03-02 Terumo Corp Specific detection and separation method for sample
DE4342942A1 (en) * 1993-12-16 1995-06-22 Boehringer Mannheim Gmbh Device and method for generating optically detectable signals by applying electrical potentials to sample liquids
JP3338551B2 (en) * 1994-03-17 2002-10-28 塩野義製薬株式会社 Method for measuring human serum albumin
JPH0875628A (en) * 1994-09-09 1996-03-22 Nippon Steel Corp Flow cell for continuous measurement of adsorbate amount in fluid

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002162399A (en) * 2000-11-22 2002-06-07 Hitachi Ltd Method and device for analyzing sample
WO2004001416A1 (en) * 2002-06-19 2003-12-31 Biosensor Applications Sweden Ab (Publ) Coated metal surface on solid support useful in analyte detection by displacement
WO2005015217A1 (en) * 2003-08-11 2005-02-17 Kyowa Medex Co., Ltd. Tool for measuring object to be measured, measuring device, and measuring method

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