JP4565057B2

JP4565057B2 - イムノグロブリンａ誘導能の高い新規乳酸菌

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Description

イムノグロブリンＡの誘導能が高く、免疫賦活能を有する新規乳酸菌及び当該乳酸菌を含む乳酸菌製剤。

生体は、呼吸や飲食という生命活動の維持ために不可欠な生理的行為によって、絶えず外来性の異物（抗原物質）を体内に取り込んでいる。従って、生体の呼吸器官や消化器官の表面は常に抗原物質に曝されていることになり、そこには病原性を有した細菌やウイルス、花粉や食物由来のアレルギー物質等も含まれている場合もある。言い換えれば、生体は、呼吸器官や消化器官の表面で病原性の微生物やアレルギー物質等の侵入に絶えず曝されていることになる。
そこで侵入してくる様々な抗原物質に対して、善玉性、悪玉性を識別して必要に応じて排除する免疫応答システムが、生体には備わっている。その最前線の防御機構として呼吸器官や消化器官の表面に備わっている免疫システムが粘膜免疫である。
粘膜免疫システムの主役として、体内への病原微生物の付着防止やアレルギー物質の侵入、吸収を防ぐ役割を担う物質が、免疫グロブリンの１種であるイムノグロブリンＡ（以下「ＩｇＡ」ともいう。）である。
ＩｇＡは、細菌やウイルスの中和、生体組織への付着抑制、食物抗原等によるアレルギーの抑制に重要な役割を果たしており、ＩｇＡの誘導組織として腸管内にはパイエル板が存在する。
乳幼児や老人、体力が低下した人は免疫力が弱くなっており、病原菌など外部からの異物に対する抵抗力が低いことが知られている。これ以外にも、近年人は、生活環境の変化等によるストレスが原因で腸管粘膜免疫が低下し、アレルギー性疾患が非常に増加しているとの報告がなされている。（非特許文献１）
従って、生体粘膜からのＩｇＡ産生を増強することが出来れば、腸管等の粘膜表面の免疫力を高めることができ、病原微生物の感染やアレルギーの発症を効果的に予防できるものと考えられる。

一方、畜産分野において家畜は、人類への動物性たんぱく質の供給という使命の下、経済動物としての立場で飼育され、体重の増加や育成率の向上等いわゆる生産性を重視した飼育形態が従来から取られてきた。また、生産性向上という目的のみならず、畜産物として食品衛生レベルの向上という観点から、疾病の発生防止等の目的で、ワクチン接種や抗菌性物質の飼料添加が積極的に行われてきた。
近年の畜産経営は、このような飼育形態に加え、機械化による効率化と多頭飼育によるスケールメリットを生かして経済性を追求する、大規模な経営形態へと転換してきている。
したがって近年の畜産経営は、安定した低価格の畜産物の供給を人々にもたらした一方で、家畜には、飼育面積の不足やワクチン等の注射を受ける機会が多いなど、ストレスのかかりやすい環境下で、飼育していることも事実である。
このような状況に加え、昨今の畜産は、生体の免疫作用を抑制する病原ウイルスの出現により、大腸菌などの細菌の二次感染症の発生が増加している。（非特許文献２）
畜産において下痢などの疾病の発生は、事故率の増加や増体率の低下を招き、生産性の低下をもたらす。特に幼畜は疾病にかかりやすく、罹患した場合の経済的損出は大きいことから疾病の発生を極力防止することが重要であるが、抗生物質の使用は、耐性菌の出現等の危惧から制限される方向にあり、畜産家は頻発する疾病の対応に非常に苦慮しているのが現状である。畜産家からは、抗生物質の代替となる天然物質由来の抗菌性様作用を持った飼料や飼料添加物の開発が待ち望まれている。

このような問題を解決するために、天然物質の中から、生体の免疫力をアップさせ、抵抗力を高める作用を持つ安全な物質を見つけ出し、食品や飼料あるいは医薬品として用いることができれば、きわめて有用なことである。ＩｇＡは粘膜表面の免疫機構の中枢を担う物質なので、ＩｇＡの産生量を向上させ、生体の免疫能を活性化させうる食品や飼料の開発が望まれている。

ところで、乳酸菌はプロバイオティクス効果を有することが古くから知られており、その効果の１つとして、菌体が免疫賦活作用を持つことが知られている。（非特許文献３）
畜産分野においても、乳酸菌が有する免疫賦活効果が病気に対する抵抗性を高めることに着目した利用研究が数多くなされている。（非特許文献７）
免疫賦活作用の１つであるＩｇＡの産生を誘導する乳酸菌としては、植物由来のラクトバチルス属、ロイコノストック属、ペディオコッカス属乳酸菌の他、ビフィズス菌（特許文献１、２）やエンテロコッカス属菌（特許文献３〜５）の報告がある。
一般に植物由来乳酸菌の場合、ヒトなど動物体内での定着率は高いとはいえず、ビフィズス菌は、偏性嫌気性菌であるため、培養条件として嫌気培養という特殊な環境を必要とする。また、培地成分として、特殊なアミノ酸やビタミン類、金属イオン等の栄養素を要求する菌株も存在し、培養用の人工培地は複雑な組成となってしまう。（非特許文献４）更に、偏性嫌気性菌であるため、酸素が存在する通常の環境下では生育できず、製剤とした場合の生存性や安定性に難点がある。

それに対して、エンテロコッカス属の乳酸菌は、哺乳動物の腸内に存在する乳酸菌である。通性嫌気性菌であり、ビフィズス菌のような特殊な培養条件を必要とせず、比較的簡単な培地組成でも増殖する菌種であることから大量培養に適している。また、酸素の存在下で生育できるので、通常の環境下での生存性や安定性はビフィズス菌に比べ高い。また、もともと哺乳動物の腸内に存在する乳酸菌であることから、ヒトや動物に経口投与した場合でも、他の植物性の乳酸菌類に比べ腸内定着率が高いであろうと予測される。
そして、エンテロコッカス属菌は、すでに一部の菌株が免疫賦活作用を有することや、薬剤耐性菌の感染防除剤として用いることが知られており（特許文献３〜５）、ＩｇＡ産生増加による免疫賦活能を有する菌株（特許文献５）も報告され免疫活性剤、抗癌剤、各種アレルギー製剤等が提案されている。
しかし、特許文献５の乳酸菌製剤に用いられたエンテロコッカス属乳酸菌はエンテロコッカス・フェカリスであるが、その菌株が誘導するＩｇＡ産生量は、陰性対象のたかだか２倍にも満たないものであり十分とはいえない。
エンテロコッカス属菌の１種であるエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)も、従来から整腸剤や飼料添加物として広く使用されている菌種であって、安全性や腸内への定着性に問題はなく、その大量培養技術も確立していることから、免疫賦活性の乳酸菌製剤として医薬品や食品、飼料に用いることができれば、安全性や免疫機能向上効果と共に経済性の面からも極めて有効であるとして、有望視されている乳酸菌の１つである。
しかしながら、エンテロコッカス・フェシウムについては、まだＩｇＡ産生誘導と関連づけた報告はほとんどない。特許文献６，７には、エンテロコッカス・フェシウムＩｇＡ産生誘導作用があることについては明記されているものの、ＩｇＡ産生能として実際に確認されているのは、パイエル板の性状変化（ＩｇＡ抗体）からの間接的な確認のみで、定量的な有効性の検証がなされておらず、そのＩｇＡ産生誘導能自体も十分なものとはいえない。
また、上記のいずれのエンテロコッカス属乳酸菌についても病原物質の定着抑制効果や家畜の生産性の向上効果をふまえた免疫賦活作用効果の検証は行われておらず、その有効性の検討が不十分である。

特開２００７−３０８４１９号公報特開平２−２８００５９号公報特許第３１５１４４２号公報特開２００６−８９４２１号公報特開平１１−９２３８９号公報特開２００３−１１３１１４号公報特開２００６−６７８８１号公報吉開泰信編「粘膜免疫学の最前線」 116〜129頁医歯薬ジャーナル社発行石川弘道著「現場の豚病対策」 13〜16頁有限会社ベネット発行光岡智知足編「腸内フローラと感染・免疫」 156〜158頁学会出版センター発行細野明義編「発酵乳の科学」 217〜223頁アイ・ケイコーポレーション発行薬学雑誌・第112巻・第12号 919〜925頁, 1992年モダンメディア・第５２巻・第７号 209〜216頁，2006年上野川修一監修「乳酸菌の保健機能と応用」 306〜312頁シーエムシー出版

本発明の課題は、高いＩｇＡ産生誘導能を有し、免疫賦活活性の高いエンテロコッカス属に属する新規な乳酸菌の菌株を見出すことと共に、腸内定着率の高い、優れた食品、飼料用又は医薬品用に用いることのできる乳酸菌製剤を提供することである。

そこで本発明者らはエンテロコッカス属菌より、ＩｇＡ産生誘導能を有する菌株のスクリーニングを行い、鋭意研究を進めた結果、高いＩｇＡ産生誘導能を有するエンテロコッカス属に属する新規乳酸菌株、エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡを見出した。
本発明のＮＨＲＤＩＨＡＲＡ（ＦＥＲＭＢＰ−１１０９０）は、その菌学的性質（表１）及びｒ−ＲＮＡの配列検索により、エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)に属する新規乳酸菌であることが確定され、そのＩｇＡ誘導機能も既知のエンテロコッカス・フェシウムと比較し、格段に優れていることを見出し、本発明を完成させた。
さらに、本発明者らは、本発明のＮＨＲＤＩＨＡＲＡを乳酸菌製剤として、腸内での病原物質の定着抑制効果、及び家畜の生産性を向上させる効果が極めて優れたものであることを確認し、本発明の乳酸菌製剤を用いた食品、飼料、免疫力増強剤などの係る本発明も完成させた。

すなわち、本発明は、以下のとおりのものである。
〔１〕エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ（ＦＥＲＭＢＰ−１１０９０）。
〔２〕体内におけるイムノグロブリンＡの産生を増進し、病原性細菌の増殖を抑制する乳酸菌である前記〔１〕に記載の菌株。
〔３〕前記〔１〕又は〔２〕に記載の菌株の培養物、その抽出物、又はその菌体処理物を含んでなる、体内のイムノグロブリンＡ産生の増進活性を有する乳酸菌製剤。
〔４〕体内のイムノグロブリンＡ産生の増進活性を有する他の乳酸菌、乳酸菌製剤、ビフィズス菌、ビフィズス菌製剤、その他の微生物、その他の微生物製剤をさらに含んでなる、前記〔３〕に記載の乳酸菌製剤。
〔５〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤を体内のイムノグロブリンＡの産生増進のための有効成分として含む飲食品用添加剤。
〔６〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤を体内のイムノグロブリンＡの産生増進のための有効成分として含む飲食品。
〔７〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤を体内のイムノグロブリンＡの産生増進のための有効成分として含む飼料用添加剤。
〔８〕前記飼料用添加剤が、家畜の体重増加、増体向上又は事故率の低下のための添加剤である前記〔７〕に記載の飼料用添加剤。
〔９〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤を体内のイムノグロブリンＡの産生増進のための有効成分として含む飼料。
〔１０〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤と薬学上許容される担体又は添加剤とを含んでなる、ヒト又は動物用の免疫機能向上剤。
〔１１〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤と薬学上許容される担体又は添加剤とを含んでなる、ヒト又は動物用の感染症予防又は治療用医薬組成物。
〔１２〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤を用いることを特徴とする、家畜の体重を増加させる方法。
〔１３〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤を用いることを特徴とする、家畜の増体を向上させる方法。
〔１４〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤を用いることを特徴とする、家畜の事故を低下させる方法。
〔１５〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤を用いることを特徴とする、動物（ヒトを除く）の免疫機能を向上させる方法。
〔１６〕前記〔３〕又は〔４〕に記載の乳酸菌製剤を用いることを特徴とする、動物（ヒトを除く）の感染症の発生を抑制させる方法。

本発明における新規な乳酸菌株である、エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ（ＦＥＲＭＢＰ−１１０９０）は、高いＩｇＡ産生誘導能を有しており、腸内での定着率も高く免疫賦活活性も高いので、乳酸菌製剤として食品、飼料などに添加することで、ヒトや家畜などの動物の免疫力を向上させる効果がある。また、免疫機能向上剤、感染症の予防及び治療のための医薬組成物として用いることができる。

図１Ａは、マウスパイエル板細胞からのＩｇＡ産生促進作用を示し、スクリーニング時の各種菌株からのＩｇＡ産生量である。なお、陽性対照（ＬＰＳ）は、無添加の場合を示す。なお、各数値は、別々のマウスのパイエル板を用いて、３回反復以上測定しその平均値を求めた。図１Ｂは、マウスパイエル板細胞からのＩｇＡ産生促進作用を示し、図１Ａのうち、本菌株と共に、同じエンテロコッカス・フェシウムに属する他の菌株、エンテロコッカス属の他の種に属する菌株を、それぞれ比較例１〜５，及び比較例６〜８として抜き出して図示した。比較例１（ＮＨＲＤ４４）、比較例２（ＮＨＲＤ８８）、比較例３（ＮＨＲＤ９９）、比較例４（ＮＨＲＤ１０２）、比較例５（ＮＨＲＤ１０４）、比較例６（ＮＨＲＤ１９９）、比較例７（ＮＨＲＤ３２６）、比較例８（市販生菌剤）参照例：特許文献５実施例１（エンテロコッカス・フェカリスＮＦ−１０１１）なお、各数値は、別々のマウスのパイエル板を用いて、３回反復以上測定しその平均値を求めた。図２は、マウスに本菌株を経口投与した場合のＩｇＡ産生量を示す。（１）コントロール群１（エンテロコッカス・フェシウム未投与群）（２）コントロール群２（実施例３でＳ．Ｉ．が１前後だったエンテロコッカス・フェシウム投与群）（３）エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ乾燥生菌体投与群（ＬＡ）（４）エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ乾燥死菌体投与群（ＬＡＤ）図３は、ブタパイエル板細胞からのＩｇＡ産生促進作用を示す。ここで、比較例１〜８は、図１と同一菌株であり、さらにエンテロコッカス属の他の菌株（エンテロコッカス・フェカリス）についての比較例９〜１３を図示した。比較例９（ＮＨＲＤ４２）、比較例１０（ＮＨＲＤ５４）、比較例１１（ＮＨＲＤ６４）、比較例１２（ＮＨＲＤ２４８）、比較例１３（ＮＨＲＤ２４９）。なお、各数値は、別々のブタのパイエル板を用いて、３回反復以上測定しその平均値を求めている。図４は、本菌株のＩｇＡ産生誘導能を、畜産分野で市販されている乳酸菌製剤、その他の微生物製剤と比較したものである。なお、各数値は、別々のブタのパイエル板を用いて、３回以上反復測定しその平均値を求めている。ここで、市販品１はバチルス・サブチルス、市販品２はクロストリジウム・ブチリカム、市販品３はバチルス属、市販品４はラクトバチルス属微生物、市販品５はエンテロコッカス・フェシウム、市販品６クロストリジウム・ブチリカム及び市販品７はエンテロコッカス・フェカリスである。図５Ａは、養豚を１２００頭ずつに分けた試験群とコントロール群において、ＩｇＡ量の平均値を測定し、試験終了までの変化を比較したものである。ここで、それぞれの試験群から１０頭ずつを選び出し、糞便中のＩｇＡ量を測定した平均値である。 ■が試験群、◆がコントロール群である。図５Ｂは、養豚を１２００頭ずつに分けた試験群とコントロール群において、ＩｇＡ量の平均値を測定し、試験終了までの変化を比較したものである。ここで、それぞれの試験群から１０頭ずつを選び出し、血清中のＩｇＡ量を測定した平均値である。 ■が試験群、◆がコントロール群である。図６Ａは、実際の養豚場における６５日後のＥＴＥＣの感染率を示したものである。養豚を１２００頭ずつに分けて試験群とコントロール群とし、試験群には、ＥＴＥＣ感染と同時に１日１頭あたり本菌株の生菌１０^１０個を投与し、耐熱性エンテロトキシン（ＳＴ）遺伝子の糞便中からの検出量の平均値を測定し、６５日後の感染率を測定したものである。図６Ｂは、実際の養豚場における６５日後のＥＴＥＣの事故率を示したものである。養豚を１２００頭ずつに分けて試験群とコントロール群とし、試験群には、ＥＴＥＣ感染と同時に１日１頭あたり本菌株の生菌１０^１０個を投与し、６５日後の事故率を測定したものである。図７Ａは、図６Ａ及び図６Ｂと同様の試験群、コントロール群に対して体重増加率の変化を示した。図７Ｂは、図６Ａ及び図６Ｂと同様の試験群、コントロール群に対して増大量の変化を示した。図８は、同じエンテロコッカス・フェシウムに属するＩＳ−１株（特許文献５）との１６ｓｒＲＮＡ遺伝子の５’末端から１５１１番目の塩基までについての相同性を示すものである。（９９．７％の相同性）

１．本発明に係る微生物
本発明による新規微生物はエンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡであり、この菌株はエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)に属する乳酸菌であり、日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６にある独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（ＡＩＳＴ）に、平成２０年６月６日付でエンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤ８９の菌株名で寄託番号ＦＥＲＭＰ−２１５９２として国内寄託され、平成２１年２月２日付で菌株名がエンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡに改められて、ブダペストの国際寄託当局に移管され、国際寄託番号ＦＥＲＭＢＰ−１１０９０として国際寄託されている。

＜菌学的性質＞
本発明によるエンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡの菌学的性状は表1のとおりとなる。
本菌株は特定の糖類（Ｌ-キシロース、メリビオース）に対する資化性が、定型的なエンテロコッカス・フェシウム；ＪＣＭ５８０４基準株と相違し、更に（ラフィノース、D-ソルビトール）に対する資化性が、特開２００６−６７８８１号広報において使用されているエンテロコッカス・フェシウムＩＳ−1株と相違している。

本菌株と前記エンテロコッカス・フェシウムＩＳ−１及び定型的なエンテロコッカス・フェシウムＪＣＭ５８０４基準株との菌学的性質を比較すると表２のとおりになる。

＜菌学的同定＞
上記した菌学的性質及び１６ｓｒＲＮＡ遺伝子の５’末端から１５１１番目の塩基までについてシーケンスした結果エンテロコッカス・フェシウム標準菌株と９９．７％の相同性があったことから、本発明の菌株はエンテロコッカス・フェシウムと同定された。
エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡのＤＮＡシーケンスデータ（１６ｓｒＲＮＡ遺伝子の５’末端の塩基から１５１１番目までの塩基配列)は下記のとおりである（配列番号１）。
GACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGTACGCTTCTTTTTCCACCGGAGCTTGCTCCACCGGAAAAAGAAGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCATCAGAAGGGGATAACACTTGGAAACAGGTGCTAATACCGTATAACAATCGAAACCGCATGGTTTTGATTTGAAAGGCGCTTTCGGGTGTCGCTGATGGATGGACCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCCACGATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGAAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAAGAACAAGGATGAGAGTAACTGTTCATCCCTTGACGGTATCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAAATATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGATAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGGGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTTGACCACTCTAGAGATAGAGCTTCCCCTTCGGGGGCAAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAGCAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGGAAGTACAACGAGTTGCGAAGTCGCGAGGCTAAGCTAATCTCTTAAAGCTTCTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTATAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTTGGAGCCAGCCGCCTAAGGTGGGATAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAA(1511塩基)を有する。

＜菌株のタイピング＞
本菌株を、菌株毎に複数の遺伝子の配列の差異をパターン化して解析するmultilocus sequence typing（ＭＬＳＴ法）(非特許文献４)によってタイピングを行った。すなわち、公共のＭＬＳＴ法データベース(MLST.net)を使用して、エンテロコッカス・フェシウム内でタイピングを行ったところ、表３のとおりとなった。このＭＬＳＴタイプのエンテロコッカス・フェシウムは、当データベースに登録されていない新規な菌株であった。

＜培養法・分離法＞
本発明による菌株エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡは、広く自然界に生育する乳酸菌であり、家畜等の動物糞、各種食品、土壌等を分離源とでき、菌体の培養法、分離法に特に制限はない。培地は、該菌用であれば特に制限はなく、天然培地、合成培地、半合成培地などの培地に培養することができる。培地としては、窒素源及び炭素源を含有するものが用いられる。窒素源の具体例としては、肉エキス、ペプトン、大豆粉、大豆加水分解物、グルテン、カゼイン、酵母エキス、アミノ酸等が挙げられ、炭素源の具体例としては、グルコース、フラクトース、ラクトース、ソルビトール、イノシトール、水飴、麹汁、澱粉、バカス、フスマ、糖蜜、等が挙げられる。このほか、無機質として、例えば硫酸アンモニウム、リン酸カリウム、塩化マグネシウム、食塩、炭酸カルシウム、鉄、マンガン、モリブデン更に各種ビタミン類その他を添加することができる。
培養温度は１０〜５０℃、更に好ましくは２５〜４５℃であり、培養時間は６〜３６時間程度であり、通気振盪、通気撹拌してもよい、培地のｐＨは３〜１０好ましくは５〜７である。
分離法は、例えば培養終了後、菌体を採取し遠心分離などの手段により上清を除き、蒸留水もしくは生理食塩水を加え、必要によりこの操作を繰り返し、遠心分離又は濾過等により菌体を採取する。

２．本発明の乳酸菌製剤について
本発明による乳酸菌製剤は、生菌又は発酵物としての利用形態をも含むものであり、培養液ごとそのまま、もしくは濃縮して用いることができ、菌体のみを分離し、生菌体、死菌体として、又は菌体を加熱、乾燥、凍結、磨砕、溶菌、抽出などの処理をした処理物として用いることもできる。
具体的には、本発明による単離した生菌体をそのまま使用し、又は乳製品、果実類、穀物又はこれらの加工物（食品）にこの生菌を付与し乳酸発酵させた状態の発酵物（処理物）として利用することができる。
また、本発明による乳酸菌製剤は、単離した菌体を、加熱、紫外線照射、ホルマリン処理等により不活性化して投与に適した剤形にすることもできる。分離された生菌体、死菌体はさらに摩砕、破砕処理し、得られた処理物を必要により加熱滅菌、無菌濾過した後に、その濾液を凍結乾燥して製剤とすることもできる。菌体の処理物は、例えば、上記摩砕物、破砕物、それらからの抽出液、凍結乾燥品等の形態が挙げられる。

本発明の乳酸菌製剤は単体でも使用することができるが、他の乳酸菌製剤、ビフィズス菌製剤、その他の微生物製剤等と混合して使用することもできる。
乳酸菌製剤の具体例としては、ラクトバチルス(Lactobacillus)属、ストレプトコッカス（Streptococcus）属、ラクトコッカス（Lactococcus）属、ロイコノストック（Leuconostoc）属、ペディオコッカス（Pediococcus）属、エンテロコッカス(Enterococcus)属等が挙げられる。ビフィズス菌製剤の具体例としてはビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属のビフィズス菌製剤があげられる。その他の微生物製剤の具体例としてはバチルス(Bacillus）属、クロストリジウム（Clostridium）属、酵母、及び真菌製剤が挙げられる。
また、本発明による乳酸菌製剤は、乳酸菌製剤同士の混合のみならず、本発明による乳酸菌と他の微生物とを共培養した形態のものをも包含する。さらに、本発明による乳酸菌製剤は、本発明による乳酸菌と他の免疫力を高める物質とを混合して免疫力を相乗的に高めた製剤をも包含する。

３．本発明の乳酸菌製剤の用途
本発明の乳酸菌製剤は、ＩｇＡ産生誘導能が高いだけでなく、腸内での定着率も高いため、ヒトや家畜への経口投与により免疫力増進をはかることができるので、ＩｇＡ産生増進のための有効量を、各種飲食品や家畜、家禽、養殖用魚介類又はペット用の飼料に直接混合するか、食品用添加剤、又は飼料用添加剤などに加工して、用いることができる。特に家畜用飼料に用いた場合、家畜の体重増加、増体及び事故率の低下に多大な効果を奏することができる。また、免疫機能向上剤として、さらにヒト又は動物用の感染症の予防及び治療のための医薬組成物として用いることができる。
ここで、ヒト又は動物の感染症としては、例えば、消化器感染症、呼吸器感染症(下痢、肺炎、発熱など)などがあり、その原因として典型的な病原菌は、病原性大腸菌やサルモネラ属菌などの細菌、インフルエンザなどのウイルス、その他マイコプラズマや寄生虫、原虫などがある。
例えば家畜用に投与する場合は、直接経口投与する方法及び飼料や飲水に混合してから投与する方法が典型的であるが、飼料中に添加する投与方法が好ましい。
本発明の乳酸菌製剤を食品に添加する場合には、基本的には全ての食品が対象となり、例えば、穀類製品、豆類製品、肉製品、水産加工品、乳製品、菓子類、清涼飲料等があげられる。

本発明の「乳酸菌製剤」は、食品、飼料に対して直接添加する場合の他、ＩｇＡ産生増進のための有効成分として、食品用添加剤、飼料用添加剤中に、又は免疫機能増強剤、もしくは感染症予防・治療剤中に用いることもできるので、以下、これらの場合について使用形態、使用量などを具体的に述べる。

本発明による乳酸菌製剤は、経口及び非経口（例えば、直腸投与、経皮投与）のいずれかの投与経路で、ヒト又は動物に投与することができる。
製剤としては菌体を培養後、菌体のみを分離濃縮後、乾燥した菌体原末をそのまま製剤とすることもでき、又米糠油かす、小麦粉、ブドウ糖、無水ケイ酸、フスマ等、飼料安全法で許可されている任意の賦形剤と混合した製剤とすることができる。さらに有効成分として培養した培養液を、残渣も含めて濃縮乾燥した菌体含有物を用いることもできる。本発明による乳酸菌製剤は、投与経路に応じた適切な剤形として提供されることが好ましい。例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、丸剤、細粒剤、トローチ錠等の経口剤、直腸投与剤等があげられる。

乳酸菌製剤としての効果をより確実なものとするために、例えば、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤化剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤等、の薬学上許容される担体又は添加剤を適宜選択し、組み合わせることによって製造することが望ましい。使用可能な無毒性の上記添加剤は、例えば乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース又はその塩、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、シロップワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウム等が挙げられる。
賦形剤としては、例えば、乳糖、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、白糖等の糖類、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン等のデンプン類、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、沈降炭酸カルシウム等の無機塩類等があげられる。
崩壊剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、部分アルファー化デンプン等のデンプン類、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニルピロリドンを架橋構造にした、その他合成高分子類等があげられる。
結合剤としては、例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム等の高分子類等があげられる。滑沢剤としては、例えば、タルク、ロウ類、軽質無水ケイ酸等の天然物由来及びその誘導体等、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム、ショ糖脂肪酸エステル糖の脂肪酸及びその金属塩類等があげられる。なお、錠剤には他にマクロゴール等の高分子化合物が適宜使用される。
上記の粉末製剤にはさらに賦形剤粉末を添加してもよい。賦形剤としては、脱脂米糠、大豆粉、フスマ、もみがら粉、炭酸カルシウム、糖、澱粉、ビール酵母、小麦粉等、飼料安全法で認可されている任意の賦形剤があげられる。これらの賦形剤は１種のみならず２種以上併用してもよい。

本発明による乳酸菌製剤の投与量は、ＩｇＡ産生増進のための有効量であり、具体的には菌体数として１０^８〜１０^１２個、好ましくは１０^１０個相当量が投与されればよい。乳酸菌製剤中の本発明の乳酸菌含有量は、乾燥菌体重量に換算して０．０５〜５０ｍｇ／ｇ、好ましくは５ｍｇ／ｇに設定し、投与するヒト又は動物の症状や年齢、性別等を考慮し、ＩｇＡ産生増進のための有効量の範囲内で適宜決定すればよい。

以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。
なお、本明細書中に引用された先行文献中の記載内容は、本明細書の記載として参照されるものとする。

（実施例１）
本発明のエンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡのスクリーニング
家畜糞及び畜産食品を滅菌生理食塩水で１０倍に希釈した溶液１０μｌを、ＢＬ寒天培地で３日間培養後、４００種の乳酸菌のコロニーを分離し、各コロニーを形成する菌株をＮＨＲＤ１〜４００と一応命名した。なお、ここで、乳酸菌とはグラム陽性で、カタラーゼを産生しない嫌気性菌で培地中に酸を産生する細菌類を指す。これら単離した乳酸菌はエンテロコッカス属以外に、ラクトバチルス属、ラクトコッカス属、ビフィドバクテリウム属など多岐にわたる乳酸菌であった。本発明に係るエンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡは、これら全ての乳酸菌の菌株に対して行った、ブタパイエル板細胞を用いたＩｇＡ産生量測定実験において、突出してＩｇＡ産生量が高い菌株として選抜された菌株に命名したものである。
なお、本発明のＮＨＲＤＩＨＡＲＡは、寄託番号ＦＥＲＭＢＰ−１１０９０としてＡＩＳＴに国際寄託され、その具体的な菌学的性質、菌学的同定については、上記段落〔００１３〕〔００１４〕で述べたとおりである。

（実施例２）
エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ乾燥菌体（生菌）の製造
エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡを以下に示す組成のＭＲＳ液体培地に接種し（菌数：１０^２個／ｍｌ）、３７℃で１６〜２０時間培養し、生菌数約１０^９個／ｍｌの培養液を得た。得られた培養液を１２，０００×ｇで２０分間遠心分離して集菌し、蒸留水で２回洗浄して菌体を得た。この菌体を蒸留水に懸濁し、凍結乾燥して、乾燥菌体を得た。（以下乾燥生菌体）
ＭＲＳ液体培地の組成を示す。
ゼラチンのパンクレアチン消化物１０ｇ
牛肉エキス８ｇ
酵母エキス４ｇ
ブドウ糖１８．５g
リン酸一水素カリウム３ｇ
ポリソルベート８０（界面活性剤）１ｇ
酢酸ナトリウム３ｇ
クエン酸アンモニウム２ｇ
硫酸マグネシウム０．２ｇ
硫酸マンガン０．０５ｇ
蒸留水１０００ｍｌ
（ｐＨ６．２に調整、１２１℃で１５分加熱滅菌）

（実施例３）
エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ乾燥菌体（死菌）の製造
実施例２と同様の方法で得た生菌体を蒸留水に懸濁した後、１００℃で３０分加熱し、これを凍結乾燥して死菌乾燥菌体（以下乾燥死菌体）を得た。

（実施例４）
マウスパイエル板細胞からのＩｇＡ産生促進作用(in Vitro試験)
ＢＡＬＢ／ｃマウス雌性８−１２週齢（日本ＳＬＣ）よりパイエル板を取り出し、セルストレーナーを用いてシングル・セルにした。１０％ＦＣＳ加ＲＰＭＩ培地中で細胞を１×１０^６個／ｍｌに調整し、９６穴平底プレートにモノレイヤーを作製した。ＩｇＡ誘導剤として、実施例２で作製した乾燥死菌体又は同様に調整した他のエンテロコッカス・フェシウムを１００μｇ／ｍｌに調整後、２０μｌ添加し、６日間混合培養した。混合培養終了後、培養上清を採取しＩｇＡ量を測定した。パイエル板細胞に乾燥死菌体を添加せずに培養したものを陰性対照とした。乾燥死菌体に代えてＬＰＳ(Lipopolysaccharide)添加したものを陽性対照とした。ＩｇＡの測定は市販のキット(「MOUSE IgA ELISA QUANTITATION KIT」、BETHYL社)を用いて行った。ＩｇＡ量は、別々のマウスのパイエル板を用いて３回以上反復測定し、その平均値を求めた。
陰性対照のＩｇＡ量を基準（１．０）として、その相対比(Stimulation Index;S.I.)を比較した結果を図1−Ａに示す。
図１−Ａに示されるとおり、陽性対照（ＬＰＳ）のＩｇＡ相対比は１以上となり、ＩｇＡ産生を誘導していることが判った。よって本法がパイエル板細胞からのＩｇＡ産生を評価する方法として、有用であると判断した。
図１−Ａ中で、同じエンテロコッカス属に属する菌株を、比較例として選択し、図１−Ｂとして図示する。比較例１（ＮＨＲＤ４４）、比較例２（ＮＨＲＤ８８）、比較例３（ＮＨＲＤ９９）、比較例４（ＮＨＲＤ１０２）、比較例５（ＮＨＲＤ１０４）は、いずれも、エンテロコッカス・フェシウムに属し、比較例６（ＮＨＲＤ１９９）及び比較例７（ＮＨＲＤ３２６）は、エンテロコッカス・フェカリスに属している。比較例８は、市販生菌剤由来のエンテロコッカス・フェカリスに対して上記操作と同様の操作を行ったものである。さらに、参照例として、実験条件が同じ特許文献５の実施例２のデータ（エンテロコッカス・フェカリスＮＦ−１０１１）もあわせて図示した。
各種エンテロコッカス・フェシウム菌株によるＩｇＡ産生誘導能を比較すると、本発明のエンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡのＳ．Ｉ．は２．６となり、陽性対照（ＬＰＳ）よりも高いＩｇＡ産生誘導能を有すると共に、他のエンテロコッカス・フェシウムのみならず、他のエンテロコッカス属微生物など他の乳酸菌類に比べてもＩｇＡを著しく増加させる作用を持つことが判った。

(実施例５）in VivoでのＩｇＡ産生誘導能の検証
この例は、マウスに本発明の菌株エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡを経口投与してＩｇＡ産生量を測定したものであり、試験群は下記の４群で比較した。
（１）コントロール群１（エンテロコッカス・フェシウム未投与群）
（２）コントロール群２（実施例３でＳ．Ｉ．が１前後だったエンテロコッカス・フェシウム投与群）
（３）エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ乾燥生菌体投与群（ＬＡ）
（４）エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ乾燥死菌体投与群（ＬＡＤ）
（２）〜（４）は同じ菌数に調整し、ＭＦ粉末飼料（オリエンタル酵母社製）に重量比０．３３％含有するように調整し混合した。
３週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（日本ＳＬＣ）を９匹ずつに分けゲージに入れて、ＭＦ粉末飼料で７日間予備飼育の後、コントロール群２とＬＡ、ＬＡＤ群はエンテロコッカス・フェシウムを混合した飼料に切り替え、４週間連続給餌した。コントロール群１はＭＦ粉末飼料のみを給餌した。

投与期間中、全マウスの体重と摂餌量を測定し、外観の異常の有無を肉眼的に観察した。投与終了時にはマウスを解剖し内臓の著変の有無を確認した。
投与期間中、マウスの体重と飼料摂餌量は各試験区で有意な差はなく、外観の異常の有無も認められなかった。また、解剖所見でも内臓に著変は認められなかった。このことから本菌株の安全性が確認された。

投与開始時と４週間後に糞便を採取し、ＩｇＡ量を測定した。
得られた糞便を糞便重量に対し、１０倍量の緩衝液に懸濁した。懸濁液を１２，０００×ｇ、５分、４℃の条件で遠心分離して上清を回収し、ＩｇＡ量測定用サンプルとした。このサンプルを最適濃度に希釈して、ＥＬＩＳＡ法で測定した。ＥＬＩＳＡの方法は、実施例３で行った方法と同様にして行った。
糞便中ＩｇＡは腸粘膜由来であることから、糞便中のＩｇＡ量をもって腸粘膜のＩｇＡ量とした。

その結果を図２に示す。
投与開始時の糞便中ＩｇＡ量は各群ともに有意差はなかった。しかし、実験終了時の４週後（マウス週齢：８週齢）にはコントロール群に対してＬＡ群、ＬＡＤ群ともに有意な増加がみられた。（ＬＡ群ｐ＜０．０１、ＬＡＤ群ｐ＜０．０５）コントロール群２では有意な増加は見られなかった。

（実施例６）畜産分野における応用試験（１）
家畜の飼料効率、増体率、死亡率(事故率)、肉質などは、畜産物の生産コストに直結する要因である。これらの項目は、家畜の生産性という言葉に置き換えられ、畜産経営上重要な評価指標として捉えられている。
家畜の場合、下痢などの疾病の発生は、事故率の増加や増体率の低下を招き、生産性の低下をもたらす。特に幼畜は疾病にかかりやすく、罹患した場合の経済的損出は大きい。
畜産分野では古くから、乳酸菌が有する免疫賦活効果を利用して、病気に対する抵抗性を高める利用研究がなされている(非特許文献６)。乳酸菌が有するプロバイオティクス機能の１つが、下痢の予防や事故率の低下であり、畜産分野において乳酸菌をはじめとした多くの微生物製剤品が、生菌剤という名で、飼料あるいは飼料添加物として市販されている。
本実施例では、まず、本発明の菌株エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡが有するＩｇＡ産生誘導能を、畜産分野で市販されている生菌剤と比較を行った。その後の（実施例７）以降で、実際に一般養豚場において本菌株を使用して、ＩｇＡ産生誘導能の上昇とそれに伴う病原性微生物の感染抑制が生産性の向上をもたらすことを確認した。

（６−１）ブタパイエル板細胞からのＩｇＡ産生促進作用（in Vitro試験）
屠畜場で食用として屠畜されたブタの小腸よりパイエル板を取り出し、（実施例４）で行った方法と同様にしてＩｇＡ量を測定した。
パイエル板細胞に乾燥死菌体を添加せずに培養したものを陰性対照とした。乾燥死菌体に代えてＬＰＳ(Lipopolysaccharude)を添加したものを陽性対照とした。ＩｇＡの測定は市販のキット(「PIG IgA ELISA QUANTITATION KIT」、BETHYL社)を用いて行った。ＩｇＡ量は、ブタの個体差を考慮して、別々のブタのパイエル板を用いて、３回以上反復測定しその平均値を求めた。
陰性対照のＩｇＡ量を基準（１．０）として、その相対比(Stimulation Index;S.I.)を比較した結果を図３に示す。
図３に示されるとおり、陽性対照（ＬＰＳ）のＩｇＡ相対比は１以上となり、マウスパイエル板細胞と同様に、ＩｇＡ産生を誘導していることが判った。よって、ブタパイエル板細胞を用いてＩｇＡ産生を評価する方法が利用可能であると判断した。
各種エンテロコッカス・フェシウム菌株によるＩｇＡ産生誘導能を比較すると、本発明のエンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡのＳ．Ｉは３．２となり、陽性対照（ＬＰＳ）よりも高いＩｇＡ産生誘導能を有すると共に、他のエンテロコッカス・フェシウムに比べＩｇＡを著しく増加させる作用を持つことが判った。

よって本菌株は、マウスと同様に家畜においても、高いＩｇＡ産生誘導能を有することが判った。

（６−２）市販製品との比較試験
畜産分野で市販されている乳酸菌製剤、その他の微生物製剤と本発明の菌株のＩｇＡ産生誘導能を比較した。ＩｇＡ量の測定は、実施例５−１−１で行った方法と同様の方法で行った。ＩｇＡ量は、ブタの個体差を考慮して、別々のブタのパイエル板を用いて、３回反復測定しその平均値を求めた。
その結果を図４に示す。
図４に示されるとおり、本発明の菌株エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡは、市販の畜産用微生物製剤で使用されている菌株と比較して、著しく高いＩｇＡ産生誘導能を有することが判った。

（実施例７）畜産分野における応用試験（２）家畜におけるＩｇＡ産生誘導能と生産性向上効果の確認試験
本実施例では、本菌株のＩｇＡ産生誘導効果を検証するため、一般養豚場においてエンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡを投与して実験を行ったものである。

育成子豚期用飼料にエンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ乾燥生菌体を添加し、下記の２群で比較した。
（1）コントロール群（エンテロコッカス・フェシウム未投与群）
（2）試験群（エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ乾燥生菌体投与群）
（２）は摂取菌数が１日１頭１０^１０個となるように調整して飼料に混合した。

２５日令の肉豚（ＷＬＤＤ）を、コントロール群と試験群それぞれ１２００頭ずつに分け同じ環境下で飼育した。

（７−１）ＩｇＡ産生誘導能試験
目的：腸粘膜及び血清中のＩｇＡ産生誘導作用を確認するために、糞便及び血液を採取しＩｇＡ量を測定した。糞便中ＩｇＡは腸粘膜由来であることから、糞便中のＩｇＡ量を以って腸粘膜のＩｇＡ量とした。
その結果を図５に示す。
図５に示すとおり、本菌株摂取から２０日目には、試験群の腸粘膜のＩｇＡ量は有意に上昇し、実験終了時には血清中のＩｇＡ量も有意に上昇した。

（７−２）疾病の発生及び事故率の低下確認試験
本実施例では、豚に特異的な病原性大腸菌の侵入を受けた農場を試験農場とし、この農場の２５日令の肉豚（ＷＬＤＤ）を、コントロール群と試験群とをそれぞれ１２００頭ずつに分け、以下の実験を行った。
この大腸菌は腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）と呼ばれ、耐熱性エンテロトキシン（ＳＴ）という腸管毒素を産生し下痢を引き起こす。感染畜は下痢による脱水症状から、体重の減少や増体率の低下が起こり、重篤例では衰弱による死亡や、著しい発育不良（ヒネ）による淘汰に結びつき、事故率の上昇を招くものである。

本実施例では、ＥＴＥＣの感染率をみるために、その病原因子である耐熱性エンテロトキシン（ＳＴ）遺伝子を糞便中からＰＣＲ法で検出した。また、当農場のスタッフより、試験期間中の臨床症状の聞き取りを行い、最終的な事故率を調査した。

その結果を表４及び図６に示す。
本結果に示すとおり、試験期間中のＥＴＥＣの感染は、コントロール群では７０％に達したのに対し、試験群は３３％に抑えられ、本感染症がもたらす衰弱や著しい発育不良（ヒネ）による淘汰による事故率も試験群が少なかった。また、農場スタッフからの聞き取り調査により、試験群では軟便の発生がコントロール群より少ないことがわかった。

（７−３）体重及び増体の向上効果確認試験
目的：家畜の生産性の向上効果をみるために、試験期間中の体重及び増体量を測定した。その結果を図７に示す。
図７に示すとおり、本菌株投与後は、体重、増体ともにコントロール群と比較して有意な差が認められた。

食品、飼料などに添加することで、ヒトや家畜などの動物の免疫力を向上させる効果がある。特に家畜用の体重増加、増体、事故率の低下に有用である。さらに、ヒト又は動物の免疫機能向上剤として、感染症の予防及び治療のための医薬組成物として用いることができる。

Claims

エンテロコッカス・フェシウムＮＨＲＤＩＨＡＲＡ（ＦＥＲＭＢＰ−１１０９０）。
体内におけるイムノグロブリンＡの産生を増進し、病原性細菌の増殖を抑制する乳酸菌である請求項１に記載の菌株。
請求項１又は２に記載の菌株の培養物、その抽出物、又はその菌体処理物を含んでなる、体内のイムノグロブリンＡ産生の増進活性を有する乳酸菌製剤。
体内のイムノグロブリンＡ産生の増進活性を有する他の乳酸菌、乳酸菌製剤、ビフィズス菌、ビフィズス菌製剤、その他の微生物、その他の微生物製剤をさらに含んでなる、請求項３に記載の乳酸菌製剤。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤を体内のイムノグロブリンＡの産生増進のための有効成分として含む飲食品用添加剤。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤を体内のイムノグロブリンＡの産生増進のための有効成分として含む飲食品。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤を体内のイムノグロブリンＡの産生増進のための有効成分として含む飼料用添加剤。
前記飼料用添加剤が、家畜の体重増加、増体向上又は事故率の低下のための添加剤である請求項７に記載の飼料用添加剤。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤を体内のイムノグロブリンＡの産生増進のための有効成分として含む飼料。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤と薬学上許容される担体又は添加剤とを含んでなる、ヒト又は動物用の免疫機能向上剤。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤と薬学上許容される担体又は添加剤とを含んでなる、ヒト又は動物用の感染症予防又は治療用医薬組成物。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤を用いることを特徴とする、家畜の体重を増加させる方法。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤を用いることを特徴とする、家畜の増体を向上させる方法。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤を用いることを特徴とする、家畜の事故を低下させる方法。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤を用いることを特徴とする、動物（ヒトを除く）の免疫機能を向上させる方法。
請求項３又は４に記載の乳酸菌製剤を用いることを特徴とする、動物（ヒトを除く）の感染症の発生を抑制させる方法。