JP4530633B2 - Signaling substance production inhibitor - Google Patents
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Description
本発明は、生体内での細胞内シグナル伝達機構におけるシグナル伝達物質の産生抑制剤および当該抑制剤を有効成分とする医薬組成物に関する。 The present invention relates to a production inhibitor of a signal transduction substance in an intracellular signal transduction mechanism in a living body and a pharmaceutical composition containing the inhibitor as an active ingredient.
近年、生体における様々な機能を制御している細胞内シグナル伝達機構のメカニズムについて研究されており、当該伝達機構に関与する数々のシグナル伝達物質及びその機能が報告されてきている。シグナル伝達物質としては、セリン／トレオニンキナーゼ系であるプロテインキナーゼＣ、イノシトールリン脂質代謝酵素であるホスファチジルイノシトール３キナーゼ、ＭＡＰ−キナーゼスーパーファミリーに属する細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）、Ｊun−Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）、ｐ３８、及び、転写因子に属するＮＦ−κＢなどが報告されている。 In recent years, mechanisms of intracellular signal transduction mechanisms that control various functions in living bodies have been studied, and a number of signal transduction substances involved in the transmission mechanisms and their functions have been reported. Signal transducing substances include protein kinase C which is a serine / threonine kinase system, phosphatidylinositol 3 kinase which is an inositol phospholipid metabolizing enzyme, extracellular signal-regulated kinase (ERK) belonging to MAP-kinase superfamily, Jun-N-terminal kinase (JNK), p38, and NF-κB belonging to transcription factors have been reported.
例えば、セリン／トレオニンキナーゼ系であるプロテインキナーゼＣは、タンパク質を可逆的にリン酸化・脱リン酸化することにより、転写調節、細胞増殖や分化の制御などの様々な細胞機能の調節を行っており、ホスファチジルイノシトール３キナーゼはイノシトールリン脂質を代謝する酵素の１つであり、種々の細胞外からの刺激により活性化され、核へのシグナル伝達、細胞の運動性、形態の変化、物質の輸送、分泌の調節等に関与するという多様な役割が示唆されている。また、これらは、糖尿病性腎症、自己免疫疾患、炎症などに関与している事が報告されている。 For example, protein kinase C, which is a serine / threonine kinase system, regulates various cell functions such as transcriptional regulation and control of cell growth and differentiation by reversibly phosphorylating and dephosphorylating proteins. Phosphatidylinositol 3 kinase is one of the enzymes that metabolize inositol phospholipids, activated by various extracellular stimuli, signaling to the nucleus, cell motility, morphological changes, substance transport, Various roles have been suggested to be involved in the regulation of secretion. These have been reported to be involved in diabetic nephropathy, autoimmune diseases, inflammation and the like.
この様に、種々のシグナル伝達物質については、生体を維持するホメオスタシスを制御する１つの因子として作用しており、これらの因子の生体内での役割の解明及び当該因子の制御を行う事による各種疾患の治療について研究されている。 As described above, various signaling substances act as one factor that controls homeostasis for maintaining a living body, and elucidation of the role of these factors in the living body and various factors by controlling the factors. Research is being conducted on the treatment of disease.
シグナル伝達物質を制御する物質としては、Bisindolylmaleimide Ｉ、Wortmannin、SB203580、SB 202190等が報告されている。これらのインヒビターは、それぞれ単一のシグナル伝達物質を抑制するものであり、複数のシグナル伝達物質を抑制するものではない（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３）。 Bisindolylmaleimide I, Wortmannin, SB203580, SB 202190, etc. have been reported as substances that control signal transduction substances. Each of these inhibitors suppresses a single signaling substance and does not suppress a plurality of signaling substances (Non-patent Document 1, Non-patent Document 2, and Non-patent Document 3).
一方、ケラタン硫酸オリゴ糖の投与による生体の様々な機能への作用についても研究されており、特許文献１にはケラタン硫酸オリゴ糖又はその誘導体によりインターロイキン−１２の産生を抑制すると報告されている。 On the other hand, effects on various functions of a living body by administration of keratan sulfate oligosaccharide have also been studied, and Patent Document 1 reports that production of interleukin-12 is suppressed by keratan sulfate oligosaccharide or a derivative thereof. .
上記で述べた様に、近年、社会的に問題となっている様々な疾病の発症メカニズムにおいてシグナル伝達物質の関与が報告されており、それら疾病の治療や予防、症状の緩和などを目的とする当該シグナル伝達物質の調節方法の提供が期待されている。
本発明は、様々なシグナル伝達物質の産生を効果的に抑制するシグナル伝達物質産生抑制剤を提供することを目的とし、更に当該産生抑制剤を有効成分とする医薬組成物を提供することを目的とする。
As mentioned above, in recent years, the involvement of signal transduction substances has been reported in the mechanism of the onset of various diseases that have become social problems, with the aim of treating and preventing those diseases and alleviating symptoms. It is expected to provide a method for regulating the signal transduction substance.
An object of the present invention is to provide a signal transduction substance production inhibitor that effectively suppresses the production of various signal transduction substances, and further to provide a pharmaceutical composition comprising the production inhibitor as an active ingredient. And
本発明者らは、ケラタン硫酸オリゴ糖又はその誘導体に、種々のシグナル伝達物質の産生を抑制する作用があることを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明の要旨は以下である。
（１）本発明は、ケラタン硫酸オリゴ糖又はその誘導体を有効成分とするシグナル伝達物質産生抑制剤（以下、本発明産生抑制剤とも言う）である。
（２）シグナル伝達物質がリン酸化プロテインキナーゼＣ及び／又はホスファチジルイノシトール３キナーゼである上記（１）記載の産生抑制剤。
（３）ケラタン硫酸オリゴ糖又はその誘導体が、下記式で表されるいずれかの二糖、又は、下記式で表される二糖の何れか若しくは両方を繰り返し構成単位として含む三糖以上のオリゴ糖であることを特徴とする、上記（１）又は（２）記載の産生抑制剤。
Ｇａｌ(６Ｓ)−ＧｌｃＮＡｃ(６Ｓ) および Ｇａｌ(６Ｓ)−ＧｌｃＮＡｃ
（式中、Ｇａｌはガラクトース残基を、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を、６Ｓは６位のヒドロキシル基が-Ｏ-硫酸エステルとなっていることを、−はグリコシド結合をそれぞれ表す。）
The present inventors have found that keratan sulfate oligosaccharide or a derivative thereof has an action of suppressing production of various signaling substances, and completed the present invention. That is, the gist of the present invention is as follows.
(1) The present invention is a signal transduction substance production inhibitor (hereinafter also referred to as the present invention production inhibitor) containing keratan sulfate oligosaccharide or a derivative thereof as an active ingredient.
(2) The production inhibitor according to the above (1), wherein the signaling substance is phosphorylated protein kinase C and / or phosphatidylinositol 3 kinase.
(3) A keratan sulfate oligosaccharide or a derivative thereof is a trisaccharide or higher oligo comprising any disaccharide represented by the following formula, or any one or both of the disaccharide represented by the following formula as a repeating unit. The production inhibitor according to (1) or (2) above, which is a sugar.
Gal (6S) -GlcNAc (6S) and Gal (6S) -GlcNAc
(In the formula, Gal represents a galactose residue, GlcNAc represents an N-acetylglucosamine residue, 6S represents that the hydroxyl group at the 6-position is —O-sulfate, and − represents a glycosidic bond.)
（４）ケラタン硫酸オリゴ糖の誘導体が下記一般式＜１＞で表されることを特徴とする上記（１）〜（３）の何れかに記載の産生抑制剤。 (4) The production inhibitor according to any one of (1) to (3) above, wherein the keratan sulfate oligosaccharide derivative is represented by the following general formula <1>.
（５）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の産生抑制剤を有効成分として含有する医薬組成物。
（６）疾病の起因がシグナル伝達物質の産生亢進である疾病の処置に用いられるための上記（５）記載の医薬組成物。
(5) A pharmaceutical composition comprising the production inhibitor according to any one of (1) to (4) as an active ingredient.
(6) The pharmaceutical composition according to the above (5), which is used for the treatment of a disease whose cause is an increase in production of a signaling substance.
本発明により、ケラタン硫酸オリゴ糖又はその誘導体を有効成分とするシグナル伝達物質産生抑制剤が提供される。また、当該産生抑制剤を有効成分とする医薬組成物も提供される。 According to the present invention, a signal transduction substance production inhibitor comprising a keratan sulfate oligosaccharide or a derivative thereof as an active ingredient is provided. Also provided is a pharmaceutical composition comprising the production inhibitor as an active ingredient.
本発明産生抑制剤は、ケラタン硫酸オリゴ糖又はその誘導体を有効成分とするシグナル伝達物質産生抑制剤である。 The production inhibitor of the present invention is a signal transduction substance production inhibitor containing keratan sulfate oligosaccharide or a derivative thereof as an active ingredient.
本発明産生抑制剤において用いる「ケラタン硫酸オリゴ糖」（以下、ＫＳオリゴ糖とも言う）は、ケラタン硫酸の基本構造（ガラクトース残基又はガラクトース−６−Ｏ−硫酸残基と、Ｎ−アセチルグルコサミン残基又はＮ−アセチルグルコサミン−６−Ｏ−硫酸残基とが交互にグリコシド結合した構造）を少なくとも含む二糖以上のオリゴ糖である限りにおいて特に限定されない。また、ＫＳオリゴ糖は、シアル酸（ノイラミン酸のアシル誘導体）残基及び／又はフコース残基を含んでいても良い。通常には、シアル酸残基は、α２，３又はα２，６グリコシド結合でガラクトース残基に結合し、フコース残基は、α１，３グリコシド結合でＮ−アセチルグルコサミン残基に結合する。 “Keratan sulfate oligosaccharide” (hereinafter also referred to as KS oligosaccharide) used in the production inhibitor of the present invention has a basic structure of keratin sulfate (galactose residue or galactose-6-O-sulfate residue and N-acetylglucosamine residue). Group or an N-acetylglucosamine-6-O-sulfate residue alternately glycosidically linked) is not particularly limited as long as it is an oligosaccharide having at least a disaccharide. Further, the KS oligosaccharide may contain a sialic acid (acyl derivative of neuraminic acid) residue and / or a fucose residue. Usually, sialic acid residues bind to galactose residues with α2,3 or α2,6 glycosidic bonds, and fucose residues bind to N-acetylglucosamine residues with α1,3 glycosidic bonds.
本発明に於けるオリゴ糖とは、通常、多糖の分野においてオリゴ糖と称される範囲の構成糖物質を含むが、２〜１０糖から成る糖ポリマーが好ましく、２〜６糖から成るものがより好ましく、２〜４糖から成るものが更に好ましい。中でも特に２糖から成るものが好ましい。 The oligosaccharide in the present invention usually includes a constituent sugar substance in the range of polysaccharides in the field of polysaccharides, preferably a sugar polymer composed of 2 to 10 sugars, and composed of 2 to 6 sugars. More preferably, those consisting of 2-4 sugars are even more preferred. Of these, those consisting of disaccharides are particularly preferred.
ＫＳオリゴ糖は、例えばケラタン硫酸を酵素的又は化学的に分解して得られる生成物であっても良く、また例えばＮ−アセチルラクトサミンが１単位以上結合してなるオリゴ糖などを硫酸化して得られる化合物であっても良い。この様なケラタン硫酸オリゴ糖の中でも、ケラタン硫酸を分解して得られるオリゴ糖（ケラタン硫酸由来のオリゴ糖）が好ましく、ケラタン硫酸をエンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ型ケラタン硫酸分解酵素で分解して得られる分解生成物がより好ましい。 The KS oligosaccharide may be a product obtained by, for example, enzymatically or chemically degrading keratan sulfate. For example, a KS oligosaccharide may be obtained by sulfating an oligosaccharide formed by binding one or more units of N-acetyllactosamine. The compound obtained may be used. Among such keratan sulfate oligosaccharides, oligosaccharides obtained by degrading keratan sulfate (oligosaccharides derived from keratan sulfate) are preferable, and keratan sulfate is decomposed with endo-β-N-acetylglucosaminidase-type keratan sulfate decomposing enzyme. The decomposition product obtained is more preferable.
天然より得られるケラタン硫酸は、Ｎ−アセチルグルコサミン残基の６位のヒドロキシル基の多くが硫酸化されており、ガラクトース残基の６位のヒドロキシル基は一部硫酸化されていることが多い。ＫＳオリゴ糖は、このケラタン硫酸を上述の様に分解して得られるケラタン硫酸オリゴ糖でも構わないが、本発明のＫＳオリゴ糖としては、Ｎ−アセチルグルコサミン残基の６位のヒドロキシル基は硫酸化されていてもされていなくても良く、ガラクトース残基の６位のヒドロキシル基は硫酸化されているものがより好ましい。 In keratan sulfate obtained from nature, most of the hydroxyl group at the 6-position of the N-acetylglucosamine residue is sulfated, and the hydroxyl group at the 6-position of the galactose residue is often partially sulfated. The KS oligosaccharide may be a keratan sulfate oligosaccharide obtained by decomposing this keratan sulfate as described above. However, as the KS oligosaccharide of the present invention, the hydroxyl group at the 6-position of the N-acetylglucosamine residue is sulfate. The hydroxyl group at the 6-position of the galactose residue is more preferably sulfated.
つまり、ＫＳオリゴ糖は、Ｇａｌ(６Ｓ)−ＧｌｃＮＡｃ(６Ｓ)、又は、Ｇａｌ(６Ｓ)−ＧｌｃＮＡｃ（式中、Ｇａｌはガラクトース残基を、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を、６Ｓは６位のヒドロキシル基が６−Ｏ−硫酸エステルとなっていることを、−はグリコシド結合をそれぞれ表す）で表される二糖の何れかであるか、又は、当該二糖の何れか若しくは両方を繰り返し構成単位として含む三糖以上のオリゴ糖がより好ましい。 That is, the KS oligosaccharide is Gal (6S) -GlcNAc (6S) or Gal (6S) -GlcNAc (where Gal is a galactose residue, GlcNAc is an N-acetylglucosamine residue, and 6S is the 6th position. The hydroxyl group is 6-O-sulfate,-represents a glycosidic bond, respectively, or either or both of the disaccharides are repeated. More preferred are oligosaccharides having three or more saccharides as structural units.
更に、ＫＳオリゴ糖は、Ｇａｌ(６Ｓ)−ＧｌｃＮＡｃ(６Ｓ)、又は、Ｇａｌ(６Ｓ)−ＧｌｃＮＡｃ（式中、Ｇａｌはガラクトース残基を、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を、６Ｓは６位のヒドロキシル基が６−Ｏ−硫酸エステルとなっていることを、−はグリコシド結合をそれぞれ表す）で表される二糖の何れかであるか、又は、当該二糖の何れか若しくは両方を繰り返し構成単位として含む偶数糖から成るオリゴ糖が一層好ましい。 Furthermore, KS oligosaccharide is Gal (6S) -GlcNAc (6S) or Gal (6S) -GlcNAc (where Gal is a galactose residue, GlcNAc is an N-acetylglucosamine residue, and 6S is position 6). The hydroxyl group is 6-O-sulfate,-represents a glycosidic bond, respectively, or either or both of the disaccharides are repeated. More preferred are oligosaccharides composed of even-numbered sugars included as structural units.
ＫＳオリゴ糖は、特に好ましくは、下記式＜２＞〜式＜４＞で表されるオリゴ糖から選択される。
Ｇａｌ(６Ｓ)β1-4ＧｌｃＮＡｃ(６Ｓ)β1-3Ｇａｌ(６Ｓ)β1-4ＧｌｃＮＡｃ(６Ｓ) 式＜２＞
Ｇａｌ(６Ｓ)β1-4ＧｌｃＮＡｃ(６Ｓ) 式＜３＞
Ｇａｌ(６Ｓ)β1-4ＧｌｃＮＡｃ 式＜４＞
（式中、Ｇａｌはガラクトース残基を、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を、６Ｓは６位のヒドロキシル基が６−Ｏ−硫酸エステルとなっていることを、β1-4はβ1-4グリコシド結合を、β1-3はβ1-3グリコシド結合をそれぞれ表す。）
The KS oligosaccharide is particularly preferably selected from oligosaccharides represented by the following formulas <2> to <4>.
Gal (6S) β1-4GlcNAc (6S) β1-3Gal (6S) β1-4GlcNAc (6S) Formula <2>
Gal (6S) β1-4GlcNAc (6S) Formula <3>
Gal (6S) β1-4GlcNAc formula <4>
(In the formula, Gal represents a galactose residue, GlcNAc represents an N-acetylglucosamine residue, 6S represents that the hydroxyl group at the 6-position is a 6-O-sulfate, and β1-4 represents a β1-4 glycoside. And β1-3 represents a β1-3 glycosidic bond, respectively.)
尚、式＜２＞で表されるオリゴ糖をＬ４Ｌ４、式＜３＞で表されるオリゴ糖をＬ４、式＜４＞で表されるオリゴ糖をＬ３とも言う。前述の様に式＜２＞〜式＜４＞で表されるオリゴ糖にＮ−アセチルノイラミン酸などのシアル酸残基が結合していても良く、この様なシアル酸含有ケラタン硫酸オリゴ糖としては、ＳＡ−Ｇａｌ(６Ｓ)−ＧｌｃＮＡｃ(６Ｓ)及びＳＡ−Ｇａｌ(６Ｓ)−ＧｌｃＮＡｃ(６Ｓ)−Ｇａｌ(６Ｓ)−ＧｌｃＮＡｃ(６Ｓ)が例示される（式中、ＳＡはシアル酸残基を、Ｇａｌはガラクトース残基を、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を、６Ｓは６位のヒドロキシル基が６−Ｏ−硫酸エステルとなっていることを、−はグリコシド結合をそれぞれ表す。）。 The oligosaccharide represented by the formula <2> is also referred to as L4L4, the oligosaccharide represented by the formula <3> is also referred to as L4, and the oligosaccharide represented by the formula <4> is also referred to as L3. As described above, a sialic acid residue such as N-acetylneuraminic acid may be bonded to the oligosaccharide represented by the formulas <2> to <4>. Such a sialic acid-containing keratan sulfate oligosaccharide may be used. Are exemplified by SA-Gal (6S) -GlcNAc (6S) and SA-Gal (6S) -GlcNAc (6S) -Gal (6S) -GlcNAc (6S) (wherein SA is a sialic acid residue) Gal represents a galactose residue, GlcNAc represents an N-acetylglucosamine residue, 6S represents that the hydroxyl group at the 6-position is a 6-O-sulfate, and − represents a glycosidic bond.
本明細書において、ケラタン硫酸オリゴ糖の「誘導体」とは（以下、ＫＳオリゴ糖誘導体とも言う）、通常には、ＫＳオリゴ糖のヒドロキシル基の水素原子の少なくとも１つ（好ましくは全ヒドロキシル基の１０％以上）が、アシル基により置換されたもの（部分又は完全Ｏ−アシル化誘導体）であり、その薬学的に許容されうる塩も包含する。 In the present specification, the “derivative” of keratan sulfate oligosaccharide (hereinafter also referred to as KS oligosaccharide derivative) is usually at least one hydrogen atom of the hydroxyl group of KS oligosaccharide (preferably of all hydroxyl groups). 10% or more) are those substituted with an acyl group (partially or fully O-acylated derivatives), including pharmaceutically acceptable salts thereof.
尚、ＫＳオリゴ糖及びＫＳオリゴ糖誘導体は、電離した状態のもの、プロトン又はカチオンが付加した構造のものを包含する。従って、カチオンが付加したＫＳオリゴ糖及びＫＳオリゴ糖誘導体には、その薬学的に許容されうる塩も包含する。 The KS oligosaccharide and the KS oligosaccharide derivative include those in an ionized state and structures having a proton or a cation added thereto. Therefore, the KS oligosaccharide and KS oligosaccharide derivative to which a cation is added include pharmaceutically acceptable salts thereof.
薬学的に許容されうる塩とは、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩等の無機塩基との塩、またはジエタノールアミン塩、シクロヘキシルアミン塩、アミノ酸塩等の有機塩基との塩のうち、薬学的に許容されるものであるが、これらに限定されるものでは無い。 Pharmaceutically acceptable salts include, for example, alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt and lithium salt, alkaline earth metal salts such as calcium salt, salts with inorganic bases such as ammonium salt, or diethanolamine salt, Of the salts with organic bases such as cyclohexylamine salts and amino acid salts, these are pharmaceutically acceptable, but not limited thereto.
ＫＳオリゴ糖誘導体において、ＫＳオリゴ糖のヒドロキシル基の水素原子を置換するアシル基は、好ましくは炭素数１〜１０のアシル基、より好ましくは炭素数１〜１０の脂肪族又は芳香族のアシル基、すなわちヘテロ原子を含むこともあるアルカノイル基又はアロイル基であり、その例としては、アセチル、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリフルオロアセチル、メトキシアセチル、プロピオニル、ｎ−ブチリル、（Ｅ）−２−メチルブテノイル、イソブチリル、ペンタノイル、ベンゾイル、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾイル、ｏ−（メトキシカルボニル）ベンゾイル、２，４，６−トリメチルベンゾイル、ｐ−トルオイル、ｐ−アニソイル、ｐ−クロロベンゾイル、ｐ−ニトロベンゾイルなどの基が挙げられる。ＫＳオリゴ糖誘導体が複数のアシル基を有する場合には、それらのアシル基は互いに同一でも異なっていても良い。尚、ＫＳオリゴ糖の還元末端糖の１位のヒドロキシル基の水素原子がアシル基により置換されている場合、そのＯ−アシル基の配位は、α−グリコシド配位又はβ−グリコシド配位のいずれでもよいが、α−グリコシド配位であることが好ましい。 In the KS oligosaccharide derivative, the acyl group that replaces the hydrogen atom of the hydroxyl group of the KS oligosaccharide is preferably an acyl group having 1 to 10 carbon atoms, more preferably an aliphatic or aromatic acyl group having 1 to 10 carbon atoms. I.e., alkanoyl or aroyl groups that may contain heteroatoms, examples of which include acetyl, chloroacetyl, dichloroacetyl, trifluoroacetyl, methoxyacetyl, propionyl, n-butyryl, (E) -2-methylbutenoyl , Isobutyryl, pentanoyl, benzoyl, o- (dibromomethyl) benzoyl, o- (methoxycarbonyl) benzoyl, 2,4,6-trimethylbenzoyl, p-toluoyl, p-anisoyl, p-chlorobenzoyl, p-nitrobenzoyl, etc. The group of is mentioned. When the KS oligosaccharide derivative has a plurality of acyl groups, these acyl groups may be the same or different from each other. When the hydrogen atom of the hydroxyl group at the 1-position of the reducing terminal sugar of the KS oligosaccharide is substituted with an acyl group, the coordination of the O-acyl group is α-glycoside coordination or β-glycoside coordination. Either may be used, but α-glycoside coordination is preferred.
アシル化されたＫＳオリゴ糖は、有機溶媒、脂質に対する溶解性の向上、生体膜透過性の増大、経口投与した場合の消化管吸収量の増大等の利点を有する。 Acylated KS oligosaccharides have advantages such as improved solubility in organic solvents and lipids, increased biomembrane permeability, and increased gastrointestinal absorption when administered orally.
本発明産生抑制剤において、ＫＳオリゴ糖又はＫＳオリゴ糖誘導体は、好ましくは、上記一般式＜１＞で示される化合物である。なお、上記一般式＜１＞においてＭは、水素原子又は１価〜３価の金属カチオン若しくは１価〜３価の塩基である。一般式＜１＞において便宜上、Ｍが付加している構造を記載したが、溶液中では電離している場合があり、この様に電離している場合は、スルホン酸基はマイナスイオンの状態になる。 In the production inhibitor of the present invention, the KS oligosaccharide or KS oligosaccharide derivative is preferably a compound represented by the above general formula <1>. In the general formula <1>, M is a hydrogen atom, a monovalent to trivalent metal cation, or a monovalent to trivalent base. For the sake of convenience, in the general formula <1>, the structure to which M is added is described. However, in the solution, there is a case where it is ionized. In this case, the sulfonic acid group is in a negative ion state. Become.
アシル基が置換したＫＳオリゴ糖誘導体は、好ましくは、上記一般式＜１＞においてＸ１〜Ｘ５の全てがアセチル基である。特に好ましくは、下記一般式＜５＞で示される誘導体である。 In the KS oligosaccharide derivative substituted with an acyl group, all of X 1 to X 5 in the general formula <1> are preferably acetyl groups. Particularly preferred is a derivative represented by the following general formula <5>.
（式中、Ａｃはアセチル基、Ｙは水素原子又はＳＯ３Ｎａ、波線で示した結合は、α−グリコシド配位又はβ−グリコシド配位の単結合を示す。）
本発明産生抑制剤中に含有されるＫＳオリゴ糖又はその誘導体は、単一の種からなっていても、混合物であってもよい。例えば上記一般式＜１＞中の波線で示した部分がα−グリコシド配位である物質であってもよく、β−グリコシド配位である物質であってもよく、これらの混合物であってもよい。
(In the formula, Ac is an acetyl group, Y is a hydrogen atom or SO 3 Na, and the bond shown by a wavy line is a single bond of α-glycoside coordination or β-glycoside coordination.)
The KS oligosaccharide or derivative thereof contained in the production inhibitor of the present invention may be a single species or a mixture. For example, the substance indicated by the wavy line in the general formula <1> may be a substance having an α-glycoside coordination, a substance having a β-glycoside coordination, or a mixture thereof. Good.
ＫＳオリゴ糖は、例えばケラタン硫酸、好ましくは高硫酸化ケラタン硫酸の緩衝溶液にエンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ型ケラタン硫酸分解酵素、例えばバチルス属細菌由来のケラタナーゼ（ＩＩ）（特開平２−５７１８２号公報）、またはバチルス・サーキュランスＫｓＴ２０２株由来のケラタン硫酸分解酵素（国際公開第ＷＯ９６／１６１６６号）を作用させて分解した後、得られた分解物を分画することにより得ることが出来る。得られたオリゴ糖は通常の分離精製方法、例えばエタノール沈殿、ゲル濾過および陰イオン交換クロマトグラフィーにより、目的のオリゴ糖を分離精製することが出来る。 The KS oligosaccharide is synthesized in, for example, a buffer solution of keratan sulfate, preferably highly sulfated keratan sulfate, and endo-β-N-acetylglucosaminidase-type keratan sulfate degrading enzyme, for example, keratanase (II) derived from Bacillus bacteria (Japanese Patent Laid-Open No. 2-57182). No. 1), or keratan sulfate degrading enzyme (International Publication No. WO96 / 16166) derived from Bacillus circulans KsT202 strain is allowed to act, and then the resulting degradation product is fractionated. The obtained oligosaccharide can be separated and purified by the usual separation and purification methods such as ethanol precipitation, gel filtration and anion exchange chromatography.
この様な製造方法の例は、国際公開第ＷＯ９６／１６９７３号に記載されている。尚、原料となるケラタン硫酸は、主としてガラクトース又はガラクトース−６−Ｏ−硫酸とＮ−アセチルグルコサミン又はＮ−アセチルグルコサミン−６−Ｏ−硫酸との二糖の繰り返し構造で構成され、動物種及び器官などによって硫酸含量が異なっているが、通常はサメなどの軟骨魚類、クジラ、ウシなどの哺乳動物の軟骨、骨や角膜などの生原料から製造されるものを用いることが出来る。 An example of such a production method is described in International Publication No. WO96 / 16973. The raw material keratan sulfate is mainly composed of a disaccharide repeating structure of galactose or galactose-6-O-sulfate and N-acetylglucosamine or N-acetylglucosamine-6-O-sulfate. The sulfuric acid content varies depending on, for example, cartilage fish such as sharks, mammals such as whales and cattle, and those produced from raw materials such as bone and cornea.
原料として使用されるケラタン硫酸は、通常入手出来るものであればよく、特に制限されないが、構成糖であるガラクトース残基が硫酸化された高硫酸化ケラタン硫酸（構成二糖あたり１．５〜２分子の硫酸基を含む高硫酸化ケラタン硫酸をケラタンポリ硫酸と言うこともある）を用いることが好ましい。また、ガラクトース残基の硫酸基の位置として６位が好ましい。この様な高硫酸化ケラタン硫酸は、例えば、サメなどの軟骨魚類のプロテオグリカンから取得出来る。また市販されているものを使用することも出来る。 The keratan sulfate used as a raw material is not particularly limited as long as it is usually available. However, highly sulfated keratan sulfate in which a galactose residue as a constituent sugar is sulfated (1.5 to 2 per constituent disaccharide). It is preferable to use highly sulfated keratan sulfate containing a sulfate group of a molecule (sometimes referred to as keratan polysulfate). The 6-position is preferred as the position of the sulfate group of the galactose residue. Such highly sulfated keratan sulfate can be obtained from proteoglycans of cartilaginous fish such as sharks. Moreover, what is marketed can also be used.
この様にして得られたＫＳオリゴ糖の硫酸基含量を、糖鎖の公知の脱硫酸化方法や硫酸化方法によって適宜調整したものを、本発明に使用されるＫＳオリゴ糖として用いても良い。 The KS oligosaccharide thus obtained may be used as the KS oligosaccharide used in the present invention by appropriately adjusting the sulfate group content of the sugar chain by a known desulfation method or sulfation method of sugar chains.
ＫＳオリゴ糖誘導体を作るに際し、ＫＳオリゴ糖のヒドロキシル基の水素原子のアシル基による置換は、糖のヒドロキシル基の保護のために通常に行われるアシル化方法に従って行うことが出来る。例えば、導入すべきアシル基の反応性誘導体（アシル基に対応するカルボン酸の無水物（例えば、アセチル基を導入する場合は、無水酢酸、プロパノイル基を導入する場合は、無水プロピオン酸）、カルボン酸、ハロゲン化物など）と、適当な反応溶媒（ピリジン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アセトニトリル、クロロホルム、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、水、およびこれらの混合物など）中でＫＳオリゴ糖を常法によって反応させることによってアシル基を導入することが出来る。必要に応じて、ピリジン等の塩基触媒の存在下で反応させることも出来る。 In preparing the KS oligosaccharide derivative, the substitution of the hydrogen atom of the hydroxyl group of the KS oligosaccharide with the acyl group can be carried out according to an acylation method usually performed for protecting the hydroxyl group of the sugar. For example, a reactive derivative of an acyl group to be introduced (an anhydride of a carboxylic acid corresponding to the acyl group (for example, acetic anhydride when introducing an acetyl group, propionic anhydride when introducing a propanoyl group), Acid, halide, etc.) and KS in a suitable reaction solvent (eg pyridine, dioxane, tetrahydrofuran, N, N-dimethylformamide (DMF), acetonitrile, chloroform, dichloromethane, methanol, ethanol, water, and mixtures thereof). An acyl group can be introduced by reacting an oligosaccharide by a conventional method. If necessary, the reaction can be carried out in the presence of a base catalyst such as pyridine.
また、必要により、アシル化の程度を調整してもよく、この調整は、上記のアシル化方法において部分的にアシル化を行うか、又は、アシル化されたＫＳオリゴ糖からアシル基を部分的に除去することによって行うことが出来る。アシル基の除去は、メタノール性アンモニア、濃アンモニア水、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどを用いて加水分解することによって行うことが出来る。得られた誘導体は、逆相高速液体クロマトグラフィー等で精製することが出来る。 In addition, if necessary, the degree of acylation may be adjusted. This adjustment may be carried out by performing partial acylation in the above acylation method, or by partially converting acyl groups from acylated KS oligosaccharides. This can be done by removing it. The acyl group can be removed by hydrolysis using methanolic ammonia, concentrated aqueous ammonia, sodium methoxide, sodium ethoxide, sodium hydroxide, potassium hydroxide or the like. The obtained derivative can be purified by reverse phase high performance liquid chromatography or the like.
本発明産生抑制剤の有効成分であるＫＳオリゴ糖又はその誘導体は、医薬として使用出来る程度に精製され、医薬として混入が許されない物質を含まないものであることが好ましい。 The KS oligosaccharide or derivative thereof, which is an active ingredient of the production inhibitor of the present invention, is preferably purified to such an extent that it can be used as a medicine and does not contain a substance that is not allowed to be mixed as a medicine.
本発明におけるシグナル伝達物質とは、生体内の細胞内シグナル伝達機構に関与しているシグナル伝達物質を指し、セリン／トレオニンキナーゼ系、イノシトールリン脂質代謝酵素、及び、ＭＡＰ−キナーゼスーパーファミリーに属するシグナル伝達物質等が好ましい。特に、リン酸化プロテインキナーゼＣ（以下、リン酸化ＰＫＣ又はｐ−ＰＫＣとも言う）及び／又はホスファチジルイノシトール３キナーゼ（以下、ＰＩ３Ｋとも言う）から選択されるシグナル伝達物質がより好ましい。 The signal transducing substance in the present invention refers to a signal transducing substance involved in the intracellular signal transduction mechanism in the living body, and is a signal belonging to serine / threonine kinase system, inositol phospholipid metabolizing enzyme, and MAP-kinase superfamily. A transmitter substance or the like is preferable. In particular, a signaling substance selected from phosphorylated protein kinase C (hereinafter also referred to as phosphorylated PKC or p-PKC) and / or phosphatidylinositol 3 kinase (hereinafter also referred to as PI3K) is more preferable.
リン酸化ＰＫＣは、シグナル伝達物質の１種であるプロテインキナーゼＣ（以下、ＰＫＣとも言う）がリン酸化され活性化されたものである。活性化されたリン酸化ＰＫＣは、タンパク質をリン酸化し、当該タンパク質を活性化させ機能タンパクに変換する作用を有しており、当該機能タンパクが生体内にて種々の作用を示す。また、ＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール２−リン酸をセカンドメッセンジャーであるホスファチジルイノシトール３−リン酸に変換し、様々なシグナル伝達をする。リン酸化ＰＫＣ（又はＰＫＣ）及びＰＩ３Ｋ共に、これらの作用により多くの生理現象や疾患の発症等に関与している事が知られている。例えば、これらシグナル伝達物質は、インターロイキン−１２の産生にも関与しており、これらシグナル伝達物質の活性化、不活性化によりＩＬ−１２の産生も左右され、リン酸化ＰＫＣ及び／又はＰＩ３Ｋの産生抑制に伴いＩＬ−１２の産生も抑制される。 Phosphorylated PKC is obtained by phosphorylating and activating protein kinase C (hereinafter also referred to as PKC), which is one type of signal transmission substance. The activated phosphorylated PKC has an action of phosphorylating a protein, activating the protein and converting it into a functional protein, and the functional protein exhibits various actions in vivo. PI3K converts phosphatidylinositol 2-phosphate into phosphatidylinositol 3-phosphate, which is a second messenger, and performs various signal transduction. Both phosphorylated PKC (or PKC) and PI3K are known to be involved in many physiological phenomena and the onset of diseases due to these actions. For example, these signal transmitters are also involved in the production of interleukin-12, and the production of IL-12 depends on the activation and inactivation of these signal transmitters, and phosphorylated PKC and / or PI3K. With production suppression, IL-12 production is also suppressed.
尚、本発明産生抑制剤により、これらシグナル伝達物質は同時に抑制されても、又は、各々独立して抑制されても構わない。 In addition, these signaling substances may be simultaneously suppressed by this invention production inhibitor, or each may be suppressed independently.
本発明産生抑制剤は、シグナル伝達物質の産生を抑制するのに有効であり、従って、本発明産生抑制剤は医薬組成物の有効成分として使用される。つまり、本発明産生抑制剤を有効成分として含有する医薬組成物はシグナル伝達物質の産生亢進が疾病の起因である疾病の処置に用いられる。更に、本発明産生抑制剤は、シグナル伝達物質の中でも特にリン酸化ＰＫＣ及び／又はＰＩ３Ｋの産生を抑制するので、上記医薬組成物はリン酸化ＰＫＣ及び／又はＰＩ３Ｋの亢進が病勢の進行に促進的に働く疾病に対し、当該疾病の処置、すなわち当該疾病の治療及び病勢の軽減、悪化防止、予防などの為、上記シグナル伝達物質の産生の抑制を目的として用いる事が可能である。本発明の医薬組成物を用いることが可能である疾患の例としては、糖尿病、糖尿病性腎症、癌、自己免疫疾患、炎症、神経障害、脳卒中、脊髄損傷などが挙げられる。 The production inhibitor of the present invention is effective for suppressing the production of a signal transduction substance, and therefore the production inhibitor of the present invention is used as an active ingredient of a pharmaceutical composition. That is, the pharmaceutical composition containing the production inhibitor of the present invention as an active ingredient is used for the treatment of a disease in which increased production of a signal transducing substance is the cause of the disease. Furthermore, since the production inhibitor of the present invention suppresses the production of phosphorylated PKC and / or PI3K, among other signal transducing substances, the above pharmaceutical composition promotes the phosphorylation PKC and / or PI3K in the progression of the disease state. It can be used for the purpose of suppressing the production of the above signaling substance for the treatment of the disease, for the treatment of the disease, that is, the treatment of the disease and the reduction, prevention of prevention, prevention of the disease. Examples of diseases for which the pharmaceutical composition of the present invention can be used include diabetes, diabetic nephropathy, cancer, autoimmune diseases, inflammation, neuropathy, stroke, spinal cord injury and the like.
本発明においては、対象となる疾患の性質や進行状況、投与方法などに応じて、任意の剤形を適宜選択することが出来る。すなわち、本発明の医薬組成物は、注射（静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内など）、経鼻、経口、経皮、吸入などにより投与することができ、これらの投与方法に応じて適宜製剤化することが出来る。選択しうる剤形も特に限定されず、例えば、注射剤（溶液、懸濁液、乳濁液、用時溶解用固形剤など）、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、リポ化剤、軟膏剤、硬膏剤、ローション剤、パスタ剤、貼付剤、ゲル剤、坐剤、外用散剤、スプレー剤、吸入剤などから広く選択することが出来る。また、これらの製剤調製にあたり、慣用の賦形剤、安定化剤、結合剤、滑沢剤、乳化剤、浸透圧調整剤、pH調整剤、その他着色剤、崩壊剤など、通常医薬に用いられる成分を使用することが出来る。 In the present invention, any dosage form can be appropriately selected depending on the nature and progress of the target disease, the administration method, and the like. That is, the pharmaceutical composition of the present invention can be administered by injection (intravenous, intramuscular, subcutaneous, intradermal, intraperitoneal, etc.), nasal, oral, transdermal, inhalation, and the like. Depending on the case, it can be appropriately formulated. The dosage form that can be selected is not particularly limited, and examples thereof include injections (solutions, suspensions, emulsions, solid preparations for use when used), tablets, capsules, granules, powders, liquids, lipolytic agents. , Ointments, plasters, lotions, pasta, patches, gels, suppositories, powders for external use, sprays, inhalants and the like. In preparation of these preparations, ingredients commonly used in medicine, such as conventional excipients, stabilizers, binders, lubricants, emulsifiers, osmotic pressure regulators, pH regulators, other colorants, and disintegrants. Can be used.
本発明の医薬組成物中の有効成分であるＫＳオリゴ糖又はその誘導体の配合量並びに投与量は、その製剤の投与方法、投与形態、使用目的、患者の具体的症状、患者の体重、年齢、性別などに応じて個別に決定されるべき事項であり、特に限定されないが、ＫＳオリゴ糖の臨床量としては成人１人１日１回あたり５０〜５０００ｍｇが例示される。 The compounding amount and dosage of the KS oligosaccharide or derivative thereof as an active ingredient in the pharmaceutical composition of the present invention are the administration method, dosage form, purpose of use, specific symptoms of the patient, patient weight, age, Although it is a matter which should be determined individually according to sex etc., it is not specifically limited, As a clinical quantity of KS oligosaccharide, 50-5000 mg per adult per day is illustrated.
本発明の医薬組成物の有効成分であるＫＳオリゴ糖の安全性については、国際公開第ＷＯ９６／１６９７３号において示されており、その誘導体については、特開２００１−８９４９３に記載の実施例から安全性が推定される。 The safety of KS oligosaccharide, which is an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention, is shown in International Publication No. WO96 / 16973, and its derivatives are disclosed in the examples described in JP-A-2001-89493. Sex is estimated.
尚、本発明産生抑制剤は、以上の医薬組成物の有効成分としてだけでなく、培養細胞を添加してシグナル伝達物質の産生を抑制したり、実験動物に投与して疾病のメカニズム等を研究する病理学的又は生化学研究に使用することが出来る。 It should be noted that the production inhibitor of the present invention is not only an active ingredient of the above pharmaceutical composition, but also suppresses the production of signaling substances by adding cultured cells, or administers to experimental animals to study the disease mechanism, etc. Can be used for pathological or biochemical studies.
以下に本発明を、実施例により具体的に説明する。しかしながら、これにより本発明の技術的範囲が限定されるべきものでは無い。 Hereinafter, the present invention will be specifically described by way of examples. However, this should not limit the technical scope of the present invention.
下記実施例で用いたＫＳオリゴ糖二ナトリウム塩（Ｌ４の二ナトリウム塩）は、いずれも国際公開第ＷＯ９６／１６９７３号に記載の方法で製造したものを用いた。 As the KS oligosaccharide disodium salt (L4 disodium salt) used in the following examples, those manufactured by the method described in International Publication No. WO96 / 16973 were used.
＜実施例１＞ マクロファージ及び樹状細胞におけるＬ４処理によるリン酸化プロテインキナーゼＣ及び／又はホスファチジルイノシトール３キナーゼへの影響
２０週齢のＭＲＬ−ｌｐｒ／ｌｐｒ系マウスを２グループに分け、１つのグループにはＬ４二ナトリウム塩（５ｍｇ／ｋｇ）を週５回、４週間、筋肉内投与し、残りのグループにはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を同様に筋肉内投与した。
最終投与から２４時間後に腸管膜リンパ節を摘出し、切片を採取し、凍結切片を作製した。
当該凍結切片について、マクロファージや樹状細胞のマーカーとして知られているＣＤ１４とリン酸化プロテインキナーゼＣ、あるいは、ＣＤ１４とホスファチジルイノシトール３キナーゼとの免疫染色（２重染色）を行った。
<Example 1> Effect of L4 treatment on macrophage and dendritic cells on phosphorylated protein kinase C and / or phosphatidylinositol 3-kinase 20-week-old MRL-lpr / lpr mice were divided into two groups and divided into one group L4 disodium salt (5 mg / kg) was intramuscularly administered 5 times a week for 4 weeks, and phosphate buffered saline (PBS) was intramuscularly administered to the remaining groups.
Twenty-four hours after the final administration, the mesenteric lymph nodes were removed, sections were collected, and frozen sections were prepared.
The frozen section was subjected to immunostaining (double staining) of CD14 and phosphorylated protein kinase C, which are known as markers for macrophages and dendritic cells, or CD14 and phosphatidylinositol 3 kinase.
染色方法は、以下の手順で実施した。作製した凍結切片を１０％中性緩衝ホルマリン液に室温にて３０分間浸し固定した後、ＰＢＳによる５分間の洗浄を３回行った。次に、０．３％の過酸化水素水／メタノール混合溶液に４℃にて３０分間浸し、同様にＰＢＳによる５分間の洗浄を３回行った。その後、０．１モル／Ｌのリン酸バッファー（ｐＨ７．４）に溶解した１０％ロバ血清（Jackson社製）により切片をブロッキングした。ｐ−ＰＫＣ（リン酸化ＰＫＣ）やＰＩ３Ｋに対する各種抗体（各々upstate社製）を０．１モル／Ｌのリン酸バッファー（ｐＨ７．４）に溶解した１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）にて１００倍に希釈し、１次抗体液を作製した。作製した１次抗体液に先にブロッキングした切片を浸し、４℃にて一晩放置した後、ＰＢＳによる５分間の洗浄を３回行った。引き続き、西洋ワサビペルオキシダーゼにて標識したウサギIgGに対する二次抗体（Jackson社製）を０．１モル／Ｌのリン酸バッファー（ｐＨ７．４）に溶解した１％ＢＳＡにて１００倍に希釈し、２次抗体液を作製した。作製した２次抗体液に切片を室温にて１時間浸した後、ＰＢＳにより５分間の洗浄を３回行い、ジアミノベンチジン（ＤＡＢ、DOJINDO社製）により発色した。 The staining method was performed according to the following procedure. The prepared frozen section was immersed and fixed in 10% neutral buffered formalin solution at room temperature for 30 minutes, and then washed with PBS for 5 minutes three times. Next, it was immersed in a 0.3% hydrogen peroxide solution / methanol mixed solution at 4 ° C. for 30 minutes, and similarly washed with PBS for 5 minutes three times. Thereafter, the sections were blocked with 10% donkey serum (Jackson) dissolved in 0.1 mol / L phosphate buffer (pH 7.4). Various antibodies against p-PKC (phosphorylated PKC) and PI3K (each upstate) were dissolved 100% in 1% bovine serum albumin (BSA) dissolved in 0.1 mol / L phosphate buffer (pH 7.4). To prepare a primary antibody solution. The previously blocked section was immersed in the prepared primary antibody solution and allowed to stand overnight at 4 ° C., followed by washing with PBS for 5 minutes three times. Subsequently, a secondary antibody against rabbit IgG labeled with horseradish peroxidase (Jackson) was diluted 100-fold with 1% BSA dissolved in 0.1 mol / L phosphate buffer (pH 7.4). A secondary antibody solution was prepared. The sections were immersed in the prepared secondary antibody solution for 1 hour at room temperature, washed with PBS for 5 minutes three times, and developed with diaminobenzidine (DAB, manufactured by DOJINDO).
さらに同組織切片を抗ＣＤ１４抗体にて二重染色するため、ＤＡＢで発色させた切片をＰＢＳによる５分間の洗浄を３回行い、０．１モル／Ｌのリン酸バッファー（ｐＨ７．４）に溶解した１０％ウサギ血清（Jackson社製）により切片をブロッキングした。ＣＤ１４に対する抗体（SantaCruz社製）を０．１モル／Ｌのリン酸バッファー（ｐＨ７．４）に溶解した１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）にて１００倍に希釈し、１次抗体液を作製した。作製した１次抗体液に先にブロッキングした切片を浸し、４℃にて一晩放置した後、ＰＢＳによる５分間の洗浄を３回行った。引き続き、フルオロイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）にて標識したヤギIgGに対する二次抗体（Jackson社製）を０．１モル／Ｌのリン酸バッファー（ｐＨ７．４）に溶解した１％ＢＳＡにて１００倍に希釈し、２次抗体液を作製した。作製した２次抗体液に切片を室温にて１時間浸した後、ＰＢＳによる５回の洗浄を３回行い、染色状況をレーザー顕微鏡で観察した（図１のレーザー顕微鏡写真）。 Further, in order to double-stain the tissue section with an anti-CD14 antibody, the section developed with DAB was washed with PBS for 5 minutes three times, and then added to 0.1 mol / L phosphate buffer (pH 7.4). The sections were blocked with dissolved 10% rabbit serum (Jackson). An antibody against CD14 (manufactured by SantaCruz) was diluted 100-fold with 1% bovine serum albumin (BSA) dissolved in 0.1 mol / L phosphate buffer (pH 7.4) to prepare a primary antibody solution. . The previously blocked section was immersed in the prepared primary antibody solution and allowed to stand overnight at 4 ° C., followed by washing with PBS for 5 minutes three times. Subsequently, a secondary antibody (manufactured by Jackson) against goat IgG labeled with fluoroisothiocyanate (FITC) was dissolved 100% with 1% BSA dissolved in 0.1 mol / L phosphate buffer (pH 7.4). Dilution was performed to prepare a secondary antibody solution. After immersing the sections in the prepared secondary antibody solution for 1 hour at room temperature, washing was performed 5 times with PBS three times, and the staining was observed with a laser microscope (laser micrograph in FIG. 1).
ＣＤ１４陽性細胞におけるｐ−ＰＫＣ或いはＰＩ３Ｋ陽性細胞の数を顕微鏡下で計測し、ＣＤ１４陽性細胞におけるｐ−ＰＫＣ或いはＰＩ３Ｋ陽性細胞の割合を算出した（表１）。 The number of p-PKC or PI3K positive cells in CD14 positive cells was counted under a microscope, and the ratio of p-PKC or PI3K positive cells in CD14 positive cells was calculated (Table 1).
結果より、ＰＢＳ投与群ではＣＤ１４陽性細胞のほとんどがリン酸化ＰＫＣ或いはＰＩ３Ｋを発現している。しかし、Ｌ４二ナトリウム塩投与群では、リン酸化ＰＫＣ或いはＰＩ３Ｋを発現しているＣＤ１４陽性細胞は少ない。つまり、Ｌ４によりマクロファージや樹状細胞におけるリン酸化ＰＫＣ或いはＰＩ３Ｋの産生が顕著に抑制されることが明らかとなった。 From the results, in the PBS administration group, most of CD14 positive cells express phosphorylated PKC or PI3K. However, in the L4 disodium salt administration group, there are few CD14 positive cells expressing phosphorylated PKC or PI3K. That is, it became clear that L4 remarkably suppresses the production of phosphorylated PKC or PI3K in macrophages and dendritic cells.
Claims (2)
Ｇａｌ（６Ｓ）β１−４ＧｌｃＮＡｃ（６Ｓ）
（式中、Ｇａｌはガラクトース残基を、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を、６Ｓは６位のヒドロキシル基が-Ｏ-硫酸エステルとなっていることを、β１−４はβ１−４グリコシド結合をそれぞれ表す。） A phosphorylated protein kinase C production inhibitory reagent comprising a disaccharide keratan sulfate oligosaccharide represented by the following formula as an active ingredient .
Gal (6S) β1-4GlcNAc (6S)
(In the formula, Gal represents a galactose residue, GlcNAc represents an N-acetylglucosamine residue, 6S represents that the hydroxyl group at the 6-position is —O-sulfate, and β1-4 represents a β1-4 glycoside bond. Represents each.)
Ｇａｌ（６Ｓ）β１−４ＧｌｃＮＡｃ（６Ｓ）
（式中、Ｇａｌはガラクトース残基を、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を、６Ｓは６位のヒドロキシル基が-Ｏ-硫酸エステルとなっていることを、β１−４はβ１−４グリコシド結合をそれぞれ表す。） Phosphatidylinositol 3-kinase production inhibiting agent containing, as an active ingredient, the keratan sulfate oligosaccharide of disaccharide represented by the following formula.
Gal (6S) β1-4GlcNAc (6S)
(In the formula, Gal represents a galactose residue, GlcNAc represents an N-acetylglucosamine residue, 6S represents that the hydroxyl group at the 6-position is —O-sulfate, and β1-4 represents a β1-4 glycoside bond. Represents each.)
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