JP4509517B2

JP4509517B2 - 黄色ブドウ球菌の皮膚付着を阻害し、かつ、表皮ブドウ球菌の皮膚付着を促進させる剤

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Publication number: JP4509517B2
Application number: JP2003328880A
Authority: JP
Inventors: 尚範秋山; 啓氏岩月; 茂亀高
Original assignee: Rohto Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Rohto Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2002-09-19
Filing date: 2003-09-19
Publication date: 2010-07-21
Anticipated expiration: 2023-09-19
Also published as: JP2005002087A

Description

本発明は、黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤に関する。

アトピー性皮膚炎患者の皮膚病変部からは、高率・高濃度に病原菌である黄色ブドウ球菌が検出されることから、古くから黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）のアトピー性皮膚炎への関与が強く示唆されてきた。今日、アトピー性皮膚炎は社会問題の１つでもあることから、その皮膚病変部における黄色ブドウ球菌の存在意義解明のための検討が精力的に行われているが、今なお不明な点も多い。しかしながら、アトピー性皮膚炎において黄色ブドウ球菌が皮膚病変部から高率・高濃度に検出されるという事実は、黄色ブドウ球菌がアトピー性皮膚炎の病変形成やその増悪に深く関与していることを示すものである。従って、アトピー性皮膚炎患者の皮膚表面の状態改善を図ることを目的とした黄色ブドウ球菌への対処法が種々提案されている。

以上のような事情の下、グルコオリゴ糖（本発明ではマルトース・ショ糖縮合物を意味する）のアトピー性皮膚炎への有効性が期待されている。グルコオリゴ糖は、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis）などの人体にとって無害な微生物が優先的に資化できる物質として知られている。従って、グルコオリゴ糖の当該性質をアトピー性皮膚炎に適用すれば、グルコオリゴ糖は皮膚常在菌コントロール剤として機能し、表皮ブドウ球菌などの人体にとって無害な微生物を優先的に増殖させることにより、黄色ブドウ球菌などの病原菌の増殖を抑制し、その結果、皮膚表面の状態改善を図ることができるものと期待されている。このような考え方を利用し、例えば、特許文献１や特許文献２には、グルコオリゴ糖とセラミドや糖セラミドを配合したアトピー性皮膚炎に対して改善効果を有する皮膚化粧料や皮膚外用剤が記載されている。しかしながら、これらの特許文献にも記載されている通り、グルコオリゴ糖を単独で配合してもアトピー性皮膚炎の症状を十分に改善するにはいたらず、グルコオリゴ糖の皮膚常在菌コントロール剤としての機能は、必ずしも満足すべきものではない。これは、アトピー性皮膚炎において、皮膚表面に付着した黄色ブドウ球菌がいったん増殖するにいたった以上は、その増殖を抑制することには限度があることを示すものである。皮膚表面に付着した状態の黄色ブドウ球菌を洗浄などによって除去する方法も提案されているが、その効果は短時間しか持続せず不十分である。従って、アトピー性皮膚炎患者の皮膚表面の状態改善を図ることを目的とした黄色ブドウ球菌への対処法として、黄色ブドウ球菌をいかに皮膚表面に付着させないかという点に着目することは有用である。

そこで本発明は、黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤を提供することを目的とする。

本発明者らは上記の点に鑑みて種々の検討を行った結果、グルコオリゴ糖には上記のような皮膚常在菌コントロール剤としての作用の他にも、黄色ブドウ球菌が皮膚表面に付着することを阻害する作用があることを見出した。

本発明は上記の知見に基づいてなされたものであり、本発明の黄色ブドウ球菌の皮膚付着を阻害し、かつ、表皮ブドウ球菌の皮膚付着を促進させる剤は、請求項１記載の通り、マルトース・ショ糖縮合物を有効成分とすることを特徴とする。
また、本発明の黄色ブドウ球菌の皮膚付着を阻害し、かつ、表皮ブドウ球菌の皮膚付着を促進させるための皮膚外用剤または皮膚化粧料は、請求項２記載の通り、マルトース・ショ糖縮合物を有効成分として含有してなることを特徴とする。
また、本発明の皮膚外用剤または皮膚化粧料は、請求項３記載の通り、マルトース・ショ糖縮合物を、黄色ブドウ球菌の皮膚付着を阻害し、かつ、表皮ブドウ球菌の皮膚付着を促進させる剤として含有してなることを特徴とする。
また、請求項４記載の皮膚外用剤または皮膚化粧料は、請求項２または３記載の皮膚外用剤または皮膚化粧料において、さらに、抗炎症剤、ビタミン剤、保湿剤、抗菌剤および局所麻酔剤からなる群から選択される少なくとも一種以上の薬効成分を配合してなることを特徴とする。

本発明によれば、黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤が提供される。

本発明の黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤は、グルコオリゴ糖を有効成分とすることを特徴とするものである。本発明の黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤は、例えば、アトピー性皮膚炎のような、掻き傷から滲出してきた血漿成分を介して黄色ブドウ球菌が皮膚表面に付着して増殖することで障害が発生・悪化する疾患の予防に有用である。また、血漿成分が体外に滲出してくる擦り傷、掻き傷、切り傷といった外傷に対しても有用である。

本発明の黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤の有効成分であるグルコオリゴ糖としては、天然の糖であるマルトースとショ糖から固定化酵素法により得られる、例えば、（Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２））−（Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６））−（Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４））−（Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノース）なる構造を有するものが挙げられる。このようなグルコオリゴ糖は、例えば、ＢＩＯＥＣＯＬＩＡ（登録商標：ソラビア社）として市販されている。

本発明の黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤は、軟膏剤やゲル剤や液剤やローション剤などの形態にて黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害のための皮膚外用剤としてや、ボディ洗浄料、ハンド洗浄料、洗顔料などの洗浄料類やローション類や乳液類やクリーム類やパック類などの形態にて黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害のための皮膚化粧料などとして実用に供することができる。すなわち、本発明によれば、グルコオリゴ糖を黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤として、皮膚外用剤や皮膚化粧料などに含有せしめて実用に供することができる。その適用方法は、一般的な皮膚外用剤や皮膚化粧料などの適用方法に準じればよく、一日１回〜数回、適量を皮膚などの外皮に塗布するなどして用いることができる。

本発明の黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤は、常法により公知のあらゆる剤型に調製することができるが、例えば、皮膚外用剤や皮膚化粧料として製剤化するに際しては、通常用いられる基剤や添加剤などを適宜選択、配合して、常法によりクリーム、乳液、ローション、ゲルなどの剤型に調製することができる。グルコオリゴ糖に加え、色素、香料、防腐剤、界面活性剤、植物抽出液、ｐＨ調整剤、金属封鎖剤、油分、ゲル化剤、多価アルコール、高級アルコール、炭化水素、浸透促進剤、顔料、抗酸化剤等を適宜配合してもよい。本発明の黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤を、皮膚外用剤や皮膚化粧料に製剤化する場合の当該製剤のｐＨは、皮膚刺激のないｐＨであればよく、ｐＨ４．０〜８．０が好ましく、特にｐＨ４．０〜６．０が好ましい。

皮膚外用剤や皮膚化粧料として製剤化するに際、当該製剤におけるグルコオリゴ糖の含有量は、本発明の効果を奏する限り限定されないが、製剤全量を基準として、通常０．００１〜３０重量％、好ましくは０．０１〜２０重量％、より好ましくは０．０１〜１０重量％、特に好ましくは０．０１〜５重量％である。

皮膚外用剤や皮膚化粧料には、他の薬効成分を配合することで、本発明の効果を高めたり、さらなる効果を付与したりすることができる。かかる薬効成分は、皮膚や粘膜に対して薬効を発揮する成分であれば特に限定されるものではなく、皮膚や粘膜に生じる炎症・損傷の治癒や改善、皮膚の保護などあらゆる好ましい効果をもたらす成分をいう。このような薬効成分としては、具体的には、抗炎症剤、ビタミン剤、保湿剤、抗菌剤、局所麻酔剤などを例示することができる。

抗炎症剤としては、例えば、グリチルリチン酸並びにグリチルリチン酸二カリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウム等のグリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸又はその誘導体、アラントイン又はその誘導体、ε−アミノカプロン酸、カンゾウ抽出物、メントール、カンフルなどを例示することができる。好ましくは、カンゾウ抽出物、グリチルリチン酸二カリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウム、グリチルレチン酸、アラントイン、ε−アミノカプロン酸、メントール、カンフルである。

これらの成分は１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。またこれら抗炎症剤の配合量は、特に制限されないが、通常０．０１〜５重量％、好ましくは０．０１〜３重量％、より好ましくは０．０１〜２重量％の範囲から目的に応じて適宜選択調整することができる。

ビタミン剤としては、例えば、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール等のレチノール誘導体（ビタミンＡ類）、レチナール、レチノイン酸、レチノイン酸メチル、レチノイン酸エチル、レチノイン酸レチノール、ビタミンＡ油、ビタミンＡ脂肪酸エステル等のビタミンＡ類、β−カロチン、α−カロチン、γ−カロチン、δ−カロチン、リコピン、ゼアキサンチン、クリプトキサンチン、エキネノン等のプロビタミンＡ類、ｄｌ−α−トコフェロール、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール、コハク酸ｄｌ−α−トコフェロール、コハク酸ｄｌ−α−トコフェロールカルシウム等のビタミンＥ類、リボフラビン、フラビンモノヌクレオチド、フラビンアデニンジヌクレオチド、リボフラビン酪酸エステル、リボフラビンテトラ酪酸エステル、リボフラビン５’−リン酸エステルナトリウム、リボフラビンテトラニコチン酸エステル等のビタミンＢ２類、ニコチン酸ｄｌ−α−トコフェロール、ニコチン酸ベンジル、ニコチン酸メチル、ニコチン酸β−ブトキシエチル、ニコチン酸１−（４−メチルフェニル）エチル等のニコチン酸類、アスコルビゲン−Ａ、アスコルビン酸ステアリン酸エステル、アスコルビン酸パルミチン酸エステル、ジパルミチン酸Ｌ−アスコルビルなどのビタミンＣ類、メチルヘスペリジン、エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロールなどのビタミンＤ類、フィロキノン、ファルノキノン等のビタミンＫ類、γ−オリザノールなどがあげられる。また、ジベンゾイルチアミン、ジベンゾイルチアミン塩酸塩、チアミン塩酸塩、チアミンセチル塩酸塩、チアミンチオシアン酸塩、チアミンラウリル塩酸塩、チアミン硝酸塩、チアミンモノリン酸塩、チアミンリジン塩、チアミントリリン酸塩、チアミンモノリン酸エステルリン酸塩、チアミンモノリン酸エステル、チアミンジリン酸エステル、チアミンジリン酸エステル塩酸塩、チアミントリリン酸エステル、チアミントリリン酸エステルモノリン酸塩等のビタミンＢ１類、塩酸ピリドキシン、酢酸ピリドキシン、塩酸ピリドキサール、５’−リン酸ピリドキサール、塩酸ピリドキサミン等のビタミンＢ６類、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、デオキシアデノシルコバラミン等のビタミンＢ１２類、葉酸、プテロイルグルタミン酸等の葉酸類、ニコチン酸、ニコチン酸アミドなどのニコチン酸類、パントテン酸、パントテン酸カルシウム、パントテニルアルコール（パンテノール）、Ｄ−パンテサイン、Ｄ−パンテチン、補酵素Ａ、パントテニルエチルエーテル等のパントテン酸類、ビオチン、ビオチシン等のビオチン類、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、デヒドロアスコルビン酸、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム等のアスコルビン酸誘導体であるビタミンＣ類、そのほか、カルニチン、フェルラ酸、α−リポ酸、オロット酸等のビタミン様作用因子等を例示することができる。

好ましくは、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、レチナール、レチノイン酸、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム、アスコルビン酸ステアリン酸エステル、アスコルビン酸パルミチン酸エステル、リボフラビン、リボフラビン酪酸エステル、リボフラビン５’−リン酸エステルナトリウム、パントテン酸、パントテン酸カルシウム、レチノール、ビタミンＡ油、ビタミンＡ脂肪酸エステル、メチルヘスペリジン、葉酸、ジベンゾイルチアミン、ジベンゾイルチアミン塩酸塩、チアミン塩酸塩、チアミンセチル塩酸塩、チアミンチオシアン酸塩、チアミンラウリル塩酸塩、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、β−カロチン、エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール、塩酸ピリドキシン、パンテノール、ｄｌ−α−トコフェロール及び酢酸ｄｌ−α−トコフェロールである。
より好ましくはレチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、レチナール、レチノイン酸、アスコルビン酸、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム、アスコルビン酸ステアリン酸エステル、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、β−カロチン、エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール、塩酸ピリドキシンである。

これらの成分は１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。またこれらビタミン剤の配合量は、特に制限されないが、通常０．０１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜５重量％、より好ましくは０．０１〜２重量％の範囲から目的に応じて適宜選択調整することができる。

保湿剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ブドウ糖、ショ糖、果糖、キシリトール、乳糖、マルトース、マルチトール等の多価アルコール、ヒアルロン酸ナトリウム、ヘパリン類似物質、コンドロイチン硫酸ナトリウム、コラーゲン、エラスチン、ケラチン等の生体高分子、グリシン、アスパラギン酸、アルギニン等のアミノ酸、乳酸ナトリウム、尿素、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等の天然保湿因子であり、セラミド、コレステロール、リン脂質等の脂質類などがあげられる。また、ラベンダーエキス、ユーカリエキス、ペパーミントエキス等の植物抽出物等を例示することができる。好ましくは、グリセリン、ヒアルロン酸ナトリウム、ヘパリン類似物質、コンドロイチン硫酸ナトリウム、コラーゲン、ケラチン、グリシン、アスパラギン酸、アルギニン、乳酸ナトリウム、尿素、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、セラミド、コレステロール、ラベンダーエキス、ユーカリエキス、ペパーミントエキスである。

これらの成分は１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。またこれら保湿剤の配合量は、特に制限されないが、通常０．００５〜２０重量％、好ましくは０．０１〜１０重量％、より好ましくは０．０１〜５重量％の範囲から適宜選択調整することができる。

抗菌剤としては、例えば、イソプロピルメチルフェノール、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジニウム等を例示することができる。
これらの成分は１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。これら抗菌剤の配合量は、特に制限されないが、通常０．００１〜１０重量％、好ましくは０．００１〜５重量％、より好ましくは０．００１〜１重量％の範囲から適宜選択調整することができる。

局所麻酔剤としては、例えば、ユーカリ油、オイゲノール、メントール、カンフル、ハッカ油等を例示することができる。
これらの成分は１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。これらの局所麻酔剤の配合量は、特に制限されないが、通常０．０１〜２０重量％、好ましくは０．1〜１５重量％の範囲から適宜選択調整することができる。

本発明の黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤は、血漿成分が体外に滲出してくる前に適用しても後に適用しても効果的に黄色ブドウ球菌の皮膚表面への付着を阻害することから、創傷部から滲出してきた血漿成分を介して黄色ブドウ球菌が皮膚表面に付着して増殖することで障害が発生・悪化する疾患の予防に有用であり、アトピー性皮膚炎治療剤、創傷治癒剤などとして用いるのが好適である。

本発明を以下の試験例と実施例によってさらに詳細に説明するが、本発明は以下の記載に基づいて何ら限定して解釈されるものではない。なお、以下の試験例と実施例においては、グルコオリゴ糖としてＢＩＯＥＣＯＬＩＡ（登録商標：ソラビア社）を用いた。

黄色ブドウ球菌株として、アトピー性皮膚炎患者の皮膚病変部から採取した２株（コアグラーゼＩＩ型のＡＤ１とコアグラーゼＶＩＩ型のＡＤ２）を用いて以下の試験例１と試験例２を行った。両株に対するオキサシリンの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は、ＡＤ１に対しては１２８μｇ／ｍｌ、ＡＤ２に対しては０．１２μｇ／ｍｌであった。これらの黄色ブドウ球菌は、８ｍｌのＴＳＢ培地（日水製薬社）中で振盪することなく３７℃で一晩育成した後、４℃で１０分間６０００ｇにて遠心分離を行うことで取得し、その後、無菌食塩水に再懸濁してから前記と同様の条件で遠心分離を行い、この操作を合計３回繰り返した後、１ｍｌのポリプロピレン微量遠心分離チューブまたは組織培養ディシュ（３５×１０ｍｍ）に再懸濁することで懸濁液として接種に供した。黄色ブドウ球菌の接種は８．４×１０^７〜２．１×１０^７ｃｆｕ／ｍｌの範囲で行った。なお、以下の試験例１と試験例２における統計学上の処理は、対応のない２群の比較のためのｔ検定に拠った。

試験例１：種々の媒体中における黄色ブドウ球菌の増殖の観察
（方法）
２種の黄色ブドウ球菌（ＡＤ１とＡＤ２）懸濁液を別々に表１記載の試験液各１ｍｌに接種した。３７℃で２４時間インキュベートした後、それぞれの試験液中の菌数を１０倍希釈法によりカウントした。
（結果）
表１に示す。表１から明らかなように、５％グルコオリゴ糖添加０．５％食塩水中の黄色ブドウ球菌の菌数は、コントロールである０．５％食塩水中の黄色ブドウ球菌の菌数の１／１０以下であり、菌数が少なかった（Ｐ＜０．０１）。５％グルコオリゴ糖添加０．５％食塩水のｐＨは４．８であり、コントロールである０．５％食塩水のｐＨの６．６よりも低かった。即ち、５％グルコオリゴ糖添加によりｐＨの低下が見られた。一方、５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳ中の黄色ブドウ球菌の菌数は、コントロールであるＰＢＳ中の黄色ブドウ球菌の菌数と比べて減少はなかった。５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳのｐＨとコントロールであるＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）のｐＨは同じ７．４であり、５％グルコオリゴ糖添加によるｐＨの低下は見られなかった。また、データは示さないが、５％グルコオリゴ糖を０．５％トリプトン添加０．５％食塩水に添加してもｐＨの低下は見られず、黄色ブドウ球菌の菌数は減少しない。以上の結果から、５％グルコオリゴ糖は、ｐＨが弱酸性の状態において黄色ブドウ球菌の増殖を抑制することが示唆された。

試験例２：カバーガラス上への黄色ブドウ球菌の付着の観察
（方法）
１群のカバーガラス（１．７７ｃｍ^２，テフロン樹脂製：住友ベークライト社）を、組織培養ディシュの中で、ＰＢＳ、５％グルコース添加ＰＢＳ、１％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳ、５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳに浸漬して３７℃で１時間前処理した。処理を行ったカバーガラスは３ｍｌのＰＢＳで５回洗浄した。その後、組織培養ディシュの中で、ウサギ血漿（デンカ生研）に浸漬して３７℃で１時間処理し、ＰＢＳで５回洗浄して試験に供した。２種の黄色ブドウ球菌（ＡＤ１とＡＤ２）懸濁液を別々にこれらのカバーガラスを浸漬した３ｍｌのＰＢＳに接種した。３７℃で２４時間インキュベートした後、カバーガラスを液中から取り出し、３ｍｌのＰＢＳで５回穏やかに洗浄し、４ｍｌのＰＢＳ中でウルトラソニックス社モデルＷ−２２５Ｒを用いて６０％パワー下、４℃で４５秒間超音波処理し、カバーガラス上から離脱した黄色ブドウ球菌の菌数をカウントし、カバーガラス上に付着していた黄色ブドウ球菌の菌数を決定した。また、参考に供するために、黄色ブドウ球菌懸濁液と同様の方法で調製した２種の表皮ブドウ球菌（ＡＤ３とＡＤ４）懸濁液を用い、同様の試験を行った。
（結果）
表２に示す。表２から明らかなように、１％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳによる前処理とウサギ血漿による処理を行ったカバーガラス上と５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳによる前処理とウサギ血漿による処理を行ったカバーガラス上に付着していた黄色ブドウ球菌の菌数は、コントロールであるＰＢＳによる前処理とウサギ血漿による処理を行ったカバーガラス上に付着していた黄色ブドウ球菌の菌数の１／１０以下であり、菌数が少なかった（Ｐ＜０．０１）。５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳによる前処理とウサギ血漿による処理を行ったカバーガラス上に付着していた表皮ブドウ球菌の菌数は、コントロールであるＰＢＳによる前処理とウサギ血漿による処理を行ったカバーガラス上に付着していた表皮ブドウ球菌の菌数と比べて減少はなかった。以上の結果から、５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳによる処理により、カバーガラス上への黄色ブドウ球菌の付着が阻害されることがわかった。しかしながら、５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳによる処理は、表皮ブドウ球菌に対してはこのような作用を示さなかった。

試験例３：ヘアレスマウスを用いた評価試験
（方法１）
ヘアレスマウスの背中部分の皮膚を剥がし、これをアセトン：エーテル（１：１）溶液にて脱脂した後、ＰＢＳに２時間浸漬した。その後、皮膚を約２ｃｍ^２の大きさに切って２枚の皮膚片を調製し、２４穴プレートの２つのウエルにそれぞれ入れ、そこに試験溶液としての５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳを１ｍｌ添加し、３７℃で１時間インキュベートした後、ＰＢＳで５回洗浄した。次に、ウエルにウサギ血漿を１ｍｌ添加し、３７℃で１時間インキュベートした後、ＰＢＳで５回洗浄した。そして、一方のウエルには黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ６５３８株）を、他方のウエルには表皮ブドウ球菌（ＡＴＣＣ１２２２８株）をそれぞれ１．０×１０^７ｃｆｕ／ｍｌのＰＢＳ懸濁液１ｍｌ接種し、３７℃で２４時間インキュベートした。その後、走査型電子顕微鏡観察を行い、１００μｍ×８０μｍの視野あたりの付着菌数を計測し、１０視野の計測結果から平均値を算出した。また、試験溶液としての５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳのかわりにコントロールとしてのＰＢＳを用いて上記と同様の試験を行い、１０視野の計測結果から平均値を算出した。なお、統計学上の処理は、対応のない２群の比較のためのｔ検定に拠った。
（方法２）
ヘアレスマウスの背中部分の皮膚を剥がし、これをアセトン：エーテル（１：１）溶液にて脱脂した後、ＰＢＳに２時間浸漬した。その後、皮膚を約２ｃｍ^２の大きさに切って２枚の皮膚片を調製し、２４穴プレートの２つのウエルにそれぞれ入れ、そこにウサギ血漿を１ｍｌ添加し、３７℃で１時間インキュベートした後、ＰＢＳで５回洗浄した。次に、ウエルに試験溶液としての５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳを１ｍｌ添加し、３７℃で１時間インキュベートした後、ＰＢＳで５回洗浄した。そして、一方のウエルには黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ６５３８株）を、他方のウエルには表皮ブドウ球菌（ＡＴＣＣ１２２２８株）をそれぞれ１．０×１０^７ｃｆｕ／ｍｌのＰＢＳ懸濁液１ｍｌ接種し、３７℃で２４時間インキュベートした。その後、走査型電子顕微鏡観察を行い、１００μｍ×８０μｍの視野あたりの付着菌数を計測し、１０視野の計測結果から平均値を算出した。また、試験溶液としての５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳのかわりにコントロールとしてのＰＢＳを用いて上記と同様の試験を行い、１０視野の計測結果から平均値を算出した。なお、統計学上の処理は、対応のない２群の比較のためのｔ検定に拠った。
（結果）
図１と図２に示す。図１から明らかなように、５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳは、ウサギ血漿を添加する前に添加しても後に添加しても黄色ブドウ球菌の皮膚表面への付着を阻害した。しかしながら、図２から明らかなように、表皮ブドウ球菌の皮膚表面への付着は阻害せず、促進させた。

実施例１：皮膚外用剤（ゲル剤）
公知の方法に準じ、以下の組成を有するｐＨ５．５の皮膚外用剤を製造した（単位：ｗ／ｖ）。
グルコオリゴ糖５．０％
カルボキシビニルポリマー０．３％
トリエタノールアミン０．１％
パラベン０．０５％
ｐＨ調整剤適量
精製水適量
合計１００％

実施例２：皮膚化粧料（ローション）
公知の方法に準じ、以下の組成を有するｐＨ４．５の皮膚化粧料を製造した（単位：ｗ／ｖ）。
グルコオリゴ糖０．００１％
キサンタンガム０．１％
アルギン酸ナトリウム０．１％
フェノキシエタノール０．５％
ｐＨ調整剤適量
精製水適量
合計１００％

実施例３：皮膚化粧料（ローション）
公知の方法に準じ、以下の組成を有するｐＨ５．５の皮膚化粧料を製造した（単位：ｗ／ｗ％）。
１，３−ブチレングリコール１２．０％
グリセリン３．０％
グルコオリゴ糖２．０％
コラーゲントリペプチド０．０１％
アラントイン０．１％
ポリクオタニウム−５１０．５％
ヒアルロン酸ナトリウム０．０１％
ＰＥＧ−１５０００．５％
ｐＨ調整剤適量
防腐剤微量
精製水適量
合計１００％

実施例４：皮膚外用剤（乳液）
公知の方法に準じ、以下の組成を有するｐＨ５．０の皮膚外用剤を製造した（単位：ｗ／ｗ％）。
１，３−ブチレングリコール１２．０％
ホホバ油６．０％
グリセリン４．０％
ワセリン３．５％
ポリオキシエチレン（４０）硬化ヒマシ油１．５％
ステアリン酸グリセリル１．２％
コラーゲントリペプチド０．１％
アラントイン０．１％
カルボキシビニルポリマー０．１％
キサンタンガム０．１％
セタノール０．６％
パンテノール１．０％
トリエタノールアミン適量
精製水適量
合計１００％

実施例５：皮膚外用剤（クリーム）
公知の方法に準じ、以下の組成を有するｐＨ５．０の皮膚外用剤を製造した（単位：ｗ／ｗ％）。
１，３−ブチレングリコール１５．０％
ワセリン１５．０％
グリセリン７．０％
グルコオリゴ糖５．０％
ステアリルアルコール１．０％
ポリオキシエチレン（４０）硬化ヒマシ油１．８％
ステアリン酸グリセリル１．０％
コラーゲントリペプチド０．５％
グリチルリチン酸二カリウム０．１％
カルボキシビニルポリマー０．４％
トリエタノールアミン適量
精製水適量
合計１００％

実施例６：皮膚外用剤（ゲル剤）
公知の方法に準じ、以下の組成を有するｐＨ６．０の皮膚外用剤を製造した（単位：ｗ／ｗ％）。
グルコオリゴ糖０．５％
アルキル変性カルボキシビニルポリマー０．５％
１，３−ブチレングリコール５．０％
フェニルメチルポリシロキサン１．０％
ラベンダー油０．１％
ヒアルロン酸ナトリウム０．１％
メントール０．１％
アルギニン適量
精製水適量
合計１００％

実施例７：皮膚化粧料（洗浄料）
公知の方法に準じ、以下の組成を有するｐＨ６．０の皮膚化粧料を製造した（単位：ｗ／ｗ％）。
グルコオリゴ糖４．０％
ポリオキシエチレンスルホコハク酸ラウリル二ナトリウム
５．０％
１，２−ペンタンジオール２．０％
n-ラウロイル-N’-カルボキシメチル-N’-ヒドロキシエチルエチレンジアミンナトリウム
３．５％
コラーゲントリペプチド０．３％
ラウリン酸ポリグリセリル２．０％
ポリオキシプロピレン(1)ヤシ油脂肪酸モノイソプロパノールアミド
０．５％
フェノキシエタノール０．３％
ティーツリーオイル０．１％
ｐＨ調整剤適量
精製水適量
合計１００％

本発明は、黄色ブドウ球菌の皮膚付着阻害剤を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。

試験例３における５％グルコオリゴ糖添加ＰＢＳの黄色ブドウ球菌の皮膚表面への付着に対する影響を示すグラフ。同、表皮ブドウ球菌の皮膚表面への付着に対する影響を示すグラフ。

Claims

マルトース・ショ糖縮合物を有効成分とすることを特徴とする黄色ブドウ球菌の皮膚付着を阻害し、かつ、表皮ブドウ球菌の皮膚付着を促進させる剤。
マルトース・ショ糖縮合物を有効成分として含有してなることを特徴とする黄色ブドウ球菌の皮膚付着を阻害し、かつ、表皮ブドウ球菌の皮膚付着を促進させるための皮膚外用剤または皮膚化粧料。
マルトース・ショ糖縮合物を、黄色ブドウ球菌の皮膚付着を阻害し、かつ、表皮ブドウ球菌の皮膚付着を促進させる剤として含有してなることを特徴とする皮膚外用剤または皮膚化粧料。
さらに、抗炎症剤、ビタミン剤、保湿剤、抗菌剤および局所麻酔剤からなる群から選択される少なくとも一種以上の薬効成分を配合してなることを特徴とする請求項２または３記載の皮膚外用剤または皮膚化粧料。