JP4454069B2 - Chronic hepatitis inhibitor - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アキノワスレグサの抽出物を有効成分として含有する慢性肝炎抑制剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
肝臓障害のうち急性肝障害についてはある程度研究も進み種々の治療が行われているが、慢性肝障害については原因等、不明な点が多く効果的な治療方法は確立されていない。この慢性肝障害は免疫系を介する肝障害であると考えられている。
【０００３】
このような慢性肝障害に対しては漢方薬を用いた治療が行われている。この漢方療法においては、大柴胡湯、小柴胡湯、柴胡桂枝湯、柴胡桂姜湯、四逆散等が用いられている（「一般用漢方処方（漢方２１０処方）」日本製薬団体連合会漢方専門委員会（１９７５）、「漢方概論」藤平健、小倉重成著、創元社（１９７９）」）。これらの漢方薬に含まれている生薬の有効成分については不明な点が多いが、例えば三七人参については、その成分に肝保護作用が認められている（特願平８−４６１５４）。また、これらの生薬は、副作用が少ないと言うメリットが知られている。
【０００４】
しかし、これらの生薬は、海外に原料を依存するものが多いため入手が困難であり、且つ野生のものを採取するものもあり作用が一定ではない（「生薬学第４版」北川勲ら著（廣川書店）ｐｐ３８４−３８７、１９９２）、「漢方薬の評価と開発技術」東京生薬研究会編（（株）シーエムシー）ｐｐ３５３−３５４（１９８３））という問題がある。すなわち、漢方薬は一般的に高価であり、日常的な摂取が困難であるというデメリットがある。
【０００５】
また、野菜を原料に、肝障害抑制作用を有する有効成分の抽出も試みられている。野菜では、ニンニク(Kagawa, K. et al. Japan. J. Pharmacol.,Vol. 42, p.19-26(1986), Nakagawa, S. et al. Hiroshima J. Med. Sci., Vol. 34, p.303-309(1985))、人参(Bishayee, A. et al. J. Ethnopharmacl., Vol.47, p.69-74(1995)、オオヒジキ(САРТИКОВ, А.С.et al. Khim. Farm. Zh., Vol. 24, p.38-40(1990)）が急性肝障害抑制効果を示す事が知られているが、慢性肝障害抑制効果を示すものは知られていなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、安全かつ調製が容易な慢性肝炎抑制剤を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、上記課題を解決するため精鋭探索したところ、アキノワスレグサに優れた慢性肝炎抑制作用があること見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、アキノワスレグサの抽出物を有効成分として含有する慢性肝炎抑制剤及びこの慢性肝炎抑制剤を含有する慢性肝炎用の医薬品組成物である。
【０００８】
また、本発明においてアキノワスレグサから慢性肝炎抑制作用を示す有効成分を抽出する溶媒としては、水及び／または水溶性の極性有機溶媒を用いるのが好ましい。また、本発明の有効成分は、アキノワスレグサから非水溶性の有機溶媒を用いて抽出されたものを除いた後の残渣から水及び／または水溶性の極性有機溶媒を用いて抽出するのが好ましい。
【０００９】
更に、水溶性の極性有機溶媒の中では、メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、ｉ−プロピルアルコール、ｎ−ブチルアルコール，ｉ−ブチルアルコール、ｓｅｃ−ブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、アセトンから選ばれる１種又は２種以上を組み合わせて用いるのが好ましい。更に、本発明の有効成分は、水及び／またはメタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、ｉ−プロピルアルコール、ｔ−ブチルアルコールから選ばれる１種又は２種以上を用いて抽出されたものから、更にｎ−ブチルアルコール，ｉ−ブチルアルコール、ｓｅｃ−ブチルアルコールから選ばれる１種又は２種以上を用いて抽出するのが好ましい。
【００１０】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
＜１＞本発明の慢性肝炎抑制剤
（１）アキノワスレグサの抽出物
本発明の慢性肝炎抑制剤は、アキノワスレグサの抽出物を有効成分として含有する。本発明において用いるアキノワスレグサはユリ科キスゲ属に属する植物である。本発明ではアキノワスレグサの茎、葉、根等の植物組織のいずれの部分を使用しても良いが、特に、本発明の慢性肝炎抑制作用を示す有効成分は茎、葉の部分に多く含まれているため、これらの組織を用いることが好ましい。
【００１１】
上記アキノワスレグサは慢性肝炎抑制作用を有する成分を含んでおり、粉砕した茎、葉の組織をそのまま用いることも可能であるが、抽出により前記有効成分を含む抽出物を取り出して、本発明の慢性肝炎抑制剤の有効成分として用いることが好ましい。本発明において抽出物とは、このような粉砕物及び抽出物、又はこれらの濃縮物のいずれでもよく、またこれらの混合物でもよい。
【００１２】
アキノワスレグサの抽出処理は、連続式、バッチ式等の方法で、常法により冷浸または温浸にて任意の時間行う。例えば、アキノワスレグサは乾燥粉末を、細かく粉砕し、抽出溶媒に、室温で１〜４８時間、浸漬及び又は振とうして行う。その後、抽出液から抽出残渣を除いて、減圧または限外濾過を行い抽出物を濃縮する。さらに、必要に応じて溶媒を留去して乾固するかまたは凍結乾燥する。
【００１３】
このような抽出に用いる溶媒としては、水や各種の有機溶媒が挙げられるが、水もしくは水溶性の極性有機溶媒またはこれらの混合物が好ましい。水溶性の極性有機溶媒とは、水とある範囲以上で混ざる極性有機溶媒、すなわち、２０℃で水に対する溶解度が１０重量％以上である極性有機溶媒をいう。例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、ｉ−プロピルアルコール、ｎ−ブチルアルコール，ｉ−ブチルアルコール、ｓｅｃ−ブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、アセトン等が好ましくは挙げられる。
【００１４】
上記のように、本発明の抽出物はアキノワスレグサから水もしくは水溶性の極性有機溶媒またはこれらの混合物により直接抽出することができるが、この抽出操作の前に、非水溶性の有機溶媒により抽出される不純物を取り除く処理を行うのが好ましい。非水溶性の有機溶媒とは、水とほとんど混ざらない溶媒、すなわち、２０℃で水に対する溶解度が１０重量％未満である溶媒をいう。例えば、ベンゼン、ヘキサン、四塩化炭素、クロロホルム、各種のエーテル、各種のエステル等が挙げられる。非水溶性の有機溶媒であれば非極性の溶媒、極性の溶媒のいずれでも用いることができる。これらの中では、ヘキサン等の非極性の有機溶媒と、酢酸エチル等の極性の有機溶媒の２種類以上の溶媒を用いて、それぞれの溶媒に溶解する不純物を取り除く処理を行うのが好ましい。
【００１５】
したがって、好ましい態様としては、アキノワスレグサの乾燥粉末から非水溶性の有機溶媒により抽出される不純物を取り除く処理をし、次に、水溶性の極性有機溶媒を用いて本願発明の有効成分を抽出するのが好ましい。
【００１６】
以下 本発明の有効成分の抽出例を以下に例示するが、本発明はこの抽出例に限定されるものではない。まず、アキノワスレグサを凍結乾燥し、この乾燥粉末にヘキサン等の非水溶性の非極性有機溶媒を加え、この溶媒に可溶性の成分を取り除く。この際に用いる非水溶性の非極性有機溶媒としは、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン等が好ましくは例示できる。アキノワスレグサに加える溶媒の量は、乾燥粉末１ｇ当たり、１〜２００ｍｌであるのが好ましく、１０〜５０ｍｌであるのが更に好ましい。操作はアキノワスレグサにこの溶媒を加えた後、スターラー等でよく攪拌し、非極性の有機溶媒に可溶性の画分を抽出する。この操作は、通常２回〜５回繰り返すのが好ましい。
【００１７】
次に、上記の操作で残渣として残った部分に、酢酸エチル等の非水溶性の極性有機溶媒を加え、この溶媒に可溶性の成分を取り除く。この際に用いる非水溶性の極性有機溶媒としては、酢酸エチル、酢酸メチル等のエステル類が好ましくは例示できる。アキノワスレグサに加える溶媒の量は、乾燥粉末１ｇ当たり、１〜２００ｍｌであるのが好ましく、１０〜５０ｍｌであるのが更に好ましい。操作はアキノワスレグサにこの溶媒を加えた後、スターラー等でよく攪拌し、極性の有機溶媒に可溶性の画分を抽出する。この操作は、通常２回〜５回繰り返すのが好ましい。
【００１８】
次に、上記の操作で残渣として残った部分に、アルコール等の水溶性の極性有機溶媒またはこれらと水の混合物を加え、本発明の有効成分を抽出する。水溶性の極性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、ｉ−プロピルアルコール、ｎ−ブチルアルコール，ｉ−ブチルアルコール、ｓｅｃ−ブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール等が例示できる。これらの中では、メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、ｉ−プロピルアルコール、ｔ−ブチルアルコールまたはこれらと水との混合物を用いるのが好ましく、５０〜９０重量％のメタノールまたはエタノール水溶液を用いるのが特に好ましい。アキノワスレグサに加える溶媒の量は、乾燥粉末１ｇ当たり、１〜２００ｍｌであるのが好ましく、１０〜５０ｍｌであるのが更に好ましい。操作はアキノワスレグサにこの溶媒を加えた後、スターラー等でよく攪拌し、極性の有機溶媒に可溶性の画分を抽出する。この操作は、通常２回〜５回繰り返すのが好ましい。
【００１９】
この抽出物は、慢性肝炎抑制剤としてそのまま用いることができるが、以下の処理により水に溶解する不純物を取り除く処理をするのが好ましい。この処理に用いる溶媒としては、水とある範囲でしか混ざらない水溶性の極性溶媒、すなわち、ｎ−ブチルアルコール，ｉ−ブチルアルコール、ｓｅｃ−ブチルアルコールまたはこれらの混合物を用いるのが好ましい。抽出物に加える溶媒の量は、乾燥粉末１ｇ当たり、１〜１００ｍｌであるのが好ましく、５〜２０ｍｌであるのが更に好ましい。操作は抽出物にブチルアルコールを加えた後、スターラー等でよく攪拌し、ブチルアルコールに可溶性の画分を抽出する。この操作は、通常３回〜７回繰り返すのが好ましい。
【００２０】
このようにして得られた抽出物は、慢性肝炎抑制剤としてそのまま用いることができるが、濃縮して、溶媒を蒸発させることにより固形物として用いることが好ましい。濃縮は、常圧または減圧条件下で、通常に用いられる各種の濃縮方法を用いて行うことができる。
【００２１】
（２）慢性肝炎抑制剤
本発明の慢性肝炎抑制剤は、上記のアキノワスレグサの抽出物を有効成分として含有す
るものである。また、これらの抽出物は、そのまま製剤とすることもできるし、また、各種基剤に配合して製剤としてもよい。配合量や基剤に種類は特に限定されるものではなく、適宜設定すればよい。
【００２２】
＜２＞本発明の慢性肝炎抑制剤を含有する組成物
本発明の組成物は、上記の慢性肝炎抑制剤を、常法にしたがって配合したものであり、例えば、食品、医薬品等が例示できる。本発明の医薬品の剤型は、特に限定されないが、一般に製剤上許容される１または２種類以上の担体、賦形剤、統合剤、防腐剤、安定剤、香味剤等と共に混合して、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、水薬、ドリンク剤等の内服剤型とすることが好ましい。このような製剤化は、通常、医薬の製造に用いられる方法にしたがって製剤化することができる。上記医薬品の投与量としては、疾患の種類、症状、患者の年齢、体重等に異なるが、成人１日当たり、アキノワスレグサの抽出物として、５００ｍｇ〜５０００ｍｇを１回ないし数回に分けて経口投与するのが好ましい。
【００２３】
食品に、上記の慢性肝炎抑制剤を用いる場合には、種々の食品に、食品として通常用いられている任意成分とともに、食品原料に抽出物を所要量配合することができる。この抽出物を配合する際に特に留意するすることはなく、通常の製造方法により加工製造することにより、健康食品、機能性食品を製造することができる。配合量は、食品の種類のより異なるが、食品の味を損なわず、且つ十分な慢性肝炎抑効果を得るためには、食品全量に対して、０．１〜１０重量％の割合で配合するのが好ましい。
【００２４】
【実施例】
以下実施例により、本発明を更に具体的に説明する。
【００２５】
【実施例１】
＜本発明の有効成分の抽出＞
アキノワスレグサの茎、葉の部分を凍結乾燥し、乾燥粉末１００ｇを得た。この乾燥粉末を、以下の図１に示す流れに従って分画し、後の評価に使用した。
【００２６】
（ａ）ヘキサンによる不純物の除去
アキノワスレグサの茎の部分を凍結乾燥して得た乾燥粉末１００ｇに２Ｌのｎ−ヘキサンを加え十分に攪拌後、残渣を取り除いた上清をヘキサン抽出液として得た。この操作を更に２回繰り返し、計３回の操作により、６０００ｍｌのヘキサン抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターを用いて濃縮乾固させることにより、１．８ｇの固形物がヘキサン画分から得られた。
【００２７】
（ｂ）酢酸エチルによる不純物の除去
次に上記の操作（ａ）の残渣９８．２ｇに酢酸エチル２Ｌを加え十分に攪拌後渣を取り除いた上清を酢酸エチル抽出液として得た。この操作を更に２回繰り返し、計３回の操作により、６０００ｍｌの酢酸エチル抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターを用いて濃縮乾固させることにより、１．８ｇの固形物が酢酸エチル画分から得られた。
【００２８】
（ｃ）７０％エタノールによる抽出
次に上記の操作（ｂ）の残渣９６．４ｇに７０％エタノール２Ｌを加え十分に攪拌後、残渣を取り除いた上清を７０％エタノール抽出液として得た。この操作を更に３回繰り返し、計４回の操作により、８０００ｍｌの７０％エタノール抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターを用いて濃縮乾固させることにより４２．８ｇの固形物が７０％エタノール画分から得られた。また、操作（ｃ）により、５３．６ｇのエタノール残渣が得られた。
【００２９】
（ｄ）ブチルアルコール（ブタノール）による抽出
次に上記の操作（ｃ）による濃縮乾固物４２．８ｇを５００ｍｌの蒸留水に溶解させた。そして、この溶液に５００ｍｌのｎ−ブタノールを加え十分に攪拌後、分液ロートを用いた向流分配によりブタノール層を抽出した。残った水層には、更に５００ｍｌのｎ−ブチルアルコールを加え十分に攪拌後、ｎ−ブチルアルコールによる抽出を行った。この抽出を更に３回繰り返し、計５回の抽出操作により、２５００ｍｌのブチルアルコール抽出液を得た。このブチルアルコール抽出液をエバポレーターを用いて濃縮乾固させることにより１０．０ｇの固形物がブチルアルコール画分から得られた。
【００３０】
また、操作（ｄ）で水層部分の溶液を凍結乾燥装置を用いて濃縮乾固させることにより３２．８ｇの固形物が水溶性画分から得られた。上記の操作による分画により得られた各分画への分配率（重量％）を表１に示す。ここで、分配率とは、各分画から得られた固形物の重量を、分画開始前の重量（１００ｇ）で除した値に１００を乗じて％表示したものである。
【００３１】
【表１】

【００３２】
【実施例２】
＜慢性肝炎抑制剤の評価＞
慢性肝炎に対する肝保護作用は、ラットを用いたＤ−ガラクトサミン誘導性の肝障害モデルにより評価した。このＤ−ガラクトサミン誘導性の肝障害は、免疫系を介しての肝障害作用が示唆されるため、慢性肝炎のモデルとされており、臨床試験での評価結果と相関性が高い。
【００３３】
評価には、５週齢の雄性ウィスター系ラットを用いた。４〜５日間の予備飼育の後、試験飼料を１０日間摂取させた。試験に用いた飼料の基本組成は以下の表２の通りである。また、各分画からの抽出物の飼料への添加は、表３の示した通りである。すなわち、飼料１ｋｇ当たり、各添加物とコーンスターチの合計量を４０１ｇに維持しつつ、ヘキサン画分、酢酸エチル画分、ブチルアルコール画分および水溶性画分においては、各画分の抽出物をそれぞれ１．０ｇ、１．１ｇ、５．８ｇ及び１９．２ｇの比率で添加物として配合して飼料を調整した。
【００３４】
【表２】

【００３５】
【表３】

【００３６】
上記の試験飼料を１０日間摂取させた後に、肝障害を誘発するＤ−ガラクトサミンを３５０ｍｇ／ｋｇ腹膜内投与した。そして、その２２時間後に被検ラットを屠殺し、採血及び肝臓摘出を行った。偽薬投与群には、同容量の生理食塩水を投与した。
【００３７】
この採血した血液を用いて、肝細胞の脱落により血中濃度が上昇することが知られている酵素、すなわち、ＡＬＴ：アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＧＰＴ）活性と、ＡＳＴ：アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）活性を市販の測定キット（和光純薬）により測定した。そして、この酵素活性の増減を肝障害の指標とした。また、摘出した肝臓の重量も測定した。酵素活性の増減の結果を図２および３にそれぞれ示す。
【００３８】
図２および３に示したとおり、偽処理群（Ｄ−ガラクトサミン非投与群）に比べて、対照群（Ｄ−ガラクトサミン投与群）では顕著に、ＡＬＴ活性とＡＳＴ活性の両方が上昇しており、肝細胞の壊死がおきていることが示唆された。一方、アキノワスレグサの抽出画分を添加した飼料で飼育した群の中では、ブチルアルコール抽出画分を添加物として加えた群で、明かに肝障害抑制作用が観察された。なお、分散分析の後、Ｄｕｎｃａｎ法による検定を行ったところ、ブチルアルコール抽出画分を添加物として加えた群は、他のすべてのＤ−ガラクトサミン投与群に対して５％以下の危険率で統計的に有意差があることを示した。なお、図２および３中に示してあるアルファベット（ａ，ｂ，ｃ）は、共通するアルファベットを有しない群間で、危険率５％未満で有意差があることを示す。
【００３９】
また、摘出された肝臓重量の測定結果を、各群７匹のラットの平均値として、標準偏差とともに表４に示す。表４に示すように、Ｄ−ガラクトサミン投与群では、非投与群と比較してすべての群で肝臓重量の減少が観察された。この減少はＤ−ガラクトサミン処理により肝臓の壊死が引き起こされたためであると示唆される。ブチルアルコール抽出画分を添加物として加えた群では、肝臓重量の減少が他のＤ−ガラクトサミン投与群に比べて少なく、このブチルアルコール抽出画分は肝臓の壊死に対しても抑制作用を示した。
【００４０】
【表４】

【００４１】
【比較例１】
＜他の肝障害抑制作用を有する植物との比較＞
これまでに四塩化炭素誘導性の肝障害に対して抑制作用を有すると報告されているオカヒジキ、ニンジン、ニンニクについて、アキノワスレグサとの比較試験を行った。いずれの植物とも、可食部分の凍結乾燥粉末をサンプルとした。
慢性肝炎に対する肝保護作用は、ラットを用いたＤ−ガラクトサミン誘導性の肝障害モデルにより評価した。試験に用いた飼料の基本組成は前出の表２の通りである。また、各植物の乾燥粉末の飼料への添加は、いずれも３０ｇ／ｋｇとし、粉末とコーンスターチの含有量を４０１ｇ（サンプル３０ｇ＋コーンスターチ３７１ｇ）とした。結果を、各群７匹のラットの平均値として、標準偏差とともに以下の表５に示す。
【００４２】
【表５】

【００４３】
オカヒジキ、ニンジンを、アキノワスレグサと同量添加しても、有意な肝保護作用はみとめられなかった。ニンニクを添加した群は、対照群と比較して、有意にＤ−ガラクトサミン誘導性の肝障害を抑制したが、アキノワスレグサを添加した群よりもその抑制の程度は低かった。
【００４４】
【発明の効果】
本発明のアキノワスレグサの抽出物を有効成分として含有する慢性肝炎抑制剤は、優れ
た慢性肝炎の抑制効果を有する。また、本発明の慢性肝炎抑制剤は植物由来であるため安全であり、且つその抽出が容易であるため、処方が容易な、該慢性肝炎抑制剤を含む慢性肝炎用の医薬品組成物を提供することができる。
【００４５】
【図面の簡単な説明】
【図１】 アキノワスレグサから慢性肝炎抑制剤の有効成分を抽出する一例を示す図である。
【図２】 薬物投与２２時間後のＡＬＴ（ＧＰＴ）活性値を示す図である。
【図３】 薬物投与２２時間後のＡＳＴ（ＧＯＴ）活性値を示す図である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
TECHNICAL FIELD The present invention relates to a chronic hepatitis inhibitor containing an extract of Aquinois regusa as an active ingredient.
[0002]
[Prior art]
Among liver disorders, acute liver disorders have been studied to some extent and various treatments have been carried out. However, for chronic liver disorders, there are many unclear points such as causes, and an effective treatment method has not been established. This chronic liver disorder is considered to be a liver disorder via the immune system.
[0003]
Treatment with such Chinese medicine is performed for such chronic liver disorders. In this Kampo therapy, Dai-saiko-to, Sho-saiko-to, Saiko-Kei-to, Sai-ko-Kai-to, Shikakusan, etc. are used. Kampo Special Committee (1975), "Introduction to Kampo" by Ken Fujihira, Shigenari Ogura, Sogensha (1979)). Although there are many unclear points about the active ingredients of herbal medicines contained in these Chinese herbal medicines, for example, for ginseng, the ingredients have been found to have a liver protective effect (Japanese Patent Application No. 8-46154). In addition, these herbal medicines are known to have the merit that there are few side effects.
[0004]
However, these herbal medicines are difficult to obtain because many of them depend on raw materials overseas, and the action is not constant due to the collection of wild things ("Biopharmaceutical 4th edition" written by Isao Kitagawa et al. (Yodogawa Shoten) pp 384-387, 1992), “Evaluation and Development Technology of Kampo Medicine”, edited by Tokyo Seiyaku Kenkyukai (CMC Co., Ltd.) pp 353-354 (1983)). That is, Chinese medicine is generally expensive and has a demerit that it is difficult to take on a daily basis.
[0005]
Moreover, extraction of the active ingredient which has a liver disorder inhibitory effect from vegetable as a raw material is also tried. In vegetables, garlic (Kagawa, K. et al. Japan. J. Pharmacol., Vol. 42, p. 19-26 (1986), Nakagawa, S. et al. Hiroshima J. Med. Sci., Vol. 34 , p.303-309 (1985)), ginseng (Bishayee, A. et al. J. Ethnopharmacl., Vol.47, p.69-74 (1995), baboon (САРТИКОВ, А.С.et al. Khim) Farm. Zh., Vol. 24, p.38-40 (1990)) is known to show an effect of suppressing acute liver injury, but none of which shows an effect of suppressing chronic liver injury was known.
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a chronic hepatitis inhibitor that is safe and easy to prepare.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
The inventors of the present invention have conducted an extensive search to solve the above-mentioned problems. As a result, the inventors have found that Aquinois regusa has an excellent chronic hepatitis inhibitory action and have completed the present invention. That is, the present invention is a chronic hepatitis inhibitor containing an extract of Achillea regusa as an active ingredient, and a pharmaceutical composition for chronic hepatitis containing this chronic hepatitis inhibitor.
[0008]
In the present invention, water and / or a water-soluble polar organic solvent is preferably used as a solvent for extracting an active ingredient exhibiting an effect of suppressing chronic hepatitis from Achillea regusa. In addition, the active ingredient of the present invention is preferably extracted from the residue after removing the extract from Achillea grass using a water-insoluble organic solvent using water and / or a water-soluble polar organic solvent. .
[0009]
Furthermore, among water-soluble polar organic solvents, it is selected from methanol, ethanol, n-propyl alcohol, i-propyl alcohol, n-butyl alcohol, i-butyl alcohol, sec-butyl alcohol, t-butyl alcohol, and acetone. It is preferable to use 1 type or in combination of 2 or more types. Furthermore, the active ingredient of the present invention is extracted from water and / or one or two or more selected from methanol, ethanol, n-propyl alcohol, i-propyl alcohol, and t-butyl alcohol. Extraction is preferably performed using one or more selected from n-butyl alcohol, i-butyl alcohol, and sec-butyl alcohol.
[0010]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
<1> Chronic Hepatitis Inhibitor of the Present Invention (1) Extract of Aquinoa Legusa The chronic hepatitis suppressor of the present invention contains an extract of Aquinois regusa as an active ingredient. The Aquinois regusa used in the present invention is a plant belonging to the genus Lisaceae. Stems daylilies in the present invention, the leaves, may be used any part of a plant tissue of roots and the like, in particular, active ingredients indicating the chronic hepatitis inhibitory effect of the present invention stems, contained in many parts of the leaves Therefore, it is preferable to use these tissues.
[0011]
The Achillea regusa contains a component having an inhibitory effect on chronic hepatitis , and it is possible to use the pulverized stem and leaf tissues as they are. However, the extract containing the active ingredient is extracted by extraction, and the chronic of the present invention is extracted. It is preferable to use it as an active ingredient of a hepatitis inhibitor. In the present invention, the extract may be any of such pulverized product and extract, or a concentrate thereof, or a mixture thereof.
[0012]
The extraction process of the Aquinois regusa is carried out by a continuous method, a batch method, or the like, and is carried out for an arbitrary time by cold or digestion according to a conventional method. For example, Akinowasusa is performed by finely pulverizing a dry powder and immersing and / or shaking in an extraction solvent at room temperature for 1 to 48 hours. Thereafter, the extraction residue is removed from the extract, and the extract is concentrated under reduced pressure or ultrafiltration. Further, if necessary, the solvent is distilled off to dryness or freeze-drying.
[0013]
Examples of the solvent used for such extraction include water and various organic solvents, and water, a water-soluble polar organic solvent, or a mixture thereof is preferable. The water-soluble polar organic solvent refers to a polar organic solvent mixed with water in a certain range or more, that is, a polar organic solvent having a solubility in water of 10% by weight or more at 20 ° C. For example, methanol, ethanol, n-propyl alcohol, i-propyl alcohol, n-butyl alcohol, i-butyl alcohol, sec-butyl alcohol, t-butyl alcohol, acetone and the like are preferable.
[0014]
As described above, the extract of the present invention can be directly extracted from Achillea grass with water or a water-soluble polar organic solvent or a mixture thereof, but before this extraction operation, it is extracted with a water-insoluble organic solvent. It is preferable to carry out a treatment for removing the impurities. The water-insoluble organic solvent means a solvent that hardly mixes with water, that is, a solvent having a solubility in water of less than 10% by weight at 20 ° C. Examples include benzene, hexane, carbon tetrachloride, chloroform, various ethers, various esters, and the like. As long as it is a water-insoluble organic solvent, either a nonpolar solvent or a polar solvent can be used. In these, it is preferable to perform the process which removes the impurity which melt | dissolves in each solvent using two or more types of solvents, such as nonpolar organic solvents, such as hexane, and polar organic solvents, such as ethyl acetate.
[0015]
Therefore, as a preferred embodiment, a treatment for removing impurities extracted from the dry powder of Achillea regusa with a water-insoluble organic solvent is performed, and then the active ingredient of the present invention is extracted using a water-soluble polar organic solvent. Is preferred.
[0016]
Hereinafter, although the extraction example of the active ingredient of this invention is illustrated below, this invention is not limited to this extraction example. First, akinoisregusa is freeze-dried, a water-insoluble nonpolar organic solvent such as hexane is added to the dried powder, and components soluble in the solvent are removed. Preferred examples of the water-insoluble nonpolar organic solvent used in this case include n-hexane and cyclohexane. The amount of the solvent added to the Aquinoisregusa is preferably 1 to 200 ml, more preferably 10 to 50 ml, per 1 g of the dry powder. For the operation, this solvent is added to Achillea regusa and then stirred well with a stirrer or the like to extract a fraction soluble in a nonpolar organic solvent. This operation is usually preferably repeated 2 to 5 times.
[0017]
Next, a water-insoluble polar organic solvent such as ethyl acetate is added to the portion remaining as a residue in the above operation, and components soluble in this solvent are removed. Preferable examples of the water-insoluble polar organic solvent used in this case include esters such as ethyl acetate and methyl acetate. The amount of the solvent added to the Aquinoisregusa is preferably 1 to 200 ml, more preferably 10 to 50 ml, per 1 g of the dry powder. For the operation, this solvent is added to Achillea regusa and then stirred well with a stirrer or the like to extract a fraction soluble in a polar organic solvent. This operation is usually preferably repeated 2 to 5 times.
[0018]
Next, a water-soluble polar organic solvent such as alcohol or a mixture of these and water is added to the portion remaining as a residue in the above operation, and the active ingredient of the present invention is extracted. Examples of the water-soluble polar organic solvent include methanol, ethanol, n-propyl alcohol, i-propyl alcohol, n-butyl alcohol, i-butyl alcohol, sec-butyl alcohol, t-butyl alcohol and the like. Among these, it is preferable to use methanol, ethanol, n-propyl alcohol, i-propyl alcohol, t-butyl alcohol or a mixture thereof with water, and 50 to 90% by weight of methanol or an aqueous ethanol solution is preferably used. Particularly preferred. The amount of the solvent added to the Aquinoisregusa is preferably 1 to 200 ml, more preferably 10 to 50 ml, per 1 g of the dry powder. For the operation, this solvent is added to Achillea regusa and then stirred well with a stirrer or the like to extract a fraction soluble in a polar organic solvent. This operation is usually preferably repeated 2 to 5 times.
[0019]
Although this extract can be used as it is as a chronic hepatitis inhibitor, it is preferable to carry out a treatment for removing impurities dissolved in water by the following treatment. As a solvent used in this treatment, it is preferable to use a water-soluble polar solvent that is mixed only with water within a certain range, that is, n-butyl alcohol, i-butyl alcohol, sec-butyl alcohol, or a mixture thereof. The amount of the solvent added to the extract is preferably 1 to 100 ml, more preferably 5 to 20 ml, per 1 g of the dry powder. For the operation, after adding butyl alcohol to the extract, the mixture is stirred well with a stirrer or the like to extract a fraction soluble in butyl alcohol. This operation is usually preferably repeated 3 to 7 times.
[0020]
The extract thus obtained can be used as it is as a chronic hepatitis inhibitor, but is preferably used as a solid by concentrating and evaporating the solvent. Concentration can be performed under various atmospheric pressure or reduced pressure conditions using various commonly used concentration methods.
[0021]
(2) chronic hepatitis inhibitor for chronic hepatitis inhibitors present invention containing an extract of the above daylilies as an active ingredient. In addition, these extracts can be used as preparations as they are, or can be formulated into various bases. There is no particular limitation on the amount and base, and it may be set as appropriate.
[0022]
<2> Composition Containing Chronic Hepatitis Inhibitor of the Present Invention The composition of the present invention is a mixture of the above chronic hepatitis inhibitor according to a conventional method, and examples thereof include foods and pharmaceuticals. The pharmaceutical dosage form of the present invention is not particularly limited, and is generally mixed with one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients, integrants, preservatives, stabilizers, flavoring agents, etc. , Granules, capsules, liquid medicines, drinks, etc. Such formulation can usually be formulated according to a method used for production of a medicine. The dose of the above pharmaceuticals varies depending on the type of disease, symptoms, patient age, weight, etc., but 500 mg to 5000 mg is orally administered as an extract of Aquinoa Regusa per day for adults. Is preferred.
[0023]
When the above chronic hepatitis inhibitor is used in foods, the required amount of the extract can be blended in the food raw materials together with optional ingredients usually used as foods in various foods. When blending this extract, there is no particular consideration, and health foods and functional foods can be produced by processing and producing them by a normal production method. The blending amount differs depending on the type of food, but in order to obtain a sufficient chronic hepatitis suppressing effect without impairing the taste of the food, it is blended at a ratio of 0.1 to 10% by weight with respect to the total amount of food. Is preferred.
[0024]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples.
[0025]
[Example 1]
<Extraction of active ingredient of the present invention>
The stems and leaves of Akinowasusa were freeze-dried to obtain 100 g of dry powder. This dry powder was fractionated according to the flow shown in FIG. 1 below and used for later evaluation.
[0026]
(A) Removal of impurities with hexane 2 L of n-hexane was added to 100 g of dry powder obtained by freeze-drying the stem part of Achillea regusa and sufficiently stirred, and then the residue was removed to obtain a supernatant as a hexane extract. . This operation was further repeated twice to obtain 6000 ml of hexane extract by a total of three operations. The extract was concentrated to dryness using an evaporator to obtain 1.8 g of a solid from the hexane fraction.
[0027]
(B) Removal of Impurities with Ethyl Acetate Next, 2 L of ethyl acetate was added to 98.2 g of the residue obtained in the above operation (a), and after stirring well, the supernatant was removed to obtain an ethyl acetate extract. This operation was further repeated twice to obtain 6000 ml of ethyl acetate extract by a total of three operations. The extract was concentrated to dryness using an evaporator to obtain 1.8 g of a solid from the ethyl acetate fraction.
[0028]
(C) Extraction with 70% ethanol Next, 2L of 70% ethanol was added to 96.4 g of the residue obtained in the above operation (b), and after sufficient stirring, a supernatant from which the residue was removed was obtained as a 70% ethanol extract. This operation was further repeated three times, and 8000 ml of 70% ethanol extract was obtained by a total of four operations. The extract was concentrated to dryness using an evaporator to obtain 42.8 g of a solid from the 70% ethanol fraction. In addition, 53.6 g of ethanol residue was obtained by the operation (c).
[0029]
(D) Extraction with Butyl Alcohol (Butanol) Next, 42.8 g of the concentrated dried product obtained by the above operation (c) was dissolved in 500 ml of distilled water. Then, 500 ml of n-butanol was added to this solution and sufficiently stirred, and then the butanol layer was extracted by countercurrent distribution using a separatory funnel. To the remaining aqueous layer, 500 ml of n-butyl alcohol was further added and sufficiently stirred, followed by extraction with n-butyl alcohol. This extraction was further repeated three times, and a total of five extraction operations yielded 2500 ml of a butyl alcohol extract. The butyl alcohol extract was concentrated to dryness using an evaporator to obtain 10.0 g of a solid from the butyl alcohol fraction.
[0030]
In addition, 32.8 g of a solid was obtained from the water-soluble fraction by concentrating and drying the solution in the aqueous layer portion using a freeze-drying apparatus in operation (d). Table 1 shows the distribution ratio (% by weight) to each fraction obtained by fractionation by the above operation. Here, the distribution ratio is a value obtained by dividing the weight of the solid matter obtained from each fraction by the weight (100 g) before the start of fractionation and multiplying by 100 to display the percentage.
[0031]
[Table 1]

[0032]
[Example 2]
<Evaluation of chronic hepatitis inhibitor>
The hepatoprotective action against chronic hepatitis was evaluated by a D-galactosamine-induced liver injury model using rats. The D- galactosamine-induced liver injury, since hepatopathy action via the immune system is suggested, which is a model of chronic hepatitis, a high evaluation results correlated with clinical trials.
[0033]
For evaluation, 5-week-old male Wistar rats were used. After pre-feeding for 4-5 days, the test feed was ingested for 10 days. The basic composition of the feed used in the test is as shown in Table 2 below. Moreover, the addition of the extract from each fraction to the feed is as shown in Table 3. That is, while maintaining the total amount of each additive and corn starch at 401 g per 1 kg of feed, the extract of each fraction was added to each of the hexane fraction, ethyl acetate fraction, butyl alcohol fraction and water-soluble fraction. Feeds were prepared by blending them as additives at a ratio of 1.0 g, 1.1 g, 5.8 g and 19.2 g.
[0034]
[Table 2]

[0035]
[Table 3]

[0036]
After ingesting the test feed for 10 days, D-galactosamine that induces liver damage was administered intraperitoneally at 350 mg / kg. Then, 22 hours after that, the test rats were sacrificed, and blood collection and liver extraction were performed. The placebo group was administered with the same volume of physiological saline.
[0037]
Using this collected blood, enzymes that are known to increase in blood concentration due to shedding of hepatocytes, ie, ALT: alanine aminotransferase (GPT) activity and AST: aspartate aminotransferase ( GOT ) activity Was measured with a commercially available measurement kit (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). The increase or decrease in enzyme activity was used as an index of liver injury. The weight of the extracted liver was also measured. The results of increase / decrease in enzyme activity are shown in FIGS. 2 and 3, respectively.
[0038]
As shown in FIGS. 2 and 3, both the ALT activity and the AST activity are significantly increased in the control group (D-galactosamine administration group) as compared to the sham treatment group (D-galactosamine non-administration group). It was suggested that necrosis of hepatocytes occurred. On the other hand, among the groups bred with the feed supplemented with the extract of Aquinoa grasshopper, the liver damage inhibitory effect was clearly observed in the group added with the extract of butyl alcohol as an additive. After the analysis of variance, the Duncan method was used. As a result, the group to which the butyl alcohol extract fraction was added as an additive was statistically less than 5% of all other D-galactosamine administration groups. It was shown that there is a significant difference. In addition, the alphabet (a, b, c) shown in FIGS. 2 and 3 indicates that there is a significant difference between the groups having no common alphabet with a risk rate of less than 5%.
[0039]
Moreover, the measurement result of the extracted liver weight is shown in Table 4 together with the standard deviation as an average value of 7 rats in each group. As shown in Table 4, in the D-galactosamine administration group, a decrease in liver weight was observed in all groups compared to the non-administration group. This decrease is suggested to be due to liver necrosis caused by D-galactosamine treatment. In the group to which the butyl alcohol extract fraction was added as an additive, the decrease in liver weight was smaller than in other D-galactosamine administration groups, and this butyl alcohol extract fraction also showed an inhibitory action on liver necrosis. .
[0040]
[Table 4]

[0041]
[Comparative Example 1]
<Comparison with other plants with inhibitory effect on liver damage>
Okajiki, carrot, and garlic, which have been reported to have an inhibitory effect on carbon tetrachloride-induced liver damage, have been compared with Aquinoa legusa. For all plants, lyophilized powder of the edible portion was used as a sample.
The hepatoprotective action against chronic hepatitis was evaluated by a D-galactosamine-induced liver injury model using rats. The basic composition of the feed used in the test is as shown in Table 2 above. In addition, the dry powder of each plant was added to the feed at 30 g / kg, and the content of the powder and corn starch was 401 g (sample 30 g + corn starch 371 g). The results are shown in Table 5 below with the standard deviation as an average value of 7 rats in each group.
[0042]
[Table 5]

[0043]
Even when Okajiki and carrot were added in the same amount as Akinowasusa, no significant hepatoprotective effect was observed. The group to which garlic was added significantly suppressed D-galactosamine-induced liver injury as compared to the control group, but the degree of suppression was lower than that to the group to which Aquinovaregusa was added.
[0044]
【The invention's effect】
The chronic hepatitis suppressor containing the extract of Aquinoisregusa of the present invention as an active ingredient has an excellent inhibitory effect on chronic hepatitis . Moreover, chronic hepatitis inhibitor of the present invention is safe because it is derived from plants, and therefore extraction is easy, formulation ease, pharmaceutical products sets composition as for chronic hepatitis comprising the chronic hepatitis inhibitor Can be provided.
[0045]
[Brief description of the drawings]
BRIEF DESCRIPTION OF DRAWINGS FIG. 1 is a diagram showing an example of extracting an active ingredient of a chronic hepatitis suppressor from Achinowasregusa.
FIG. 2 is a graph showing ALT (GPT) activity value 22 hours after drug administration.
FIG. 3 is a graph showing AST (GOT) activity values 22 hours after drug administration.

Claims (6)

アキノワスレグサの抽出物を有効成分として含有する慢性肝炎抑制剤であって、
前記抽出物が、水及び／またはメタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、ｉ−プロピルアルコール、ｎ−ブチルアルコール、ｉ−ブチルアルコール、ｓｅｃ−ブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、アセトンから選ばれる１種又は２種以上の水溶性の極性有機溶媒を用いて抽出されたものであることを特徴とする慢性肝炎抑制剤。A chronic hepatitis suppressant containing an extract of Aquinois regusa as an active ingredient,
The extract is selected from water and / or methanol, ethanol, n-propyl alcohol, i-propyl alcohol, n-butyl alcohol, i-butyl alcohol, sec-butyl alcohol, t-butyl alcohol, acetone, or A chronic hepatitis inhibitor characterized by being extracted using two or more water-soluble polar organic solvents . 前記抽出物が、アキノワスレグサから非水溶性の有機溶媒を用いて抽出されたものを除いた後の残渣から水及び／または前記水溶性の極性有機溶媒を用いて抽出されたものであることを特徴とする請求項１に記載の慢性肝炎抑制剤。Said extract, it has been extracted using a polar organic solvent from the residue of water and / or the water-soluble after removal an extract with a water-insoluble organic solvent from daylilies The chronic hepatitis inhibitor according to claim 1, wherein 前記非水溶性の有機溶媒がｎ−ヘキサン、酢酸エチルまたはこれらの混合物である請求項１又は２に記載の慢性肝炎抑制剤。The chronic hepatitis inhibitor according to claim 1 or 2 , wherein the water-insoluble organic solvent is n-hexane, ethyl acetate, or a mixture thereof. 前記抽出物が、水及び／または前記水溶性の極性有機溶媒を用いて抽出されたものから、更にｎ−ブチルアルコール，ｉ−ブチルアルコール、ｓｅｃ−ブチルアルコールから選ばれる１種又は２種以上を用いて抽出されたものであることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の慢性肝炎抑制剤。Wherein the extract from those extracted with water and / or the water-soluble polar organic solvent, further n- butyl alcohol, i- butyl alcohol, one or more selected from sec- butyl alcohol The chronic hepatitis inhibitor according to any one of claims 1 to 3 , wherein the chronic hepatitis inhibitor is extracted. 前記抽出物が、アキノワスレグサから非水溶性の有機溶媒を用いて抽出されたものを除いた後の残渣から水及び／またはメタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、ｉ−プロピルアルコール、ｔ−ブチルアルコールから選ばれる１種または２種以上を用いて抽出されたものから、更にｎ−ブチルアルコール，ｉ−ブチルアルコール、ｓｅｃ−ブチルアルコールから選ばれる１種又は２種以上を用いて抽出されたものであることを特徴とする請求項１に記載の慢性肝炎抑制剤。Water and / or methanol, ethanol, n-propyl alcohol, i-propyl alcohol, t-butyl alcohol from the residue after the extract was removed from the extract of Aquinowa regusa using a water-insoluble organic solvent Extracted using one or more selected from n-butyl alcohol, i-butyl alcohol, and sec-butyl alcohol from those extracted using one or more selected from chronic hepatitis inhibitor according to claim 1, characterized in that. 前記請求項１〜５の何れか１項に記載の慢性肝炎抑制剤を含有する慢性肝炎用の医薬品組成物。Claim 1 pharmaceuticals group composition as for chronic hepatitis containing chronic hepatitis inhibitor according to any one of 5.

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