JP4099541B2 - ペプチド精製物の製造方法 - Google Patents
ペプチド精製物の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4099541B2 JP4099541B2 JP2006196665A JP2006196665A JP4099541B2 JP 4099541 B2 JP4099541 B2 JP 4099541B2 JP 2006196665 A JP2006196665 A JP 2006196665A JP 2006196665 A JP2006196665 A JP 2006196665A JP 4099541 B2 JP4099541 B2 JP 4099541B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gly
- peptide
- tripeptide
- adsorbent
- hydrophilic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 189
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 46
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 91
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 79
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 63
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 63
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 63
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 49
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 36
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 18
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 16
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000012264 purified product Substances 0.000 claims description 16
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 14
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 14
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 14
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 14
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 14
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Natural products C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 12
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 8
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 7
- -1 zinc chloride activated activated carbon Chemical class 0.000 claims description 7
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L Zinc chloride Inorganic materials [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims description 6
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims description 4
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims description 4
- PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 3
- PUUYVMYCMIWHFE-BQBZGAKWSA-N Gly-Ala-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PUUYVMYCMIWHFE-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- KGGYQPXQVMSTRG-UHFFFAOYSA-N Gly-Ala-Hyp Natural products [NH3+]CC(=O)NC(C)C(=O)N1CC(O)CC1C([O-])=O KGGYQPXQVMSTRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 3
- KTSZUNRRYXPZTK-BQBZGAKWSA-N Gly-Gln-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KTSZUNRRYXPZTK-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- HFXJIZNEXNIZIJ-BQBZGAKWSA-N Gly-Glu-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O HFXJIZNEXNIZIJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- LOEANKRDMMVOGZ-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LOEANKRDMMVOGZ-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 3
- GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- HVIBGVJOBJJPFB-OFQRNFBNSA-N Gly-Pro-Hyp Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)C(O)CC1 HVIBGVJOBJJPFB-OFQRNFBNSA-N 0.000 claims description 3
- GAAHQHNCMIAYEX-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GAAHQHNCMIAYEX-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 3
- OOCFXNOVSLSHAB-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Pro Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OOCFXNOVSLSHAB-IUCAKERBSA-N 0.000 claims description 3
- HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ser Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 claims description 3
- 108010017349 glycyl-prolyl-hydroxyproline Proteins 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 125000003011 styrenyl group Chemical group [H]\C(*)=C(/[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N glyclproline Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 claims 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 23
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 23
- 101100313763 Arabidopsis thaliana TIM22-2 gene Proteins 0.000 description 17
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 10
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 9
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 9
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 9
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 6
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 description 5
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 5
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 4
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 4
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 3
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 3
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 3
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 3
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Arg Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000680262 Homo sapiens Transmembrane protein 60 Proteins 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 102100022076 Transmembrane protein 60 Human genes 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 2
- 238000012812 general test Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-prolyl-L-arginine Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010025801 glycyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000012567 medical material Substances 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 2
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 2
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940058015 1,3-butylene glycol Drugs 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 1
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- WMGHDYWNHNLGBV-ONGXEEELSA-N Gly-Phe-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 WMGHDYWNHNLGBV-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- GGAPHLIUUTVYMX-QWRGUYRKSA-N Gly-Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C[NH3+])CC1=CC=CC=C1 GGAPHLIUUTVYMX-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- BIVBRWYINDPWKA-VLQRKCJKSA-L Glycyrrhizinate dipotassium Chemical compound [K+].[K+].O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C=C4[C@@H]5C[C@](C)(CC[C@@]5(CC[C@@]4(C)[C@]3(C)CC[C@H]2C1(C)C)C)C(O)=O)C([O-])=O)[C@@H]1O[C@H](C([O-])=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BIVBRWYINDPWKA-VLQRKCJKSA-L 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000019437 butane-1,3-diol Nutrition 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 229940101029 dipotassium glycyrrhizinate Drugs 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000000909 electrodialysis Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000003330 peritoneal dialysis fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 125000005372 silanol group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
[1]親水性トリペプチドGly-X-Y(Gly-X-Yは、Gly-Ser-Hyp、Gly-Lys-Asp、Gly-Ala-Ala、Gly-Pro-Hyl、Gly-Leu-Hyp、Gly-Ala-Arg、Gly-Ala-Ser、Gly-Ala-Hyp、Gly-Gln-Glu、Gly-Glu-Gln、Gly-Pro-Ser、Gly-Pro-Lys、Gly-Pro-Ala、Gly-Pro-Pro、 Gly-Pro-ArgおよびGly-Pro-Hypから成る群から選ばれる少なくとも1種である)および疎水性ペプチドを含有するペプチド混合物を含む水溶液を非極性吸着剤と接触させて、
前記ペプチド混合物に含有される少なくとも一部の疎水性ペプチドを非極性吸着剤に吸着させ、
前記非極性吸着剤に吸着しなかった親水性トリペプチドGly-X-Yを回収することを含み、
前記非極性吸着剤への接触は、非極性吸着剤を充填したカラムに上記ペプチド混合物を含む水溶液を流通することで行い、カラムからの流出水溶液を回収することで親水性トリペプチドGly-X-Yの回収を行うか、または
前記非極性吸着剤への接触は、非極性吸着剤と上記ペプチド混合物を含む水溶液を容器中で混合し、必要により一定時間放置することで行い、非極性吸着剤から水溶液を分離することで親水性トリペプチドGly-X-Yの回収を行う、
親水性トリペプチドGly-X-Yの含有率が前記ペプチド混合物より高められたペプチド精製物の製造方法。
[2]前記ペプチド混合物がタンパク質加水分解物である[1]に記載の製造方法。
[3]前記タンパク質加水分解物がゼラチンまたはコラーゲンの酵素消化精製物である[2]に記載の製造方法。
[4]前記ペプチド混合物の親水性トリペプチドGly-X-Yの含有率が2〜20%の範囲であり、かつペプチド精製物の親水性トリペプチドGly-X-Yの含有率が25%以上である[1]〜[3]のいずれかに記載の製造方法。
[5]前記非極性吸着剤がスチレン系吸着剤、置換芳香族系吸着剤、またはアクリル系吸着剤である[1]〜[4]のいずれかに記載の製造方法。
[6]前記非極性吸着剤が、活性炭である[1]〜[4]のいずれかに記載の製造方法。
[7]前記活性炭が、塩化亜鉛賦活活性炭である[6]に記載の製造方法。
[8]前記活性炭は、細孔半径が10〜100Åであり、かつ表面積が1000m2/g以上で
ある[6]または[7]に記載の製造方法。
[9]前記非極性吸着剤が、ODS担体である[1]〜[4]のいずれかに記載の製造方法。
[10]前記非極性吸着剤と接触させるペプチド混合物を含む水溶液は、pH調整剤をさらに含む[1]〜[9]のいずれかに記載の製造方法。
[11]前記ペプチド混合物を含む水溶液は、pHを4以上7以下に調整される[10]に記載の製造方法。
[12]ペプチド精製物の親水性トリペプチドGly-X-Yの含有率が40〜95%の範囲である[1]〜[11]のいずれかに記載の製造方法。
[13]回収した親水性トリペプチドGly-X-Yを含有する溶液を、脱塩処理して、塩分含有量を低減したペプチド精製物を得る[1]〜[12]のいずれかに記載の製造方法。
[14]回収した親水性トリペプチドGly-X-Yを含有する溶液、またはこの溶液を脱塩処理した後の溶液をMFろ過して、除菌したペプチド精製物を得る[1]〜[12]のいずれかに記載の製造方法。
[15]回収した親水性トリペプチドGly-X-Yを含有する溶液、またはこの溶液を脱塩処理及び/又はMFろ過した溶液を乾燥して、固形のペプチド精製物を得る[1]〜[12]のいずれかに記載の製造方法。
[16] [14]または[15]に記載の方法で得られたトリペプチド精製物を含む水溶液を、分画分子量1000〜6000の限外ろ過膜で処理して、透過液としてエンドトキシンを低減したトリペプチド精製物を得る、エンドトキシンを低減したトリペプチド精製物の製造方法。
市販のコラーゲンペプチド360mg(ゼライス社製)を純水3.24mLに溶解し、10%コラーゲンペプチド水溶液を調製した。該コラーゲンペプチドは、親水性トリペプチドを13.0%(総トリペプチド含有率として16.0%)含有していた。総トリペプチド含有率の測定方法は、ゲルろ過クロマトグラフィーにより分析した。また、親水性のトリペプチド含有率の測定方法は、逆相クロマトグラフィーにより分析し、水100%の溶離条件(0-15min)で溶出してきた成分を親水性トリペプチド含有率とした。条件は以下の通りである。
column : Superdex Peptide(10mm×300mm)
Eluent : 100mM Tris/HCl(pH7.4)
Flow rate : 1mL/min
Detection : UV at 214nm
column : TSKgel ODS-80Ts(4.6mm×150mm)
Eluent : A)H2O/TFA(100/0.1)、B)CH3CN/H2O/TFA(50/50/0.1)
Temp : 40℃
Flow rate : 1mL/min
Detection : UV at 214nm
実施例1で用いたと同じ市販のコラーゲンペプチド15g(ゼライス社製)を純水100mLに溶解し、前処理として脱塩処理を行なった。脱塩には三菱化学社製の強酸性陽イオン交換樹脂DIAION SK1B 2mLと、強塩基性陰イオン交換樹脂DIAION SA10A 4mLを混ぜ合わせた後、アクリル製のカラムへ充填しイオン交換樹脂を行なった。その後、純水で希釈し10%コラーゲンペプチド水溶液を調製した。なお、脱塩処理はイオン交換樹脂を使用した。表3に脱塩前後の分析結果を示した。該コラーゲンペプチドは、親水性トリペプチドを13.2%(総トリペプチド含有率として16.2%)含有していた。
実施例1と同様の市販のコラーゲンペプチドを実施例2と同様に脱塩処理した10%コラーゲンペプチド水溶液を調製した。該コラーゲンペプチドは、親水性トリペプチドを12.4%(総トリペプチド含有率として15.9%)含有していた。
実施例1と同様の市販のコラーゲンペプチドを実施例2と同様に脱塩処理した10%コラーゲンペプチド水溶液を使用した。該コラーゲンペプチドは、親水性トリペプチドを13.2%(総トリペプチド含有率として16.1%)含有していた。
市販のコラーゲンペプチド(ゼライス社製)を純水に溶解し、10%コラーゲンペプチド水溶液を調製した。また、コラーゲンペプチド水溶液のpHは、塩酸または水酸化ナトリウムを用いて(1)4.0、(2)5.0、(3)6.0、(4)7.0、(5)8.0に調整した。該コラーゲンペプチドは、親水性トリペプチドを13.2%(総トリペプチド含有率として16.2%)含有していた。
活性炭5gを純水40mLに懸濁させた活性炭懸濁液に、市販のコラーゲンペプチド(ゼライス社製)を(1)1.0g、(2)2.0g、(3)4.0g、(4)8.0g添加/溶解し、室温で2時間静かに振とう(吸着処理)した。その後、ろ過により活性炭を除去し、親水性のトリペプチドGly-X-Yに富むペプチド精製物を得た。該コラーゲンペプチドは親水性トリペプチドを13.0%(総トリペプチド含有率として16.0%)含有している。なお、活性炭1g当たりのコラーゲンペプチドの負荷量は(1)200mg/mL-carbon、(2)400mg/mL-carbon、(3)800mg/mL-carbon、(4)1600mg/mL-carbonである。活性炭は日本エンバイロケミカルズ社製の粒状白鷺KL、DC32、カルボラフィン、和光純薬の活性炭素粉末を使用した。
市販のコラーゲンペプチド300g(ゼライス社製)を純水600mLに溶解し、25%コラーゲンペプチド水溶液を調製した。該コラーゲンペプチドは、親水性トリペプチドを20.3%(総トリペプチド含有率として28.8%)含有している。
市販のコラーゲンペプチド600g(ゼライス社製)を純水3.4Lに溶解し、10%コラーゲンペプチド水溶液を調製した。その後、実施例2と同様にイオン交換樹脂を用いて脱塩処理を行なった。表10に脱塩前後の分析結果を示した。該コラーゲンペプチドは、親水性トリペプチドを13.4%(総トリペプチド含有率として16.4%)含有していた。
column : Superdex Peptide(10mm×300mm)
Eluent : 100mM Tris/HCl(pH7.4)
Flow rate : 1mL/min
Detection : UV at 214nm
column : TSKgel ODS-80Ts(4.6mm×150mm)
Eluent : A)H2O/TFA(100/0.1)、B)CH3CN/H2O/TFA(50/50/0.1)
Temp : 40℃
Flow rate : 1mL/min
Detection : UV at 214nm
以下、ペプチド精製組成物を配合した医薬品、再生医療用材料、医薬部外品、化粧品を示すが、これら配合例は本発明の範囲を何ら制限するものではない。また本発明に係るペプチド精製組成物を医薬品、再生医療用材料、医薬部外品、化粧品に配合する方法は既に公知になっている操作方法に準じて実施することができる。
[腹膜透析液]
次の組成で腹膜透析液を調製した。
ナトリウムイオン 140.0mEq/L
カルシウムイオン 4.5mEq/L
マグネシウムイオン 1.5mEq/L
塩素イオン 101.0mEq/L
乳酸 45.0mEq/L
グルコース 8g/L
実施例8の凍結乾燥精製物 25g/L
注射用水 適量
全量 1L
[輸液製剤]
次の組成で輸液製剤を調製した。
塩化ナトリウム 8.6g/L
塩化カリウム 0.3g/L
塩化カルシウム 0.33g/L
グルコース 8g/L
実施例8の凍結乾燥精製物 25g/L
注射用水 適量
全量 1L
[化粧水]
次の組成で保湿化粧水を調製した。
実施例8の凍結乾燥精製物 0.5%
グリチルリチン酸ジカリウム 0.1%
ヒアルロン酸ナトリウム 0.05%
1,3-ブチレングリコール 5.0%
グリセリン 1.0%
防腐剤 適量
精製水 残余
[変形性関節症用製剤あるいは慢性関節リュウマチ用製剤]
次の組成で変形性関節症用製剤、或は慢性関節リュウマチ用製剤を調製した。
ヒアルロン酸ナトリウム 10.0g/L
実施例8の凍結乾燥精製物 1.2g/L
注射用水 適量
全量 1L
Claims (16)
- 親水性トリペプチドGly-X-Y(Gly-X-Yは、Gly-Ser-Hyp、Gly-Lys-Asp、Gly-Ala-Ala、Gly-Pro-Hyl、Gly-Leu-Hyp、Gly-Ala-Arg、Gly-Ala-Ser、Gly-Ala-Hyp、Gly-Gln-Glu、Gly-Glu-Gln、Gly-Pro-Ser、Gly-Pro-Lys、Gly-Pro-Ala、Gly-Pro-Pro、 Gly-Pro-ArgおよびGly-Pro-Hypから成る群から選ばれる少なくとも1種である)および疎水性ペプチドを含有するペプチド混合物を含む水溶液を非極性吸着剤と接触させて、
前記ペプチド混合物に含有される少なくとも一部の疎水性ペプチドを非極性吸着剤に吸着させ、
前記非極性吸着剤に吸着しなかった親水性トリペプチドGly-X-Yを回収することを含み、
前記非極性吸着剤への接触は、非極性吸着剤を充填したカラムに上記ペプチド混合物を含む水溶液を流通することで行い、カラムからの流出水溶液を回収することで親水性トリペプチドGly-X-Yの回収を行うか、または
前記非極性吸着剤への接触は、非極性吸着剤と上記ペプチド混合物を含む水溶液を容器中で混合し、必要により一定時間放置することで行い、非極性吸着剤から水溶液を分離することで親水性トリペプチドGly-X-Yの回収を行う、
親水性トリペプチドGly-X-Yの含有率が前記ペプチド混合物より高められたペプチド精製物の製造方法。 - 前記ペプチド混合物はタンパク質加水分解物である請求項1に記載の製造方法。
- 前記タンパク質加水分解物はゼラチンまたはコラーゲンの酵素消化精製物である請求項2に記載の製造方法。
- 前記ペプチド混合物の親水性トリペプチドGly-X-Yの含有率が2〜20%の範囲であり、かつペプチド精製物の親水性トリペプチドGly-X-Yの含有率が25%以上である請求項1〜3のいずれか1項に記載の製造方法。
- 前記非極性吸着剤がスチレン系吸着剤、置換芳香族系吸着剤、またはアクリル系吸着剤である請求項1〜4のいずれか1項に記載の製造方法。
- 前記非極性吸着剤が、活性炭である請求項1〜4のいずれか1項に記載の製造方法。
- 前記活性炭が、塩化亜鉛賦活活性炭である請求項6に記載の製造方法。
- 前記活性炭は、細孔半径が10〜100Åであり、かつ表面積が1000m2/g以上である
請求項6または7に記載の製造方法。 - 前記非極性吸着剤が、ODS担体である請求項1〜4のいずれか1項に記載の製造方法。
- 前記非極性吸着剤と接触させるペプチド混合物を含む水溶液は、pH調整剤をさらに含む請求項1〜9のいずれか1項に記載の製造方法。
- 前記ペプチド混合物を含む水溶液は、pHを4以上7以下に調整される請求項10に記載の製造方法。
- 前記ペプチド精製物の親水性トリペプチドGly-X-Yの含有率が40〜95%の範囲である請求項1〜11のいずれか1項に記載の製造方法。
- 回収した親水性トリペプチドGly-X-Yを含有する溶液を、脱塩処理して、塩分含有量を低減したペプチド精製物を得る請求項1〜12のいずれか1項に記載の製造方法。
- 回収した親水性トリペプチドGly-X-Yを含有する溶液、またはこの溶液を脱塩処理した後の溶液をMFろ過して、除菌したペプチド精製物を得る請求項1〜12のいずれか1項に記載の製造方法。
- 回収した親水性トリペプチドGly-X-Yを含有する溶液、またはこの溶液を脱塩処理及び/又はMFろ過した溶液を乾燥して、固形のペプチド精製物を得る請求項1〜12のいずれか1項に記載の製造方法。
- 請求項14または15に記載の方法で得られたトリペプチド精製物を含む水溶液を、分画分子量1000〜6000の限外ろ過膜で処理して、透過液としてエンドトキシンを低減したトリペプチド精製物を得る、エンドトキシンを低減したトリペプチド精製物の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006196665A JP4099541B2 (ja) | 2006-07-19 | 2006-07-19 | ペプチド精製物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006196665A JP4099541B2 (ja) | 2006-07-19 | 2006-07-19 | ペプチド精製物の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008024611A JP2008024611A (ja) | 2008-02-07 |
JP4099541B2 true JP4099541B2 (ja) | 2008-06-11 |
Family
ID=39115621
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006196665A Active JP4099541B2 (ja) | 2006-07-19 | 2006-07-19 | ペプチド精製物の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4099541B2 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110135561A1 (en) * | 2008-07-31 | 2011-06-09 | Sony Corporation | Adsorbent, cleansing agent, renal disease drug, and functional food |
JP5168240B2 (ja) * | 2008-07-31 | 2013-03-21 | ソニー株式会社 | 吸着剤、クレンジング剤、腎臓疾患治療薬、及び、機能性食品 |
JP2010106007A (ja) * | 2008-08-14 | 2010-05-13 | Sony Corp | 薬剤徐放剤、吸着剤、機能性食品、マスク及び吸着シート |
JP5604417B2 (ja) * | 2009-03-11 | 2014-10-08 | ゼライス株式会社 | アテローム性動脈硬化症の進行抑制薬・予防薬・血中コレステロール低下薬・機能性食品・特定保健用食品 |
IL277009B2 (en) * | 2018-03-08 | 2024-06-01 | Catalent Uk Swindon Zydis Ltd | Process for reducing endotoxin in gelatin Process for reducing endotoxin in gelatin |
KR102284800B1 (ko) * | 2020-12-30 | 2021-08-03 | 주식회사 하플사이언스 | 재조합 세포외 기질 단백질의 생산을 위한 동물세포 배양용 배지 조성물 및 이를 이용한 방법 |
CN114315960B (zh) * | 2021-12-31 | 2022-10-14 | 深圳市维琪医药研发有限公司 | 一种经修饰的肽及其美容组合物或药用组合物和用途 |
-
2006
- 2006-07-19 JP JP2006196665A patent/JP4099541B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2008024611A (ja) | 2008-02-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4099541B2 (ja) | ペプチド精製物の製造方法 | |
Zhang et al. | Macroporous resin purification of grass carp fish (Ctenopharyngodon idella) scale peptides with in vitro angiotensin-I converting enzyme (ACE) inhibitory ability | |
ES2331255T3 (es) | Metodo para producir teicoplanina altamente pura. | |
JP2018168263A (ja) | 植物性プロテオグリカン及びその用途 | |
KR101071338B1 (ko) | 해양 생물 유래 콜라겐 펩타이드의 제조방법 및 그로부터 제조된 콜라겐 펩타이드 | |
JP3110078B2 (ja) | 高純度抗菌性ペプチドの大量製造法 | |
CN108610274A (zh) | 一组环γ-聚谷氨酸系列分子及其制备方法和应用 | |
JP4437237B2 (ja) | 有用組成物の製造方法 | |
JP5016830B2 (ja) | ペプチド精製物の製造方法 | |
JP7067182B2 (ja) | 植物性プロテオグリカン及びその用途 | |
JP4035553B2 (ja) | 有用組成物の製造方法 | |
KR101639105B1 (ko) | 히알루론산의 정제 방법 및 제조 방법 | |
KR100854788B1 (ko) | 락토페록시다제의 제조 방법 | |
FR2583982A1 (fr) | Produit medicamenteux obtenu a partir du thymus et son procede d'obtention | |
JPWO2017150679A1 (ja) | セレノネインの分離方法 | |
JP5501589B2 (ja) | ヒアルロン酸及び/又はその塩の精製法 | |
JP2002532383A (ja) | 生物学的液体からペプチドを製造する方法及びその方法で得られるペプチド | |
JPH0254070B2 (ja) | ||
JPH0737474B2 (ja) | 高純度シアル酸の精製法 | |
RU2748071C1 (ru) | Способ получения отдельных фракций матриксного гиалуроната различных молекулярных масс высокой фракционной и химической чистоты в едином технологическом цикле | |
WO2021059344A1 (ja) | 植物性プロテオグリカン及びその用途 | |
JP5137491B2 (ja) | 水酸化アルミニウム吸着体の吸着性及び/又は溶出性の改変方法 | |
KR100834518B1 (ko) | 효소분해법을 이용한 미각이 개선된 글루코사민유기산의제조방법 | |
JPH04299990A (ja) | モチリンアナログの精製方法 | |
DK2776453T3 (en) | A process for the purification of teicoplanin |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071126 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20080205 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20080228 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110328 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Ref document number: 4099541 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110328 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110328 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120328 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120328 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130328 Year of fee payment: 5 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130328 Year of fee payment: 5 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130328 Year of fee payment: 5 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140328 Year of fee payment: 6 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |