JP4081408B2

JP4081408B2 - Skin preparation

Info

Publication number: JP4081408B2
Application number: JP2003161967A
Authority: JP
Inventors: 由希半田
Original assignee: Naris Cosmetics Co Ltd
Current assignee: Naris Cosmetics Co Ltd
Priority date: 2003-06-06
Filing date: 2003-06-06
Publication date: 2008-04-23
Anticipated expiration: 2023-06-06
Also published as: JP2004359632A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、皮膚のE-カドヘリン発現促進作用を有する皮膚外用剤に関し、さらに詳しくは、表皮細胞間の接着を改善、強化することにより皮膚の肌理、シワ、たるみ、肌荒れ改善効果の期待できる皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
老化によって起こる肌の変化はシワ、たるみの形成や肌理の消失が挙げられる。このようなシワ、たるみ、肌理消失は、皮膚でのコラーゲン、ラミニンなどの細胞外マトリクスの変性することが原因の一つと考えられており、老化した皮膚の改善を目的としてコラーゲン産生促進剤あるいはラミニン発現促進剤など様々な提案がなされてきた。（例えば、特許文献１参照）
さらに近年ではこれら細胞外マトリクスのみが皮膚構造保持に機能するのではなく、真皮および表皮の細胞がこれら細胞外マトリクスと接着、また細胞同士が接着することが皮膚構造保持に重要であることが明らかにされてきている。
細胞の接着装置は数種あり、密着結合、接着帯、付着班（接着点）、デスモソーム、ヘミデスモソーム、ギャップ結合などが存在する。（非特許文献１参照）
それらの接着装置の中でも細胞接着に特に重要なのが接着帯であり、その機能を担う接着分子として、カドヘリンがある。カドヘリンは、カルシウム依存性細胞接着分子（ＣＡＭ）のスーパーファミリーである膜糖タンパク質として発見された。細胞膜上に発現しているカドヘリンは、カルシウム濃度依存的に別の細胞に発現している同種のカドヘリンと結合することで、細胞間接着を行う。（非特許文献2参照）カドヘリンの細胞質ドメインはP120とβ−カテニンが直接結合し、β−カテニンはα−カテニンと結合、さらに細胞骨格保持に機能するアクチン線維と結びついている。
カドヘリンはファミリーとして現在約20種が知られているが、皮膚表皮に存在するカドヘリン種としてE（上皮型）−カドヘリン（分子量124KD）,P（胎盤型）−カドヘリン（分子量118KD）が明らかにされている。さらに成人ヒトケラチノサトにおいて分泌しているタンパク質20種を同定した結果、接着分子としてはE−カドヘリンが分泌していることが報告されている。（非特許文献3参照）また、3次元組織構造の再構築による培養表皮を移植する際に、培養表皮をディスパーゼ処理し剥がした場合は皮膚への接着が低く、低温で剥がした場合は接着率が高いが、その原因として、ディスパーゼ処理した表皮ではE-カドヘリンが著しく減少していることが明らかになっている。（非特許文献4参照）
これらはE-カドヘリンの皮膚表皮における重要性を示唆するものである。
さらに、細胞同士の接着は単に構造保持のみに機能するのではなく、個々の細胞の増殖、伸展、運動、分化に影響し、細胞の生命現象において極めて重要な機能を有することが報告されている。実際、カドヘリンの結合成分であるβ-カテニンが遺伝子転写活性調節因子としても機能することが知られている。（非特許文献5参照）また、α-カテニンにRhoファミリーCdc42やRoc1が関与することが明らかになっている。（非特許文献1参照）
以上の点から、E-カドヘリンは皮膚表皮の高次構造保持および正常な表皮機能に機能すると考えられる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明は、ヒト皮膚のカドヘリン発現を促進することで、細胞間接着を改善、強化し、肌のシワ、たるみ、肌理構造の改善作用を有する皮膚外用剤を提供することを課題とする。
【０００４】
【特許文献１】
特開2000-256308号
【非特許文献１】
林正男,羊土社,「新細胞接着分子の世界」,2001
【非特許文献２】
Takeichi,M，Development、102：639,1988
【非特許文献３】
Katz,AB, Taichman,LB
J.Invest.Dermatol. 112(5),818,
1999
【非特許文献４】
長田義仁,エヌ・ティーエヌ,バイオメティックスハンドブック,2003
【非特許文献５】
内田浩ら,羊土社,「細胞内シグナル伝達がわかる」,70,2000
【０００５】
【問題を解決するための手段】
本発明者は、前記問題点を解決するために鋭意検討した結果、皮膚のE-カドヘリンに着目した結果、E-カドヘリン発現促進作用を有する物質を新たに見出した。これらのE-カドヘリン発現促進作用剤を併用した場合に、シワ、たるみを改善する作用及び肌理を整える作用に優れ、顕著な効果を発揮することを見出した。更にE-カドヘリン発現促進作用剤と抗酸化剤及び／又はミネラルとを併用した場合においては、シワ、たるみを改善する作用及び肌理を整える作用が飛躍的に向上し、顕著な効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、E-カドヘリン発現促進剤を含有する皮膚外用剤を提供するものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明におけるカドヘリン発現促進剤としては、E-カドヘリンを発現促進するものがより望ましい。
【０００７】
本発明に使用されるE-カドヘリン発現促進物質としての植物抽出物に用いられる植物は特に限定されない。キジムシロ属（Potentilla）に属する植物には、トルメンチラ（P. tormentilla）等が挙げられる。
【０００８】
バラ属の植物には、西洋バラ（Rose centifolia）、現代バラ（Rose hybrida）等が挙げられる。
【００１１】
ゼニアオイ属の植物には、ゼニアオイ（Malva sylvestris L.）、ハイアオイ（Malvarotundifolea L.）、ジャコウアオイ（Malva moschata L.）、フユアオイ(Malva verticillata L.varverticillata)、オカノリ(Malva verticillata L.var.crispa(L.)Makino(M.crispa L.)等が挙げられる。
【００１２】
フヨウ属の植物にはハイビスカス（Hibiscus sabdariffa L.）等が挙げられる。
【００１３】
本発明に使用される植物の抽出部位は、特に限定されない。花弁、葉、茎、根、種子、果実等或いは、全草を生のまま或いは乾燥したものを用いて抽出することも出来る。
【００１４】
本発明で使用される抽出物は各種溶媒にて抽出することが可能である。水のみを用いる場合のほかに、水と混和する極性溶媒を単独で用いることもできる。極性溶媒としてエタノール、プロピレングリコール、エチエングリコール、1,3-ブチレングリコールなどを用いることが可能であるが極性溶媒であれば、その限りではない。更に、エタノール、プロピレングリコール、エチレングリコール、1,3-ブチレングリコールの1種又は2種以上の混合溶媒を用いることができる。
【００１５】
抽出時間・抽出温度は、特に限定されない。例えば、水による抽出であれば、通常60℃下において、３〜４時間抽出を行い、エタノールなどの低沸点溶媒を使用する場合は還流器付きの抽出装置を使用する。抽出した溶液は、冷却後、ろ過をすることによって抽出液を得ることができる。更に、活性炭やその他樹脂などを用いて脱臭・脱色などを行うこともできる。必要に応じて加熱等の方法により溶媒をなくし、抽出物（乾燥物）としても利用が可能である。
【００１６】
本発明において用いられる抗酸化剤としては、皮膚外用剤に配合できる抗酸化剤であれば特に制限されない。抗酸化剤の例を挙げれば、例えば、ビタミンＡ類及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンＢ類及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンＣ類及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンＤ類及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンＥ類及びその誘導体、アミノ酸類、含硫有機化合物及びその誘導体並びにそれらの塩、カロチノイド、タンニン類、フラボノイド等が挙げられる。
【００１７】
ビタミンＣ類及びそれらの誘導体並びにそれらの塩の例としては、Ｌ−アスコルビン酸
；パルミチン酸Ｌ−アスコルビル、ジパルミチン酸Ｌ−アスコルビル、イソパルミチン酸Ｌ−アスコルビル、ジイソパルミチン酸Ｌ−アスコルビル、テトライソパルミチン酸Ｌ−アスコルビル、ステアリン酸Ｌ−アスコルビル、ジステアリン酸Ｌ−アスコルビル、イソステアリン酸Ｌ−アスコルビル、ジイソステアリン酸Ｌ−アスコルビル、ミリスチン酸Ｌ−アスコルビル、ジミリスチン酸Ｌ−アスコルビル、イソミリスチン酸Ｌ−アスコルビル、ジイソミリスチン酸Ｌ−アスコルビル、オレイン酸Ｌ−アスコルビル、ジオレイン酸Ｌ−アスコルビル、2−エチルヘキサン酸Ｌ−アスコルビル、ジ２−エチルヘキサン酸Ｌ−アスコルビル等のアスコルビン酸アルキルエステル；Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸
リン酸エステルカリウム、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルカルシウム、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルアルミニウム等のアスコルビン酸
リン酸エステル塩；
【００１８】
Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸
硫酸エステルカリウム、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステルカルシウム、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステルアルミニウム等のアスコルビン酸
硫酸エステル；Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸カリウム、Ｌ−アスコルビン酸マグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸カルシウム、Ｌ−アスコルビン酸
アルミニウム等のアスコルビン酸塩；アスコルビン酸グルコシド、アスコルビン酸ポリペプチド、メチルシラノールアスコルベート、リン酸アスコルビルトコフェリルカリウム等が挙げられる。
【００１９】
これらのビタミンＣ類及びそれらの誘導体並びにそれらの塩の中では、アスコルビン酸
リン酸エステル塩、アスコルビン酸グルコシド、テトライソパルミチン酸Ｌ−アスコルビルが特に好ましい。
【００２０】
ビタミンＥ類及びその誘導体の例としては、ｄｌ−α−トコフェロール、ｄｌ−β−トコフェロール、ｄｌ−γ−トコフェロール、ｄｌ−δ−トコフェロール等のトコフェロール；酢酸−ｄｌ−α−トコフェロール、ニコチン酸−ｄｌ−α−トコフェロール、リノール酸−ｄｌ−α−トコフェロール等、コハク酸ｄｌ−α−トコフェロール等のトコフェロールエステル；トコフェレス−５、トコフェレス−１０、トコフェレス−１２等のトコフェロールのエチレンオキシド付加物；ユビキノン類等が挙げられる。
【００２１】
これらのビタミンＥ類及びその誘導体の中では、ｄｌ−α−トコフェロール、ｄｌ−β−トコフェロール、ｄｌ−γ−トコフェロール、ｄｌ−δ−トコフェロール及びトコフェロールエステルからなる群から選ばれた１種又は２種以上が特に好ましい。
【００２２】
カロチノイドの例としては、α−カロチン、β−カロチン、γ−カロチン、リコピン、クリプトキサンチン、ゼアキサンチン、イソゼアキサンチン、ロドキサンチン、カプサンチン、クロセチン等が挙げられる。
【００２３】
本発明においては、これらの抗酸化剤の中で、ビタミンＣ類及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンＥ類及びそれらの誘導体からなる群から選ばれた１種又は２種以上が効果をよく発揮するので好ましく用いられる。
【００２４】
本発明において用いられるミネラル塩としては、皮膚外用剤に配合できるミネラル塩であれば特に制限されない。ミネラル塩の例を挙げれば、例えば、塩化カルシウム、塩化マグネシウムおよび塩化亜鉛、リン酸カルシウム、リン酸二水素カルシウム、硫酸カルシウム、シュウ酸亜鉛等が挙げられる。
【００２５】
また、本発明にかかる皮膚外用剤の適用範囲は、特に限定されない。つまり、この発明の有効成分が有する作用効果に応じて各作用効果を利用できる全ての皮膚外用剤に適用できる。
【００２６】
本発明にかかるE-カドヘリン発現促進物質の配合量は、特に限定されない。理論上は有効量存在すれば良いことになるが、好ましくは、乾燥重量換算で0.0005〜0.１重量％、なかでも0.001〜0.05重量％が最適である。
【００２７】
本発明にかかる抗酸化剤は、特に限定されない。皮膚上で抗酸化剤の効果を発揮する量で、皮膚外用剤の安全性及び使用性が満足される量が配合される。したがって、抗酸化剤の配合量は抗酸化剤の種類、配合される皮膚外用剤によって異なり一概に決めることはできないが、一般的には、皮膚外用剤全量中0.00001〜10.0質量％の範囲で配合される。
【００２８】
本発明にかかるミネラル塩の配合量は、特に限定されない。原則的には、有効量存在すれば良いことになるが、組成物中乾燥重量で0.00001〜10重量％が利用でき、好ましくは、0.0001〜0.5重量％、なかでも0.00001〜0.1重量％が最適である。
【００２９】
たとえば、本発明にかかる有効成分を各種の外用製剤類（動物用に使用する製剤も含む）全般において利用でき、具体的にはアンプル、粉末、顆粒、固形、液体、ゲル又は気泡状の１）医薬品、２）医薬部外品、３）局所用又は全身用の皮膚用化粧料（例えば、クリーム、乳液、化粧水、パック剤、洗顔料などの各種基礎化粧料など）、４）衛星用品などが挙げられる。
【００３０】
以下、本発明による試験実施例を示すとともに、本発明の素材を利用した皮膚外用剤の処方例での利用例を示すが、ここに記載された実施例に限定されるものではない。
【００３１】
試料溶液の調製
調製例１（水抽出物）
各種植物乾燥物（全草）を、100gとり、1000mLの精製水を加え、60℃下において3時間抽出を行った。冷却後、ろ過を行い、ろ液を得た。ろ液を減圧下濃縮し、十分乾燥させ、水抽出物を6.5ｇを得た。
【００３２】
調製例２（エチルアルコール抽出物）
各種植物乾燥物（全草）を10gとり、ソックスレー抽出器を用いてエチルアルコールにて５時間抽出を行った。冷却後、ろ過を行い、ろ液を得た。ろ液を減圧下濃縮し、十分乾燥させ、エチルアルコール抽出物を0.7ｇ得た。
【００３３】
調製例３（エチルアルコール・水混液抽出物）
前記水抽出物における抽出法において水の代わりに50%エチルアルコール50%水混液を使用した。抽出物は可能な限り溶媒を除去、濃縮した後、十分乾燥させ、50%エチルアルコール抽出物を7.4g得た。
【００３４】
前記植物抽出物を50%エチルアルコールに1.0％濃度になるように溶解後、0.2μｍメンブレンフィルターにてろ過滅菌し、各植物抽出液とした。
【００３５】
E-カドヘリン発現促進の評価
ケラチノサイト表面に発現するE-カドヘリン量をサンドイッチELISA法（E-CADHERINEIA KIT, Takara）にて測定した。ケラチノサイトHaCaTを１０cmシャーレに10％FBSのDMEM培地にて培養し２４時間後、2％FBSのDMEM培地に培地交換し、各試料を添加した。表中の濃度は最終濃度である。コントロールとして試料の溶媒を使用した。さらに４８時間培養後に細胞をＰＢＳ（−）にて洗浄後、Lysis Bufferで細胞を剥離し回収した。細胞をソニックにて破壊し遠心分離後、上清を採取し細胞抽出液とした。一次抗体として抗ヒトE-カドヘリン抗体（モノクローナル抗体,Takara）がコートされた９６ELISAプレートに細胞抽出液を100μL添加37℃1時間反応させる。PBS（−）で3回洗浄後、酵素標識二次抗体としてHRP標識抗ヒトE-カドヘリン抗体（モノクローナル抗体,Takara）を100μL添加し37℃1時間反応しサンドイッチ複合体を形成させる。酵素基質としてTMBZ液を100μL添加し反応（室温15分）後、反応停止液として１N H₂SO₄添加し、マイクロプレートリーダーにて波長４５０nmで吸光度を測定した。本試験ではコントロールとして試料の溶媒を用いた。ELISA試験では、ブランクとしてBufferを用い、陰性対象にフキタンポポ、バオバブを用いた。結果を吸光度値よりブランクを差し引きコントロールを100％としたときのカドヘリン発現促進率（％）を算出して表３に示した。
【００３６】
【数１】

【００３７】
【表１】
カドヘリン発現促進率（％）

【００３８】
【表２】

【００３９】
【表３】

【００４０】
表1に示した結果のように、トルメンチラ抽出物、バラ抽出物、ゼニアオイ抽出物、ハイビスカス抽出物において、E-カドヘリン量の増加が見られた。さらに、表２に示した結果のように、トルメンチラ抽出物あるいはゼニアオイ抽出物及び西洋バラ抽出物あるいはハイビスカス抽出物を組み合わせることにより、飛躍的に高いE-カドヘリン発現促進効果が認められた。また表３に示したようにL-アスコルビン酸誘導体、トコフェロール誘導体あるいはマグネシウム塩を併用によっても同様の結果が得られた。
【００４１】
化粧料の使用による皮膚シワ、肌理改善効果の測定
さらに、本発明にかかる軟膏を用いて、実際に使用した場合の効果について検討を行った。顔のシワおよび肌理消失を訴える女性140名に３ヶ月間連続で一日２回（朝・夕）全顔に塗布してもらい連用試験を行った。被験者を無作為に20名ずつの群に分け表４の処方の軟膏を塗布してもらい、皮膚の改善度を評価した。評価方法は開始時と塗布3ヶ月後に皮膚のレプリカを採取し、最も大きなシワの長さおよび肌理状態を観察し、シワ改善度と肌理改善度を評価した。さらに使用後の実感度を被験者に４段階評価してもらった。結果を表４に示す。また、使用期間中に肌の異常を訴えた被験者はいなかった。
【００４２】
判定基準
（レプリカのシワ判定基準）
５：開始時と比較してシワの長さ50％減少
４：開始時と比較してシワの長さ30％減少
３：開始時と比較してシワの長さ10％減少
２：開始時と比較してシワの長さ同じ
１：開始時と比較してシワの長さ増加
【００４３】
（レプリカの肌理判定基準）
５：開始時と比較して顕著に均一性上昇
４：開始時と比較して均一性上昇
３：開始時と比較してやや均一性上昇
２：開始時と比較して均一性同じ
１：開始時と比較して均一性減少
【００４４】
（被験者のシワ度判定基準）
顕著に有効：シワがなくなった
有効：開始時と比較してシワが短くなり浅くなった
やや有効：開始時と比較してやや短くなり、浅くなった
無効：開始時と比較して同じ
【００４５】
【表４】

【００４６】
表４の結果から、トルメンチラ抽出物、ゼニアオイ抽出物のみでも、シワ改善効果・肌理改善効果が見られるが、トルメンチラ抽出物及びバラ抽出物、L-アスコルビン酸誘導体、トコフェロール誘導体を組み合わせることにより、飛躍的に高いシワ改善、肌理改善効果がみられることがわかる。被験者の実感効果も高く、本発明の有効成分により、シワ、肌理が改善されたことがわかる。
【００４７】
化粧料の使用によるたるみ改善効果の測定
さらに、本発明にかかる軟膏を用いて、実際に使用した場合の効果について検討を行った。顔のたるみを訴える30代から40代の女性140名に1ヶ月間連続で一日２回（朝・夕）塗布してもらい連用試験を行った。被験者を無作為に20名ずつの群に分け、表５の処方の軟膏を塗布してもらい、皮膚の改善度を評価した。評価方法は開始時と塗布1ヶ月後に半顔ずつの改善効果を比較し評価した。評価方法は開始時と塗布1ヶ月後に皮膚のハリ、弾力改善度をCutomaterSEM474（Curage and Khazaka）を用い評価した。Cutomaterにて皮膚の弾力回復率を測定し、塗布後の弾力回復率から開始時の弾力回復率を差し引き評価した。さらに、使用後の実感度を被験者に頬、目元部位のたるみ改善度、および頬のハリ改善度に関して４段階評価してもらった。結果を表５に示す。また、使用期間中に肌の異常を訴えた被験者はいなかった。
【００４８】
皮膚弾力性
Cutomaterの陰圧吸引により伸びた皮膚の高さを伸展長（mm）とし、陰圧開放後に吸引前の状態に戻らず盛り上がったままの皮膚の高さを非退縮長（mm）とする。
【００４９】
【数２】

【００５０】
判定基準
（弾力回復率判定基準）
５：弾力回復率30％以上
４：弾力回復率20〜30％以上
３：弾力回復率10〜20％
２：弾力回復率0〜10％
１：弾力回復率0％以下
【００５１】
（被験者のたるみ度判定基準）
顕著に有効：たるみがなくなった
有効：開始時と比較してたるみが減った
やや有効：開始時と比較してややたるみが減った
無効：開始時と比較して同じ
【００５２】
【表５】

【００５３】
表５の結果から、トルメンチラ抽出物、バラ抽出物、ゼニアオイ抽出物、ハイビスカス抽出物に高い弾力改善効果が見られた。トルメンチラ抽出物と西洋バラ抽出物の組み合わせ、ゼニアオイ抽出物と西洋バラの組み合わせにおいては、弾力回復効果が飛躍的に高まった。植物抽出物と抗酸化物質との組み合わせにおいても、植物抽出物単独配合と比べ、弾力回復効果が飛躍的に高まった。また、被験者のシワ改善の実感度も高く、本発明の有効成分により、弾力・シワが改善されたことがわかる。
【００５４】
処方例１
（１）軟膏（重量％）
a)トルメンチラ抽出物…0.01
b)西洋バラ抽出物…0.01
c)酸化防止剤…適量
d)ワセリン…残部
製法a)〜ｄ)までを加え、40℃に加温し、十分に混合する。
【００５５】
処方例２
（２）クリーム状外用剤（重量％）
a)ミツロウ …2.0
b)ステアリルアルコール…5.0
c)ステアリン酸…8.0
d)スクワラン…10.0
e)自己乳化型グリセリルモノステアレート…3.0
f)ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.)…1.0
g) ゼニアオイ抽出物…0.005
ｈ)西洋バラ抽出物…0.01
i)1,3-ブチレングリコール…5.0
j)水酸化カリウム…0.3
k)防腐剤・酸化防止剤…適量
ｌ）精製水…残部
製法a)〜f)、ｋ）を加熱溶解し、80℃に保ち油相とする。ｉ）、ｊ）、ｌ）を混合し80℃に保ち水相とする。油相に水相を加え乳化する。乳化後、攪拌しながら冷却し60℃になったらｇ）〜ｈ)を加え40℃になったら取りだしクリーム状外用剤を得る。
【００５６】
処方例３
（３）乳液状外用剤（重量％）
a)ミツロウ…0.5
b)ワセリン…2.0
c)スクワラン…8.0
d)ソルビタンセスキオレエート…0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.)…1.2
f)トルメンチラ抽出物…0.03
g)L-アスコルビン酸リン酸エステル塩…0.01
h)1,3-ブチレングリコール…7.0
i)カルボキシビニルポリマー…0.2
j)水酸化カリウム…0.1
k)精製水…残部
l)防腐剤・酸化防止剤…適量
m)エタノール…7.0
製法a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。ｈ)〜l)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し60℃でｆ）、ｇ）を加え、50℃まで撹拌しながら冷却する。50℃でｍ)を添加し、40℃まで冷却し、乳液状外用剤を得る。
【００５７】
処方例４
（４）化粧水(重量%)
a)トルメンチラ抽出物…0.1
b)dl-α-トコフェノール…0.0001
c)グリセリン…5.0
d)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.)…1.0
e)エタノール…6.0
f)香料…適量
g)防腐剤・酸化防止剤…適量
h)精製水…残部
製法a)〜h)までを随時加え混合し、均一に溶解する。
【００５８】
【発明の効果】
本発明の植物抽出物にシワ、たるみ、肌理構造改善効果を見出した。本発明の植物抽出液を化粧料に配合することによって、皮膚のＥ−カドヘリン発現促進作用を有し、表皮細胞間の接着を改善することにより皮膚の肌理、シワ、たるみ、肌荒れ改善効果の期待できる化粧料の提供が可能となった。[0001]
[Industrial application fields]
The present invention relates to a skin external preparation having an action of promoting the expression of E-cadherin in the skin, and more specifically, skin that can be expected to have an effect of improving skin texture, wrinkles, sagging and rough skin by improving and strengthening adhesion between epidermal cells. It relates to an external preparation.
[0002]
[Prior art]
Skin changes caused by aging include wrinkles, sagging and loss of texture. Such wrinkles, sagging, and loss of texture are thought to be one of the causes of degeneration of extracellular matrix such as collagen and laminin in the skin. Collagen production promoter or laminin for the purpose of improving aging skin Various proposals such as expression promoters have been made. (For example, see Patent Document 1)
Furthermore, in recent years, it is clear that not only these extracellular matrix functions to maintain the skin structure, but it is important to maintain the skin structure that the cells of the dermis and epidermis adhere to these extracellular matrices and the cells adhere to each other. Have been.
There are several types of cell adhesion devices, including tight junctions, adhesion bands, adhesion spots (adhesion points), desmosomes, hemidesmosomes, and gap junctions. (See Non-Patent Document 1)
Among these adhesion devices, the adhesion band is particularly important for cell adhesion, and cadherin is an adhesion molecule that plays a role in the adhesion band. Cadherin has been discovered as a membrane glycoprotein, a superfamily of calcium-dependent cell adhesion molecules (CAM). The cadherin expressed on the cell membrane binds to the same kind of cadherin expressed in another cell in a calcium concentration-dependent manner, thereby intercellular adhesion. (See Non-Patent Document 2) In the cytoplasmic domain of cadherin, P120 and β-catenin are directly bound, and β-catenin is bound to α-catenin and further linked to actin fibers that function to maintain the cytoskeleton.
About 20 cadherins are currently known as a family, but E (epithelial type)-cadherin (molecular weight 124KD), P (placental type)-cadherin (molecular weight 118KD) are clarified as cadherin species existing in the skin epidermis. ing. Furthermore, as a result of identifying 20 proteins secreted in adult human keratinosa, it has been reported that E-cadherin is secreted as an adhesion molecule. (See Non-Patent Document 3) In addition, when transplanting cultured epidermis by reconstructing a three-dimensional tissue structure, adhesion to the skin is low if the cultured epidermis is peeled off by dispase treatment, and if peeled at low temperature, the adhesion rate However, it is clear that E-cadherin is markedly reduced in the dispase-treated epidermis. (See Non-Patent Document 4)
These suggest the importance of E-cadherin in the skin epidermis.
Furthermore, it is reported that cell-cell adhesion does not only function to maintain the structure, but affects the growth, extension, movement, and differentiation of individual cells, and has extremely important functions in cell life phenomena. . In fact, it is known that β-catenin, which is a cadherin binding component, also functions as a gene transcriptional activity regulator. (See Non-Patent Document 5) It has also been revealed that Rho family Cdc42 and Roc1 are involved in α-catenin. (See Non-Patent Document 1)
From the above points, E-cadherin is thought to function in maintaining the higher-order structure of the skin epidermis and normal epidermal function.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
Accordingly, an object of the present invention is to provide an external preparation for skin that improves and strengthens cell-cell adhesion by promoting cadherin expression in human skin, and has an effect of improving skin wrinkles, sagging, and texture structure. .
[0004]
[Patent Document 1]
JP 2000-256308 [Non-Patent Document 1]
Masao Hayashi, Yodosha, "The world of new cell adhesion molecules", 2001
[Non-Patent Document 2]
Takeichi, M, Development, 102: 639, 1988
[Non-Patent Document 3]
Katz, AB, Taichman, LB
J. Invest. Dermatol. 112 (5), 818,
1999
[Non-Patent Document 4]
Yoshihito Nagata, NTN, Biometrics Handbook, 2003
[Non-Patent Document 5]
Hiroshi Uchida et al., Yodosha, "Understanding intracellular signal transduction", 70, 2000
[0005]
[Means for solving problems]
As a result of diligent studies to solve the above problems, the present inventor has newly found a substance having an E-cadherin expression promoting action as a result of focusing on E-cadherin in the skin. It has been found that when these E-cadherin expression promoting agents are used in combination, they are excellent in wrinkles, sagging and smoothing, and exhibit remarkable effects. Furthermore, when an E-cadherin expression promoting agent and an antioxidant and / or mineral are used in combination, the effect of improving wrinkles and sagging and the effect of adjusting the texture are dramatically improved and a remarkable effect is exhibited. As a result, the present invention has been completed.
That is, the present invention provides an external preparation for skin containing an E-cadherin expression promoter.
[0006]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
As the cadherin expression promoter in the present invention, those that promote the expression of E-cadherin are more desirable.
[0007]
The plant used for the plant extract as an E-cadherin expression promoting substance used in the present invention is not particularly limited. Examples of plants belonging to the genus Potentilla include P. tormentilla.
[0008]
Examples of the plant belonging to the genus Rose include western rose (Rose centifolia), modern rose (Rose hybrida) and the like.
[0011]
The plants of the genus Mallow are: Mallow (Malva sylvestris L.), Hyacinth (Malvarotundifolea L.), Musk muck (Malva moschata L.), Fuyu aoi (Malva verticillata L. varverticillata L.) L.) Makino (M. crispa L.) and the like.
[0012]
Hibiscus (Hibiscus sabdariffa L.) etc. are mentioned as a plant of Fuso.
[0013]
The extraction part of the plant used for this invention is not specifically limited. It can also be extracted using petals, leaves, stems, roots, seeds, fruits, or the like, or whole plants that are raw or dried.
[0014]
The extract used in the present invention can be extracted with various solvents. Besides using water alone, a polar solvent miscible with water can be used alone. Ethanol, propylene glycol, ethylene glycol, 1,3-butylene glycol and the like can be used as the polar solvent, but the polar solvent is not limited thereto. Further, one or more mixed solvents of ethanol, propylene glycol, ethylene glycol, and 1,3-butylene glycol can be used.
[0015]
Extraction time and extraction temperature are not particularly limited. For example, in the case of extraction with water, the extraction is usually performed at 60 ° C. for 3 to 4 hours, and when a low-boiling solvent such as ethanol is used, an extraction device with a reflux is used. An extracted solution can be obtained by filtering the extracted solution after cooling. Furthermore, deodorization and decolorization can be performed using activated carbon or other resins. If necessary, the solvent can be removed by a method such as heating, and it can be used as an extract (dry product).
[0016]
The antioxidant used in the present invention is not particularly limited as long as it is an antioxidant that can be blended into a skin external preparation. Examples of antioxidants include, for example, vitamins A and their derivatives and their salts, vitamins B and their derivatives and their salts, vitamins C and their derivatives and their salts, vitamins D And derivatives thereof and salts thereof, vitamin Es and derivatives thereof, amino acids, sulfur-containing organic compounds and derivatives thereof, and salts thereof, carotenoids, tannins, flavonoids and the like.
[0017]
Examples of vitamin Cs and derivatives thereof and salts thereof include L-ascorbic acid; L-ascorbyl palmitate, L-ascorbyl dipalmitate, L-ascorbyl isopalmitate, L-ascorbyl diisopalmitate, tetra L-ascorbyl isopalmitate, L-ascorbyl stearate, L-ascorbyl distearate, L-ascorbyl isostearate, L-ascorbyl diisostearate, L-ascorbyl myristic acid, L-ascorbyl dimyristic acid, L-ascorbyl isomyristate Ascorbic acid such as L-ascorbyl diisomyristate, L-ascorbyl oleate, L-ascorbyl dioleate, L-ascorbyl 2-ethylhexanoate, L-ascorbyl di-2-ethylhexanoate Ascorbine such as alkyl ester; L-ascorbic acid sodium phosphate ester, potassium L-ascorbic acid phosphate, L-ascorbic acid magnesium phosphate, L-ascorbic acid phosphate calcium, L-ascorbic acid phosphate aluminum Acid phosphate ester salts;
[0018]
L-ascorbic acid sodium sulfate, L-ascorbic acid potassium sulfate, L-ascorbic acid sulfuric acid magnesium, L-ascorbic acid sulfuric acid calcium, L-ascorbic acid sulfuric acid ester such as aluminum sulfate; L-ascorbic acid Ascorbic acid salts such as sodium, potassium L-ascorbate, magnesium L-ascorbate, calcium L-ascorbate, aluminum L-ascorbate; ascorbic acid glucoside, ascorbic acid polypeptide, methylsilanol ascorbate, ascorbyl phosphate coferyl phosphate Potassium etc. are mentioned.
[0019]
Among these vitamin Cs and derivatives thereof and salts thereof, ascorbic acid phosphate ester salt, ascorbic acid glucoside, and tetraisopalmitic acid L-ascorbyl are particularly preferable.
[0020]
Examples of vitamin E and derivatives thereof include dl-α-tocopherol, dl-β-tocopherol, dl-γ-tocopherol, dl-δ-tocopherol and other tocopherols; acetate-dl-α-tocopherol, nicotinic acid-dl -Tocopherol esters such as succinic acid dl-α-tocopherol, etc .; ethylene oxide adducts of tocopherols such as tocopheres-5, tocopheres-10, tocopheres-12; ubiquinones, etc. Can be mentioned.
[0021]
Among these vitamin Es and derivatives thereof, one or two selected from the group consisting of dl-α-tocopherol, dl-β-tocopherol, dl-γ-tocopherol, dl-δ-tocopherol and tocopherol esters The above is particularly preferable.
[0022]
Examples of carotenoids include α-carotene, β-carotene, γ-carotene, lycopene, cryptoxanthine, zeaxanthin, isozeaxanthin, rhodoxanthin, capsanthin, crocetin and the like.
[0023]
In the present invention, among these antioxidants, one or more selected from the group consisting of vitamin Cs and their derivatives and their salts, vitamin Es and their derivatives are effective. Since it exhibits, it is preferably used.
[0024]
The mineral salt used in the present invention is not particularly limited as long as it is a mineral salt that can be blended in a skin external preparation. Examples of mineral salts include calcium chloride, magnesium chloride and zinc chloride, calcium phosphate, calcium dihydrogen phosphate, calcium sulfate, zinc oxalate and the like.
[0025]
Moreover, the application range of the external preparation for skin concerning this invention is not specifically limited. That is, the present invention can be applied to all external preparations for skin that can use each function and effect according to the function and effect of the active ingredient of the present invention.
[0026]
The amount of the E-cadherin expression promoting substance according to the present invention is not particularly limited. Theoretically, an effective amount may be present, but preferably 0.0005 to 0.1% by weight, especially 0.001 to 0.05% by weight in terms of dry weight is optimal.
[0027]
The antioxidant according to the present invention is not particularly limited. The amount that exhibits the effect of the antioxidant on the skin is blended in an amount that satisfies the safety and usability of the external preparation for skin. Therefore, the amount of antioxidants varies depending on the type of antioxidant and the external preparation for skin, and cannot be determined in general, but in general, it is in the range of 0.00001 to 10.0% by mass of the total amount of external preparation for skin. Is done.
[0028]
The compounding quantity of the mineral salt concerning this invention is not specifically limited. In principle, an effective amount should be present, but 0.00001 to 10% by weight in dry weight in the composition can be used, preferably 0.0001 to 0.5% by weight, and most preferably 0.00001 to 0.1% by weight. is there.
[0029]
For example, the active ingredient according to the present invention can be used in various external preparations (including preparations used for animals) in general, specifically, ampoules, powders, granules, solids, liquids, gels or bubbles 1) Pharmaceuticals, 2) Quasi-drugs, 3) Topical or systemic skin cosmetics (for example, various basic cosmetics such as creams, emulsions, lotions, packs, face wash, etc.), 4) Satellite products, etc. Is mentioned.
[0030]
Hereinafter, although the test example by this invention is shown and the usage example in the formulation example of the skin external preparation using the raw material of this invention is shown, it is not limited to the Example described here.
[0031]
Preparation of sample solution Preparation Example 1 (water extract)
100 g of various plant dried products (whole plant) was taken, 1000 mL of purified water was added, and extraction was performed at 60 ° C. for 3 hours. After cooling, filtration was performed to obtain a filtrate. The filtrate was concentrated under reduced pressure and sufficiently dried to obtain 6.5 g of a water extract.
[0032]
Preparation Example 2 (Ethyl alcohol extract)
10 g of various dried plants (whole plant) was taken and extracted with ethyl alcohol for 5 hours using a Soxhlet extractor. After cooling, filtration was performed to obtain a filtrate. The filtrate was concentrated under reduced pressure and sufficiently dried to obtain 0.7 g of an ethyl alcohol extract.
[0033]
Preparation Example 3 (Ethyl alcohol / water mixture extract)
In the extraction method for the water extract, a 50% ethyl alcohol 50% water mixture was used instead of water. The extract was concentrated after removing the solvent as much as possible and then sufficiently dried to obtain 7.4 g of 50% ethyl alcohol extract.
[0034]
The plant extract was dissolved in 50% ethyl alcohol to a concentration of 1.0%, and then sterilized by filtration through a 0.2 μm membrane filter to obtain each plant extract.
[0035]
Evaluation of E-cadherin expression promotion The amount of E-cadherin expressed on the surface of keratinocytes was measured by sandwich ELISA (E-CADHERINE KIT, Takara). Keratinocyte HaCaT was cultured in 10% Petri dish in 10% FBS DMEM medium, 24 hours later, the medium was replaced with 2% FBS DMEM medium, and each sample was added. Concentrations in the table are final concentrations. The sample solvent was used as a control. After further culturing for 48 hours, the cells were washed with PBS (−), and the cells were detached and collected with Lysis Buffer. The cells were disrupted with sonic and centrifuged, and the supernatant was collected to obtain a cell extract. 100 μL of cell extract is added to a 96 ELISA plate coated with anti-human E-cadherin antibody (monoclonal antibody, Takara) as a primary antibody, and allowed to react at 37 ° C. for 1 hour. After washing 3 times with PBS (−), 100 μL of HRP-labeled anti-human E-cadherin antibody (monoclonal antibody, Takara) is added as an enzyme-labeled secondary antibody and reacted at 37 ° C. for 1 hour to form a sandwich complex. After reacting by adding 100 μL of TMBZ solution as an enzyme substrate (room temperature 15 minutes), 1N H ₂ SO _{4 was} added as a reaction stop solution, and absorbance was measured at a wavelength of 450 nm with a microplate reader. In this test, the solvent of the sample was used as a control. In the ELISA test, Buffer was used as a blank, and Fukidan Popo and Baobab were used as negative subjects. Table 3 shows the results of calculating the cadherin expression promotion rate (%) when a blank was subtracted from the absorbance value and the control was taken as 100%.
[0036]
[Expression 1]

[0037]
[Table 1]
Cadherin expression promotion rate (%)

[0038]
[Table 2]

[0039]
[Table 3]

[0040]
As shown in Table 1, an increase in the amount of E-cadherin was observed in the tormentilla extract, rose extract, mallow extract, and hibiscus extract. Furthermore, as shown in the results shown in Table 2, a dramatic increase in the E-cadherin expression promoting effect was recognized by combining the tormentilla extract or the mallow extract and the western rose extract or the hibiscus extract. As shown in Table 3, the same results were obtained when L-ascorbic acid derivative, tocopherol derivative or magnesium salt was used in combination.
[0041]
Measurement of skin wrinkle and texture improvement effect by use of cosmetics Furthermore, the effect when actually used was examined using the ointment according to the present invention. 140 women who complained of wrinkles on the face and disappearance of skin texture were applied to all faces twice a day (morning and evening) for 3 consecutive months. The subjects were randomly divided into groups of 20 people, and the ointment of the prescription in Table 4 was applied to evaluate the degree of improvement of the skin. As the evaluation method, skin replicas were collected at the start and 3 months after application, the length and texture of the largest wrinkles were observed, and the degree of improvement of the wrinkles and the degree of improvement of the texture were evaluated. Further, the actual sensitivity after use was evaluated by the test subject in four levels. The results are shown in Table 4. In addition, no subject complained of skin abnormalities during the period of use.
[0042]
Criteria (replica wrinkle criteria)
5: 50% reduction in wrinkle length compared to the start 4: 30% reduction in wrinkle length compared to the start 3: 10% reduction in wrinkle length compared to the start 2: Wrinkle length is the same in comparison 1: Wrinkle length is increased compared to the start time.
(Replication texture criteria)
5: Remarkably increased uniformity compared to the start 4: Increased uniformity compared to the start 3: Slightly increased uniformity compared to the start 2: Same uniformity compared to the start 1: Same start Reduced uniformity compared to
(Subject's wrinkle degree criterion)
Remarkably effective: Wrinkle disappeared Effective: Wrinkles became shorter and shallower compared to the start time Slightly effective: Slightly shorter than the start time, shallower and disabled Invalid: Same as the start time [0045]
[Table 4]

[0046]
From the results of Table 4, wrinkle improvement effect and skin texture improvement effect can be seen only with tormentilla extract and mallow extract, but by combining tormentilla extract and rose extract, L-ascorbic acid derivative, tocopherol derivative, leap forward It can be seen that high wrinkle improvement and texture improvement effect are observed. The actual feeling effect of the test subject is also high, and it can be seen that wrinkles and texture are improved by the active ingredient of the present invention.
[0047]
Measurement of sagging improvement effect by use of cosmetics Furthermore, the effect when actually used was examined using the ointment according to the present invention. 140 women in their 30s and 40s who complain of sagging of the face were applied twice a day (morning and evening) for a month in a row for a continuous test. The subjects were randomly divided into groups of 20 people, and an ointment having the formulation shown in Table 5 was applied to evaluate the degree of improvement of the skin. The evaluation method compared and evaluated the improvement effect of each half face at the start and one month after application. The evaluation method used Cutomater SEM474 (Curage and Khazaka) to evaluate skin elasticity and elasticity improvement at the start and one month after application. The skin elasticity recovery rate was measured with Cutomater, and the elasticity recovery rate at the start was subtracted from the elasticity recovery rate after application. Furthermore, the actual sensitivity after use was evaluated by the test subject on a four-point scale regarding the degree of improvement in sagging of the cheek, the eye area, and the degree of improvement in cheek tension. The results are shown in Table 5. In addition, no subject complained of skin abnormalities during the period of use.
[0048]
Skin elasticity
The height of the skin stretched by the negative pressure suction of Cutomater is defined as the extension length (mm), and the height of the skin that remains raised after the negative pressure release without returning to the state before suction is defined as the non-retraction length (mm).
[0049]
[Expression 2]

[0050]
Judgment criteria (elasticity recovery rate criteria)
5: Elastic recovery rate 30% or more 4: Elastic recovery rate 20-30% or more 3: Elastic recovery rate 10-20%
2: Elasticity recovery rate 0 to 10%
1: Elasticity recovery rate 0% or less [0051]
(Subject's slackness criterion)
Significantly effective: no sagging effective: slightly less sagging compared to starting time slightly valid: slightly less sagging compared to starting time invalid: same compared to starting time [0052]
[Table 5]

[0053]
From the results of Table 5, a high elasticity improving effect was observed in the tormentilla extract, rose extract, mallow extract, and hibiscus extract. In the combination of Tormentilla extract and Western rose extract, and the combination of mallow extract and Western rose, the resilience recovery effect was dramatically increased. Even in the combination of the plant extract and the antioxidant substance, the elasticity recovery effect was dramatically increased as compared with the plant extract alone. Moreover, the actual sensitivity of the subject to improve wrinkles is high, and it can be seen that the elasticity and wrinkles were improved by the active ingredient of the present invention.
[0054]
Formulation Example 1
(1) Ointment (wt%)
a) Tormentilla extract ... 0.01
b) Western rose extract ... 0.01
c) Antioxidant: appropriate amount
d) Vaseline: Add the remaining preparations a) to d), warm to 40 ° C, and mix thoroughly.
[0055]
Formulation Example 2
(2) Creamy external preparation (wt%)
a) Beeswax 2.0
b) Stearyl alcohol… 5.0
c) Stearic acid… 8.0
d) Squalane… 10.0
e) Self-emulsifying glyceryl monostearate ... 3.0
f) Polyoxyethylene cetyl ether (20E.O.) ... 1.0
g) Mallow extract… 0.005
h) Western rose extract ... 0.01
i) 1,3-Butylene glycol… 5.0
j) Potassium hydroxide ... 0.3
k) Preservative / Antioxidant: Appropriate amount l) Purified water: Remainder production methods a) to f), k) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. to obtain an oil phase. i), j) and l) are mixed and kept at 80 ° C. to obtain an aqueous phase. Add water phase to oil phase and emulsify. After emulsification, the mixture is cooled with stirring and g) to h) are added when the temperature reaches 60 ° C, and the creamy external preparation is obtained when the temperature reaches 40 ° C.
[0056]
Formulation Example 3
(3) Milky topical preparation (wt%)
a) Beeswax ... 0.5
b) Petrolatum ... 2.0
c) Squalane… 8.0
d) Sorbitan sesquioleate ... 0.8
e) Polyoxyethylene oleyl ether (20E.O.) ... 1.2
f) Tormentilla extract ... 0.03
g) L-ascorbic acid phosphate salt ... 0.01
h) 1,3-butylene glycol… 7.0
i) Carboxyvinyl polymer ... 0.2
j) Potassium hydroxide ... 0.1
k) Purified water ... balance
l) Preservatives / Antioxidants: appropriate amount
m) Ethanol ... 7.0
The production methods a) to e) are dissolved by heating and maintained at 80 ° C. h) to l) are heated and dissolved,
Maintain at 80 ° C., emulsify in addition to a) to e), add f) and g) at 60 ° C., and cool to 50 ° C. with stirring. Add m) at 50 ° C. and cool to 40 ° C. to obtain an emulsion external preparation.
[0057]
Formulation Example 4
(4) Lotion (wt%)
a) Tormentilla extract ... 0.1
b) dl-α-Tocophenol… 0.0001
c) Glycerin ... 5.0
d) Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20E.O.) ... 1.0
e) Ethanol ... 6.0
f) Fragrance ... appropriate amount
g) Preservatives / Antioxidants ... appropriate amount
h) Purified water: Add the remainder of the preparation methods a) to h) as needed and mix to dissolve uniformly.
[0058]
【The invention's effect】
The plant extract of the present invention was found to have an effect of improving wrinkles, sagging and texture. By blending the plant extract of the present invention into cosmetics, it has an action of promoting the expression of E-cadherin in the skin, and expects the skin texture, wrinkles, sagging, rough skin improvement effect by improving the adhesion between epidermal cells It was possible to provide cosmetics that could be used.

Claims

トルメンチラ抽出物と西洋バラ抽出物、ゼニアオイ抽出物と西洋バラ抽出物、トルメンチラ抽出物とＬ−アスコルビン酸リン酸エステル、トルメンチラ抽出物とｄｌ−α−トコフェロールの組合せから選ばれる１種以上を配合することを特徴とするシワ改善及び肌理改善剤。One or more selected from the combination of tormentilla extract and western rose extract, mallow extract and western rose extract, tormentilla extract and L-ascorbic acid phosphate ester, tormentilla extract and dl-α-tocopherol An agent for improving wrinkles and texture.

トルメンチラ抽出物と西洋バラ抽出物、ゼニアオイ抽出物と西洋バラ抽出物、トルメンチラ抽出物とＬ−アスコルビン酸リン酸エステル、トルメンチラ抽出物とｄｌ−α−トコフェロールの組合せから選ばれる１種以上を配合することを特徴とする弾力回復剤。One or more selected from the combination of tormentilla extract and western rose extract, mallow extract and western rose extract, tormentilla extract and L-ascorbic acid phosphate ester, tormentilla extract and dl-α-tocopherol Elasticity recovery agent characterized by that.