JP4071837B2 - アスコルビン酸検出用試薬組成物及び試験片 - Google Patents
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Description
【発明の属する技術分野】
本発明は、液体試料中の、さらに詳しくは、全血、血清、血漿、尿、髄液、唾液などの生体試料中のアスコルビン酸を検出するための試薬組成物及び試験片に関する。
【0002】
【従来の技術】
液体試料中のアスコルビン酸を検出するための方法は、種々存在し、知られている。
例えば、特開昭55−142249号には、キレート剤と鉄(III)イオン(又は銅(II)イオン)との錯体、金属指示薬、緩衝剤などを用いた方法が示されている。
また、特開昭57−154056号、特開昭58−63850号、特開昭60−162954号、特開平1−259260号には、インドフェノール系色素を用いた方法が示されている。
また、特開昭54−80793号、特開昭59−106476号、特開平1−213574号には、テトラゾリウム系色素を用いた方法が示されている。
また、特開昭54−30890号には、オキサジン系色素を用いた方法が示されている。
また、特開昭48−100187号、特開昭56−8550号には、モリブデン酸を用いた方法が示されている。
また、特開昭60−6870号には、銅イオンを用いて、アスコルビン酸が酸化されて出る過酸化水素による検出を用いた方法が示されている。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】
最近の尿試験片、例えばグルコース、潜血などの項目においては、尿中のアスコルビン酸等還元性物質の影響をある程度の濃度までは、回避できるように工夫されてきているが、充分なものではなく、還元性物質を検出するために、測定レンジが広い試験片が必要となってきている。
しかし、上記の従来技術では、100mg/dl程度までのアスコルビン酸しか検出できないという課題があった。
【0004】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記課題を解決するために、液体試料中のアスコルビン酸を検出するための試薬組成物において、
(i)鉄(III)化合物、
(ii)鉄(II)イオン検出試薬、
(iii)酸化剤
を含み、かつ
酸化剤がヨウ素酸塩であることを特徴とするアスコルビン酸検出用組成物である。
また、液体試料中のアスコルビン酸を検出するための試験片において、上記の試薬組成物を保持体に保持することを特徴とする試験片である。
【0005】
【発明の実施の形態】
本発明は、さらに、緩衝剤を含むことが好ましい。
緩衝剤は、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、マロン酸緩衝液、クエン酸緩衝液など種々用いることができる。
また、緩衝剤のpHは、2〜7であることが好ましい。
【0006】
さらに、本発明には、ポリマーや界面活性剤を含むことができる。
ポリマーは、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、アルギン酸ナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、ゼラチンなど種々用いることができる。
界面活性剤は、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル(トリトンX−100)、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(ツイーン20)、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート(ツイーン60)、ポリオキシエチレンラウリルエーテル(ブリッジ35)、ポリオキシエチレンセチルエーテル(ブリッジ58)など種々用いることができる。
【0007】
本発明における鉄(III)化合物は、エチレンジアミン四酢酸一ナトリウム鉄(III)、シュウ酸アンモニュウム鉄(III)水和物、硫酸鉄(III)アンモニュウム水和物、塩化鉄(III)等のキレート化合物やイオン化合物から選択することができる。
【0008】
また、鉄(II)イオン検出試薬は、2,2’−ビピリジン、2,2’−ビキノリン、1,10−フェナントトリン等の化合物や誘導体から選択することができる。
【0009】
また、酸化剤は、ヨウ素酸ナトリウム、ヨウ素酸カリウムなどのヨウ素酸塩であるが、ヨウ素酸ナトリウムが好ましい。
本発明は、さらに、液体試料中のアスコルビン酸を検出するための液状試薬や錠剤試薬に応用することも可能である。
以下に実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【0010】
【実施例1】
濾紙(ワットマン社製;3MMChr)を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
<処方>
2,2’−ビピリジン(ナカライテスク製) 3 g
エチレンジアミン四酢酸鉄(III)−ナトリウム 4 g
(ナカライテスク製)
ヨウ素酸ナトリウム(ナカライテスク製) 1 g
ポリビニルピロリドンK−30(ナカライテスク製) 10 g
0.5Mクエン酸/クエン酸ナトリウム緩衝液(pH4) 80 ml
エタノール 20 ml
【0011】
【実施例2】
濾紙(ワットマン社製;3MMChr)を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
<処方>
1,10−フェナントロリン(ナカライテスク製) 3 g
エチレンジアミン四酢酸鉄(III)−ナトリウム 4 g
(ナカライテスク製)
ヨウ素酸ナトリウム(ナカライテスク製) 1 g
ポリビニルピロリドンK−30(ナカライテスク製) 10 g
0.5Mクエン酸/クエン酸ナトリウム緩衝液(pH4) 80 ml
エタノール 20 ml
【0012】
【比較例1】
濾紙(ワットマン社製;3MMChr)を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
<処方>
2,2’−ビピリジン(ナカライテスク製) 3 g
エチレンジアミン四酢酸鉄(III)一ナトリウム 4 g
(ナカライテスク製)
ポリビニルピロリドンK−30(ナカライテスク製) 10 g
0.5Mクエン酸/クエン酸ナトリウム緩衝液(pH4) 80 ml
エタノール 20 ml
【0013】
【比較例2】
濾紙(ワットマン社製;3MMChr)を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
<処方>
1,10−フェナントロリン(ナカライテスク製) 3 g
エチレンジアミン四酢酸鉄(III)一ナトリウム 4 g
(ナカライテスク製)
ポリビニルピロリドンK−30(ナカライテスク製) 10 g
0.5Mクエン酸/クエン酸ナトリウム緩衝液(pH4) 80 ml
エタノール 20 ml
【0014】
実施例1、2及び比較例1、2にて作製したこの片面に両面テープ(ソニーケミカル製;T4000)を貼り、5mm×5mmにカットし、試薬部分を得た。これを5mm×60mmのPETフィルムの先端部に貼付し、試験片を得た。
<測定方法>
実施例1、2及び比較例1、2にて作製した上記試験片の試薬部分に下記試料1〜6を7μl滴下して、各試験紙の最大吸収波長における1分後の反射率変化を、色差計(日本分光製;Σ−90)を用いて、測定した。
試料1;蒸留水
試料2;アスコルビン酸水溶液 ( 10mg/l)
試料3;アスコルビン酸水溶液 ( 30mg/l)
試料4;アスコルビン酸水溶液 ( 50mg/l)
試料5;アスコルビン酸水溶液 (100mg/l)
試料6;アスコルビン酸水溶液 (300mg/l)
ここで、最大吸収波長は、実施例1及び比較例1においては540nm、実施例2及び比較例2においては510nmとなった。
<結果>
結果として、実施例と比較例の最大吸収波長における反射率変化をまとめ、表1に示す。
【0015】
【表1】
上記結果より、実施例1、2による試験片は、比較例1、2による試験片に比べて、測定レンジはかなり広くなっている。
しかも、試薬部分の発色は、発色系であるため肉眼比色においても有利である。
【0016】
【発明の効果】
本発明によって、従来よりも広い測定レンジを持つ試験片を作製することが可能になった。
Claims (8)
- 液体試料中のアスコルビン酸を検出するための試薬組成物において、
(i)鉄(III)化合物、
(ii)鉄(II)イオン検出試薬、
(iii)酸化剤
を含み、かつ
酸化剤がヨウ素酸塩であることを特徴とするアスコルビン酸検出用組成物。 - さらに、緩衝剤を含むことを特徴とする請求項1に記載のアスコルビン酸検出用組成物。
- 緩衝剤のpHが、2〜7であることを特徴とする請求項2に記載のアスコルビン酸検出用組成物。
- さらに、ポリマーを含むことを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載のアスコルビン酸検出用組成物。
- さらに、界面活性剤を含むことを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載のアスコルビン酸検出用組成物。
- 鉄(III)化合物が、エチレンジアミン四酢酸一ナトリウム鉄(III)、シュウ酸アンモニュウム鉄(III)水和物、硫酸鉄(III)アンモニュウム水和物、及び
塩化鉄(III)のキレート化合物又はイオン化合物から選ばれることを特徴とする請求項1に記載のアスコルビン酸検出用組成物。 - 鉄(II)イオン検出試薬が、2,2′−ビピリジン、2,2′−ビキノリン、1,10−フェナントロリン及びそれらの誘導体から選ばれることを特徴とする請求項1に記載のアスコルビン酸検出用組成物。
- 液体試料中のアスコルビン酸を検出するための試験片において、請求項1〜7のいずれかの試薬組成物を保持体に保持することを特徴とする試験片。
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