JP4031478B2 - インフルエンザ血球凝集素多価ワクチンの製造方法 - Google Patents
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Description
インフルエンザウイルスの繁殖と精製
以下のインフルエンザワクチン株が、FDAから鶏卵尿液中に得られた:
A/北京/353/89様(H3N2)
A/北京/32/92様(H3N2)
A/テキサス/36/91様(H1N1)
B/パナマ/45/90
実施例2
インフルエンザA/テキサス/36/91 HA遺伝子のクローニング
インフルエンザHA遺伝子の1つのためのクローニングの手順の特別な例が図2に示されている。
細菌プラスミドへのHA遺伝子のクローニング
PCR増幅されたrHA遺伝子はpUC様プラスミドベクター中にTAクローニングシステム(Invitrogen、Inc.)を用いてクローン化された。
組換えHA遺伝子の昆虫細胞中での発現
クローン化されたHA遺伝子を含むキメラ組換えプラスミドを精製し、2μgを、1μgのAcNPV野生型DNAと混合した。
組換えHAの生産および精製
インフルエンザA/北京/353/89の遺伝子を含むバキュロイルス発現ベクター、A8611が、A/北京/32/92血液凝集素をポリヘドリンプロモーターについて上に記載されたものと実質的に同様に作られ、S.frugiperda細胞を感染させるために用いられた。
rHAプロテアーゼ抵抗性の分析
成熟HAは、HAモノマーを分解するトリプシンを含む酵素に対して抵抗性である3次構造に集合する(Murphy and Webster、1990)。
標準化されたマウス効力アッセイを用いたrHAの免疫原性
ある抗原の免疫原性を測定するための方法の1つに、マウス中において検出可能な抗体反応を誘導するために必要な量を決定することがある(マウス効力アッセイ)。
アジュバントと組合せたrHAの投与および入手可能なインフルエンザワクチンとの比較
インフルエンザA/北京/353/89由来の精製されたrHAのマウス効力がアルムとともに、またはアルム無し(ニート)で試験され、市販のインフルエンザワクチンで、インフルエンザA/北京/353/89を含んでいるFluzone(登録商標)(Connaught Laboratories、Inc.Swiftwater、PA)と比較した。
血液凝集素阻害の研究
血液凝集素阻害(HAI)抗体は、4つの公知の抗体のうちの3つに結合し、インフルエンザの赤血球を凝集する能力を妨害する(Wilson et al.,”Structure of the hemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at 3Å resolution”Nature、289:366−378(1981))。
1993/1994インフルエンザワクチンの系統的記述および診療効率
一連のヒト臨床試験が、組換えHAを含む実験インフルエンザワクチンのヒトでの安全性および免疫原性を特徴づけるために、および、そのようなワクチンの伝染病の季節の間の天然感染に対しての防御効果についての予備的データを得るために行われた。
改善されたHA0クローニングベクターを作成するための方法
成熟HAの発現のための改善されたクローニングベクターであって、HAをコードする遺伝子がキチナーゼシグナルペプチドの配列をコードする配列の直後に配置されているものが設計された。
1995−1996インフルエンザウイルスワクチンAおよびB3価型の調製および効果
インフルエンザウイルスワクチン、精製された組換え血球凝集素、3価、AおよびB型(A/テキサス/36/92/1(H1N1)、A/ヨハネスブルグ/33/94(H3N2)およびB/ハービン/7/94)は、精製された組換えインフルエンザ血球凝集素抗原(HA)から派生された非感染性サブユニットである。
Claims (7)
- 培養昆虫細胞においてバキュロウイルス発現系によって産生され95%より高い純度まで精製された組換えグリコシル化インフルエンザ血球凝集素タンパク質を含むワクチン組成物であって、該組換えグリコシル化インフルエンザ血球凝集素タンパク質が、配列番号7または9の配列のアミノ酸位置1−18のアミノ酸を有するバキュロウイルスシグナルペプチドに作動可能に結合しており、該血球凝集素タンパク質が免疫原性であり、ワクチンとして用いられた場合に防御免疫反応を誘導することを特徴とするワクチン組成物。
- アジュバント剤をさらに含むことを特徴とする請求項1記載のワクチン組成物。
- 前記インフルエンザが、インフルエンザA株およびインフルエンザB株より成る群から選択されることを特徴とする請求項1または2記載のワクチン組成物。
- インフルエンザに対して動物(ヒトを除く)にワクチン接種する方法であって、培養昆虫細胞においてバキュロウイルス発現系によって産生され95%より高い純度まで精製された組換えグリコシル化インフルエンザ血球凝集素タンパク質の有効量を、動物(ヒトを除く)に投与することを含み、該組換えグリコシル化インフルエンザ血球凝集素タンパク質が、配列番号7または9の配列のアミノ酸位置1−18のアミノ酸を有するバキュロウイルスシグナルペプチドに作動可能に結合しており、該血球凝集素タンパク質が免疫原性であり、ワクチンとして用いられた場合に防御免疫反応を誘導することを特徴とする方法。
- アジュバント剤と組み合わせて前記タンパク質を前記動物に投与することをさらに含むことを特徴とする請求項4記載の方法。
- 前記インフルエンザがインフルエンザA株およびインフルエンザB株より成る群から選択されることを特徴とする請求項4または5記載の方法。
- 前記動物が哺乳類であることを特徴とする請求項4から6いずれか1項記載の方法。
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