JP3967558B2

JP3967558B2 - フラボノイド化合物の製造方法

Info

Publication number: JP3967558B2
Application number: JP2001093020A
Authority: JP
Inventors: 義明三宅; 俊彦大澤; 健一郎湊
Original assignee: Nagoya University NUC; Japan Science and Technology Agency; Tokai National Higher Education and Research System NUC; National Institute of Japan Science and Technology Agency
Current assignee: Nagoya University NUC; Japan Science and Technology Agency; Tokai National Higher Education and Research System NUC; National Institute of Japan Science and Technology Agency
Priority date: 2001-03-28
Filing date: 2001-03-28
Publication date: 2007-08-29
Anticipated expiration: 2021-03-28
Also published as: JP2002281995A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、フラボノイド化合物の製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、ナリンゲニンの配糖体であるナリンジンは、ザボン、夏みかん、グレープフルーツ等の柑橘類、特にそれら柑橘類の果皮やじょうのう膜に多く含まれるフラボノイドである。このナリンジンは、強い苦味を有していることから、主として飲料等に苦味を付与するために用いられている。また、このナリンジンは、抗腫瘍作用や抗炎症作用を有しているうえ、発癌物質によるラット乳癌の生成に対して抑制作用を有することが知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
天然に多く存在するナリンジンの有効利用の一環として、ナリンジンを物質変換することにより、その利用範囲のより一層の拡大を見込める可能性が高い。特に、前記ナリンジンは体内への吸収性があまり高くなりことから、物質変換によって栄養的な観点からの価値の向上が期待される。
【０００４】
この発明は、前記ナリンジンのさらなる利用拡大を目指した鋭意研究の結果なされたものである。その目的とするところは、ナリンジンの利用範囲の拡大を図ることができるフラボノイド化合物の製造方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明のフラボノイド化合物の製造方法は、下記化２で示される構造を有し、アスペルギルス・サイトイ（Aspergillus saitoi）を用いてナリンジンを微生物発酵処理することによって得られることを特徴とするフラボノイド化合物の製造方法であって、ナリンジンを下記化１に示されるフラボノイド化合物を製造する能力を有するアスペルギルス・サイトイ（ Aspergillus saitoi ）にて微生物発酵処理することにより、前記ナリンジンを微生物変換してフラボノイド化合物を生成させることを特徴とするものである。
【０００６】
【化２】

但し、Ｒ１は水素でＲ２は水酸基、又はＲ１は水酸基でＲ２は水素。
【０００８】
請求項２に記載の発明のフラボノイド化合物の製造方法は、請求項１に記載の発明において実施され、前記微生物発酵処理は、ナリンジンと請求項１に記載のフラボノイド化合物を製造する能力を有するアスペルギルス・サイトイとを含む培地を振盪培養し、前記アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸にナリンジンからナリンゲニンを微生物変換させる菌糸培養工程を行った後、前記アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸から胞子形成を進行させつつ、前記培地中のナリンゲニンからフラボノイド化合物を微生物変換させる胞子形成工程を行うように構成したことを特徴とするものである。
【０００９】
なお、前記菌糸培養工程後の胞子形成工程は、そのまま振盪培養しても、静置培養に切り替えてもどちらでもよい。但し、静置培養する場合には、培地の深さを浅くして培地の体積に対する表面積の割合（比表面積）を大きくすることにより、培地全体を好気的条件に保ち、アスペルギルス・サイトイによる微生物変換効率を高めるように構成するのが好ましい。
【００１０】
請求項３に記載の発明のフラボノイド化合物の製造方法は、請求項２に記載の発明において実施され、前記菌糸培養工程に先立って、請求項１に記載のフラボノイド化合物を製造する能力を有するアスペルギルス・サイトイを含む培地を振盪培養する予備培養工程を行うように構成したことを特徴とするものである。
【００１１】
【発明の実施の形態】
以下、この発明を具体化した実施形態を詳細に説明する。
実施形態の第１のフラボノイド化合物は、下記化３で示される構造を有している。
【００１２】
【化３】

この第１のフラボノイド化合物は、化学式がＣ₁₅Ｈ₁₂Ｏ₆で、分子量が約２８９のフラボノイド化合物（4',5,7,8-tetrahydroxyflavanone 又は 2,3-dihydro-5,7,8-trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one）である。このフラボノイド化合物は、上記化３で示される構造より、ナリンゲニン（naringenin；4',5,7-trihydroxyflavanone）の８位に水酸基を備えた有機化合物、いわゆる８−ヒドロキシナリンゲニン（8-hydroxynaringenin）である。
【００１３】
実施形態の第２のフラボノイド化合物は、下記化４で示される構造を有している。
【００１４】
【化４】

この第２のフラボノイド化合物は、化学式がＣ₁₅Ｈ₁₂Ｏ₆で、分子量が約２８９のフラボノイド化合物（4',5,6,7-tetrahydroxyflavanone 又は 2,3-dihydro-5,6,7-trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one）である。このフラボノイド化合物は、上記化４で示される構造より、ナリンゲニン（naringenin）の６位に水酸基を備えた有機化合物、いわゆる６−ヒドロキシナリンゲニン（6-hydroxynaringenin）である。
【００１５】
これら８−ヒドロキシナリンゲニン及び６−ヒドロキシナリンゲニン（第１及び第２のフラボノイド化合物）は、いずれもメタノール、エタノール及びジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）に可溶で、若干溶解性が悪いが水にも可溶である。さらに、前記ナリンゲニンには抗酸化作用がほとんど見られないのに対し、第１及び第２のフラボノイド化合物は極めて高い抗酸化作用を発揮することができる。特に、前記８−ヒドロキシナリンゲニンは、６−ヒドロキシナリンゲニンよりもより一層高い抗酸化作用を発揮することができる。そして、この高い抗酸化作用を利用して、例えば食品や飲料等に添加して健康増進活性を有する健康食品や健康ドリンク等に利用することができる。このとき、これら第１及び第２のフラボノイド化合物は、生体内で活性酸素を消去して過酸化脂質の生成を抑制し、酸化ストレスに起因する癌、動脈硬化、糖尿病の合併症等の生活習慣病の予防に役立つ。
【００１６】
第１及び第２のフラボノイド化合物は、ナリンジン（naringin）をアスペルギルス・サイトイ（Aspergillus saitoi）にて微生物発酵処理することによって得られる。すなわち、これらフラボノイド化合物は、ナリンゲニンとネオヘスペリジオース（neohesheridiose）との配糖体であるナリンジンを含有する培地中でアスペルギルス・サイトイを培養し、そのアスペルギルス・サイトイにナリンジンを微生物変換させることにより、その培養上澄み液中に生成される。なお、このときの培養条件としては、アスペルギルス・サイトイの生育及び前記微生物変換を良好に行うために、２０〜４０℃の培養温度、好気的条件であるのが好ましい。
【００１７】
前記培地としては、ポテトデキストロース含有培地やツァペック培地等の糸状菌用培地又はオカラ等の有機物を含有する種々の液体培地が好適に使用される。さらに、ナリンジンから前記フラボノイド化合物を微生物変換させる目的以外の発酵を阻害するように、必要最小限の栄養素を含有する最小培地であるのが好ましく、例えばアルコール発酵しないように単糖類及び二糖類が培地中に含まれないようにするのが好ましい。また、前記培地は、培養開始時点では、アスペルギルス・サイトイの生育を良好にするために、ｐＨ３〜７の範囲内であるのが好ましい。
【００１８】
さらに、培地中にナリンジンを添加する際には、培地中におけるナリンジンの溶解性を高める目的で、低濃度の有機溶媒が含有されるのが好ましい。前記有機溶媒としては、メタノール、エタノール、ＤＭＳＯ等が挙げられる。この培地中の有機溶媒の含有量としては、好ましくは０．０１〜５容量％、より好ましくは０．０１〜０．１容量％である。この培地中の有機溶媒の含有量が０．０１容量％未満の場合には、培地中に充分な量のナリンジンを溶解させることができない。逆に５容量％を越える場合には、アスペルギルス・サイトイの生育が阻害される。
【００１９】
一方、培地中に添加されるナリンジンの含有量としては、多量のフラボノイド化合物を効率よく得るために、その溶解限界としての飽和濃度まで含有させるのが好ましい。なお、前記飽和濃度は、前記有機溶媒の含有量と深く関連しているが、およそ１重量％以下である。また、培養開始時に培地中に添加されるアスペルギルス・サイトイの濃度としては、多量のフラボノイド化合物を短期間で効率よく得るために、２×１０⁶個／ｍＬ（ｃｆｕ／ｍＬ）以上であるのが好ましい。
【００２０】
さらに、このアスペルギルス・サイトイによる微生物変換効率を高めるために、前記培地中でアスペルギルス・サイトイの栄養菌糸を振盪培養する菌糸培養工程を行った後、その栄養菌糸から胞子形成を進行させる胞子形成工程を行うように構成するのが好ましい。
【００２１】
なお、前記菌糸培養工程に先立って、アスペルギルス・サイトイが栄養菌糸を充分に形成できるようにするために、菌体のみを含有する培地を予備的に振盪培養（以下、予備培養工程と記載する）するように構成するのが好ましい。この予備培養工程は、ナリンジンの溶解性を高めるために培地中に同時に添加される有機溶媒によるアスペルギルス・サイトイの培養初期段階（増殖初期段階）での生育阻害を回避することにより、ナリンジンの微生物変換効率を高めるために行われる。
【００２２】
この予備培養工程は、アスペルギルス・サイトイの培養初期段階における生育阻害を確実に回避するために、好ましくはアスペルギルス・サイトイの栄養菌糸が培養液面の１／３以上占めるまで、より好ましくは１／３〜２／３程度占めるまで行うように構成される。この予備培養工程において、アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸が培養液面の１／３〜２／３程度占めるまでの期間は概ね１〜２週間である。この予備培養工程期間が１週間未満では栄養菌糸が液面の１／３を占めるに至らない。逆に２週間を超える場合には、アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸が容器全体に増殖してしまい、培地の栄養成分が欠乏するため、アスペルギルス・サイトイによりナリンジンの分解が早く進み、工程の制御が難しくなる。
【００２３】
菌糸培養工程は、培地中にナリンジンを添加してから後の工程であり、前記ナリンジンを含む培地中で好気的条件を保ちつつアスペルギルス・サイトイを振盪培養することにより、アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸にナリンジンを微生物変換させる工程である。この工程において、アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸は、ナリンジンを構成するナリンゲニンとネオヘスペリジオースとの結合を切断してナリンゲニンを生成するグリコシダーゼ反応を極めて効率的に行う。
【００２４】
なおこのとき、培地中に添加されるナリンジンの含有量は、前記溶解限界を超えて添加されても構わない。このとき、ナリンジン添加時点では溶解されずに培養容器の底部に沈澱していたナリンジンが振盪による撹拌作用により適宜培地中に溶解されて微生物発酵に利用され得る。さらに、培地中に溶解限界を超えてナリンジンを含有させた場合には、培養容器底部のナリンジンの沈澱を防ぐ目的で、５０ｒｐｍ／分程度で沈澱が消失するまで振盪培養するように構成するのが好ましく、その結果としてより多くのナリンゲニンを生成させることができる。
【００２５】
胞子形成工程は、前記菌糸培養工程後の培地をそのまま培地交換せずに静置培養又は振盪培養することによって、アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸に胞子形成を進行させながら微生物変換を行わせる工程である。なお、菌糸培養工程から胞子形成工程に移行する段階は、菌糸培養工程が終了する前から胞子形成が始まる場合もあるため、明確には区別をすることはできないが、胞子が形成され始めたことを目視にて一応確認可能となることから、それを指標にして把握することができる。
【００２６】
この工程において、アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸は、胞子形成を進行させながら、ナリンゲニンの８位又は６位に水酸基を付加させるヒドロキシラーゼ反応を行ってフラボノイド化合物を極めて効率的に生成させる。なお、この胞子形成工程では、通常８−ヒドロキシナリンゲニンと６−ヒドロキシナリンゲニンとが所定の比率で同時に生成される。これら８−ヒドロキシナリンゲニン及び６−ヒドロキシナリンゲニンの生成反応は、培養容器内における胞子形成過程の前期から中期にかけて最も効率的に行われ、収量も増加する。しかし、胞子形成が中期から完了する段階につれて、次第に８−ヒドロキシナリンゲニンと６−ヒドロキシナリンゲニンが分解され、含有量が減少する。このため、より大量の８−ヒドロキシナリンゲニンと６−ヒドロキシナリンゲニンを得るために、ナリンジン添加後からの培養日数が３〜１０日で培養を停止するように構成するのが好ましく、ここで生成されたフラボノイド化合物を抽出するとよい。
【００２７】
また、この胞子形成工程において静置培養を行う場合には、振盪時の物理的刺激による胞子形成の抑制効果を容易に解消することができるため、胞子形成が速やかに行われ、８−ヒドロキシナリンゲニンと６−ヒドロキシナリンゲニンの収量のピークも早くでる。なお、この静置培養時には、培地の深さを浅くして培地の体積に対する表面積の割合（比表面積）を大きくすることにより、培地全体を好気的条件に保ち、アスペルギルス・サイトイの活動を活発化させてその微生物変換効率を高めるように構成するのが好ましい。
【００２８】
一方、胞子形成工程において振盪培養を行う場合には、培地の深さを適度に深くしても好気的条件を保つことが容易であり、さらに物理的刺激により胞子形成を遅らすことができるため、微生物変換が緩やかに行われ、８−ヒドロキシナリンゲニンと６−ヒドロキシナリンゲニンの収量のピークも静置培養より遅くなる。
【００２９】
本実施形態における振盪培養の振盪速度としては、５０〜２００ｒｐｍ／分の範囲内であるのが好ましい。この振盪速度が５０ｒｐｍ／分未満の場合には、アスペルギルス・サイトイを含有した培地全体が好気的でないため、菌糸の増殖が充分にできない。逆に振盪速度が２００ｒｐｍ／分を越える場合には、培地の揺れが激しく、菌糸形成が充分にできない。
【００３０】
最後に、上記培養上澄み液又は前記胞子形成工程後の培地からフラボノイド化合物を抽出して精製する。このとき、前記培地をアスペルギルス・サイトイの細胞膜が破壊されない程度に遠心分離（３０００ｒｐｍ程度）して上澄み画分を得、その上澄み画分を疎水性カラムによる逆相液体クロマトグラフィーにより精製するとよい。なお、前記遠心分離後の沈澱画分にも比較的多量のフラボノイド化合物が含まれていることから、その沈澱画分にメタノールやエタノール等の有機溶媒を加えて充分に洗浄しながら抽出した後、その抽出液を逆相液体クロマトグラフィーにて精製するように構成するとよい。
【００３１】
さらに、８−ヒドロキシナリンゲニンと６−ヒドロキシナリンゲニンとは、極めて類似した性質を有していることから、前記逆相液体クロマトグラフィーにおいて著しく類似した溶出パターンを示す。このため、両者を互いに別々の画分に分離するために、必要に応じて諸条件を僅かに変更しつつ、逆相液体クロマトグラフィーその他の分離精製を行うように構成するのがより好ましい。
【００３２】
上記実施形態によって発揮される効果について、以下に記載する。
・実施形態の第１のフラボノイド化合物は、アスペルギルス・サイトイを用いてナリンジンを微生物発酵処理することによって得られたものであり、上記化３で示される構造を有する８−ヒドロキシナリンゲニンである。また、実施形態の第２のフラボノイド化合物は、アスペルギルス・サイトイを用いてナリンジンを微生物発酵処理することによって得られたものであり、上記化４で示される構造を有する６−ヒドロキシナリンゲニンである。これらのフラボノイド化合物は、ナリンジンを微生物変換することによって製造されたものであることから、天然に多く存在するナリンジンの有効利用を促進し、その利用範囲の拡大を図ることができる。
【００３３】
さらに、原料としてのナリンジンは、ザボン、夏みかん、グレープフルーツ等の果皮やじょうのう膜に多く含有されていることから、果汁を搾汁した後の残渣（廃棄物）を極めて有効に利用することができる。前記残渣は、ナリンジンが極めて高濃度に濃縮されているうえ、大量かつ安価に入手することが容易である。このため、これらフラボノイド化合物は、前記残渣を原料として使用することによって、極めて大量かつ安価に製造することが可能である。一方、これら第１及び第２のフラボノイド化合物については、植物（例えばコガネバナの葉）の抽出物から分離精製された文献や、植物の抽出物（例えばベニバナ色素のアグリコン）を酸で異性化することによって化学的に合成された文献等が知られている。しかしながら、これらの文献による方法では、大量のフラボノイド化合物を安価に得るのは著しく困難である。
【００３４】
加えて、これらのフラボノイド化合物は、ナリンゲニンの８位又は６位に水酸基が付加された構造を有することによって、ナリンジン及びナリンゲニンと比べて著しく高い抗酸化作用を発揮することができる。このため、生体内で活性酸素を消去して過酸化脂質の生成を抑制し、酸化ストレスに起因する癌、動脈硬化、糖尿病の合併症等の生活習慣病の予防に役立てることができる。
【００３５】
・実施形態の第１及び第２のフラボノイド化合物の製造方法は、ナリンジンをアスペルギルス・サイトイにて微生物発酵処理することにより、前記ナリンジンを微生物変換して得られるものである。このため、ナリンジンの利用範囲の拡大を図ることができるフラボノイド化合物を極めて容易に製造することができる。さらに、原料として柑橘類に含有されている天然成分であるナリンジンを用いるとともに、焼酎等の酒類の醸造に利用されるアスペルギルス・サイトイが用いられていることから、人体への摂取においてもほとんど問題がない。
【００３６】
加えて、前記微生物発酵処理において、アスペルギルス・サイトイとナリンジンとを含む培地を振盪培養する菌糸培養工程を行った後に胞子形成工程を行うように構成することによって、非常に簡単な作業工程で、第１及び第２のフラボノイド化合物を極めて効率的に製造することが可能となる。また、前記菌糸培養工程に先立って、予備培養工程を行うことによって、アスペルギルス・サイトイの培養初期における生育阻害を回避して、ナリンジンの微生物変換効率を容易に高めることが可能である。
【００３７】
【実施例】
以下、前記実施形態を具体化した実施例について説明する。
＜ナリンジン変換物の製造＞
ポテトデキストロース−ブロス培地（ＤＩＦＣＯ社製）を複数個の三角フラスコ（容積５００ｍＬ）に１００ｍＬずつ分取し、オートクレーブ滅菌（１２１℃、１５分間）を行った。冷却した後に、２×１０⁸個／ｍＬ以上の濃度に調製したアスペルギルス・サイトイの胞子懸濁液を１．０ｍＬずつ各フラスコに接種し、３０℃の恒温室（大気と同じ成分の好気的条件）内において１００ｒｐｍ／分で振盪培養を行いながら栄養菌糸を育成させた。なお、前記アスペルギルス・サイトイは、(財)応用微生物学研究奨励会（通称ＩＡＭ）より分譲を受けたアスペルギルス・サイトイ菌株（ＩＡＭＮｏ．２２１０）が用いられた。
【００３８】
１０日間振盪培養を行って栄養菌糸を生育させた後、オートクレーブ滅菌（１０５℃、５分間）した１０重量％のナリンジン（ＳＩＧＭＡ社製）エタノール希釈液を５ｍＬずつ加え、引続き同好気的条件下で振盪培養を行なって、さらに栄養菌糸からの胞子形成を進行させた。なお、このときの胞子形成の様子を経時的にモニタリングしたところ、ナリンジンを投入しておよそ５日経過後から胞子の形成が始まり、３週間後には培地の液面全体で胞子の形成が認められたことが分かった。
【００３９】
本実験では、ナリンジン投入後から１週間経過した時点（胞子が液面に出現しはじめた時期）、すなわち胞子形成の前期から中期と思われる時期のサンプルを採取した。そして、この採取されたサンプルを遠心分離（３０００ｒｐｍ、１５分間）して不純物を沈澱除去した後、その上澄み液を分析用高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（島津製作所製のＬＣ１０Ａ、カラムはＹＭＣ社製のＡ３０３）にて分析し、フラボノイド組成の変化を調べた。その結果、フラボノイド組成物全体に占めるナリンジン変換物のピークの割合はおよそ３０％であることが分かった。
【００４０】
さらに、前記ナリンジン変換物を含有することが確認されたＨＰＬＣ用サンプルの残りをエバポレーターにて濃縮した後、分取用ＨＰＬＣ（島津製作所製のＬＣ８Ａ、カラムはＹＭＣ社製のＲ３５３−１５１Ａ、ＳＨ３４３−５）にて分画し、ナリンジン変換物の単離精製を行った。その結果、極めて近接した位置に２種類のナリンジン変換物のピークが確認された。これら２種類のナリンジン変換物のピークの割合は、およそ４７．５％（第１のナリンジン変換物）及び３３．２％（第２のナリンジン変換物）であった。
【００４１】
＜構造決定＞
上記＜ナリンジン変換物の製造＞で得られた第１及び第２のナリンジン変換物の構造決定を行った。¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲスペクトルは、内部標準としてＤＭＳＯ−ｄ６に溶解させたテトラメチルシラン（Tetramethylsilane；ＴＭＳ）を用いてＪＥＯＬＪＮＭ−ＥＸ−４００ＮＭＲ装置（¹ＨＮＭＲは４００ＭＨｚ、¹³ＣＮＭＲは１００ＭＨｚ）で分析した。質量スペクトル（ＦＡＢ-ＭＳ）は、ＪＥＯＬＪＭＳ−ＤＸ−７０５Ｌで測定した。また、各ナリンジン変換物を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）にて展開（展開溶媒は１−ブタノール／酢酸／水＝４／１／５）し、そのＲｆ値（移動率）を求めた。結果を表１〜表３に示す。
【００４２】
【表１】

【００４３】
【表２】

【００４４】
【表３】

その結果、前記第１のナリンジン変換物は上記化３で示される構造を有する８−ヒドロキシナリンゲニンであり、第２のナリンジン変換物は上記化４で示される構造を有する６−ヒドロキシナリンゲニンであることが確認された。
【００４５】
さらに、前記実施形態より把握できる技術的思想について以下に記載する。
・前記微生物発酵処理を０．０１〜５容量％の有機溶媒を含有する培地中で行うことを特徴とする前記フラボノイド化合物の製造方法。このように構成した場合、アスペルギルス・サイトイの生育阻害を低減させつつ、比較的多量のナリンジンを培地中に溶解させて、その微生物変換効率を容易に高めることができる。
【００４６】
・さらに前記微生物発酵処理後の培養上澄み液を、疎水性カラムを用いた逆相液体クロマトグラフィーにより精製することを特徴とする前記フラボノイド化合物の製造方法。このように構成した場合、極めて容易にフラボノイド化合物を単離することができる。
【００４７】
・前記ナリンジンは、柑橘類の果皮又はじょうのう膜から抽出されたものであることを特徴とする前記フラボノイド化合物の製造方法。このように構成した場合、フラボノイド化合物を大量かつ安価に製造することが容易である。
【００４８】
・上記化３で示される構造を有し、アスペルギルス・サイトイ（Aspergillus saitoi）を用いてナリンジンを微生物発酵処理することによって得られることを特徴とするフラボノイド化合物。このように構成した場合、ナリンジンの利用範囲の拡大を図ることができる。
【００４９】
・上記化４で示される構造を有し、アスペルギルス・サイトイ（Aspergillus saitoi）を用いてナリンジンを微生物発酵処理することによって得られることを特徴とするフラボノイド化合物。このように構成した場合、ナリンジンの利用範囲の拡大を図ることができる。
【００５０】
【発明の効果】
以上詳述したように、この発明によれば、次のような効果を奏する。
【００５１】
各請求項に記載の発明のフラボノイド化合物の製造方法によれば、ナリンジンの利用範囲の拡大を図ることができるフラボノイド化合物を容易に製造することができる。

Claims

下記化１で示される構造を有し、アスペルギルス・サイトイ（Aspergillus saitoi）を用いてナリンジンを微生物発酵処理することによって得られることを特徴とするフラボノイド化合物の製造方法であって、
ナリンジンを下記化１に示されるフラボノイド化合物を製造する能力を有するアスペルギルス・サイトイ（ Aspergillus saitoi ）にて微生物発酵処理することにより、前記ナリンジンを微生物変換してフラボノイド化合物を生成させることを特徴とするフラボノイド化合物の製造方法。

但し、Ｒ１は水素でＲ２は水酸基、又はＲ１は水酸基でＲ２は水素。
前記微生物発酵処理は、
ナリンジンと請求項１に記載のフラボノイド化合物を製造する能力を有するアスペルギルス・サイトイとを含む培地を振盪培養し、前記アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸にナリンジンからナリンゲニンを微生物変換させる菌糸培養工程を行った後、
前記アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸から胞子形成を進行させつつ、前記培地中のナリンゲニンからフラボノイド化合物を微生物変換させる胞子形成工程を行うように構成したことを特徴とする請求項１に記載のフラボノイド化合物の製造方法。
前記菌糸培養工程に先立って、請求項１に記載のフラボノイド化合物を製造する能力を有するアスペルギルス・サイトイを含む培地を振盪培養する予備培養工程を行うように構成したことを特徴とする請求項２に記載のフラボノイド化合物の製造方法。