JP3874372B2

JP3874372B2 - Anticancer drug effect enhancer

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Publication number: JP3874372B2
Application number: JP04991094A
Authority: JP
Inventors: 一任竹迫; 郁之進加藤; 隆鶴尾
Original assignee: Takara Bio Inc
Current assignee: Takara Bio Inc
Priority date: 1994-02-24
Filing date: 1994-02-24
Publication date: 2007-01-31
Anticipated expiration: 2022-01-31
Also published as: JPH07233084A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、制癌剤に有効である、新規な効果増強剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
本発明で使用される化合物及びその医薬として許容される塩は、優れた抗真菌活性を有し、カンジダ症、クリプトコッカス症を始めとする真菌感染症の治療に有用であることが知られている（特開平２−１３８２９６号、同３−２２９９５号、同３−４４３９８号、同３−２２０１９９号、同５−２７９３８４号、特願平４−３０３１７７号、欧州特許公開第０５８１４２９号）。配列表の配列番号２で表されるオーレオバシジンＡは下記式（２）の構造を有しており、その中で特に優れた活性と低い毒性を有している。
【０００３】
【化２】

【０００４】
〔式中、_D-Ｈｍｐは２（Ｒ）−ヒドロキシ−３（Ｒ）−メチルペンタン酸を示す〕
ところで、抗生物質等の化学療法剤を比較的長期に投与した場合、感染微生物が耐性を獲得し、化学療法剤の効果が減少することはよく知られている。また、癌の成長又は転移を縮小、阻害又は制限する手段として、制癌剤を用いる癌化学療法においても時間の経過と共に投与した制癌剤に耐性を示す癌が出現し、癌化学療法の治療効果が低下することが一般に知られている。それは癌細胞内の制癌剤の蓄積、維持能低下が原因であることが多いと言われている。この耐性の機作が分子レベルで解明されつつあり、これに対する治療方法も検討されてきている。すなわち、最近、多剤耐性を担う遺伝子が単離され、この遺伝子が多剤耐性細胞に発現する膜蛋白質、Ｐ糖蛋白質（Ｐ−glycoprotein) の遺伝子であることが明らかとなった。Ｐ糖蛋白質は制癌剤の細胞外排出の機能をもった蛋白質であることが推定され、癌の多剤耐性機構において中心的役割を担う蛋白質であると考えられる。また、Ｐ糖蛋白質は癌細胞のほかにも、真菌を始めとする真核生物、細菌にも存在し、真菌において薬剤耐性に関与していることが知られている〔Ｋ．ニシ（Ｋ．Nishi)ら、モレキュラーミクロバイオロジー（Molecular Microbiology) 、第６巻、第７６１〜７６９頁（１９９２）〕。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
新規な化学療法剤の開発が困難な今日、既存の化学療法剤の効果増強を試みることは極めて重要である。
本発明の目的は、優れた制癌剤の効果増強作用を有することが見出された化合物を含有する、制癌剤の効果増強剤を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明を概説すれば、本発明は、下記式（１）で表される環状デプシペプチド又はその医薬として許容される塩を含有することを特徴とする、ビンクリスチン、ビンブラスチン、アドリアマイシン、ダウノマイシン及びアクチノマイシンＤから選択される制癌剤の効果増強剤に関する。
【０００７】
【化３】

【０００８】
〔式中、Ｘ１はＨｍｐ又はＨｍｂ（Ｈｍｐは２−ヒドロキシ−３−メチルペンタン酸、Ｈｍｂは２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸を示す）であり、Ｘ３はＭｅＰｈｅ又はβＨＯＭｅＰｈｅ（ＭｅＰｈｅはＮ−メチルフェニルアラニン、βＨＯＭｅＰｈｅはβ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルフェニルアラニンを示す）であり、Ｘ５はａＩｌｅ、Ｖａｌ又はＬｅｕであり、Ｘ８はβＨＯＭｅＶａｌ（βＨＯＭｅＶａｌはβ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルバリンを示す）又はＭｅＶａｌである〕
【０００９】
なお、本明細書において用いた特殊なα−アミノ酸、Ｎ−メチル−α−アミノ酸、又はα−オキシ酸の略号は、次表にまとめて示すとおりである。

【００１０】
本発明者らは、鋭意研究の結果、意外にも抗真菌剤として知られている下記式（３）で表される環状デプシペプチド（配列表の配列番号１）の中で、特に前記の式（１）で表される化合物が、細胞内における制癌剤の蓄積、維持に強い効果を示すと共に、制癌剤の効果を著しく増強させる効果を有することを見出し、本発明を完成した。
なお、下記式（３）中、Ｘ１はＨｍｐ、Ｈｍｂ又はＤｈｍｐ（Ｈｍｐは２−ヒドロキシ−３−メチルペンタン酸、Ｈｍｂは２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸、Ｄｈｍｐは２，４−ジヒドロキシ−３−メチルペンタン酸を示す）であり、
Ｘ２はＰｈｅ、ｏＦＰｈｅ、ｍＦＰｈｅ、ｐＦＰｈｅ又はＣｈａであり、
Ｘ３はＭｅＰｈｅ、ｏＦＭｅＰｈｅ、ｍＦＭｅＰｈｅ、ｐＦＭｅＰｈｅ、ＭｅＧｌｙ、ＭｅＡｌａ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｙｒ、βＨＯＭｅＰｈｅ又はβＲ ₁ ＯＭｅＰｈｅ｛但し、Ｒ ₁ は炭素数１〜４の低級アシル基であり、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−Ｒ ₂ （Ｒ ₂ は炭素数１〜４の低級アルキル基である）、−ＮＨ ₂ 又は−ＮＨ−Ｒ ₃ （Ｒ ₃ は炭素数１〜４の低級アシル基である）で置換されていてもよい｝、
Ｘ４はＰｒｏ、４Ｈｙｐ、ＳＰｒｏ又はＰｉｐであり、
Ｘ５はａＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｇｌｕ、ＧｌｕＯＲ ₄ （Ｒ ₄ はベンジル基、炭素数１〜１２のアルキル基又は炭素数１〜１２のアルケニル基である）、ＨＯＮｖａ又はＲ ₅ ＯＮｖａ（Ｒ ₃ はベンジル基又は炭素数１〜１２のアシル基である）であり、
Ｘ６はＶａｌ、ＭｅＶａｌ、ＭｅａＩｌｅ、ＭｅＬｅｕ、Ｈｍｂ、ＨＯＭｅＮｖａ又はＲ ₆ ＯＭｅＮｖａ（Ｒ ₆ はベンジル基又は炭素数１〜１２のアシル基である）であり、
Ｘ７はＬｅｕ、Ｎｖａ、ａＩｌｅ、ＨＯＮｖａ又はＧｌｕＯＲ ₇ （Ｒ ₇ はベンジル基、炭素数１〜１２のアルキル基又は炭素数１〜１２のアルケニル基である）であり、
Ｘ８はβＨＯＭｅＶａｌ、γＨＯＭｅＶａｌ、ＭｅＶａｌ、Ｖａｌ、Ｎ，βＭｅＡｓｐ、βＨＯＭｅＰｈｅ、ＭｅＤＨ _2,3 Ｖａｌ、ＭｅＤＨ _3,4 Ｖａｌ又はＭｅＴｈｒである。
また、下記式（３）で表される代表的化合物を後記表１〜表３に示す。
【００１１】
【化４】

【００１２】
【表１】

【００１３】
【表２】

【００１４】
【表３】

【００１５】
なお、表１〜表３中、・印はオーレオバシジンＡ（化合物１）と同一のアミノ酸又はオキシ酸であることを示す。
【００１６】
本発明で用いられる環状デプシペプチドは、オーレオバシジウムプルランス（Aureobasidium pullulans) No.Ｒ１０６〔微工研条寄第１９３８号（ＦＥＲＭＢＰ−１９３８）〕の培養物より、特開平２−１３８２９６号、同３−２２９９５号、同３−２２０１９９号、同５−２７９３８４号各公報又は特願平４−３０３１７７号明細書記載の方法により採取される。
【００１７】
例えば、グルコース、グリセリン等の炭素源、ペプトン、アンモニウム塩、アミノ酸等の窒素源、その他無機塩等を含有する液体培地で上記生産菌を培養し、得られた培養液によりエタノール等の有機溶媒で抽出し、抽出物を吸着性樹脂で精製し、更に６０〜７０％のアセトニトリル／水の混合溶媒等を用いた逆相ＨＰＬＣやヘキサン／アセトニトリル／２−プロパノールの混合溶媒を用いたシリカゲルＨＰＬＣ等により精製すれば、環状デプシペプチドを分離、生産することができる。なお、化合物１（オーレオバシジンＡ）については特開平２−１３８２９６号公報に、化合物２、１０、１１、２０、２１、２８、３９、４０、４１、４２については特開平３−２２９９５号公報に、化合物４、９、１５、１６、１９、３４については特開平３−２２０１９９号公報に、化合物３については特開平５−２７９３８４号公報に、化合物２９、３０、３５については特願平４−３０３１７７号明細書、欧州特許公開第０５８１４２９号公報中にそれぞれ記載されている。
【００１８】
また、培養物より得られたものを原料として、特開平３−４４３９８号、同３−２２０１９９号各公報記載の化学的な方法により誘導体として採取される。
なお、化合物１２、１３、１４については特開平３−４４３９８号公報に、化合物６については特開平３−２２０１９９号公報にそれぞれ記載されている。
【００１９】
更に、特願平４−３０３１７７号明細書、欧州特許公開第０５８１４２９号公報、特願平５−３４６８７３号明細書記載の方法により化学的に全合成により得ることができる。なお化合物１、１７、１８、２２、２９、３０、３１、３２、３３、３５、３８、４３については特願平４−３０３１７７号明細書及び欧州特許公開第０５８１４２９号公報に、化合物２３、２４、２５、２６、２７、３６、３７については欧州特許公開第０５８１４２９号公報に、化合物５、７、８、４４については特願平５−３４６８７３号明細書にそれぞれ記載されている。なお、化合物５、７、８、４４の製造法については参考例として後述する。
【００２０】
式（１）で表される化合物の医薬として許容される塩としては、無毒の、医薬として許容される慣用の塩であり、例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、例えばトリエチルアミン塩、Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミン塩等のアミン塩のような無機又は有機塩基との塩が挙げられる。
【００２１】
本発明において化学療法とは、例えば、細菌、ウイルス、真菌又は原生動物等に対し、抗生物質を投与することによって感染症の予防若しくは治療を行うこと、並びに癌細胞に対し制癌剤を投与することによって癌の予防若しくは治療を行うこと等を意味し、化学療法剤とはこれらの目的に使用される抗生物質、制癌剤等を意味する。
【００２２】
本発明の制癌剤の効果増強剤により、その効果が増強されうる制癌剤としては、後述のように式（１）の化合物又はその医薬として許容される塩が、細胞内の制癌剤の濃度を上昇させうることから考えて、少なくとも細胞膜を通じて細胞内に輸送され効果を発揮する制癌剤であればよく、そのような制癌剤としては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、アドリアマイシン、ダウノマイシン及びアクチノマイシンＤから選択される、抗生物質、抗癌剤、植物成分を含む天然物抗癌物質由来の制癌剤がある。
【００２３】
本発明の化学療法剤効果増強剤の耐性癌に対する制癌剤効果増強作用は、例えばヒト卵巣癌細胞のアドリアマイシン耐性株２７８０ＡＤ、又はヒト骨髄性白血病のアドリアマイシン耐性株Ｋ５６２／ＡＤＭを用い、その細胞内への制癌剤取り込み増強効果及び制癌剤の作用増強効果によって説明される。
【００２４】
本発明の制癌剤の効果増強剤は、式（１）の化合物又はその医薬として許容される塩を外用、内服又は非経口投与に適した有機又は無機の担体若しくは賦形剤と混合して、例えば固体状、半固体状若しくは液状の医薬製剤の形で投与することができる。この医薬製剤は、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、坐剤、液剤、懸濁液及びその他の適切な形で使用でき、例えば通常の無毒で、医薬として許容される担体と混合してもよい。使用しうる担体は、水、グルコース、ラクトース、アラビアゴム、ゼラチン、マンニトール、でんぷんペースト、ステアリン酸マグネシウム、タルク、コーンスターチ、ケラチン、コロイドシリカ、及び他の固体状、半固体状又は液状の製剤を製造するのに適した担体があり、更に、賦形剤、安定化剤、粘稠化剤、着色剤、香料を使用してもよい。式（１）の化合物又はその医薬として許容される塩は、疾患の経過又は状態により、所望の効果を発揮するのに十分な量が医薬製剤中に含有される。
この医薬製剤をヒトに用いる場合は、非経口投与又は内服で使用することが望ましい。
本発明の制癌剤の効果増強剤を用いてヒト又は動物を治療する際には、公知の制癌剤と組合せて使用する。その際には、前記のようにして製剤化した本発明の制癌剤の効果増強剤と制癌剤とを同時に投与してもよいし、又は予め式（１）の化合物又はその医薬として許容される塩と制癌剤とを、例えば散剤、細粒剤、錠剤、カプセル剤、注射剤等に製剤化したものを投与してもよい。
【００２５】
本発明の制癌剤の効果増強剤として用いられる式（１）の化合物の用量は、年令、体重等の患者の状態、投与経路、病気の性質と程度等を考慮した上で、調整することが望ましいが、通常は、成人に対して有効成分量として、一日当り、１０〜２０００mgの範囲が一般的である。場合によっては、これ未満で足りるし、また逆にこれより以上の容量を必要とすることもある。多量に投与するときは、一日数回に分割して投与することが望ましい。
なお化合物１〜４４を各１００mg／kgずつマウスに腹腔内投与したが何ら毒性を示さない。
【００２６】
以下、化合物５、７、８、４４についてその製造例を参考例をもって示す。
参考例１シクロ（_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ）（化合物７）の合成
ａ）Ｂｏｃ−_D-ＭｅＡｌａ−ＯＨ（Ｂｏｃはｔ−ブトキシカルボニル基を示す）
Ｂｏｃ−_D-Ａｌａ−ＯＨ（３．０ｇ、１５．９mmol）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、４８ml）溶液に、氷冷下、６０％水素化ナトリウム（１．９ｇ、４７．６mmol）を加え、１０分間かくはん後、ヨウ化メチル（７．９ml、１２７mmol）を加え、室温で２２時間かくはんした。減圧濃縮後、氷冷下、１０％クエン酸水溶液を加え酸性とした後、酢酸エチルで抽出した。これを飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンより結晶化し、ヘキサンで洗浄し、標記化合物を得た。収量３．０７ｇ（収率９４．８％）。
【００２７】
ｂ）Ｂｏｃ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（Ｐａｃはフェナシル基を示す）
Ｂｏｃ−_D-ＭｅＡｌａ−ＯＨ（１．５０ｇ、７．３８mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．５３ｇ、５．６８mmol）の塩化メチレン（１２ml）溶液に、氷冷下ブロモ−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩（ＰｙＢｒｏＰ、３．４４ｇ、７．３８mmol）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、３．９６ml、２２．７mmol）を加え、氷冷下３時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２００ｇ、クロロホルム、クロロホルム−メタノール１００：１により溶出）で精製した。更に、溶出液を減圧濃縮後、ヘキサンより結晶化し、ヘキサンで洗浄し、標記化合物を得た。収量１．９０ｇ（収率７８．０％）。
【００２８】
ｃ）ＨＣｌ・Ｈ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．７ｇ、４．０６mmol）に４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（３０ml）を加え、室温に４０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルより結晶化し、エーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量１．３８ｇ（収率９５．８％）。
【００２９】
ｄ）Ｂｏｃ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-Ｐｈｅ−ＯＨ（１．２６ｇ、４．７６mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．３０ｇ、３．６６mmol）、の塩化メチレン（１０ml）溶液に、氷冷下、ＰｙＢｒｏＰ（２．２２ｇ、４．７６mmol）、ＤＩＥＡ（９２１μｌ、５．２９mmol）を加え、氷冷下２時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２００ｇ、トルエン−酢酸エチル３：１，１：１により溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量１．７６ｇ（収率８４．９％）。
【００３０】
ｅ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．７０ｇ、３．０１mmol）に４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（３０ml）を加え、室温に３０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルより結晶化し、エーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量１．６３ｇ（収率１００％）。
【００３１】
ｆ）Ｂｏｃ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（８９８mg、３．８８mmol）の塩化メチレン（９ml）溶液に、氷冷下ＨＣｌ・Ｈ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．４５ｇ、２．９９mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（１．８１ｇ、３．８８mmol）を加え、更にＤＩＥＡ（２．０８ml、１２．０mmol）を加え、氷冷下１６時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２００ｇ、トルエン−酢酸エチル２：１、１：１により溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量１．６７ｇ（収率８２．３％）。
【００３２】
ｇ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．００ｇ、１．４７mmol）に４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（１８．４ml）を加え、室温に５０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルより結晶化し、エーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量８３８mg（収率９２．７％）。
【００３３】
ｈ）Ｂｏｃ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ（Ｂｚｌはベンジル基を示す）
Ｈ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＨ（３８．６mg、０．２６４mmol）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、０．５７ml）懸濁液に、氷冷下ビストリメチルシリルトリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ、０．５６ml、２．１１mmol）を加え、室温で１時間かくはんした。これに氷冷下、ジ−ｔ−ブチル−ジカーボナート（７２．８μｌ、０．３１７mmol）を加え、室温で１．５時間かくはんした。減圧濃縮後、１０％クエン酸水溶液を加え、飽和食塩水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた油状物を酢酸エチル（０．５ml）に溶解し、氷冷下トリエチルアミン（５５．０μｌ、０．３９６mmol）、臭化ベンジル（６２．８μｌ、０．５２８mmol）を加え、氷冷下、５分間かくはん後、室温で４８時間かくはんした。減圧濃縮後、調製用シリカゲル薄層クロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール１９：１で展開）により精製し、標記化合物を得た。収量６０．７mg（収率６８．１％）。
【００３４】
ｉ）ＨＣｌ−Ｈ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ
Ｂｏｃ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ（４７２mg、１．４０mmol）に５．５Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（２９．５ml）を加え、室温に１．５時間放置した。減圧濃縮後、エーテルより結晶化し、エーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量３６７mg（収率９５．７％）。
【００３５】
ｊ）Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ
Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ−ＯＨ・Ｈ₂Ｏ（１．３４ｇ、５．３９mmol）の塩化メチレン（１０ml）溶液に、氷冷下、ＨＣｌ・Ｈ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ（９８１．１mg、３．５９mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（２．５２ｇ、５．３９mmol）を加え、更にＤＩＥＡ（２．５０ml、１４．４mmol）を加え、氷冷下１時間かくはん、更に室温で８時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル４０ｇ、トルエン−酢酸エチル３：１により溶出）で精製した。更に、溶出液を減圧濃縮後、ヘキサンより結晶化し、ヘキサンで洗浄し、標記化合物を得た。収量１．０５ｇ（収率６５．２％）。
【００３６】
ｋ）Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ（４３．５mg、９６．５μmol ）のメタノール（４０ml）溶液に、パラジウム−黒（４０mg）を加え、室温で水素ガスを５０分間吹込んだ。触媒をろ去後、減圧濃縮し、標記化合物を得た。収量３０．６mg（収率８７．９％）。
【００３７】
ｌ）Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＨ（７４４mg、２．１５mmol）、２（Ｒ）−ヒドロキシ−３（Ｒ）−メチルペンタン酸フェナシルエステル（_D-Ｈｍｐ−ＯＰａｃ）（５８９mg、２．３６mmol）、４−ピロリジノピリジン（９５．６mg、０．６５mmol）をＴＨＦ（４．３ml）に溶解し、氷冷下、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、４８７mg、２．３６mmol）を加え、氷冷下１時間かくはん後、徐々に室温に戻して１８時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、不溶物をろ去した後、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル８０ｇ、トルエン−酢酸エチル５：１により溶出）で精製し、Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−ＯＰａｃを得た（収量１．００ｇ、収率７８．７％）。更に、中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２００ｇ、トルエン−酢酸エチル１５：１、１０：１により溶出）で、ジアステレオマーを分離し、標記化合物を得た。収量３５７mg（収率５６．２％：Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ_-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＨ中の_L-L体を基準にした）。
【００３８】
ｍ）Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−ＯＰａｃ（２２０mg、０．３７mmol）を９０％酢酸水溶液（１８．５ml）に溶解し、氷冷下、超音波かくはんしながら亜鉛末（３．６０ｇ、５５．５mmol）を加え、氷冷下７．５時間超音波かくはんした。不溶物をろ去後、減圧濃縮した。これに１０％クエン酸水溶液を加えた後、酢酸エチルを抽出した。抽出物を飽和食塩水洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１０ｇ、クロロホルム−メタノール−酢酸５０：１：０．５により溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量１３３mg（収率７３．７％）。
【００３９】
ｎ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（４．９４ｇ、２１．４mmol）のアセトン（５０ml）溶液に、氷冷下、トリエチルアミン（３．３０ml、２３．８mmol）、臭化フェナシル（４．７７ｇ、２４．０mmol）を加え、氷冷下１時間かくはん後、更に室温で２時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。これに５．５Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（７７．８ml、０．４２８mmol）を加え、室温に３０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルより結晶化し、集めた結晶をエーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量６．０８ｇ（収率９９．３％）。
【００４０】
ｏ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＰａｃ
ＨＣｌ・Ｈ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＰａｃ（１．１２ｇ、４．１８mmol）を塩化メチレン（１０ml）に溶解し、氷冷下Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−ＯＨ（１．０６ｇ、４．５９mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（２．５７ｇ、５．４９mmol）、ＤＩＥＡ（２．６５ml、１５．２mmol）を加え、氷冷下３０分間かくはんし、更に室温で１７時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル８０ｇ、クロロホルムにより溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量７６４mg（収率３６．０％）。
【００４１】
ｐ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＰａｃ（６５７mg、１．４２mmol）を９０％酢酸水溶液（７０ml）に溶解し、氷冷下、超音波かくはんしながら亜鉛末（４．６４ｇ、７１．０mmol）を加え、氷冷下７．５時間超音波かくはんした。不溶物をろ去、減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をヘキサンより結晶化し、ヘキサンで洗浄し、標記化合物を得た。収量３２５mg（収率６６．５％）。
【００４２】
ｑ）Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−ＯＨ（６０．０mg、０．１２３mmol）の塩化メチレン（４００μｌ）溶液に、氷冷下、ＨＣｌ・Ｈ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１１４mg、０．１８４mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（７４．６mg、０．１６mmol）を加え、更にＤＩＥＡ（８６．０μｌ、０．４９１mmol）を加え、氷冷下２時間かくはん、更に室温で１３時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２０ｇ、トルエン−酢酸エチル２：１、３：２により溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量９７．４mg（収率７５．５％）。
【００４３】
ｒ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（８５mg、８１．０μmol)に氷冷下、トリフルオロ酢酸（５００μｌ、６．４８mmol）を加え、氷冷下３０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルを加え、氷冷下４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（４１μｌ、１６２μmol)を加え、室温に３０分間放置した。析出した結晶をエーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量５９．２mg（収率７４．２％）。
【００４４】
ｓ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（２９．０mg、８３．７μmol ）、ＨＣｌ・Ｈ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（５５．０mg、５５．８μmol ）をＤＭＦ（２００μｌ）に溶解し、氷冷下、ＨＯＯＢｔ（１１．０mg、６７．０μmol ）を加え、更にＮ−エチル−Ｎ′−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド（ＥＤＣ、１２．９μｌ、７２．５μmol ）を加え、氷冷下２時間かくはんした。室温で１７時間かくはん後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を調製用シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ベンゼン−アセトン３：１展開、酢酸エチル抽出）で精製し、標記化合物を得た。収量６０．６mg（収率８５．１％）。
【００４５】
ｔ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（５０．０mg、３９．２μmol ）を９０％酢酸水溶液（２．０ml）に溶解し、氷冷下、亜鉛末（５１３mg、７．８４mmol）を加え、氷冷下１時間超音波かくはんした。不溶物をろ去後、減圧濃縮し、１０％クエン酸水溶液を加え、酢酸エチルを抽出した。抽出物を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、標記化合物を得た。収量４８．３mg。
【００４６】
ｕ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ（４８．３mg、３９．２μmol)に氷冷下、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、６０４μｌ、７．８４mmol）を加え、氷冷下３０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルを加え、氷冷下４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（２９．５μｌ、１１８μmol)を加え、氷冷下３０分間放置した。析出した結晶をエーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量３３．３mg（収率７８．７％）。
【００４７】
ｖ）シクロ（_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−Ｐｒｏ）（化合物７）
ＨＣｌ・Ｈ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ（２３．０mg、２１．３μmol)、ＤＩＥＡ（７．４μｌ、４２．６μmol ）を塩化メチレン（１１ml）に溶解し、これをＰｙＢｒｏＰ（４９．４mg、１０６μmol ）、ＤＩＥＡ（１８．６μｌ、１０６μmol ）を塩化メチレン（１１ml）溶液に室温で４時間かけて滴下し、更に室温で２０時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を調製用シリカゲル薄層クロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール１９：１展開、抽出）で精製し、標記化合物を得た。収量１２．１mg（収率５５．５％）。
【００４８】
標記化合物の理化学的性質を示す。
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、２７０ＭＨｚ）：δ８．６２、７．９５、７．６７（計３Ｈ、ＮＨ）、７．３５〜７．１１（計５Ｈ、芳香族Ｈ）、５．７９、５．４４〜５．２２、４．９７、４．８８、４．７３〜４．５６、４．３０、４．０４、３．４４（計１０Ｈ）、３．３３、３．３２、３．２０、２．８５（計１２Ｈ、ＮＣＨ₃）、１．０９〜０．７１（ＣＨ₃）ほか。
【００４９】
参考例２シクロ（_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ）（化合物８）の合成
ａ）Ｈ−_L-Ｐｈｅ−_L-ＭｅＰｈｅ−_L-Ｐｒｏ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列表の配列番号４）
オーレオバシジンＡ（６．０ｇ、５．４５mmol）にドライアイス−メタノール浴冷却下、無水フッ化水素（２００ml）を導入後、室温で１．５時間かくはんした。減圧下、フッ化水素を留去した後、残渣をジオキサンで凍結乾燥した。これを高速液体クロマトグラフィー（カラム：Soken Pack C-18 ６０×５００mm、５０−１００％アセトニトリル／０．０５％ aq.ＴＦＡで溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量１．８１ｇ（収率２９．７％）。
【００５０】
ｂ）Ｚ−_L-Ｐｈｅ−_L-ＭｅＰｈｅ−_L-Ｐｒｏ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列表の配列番号５、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を示す）
Ｈ−_L-Ｐｈｅ−_L-ＭｅＰｈｅ−_L-Ｐｒｏ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列表の配列番号４、２００mg、０．１７９mmol）のＤＭＦ（３．６ml）懸濁液に氷冷下、トリエチルアミン（５０．２μｌ、０．３５８mmol）、ベンジルオキシカルボニルスクシンイミド（５３．５mg、０．２１５mmol）を加え、氷冷下、１．５時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、不溶物をろ去した後、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール−酢酸
１００：２：２により溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量１８３mg（収率８１．５％）。
【００５１】
ｃ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列表の配列番号６）
Ｚ−_L-Ｐｈｅ−_L-ＭｅＰｈｅ−_L-Ｐｒｏ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列番号５、１００mg、７９．８mmol）のエタノール（１０ml）溶液を５０mMカリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）（８９ml）に加えた。３０℃，１０分間静置した後、プロリルエンドペプチダーゼ（６００単位、生化学工業社製）を溶解した５０mMカリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）（１．２ml）を加え、かくはんした後、不溶物を遠心（７０００r.p.m 、１０分）して除去し、上清を減圧濃縮した。残渣を高速液体クロマトグラフィー〔カラム：ＹＭＣ C-18 ＯＤＳ、（株）山村化学研究所製、３０〜９０％アセトニトリル／０．０５％ aq. ＴＦＡで溶出〕で精製し、標記化合物を得た。収量５９．１mg（収率１００％）。
【００５２】
ｄ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列表の配列番号７）
ＨＣｌ・Ｈ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列番号６、５７．７mg、８１．０μmol ）のジオキサン／水（２：１）溶液にトリエチルアミン（１４．６μｌ、１０５μmol ）、ジ−ｔ−ブチル−ジカーボナート（２４．０μｌ、１０５μmol ）を加え、室温で３．５時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を調製用シリカゲル薄層クロマトグラフィー〔クロロホルム−メタノール−酢酸１００：１：２展開、クロロホルム−メタノール１０：１抽出）で精製し、標記化合物を得た。収量５１．２mg（収率７７．８％）。
【００５３】
ｅ）Ｂｏｃ−_D-ＭｅＶａｌ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_D-Ｖａｌ−ＯＨ（２．０ｇ、９．２１mmol）、６０％水素化ナトリウム（１．１ｇ、２７．６mmol）、ヨウ化メチル（６．５８ml、１０５．７mmol）を用い参考例１−ａ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１．５４ｇ（収率７２．５％）。
【００５４】
ｆ）Ｂｏｃ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_D-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（３００mg、１．３０mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（２９１mg、１．０８mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（６０６mg、１．３０mmol）、ＤＩＥＡ（７５３μｌ、４．３２mmol）を用い参考例１−ｂ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量３７２mg（収率７７．２％）。
【００５５】
ｇ）ＨＣｌ・Ｈ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（３５０mg、０．７８４mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（５．８８ml）を用い参考例１−ｃ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量２９２mg（収率９７．３％）。
【００５６】
ｈ）Ｂｏｃ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-Ｐｈｅ−ＯＨ（１８０mg、０．６７９mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（２００mg、０．５２２mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（３１７mg、０．６７９mmol）、ＤＩＥＡ（３６４μｌ、２．０９mmol）を用い参考例１−ｄ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量２８１mg（収率９０．７％）。
【００５７】
ｉ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１９０mg、０．３２０mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（４．２ml）を用い参考例１−ｅ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１６９mg（収率９９．４％）。
【００５８】
ｊ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列番号７、３５．０mg、４３．１μmol ）、ＨＣｌ・Ｈ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（３４．２mg、６４．６μmol ）、３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯｂｔ、８．７mg、６４．６μmol ）、ＥＤＣ（１１．４μｌ、６４．６μmol ）を用い参考例１−ｓ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量３４．６mg（収率６２．３％）。
【００５９】
ｋ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（３１．０mg、２４．１μmol ）、９０％酢酸水溶液（１．２ml）、亜鉛末（３１３mg、４．８２mmol）を用い参考例１−ｔ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量３０．０mg。
【００６０】
ｌ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ（３０．０mg、２５．７μmol ）、ＴＦＡ（３９６μｌ、５．１４mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（１２．９μｌ、５１．４μmol ）を用い参考例１−ｕ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１９．６mg（収率７３．６％）。
【００６１】
ｍ）シクロ（_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ）（化合物８）
ＨＣｌ・Ｈ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｈｅ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ（１５．０mg、１３．６μmol ）、ＤＩＥＡ（４．７μｌ、２７．２μmol ）の塩化メチレン（６．８ml) 溶液、ＰｙＢｒｏＰ（３１．７mg、６７．９μmol ）、ＤＩＥＡ（１１．８μｌ、６７．９μmol ）の塩化メチレン（６．８ml）溶液を用い参考例１−ｖ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量５．０mg（収率３５．０％）。
【００６２】
標記化合物の理化学的性質を示す。
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、２７０ＭＨｚ）：δ８．７８、８．１０、７．４８（計３Ｈ、ＮＨ）、７．３５〜７．０９（計５Ｈ、芳香族Ｈ）、５．７８、５．３９、５．２０、４．９８〜４．９４、４．８０、４．５３、４．３７〜４．３１、４．１３、３．４５（計１０Ｈ）、３．３３、３．２２、２．７８（計１２Ｈ、ＮＣＨ₃）、１．１１〜０．７０（ＣＨ₃）ほか。
【００６３】
参考例３シクロ（_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｃｈａ−_D-ＭｅＡｌａ−Ｐｒｏ）（化合物５）の合成
ａ）Ｂｏｃ−_L-Ｃｈａ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-Ｃｈａ−ＯＨ（１３７mg、０．５０７mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１５０mg、０．４２３mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（２３６mg、０．５０７mmol）、ＤＩＥＡ（２５８μｌ、１．４８mmol）を用い参考例１−ｄ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１９８mg（収率８２．１％）。
【００６４】
ｂ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-Ｃｈａ−_L-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-Ｃｈａ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１８０mg、０．３１５mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（３．１５ml）を用い参考例１−ｅ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１４８mg（収率９３．１％）。
【００６５】
ｃ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｃｈａ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
参考例２−ａ）〜ｄ）記載の方法で調製したＢｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列番号７、３５．０mg、４３．１μmol ）、ＨＣｌ・Ｈ−_L-Ｃｈａ−_D-ＭｅＶａｌ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（３２．８mg、６４．６μmol ）、ＨＯＯｂｔ（８．７mg、６４．６μmol ）、ＥＤＣ（１１．４μｌ、６４．６μmol ）を用い参考例１−ｓ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量４８．６mg（収率８９．２％）。
【００６６】
ｄ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｃｈａ−_L-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｃｈａ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（４５．４mg、３５．８μmol ）、９０％酢酸水溶液（１．６ml) 、亜鉛末（４６６mg、７．１６mmol）を用い参考例１−ｔ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量４６．０mg。
【００６７】
ｅ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｃｈａ−_L-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｃｈａ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ（４２．５mg、３７．０μmol ）、ＴＦＡ（５７０μｌ、７．４０mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（１８．５μｌ、７４．０μmol ）を用い参考例１−ｕ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量３１．７mg（収率９０．３％）。
【００６８】
ｆ）シクロ（_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｃｈａ−_L-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ）（化合物５）
ＨＣｌ・Ｈ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｃｈａ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ（２５．０mg、２１．１μmol ）、ＤＩＥＡ（７．３μｌ、４２．２μmol ）の塩化メチレン（１０．６ml）溶液、ＰｙＢｒｏＰ（４９．２mg、１０５．５μmol ）、ＤＩＥＡ（１８．４μｌ、１０５．５μmol ）の塩化メチレン（１０．６ml）溶液を用い参考例１−ｖ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量６．８mg（収率２８．６％）。
【００６９】
標記化合物の理化学的性質を示す。
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、２７０ＭＨｚ）：δ８．６２、８．５５、７．９２、７．８７、７．７５（計３Ｈ、ＮＨ）、５．８２、５．４４〜５．２０、５．０２〜４．８６、４．６７、４．５６、４．２０、４．０３、３．３７（計１０Ｈ）、３．２９、３．２８、３．２７、３．２５、３．２４（計１２Ｈ、ＮＣＨ₃）、１．０３〜０．７６（ＣＨ₃）ほか。
【００７０】
参考例４シクロ（_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-ｐＦＰｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ）（化合物４４）の合成
ａ）Ｂｏｃ−_L-ｐＦＰｈｅ−_DＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-ｐＦＰｈｅ−ＯＨ（１００mg、０．３５３mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１０５mg、０．２９４mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（１６５mg、０．３５３mmol）、ＤＩＥＡ（１７９μｌ、１．０３mmol）を用い参考例１−ｄ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１５３mg（収率８９．２％）。
【００７１】
ｂ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-ｐＦＰｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−_L-ｐＦＰｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１４０mg、０．２４０mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（２．４ml）を用い参考例１−ｅ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１２０mg（収率９６．８％）。
【００７２】
ｃ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-ｐＦＰｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
参考例２−ａ）〜ｄ）記載の方法で調製したＢｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列番号７、３５．０mg、４３．１μmol ）、ＨＣｌ・Ｈ−_L-ｐＦＰｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（３３．６mg、６４．６μmol ）、ＨＯＯｂｔ（８．７mg、６４．６μmol ）、ＥＤＣ（１１．４μｌ、６４．６μmol ）を用い参考例１−ｓ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量４８．８mg（収率８８．７％）。
【００７３】
ｄ）Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-ｐＦＰｈｅ−_L-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-ｐＦＰｈｅ−_L-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（４５．３mg、３５．４μmol ）、９０％酢酸水溶液（１．７ml) 、亜鉛末（９２０mg、１４．１mmol）を用い参考例１−ｔ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量４７．２mg。
【００７４】
ｅ）ＨＣｌ・Ｈ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-ｐＦＰｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-ｐＦＰｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ（４４．０mg、３７．９μmol ）、ＴＦＡ（５８４μｌ、７．５８mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（１８．９μｌ、７５．８μmol ）を用い参考例１−ｕ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量３４．９mg（収率９６．１％）。
【００７５】
ｆ）シクロ（_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-ｐＦＰｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ）（化合物４４）
ＨＣｌ・Ｈ−_L-ａＩｌｅ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-Ｌｅｕ−_L-βＨＯＭｅＶａｌ−_D-Ｈｍｐ−_L-ＭｅＶａｌ−_L-ｐＦＰｈｅ−_D-ＭｅＡｌａ−_L-Ｐｒｏ−ＯＨ（２８．０mg、２５．５μmol ）、ＤＩＥＡ（８．９μｌ、５１．１μmol ）の塩化メチレン（１２．８ml）溶液、ＰｙＢｒｏＰ（５９．４mg、１２８μmol ）、ＤＩＥＡ（２２．２μｌ、１２８μmol ）の塩化メチレン（１２．８ml）溶液を用い参考例１−ｖ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量７．９４mg（収率２９．８％）。
【００７６】
標記化合物の理化学的性質を示す。
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、２７０ＭＨｚ）：δ８．６５、７．９８、７．６６（計３Ｈ、ＮＨ）、７．０９〜７．０５（計４Ｈ、芳香族Ｈ）、５．８４、５．３１、５．１９、４．９７、４．８８、４．７３〜４．５７、４．１７、４．０４、３．４４（計１０Ｈ）、３．３３、３．３２、３．１９、２．９４（計１２Ｈ、ＮＣＨ₃）、１．０７〜０．７３（ＣＨ₃）ほか。
【００７７】
参考例１〜４で得られた化合物の理化学的性質を表４及び表５に示す。
【００７８】
【表４】

【００７９】
【表５】

【００８０】
^*アミノ酸分析は、日本電子（株）製ＪＣＬ−３００を用いて、ニンヒドリン反応により検出した。
【００８１】
参考例１〜４で得られた化合物の真菌類に対する最小生育阻止濃度（ＭＩＣ、μｇ／ml）を後記表６に示す。測定はサブローデキストロース寒天培地（グルコース２％、ポリペプトン１％、寒天１．５％、以上の濃度はすべてＷ／Ｖ）を用いた寒天平板希釈法（３０℃、２日間培養）により行い、ＭＩＣを求めた。なお、対照として化合物１、オーレオバシジンＡ（ＡｂＡ）を用いた。
【００８２】
化合物５、７、８、４４は、３．１２〜１２．５μｇ／mlの濃度でアスペルギルスに対して活性を示した。特に、化合物５は、アスペルギルスに対し３．１２μｇ／mlの低濃度で活性を示し、更に、クリプトコッカスに対しても強い抗真菌活性を示し、オーレオバシジンＡより強い活性を示した。
【００８３】
【表６】

【００８４】
以上、参考例１〜４で得られた化合物は、カンジダばかりでなく、クリプトコッカス及び／又はアスペルギルスに対しても優れた活性を示し、抗真菌剤として有用性が高い。
【００８５】
【実施例】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。
【００８６】
実施例１薬剤耐性癌細胞内への制癌剤取り込み増強効果
本発明の効果を示すため、式（１）の化合物の代表例について、薬剤耐性癌細胞に対する制癌剤ビンクリスチンの取り込み増強作用を検討した。
ヒト卵巣癌細胞Ａ２７８０のアドリアマイシン耐性株２７８０ＡＤ〔Ａ．Ｍ．ローガン（Rogan)ら、サイエンス（Science)、第２２４巻、第９９４〜９９６頁（１９８４）〕を５％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培養液中に１×１０⁶ 個／mlを懸濁し、直径１６mm、２４穴のマルチウエル培養プレートに１穴当り１mlの癌細胞懸濁液を入れ、５％ＣＯ₂ 、３７℃で培養した。２４時間後に培養液を２０nM ³Ｈ−ビンクリスチン（６Ci/mmol)、５％牛胎児血清、１０mMヘペス緩衝液を含むＲＰＭＩ−１６４０培養液０．５mlと交換した。ジメチルスルホキシドに溶解後、生理リン酸緩衝液で希釈した被験化合物を５μｌ加え（反応液中の濃度は１．０又は１０．０μｇ／ml）、５％ＣＯ₂ 、３７℃で２時間培養を続けた後、氷冷した生理リン酸緩衝液で細胞を洗浄した。これに０．５mlの０．２ＮＮａＯＨを加え、バイアルに移し、５６℃で３０〜６０分間温浴し、細胞を溶解させた。水溶液シンチレーター（ＡＣＳII、アマーシャム社製）を４ml加え、液体シンチレーションカウンターで細胞内に取り込まれた ³Ｈ−ビンクリスチンの量を測定した。
効果は薬物無処理の対照群に取り込まれた ³Ｈ−ビンクリスチンの量を１００として、薬物処理群に取り込まれた ³Ｈ−ビンクリスチンの量を百分率（％）で表した。結果を表７に示す。
【００８７】
【表７】

【００８８】
実施例２
界面活性剤ＨＣＯ−５０の１ｇを６５℃に加熱して溶融させ、これに化合物１を１ｇ及びポリエチレングリコール４０００を１０ｇ加えて溶融させる。充分混合後、室温にて凝固させ顆粒剤となるように調製する。
【００８９】
【発明の効果】
以上説明したとおり、本発明の制癌剤の効果増強剤により細胞内の制癌剤の濃度を増加させることができる。また、耐性細胞の感受性を増強させることが判明した。したがって、本発明化合物は、制癌剤に対して低感受性の癌細胞や、制癌剤に対して耐性を獲得した癌細胞に対して有効であり、制癌剤の使用量を減少させる手段としても有用であり、その結果、制癌剤が有する毒性等の副作用を低減させることができる。
【００９０】
【配列表】
【００９１】

【００９２】

【００９３】

【００９４】

【００９５】

【００９６】

【００９７】

[0001]
[Industrial application fields]
The present inventionIs a novel anti-cancer agentIt relates to an effect enhancer.
[0002]
[Prior art]
The compounds used in the present invention and pharmaceutically acceptable salts thereof have excellent antifungal activity and are known to be useful for the treatment of fungal infections including candidiasis and cryptococcosis. (JP-A-2-138296, JP-A-3-22995, JP-A-3-44398, JP-A-3-220199, JP-A-5-279384, Japanese Patent Application No. 4-303177, EP 0581429). Aureobasidin A represented by SEQ ID NO: 2 in the sequence listing is represented by the following formula:(2)Among them, it has particularly excellent activity and low toxicity.
[0003]
[Chemical 2]

[0004]
[Where,_D-Hmp represents 2 (R) -hydroxy-3 (R) -methylpentanoic acid]
By the way, it is well known that when a chemotherapeutic agent such as an antibiotic is administered for a relatively long period of time, the infecting microorganism acquires resistance and the effect of the chemotherapeutic agent decreases. In addition, in cancer chemotherapy using an anticancer agent as a means of reducing, inhibiting or limiting the growth or metastasis of cancer, a cancer resistant to the anticancer agent administered with the passage of time appears, and the therapeutic effect of the cancer chemotherapy decreases. It is generally known. It is said that it is often caused by accumulation of anticancer drugs in cancer cells and a decrease in maintenance ability. The mechanism of this resistance is being elucidated at the molecular level, and therapeutic methods for this are being investigated. That is, recently, a gene responsible for multidrug resistance has been isolated, and it has been revealed that this gene is a membrane protein, P-glycoprotein gene expressed in multidrug resistant cells. P-glycoprotein is presumed to be a protein having a function of extracellular elimination of anticancer agents, and is considered to be a protein that plays a central role in the multidrug resistance mechanism of cancer. In addition to cancer cells, P-glycoprotein is also present in eukaryotes and bacteria including fungi, and is known to be involved in drug resistance in fungi [K. Nishi, et al., Molecular Microbiology, Vol. 6, pp. 761-769 (1992)].
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
  Today, when it is difficult to develop new chemotherapeutic agents, it is extremely important to try to enhance the effects of existing chemotherapeutic agents.
  The object of the present invention is excellentCancer controlAgentofContaining a compound found to have an effect enhancing action,Cancer controlAgentofIt is to provide an effect enhancer.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
  In general, the present invention is a cyclic depsipeptide represented by the following formula (1).DomataVincristine, vinblastine, adriamycin, daunomycin, characterized by containing a pharmaceutically acceptable salt thereofAndAnd an effect enhancer of an anticancer drug selected from actinomycin D.
[0007]
[Chemical Formula 3]

[0008]
[In the formula, X1 is Hmp or Hmb.(Hmp represents 2-hydroxy-3-methylpentanoic acid, Hmb represents 2-hydroxy-3-methylbutanoic acid)And X3 is MePhe or βHOMePhe(MePhe represents N-methylphenylalanine, βHOMePhe represents β-hydroxy-N-methylphenylalanine)And X5 isaIle, ValOr Leu and X8 isβHOMeVal (βHOMeVal represents β-hydroxy-N-methylvaline)OrMeValIs]
[0009]
The abbreviations for special α-amino acids, N-methyl-α-amino acids, and α-oxy acids used in the present specification are as shown in the following table.

[0010]
  As a result of earnest research, the present inventors are unexpectedly known as antifungal agents.Among the cyclic depsipeptides represented by the following formula (3) (SEQ ID NO: 1 in the sequence listing), in particularThe above formulaRepresented by (1)The compound is intracellularCancer controlIn addition to showing a strong effect on the accumulation and maintenance of the agent,Cancer controlThe present invention was completed by finding that it has an effect of remarkably enhancing the effect of the agent.
  In the following formula (3), X1 is Hmp, Hmb or Dhmp (Hmp is 2-hydroxy-3-methylpentanoic acid, Hmb is 2-hydroxy-3-methylbutanoic acid, Dhmp is 2,4-dihydroxy-3- Methylpentanoic acid)
X2 is Phe, oFPhe, mFPhe, pFPhe or Cha;
X3 is MePhe, oFMePhe, mFMePhe, pFMePhe, MeGly, MeAla, MeVal, MeTyr, βHOMePhe or βR ₁ OMePhe {however, R ₁ Is a lower acyl group having 1 to 4 carbon atoms, -COOH, -COO-R ₂ (R ₂ Is a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms), -NH ₂ Or -NH-R _Three (R _Three Is a lower acyl group having 1 to 4 carbon atoms)},
X4 is Pro, 4Hyp, SPro or Pip,
X5 is aIle, Leu, Val, Nle, Glu, GluOR _Four (R _Four Is a benzyl group, an alkyl group having 1 to 12 carbon atoms or an alkenyl group having 1 to 12 carbon atoms), HONva or R _Five ONva (R _Three Is a benzyl group or an acyl group having 1 to 12 carbon atoms),
X6 is Val, MeVal, MeaIle, MeLeu, Hmb, HOMeNva or R ₆ OMeNva (R ₆ Is a benzyl group or an acyl group having 1 to 12 carbon atoms),
X7 is Leu, Nva, aIle, HONva or GluOR ₇ (R ₇ Is a benzyl group, an alkyl group having 1 to 12 carbon atoms or an alkenyl group having 1 to 12 carbon atoms),
X8 is βHOMeVal, γHOMeVal, MeVal, Val, N, βMeAsp, βHOMePhe, MeDH _2,3 Val, MeDH _3,4 Val or MeThr.
  Further, representative compounds represented by the following formula (3) are shown in Tables 1 to 3 below.
[0011]
[Formula 4]

[0012]
[Table 1]

[0013]
[Table 2]

[0014]
[Table 3]

[0015]
In Tables 1 to 3, the symbol indicates that it is the same amino acid or oxyacid as aureobasidin A (Compound 1).
[0016]
Cyclic depsipeptides used in the present invention were obtained from the culture of Aureobasidium pullulans No. R106 [Fabric Kenjo No. 1938 (FERMBP-1938)], Japanese Patent Laid-Open Nos. 2-138296 and 3- It is collected by the method described in JP-A Nos. 2295, 3-220199, and 5-279384 or Japanese Patent Application No. 4-303177.
[0017]
For example, the above producing bacteria are cultured in a liquid medium containing a carbon source such as glucose and glycerin, a nitrogen source such as peptone, ammonium salt and amino acid, and other inorganic salts, and an organic solvent such as ethanol is used with the obtained culture solution Extraction and purification of the extract with an adsorptive resin, and further by reverse-phase HPLC using a mixed solvent of 60 to 70% acetonitrile / water or silica gel HPLC using a mixed solvent of hexane / acetonitrile / 2-propanol If purified, cyclic depsipeptides can be separated and produced. Compound 1 (Aureobasidin A) is disclosed in JP-A-2-138296, and compounds 2, 10, 11, 20, 21, 28, 39, 40, 41, and 42 are disclosed in JP-A-3-22995. In addition, compounds 4, 9, 15, 16, 19, and 34 are disclosed in JP-A-3-220199, compound 3 is disclosed in JP-A-5-279384, and compounds 29, 30, and 35 are disclosed in Japanese Patent Application No. 4-4. -303177 and European Patent Publication No. 0581429, respectively.
[0018]
Moreover, it is extract | collected as a derivative | guide_body by the chemical method of Unexamined-Japanese-Patent No. 3-44398 and 3-220199 each using what was obtained from the culture as a raw material.
Compounds 12, 13, and 14 are described in JP-A-3-44398, and compound 6 is described in JP-A-3-220199.
[0019]
Further, it can be obtained by total synthesis chemically by the methods described in Japanese Patent Application No. 4-303177, European Patent Publication No. 0581429, and Japanese Patent Application No. 5-346873. Compounds 1, 17, 18, 22, 29, 30, 31, 32, 33, 35, 38, 43 are described in Japanese Patent Application No. 4-303177 and European Patent Publication No. 0581429, compounds 23, 24. , 25, 26, 27, 36, and 37 are described in European Patent Publication No. 0581429, and Compounds 5, 7, 8, and 44 are described in Japanese Patent Application No. 5-346873. In addition, about the manufacturing method of compound 5, 7, 8, 44, it mentions later as a reference example.
[0020]
  formulaRepresented by (1)The pharmaceutically acceptable salt of the compound is a non-toxic, pharmaceutically acceptable conventional salt, for example, an alkali metal salt such as sodium salt or potassium salt, for example, an alkaline earth metal salt such as calcium salt or magnesium salt And salts with inorganic or organic bases, such as ammonium salts, for example amine salts such as triethylamine salt, N-benzyl-N-methylamine salt.
[0021]
In the present invention, chemotherapy is, for example, prevention or treatment of infectious diseases by administering antibiotics to bacteria, viruses, fungi or protozoa, and administration of anticancer agents to cancer cells. It means that cancer is prevented or treated, and chemotherapeutic agents mean antibiotics, anticancer agents and the like used for these purposes.
[0022]
  As the anticancer drug whose effect can be enhanced by the anticancer drug effect enhancer of the present invention, the compound of formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof can increase the concentration of intracellular anticancer drug as described later. Therefore, any anticancer agent that is transported into the cell through the cell membrane and exerts its effect may be used. Examples of such anticancer agents include vincristine, vinblastine, adriamycin, daunomycin.AndAnd anti-cancer agents derived from natural anti-cancer substances including antibiotics, anti-cancer agents and plant components, selected from actinomycin D.
[0023]
The chemotherapeutic effect-enhancing action of the chemotherapeutic effect-enhancing agent of the present invention can be achieved by, for example, using an adriamycin-resistant strain 2780AD of human ovarian cancer cells or an adriamycin-resistant strain K562 / ADM of human myeloid leukemia. This is explained by the anticancer drug uptake enhancing effect and the action enhancing effect of the anticancer drug.
[0024]
  Of the present inventionCancer controlAgentofThe effect enhancer is the formula(1)A compound ofThatA pharmaceutically acceptable salt may be administered in the form of, for example, a solid, semi-solid or liquid pharmaceutical preparation, mixed with an organic or inorganic carrier or excipient suitable for external, internal or parenteral administration. it can. The pharmaceutical preparations can be used in tablets, pellets, capsules, suppositories, solutions, suspensions and other suitable forms, eg mixed with a conventional non-toxic pharmaceutically acceptable carrier. Carriers that can be used are water, glucose, lactose, gum arabic, gelatin, mannitol, starch paste, magnesium stearate, talc, corn starch, keratin, colloidal silica, and other solid, semi-solid or liquid formulations There are suitable carriers for this purpose, and excipients, stabilizers, thickeners, coloring agents, and fragrances may be used. formula(1)The compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is contained in a pharmaceutical preparation in an amount sufficient to exert a desired effect depending on the course or condition of the disease.
  When this pharmaceutical preparation is used in humans, it is desirable to use it parenterally or for internal use.
  Of the present inventionCancer controlAgentofWith effect enhancerHumanOr when treating animals,Cancer controlUsed in combination with agents. In that case, the formulation of the present invention formulated as described above.Cancer controlAgentofWith effect enhancerCancer controlAgents may be administered simultaneously or pre-formulated(1)Or a pharmaceutically acceptable salt thereofCancer controlYou may administer what was formulated into a powder, a fine granule, a tablet, a capsule, an injection, etc., for example.
[0025]
  Of the present inventionCancer controlAgentofFormula used as an effect enhancer(1)It is desirable to adjust the dose of the compound in consideration of the patient's condition such as age and body weight, administration route, nature and degree of disease, etc. A range of 10 to 2000 mg per day is common. In some cases, less than this may be sufficient, and conversely, more capacity may be required. When administering a large amount, it is desirable to divide the dose into several times a day.
  In addition, although compound 1-44 was intraperitoneally administered to a mouse | mouth 100 mg / kg each, it does not show any toxicity.
[0026]
The production examples of Compounds 5, 7, 8, and 44 are shown below with reference examples.
Reference Example 1 Cyclo (_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro) (Compound 7) synthesis
a) Boc-_D-MeAla-OH (Boc represents t-butoxycarbonyl group)
Boc-_D-To a solution of Ala-OH (3.0 g, 15.9 mmol) in tetrahydrofuran (THF, 48 ml) was added 60% sodium hydride (1.9 g, 47.6 mmol) under ice-cooling, followed by stirring for 10 minutes and then iodide. Methyl (7.9 ml, 127 mmol) was added and stirred at room temperature for 22 hours. After concentration under reduced pressure, the mixture was acidified with 10% aqueous citric acid solution under ice cooling, and extracted with ethyl acetate. This was washed with saturated brine, dried over magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The residue was crystallized from hexane and washed with hexane to give the title compound. Yield 3.07 g (yield 94.8%).
[0027]
b) Boc-_D-MeAla-_L-Pro-OPac (Pac represents a phenacyl group)
Boc-_D-MeAla-OH (1.50 g, 7.38 mmol), HCl.H-_L-To a solution of Pro-OPac (1.53 g, 5.68 mmol) in methylene chloride (12 ml) was added bromo-tripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphide salt (PyBroP, 3.44 g, 7.38 mmol), diisopropylethylamine ( DIEA, 3.96 ml, 22.7 mmol) was added and stirred for 3 hours under ice cooling. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with 10% aqueous citric acid solution, saturated brine, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentrating under reduced pressure, the residue was purified by medium pressure silica gel column chromatography (silica gel 200 g, eluted with chloroform, chloroform-methanol 100: 1). Further, the eluate was concentrated under reduced pressure, crystallized from hexane, and washed with hexane to obtain the title compound. Yield 1.90 g (yield 78.0%).
[0028]
c) HCl / H-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_D-MeAla-_L-To Pro-OPac (1.7 g, 4.06 mmol) was added 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (30 ml) and left at room temperature for 40 minutes. After concentration under reduced pressure, crystallization from ether and washing with ether gave the title compound. Yield 1.38 g (95.8% yield).
[0029]
d) Boc-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-Phe-OH (1.26 g, 4.76 mmol), HCl.H-_D-MeAla-_L-To a solution of Pro-OPac (1.30 g, 3.66 mmol) in methylene chloride (10 ml) was added PyBroP (2.22 g, 4.76 mmol) and DIEA (921 μl, 5.29 mmol) under ice cooling. Stirred for 2 hours. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with 10% aqueous citric acid solution, saturated brine, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentration under reduced pressure, the residue was purified by medium pressure silica gel column chromatography (silica gel 200 g, eluted with toluene-ethyl acetate 3: 1, 1: 1) to obtain the title compound. Yield 1.76 g (yield 84.9%).
[0030]
e) HCl / H-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-Phe-_D-MeAla-_L-To Pro-OPac (1.70 g, 3.01 mmol) was added 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (30 ml) and left at room temperature for 30 minutes. After concentration under reduced pressure, crystallization from ether and washing with ether gave the title compound. Yield 1.63 g (yield 100%).
[0031]
f) Boc-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-To a solution of MeVal-OH (898 mg, 3.88 mmol) in methylene chloride (9 ml) was added HCl · H— under ice-cooling._L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac (1.45 g, 2.99 mmol) and PyBroP (1.81 g, 3.88 mmol) were added, and DIEA (2.08 ml, 12.0 mmol) was further added, followed by stirring for 16 hours under ice cooling. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with 10% aqueous citric acid solution, saturated brine, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentrating under reduced pressure, the residue was purified by medium pressure silica gel column chromatography (silica gel 200 g, eluted with toluene-ethyl acetate 2: 1, 1: 1) to give the title compound. Yield 1.67 g (82.3% yield).
[0032]
g) HCl · H-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-To Pro-OPac (1.00 g, 1.47 mmol) was added 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (18.4 ml) and left at room temperature for 50 minutes. After concentration under reduced pressure, crystallization from ether and washing with ether gave the title compound. Yield 838 mg (yield 92.7%).
[0033]
h) Boc_-DL-βHOMeVal-OBzl (Bzl represents a benzyl group)
H_-DL-To a suspension of βHOMeVal-OH (38.6 mg, 0.264 mmol) in dimethylformamide (DMF, 0.57 ml) was added bistrimethylsilyltrifluoroacetamide (BSTFA, 0.56 ml, 2.11 mmol) under ice-cooling, at room temperature. And stirred for 1 hour. To this was added di-t-butyl-dicarbonate (72.8 μl, 0.317 mmol) under ice cooling, and the mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours. After concentration under reduced pressure, 10% aqueous citric acid solution was added, and the mixture was washed with saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentrating under reduced pressure, the resulting oil was dissolved in ethyl acetate (0.5 ml), triethylamine (55.0 μl, 0.396 mmol), benzyl bromide (62.8 μl, 0) under ice cooling. .528 mmol) was added, and the mixture was stirred under ice-cooling for 5 minutes and then at room temperature for 48 hours. After concentration under reduced pressure, the product was purified by preparative silica gel thin layer chromatography (developed with chloroform-methanol 19: 1) to obtain the title compound. Yield 60.7 mg (yield 68.1%).
[0034]
i) HCl-H_-DL-βHOMeVal-OBzl
Boc_-DL-A 5.5 N hydrogen chloride / dioxane solution (29.5 ml) was added to βHOMeVal-OBzl (472 mg, 1.40 mmol) and left at room temperature for 1.5 hours. After concentration under reduced pressure, crystallization from ether and washing with ether gave the title compound. Yield 367 mg (yield 95.7%).
[0035]
j) Boc-_L-Leu_-DL-βHOMeVal-OBzl
Boc-_L-Leu-OH · H₂To a solution of O (1.34 g, 5.39 mmol) in methylene chloride (10 ml) was added HCl · H under ice cooling._-DL-βHOMeVal-OBzl (981.1 mg, 3.59 mmol), PyBroP (2.52 g, 5.39 mmol) were added, and DIEA (2.50 ml, 14.4 mmol) was further added, followed by stirring for 1 hour under ice-cooling and further at room temperature. Stir for 8 hours. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with 10% aqueous citric acid solution, saturated brine, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentrating under reduced pressure, the residue was purified by medium pressure silica gel column chromatography (silica gel 40 g, eluted with toluene-ethyl acetate 3: 1). Further, the eluate was concentrated under reduced pressure, crystallized from hexane, and washed with hexane to obtain the title compound. Yield 1.05 g (65.2% yield).
[0036]
k) Boc-_L-Leu_-DL-βHOMeVal-OH
Boc-_L-Leu_-DL-Palladium-black (40 mg) was added to a solution of βHOMeVal-OBzl (43.5 mg, 96.5 μmol) in methanol (40 ml), and hydrogen gas was blown in at room temperature for 50 minutes. The catalyst was removed by filtration and concentrated under reduced pressure to obtain the title compound. Yield 30.6 mg (yield 87.9%).
[0037]
l) Boc-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-OPac
Boc-_L-Leu_-DL-βHOMeVal-OH (744 mg, 2.15 mmol), 2 (R) -hydroxy-3 (R) -methylpentanoic acid phenacyl ester (_D-Hmp-OPac) (589 mg, 2.36 mmol), 4-pyrrolidinopyridine (95.6 mg, 0.65 mmol) was dissolved in THF (4.3 ml), and N, N′-dicyclohexylcarbodiimide (DCC) was cooled with ice. 487 mg, 2.36 mmol) was added, and the mixture was stirred under ice-cooling for 1 hour, then gradually returned to room temperature and stirred for 18 hours. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, the insoluble material was filtered off, and washed successively with 10% aqueous citric acid solution, saturated brine, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentrating under reduced pressure, the residue was purified by medium pressure silica gel column chromatography (silica gel 80 g, eluted with toluene-ethyl acetate 5: 1), and Boc-_L-Leu_-DL-βHOMeVal-_D-Hmp-OPac was obtained (yield 1.00 g, yield 78.7%). Furthermore, diastereomers were separated by medium pressure silica gel column chromatography (silica gel 200 g, eluted with toluene-ethyl acetate 15: 1, 10: 1) to obtain the title compound. Yield 357 mg (Yield 56.2%: Boc-_L-Leu_-DL-in βHOMeVal-OH_LLBased on body).
[0038]
m) Boc-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-OH
Boc-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-OPac (220 mg, 0.37 mmol) was dissolved in a 90% aqueous acetic acid solution (18.5 ml), and zinc dust (3.60 g, 55.5 mmol) was added under ice-cooling with ultrasonic stirring. Ultrasonic agitation for 7.5 hours. Insoluble material was removed by filtration, followed by concentration under reduced pressure. To this was added 10% aqueous citric acid solution, and ethyl acetate was extracted. The extract was washed with saturated brine, dried over magnesium sulfate, concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by medium pressure silica gel column chromatography (silica gel 10 g, eluted with chloroform-methanol-acetic acid 50: 1: 0.5). The title compound was obtained. Yield 133 mg (yield 73.7%).
[0039]
n) HCl / H-_L-MeVal-OPac
Boc-_L-To a solution of MeVal-OH (4.94 g, 21.4 mmol) in acetone (50 ml) was added triethylamine (3.30 ml, 23.8 mmol) and phenacyl bromide (4.77 g, 24.0 mmol) under ice cooling. After stirring for 1 hour under ice cooling, the mixture was further stirred for 2 hours at room temperature. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with water, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and saturated brine. The extract was dried over magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. To this was added 5.5N hydrogen chloride / dioxane solution (77.8 ml, 0.428 mmol) and left at room temperature for 30 minutes. After concentration under reduced pressure, crystallization from ether was performed, and the collected crystals were washed with ether to obtain the title compound. Yield 6.08 g (99.3% yield).
[0040]
o) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-OPac
HCl / H-_L-MeVal-OPac (1.12 g, 4.18 mmol) was dissolved in methylene chloride (10 ml), and Boc-_L-aIle-OH (1.06 g, 4.59 mmol), PyBroP (2.57 g, 5.49 mmol), DIEA (2.65 ml, 15.2 mmol) were added, and the mixture was stirred for 30 minutes under ice cooling, and further at room temperature for 17 hours. Stirred. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, saturated brine, 10% aqueous citric acid solution and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentrating under reduced pressure, the residue was purified by medium pressure silica gel column chromatography (silica gel 80 g, eluted with chloroform) to obtain the title compound. Yield 764 mg (yield 36.0%).
[0041]
p) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-OH
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-OPac (657 mg, 1.42 mmol) was dissolved in 90% aqueous acetic acid solution (70 ml), and zinc dust (4.64 g, 71.0 mmol) was added with ultrasonic stirring under ice-cooling. Ultrasonic agitation for 5 hours. Insoluble material was removed by filtration, concentrated under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with 10% aqueous citric acid solution and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentration under reduced pressure, the residue was crystallized from hexane and washed with hexane to obtain the title compound. Yield 325 mg (yield 66.5%).
[0042]
q) Boc-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-To a solution of Hmp-OH (60.0 mg, 0.123 mmol) in methylene chloride (400 μl) under ice-cooling, HCl.H—_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac (114 mg, 0.184 mmol) and PyBroP (74.6 mg, 0.16 mmol) were added, DIEA (86.0 μl, 0.491 mmol) was further added, stirred for 2 hours under ice-cooling, and further for 13 hours at room temperature. Stirred. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with 10% aqueous citric acid solution, saturated brine, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentrating under reduced pressure, the residue was purified by medium pressure silica gel column chromatography (silica gel 20 g, eluted with toluene-ethyl acetate 2: 1, 3: 2) to give the title compound. Yield 97.4 mg (yield 75.5%).
[0043]
r) HCl.H-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-To Pro-OPac (85 mg, 81.0 μmol) was added trifluoroacetic acid (500 μl, 6.48 mmol) under ice cooling, and the mixture was allowed to stand for 30 minutes under ice cooling. After concentration under reduced pressure, ether was added, 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (41 μl, 162 μmol) was added under ice cooling, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 30 minutes. The precipitated crystals were washed with ether to obtain the title compound. Yield 59.2 mg (yield 74.2%).
[0044]
s) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-OH (29.0 mg, 83.7 μmol), HCl.H—_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac (55.0 mg, 55.8 μmol) was dissolved in DMF (200 μl), HOOBt (11.0 mg, 67.0 μmol) was added under ice cooling, and N-ethyl-N′-dimethylaminopropylcarbodiimide was added. (EDC, 12.9 μl, 72.5 μmol) was added and stirred for 2 hours under ice cooling. After stirring at room temperature for 17 hours, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with 10% aqueous citric acid solution, saturated brine, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentration under reduced pressure, the residue was purified by preparative silica gel thin layer chromatography (benzene-acetone 3: 1 development, ethyl acetate extraction) to give the title compound. Yield 60.6 mg (yield 85.1%).
[0045]
t) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OH
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac (50.0 mg, 39.2 μmol) was dissolved in 90% aqueous acetic acid solution (2.0 ml), and zinc dust (513 mg, 7.84 mmol) was added under ice cooling, followed by ultrasonic stirring for 1 hour under ice cooling. did. The insoluble material was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. A 10% aqueous citric acid solution was added to extract ethyl acetate. The extract was washed with saturated brine, dried over magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure to give the title compound. Yield 48.3 mg.
[0046]
u) HCl · H-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OH
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-To Pro-OH (48.3 mg, 39.2 μmol) was added trifluoroacetic acid (TFA, 604 μl, 7.84 mmol) under ice cooling, and the mixture was allowed to stand for 30 minutes under ice cooling. After concentration under reduced pressure, ether was added, 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (29.5 μl, 118 μmol) was added under ice cooling, and the mixture was allowed to stand for 30 minutes under ice cooling. The precipitated crystals were washed with ether to obtain the title compound. Yield 33.3 mg (yield 78.7%).
[0047]
v) Cyclo (_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-Pro) (compound 7)
HCl / H-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeAla-_L-Pro-OH (23.0 mg, 21.3 μmol), DIEA (7.4 μl, 42.6 μmol) were dissolved in methylene chloride (11 ml), and this was dissolved in PyBroP (49.4 mg, 106 μmol), DIEA (18.6 μl, 106 μmol) was added dropwise to a methylene chloride (11 ml) solution at room temperature over 4 hours, and the mixture was further stirred at room temperature for 20 hours. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with 10% aqueous citric acid solution, saturated brine, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentration under reduced pressure, the residue was purified by preparative silica gel thin layer chromatography (chloroform-methanol 19: 1 development, extraction) to give the title compound. Yield 12.1 mg (yield 55.5%).
[0048]
The physicochemical properties of the title compound are shown.
¹H-NMR (CDCl_Three270 MHz): δ 8.62, 7.95, 7.67 (total 3H, NH), 7.35-7.11 (total 5H, aromatic H), 5.79, 5.44-5.22, 4.97, 4.88, 4.73 to 4.56, 4.30, 4.04, 3.44 (total 10H), 3.33, 3.32, 3.20, 2.85 (total 12H) , NCH_Three), 1.09 to 0.71 (CH_ThreeOthers.
[0049]
Reference Example 2 Cyclo (_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-Synthesis of MeVal-Pro) (compound 8)
a) H-_L-Phe-_L-MePhe-_L-Pro-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-OH (SEQ ID NO: 4 in the sequence listing)
Aureobasidin A (6.0 g, 5.45 mmol) was cooled with a dry ice-methanol bath, anhydrous hydrogen fluoride (200 ml) was introduced, and the mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours. After distilling off hydrogen fluoride under reduced pressure, the residue was lyophilized with dioxane. This was purified by high performance liquid chromatography (column: Soken Pack C-18 60 × 500 mm, eluted with 50-100% acetonitrile / 0.05% aq. TFA) to obtain the title compound. Yield 1.81 g (yield 29.7%).
[0050]
b) Z-_L-Phe-_L-MePhe-_L-Pro-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-OH (SEQ ID NO: 5 in the sequence listing, Z represents a benzyloxycarbonyl group)
H-_L-Phe-_L-MePhe-_L-Pro-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-To a suspension of MeVal-OH (SEQ ID NO: 4, 200 mg, 0.179 mmol) in DMF (3.6 ml) under ice cooling, triethylamine (50.2 μl, 0.358 mmol), benzyloxycarbonylsuccinimide (53. 5 mg, 0.215 mmol) was added, and the mixture was stirred for 1.5 hours under ice cooling. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, the insoluble material was filtered off, and the mixture was washed with 10% aqueous citric acid solution and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentrating under reduced pressure, the residue is subjected to medium pressure silica gel column chromatography (chloroform-methanol-acetic acid).
Elution with 100: 2: 2) to give the title compound. Yield 183 mg (yield 81.5%).
[0051]
c) HCl / H-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-OH (SEQ ID NO: 6 in the sequence listing)
Z-_L-Phe-_L-MePhe-_L-Pro-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-A solution of MeVal-OH (SEQ ID NO: 5, 100 mg, 79.8 mmol) in ethanol (10 ml) was added to 50 mM potassium-phosphate buffer (pH 7.0) (89 ml). After standing at 30 ° C. for 10 minutes, 50 mM potassium-phosphate buffer solution (pH 7.0) (1.2 ml) in which prolyl endopeptidase (600 units, manufactured by Seikagaku Corporation) was dissolved was added and stirred. Insoluble matters were removed by centrifugation (7000 rpm, 10 minutes), and the supernatant was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by high performance liquid chromatography (column: YMC C-18 ODS, manufactured by Yamamura Chemical Laboratory, eluted with 30-90% acetonitrile / 0.05% aq. TFA) to obtain the title compound. Yield 59.1 mg (yield 100%).
[0052]
d) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-OH (SEQ ID NO: 7 in the sequence listing)
HCl / H-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-Triethylamine (14.6 μl, 105 μmol), di-t-butyl-dicarbonate (24.0 μl, 105 μmol) in a solution of MeVal-OH (SEQ ID NO: 6, 57.7 mg, 81.0 μmol) in dioxane / water (2: 1) And stirred at room temperature for 3.5 hours. After concentration under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed successively with 10% aqueous citric acid solution and saturated brine. After drying over magnesium sulfate and concentrating under reduced pressure, the residue was purified by preparative silica gel thin layer chromatography (chloroform-methanol-acetic acid 100: 1: 2 development, chloroform-methanol 10: 1 extraction) to give the title compound. Yield 51.2 mg (yield 77.8%).
[0053]
e) Boc-_D-MeVal-OH
Boc-_D-Similar to Reference Example 1-a) using Val-OH (2.0 g, 9.21 mmol), 60% sodium hydride (1.1 g, 27.6 mmol), methyl iodide (6.58 ml, 105.7 mmol). To give the title compound. Yield 1.54 g (yield 72.5%).
[0054]
f) Boc-_D-MeVal-_L-Pro-OPac
Boc-_D-MeVal-OH (300 mg, 1.30 mmol), HCl.H-_L-The title compound was obtained in the same manner as in Reference Example 1-b) using Pro-OPac (291 mg, 1.08 mmol), PyBroP (606 mg, 1.30 mmol) and DIEA (753 μl, 4.32 mmol). Yield 372 mg (yield 77.2%).
[0055]
g) HCl · H-_D-MeVal-_L-Pro-OPac
Boc-_D-MeVal-_L-Using Pro-OPac (350 mg, 0.784 mmol), 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (5.88 ml), the same operation as in Reference Example 1-c) was carried out to obtain the title compound. Yield 292 mg (97.3% yield).
[0056]
h) Boc-_L-Phe-_D-MeVal-_L-Pro-OPac
Boc-_L-Phe-OH (180 mg, 0.679 mmol), HCl.H-_D-MeVal-_L-The title compound was obtained in the same manner as in Reference Example 1-d) using Pro-OPac (200 mg, 0.522 mmol), PyBroP (317 mg, 0.679 mmol) and DIEA (364 μl, 2.09 mmol). Yield 281 mg (yield 90.7%).
[0057]
i) HCl / H-_L-Phe-_D-MeVal-_L-Pro-OPac
Boc-_L-Phe-_D-MeVal-_L-Using Pro-OPac (190 mg, 0.320 mmol), 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (4.2 ml), and performing the same operation as in Reference Example 1-e), the title compound was obtained. Yield 169 mg (yield 99.4%).
[0058]
j) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeVal-_L-Pro-OPac
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-OH (SEQ ID NO: 7, 35.0 mg, 43.1 μmol), HCl · H—_L-Phe-_D-MeVal-_L-Pro-OPac (34.2 mg, 64.6 μmol), 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazine (HOObt, 8.7 mg, 64.6 μmol), EDC (11 The title compound was obtained in the same manner as in Reference Example 1-s) using 4 μl and 64.6 μmol). Yield 34.6 mg (yield 62.3%).
[0059]
k) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeVal-_L-Pro-OH
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeVal-_L-Pro-OPac (31.0 mg, 24.1 μmol), 90% aqueous acetic acid solution (1.2 ml) and zinc dust (313 mg, 4.82 mmol) were used in the same manner as in Reference Example 1-t) to give the title compound. Obtained. Yield 30.0 mg.
[0060]
l) HCl / H-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeVal-_L-Pro-OH
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeVal-_L-Similar to Reference Example 1-u) using Pro-OH (30.0 mg, 25.7 μmol), TFA (396 μl, 5.14 mmol), 4.0 N hydrogen chloride / dioxane solution (12.9 μl, 51.4 μmol) Operation was performed to obtain the title compound. Yield 19.6 mg (yield 73.6%).
[0061]
m) Cyclo (_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeVal-_L-Pro) (compound 8)
HCl / H-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Phe-_D-MeVal-_L-Pro-OH (15.0 mg, 13.6 μmol), DIEA (4.7 μl, 27.2 μmol) in methylene chloride (6.8 ml), PyBroP (31.7 mg, 67.9 μmol), DIEA (11.8 μl, The same operation as in Reference Example 1-v) was carried out using a solution of 67.9 μmol) in methylene chloride (6.8 ml) to obtain the title compound. Yield 5.0 mg (Yield 35.0%).
[0062]
The physicochemical properties of the title compound are shown.
¹H-NMR (CDCl_Three270 MHz): δ 8.78, 8.10, 7.48 (total 3H, NH), 7.35 to 7.09 (total 5H, aromatic H), 5.78, 5.39, 5.20, 4.98 to 4.94, 4.80, 4.53, 4.37 to 4.31, 4.13, 3.45 (10H in total), 3.33, 3.22, 2.78 (12H in total) , NCH_Three), 1.11 to 0.70 (CH_ThreeOthers.
[0063]
Reference Example 3 Cyclo (_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Cha-_D-Synthesis of (MeAla-Pro) (compound 5)
a) Boc-_L-Cha-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-Cha-OH (137 mg, 0.507 mmol), HCl.H-_D-MeAla-_L-The title compound was obtained in the same manner as in Reference Example 1-d) using Pro-OPac (150 mg, 0.423 mmol), PyBroP (236 mg, 0.507 mmol) and DIEA (258 μl, 1.48 mmol). Yield 198 mg (yield 82.1%).
[0064]
b) HCl / H-_L-Cha-_L-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-Cha-_D-MeAla-_L-Using Pro-OPac (180 mg, 0.315 mmol), 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (3.15 ml), and performing the same operation as in Reference Example 1-e), the title compound was obtained. Yield 148 mg (yield 93.1%).
[0065]
c) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Cha-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc- prepared by the method described in Reference Examples 2-a) to d)_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-OH (SEQ ID NO: 7, 35.0 mg, 43.1 μmol), HCl · H—_L-Cha-_D-MeVal-_L-Using Pro-OPac (32.8 mg, 64.6 μmol), HOObt (8.7 mg, 64.6 μmol) and EDC (11.4 μl, 64.6 μmol), the same operation as in Reference Example 1-s) was carried out. A compound was obtained. Yield 48.6 mg (yield 89.2%).
[0066]
d) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Cha-_L-MeAla-_L-Pro-OH
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Cha-_D-MeAla-_L-Pro-OPac (45.4 mg, 35.8 μmol), 90% aqueous acetic acid solution (1.6 ml) and zinc dust (466 mg, 7.16 mmol) were used in the same manner as in Reference Example 1-t) to give the title compound. Obtained. Yield 46.0 mg.
[0067]
e) HCl / H-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Cha-_L-MeAla-_L-Pro-OH
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Cha-_D-MeAla-_L-Similar to Reference Example 1-u) using Pro-OH (42.5 mg, 37.0 μmol), TFA (570 μl, 7.40 mmol), 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (18.5 μl, 74.0 μmol) Operation was performed to obtain the title compound. Yield 31.7 mg (yield 90.3%).
[0068]
f) Cyclo (_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Cha-_L-MeAla-_L-Pro) (compound 5)
HCl / H-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-Cha-_D-MeAla-_L-Pro-OH (25.0 mg, 21.1 μmol), DIEA (7.3 μl, 42.2 μmol) in methylene chloride (10.6 ml), PyBroP (49.2 mg, 105.5 μmol), DIEA (18.4 μl, The title compound was obtained in the same manner as in Reference Example 1-v) using a solution of 105.5 μmol) in methylene chloride (10.6 ml). Yield 6.8 mg (Yield 28.6%).
[0069]
The physicochemical properties of the title compound are shown.
¹H-NMR (CDCl_Three270 MHz): δ 8.62, 8.55, 7.92, 7.87, 7.75 (total 3H, NH), 5.82, 5.44-5.20, 5.02-4.86, 4.67, 4.56, 4.20, 4.03, 3.37 (total 10H), 3.29, 3.28, 3.27, 3.25, 3.24 (total 12H, NCH_Three), 1.03-0.76 (CH_ThreeOthers.
[0070]
Reference Example 4 Cyclo (_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-pFPhe-_D-MeAla-_L-Pro) (Compound 44)
a) Boc-_L-pFPhe-_DMeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-pFPhe-OH (100 mg, 0.353 mmol), HCl.H-_D-MeAla-_L-The title compound was obtained in the same manner as in Reference Example 1-d) using Pro-OPac (105 mg, 0.294 mmol), PyBroP (165 mg, 0.353 mmol) and DIEA (179 μl, 1.03 mmol). Yield 153 mg (yield 89.2%).
[0071]
b) HCl / H-_L-pFPhe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc-_L-pFPhe-_D-MeAla-_L-Using Pro-OPac (140 mg, 0.240 mmol), 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (2.4 ml), and performing the same operation as in Reference Example 1-e), the title compound was obtained. Yield 120 mg (96.8% yield).
[0072]
c) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-pFPhe-_D-MeAla-_L-Pro-OPac
Boc- prepared by the method described in Reference Examples 2-a) to d)_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-OH (SEQ ID NO: 7, 35.0 mg, 43.1 μmol), HCl · H—_L-pFPhe-_D-MeAla-_L-Using Pro-OPac (33.6 mg, 64.6 μmol), HOObt (8.7 mg, 64.6 μmol) and EDC (11.4 μl, 64.6 μmol), the same operation as in Reference Example 1-s) was carried out. A compound was obtained. Yield 48.8 mg (yield 88.7%).
[0073]
d) Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-pFPhe-_L-MeAla-_L-Pro-OH
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-pFPhe-_L-MeAla-_L-Pro-OPac (45.3 mg, 35.4 μmol), 90% aqueous acetic acid solution (1.7 ml) and zinc dust (920 mg, 14.1 mmol) were used in the same manner as in Reference Example 1-t) to give the title compound. Obtained. Yield 47.2 mg.
[0074]
e) HCl / H-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-pFPhe-_D-MeAla-_L-Pro-OH
Boc-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-pFPhe-_D-MeAla-_L-Similar to Reference Example 1-u) using Pro-OH (44.0 mg, 37.9 μmol), TFA (584 μl, 7.58 mmol), 4.0N hydrogen chloride / dioxane solution (18.9 μl, 75.8 μmol) Operation was performed to obtain the title compound. Yield 34.9 mg (96.1% yield).
[0075]
f) Cyclo (_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-pFPhe-_D-MeAla-_L-Pro) (compound 44)
HCl / H-_L-aIle-_L-MeVal-_L-Leu-_L-βHOMeVal-_D-Hmp-_L-MeVal-_L-pFPhe-_D-MeAla-_L-Pro-OH (28.0 mg, 25.5 μmol), DIEA (8.9 μl, 51.1 μmol) in methylene chloride (12.8 ml), PyBroP (59.4 mg, 128 μmol), DIEA (22.2 μl, 128 μmol) The title compound was obtained in the same manner as in Reference Example 1-v) using a methylene chloride (12.8 ml) solution. Yield 7.94 mg (29.8% yield).
[0076]
The physicochemical properties of the title compound are shown.
¹H-NMR (CDCl_Three270 MHz): δ 8.65, 7.98, 7.66 (total 3H, NH), 7.09 to 7.05 (total 4H, aromatic H), 5.84, 5.31, 5.19, 4.97, 4.88, 4.73 to 4.57, 4.17, 4.04, 3.44 (total 10H), 3.33, 3.32, 3.19, 2.94 (total 12H) , NCH_Three), 1.07 to 0.73 (CH_ThreeOthers.
[0077]
Tables 4 and 5 show the physicochemical properties of the compounds obtained in Reference Examples 1 to 4.
[0078]
[Table 4]

[0079]
[Table 5]

[0080]
^*The amino acid analysis was detected by ninhydrin reaction using JCL-300 manufactured by JEOL Ltd.
[0081]
The minimum inhibitory concentration (MIC, μg / ml) of the compounds obtained in Reference Examples 1 to 4 for fungi is shown in Table 6 below. The measurement is performed by the agar plate dilution method (cultured at 30 ° C. for 2 days) using a Sabouraud dextrose agar medium (glucose 2%, polypeptone 1%, agar 1.5%, all concentrations are W / V). Asked. As a control, compound 1, aureobasidin A (AbA) was used.
[0082]
Compounds 5, 7, 8, and 44 showed activity against Aspergillus at concentrations of 3.12-12.5 μg / ml. In particular, Compound 5 showed activity at a low concentration of 3.12 μg / ml against Aspergillus, and also showed strong antifungal activity against Cryptococcus, and stronger activity than Aureobasidin A.
[0083]
[Table 6]

[0084]
As described above, the compounds obtained in Reference Examples 1 to 4 exhibit excellent activity against not only Candida but also cryptococcus and / or aspergillus and are highly useful as antifungal agents.
[0085]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention, this invention is not limited to these Examples.
[0086]
Example 1 Effect of enhancing uptake of anticancer drug into drug-resistant cancer cells
  To show the effect of the present invention, the formula(1)Anti-cancer agent for drug-resistant cancer cellsVincristineThe uptake-increasing action of was examined.
  Adriamycin resistant strain 2780AD of human ovarian cancer cell A2780 [A. M.M. Rogan et al., Science, Vol. 224, pp. 994-996 (1984)] in RPMI-1640 culture medium containing 5% fetal bovine serum.⁶ 1 ml of cancer cell suspension per well is suspended in a multiwell culture plate with a diameter of 16 mm and 24 wells, 5% CO₂ And cultured at 37 ° C. After 24 hours, the culture solution is 20 nM^ThreeThe medium was exchanged with 0.5 ml of RPMI-1640 culture medium containing H-vincristine (6 Ci / mmol), 5% fetal calf serum, 10 mM hepes buffer. After dissolving in dimethyl sulfoxide, add 5 μl of the test compound diluted with physiological phosphate buffer (concentration in the reaction solution is 1.0 or 10.0 μg / ml), 5% CO₂ After culturing at 37 ° C. for 2 hours, the cells were washed with an ice-cold physiological phosphate buffer. To this 0.5 ml of 0.2N NaOH was added, transferred to a vial and warm bathed at 56 ° C. for 30-60 minutes to lyse the cells. 4 ml of aqueous scintillator (ACSII, Amersham) was added and taken up into cells with a liquid scintillation counter.^ThreeThe amount of H-vincristine was measured.
  The effect was incorporated into a drug-free control group^ThreeThe amount of H-vincristine was taken as 100 and incorporated into the drug treatment group^ThreeThe amount of H-vincristine was expressed as a percentage (%). The results are shown in Table 7.
[0087]
[Table 7]

[0088]
Example 2
1 g of surfactant HCO-50 is heated to 65 ° C. and melted, and 1 g of compound 1 and 10 g of polyethylene glycol 4000 are added and melted. After thorough mixing, it is coagulated at room temperature to prepare granules.
[0089]
【The invention's effect】
As explained above, the present inventionAnticancer drugIntracellular by effect enhancerCancer controlThe concentration of the agent can be increased. It was also found to enhance the sensitivity of resistant cells. Therefore, the compound of the present invention, Anticancer drugsEffective against cancer cells that are less sensitive to cancer and cancer cells that have acquired resistance to anticancer drugs,Cancer controlIt is also useful as a means of reducing the amount of agent used,Cancer controlSide effects such as toxicity of the agent can be reduced.
[0090]
[Sequence Listing]
[0091]

[0092]

[0093]

[0094]

[0095]

[0096]

[0097]

Claims

下記式（１）で表される環状デプシペプチド又はその医薬として許容される塩を含有することを特徴とするビンクリスチン、ビンブラスチン、アドリアマイシン、ダウノマイシン及びアクチノマイシンＤから選択される制癌剤の効果増強剤。

〔式中、Ｘ１はＨｍｐ又はＨｍｂ（Ｈｍｐは２−ヒドロキシ−３−メチルペンタン酸、Ｈｍｂは２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸を示す）であり、Ｘ３はＭｅＰｈｅ又はβＨＯＭｅＰｈｅ（ＭｅＰｈｅはＮ−メチルフェニルアラニン、βＨＯＭｅＰｈｅはβ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルフェニルアラニンを示す）であり、Ｘ５はａＩｌｅ、Ｖａｌ又はＬｅｕであり、Ｘ８はβＨＯＭｅＶａｌ（βＨＯＭｅＶａｌはβ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルバリンを示す）又はＭｅＶａｌである〕 An anti-cancer effect-enhancing agent selected from vincristine, vinblastine, adriamycin, daunomycin and actinomycin D, comprising a cyclic depsipeptide represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[ Wherein, X1 is Hmp or Hmb (Hmp is 2-hydroxy-3-methylpentanoic acid, Hmb is 2-hydroxy-3-methylbutanoic acid) , X3 is MePhe or βHOMePhe (MePhe is N-methylphenylalanine) , ΒHOMePhe is β-hydroxy-N-methylphenylalanine) , X5 is aIle, Val or Leu, and X8 is βHOMeVal (βHOMeVal is β-hydroxy-N-methylvaline) or MeVal ]