JP3872373B2 - Powder cleaning composition - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、変異アルカリセルラーゼを含有する粉末洗浄剤組成物、該酵素造粒物及び該酵素を含有する洗浄剤粒子に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
襟袖等の皮脂汚れ及び下着の黄ばみ等の親油的な汚れ、食べこぼし汚れのひどい場合は、通常の洗濯では充分に汚れが取れなかったり、染みのまま残ったりする。このため、従来から洗剤組成物の通常使用濃度よりも高濃度な水溶液に衣料を浸漬することや、温水による洗濯が行われている。
【０００３】
特に、顕著な汚れに対して行われる、通常使用濃度より高濃度な温水への浸漬洗浄においては、被洗浄物から離脱した汚れの一部が再び被洗浄物に沈着して洗浄効率を下げるという問題がある。この再沈着を防止するために、カルボキシメチルセルロース等のセルロース系の再汚染防止剤や、ポリエチレングリコール等のノニオン性高分子再汚染防止剤の配合検討が行われているが、十分な効果が得られていない。
【０００４】
また、特開平７−２１６０８４号公報にはアミノ酸ポリマー、特開平６−３３００８４号公報にはα−スルホ脂肪酸誘導体、特表平１０−５０５８７４号公報にはエチレン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミンペンタメチレンリン酸のようなアミノ酢酸の誘導体やアクリル酸又はメタクリル酸のホモポリマー等が再汚染防止剤として開示されているが、十分な効果が得られていない。
【０００５】
一方、プロテアーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ等の酵素を洗浄補助剤として洗浄剤に配合することは古くから実施されており、中でもセルラーゼは、木綿単繊維の非晶質領域に作用し、単繊維内の皮脂汚れを効果的に除去し、洗浄力を向上させることが見いだされている。しかしながら、アルカリ性の衣料用洗剤液中で作用できるアルカリセルラーゼであっても、従来知られているもののほとんどは耐熱性が低く、且つ衣料用洗剤に酵素を高配合しようとする場合には、酵素培養の特異臭が問題となっていた。
【０００６】
従って、襟・袖口等の皮脂由来の汚れ、染み汚れに対して優れた洗浄力を持つ洗浄剤組成物、より具体的には高濃度な浸漬洗浄や、温水による洗濯に適した洗浄剤組成物が望まれていた。
【０００７】
本発明は、再汚染防止効果に優れ、洗浄効率の高い洗浄剤組成物、特に顕著な汚れに対して行われる、通常使用濃度より高濃度な洗浄、温水洗浄、浸漬洗浄、或いはこれらの組み合わせ洗浄に適する粉末洗浄剤組成物を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、斯かる実情に鑑み、酵素を配合した洗浄剤組成物について検討した結果、特定の変異セルラーゼが高温で安定であると共に高活性であり、これを配合した組成物が、高濃度な洗浄や温水洗浄、浸漬洗浄等に適し、且つ特異臭が殆どない粉末洗浄剤組成物となり得ることを見出した。
【０００９】
すなわち本発明は、（ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するセルラーゼについて、配列番号１の２４２位又はこれに相当する位置のグルタミン残基を他のアミノ酸残基に置換した変異アルカリセルラーゼを含有する粉末洗浄剤組成物を提供するものである。
【００１０】
また本発明は、上記（ａ）の変異アルカリセルラーゼの造粒物であって、２０℃、１分後のセルラーゼ放出率が５０％以上である酵素造粒物を提供するものである。
【００１１】
また本発明は、上記（ａ）の変異アルカリセルラーゼ、（ｂ）界面活性剤、及び（ｃ）ビルダーを含有する洗浄剤粒子を提供するものである。
【００１２】
【発明の実施の形態】
（ａ）成分の変異アルカリセルラーゼは、配列番号１で示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するセルラーゼを変異の対象となるセルラーゼ（以下、「親アルカリセルラーゼ」ともいう）とし、当該配列番号１の２４２位又はこれに相当する位置のグルタミン残基を他のアミノ酸残基に置換してなるものであり、これらは野生型の変異体或いは人為的に変異を施した変異体であってもよい。
【００１３】
親アルカリセルラーゼである「配列番号１で示されるアミノ酸配列を有するアルカリセルラーゼ」としてはＥｇｌ−２３７［バチルス エスピーＫＳＭ−Ｓ２３７（ＦＥＲＭ ＢＰ−７８７５）由来、Hakamadaら，Biosci. Biotechnol. Biochem., 64, 2281-2289, 2000］が挙げられる。また、「配列番号１に示すアミノ酸配列と９０％以上の相同性を示すアルカリセルラーゼ」としては、配列番号１に示すアミノ酸配列と好ましくは９５％以上、より好ましくは９８％以上の相同性を示すアルカリセルラーゼが挙げられ、例えば、バチルス エスピー １１３９株由来のアルカリセルラーゼ（Ｅｇｌ−１１３９）（Fukumori ら，J. Gen, Microbiol, 132, 2329-2335）（相同性９１．４％）、バチルス エスピー ＫＳＭ−６４株由来のアルカリセルラーゼ（Ｅｇｌ−６４）（Sumitomo ら，Biosci. Biotechnol. Biochem., 56, 872-877, 1992）（相同性９１．９％）、バチルス エスピー ＫＳＭ−Ｎ１３１株由来のセルラーゼ（Ｅｇｌ−Ｎ１３１ｂ）（特願２０００−４７２３７号）（相同性９５．０％）が挙げられる。
尚、アミノ酸配列の相同性はＧＥＮＥＴＹＸ−ＷＩＮのマキシマムマッチングやサーチホモロジー等のプログラム（ソフトウェア開発）を用いて計算することができる。
【００１４】
そして、本発明の変異アルカリセルラーゼは、配列番号１で示されるアミノ酸配列を有するセルラーゼを親アルカリセルラーゼとする場合には、２４２位のグルタミン残基を他のアミノ酸に置換したものであり、配列番号１で示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するセルラーゼ（配列番号１で示されるアルカリセルラーゼを除く）を親アルカリセルラーゼとする場合には、配列番号１の２４２位に相当する位置のグルタミン残基を他のアミノ酸に置換したものである。斯かる他のアミノ酸残基としては、セリン残基が好ましい。
【００１５】
また、「相当する位置のアミノ酸残基」を特定する方法としては、例えばリップマン−パーソン法等の公知のアルゴリズムを用いてアミノ酸配列を比較し、各アルカリセルラーゼのアミノ酸配列中に存在する保存アミノ酸残基に最大の相同性を与えることにより行うことができる。セルラーゼのアミノ酸配列をこのような方法で整列させることにより、アミノ酸配列中にある挿入、欠失にかかわらず、相同アミノ酸残基の各セルラーゼにおける配列中の位置を決めることが可能である（図１）。相同位置は、三次元構造中で同位置に存在すると考えられ、対象のセルラーゼの特異的機能に関して類似した効果を有することが推定できる。
【００１６】
配列番号１に示すアルカリセルラーゼ（Ｅｇｌ−２３７）の２４２位に相当する位置を、前述したＥｇｌ−１１３９、Ｅｇｌ−６４、Ｅｇｌ−Ｎ１３１ｂについて示せば、Ｅｇｌ−１１３９では２４２位、Ｅｇｌ−６４では２４２位、Ｅｇｌ−Ｎ１３１ｂでは２２８位である。
【００１７】
また、本発明の変異アルカリセルラーゼは、その酵素活性及び酵素特性が変化しない限り、配列番号１の２４２位又はこれに相当する位置のグルタミン残基以外に、例えば配列番号１の１０位のロイシン、１６位のイソロイシン、２２位のセリン、３３位のアスパラギン、３９位のフェニルアラニン、７６位のイソロイシン、１０９位のメチオニン、２６３位のフェニルアラニン、３０８位のスレオニン、４６２位のアスパラギン、４６６位のリジン、４６８位のバリン、５５２位のイソロイシン、５６４位のイソロイシン、６０８位のセリン等が他のアミノ酸残基に同時に置換していてもよい。
【００１８】
配列番号１に示すアルカリセルラーゼにおいて、２個所以上の変異が同時になされた場合の好ましい具体例を以下に示す。尚、以下の表記ではアミノ酸を３文字表記とし、「＋」は一ヶ所の置換に対し付加された置換を表し、「／」については表記したいずれのアミノ酸を使用しても良いことを示している。
例えば、２重置換体の例としては、Ｌｅｕ１０（Ｇｌｎ／Ａｌａ／Ｐｒｏ／Ｍｅｔ）＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ、Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ＋Ｐｈｅ２６３（Ｉｌｅ／Ｌｅｕ／Ｐｒｏ／Ｖａｌ）、Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ＋Ｓｅｒ６０８（Ｉｌｅ／Ａｒｇ）等が好ましく、Ｓｅｒ２２Ｐｒｏ＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒが特に好ましい。
【００１９】
３重置換体の例としては、Ｌｅｕ１０（Ｇｌｎ／Ａｌａ／Ｐｒｏ／Ｍｅｔ）＋Ｓｅｒ２２Ｐｒｏ＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ、Ｉｌｅ１６（Ａｓｎ／Ａｒｇ）＋Ｓｅｒ２２Ｐｒｏ＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ、Ｉｌｅ７６（Ｈｉｓ／Ｍｅｔ／Ｖａｌ／Ｔｈｒ／Ａｌａ）＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ＋Ｌｙｓ４６６（Ｌｅｕ／Ａｌａ／Ｓｅｒ）等が好ましく、Ｌｅｕ１０Ｇｌｎ＋Ｓｅｒ２２Ｐｒｏ＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ、Ｉｌｅ１６Ａｓｎ＋Ｓｅｒ２２Ｐｒｏ＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒが特に好ましい。
【００２０】
４重置換体の例としては、Ｉｌｅ１６（Ａｓｎ／Ａｒｇ）＋Ｍｅｔ１０９（Ｉｌｅ／Ｌｅｕ／Ｓｅｒ／Ｖａｌ）＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ＋Ｉｌｅ５６４（Ｖａｌ／Ｔｈｒ／Ｌｅｕ）等が好ましく、Ｌｅｕ１０Ｇｌｎ＋Ｉｌｅ１６Ａｓｎ＋Ｉｌｅ７６Ｈｉｓ＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒが特に好ましい。
【００２１】
５重置換体の例としては、Ｉｌｅ１６（Ａｓｎ／Ａｒｇ）＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ＋Ｔｈｒ３０８（Ａｌａ／Ｓｅｒ／Ｇｌｙ／Ｖａｌ）＋Ｉｌｅ５５２Ｍｅｔ＋Ｓｅｒ６０８（Ｉｌｅ／Ａｒｇ）等が好ましく、Ｌｅｕ１０Ｇｌｎ＋Ｉｌｅ１６Ａｓｎ＋Ｉｌｅ７６Ｈｉｓ＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ＋Ｌｙｓ４６６Ｌｅｕが特に好ましい。
また、更にそれ以上の多重置換、例えば６〜１７置換体でもよい。
【００２２】
本発明の変異アルカリセルラーゼは、例えば以下の方法により得ることができる。
すなわち、クローニングされた親アルカリセルラーゼ（例えば配列番号１で示されるアミノ酸配列を有するアルカリセルラーゼ）をコードする遺伝子に対して置換（以下、「変異」ともいう）を施し、得られた変異遺伝子を用いて適当な宿主を形質転換し、当該組換え宿主を培養し、培養物から採取することにより得られる。
【００２３】
親アルカリセルラーゼをコードする遺伝子のクローニングは、一般的な遺伝子組換え技術を用いればよく、例えばバチルス エスピーＫＳＭ−Ｓ２３７の染色体より、ショットガン法やＰＣＲ法により取得できる。
【００２４】
親アルカリセルラーゼをコードする遺伝子の変異手段としては、一般的に行われているランダム変異や部異特異的変異の方法がいずれも採用できる。より具体的には、例えばのSite-Directed Mutagenesis System Mutan-Super Express Kmキット(Takara製)等を用いて行うことができる。また、リコンビナントＰＣＲ（polymerase chain reaction）法（PCR protocols, Academic press, New York, 1990）を用いることによって、遺伝子の任意の配列を他の遺伝子の該任意の配列に相当する配列と置換することが可能である。
【００２５】
得られた変異遺伝子を用いた本発明変異アルカリセルラーゼの生産は、宿主菌体内で複製維持が可能であり、該酵素を安定に発現させることができ、該遺伝子を安定に保持できるベクターに当該遺伝子を組込み、得られた組換えベクターを用いて宿主菌を形質転換することにより行えばよい。
【００２６】
斯かるベクターとしては大腸菌を宿主とする場合、ｐＵＣ１８、ｐＢＲ３２２、ｐＨＹ３００ＰＬＫ（ヤクルト本社）等が挙げられ、枯草菌を宿主にする場合、ｐＵＢ１１０、ｐＨＳＰ６４（Sumitomoら、Biosci. Biotechnol,Biocem., 59, 2172-2175, 1995）あるいはｐＨＹ３００ＰＬＫ等が挙げられる。
【００２７】
宿主菌を形質転換するにはプロトプラスト法、コンピテントセル法、エレクトロポレーション法等を用いて行うことができる。宿主菌としては特に制限されないがバチルス属（枯草菌）等のグラム陽性菌、大腸菌等のグラム陰性菌、ストレプトマイセス属等の放線菌、サッカロマイセス属等の酵母あるいはアスペルギルス属等のカビが挙げられる。
【００２８】
得られた形質転換体は、資化しうる炭素源、窒素源、金属塩、ビタミン等を含む培地を用いて適当な条件下で培養すればよい。かくして得られた培養液から、一般的な方法によって酵素の分取や精製を行い、限外ろ過濃縮、凍結乾燥、噴霧乾燥、結晶化等により必要な酵素形態を得ることができる。
【００２９】
斯くして得られた本発明の変異アルカリセルラーゼは、優れた耐熱性を有するとともに、洗浄力にも優れ、更に高い比活性を有する。
【００３０】
（ａ）成分の含有量は、粉末洗浄剤組成物中では、０．０００１〜５質量％であるのが好ましく、０．０００５〜２．５質量％がより好ましく、０．００１〜２質量％が更に好ましい。また、酵素造粒物として用いる場合の造粒物中での（ａ）成分の含有量は、０．０１〜５０質量％であるのが好ましく、０．０５〜２５質量％がより好ましく、０．１〜２０質量％が更に好ましい。
【００３１】
また、２０℃の０．９質量％ＮａＣｌ水溶液１００ｍＬのスターラー１００ｍｉｎ^-1の撹拌下、酵素造粒物１００ｍｇを添加し、１分後に放出されたセルラーゼ量を完全溶解時のセルラーゼ量で除した放出率は、洗浄性能の点で５０％以上であるのが好ましく、更に６０％以上、更に７０％以上、特に８０％以上であるのが好ましい。
【００３２】
本発明の粉末洗浄剤組成物は、上記（ａ）成分の他に、（ｂ）界面活性剤及び（ｃ）ビルダーを含有するのが好ましい。
（ｂ）成分の界面活性剤としては、陰イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤及び陽イオン性界面活性剤の１種又は組み合わせを挙げることができるが、好ましくは陰イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤である。
【００３３】
陰イオン性界面活性剤としては、炭素数１０〜１８のアルコールの硫酸エステル塩、炭素数８〜２０のアルコールのアルコキシル化物の硫酸エステル塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、パラフィンスルホン酸塩、α−オレフィンスルホン酸塩、α−スルホ脂肪酸塩、α−スルホ脂肪酸アルキルエステル塩又は脂肪酸塩が好ましい。本発明では特に、アルキル鎖の炭素数が１０〜１４、より好ましくは１２〜１４の直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩が好ましい。これらの塩の対イオンとしては、アルカリ金属塩やアミン類が好ましく、特にナトリウム及び／又はカリウム、モノエタノールアミン、ジエタノールアミンが好ましい。
【００３４】
非イオン性界面活性剤としては、ポリオキシアルキレンアルキル（炭素数８〜２０）エーテル、アルキルポリグリコシド、ポリオキシアルキレンアルキル（炭素数８〜２０）フェニルエーテル、ポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸（炭素数８〜２２）エステル、ポリオキシアルキレングリコール脂肪酸（炭素数８〜２２）エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマーが好ましい。特に、非イオン性界面活性剤としては、炭素数１０〜１８のアルコールにエチレンオキシドやプロピレンオキシド等のアルキレンオキシドを４〜２０モル付加した〔ＨＬＢ値（グリフィン法で算出）が１０．５〜１５．０、好ましくは１１．０〜１４．５であるような〕ポリオキシアルキレンアルキルエーテルが好ましい。
【００３５】
（ｂ）成分の界面活性剤の合計量は、洗浄力及び溶解性の点から、粉末洗浄剤組成物中１０〜６０質量％であるのが好ましく、１５〜５０質量％がより好ましく、２０〜４５質量％が更に好ましい。
陰イオン性界面活性剤は、粉末洗浄剤組成物中１〜６０質量％であるのが好ましく、１〜５０質量％がより好ましく、３〜４０質量％が特に好ましい。
非イオン性界面活性剤は、粉末洗浄剤組成物中０．５〜４５質量％であるのが好ましく、１〜３５質量％がより好ましく、３〜２５質量％が特に好ましい。
陰イオン性界面活性剤と非イオン性界面活性剤は、単独で用いることもできるが、好ましくは混合して用いるのが良い。また、両性界面活性剤や陽イオン性界面活性剤を目的に合わせ併用することもできる。
【００３６】
（ｃ）成分のビルダーとしては、そのもの自身では洗浄力がないか、又はあってもそれ程著しくないが、粉末洗浄剤組成物に配合されると著しく洗剤性能を向上させ、特に洗浄剤の主要成分である界面活性剤の洗浄能力を向上させるものが挙げられ、作用として、多価金属陽イオンの捕捉作用、汚れ分散作用及びアルカリ緩衝作用の少なくとも１つの作用を有するものである。
斯かるビルダーとしては、例えば水溶性無機化合物、水不溶性無機化合物、有機化合物等が挙げられる。
【００３７】
水溶性無機化合物としては、リン酸塩（トリポリリン酸塩、ピロリン酸塩、メタリン酸塩、リン酸三ナトリウム等）、ケイ酸塩、炭酸塩、硫酸塩等が挙げられる。中でも３つの作用を全て有する点でリン酸塩が好ましい。
【００３８】
水不溶性無機化合物としては、アルミノケイ酸塩（Ａ型ゼオライト、Ｐ型ゼオライト、Ｘ型ゼオライト、非晶質アルミノケイ酸塩等）、結晶性ケイ酸塩等が挙げられる。中でも粒子径３μｍ以下（より好ましくは１μｍ以下）のＡ型ゼオライトが好ましい。
【００３９】
有機化合物としては、カルボン酸塩（アミノカルボン酸塩、ヒドロキシアミノカルボン酸塩、ヒドロキシカルボン酸塩、シクロカルボン酸塩、マレイン酸誘導体、シュウ酸塩等）、有機カルボン酸（塩）ポリマー（アクリル酸重合体及び共重合体、多価カルボン酸重合体及び共重合体、グリオキシル酸重合体、多糖類及びこれらの塩等）等が挙げられる。中でも有機カルボン酸（塩）ポリマーが好ましい。
【００４０】
前記ビルダーの塩において、対イオンとしては、アルカリ金属塩、アミン類が好ましく、特にナトリウム及び／又はカリウム、モノエタノールアミン、ジエタノールアミンが好ましい。
【００４１】
これらのビルダーは、単独で又は２種以上を併用することができるが、水溶性無機化合物を含有するのが好ましく、水溶性無機化合物及び有機化合物を併用するのがより好ましく、水溶性無機化合物、有機化合物及び水不溶性無機化合物を併用するのが更に好ましい。
【００４２】
（ｃ）成分のビルダーの合計量は、洗浄性能の点から、粉末洗浄剤組成物中２０〜８０質量％であるのが好ましく、３０〜７０質量％がより好ましく、３５〜６０質量％が更に好ましい。
また、水溶性無機化合物ビルダーは、粉末洗浄剤組成物中１０〜５０質量％であるのが好ましく、１５〜４５質量％がより好ましく、２０〜４０質量％が更に好ましい。
水不溶性無機化合物ビルダーは、粉末洗浄剤組成物中５〜５０質量％であるのが好ましく、１０〜４５質量％がより好ましく、１５〜４０質量％が更に好ましい。
有機化合物ビルダーは、粉末洗浄剤組成物中０．１〜２０質量％であるが好ましく、０．３〜１５質量％がより好ましく、０．５〜１０質量％が更に好ましい。
【００４３】
本発明の粉末洗浄剤組成物には、上記（ａ）〜（ｃ）成分の他に、漂白剤（過炭酸塩、過ホウ酸塩、漂白活性化剤等）、再汚染防止剤（カルボキシメチルセルロース等）、柔軟化剤（ジアルキル型第四級アンモニウム塩、粘土鉱物等）、還元剤（亜硫酸塩等）、蛍光増白剤（ビフェニル型、アミノスチルベン型等）、泡コントロール剤（シリコーン等）、香料、その他の酵素（プロテアーゼ、ペクチナーゼ、アミラーゼ、リパーゼ等）等の添加剤を含有させることができる。これらは、別の粒子として粉末洗浄剤組成物に配合しても良い。
【００４４】
上記成分を含有する本発明の粉末洗浄剤組成物は、（ａ）成分からなる酵素造粒物（以下、「粒子（Ｉ）」ともいう）と洗剤ベースとなる（ｂ）及び（ｃ）成分を含有する粒子（以下、「粒子（ＩＩ）」ともいう）を含有する組成物、又は一つの粒子中に（ａ）〜（ｃ）成分を含有する洗浄剤粒子であるのが好ましい。
【００４５】
（ａ）成分からなる酵素造粒物は、洗浄効率の点から、２０℃、１分後のセルラーゼの放出率が５０％以上、好ましくは６０％以上、更に好ましくは７０％以上、特に好ましくは８０％以上の粒子（粒子（Ｉ））であるのが好ましい。
ここで、セルラーゼ放出率とは、１００ｍＬ溶ビーカー（内径５０ｍｍ）に２０℃の０．９質量％ＮａＣｌ水溶液１００ｍＬを入れ、攪拌子（長さ３５ｍｍ、直径８ｍｍ）の回転数１００ｍｉｎ^-1にて攪拌下、粒子１００ｍｇを添加し、１分後に放出されたセルラーゼ活性量を完全溶解時のセルラーゼ活性量で除し、得られた値に１００をかけたものをいう。尚、セルラーゼ活性量は公知の方法（特開平１０−３１３８５９号公報）により測定すればよい。
【００４６】
当該酵素造粒物は、非分級性の点から、ＪＩＳ Ｋ ３３６２：１９９８により規定された方法で測定する見掛け密度が、５００〜１６００ｇ／Ｌであるのが好ましく、より好ましくは６００〜１５００ｇ／Ｌ、特に好ましくは７００〜１４００ｇ／Ｌである。
また、高速溶解性、低発塵性、非分級性の点から、ＪＩＳ Ｚ ８８０１の標準篩を用いて５分間振動させた後、篩目のサイズによる重量分率から求める平均粒径が、１５０〜１２００μｍであるのが好ましく、より好ましくは１５０〜１０００μｍ、特に好ましくは２００〜９００μｍである。
加えて、発塵性、溶解性の点から、１２５〜７１０μｍの粒子が酵素造粒物全体の８０質量％以上であるのが好ましく、９０質量％以上がより好ましい。
【００４７】
酵素造粒物中のセルラーゼの含有量は、造粒性や溶解性及び洗浄性能の点から、０．０２〜２０質量％であるのが好ましく、０．０５〜１５質量％がより好ましく、０．１〜１０質量％が更に好ましい。
【００４８】
本発明の酵素造粒物は、以下に示す（Ｉ−１）及び／又は（Ｉ−２）の造粒物であるのが好ましく、高速溶解性及び低発塵性の点で（Ｉ−２）の造粒物であるのがより好ましい。
【００４９】
（Ｉ−１）の造粒物は、セルラーゼを平均粒径２００〜１２００μｍの水溶性粒子からなる核物質及び融点３５〜７０℃の水溶性有機バインダーと共に造粒し、得られた造粒物の平均粒径が核物質の平均粒径の１〜２倍である造粒物である。
【００５０】
核物質としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、芒硝、炭酸ナトリウム、砂糖等の水溶性粒子が挙げられ、中でも塩化ナトリウムが好ましい。核物質の平均粒径は、溶解性、及び目的とする最終の酵素粒子を洗剤粒子と混合した時の外観の美麗さ、非分級性の観点から、２００〜１２００μｍが好ましく、２５０〜１０００μｍがより好ましい。なお、平均粒径は、ＪＩＳ Ｚ ８８０１の標準篩を用いて５分間振動させた後、篩目のサイズによる重量分率から求めることができる。
核物質の含有量は、造粒性や溶解性の観点から、（Ｉ−１）の造粒物中３０〜８０質量％であるのが好ましく、４０〜７０質量％がより好ましい。
【００５１】
水溶性有機バインダーとしては、ポリエチレングリコール、非イオン界面活性剤（ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレン・アルキルエーテル等）等が挙げられ、中でもポリエチレングリコールが好ましい。生産性の点で、水溶性有機バインダーの量は、核物質１００重量部に対して５〜６０重量部であるのが好ましい。
【００５２】
水溶性有機バインダーの融点は、３５〜７０℃であることが好ましく、４０〜７０℃がより好ましく、４５〜６８℃が更に好ましい。該融点は、ＪＩＳ Ｋ００６４：１９９２に規定された目視による方法により測定することができる。
セルラーゼを核物質及び水溶性有機バインダーと共に造粒して（Ｉ−１）の造粒物を製造する方法は、公知の方法を用いればよく、例えば特開昭６２−２５７９９０号公報に記載の造粒法が好ましい。
【００５３】
以上のようにして得られた造粒物（Ｉ−１）の平均粒径は、溶解性及び非分級性の観点から、核物質の平均粒径の１〜２倍が好ましく、１．０５〜１．５倍がより好ましい。
【００５４】
（Ｉ−２）の造粒物は、セルラーゼ、水不溶性物質４５質量％以上、及び水溶性バインダー５〜４０質量％を含有し、かつ内部よりも表面近傍に水溶性バインダーが多く存在する構造を有する造粒物である。
【００５５】
水不溶性物質としては、セルロースパウダー等の有機物質、ゼオライト、タルク、クレー、アルミナ、カオリン、チタニア、炭酸カルシウム、硫酸バリウム等の無機物質が挙げられ、熱に対する安定性の点で、無機物質が好ましく、中でも分散性の点でゼオライトやカオリンが特に好ましい。水不溶性物質は、均一性の点で、一次粒子の平均粒径が２０μｍ以下であるのが好ましく、１０μｍ以下がより好ましく、０．１〜５μｍが特に好ましい。
（Ｉ−２）の造粒物中の水不溶性物質の含有量は、酵素の速やかな溶出を促す点で、４５質量％以上であるのが好ましく、５０質量％以上がより好ましい。
一方、溶け残り防止の点からは、９０質量％以下であるのが好ましく、８０質量％以下がより好ましく、７０質量％以下が特に好ましい。
【００５６】
水溶性バインダーとしては、ポリエチレングリコール及びその誘導体、ポリビニルアルコール及びその誘導体、水溶性セルロース誘導体、カルボン酸系ポリマー、澱粉、糖類等が挙げられる。誘導体としては、エーテル化合物等が挙げられる。中でも、生産性、高速溶解性の点で、カルボン酸系ポリマー及び糖類が好ましく、アクリル酸−マレイン酸コポリマーの塩、ポリアクリル酸塩がより好ましい。塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩が好ましい。該水溶性バインダーを配合することは、粒子強度の向上及び粒子の速やかな崩壊の点で好ましい。
（Ｉ−２）の造粒物中の水溶性バインダーの含有量は、低発塵性の点で５質量％以上であるのが好ましく、１０質量％以上がより好ましく、１５質量％以上が更に好ましい。また、高速溶解性の点からは、４０質量％以下であるのが好ましく、３５質量％以下がより好ましく、３０質量％以下が更に好ましい。
【００５７】
（Ｉ−２）の造粒物は、粒子内部よりも表面近傍に水溶性バインダーが多く存在する構造を有するものであり、例えば、前記セルラーゼ、水不溶性物質、及び水溶性バインダーを混合して、好ましくは水分量３０〜６０質量％のスラリーにした後、該スラリーを噴霧乾燥することで得られる。噴霧乾燥時の熱風の温度は、酵素の安定性及び生産性の点で１４０〜２１０℃が好ましい。その他の噴霧乾燥の条件については、特に限定はない。
【００５８】
なお、セルラーゼ造粒物における水溶性バインダーの偏在性の確認は、例えば、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴ−ＩＲ）や光音響分光法（ＰＡＳ）を併用する方法（ＦＴ−ＩＲ／ＰＡＳ）を用いて行うことができる。これらは、Applied Spectroscopy vol.47、1311-1316(1993)に記載のとおり、粒子の表面から深さ方向における物質の分布状態を解析する方法であり、それにより水溶性成分の偏在性を確認することができる。
【００５９】
酵素造粒物は、洗浄性能及び経済性の点で洗浄剤組成物中０．０１〜１０質量％であるのが好ましく、０．０５〜８質量％がより好ましく、０．１〜５質量％が更に好ましい。
【００６０】
（ｂ）及び（ｃ）成分から構成される粒子（ＩＩ）は、洗浄効率の点から、（ｂ）成分及び（ｃ）成分を含有し、２０℃、１分後の（ｂ）成分の放出率が６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上の粒子であるのが好ましい。
ここで、界面活性剤放出率は、ＪＩＳ Ｋ ３３６２：１９９８記載の界面活性剤定量法に基づいて測定することができる。
【００６１】
粒子（ＩＩ）は、流動性及び非ケーキング性の点で、表面被覆剤により表面改質を行うことが好ましく、当該表面被覆剤は粒子（ＩＩ）中、１〜３０質量％であるのが好ましく、２〜１５質量％がより好ましく、５〜１０質量％が更に好ましい。
表面被覆剤としては、例えば、アルミノケイ酸塩、ケイ酸カルシウム、二酸化ケイ素、ベントナイト、タルク、クレイ、非晶質シリカ誘導体、結晶性シリケート化合物等のシリケート化合物、金属石鹸、粉末の界面活性剤等の微粉体、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸ソーダ、アクリル酸とマレイン酸のコポリマー又はその塩等のポリカルボン酸塩等の水溶性ポリマー；脂肪酸が挙げられる。中でも水不溶性無機物が好ましく、特に結晶性アルミノケイ酸塩、非晶質アルミノケイ酸塩、結晶性シリケート化合物が好ましい。
【００６２】
粒子（ＩＩ）は、（ｂ）成分、（ｃ）成分の少なくとも一部を混合した後乾燥する工程を経て得る粒子（ＩＩ−１）の製法、（ｂ）成分として陰イオン界面活性剤を含有し、該陰イオン界面活性剤の液体酸前駆体と、該陰イオン界面活性剤を中和するのに必要な量以上の粒子状固体水溶性アルカリ無機物質を混合して中和する工程を経て得る粒子（ＩＩ−２）の製法等によって得ることができる。中でも粒子（ＩＩ−１）の製法が洗浄性能、溶解性の点で好ましい。
【００６３】
すなわち粒子（ＩＩ−１）は、（ｂ）成分、（ｃ）成分の少なくとも一部をスラリーとして混合し、噴霧乾燥によって粒子を得ることができる。場合によっては、（ｂ）成分、（ｃ）成分の残部を後添加しても良いし、より高い見掛け密度を求めるのであれば、（ｂ）成分、（ｃ）成分の残部を後添加して造粒することができる。溶解性の点で、噴霧乾燥粒子構造を潰さずに粒子内部に気孔を維持することが好ましい。この点で（ｂ）成分を含有する液状物を、噴霧乾燥粒子内部に気孔を維持したまま吸収担持させる方法がより好ましい。
【００６４】
粒子（ＩＩ−２）は、（ｂ）成分として陰イオン界面活性剤を含有し、該陰イオン界面活性剤を中和するのに必要な量以上の粒子状固体水溶性アルカリ無機物質に、該陰イオン界面活性剤の液体酸前駆体を添加することにより、該液体酸前駆体を中和し、これを造粒して粒子を得ることができる。
【００６５】
粒子（ＩＩ）の見掛け密度は、好ましくは５００〜１２００ｇ／Ｌ、より好ましくは６００〜１０００ｇ／Ｌ、特に好ましくは６５０〜８５０ｇ／Ｌである。また、経済効率の観点から、見掛け密度は５００ｇ／Ｌ以上が好ましく、溶解性の観点から１２００ｇ／Ｌ以下が好ましい。
【００６６】
粒子（ＩＩ）の平均粒径は、好ましくは１５０〜８００μｍ、より好ましくは２５０〜７５０μｍ、特に好ましくは３００〜７００μｍである。また、ペースト化防止の観点からは１５０μｍ以上が好ましく、溶解性の観点からは８００μｍ以下が好ましい。
【００６７】
粒子（ＩＩ）の水分値としては、品質の観点から１０質量％以下であるのが好ましく、５質量％以下がより好ましい。
【００６８】
（ａ）〜（ｃ）成分を含有する洗浄剤粒子は、以下のように製造することができる。
すなわち、製法Ａ：（ａ）成分及び、（ｂ）成分、（ｃ）成分の少なくとも一部を混合した後乾燥する工程を経て得る方法、製法Ｂ：（ｂ）成分、（ｃ）成分の少なくとも一部を混合した後に乾燥し、これに（ａ）成分を含有する液体を添加し（ａ）成分を担持させる工程を経て得る方法、製法Ｃ：（ｂ）成分として陰イオン界面活性剤を含有し、該陰イオン界面活性剤の液体酸前駆体と、該陰イオン界面活性剤を中和するのに必要な量以上の粒子状固体水溶性アルカリ無機物質を混合して中和する工程、及びこれに（ａ）成分を含有する液体を添加し（ａ）成分を担持させる工程を経て得る方法、等によって得ることができる。中でも製法Ｂが洗浄性能、溶解性及び酵素の安定性の点で好ましい。
【００６９】
製法Ａによれば、（ａ）成分及び、（ｂ）成分、（ｃ）成分の少なくとも一部をスラリーとして混合し、噴霧乾燥によって洗浄剤粒子を得ることができる。場合によっては、（ｂ）成分、（ｃ）成分の残部を後添加してもよいし、より高い見掛け密度を求めるのであれば、（ｂ）成分、（ｃ）成分の残部を後添加して造粒することができる。溶解性の点で、噴霧乾燥粒子構造を潰さずに粒子内部に気孔を維持することが好ましい。この点で（ｂ）成分を含有する液状物を、噴霧乾燥粒子内部に気孔を維持したまま吸収担持させる方法がより好ましい。
【００７０】
製法Ｂによれば、（ｂ）成分、（ｃ）成分の少なくとも一部をスラリーとして混合した後に噴霧乾燥し、これに（ａ）成分を含有する液体を添加し（ａ）成分を担持させて洗浄剤粒子を得ることができる。場合によっては、（ｂ）成分、（ｃ）成分の残部を後添加しても良いし、より高い見掛け密度を求めるのであれば、（ｂ）成分、（ｃ）成分の残部を後添加して造粒することができる。溶解性の点で、噴霧乾燥粒子構造を潰さずに粒子内部に気孔を維持することが好ましい。この点で（ｂ）成分を含有する液状物を、噴霧乾燥粒子内部に気孔を維持したまま吸収担持させる方法がより好ましい。
【００７１】
製法Ｃによれば、（ｂ）成分として陰イオン界面活性剤を含有し、該陰イオン界面活性剤を中和するのに必要な量以上の粒子状固体水溶性アルカリ無機物質に、該陰イオン界面活性剤の液体酸前駆体を添加することにより、該液体酸前駆体を中和し、これを造粒する過程で（ａ）成分を含有する液体を添加し（ａ）成分を担持させる方法がより好ましい。
【００７２】
また、当該洗浄剤粒子は、流動性及び非ケーキング性の点で、表面被覆剤により表面改質を行うことが好ましい。表面被覆剤は洗浄剤粒子中１〜３０質量％であるのが好ましく、２〜１５質量％がより好ましく、５〜１０質量％が更に好ましい。表面被覆剤としては、上記粒子（ＩＩ）について挙げたものと同様のものが使用できる。
【００７３】
斯くして得られる本発明の粉末洗浄剤組成物は、溶解性の点から、ＪＩＳ Ｚ８８０１の標準篩を用いて５分間振動させた後、篩目のサイズによる質量分率から求める洗浄剤組成物の平均粒径は１５０〜１０００μｍであるのが好ましく、より好ましくは１５０〜８００μｍ、更に好ましくは１８０〜６００μｍである。
【００７４】
また、ＪＩＳ Ｋ ３３６２：１９９８により規定された方法で測定する見掛け密度は、溶解性の点から、１６００ｇ／Ｌ以下であるのが好ましく、１３００ｇ／Ｌ以下がより好ましく、１０００ｇ／Ｌ以下が更に好ましい。また、利便性や廃棄物（例えば箱等）低減の点からは、見掛け密度は３００ｇ／Ｌ以上であるのが好ましく、６００ｇ／Ｌ以上がより好ましく、７００ｇ／Ｌ以上が更に好ましい。
【００７５】
本発明の洗浄剤組成物は、利便性の点から、圧縮して錠剤形態にしてもよいし、１回の使用量を水溶性或いは水不溶性の容器に収納してもよい。
【００７６】
【実施例】
製造例１
（１）アルカリセルラーゼ遺伝子の変異体作製
鋳型ＤＮＡとして大腸菌−枯草菌のシャトルベクターｐＨＹ３００ＰＬＫ中に組換えられたＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＫＳＭ−Ｓ２３７株由来のアルカリセルラーゼ遺伝子を用いた。
【００７７】
部位特異的変位Ｌｅｕ１０Ｇｌｎ、Ｉｌｅ１６Ａｓｎ、Ｓｅｒ２２Ｐｒｏ、Ｉｌｅ７６Ｈｉｓ、Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ、Ｌｙｓ４６６Ｌｅｕを導入するための変異導入用プライマーＬｅｕ１０Ｇｌｎ（配列番号２）、Ｉｌｅ１６Ａｓｎ（配列番号３）、Ｓｅｒ２２Ｐｒｏ（配列番号４）、Ｉｌｅ７６Ｈｉｓ（配列番号５）、Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ（配列番号６）、Ｌｙｓ４６６Ｌｅｕ（配列番号７）を用い、アルカリセルラーゼ遺伝子内に存在する適当な対向プライマーを構築して鋳型ＤＮＡと共に変異導入を行った。
【００７８】
即ち、鋳型ＤＮＡプラスミド０．５μＬ(１０ｎｇ)、変異導入用プライマー２０μＬ（１μＭ）、対向プライマー２０μＬ（１μＭ）、１０倍濃度のＰＣＲ用緩衝液１０μＬ、１０ｍＭデオキシヌクレオチド３リン酸(ｄＮＴＰ)混液８μＬ、ＰｙｒｏｂｅｓｔＤＮＡポリメラーゼ０．５μＬ(２．５ｕｎｉｔｓ、タカラ製)及び脱イオン水３９．５μＬを混合した後、ｇｅｎｅ ａｍｐ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ９７００（アマシャムファルマシア製）でＰＣＲを行った。反応条件は、９４℃２分間の熱変性後、９４℃１分間、５６℃１分間、７２℃３０秒間（３０サイクル）及び７２℃１分間で行った。得られたＰＣＲ産物をＧＦＸ ＰＣＲ ＤＮＡ ａｎｄ ｇｅｌ ｂａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ（アマシャムファルマシア製）で精製後（４３．５μＬ）、５．５μＬの１０倍濃度のリン酸化用緩衝液及びポリヌクレオチドキナーゼ１μＬ(１０ｕｎｉｔｓ)を加え、３７℃で１時間リン酸化反応を行ない精製（５０μＬ）した。リン酸化されたＰＣＲ産物２５μＬに、鋳型プラスミドを２μＬ(２０ｎｇ)、１０倍濃度のＰＣＲ用緩衝液１０μＬ、１０ ｍＭ ｄＮＴＰ混液８μＬ、ＰｙｒｏｂｅｓｔＤＮＡポリメラー１μＬ (５ｕｎｉｔｓ)及び脱イオン水５４μＬを混合した後、ＰＣＲを行った。反応条件は、９４℃、２分間の熱変性後、９４℃１分間、６０℃１分間、７２℃６分間（３０サイクル）及び７２℃１２分間で行った。
得られたＰＣＲ産物を精製後（４３．５μＬ）、５．５μＬの１０倍濃度のリン酸化用緩衝液及びポリヌクレオチドキナーゼ１μＬ (１０ｕｎｉｔｓ)を加え、３７℃で１時間リン酸化反応を行った後、エタノール沈澱（１０μＬ）した。回収された１０μＬのＤＮＡ溶液をｌｉｇａｔｉｏｎ ｋｉｔ ｖｅｒ．２（タカラ製）を用いて１６℃、１８時間ライゲーション反応を行い、自己閉環した後、再度エタノール沈殿して、ＤＮＡ混液を回収した。
【００７９】
（２）形質転換法
（１）で得られたＤＮＡ混液５μＬを用いてChangらの方法（Chang and Cohen,Mol.Gen.Gent.,168,111-115,1979）によりＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓＩＳＷ１２１４株に導入して形質転換体を取得した。即ち、宿主菌Ｂ． ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＩＳＷ１２１４株を５０ ｍＬのＬＢ培地中で３７℃で、約２時間振とう培養後 (６００ｎｍにおける吸光度が０．４)、室温で遠心分離 (７０００ｍｉｎ^-1、１５分間)により菌体を集め、５ｍＬのＳＭＭＰ[０．５Ｍ シュークロース、２０ｍＭ マレイン酸二ナトリウム、２０ｍＭ 塩化マグネシウム６水塩、３５％（ｗ／ｖ）ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｍｅｄｉｕｍ３（ディフコ製）］に懸濁後、ＳＭＭＰ溶液に溶解した５００μＬのリゾチーム溶液 (３０ｍｇ／ｍＬ)を加え、３７℃で１時間保温した。保温終了後、室温で遠心分離 (２８００ｍｉｎ^-1、１５分間)によりプロトプラストを集め、５ｍＬのＳＭＭＰに懸濁しプロトプラスト溶液を調製した。０．５ｍＬのプロトプラスト溶液に１０μＬのプラスミド溶液と１．５ｍＬの４０％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ８０００、シグマ製）を加え、緩やかに攪拌後、室温で２分間放置した後、直ちに５ｍＬのＳＭＭＰ溶液を混和し、室温で遠心分離 (２８００ｍｉｎ^-1、１５分間)によりプロトプラストを集め、１ｍＬのＳＭＭＰ溶液に再懸濁した。プロトプラスト懸濁液を３７℃で９０分間振盪 (１２０ｍｉｎ^-1)した後、テトラサイクリン（１５μｇ／ｍＬ、シグマ製）を含むＤＭ３再生寒天培地[０．８％（ｗ／ｖ） 寒天（和光純薬製）、０．５％コハク酸２ナトリウム６水塩、０．５％カザミノ酸テクニカル（ディフコ製）、０．５％酵母エキス、０．３５％リン酸１カリウム、０．１５５％リン酸２カリウム、０．５％グルコース、０．４％塩化マグネシウム６水塩、０．０１％牛血清アルブミン（シグマ製）、０．５％カルボキメチルセルロース、０．００５％トリパンブルー（メルク製）及びアミノ酸混液(ロイシン、メチオニン１０μg／ｍＬ)]上に塗布し、３０℃で７２時間培養して形質転換体を得た。ＤＭ３再生寒天平板培地上で、ハローを形成した形質転換体をテトラサイクリン（１５μｇ／ｍＬ）を含んだポリペプトン培地で、３０℃で１５時間振とう培養を行い、集菌後、ｍｉｃｒｏ ｐｒｅｐ ｐｌａｓｍｉｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ（アマシャムファルマシア製）によりプラスミドを回収、精製した。
【００８０】
（３）塩基配列の決定
（２）で取得したプラスミド中に挿入されたセルラーゼ遺伝子の塩基配列の確認は、３７７ＤＮＡシークエンサー（アプライド バイオシステム製）を用いて行なった。
【００８１】
製造例２ 酵素造粒物の製造
（１）酵素造粒物−１の製造
配列番号１に示すアルカリセルラーゼの２４２位のグルタミンをセリンに置換した変異アルカリセルラーゼ（４００００Ｕ／ｇ）２質量％、核物質（平均粒径２５０μｍの塩化ナトリウム）４５質量％、バインダー（ポリエチレングリコール６０００）１５質量％、酸化チタン５質量％、塩化カルシウム１質量％、芒硝３２質量％を造粒し、平均粒径３５０μｍの造粒物を得た。
１２５〜７１０μｍの粒子は９０質量％以上であり、見掛け密度は８３０ｇ／Ｌであった。
【００８２】
（２）酵素造粒物−２の製造
配列番号１に示すアルカリセルラーゼの２４２位のグルタミンをセリンに置換した変異アルカリセルラーゼ（４００００Ｕ／ｇ）２質量部、水不溶性物質（ゼオライト）６５質量部、水溶性バインダー（ポリアクリル酸／マルチット＝１／１）２５質量部、芒硝４質量部である水分量５５質量％のスラリーを調整した。次にこれを噴霧乾燥により水分量４質量％の平均粒径２５０μｍの造粒物を得た。
１２５〜７１０μｍの粒子は９０質量％以上であり、見掛け密度は８１０ｇ／Ｌであった。また、表面近傍に水溶性バインダーが多く存在していた。
【００８３】
（３）酵素造粒物−３の製造
酵素造粒物−１に用いたセルラーゼを、配列番号１に示すアルカリセルラーゼの２２位のセリンをプロリンに、２４２位のグルタミンをセリンに置換した変異アルカリセルラーゼに置き換えた以外は同様にして造粒物を得た。
１２５〜７１０μｍの粒子は９０質量％以上であり、見掛け密度は８３０ｇ／Ｌであった。
【００８４】
（４）酵素造粒物−４の製造
酵素造粒物−２に用いたセルラーゼを、配列番号１に示すアルカリセルラーゼの２２位のセリンをプロリンに、２４２位のグルタミンをセリンに置換した変異アルカリセルラーゼに置き換えた以外は同様にして造粒物を得た。
１２５〜７１０μｍの粒子は９０質量％以上であり、見掛け密度は８１０ｇ／Ｌであった。また、表面近傍に水溶性バインダーが多く存在していた。
【００８５】
（５）酵素造粒物−５の製造
酵素造粒物−１に用いたセルラーゼを、配列番号１に示すアルカリセルラーゼの１０位のロイシンをグルタミンに、２２位のセリンをプロリンに、２４２位のグルタミンをセリンに置換した変異アルカリセルラーゼに置き換えた以外は同様にして酵素造粒物を得た。
１２５〜７１０μｍの粒子は９０質量％以上であり、見掛け密度は８２０ｇ／Ｌであった。
【００８６】
（６）酵素造粒物−６の製造
酵素造粒物−２に用いたセルラーゼを、配列番号１に示すアルカリセルラーゼの１０位のロイシンをグルタミンに、２２位のセリンをプロリンに、２４２位のグルタミンをセリンに置換した変異アルカリセルラーゼに置き換えた以外は同様にして酵素造粒物を得た。
１２５〜７１０μｍの粒子は９０質量％以上であり、見掛け密度は８００ｇ／Ｌであった。また、表面近傍に水溶性バインダーが多く存在していた。
【００８７】
（７）酵素造粒物−７の製造
酵素造粒物−１に用いたセルラーゼを、配列番号１に示すアルカリセルラーゼの１０位のロイシンをグルタミンに、１６位のイソロイシンをアスパラギンに、７６位のイソロイシンをヒスチジンに、２４２位のグルタミンをセリンに、４６６位のリシンをロイシンに置換した変異アルカリセルラーゼに置き換えた以外は同様にして酵素造粒物を得た。
１２５〜７１０μｍの粒子は９０質量％以上であり、見掛け密度は８２０ｇ／Ｌであった。
【００８８】
（８）酵素造粒物−８の製造
酵素造粒物−２に用いたセルラーゼを、配列番号１に示すアルカリセルラーゼの１０位のロイシンをグルタミンに、１６位のイソロイシンをアスパラギンに、７６位のイソロイシンをヒスチジンに、２４２位のグルタミンをセリンに、４６６位のリシンをロイシンに置換した変異アルカリセルラーゼに置き換えた以外は同様にして酵素造粒物を得た。
１２５〜７１０μｍの粒子は９０質量％以上であり、見掛け密度は８２０ｇ／Ｌであった。また、表面近傍に水溶性バインダーが多く存在してした。
【００８９】
製造例３ 洗剤ベースの製造
（１）洗剤ベース−１の製造
全洗剤ベース中の質量基準で、直鎖アルキル（炭素数１０〜１３）ベンゼンスルホン酸ナトリウム２０質量％、トリポリリン酸ナトリウム１７質量％、炭酸ナトリウム１０質量％、硫酸ナトリウム２２質量％、１号ケイ酸ナトリウム１４質量％、ポリエチレングリコール（ＭＷ＝１３０００）０．３質量％、アクリル酸−マレイン酸コポリマー（ナトリウム塩（７０モル％中和）、モノマー比はアクリル酸／マレイン酸＝３／７（モル比）、平均分子量７００００）０．３質量％、カルボキシメチルセルロース０．２質量％、チノパールＣＢＳ−Ｘ（チバスペシャリティケミカルス社製）０．０５質量％、チノパールＡＭＳ−ＧＸ（チバスペシャリティケミカルス社製）０．０５質量％、及び亜硫酸ナトリウム０．５質量％から、固形分５０質量％のスラリーを調製し、噴霧乾燥することによって噴霧乾燥粒子を得た。ついで、これを全洗剤ベース中の質量基準で、４Ａ型ゼオライト（東ソー（株）製）１０質量％、及び香料０．３質量％を混合し表面被覆を行い洗剤ベースを得た。洗剤ベースの平均粒径は３００μｍ、見掛け密度は４５０ｇ／Ｌであった。
【００９０】
（２）洗剤ベース−２の製造
固形分４８質量％のスラリーを、熱風温度２５０℃で噴霧乾燥し、ポリアクリル酸ナトリウム（平均分子量１００００）８質量％、炭酸ナトリウム３０質量％、硫酸ナトリウム２０質量％、塩化ナトリウム５質量％、蛍光染料０．５質量％、ゼオライト３５質量％の噴霧乾燥粒子を得た。次に、レディゲミキサー（松阪技研（株）製、容量２０Ｌ、ジャケット付き）に噴霧乾燥粒子１００質量部投入し、主軸（１５０ｍｉｎ^-1）の攪拌下、非イオン界面活性剤１８質量部、直鎖アルキル（炭素数１０〜１３）ベンゼンスルホン酸ナトリウム２０質量部、脂肪酸（炭素数１４〜１８）ナトリウム５質量部、ポリエチレングリコール（平均分子量８５００）３質量部、水４質量部の混合液を、３分間で投入し、その後５分間攪拌を行った。更に、このミキサーに結晶性シリケート１５質量部、ゼオライト１５質量部、香料０．３質量部を投入し、表面被覆を行い洗剤ベースを得た。得られた洗剤ベースの見掛け密度８２０ｇ／Ｌ、平均粒径３２０μｍであった。
【００９１】
（３）洗剤ベース−３の製造
最終洗剤ベース基準で、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸カリウム（Ｃ１０〜１４）１４質量％、α−オレフィンスルホン酸カリウム（炭素数１４〜１８）１２質量％、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｃ１２〜１４、ＥＯ１２）８質量％、ポリエチレングリコール（平均分子量＝８５００）１質量％、ゼオライト１８質量％、アクリル酸−マレイン酸コポリマー（平均分子量＝７００００ ）０．５質量％、脂肪酸カリウム（パーム核油由来）４質量％、１号ケイ酸塩４質量％、炭酸カリウム８質量％、硫酸ナトリウム２質量％、亜硫酸ナトリウム１質量％、及び蛍光染料０．３質量％からなるスラリー（固形分５０質量％）を調製し、噴霧乾燥して噴霧乾燥組成物を得た。これに最終洗剤ベース基準の重量基準で、炭酸ナトリウム１３質量％をリボンミキサーに投入して混合を行った。得られた混合物を前押し出し式２軸型押し出し造粒機（ペレッターダブル：不二パウダル（株）製）で直径が１０ｍｍの円柱状に押し出し成形して圧密化した。得られたペレット状物を、ゼオライト５質量％とともにフラッシュミル（不二パウダル（株）製）で粉砕造粒して表面被覆を行った。この造粒物から粗大物を取り除いた後、Ｖブレンダーに移し、ゼオライト５質量％を混合し、水分４．２質量％の洗剤ベースを得た。得られた洗剤ベースは、見掛け密度８２０ｇ／Ｌ、平均粒径３９０μｍであった。
【００９２】
実施例１〜１３
表１の組み合わせで、上記の酵素造粒物及び洗剤ベースを混合し粉末洗浄剤組成物を得た。
【００９３】
比較例１〜６
酵素造粒物−１〜４を市販の「セルザイム０．７Ｔ」もしくは、「ケアザイム４５００Ｔ」（ノボザイムズ社製）に置き換えて同活性量になるようにして粉末洗浄剤組成物を得た（表２）。
各洗浄剤組成物について、溶解性、洗浄力、匂い、再汚染防止性の評価を行った。結果を表１及び表２に併せて示す。また、セルラーゼの放出率は、実施例１〜１３は何れも６０％以上であったが、比較例は５０％未満であった。
【００９４】
【表１】

【００９５】
【表２】

【００９６】
＜溶解性評価＞
１Ｌ容ビーカー（内径１０５ｍｍ）に５℃の硬水（７１．２ｍｇＣａＣＯ₃／Ｌ、Ｃａ／Ｍｇのモル比７／３）１Ｌを入れ、攪拌子（長さ３５ｍｍ、直径８ｍｍ）の回転数８００ｍｉｎ^-1にて撹拌下、酵素造粒物又は洗浄剤組成物１ｇを投入し、６０秒間攪拌してＪＩＳ Ｚ ８８０１規定の標準篩（目開き７４μｍ）を通過させた。この時の篩い上の状態を以下の基準で目視判定した。
【００９７】
評価基準：
○：残留物が全く無い
×：残留物が確認できる
【００９８】
＜洗浄力評価＞
まず、表３に示した成分からなる油脂／カーボン汚れを木綿金布に染着させ、人工汚染布を調製した（６×６cm）。
【００９９】
【表３】

【０１００】
次いで、４０℃の使用水（ＣａＣｌ₂：５５．４２ｍｇ／Ｌ、ＭｇＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ：４３．５１ｍｇ／Ｌ）１６７ｍＬを１Ｌ容ビーカー（内径１０５ｍｍ）に入れ、洗浄剤組成物０．６７ｇを溶解させ、この中に前記人工汚染布５枚を入れ、４０℃で１時間漬け置きした。次いで４０℃の使用水（同上）８３３ｍＬを加え、全量をかき混ぜ式洗浄力試験機（ターゴトメーター）の試料カップに移し、回転速度１００ｍｉｎ^-1にて１０分間攪拌した。人工汚染布を流水下で濯いだ後、アイロンプレスし、反射率測定に供した。
汚染前の原布及び洗浄前後の汚染布の５５０ｎｍにおける反射率を自記色彩計（島津製作所製（株）製）にて測定し、次式によって洗浄率（％）を求め、５枚の測定平均値を以下の基準により評価した。
【０１０１】
【数１】

【０１０２】
評価基準：
○：洗浄率が７５％以上
×：洗浄率が７５％未満
【０１０３】
＜匂い評価＞
坪量５５０ｇ／ｃｍ²の紙表面をポリエチレンでラミネートし、容器を作成した。接着剤としては、一般に用いられているアクリル系エマルジョンタイプの接着剤を使用した。容器寸法は横１４．８ｃｍ×奥行き８．７ｃｍ×高さ１６ｃｍである。これに、洗剤組成物１５００ｇを充填した。その後、開口部を封緘し、３０℃、８０％ＲＨの恒温恒湿器中に９０日間放置した。試験後、以下の基準により評価した。
【０１０４】
評価基準：
○：酵素の特異臭が殆ど感じられない
×：酵素の特異臭が感じられる
【０１０５】
＜洗浄剤組成物の再汚染防止性＞
得られた洗浄剤０．６７ｇを、４０℃の使用水（ＣａＣｌ₂：５５．４２ｍｇ／Ｌ、ＭｇＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ：４３．５１ｍｇ／Ｌ）１０００ｍＬに溶解させる。次にこれに社団法人日本油化学会選定のカーボンブラック（旭カーボン（株）製、旭洗浄用カーボンブラックが好適）０．２５ｇを添加し、２６±１．５ＫＨｚの超音波を５分間照射してカーボンブラックを均一に分散させる。次にこれを４０℃にてかき混ぜ式洗浄力試験機（ターゴトメータ：Ｔｅｒｇ−Ｏ−Ｔｏｍｅｔｅｒ）の試料カップに移し、６ｃｍ×６ｃｍの木綿の白布（社団法人日本油化学会選定の標準品、洗濯科学協会が販売する＃２０２３布）５枚を入れて回転速度１００±５ｍｉｎ^-1で１０分間撹拌する。次に木綿の白布を取り出し、含水率が２００質量％以下になるように軽く手で絞ってから、４０℃の使用水（ＣａＣｌ₂：５５．４２ｍｇ／Ｌ、ＭｇＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ：４３．５１ｍｇ／Ｌ）１０００ｍＬに入れ、かき混ぜ式洗浄力試験機（回転速度１００±５ｍｉｎ^-1）を用いて３分間濯ぎ、この濯ぎ操作を計２回行なう。次に風乾後、アイロン仕上げを行って、５５０ｎｍにおける反射率を判定した。
【０１０６】
【数２】

【０１０７】
評価基準：
○：再汚染防止率が６５％以上
×：再汚染防止率が６５％未満
【０１０８】
製造例４ 洗浄剤粒子の製造
（１）洗浄剤粒子−１の製造
全洗浄剤粒子中の質量基準で、配列番号１に示すアルカリセルラーゼの２４２位のグルタミンをセリンに置換した変異アルカリセルラーゼ０．０１質量％、直鎖アルキル（炭素数１０〜１３）ベンゼンスルホン酸ナトリウム２０質量％、トリポリリン酸ナトリウム１７質量％、炭酸ナトリウム１０質量％、硫酸ナトリウム２２質量％、１号ケイ酸ナトリウム１４質量％、ポリエチレングリコール（ＭＷ＝１３０００）０．３質量％、アクリル酸−マレイン酸コポリマー（ナトリウム塩（７０モル％中和）、モノマー比はアクリル酸／マレイン酸＝３／７（モル比）、平均分子量７００００）０．３質量％、カルボキシメチルセルロース０．２質量％、チノパールＣＢＳ−Ｘ（チバスペシャリティケミカルス社製）０．０５質量％、チノパールＡＭＳ−ＧＸ（チバスペシャリティケミカルス社製）０．０５質量％、及び亜硫酸ナトリウム０．５質量％から、固形分５０質量％のスラリーを調製し、噴霧乾燥することによって噴霧乾燥粒子を得た。ついで、これを全洗浄剤粒子中の質量基準で、４Ａ型ゼオライト（東ソー（株）製）１０質量％、及び香料０．３質量％を混合し表面被覆を行い洗浄剤粒子を得た。
洗浄剤粒子の平均粒径は３００μｍ、見掛け密度は４５０ｇ／Ｌであった。洗浄剤粒子１００質量部に対して消泡剤０．４質量部を混合し、洗浄剤組成物を得た。
【０１０９】
（２）洗浄剤粒子−２の製造
固形分４８質量％のスラリーを、熱風温度２００℃で噴霧乾燥し、配列番号１に示すアルカリセルラーゼの２２位のセリンをプロリンに、２４２位のグルタミンをセリンに置換した変異アルカリセルラーゼ０．０２質量％、ポリアクリル酸ナトリウム（平均分子量１００００）８質量％、炭酸ナトリウム３０質量％、硫酸ナトリウム２０質量％、塩化ナトリウム５質量％、蛍光染料０．５質量％、ゼオライト３５質量％の噴霧乾燥粒子を得た。次に、レディゲミキサー（松阪技研（株）製、容量２０Ｌ、ジャケット付き）に噴霧乾燥粒子１００質量部投入し、主軸（１５０ｍｉｎ^-1）の攪拌下、非イオン界面活性剤１８質量部、直鎖アルキル（炭素数１０〜１３）ベンゼンスルホン酸ナトリウム２０質量部、脂肪酸（炭素数１４〜１８）ナトリウム５質量部、ポリエチレングリコール（平均分子量８５００）３質量部、水４質量部の混合液を、３分間で投入し、その後５分間攪拌を行った。更に、このミキサーに結晶性シリケート１５質量部とゼオライト１５質量部を投入し、表面被覆を行い洗浄剤粒子を得た。
得られた洗浄剤粒子の見掛け密度８３０ｇ／Ｌ、平均粒径３１０μｍであった。
【０１１０】
（３）洗浄剤粒子−３の製造
固形分４８質量％のスラリーを、熱風温度２００℃で噴霧乾燥し、ポリアクリル酸ナトリウム（平均分子量１００００）８質量％、炭酸ナトリウム３０質量％、硫酸ナトリウム２０質量％、塩化ナトリウム５質量％、蛍光染料０．５質量％、ゼオライト３５質量％の噴霧乾燥粒子を得た。次に、レディゲミキサー（松阪技研（株）製、容量２０Ｌ、ジャケット付き）に噴霧乾燥粒子１００質量部投入し、主軸（１５０ｍｉｎ^-1）の攪拌下、非イオン界面活性剤１８質量部、直鎖アルキル（炭素数１０〜１３）ベンゼンスルホン酸ナトリウム２０質量部、脂肪酸（炭素数１４〜１８）ナトリウム５質量部、ポリエチレングリコール（平均分子量８５００）３質量部、配列番号１に示すアルカリセルラーゼの２２位のセリンをプロリンに、２４２位のグルタミンをセリンに置換した変異アルカリセルラーゼ０．０２質量部、水４質量部の混合液を、３分間で投入し、その後５分間攪拌を行った。更に、このミキサーに結晶性シリケート１５質量部とゼオライト１５質量部を投入し、表面被覆を行い洗浄剤粒子を得た。
得られた洗浄剤粒子の見掛け密度８２０ｇ／Ｌ、平均粒径３２０μｍであった。
【０１１１】
（４）洗浄剤粒子−４の製造
炭酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、蛍光染料を、レディゲミキサーＦＫＭ−１３０Ｄ（（株）マツボー製）を用いて攪拌羽根を周速３．４ｍ／ｓ、剪断機周速２７ｍ／ｓで１分間混合した。混合物の平均粒径は９８μｍであった。次に、同条件でミキサーを作動させながら、直鎖アルキル（炭素数１２〜１４）ベンゼンスルホン酸（含水率０．５％）と硫酸の混合物を４分間で加え、更に５分間作動させて中和反応を行った。次いで、同条件でミキサーを作動させながら、非イオン界面活性剤、ゼオライトを洗浄剤粒子中の１５質量％分を加え、２分間作動させて造粒を行った。次に、同条件でミキサーを作動させながら、ゼオライトを洗浄剤粒子中の７質量％分を加え、配列番号１に示すアルカリセルラーゼの２２位のセリンをプロリンに、２４２位のグルタミンをセリンに置換した変異アルカリセルラーゼを４質量％含有する酵素溶液を洗浄剤粒子中の０．５質量％分、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ１３０００）、アクリル酸マレイン酸コポリマー（ＡＡ／ＭＡコポリマー）４０質量％水溶液を１分間で加え、更に２分間作動させて造粒を行った。続いて残りのゼオライトを加え、更に２分間作動させて表面改質処理を行い、表４に示す洗浄剤粒子を得た。
得られた洗浄剤粒子は、見掛け密度７８０ｇ／Ｌ、平均粒径３６０μｍであった。
【０１１２】
【表４】

【０１１３】
（５）比較例
変異アルカリセルラーゼを配合せずに、それ以外は製造例８、９、１１と同様にして洗浄剤粒子を得た。これに同活性量のセルザイム０．７Ｔ、もしくはケアザイム４５００Ｔ（ノボザイムズ社製）粒子を添加して洗浄剤組成物とした。
【０１１４】
実施例１４
実施例１〜１３と同様に、各洗浄剤粒子について、溶解性、洗浄力、匂い、再汚染防止性の評価を行った。
溶解性については、洗浄剤粒子−１〜４は、篩い上のセルラーゼ残留量が何れも比較例の残留量よりも大幅に下回っていた。また、セルラーゼの放出率は、洗浄剤粒子−１〜４は何れも６０％以上であったが、比較例は５０％未満であった。
再汚染防止性、匂いの評価については、洗浄剤粒子−１〜４は何れもセルザイムを用いた比較例よりも明らかに勝っていた。また、洗浄力、再汚染防止性の評価については、洗浄剤粒子−１〜４は何れもケアザイムを用いた比較例よりも明らかに勝っていた。
【０１１５】
【発明の効果】
本発明の粉末洗浄剤組成物は、高濃度な浸漬洗浄や、温水による洗濯にも適し、襟・袖口等の皮脂由来の汚れ、染み汚れに対しても優れた洗浄力を発揮する。また、本発明組成物におけるセルラーゼは高活性であり、従来の洗浄剤に比べて酵素の使用量が少なくて済むため、当該組成物における酵素特有の匂いも低減できる。
【０１１６】
【配列表】

【図面の簡単な説明】
【図１】配列番号１で示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するセルラーゼのアミノ酸配列を整列させた図である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a powder detergent composition containing a mutant alkaline cellulase, the enzyme granulated product, and a detergent particle containing the enzyme.
[0002]
[Prior art and problems to be solved by the invention]
In the case of oleophilic stains such as sebum stains on the collar sleeves and yellowing of the underwear, and spilled stains, the stains may not be sufficiently removed by normal washing or remain as stains. For this reason, conventionally, clothes are immersed in an aqueous solution having a concentration higher than the normal use concentration of the detergent composition, and washing with warm water has been performed.
[0003]
In particular, in immersion cleaning in warm water having a concentration higher than the normal use concentration, which is performed on remarkable soil, a part of the soil detached from the object to be cleaned is deposited again on the object to be cleaned, thereby reducing the cleaning efficiency. There's a problem. In order to prevent this redeposition, studies have been conducted on the combination of cellulose-based recontamination preventives such as carboxymethylcellulose and nonionic polymer recontamination preventives such as polyethylene glycol, but sufficient effects have been obtained. Not.
[0004]
JP-A-7-216084 discloses an amino acid polymer, JP-A-6-330084 discloses an α-sulfo fatty acid derivative, JP-A-10-505874 discloses ethylene tetraacetic acid (EDTA), diethylenetriaminepentamethyleneline. Derivatives of aminoacetic acid such as acids and homopolymers of acrylic acid or methacrylic acid have been disclosed as anti-staining agents, but sufficient effects have not been obtained.
[0005]
On the other hand, it has been practiced for a long time to mix enzymes such as protease, lipase, cellulase, and amylase into cleaning agents as cleaning aids. Among them, cellulase acts on the amorphous region of single cotton fibers, It has been found that it effectively removes sebum stains and improves detergency. However, even alkaline cellulases that can act in an alkaline clothing detergent solution, most of the conventionally known alkaline cellulases have low heat resistance. The peculiar odor of was a problem.
[0006]
Accordingly, a detergent composition having excellent detergency against dirt and stains derived from sebum such as collars and cuffs, more specifically, a detergent composition suitable for high-concentration immersion washing and washing with warm water. Was desired.
[0007]
The present invention is a cleaning composition with excellent anti-recontamination effect and high cleaning efficiency, particularly cleaning that is higher than the normal use concentration, cleaning with warm water, immersion cleaning, or a combination cleaning thereof, which is performed on remarkable dirt. An object of the present invention is to provide a powder cleaning composition suitable for the above.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
In view of such circumstances, the present inventors have studied a detergent composition containing an enzyme, and as a result, a specific mutant cellulase is stable at high temperatures and highly active. It has been found that a powder cleaning composition suitable for high-concentration cleaning, warm water cleaning, immersion cleaning, and the like and having almost no specific odor can be obtained.
[0009]
That is, the present invention relates to (a) a cellulase having 90% or more homology with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, and the glutamine residue at position 242 of SEQ ID NO: 1 or a position corresponding thereto is replaced with other amino acid residues. The present invention provides a powder detergent composition containing a mutated alkaline cellulase substituted in the above.
[0010]
The present invention also provides a granulated product of the mutant alkaline cellulase (a) described above, wherein the cellulase release rate after 1 minute at 20 ° C. is 50% or more.
[0011]
The present invention also provides detergent particles containing the mutant alkaline cellulase (a), (b) a surfactant, and (c) a builder.
[0012]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The mutant alkaline cellulase of component (a) is a cellulase to be mutated (hereinafter also referred to as “parent alkaline cellulase”) having a homology of 90% or more with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, and the sequence The glutamine residue at position 242 of number 1 or a position corresponding thereto is substituted with another amino acid residue, and these are wild-type mutants or artificially mutated mutants. Also good.
[0013]
The “alkaline cellulase having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1” which is the parent alkaline cellulase is derived from Egl-237 [Bacillus SP KSM-S237 (FERM BP-7875), Hakamada et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 64, 2281-2289, 2000]. The “alkaline cellulase showing 90% or more homology with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1” preferably has 95% or more, more preferably 98% or more homology with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1. Examples include alkaline cellulase, for example, alkaline cellulase (Egl-1139) derived from Bacillus sp. 1139 strain (Fukumori et al., J. Gen, Microbiol, 132, 2329-2335) (homology 91.4%), Bacillus sp. KSM- 64 strain alkaline cellulase (Egl-64) (Sumitomo et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 56, 872-877, 1992) (homology 91.9%), cellulase derived from Bacillus sp. KSM-N131 strain (Egl) -N131b) (Japanese Patent Application No. 2000-47237) (homology 95.0%).
The homology of amino acid sequences can be calculated using programs (software development) such as GENETYX-WIN maximum matching and search homology.
[0014]
The mutant alkaline cellulase of the present invention is obtained by substituting the glutamine residue at position 242 with another amino acid when the cellulase having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is used as the parent alkaline cellulase. When a cellulase having a homology of 90% or more with the amino acid sequence represented by 1 (excluding the alkaline cellulase represented by SEQ ID NO: 1) is used as the parent alkaline cellulase, glutamine at a position corresponding to position 242 of SEQ ID NO: 1 The residue is substituted with another amino acid. As such other amino acid residues, serine residues are preferred.
[0015]
In addition, as a method of specifying “corresponding amino acid residue”, for example, amino acid sequences are compared using a known algorithm such as the Lippmann-Person method, and conserved amino acid residues present in the amino acid sequences of the respective alkaline cellulases. This can be done by giving the group maximum homology. By aligning the amino acid sequences of cellulases in this way, it is possible to determine the positions of homologous amino acid residues in each cellulase sequence regardless of insertions or deletions in the amino acid sequences (FIG. 1). ). The homologous position is considered to exist at the same position in the three-dimensional structure, and it can be estimated that the homologous position has a similar effect on the specific function of the cellulase of interest.
[0016]
If the position corresponding to position 242 of the alkaline cellulase (Egl-237) shown in SEQ ID NO: 1 is shown for Egl-1139, Egl-64 and Egl-N131b described above, position 242 is shown for Egl-1139 and 242 is shown for Egl-64. The position is 228 for Egl-N131b.
[0017]
In addition, the mutant alkaline cellulase of the present invention has, for example, a leucine at position 10 of SEQ ID NO: 1 in addition to the glutamine residue at position 242 of SEQ ID NO: 1 or a position corresponding thereto, as long as the enzyme activity and enzyme properties are not changed. Isoleucine at position 16, Serine at position 22, Asparagine at position 33, Phenylalanine at position 39, Isoleucine at position 76, Phenylalanine at position 263, Threonine at position 308, Asparagine at position 462, Lysine at position 466, Other amino acid residues may be substituted with valine at position 468, isoleucine at position 552, isoleucine at position 564, serine at position 608, and the like.
[0018]
In the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1, preferred specific examples in the case where two or more mutations are simultaneously made are shown below. In the following notation, amino acids are represented by three letters, “+” indicates a substitution added to one substitution, and “/” indicates that any amino acid described may be used. Yes.
For example, as an example of a double substitution product, Leu10 (Gln / Ala / Pro / Met) + Gln242Ser, Gln242Ser + Phe263 (Ile / Leu / Pro / Val), Gln242Ser + Ser608 (Ile / Arg), etc. are preferable, and Ser22Pro + Gln242S is particularly preferable.
[0019]
Examples of triple substitutions include Leu10 (Gln / Ala / Pro / Met) + Ser22Pro + Gln242Ser, Ile16 (Asn / Arg) + Ser22Pro + Gln242Ser, Ile76 (His / Met / Val / Thr / Ala) + Gln242Ser + Lu462Ser + Ler462 Leu10Gln + Ser22Pro + Gln242Ser and Ile16Asn + Ser22Pro + Gln242Ser are particularly preferable.
[0020]
As an example of the quadruple substitution, Ile16 (Asn / Arg) + Met109 (Ile / Leu / Ser / Val) + Gln242Ser + Ile564 (Val / Thr / Leu) is preferable, and Leu10Gln + Ile16Asn + Ile76His + Gln242Ser is particularly preferable.
[0021]
As an example of the 5-fold substitution, Ile16 (Asn / Arg) + Gln242Ser + Thr308 (Ala / Ser / Gly / Val) + Ile552Met + Ser608 (Ile / Arg) is preferable, and Leu10Gln + Ile16Asn + Ile76His + Lle246S + is particularly preferable.
Further, further multiple substitutions, for example, 6-17 substitutions may be used.
[0022]
The mutant alkaline cellulase of the present invention can be obtained, for example, by the following method.
That is, substitution (hereinafter also referred to as “mutation”) is performed on a gene encoding the cloned parent alkaline cellulase (for example, alkaline cellulase having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1), and the obtained mutant gene is used. It is obtained by transforming a suitable host, culturing the recombinant host, and collecting from the culture.
[0023]
The gene encoding the parent alkaline cellulase can be cloned by using a general gene recombination technique, and can be obtained from, for example, the chromosome of Bacillus sp. KSM-S237 by a shotgun method or a PCR method.
[0024]
As a means for mutating a gene encoding a parent alkaline cellulase, any of the commonly used methods of random mutation and part-specific mutation can be employed. More specifically, it can be performed using, for example, the Site-Directed Mutagenesis System Mutan-Super Express Km kit (manufactured by Takara). Further, by using a recombinant PCR (polymerase chain reaction) method (PCR protocols, Academic press, New York, 1990), an arbitrary sequence of a gene can be replaced with a sequence corresponding to the arbitrary sequence of another gene. Is possible.
[0025]
Production of the mutated alkaline cellulase of the present invention using the obtained mutant gene is capable of maintaining replication in the host cell body, can stably express the enzyme, and the gene can be stably stored in the vector. May be carried out by transforming a host bacterium using the obtained recombinant vector.
[0026]
Examples of such vectors include pUC18, pBR322, pHY300PLK (Yakult Headquarters) and the like when Escherichia coli is used as a host, and pUB110, pHSP64 (Sumitomo et al., Biosci. Biotechnol, Biocem., 59, 2172-2175, 1995) or pHY300PLK.
[0027]
Transformation of the host bacteria can be performed using a protoplast method, a competent cell method, an electroporation method, or the like. Host bacteria are not particularly limited, and Gram-positive bacteria such as Bacillus (Bacillus subtilis), Gram-negative bacteria such as Escherichia coli, actinomycetes such as Streptomyces, yeasts such as Saccharomyces, and molds such as Aspergillus. .
[0028]
The obtained transformant may be cultured under suitable conditions using a medium containing an assimilating carbon source, nitrogen source, metal salt, vitamin and the like. From the culture solution thus obtained, the enzyme can be fractionated and purified by a general method, and the necessary enzyme form can be obtained by ultrafiltration concentration, freeze drying, spray drying, crystallization, and the like.
[0029]
The mutant alkaline cellulase of the present invention thus obtained has excellent heat resistance, excellent detergency, and higher specific activity.
[0030]
The content of the component (a) is preferably 0.0001 to 5% by mass, more preferably 0.0005 to 2.5% by mass, and 0.001 to 2% by mass in the powder cleaning composition. Is more preferable. In addition, the content of the component (a) in the granulated product when used as an enzyme granulated product is preferably 0.01 to 50% by mass, more preferably 0.05 to 25% by mass, and 0 More preferably, the content is 1 to 20% by mass.
[0031]
Further, a stirrer 100 min of 100 mL of 0.9 mass% NaCl aqueous solution at 20 ° C.^-1The amount of cellulase released after 1 minute is divided by the amount of cellulase at the time of complete dissolution, and the release rate is preferably 50% or more in terms of washing performance. It is preferably 60% or more, more preferably 70% or more, and particularly preferably 80% or more.
[0032]
The powder cleaning composition of the present invention preferably contains (b) a surfactant and (c) a builder in addition to the component (a).
Examples of the component (b) surfactant include one or a combination of an anionic surfactant, a nonionic surfactant, an amphoteric surfactant, and a cationic surfactant. Anionic surfactants and nonionic surfactants.
[0033]
Examples of the anionic surfactant include a sulfate ester salt of an alcohol having 10 to 18 carbon atoms, a sulfate ester salt of an alkoxylate of an alcohol having 8 to 20 carbon atoms, an alkylbenzene sulfonate, an alkyl sulfate ester salt, and a paraffin sulfonate. , Α-olefin sulfonate, α-sulfo fatty acid salt, α-sulfo fatty acid alkyl ester salt or fatty acid salt are preferred. In the present invention, a linear alkyl benzene sulfonate having an alkyl chain having 10 to 14 carbon atoms, more preferably 12 to 14 carbon atoms is particularly preferable. As a counter ion of these salts, alkali metal salts and amines are preferable, and sodium and / or potassium, monoethanolamine, and diethanolamine are particularly preferable.
[0034]
Nonionic surfactants include polyoxyalkylene alkyl (carbon number 8-20) ether, alkyl polyglycoside, polyoxyalkylene alkyl (carbon number 8-20) phenyl ether, polyoxyalkylene sorbitan fatty acid (carbon number 8-8). 22) Ester, polyoxyalkylene glycol fatty acid (carbon number 8 to 22) ester, and polyoxyethylene polyoxypropylene block polymer are preferable. In particular, as a nonionic surfactant, 4 to 20 moles of alkylene oxide such as ethylene oxide or propylene oxide is added to an alcohol having 10 to 18 carbon atoms [HLB value (calculated by Griffin method) is 10.5 to 15. 0, preferably from 11.0 to 14.5] polyoxyalkylene alkyl ethers are preferred.
[0035]
(B) From the viewpoint of detergency and solubility, the total amount of the component surfactant is preferably 10 to 60% by mass, more preferably 15 to 50% by mass, and more preferably 20 to 20% by mass. More preferred is 45% by mass.
The anionic surfactant is preferably 1 to 60% by mass, more preferably 1 to 50% by mass, and particularly preferably 3 to 40% by mass in the powder detergent composition.
The nonionic surfactant is preferably 0.5 to 45% by mass in the powder detergent composition, more preferably 1 to 35% by mass, and particularly preferably 3 to 25% by mass.
The anionic surfactant and the nonionic surfactant can be used alone, but preferably mixed and used. Further, amphoteric surfactants and cationic surfactants can be used in combination for the purpose.
[0036]
(C) The builder of the component itself has no detergency itself, or it is not so remarkably present, but when incorporated in a powder detergent composition, the detergent performance is remarkably improved. The surfactant can improve the cleaning ability of the surfactant, and has at least one of a multivalent metal cation trapping action, a soil dispersing action and an alkali buffering action.
Examples of such a builder include a water-soluble inorganic compound, a water-insoluble inorganic compound, and an organic compound.
[0037]
Examples of the water-soluble inorganic compound include phosphates (tripolyphosphate, pyrophosphate, metaphosphate, trisodium phosphate, etc.), silicates, carbonates, sulfates, and the like. Among these, phosphate is preferable because it has all three functions.
[0038]
Examples of the water-insoluble inorganic compound include aluminosilicate (A-type zeolite, P-type zeolite, X-type zeolite, amorphous aluminosilicate, etc.), crystalline silicate, and the like. Among these, A-type zeolite having a particle size of 3 μm or less (more preferably 1 μm or less) is preferable.
[0039]
Organic compounds include carboxylates (aminocarboxylates, hydroxyaminocarboxylates, hydroxycarboxylates, cyclocarboxylates, maleic acid derivatives, oxalates, etc.), organic carboxylic acid (salt) polymers (acrylic acid) Polymer and copolymer, polyvalent carboxylic acid polymer and copolymer, glyoxylic acid polymer, polysaccharides and salts thereof, and the like. Of these, organic carboxylic acid (salt) polymers are preferred.
[0040]
In the builder salt, the counter ion is preferably an alkali metal salt or an amine, and particularly preferably sodium and / or potassium, monoethanolamine, or diethanolamine.
[0041]
These builders can be used alone or in combination of two or more, but preferably contain a water-soluble inorganic compound, more preferably use a water-soluble inorganic compound and an organic compound in combination, a water-soluble inorganic compound, It is more preferable to use an organic compound and a water-insoluble inorganic compound in combination.
[0042]
(C) From the viewpoint of cleaning performance, the total amount of component builders is preferably 20 to 80% by mass, more preferably 30 to 70% by mass, and further 35 to 60% by mass in the powder cleaning composition. preferable.
Moreover, it is preferable that water-soluble inorganic compound builder is 10-50 mass% in a powder cleaning composition, 15-45 mass% is more preferable, and 20-40 mass% is still more preferable.
The water-insoluble inorganic compound builder is preferably 5 to 50% by mass in the powder detergent composition, more preferably 10 to 45% by mass, and still more preferably 15 to 40% by mass.
The organic compound builder is preferably 0.1 to 20% by mass in the powder detergent composition, more preferably 0.3 to 15% by mass, and still more preferably 0.5 to 10% by mass.
[0043]
In addition to the above components (a) to (c), the powder cleaning composition of the present invention includes a bleaching agent (percarbonate, perborate, bleach activator, etc.), a recontamination inhibitor (carboxymethylcellulose). Etc.), softening agents (dialkyl quaternary ammonium salts, clay minerals, etc.), reducing agents (sulfites, etc.), optical brighteners (biphenyl type, aminostilbene type, etc.), foam control agents (silicone, etc.), Additives such as fragrances and other enzymes (protease, pectinase, amylase, lipase, etc.) can be contained. You may mix | blend these with a powder cleaning composition as another particle | grain.
[0044]
The powder cleaning composition of the present invention containing the above components is an enzyme granulated product comprising the component (a) (hereinafter also referred to as “particle (I)”) and a detergent base (b) and (c) component. It is preferable that it is a composition containing the particle | grains (it is also hereafter called "particle | grain (II)") containing or the cleaning agent particle | grains which contain (a)-(c) component in one particle | grain.
[0045]
The enzyme granulated product comprising the component (a) has a cellulase release rate of 50% or more after 1 minute at 20 ° C., preferably 60% or more, more preferably 70% or more, particularly preferably from the viewpoint of washing efficiency. 80% or more of the particles (particle (I)) are preferred.
Here, the cellulase release rate refers to a 100 mL melt beaker (inner diameter: 50 mm), 100 mL of a 0.9 mass% NaCl aqueous solution at 20 ° C., and a stirrer (length: 35 mm, diameter: 8 mm) rotation speed: 100 min.^-1The amount of cellulase activity released after 1 minute was divided by the amount of cellulase activity at the time of complete dissolution, and the value obtained was multiplied by 100. In addition, what is necessary is just to measure a cellulase activity amount by a well-known method (Unexamined-Japanese-Patent No. 10-313859).
[0046]
From the viewpoint of non-classification, the enzyme granulated product preferably has an apparent density of 500 to 1600 g / L, more preferably 600 to 1500 g / L, measured by a method defined by JIS K 3362: 1998. Particularly preferably, it is 700 to 1400 g / L.
In addition, from the viewpoint of high-speed solubility, low dust generation, and non-classification, the average particle size determined from the weight fraction according to the size of the sieve mesh after being vibrated for 5 minutes using a standard sieve of JIS Z 8801 is 150 It is preferable that it is -1200 micrometers, More preferably, it is 150-1000 micrometers, Especially preferably, it is 200-900 micrometers.
In addition, from the viewpoint of dust generation and solubility, the particle size of 125 to 710 μm is preferably 80% by mass or more, more preferably 90% by mass or more of the whole enzyme granulated product.
[0047]
The content of cellulase in the enzyme granulated product is preferably 0.02 to 20% by mass, more preferably 0.05 to 15% by mass, from the viewpoints of granulation property, solubility and cleaning performance, and 0 More preferably, the content is 1 to 10% by mass.
[0048]
The enzyme granulated product of the present invention is preferably a granulated product of (I-1) and / or (I-2) shown below, from the viewpoint of high-speed solubility and low dust generation (I-2 It is more preferable that the product is a granulated product.
[0049]
The granulated product of (I-1) is obtained by granulating cellulase together with a core material composed of water-soluble particles having an average particle diameter of 200 to 1200 μm and a water-soluble organic binder having a melting point of 35 to 70 ° C. A granulated product having an average particle size of 1 to 2 times the average particle size of the core material.
[0050]
Examples of the nuclear material include water-soluble particles such as sodium chloride, potassium chloride, sodium sulfate, sodium carbonate, sugar, and sodium chloride is preferable. The average particle size of the nuclear material is preferably 200 to 1200 μm, more preferably 250 to 1000 μm, from the viewpoints of solubility, the appearance of the final final enzyme particles mixed with detergent particles, and the non-classification property. preferable. The average particle size can be determined from the weight fraction according to the size of the mesh after vibrating for 5 minutes using a standard sieve of JIS Z 8801.
The content of the nuclear material is preferably 30 to 80% by mass and more preferably 40 to 70% by mass in the granulated product of (I-1) from the viewpoint of granulation property and solubility.
[0051]
Examples of the water-soluble organic binder include polyethylene glycol, nonionic surfactants (polyoxyethylene-polyoxypropylene glycol, polyoxyethylene / alkyl ether, etc.), among which polyethylene glycol is preferable. From the viewpoint of productivity, the amount of the water-soluble organic binder is preferably 5 to 60 parts by weight with respect to 100 parts by weight of the core material.
[0052]
The melting point of the water-soluble organic binder is preferably 35 to 70 ° C, more preferably 40 to 70 ° C, still more preferably 45 to 68 ° C. The melting point can be measured by a visual method defined in JIS K0064: 1992.
A known method may be used as a method for producing a granulated product of (I-1) by granulating cellulase together with a nuclear substance and a water-soluble organic binder. For example, the granulation described in JP-A-62-2579990 may be used. The grain method is preferred.
[0053]
The average particle size of the granulated product (I-1) obtained as described above is preferably 1 to 2 times the average particle size of the core material from the viewpoint of solubility and non-classification, 1.5 times is more preferable.
[0054]
The granulated product of (I-2) contains cellulase, 45% by mass or more of a water-insoluble substance, and 5 to 40% by mass of a water-soluble binder, and has a structure in which more water-soluble binder exists near the surface than inside. It is a granulated product.
[0055]
Examples of water-insoluble substances include organic substances such as cellulose powder, inorganic substances such as zeolite, talc, clay, alumina, kaolin, titania, calcium carbonate, and barium sulfate, and inorganic substances are preferred from the viewpoint of heat stability. Of these, zeolite and kaolin are particularly preferred from the viewpoint of dispersibility. In terms of uniformity, the water-insoluble substance preferably has an average primary particle size of 20 μm or less, more preferably 10 μm or less, and particularly preferably 0.1 to 5 μm.
The content of the water-insoluble substance in the granulated product (I-2) is preferably 45% by mass or more, more preferably 50% by mass or more, from the viewpoint of promoting rapid elution of the enzyme.
On the other hand, it is preferably 90% by mass or less, more preferably 80% by mass or less, and particularly preferably 70% by mass or less from the viewpoint of preventing undissolved residue.
[0056]
Examples of the water-soluble binder include polyethylene glycol and derivatives thereof, polyvinyl alcohol and derivatives thereof, water-soluble cellulose derivatives, carboxylic acid polymers, starch, saccharides and the like. Examples of the derivatives include ether compounds. Among them, carboxylic acid polymers and saccharides are preferable from the viewpoint of productivity and high-speed solubility, and salts of acrylic acid-maleic acid copolymers and polyacrylates are more preferable. As the salt, sodium salt, potassium salt, and ammonium salt are preferable. Mixing the water-soluble binder is preferable in terms of improving the particle strength and promptly disintegrating the particles.
The content of the water-soluble binder in the granulated product of (I-2) is preferably 5% by mass or more, more preferably 10% by mass or more, and more preferably 15% by mass or more from the viewpoint of low dust generation. preferable. Further, from the viewpoint of fast solubility, it is preferably 40% by mass or less, more preferably 35% by mass or less, and further preferably 30% by mass or less.
[0057]
The granulated product of (I-2) has a structure in which more water-soluble binder exists near the surface than inside the particle. For example, the cellulase, the water-insoluble substance, and the water-soluble binder are mixed, Preferably, the slurry is made into a slurry having a water content of 30 to 60% by mass, and then the slurry is spray-dried. The temperature of the hot air during spray drying is preferably 140 to 210 ° C. in terms of enzyme stability and productivity. Other spray drying conditions are not particularly limited.
[0058]
In addition, confirmation of the uneven distribution of the water-soluble binder in the cellulase granulated product is, for example, a method (FT-IR / PAS) that uses Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR) or photoacoustic spectroscopy (PAS) in combination. Can be used. These are methods for analyzing the distribution of substances in the depth direction from the particle surface as described in Applied Spectroscopy vol.47, 1311-1316 (1993), thereby confirming the uneven distribution of water-soluble components. be able to.
[0059]
The enzyme granulated product is preferably 0.01 to 10% by mass, more preferably 0.05 to 8% by mass, and more preferably 0.1 to 5% by mass in the detergent composition in terms of cleaning performance and economy. Is more preferable.
[0060]
The particles (II) composed of the components (b) and (c) contain the components (b) and (c) from the viewpoint of washing efficiency, and release the component (b) after 1 minute at 20 ° C. It is preferable that the particles have a rate of 60% or more, preferably 70% or more, more preferably 80% or more.
Here, the surfactant release rate can be measured based on the surfactant quantification method described in JIS K 3362: 1998.
[0061]
The particles (II) are preferably subjected to surface modification with a surface coating agent in terms of fluidity and non-caking property, and the surface coating agent is preferably 1 to 30% by mass in the particles (II). 2-15 mass% is more preferable, and 5-10 mass% is still more preferable.
Examples of the surface coating agent include aluminosilicates, calcium silicates, silicon dioxide, bentonite, talc, clay, amorphous silica derivatives, crystalline silicate compounds such as silicate compounds, metal soaps, powder surfactants, etc. Water-soluble polymers such as fine powders, carboxymethylcellulose, polyethylene glycol, sodium polyacrylate, polycarboxylic acid salts such as copolymers of acrylic acid and maleic acid or salts thereof; and fatty acids. Of these, water-insoluble inorganic substances are preferred, and crystalline aluminosilicates, amorphous aluminosilicates, and crystalline silicate compounds are particularly preferred.
[0062]
Particle (II) contains (b) component, a method for producing particle (II-1) obtained by mixing and drying at least part of component (c), and contains an anionic surfactant as component (b) And a step of mixing and neutralizing the liquid acid precursor of the anionic surfactant and a particulate solid water-soluble alkaline inorganic substance in an amount more than necessary to neutralize the anionic surfactant. It can obtain by the manufacturing method of particle | grains (II-2) to obtain. Among these, the production method of the particles (II-1) is preferable in terms of cleaning performance and solubility.
[0063]
That is, particles (II-1) can be obtained by mixing at least a part of component (b) and component (c) as a slurry and spray drying. Depending on the case, the remainder of the component (b) and the component (c) may be added later. If a higher apparent density is desired, the remainder of the component (b) and the component (c) may be added later. Can be granulated. From the viewpoint of solubility, it is preferable to maintain pores inside the particles without destroying the spray-dried particle structure. In this respect, a method of absorbing and supporting the liquid containing the component (b) while maintaining pores inside the spray-dried particles is more preferable.
[0064]
The particle (II-2) contains an anionic surfactant as the component (b), and the particulate solid water-soluble alkaline inorganic substance is added in an amount more than necessary to neutralize the anionic surfactant. By adding a liquid acid precursor of an anionic surfactant, the liquid acid precursor can be neutralized and granulated to obtain particles.
[0065]
The apparent density of the particles (II) is preferably 500 to 1200 g / L, more preferably 600 to 1000 g / L, and particularly preferably 650 to 850 g / L. From the viewpoint of economic efficiency, the apparent density is preferably 500 g / L or more, and preferably 1200 g / L or less from the viewpoint of solubility.
[0066]
The average particle diameter of the particles (II) is preferably 150 to 800 μm, more preferably 250 to 750 μm, and particularly preferably 300 to 700 μm. Further, from the viewpoint of preventing pasting, 150 μm or more is preferable, and from the viewpoint of solubility, 800 μm or less is preferable.
[0067]
As a moisture value of particle | grains (II), it is preferable that it is 10 mass% or less from a viewpoint of quality, and 5 mass% or less is more preferable.
[0068]
The detergent particles containing the components (a) to (c) can be produced as follows.
That is, production method A: a method obtained by mixing and drying at least a part of component (a), component (b) and component (c), method B: at least of component (b) and component (c) A method obtained by mixing a part and then drying, adding a liquid containing the component (a) to the component and supporting the component (a), and manufacturing method C: containing an anionic surfactant as the component (b) A step of mixing and neutralizing the liquid acid precursor of the anionic surfactant and a particulate solid water-soluble alkali inorganic substance in an amount more than necessary to neutralize the anionic surfactant; and It can be obtained by, for example, a method obtained by adding a liquid containing the component (a) and supporting the component (a). Among them, production method B is preferable in terms of cleaning performance, solubility and enzyme stability.
[0069]
According to the manufacturing method A, at least a part of the component (a), the component (b), and the component (c) are mixed as a slurry, and cleaning particles can be obtained by spray drying. In some cases, the remainder of the component (b) and the component (c) may be added later, or if the higher apparent density is desired, the remainder of the component (b) and the component (c) may be added later. Can be granulated. From the viewpoint of solubility, it is preferable to maintain pores inside the particles without destroying the spray-dried particle structure. In this respect, a method of absorbing and supporting the liquid containing the component (b) while maintaining pores inside the spray-dried particles is more preferable.
[0070]
According to the production method B, at least a part of the component (b) and the component (c) is mixed as a slurry and then spray-dried, and a liquid containing the component (a) is added thereto to support the component (a). Cleaning agent particles can be obtained. Depending on the case, the remainder of the component (b) and the component (c) may be added later. If a higher apparent density is desired, the remainder of the component (b) and the component (c) may be added later. Can be granulated. From the viewpoint of solubility, it is preferable to maintain pores inside the particles without destroying the spray-dried particle structure. In this respect, a method of absorbing and supporting the liquid containing the component (b) while maintaining pores inside the spray-dried particles is more preferable.
[0071]
According to the production method C, the anionic surfactant is contained as the component (b), and the anionic surfactant is added to the particulate solid water-soluble alkaline inorganic substance in an amount more than necessary to neutralize the anionic surfactant. A method of neutralizing the liquid acid precursor by adding a liquid acid precursor of a surfactant and adding a liquid containing the component (a) in the process of granulating the precursor, thereby supporting the component (a) Is more preferable.
[0072]
The detergent particles are preferably subjected to surface modification with a surface coating agent in terms of fluidity and non-caking property. The surface coating agent is preferably 1 to 30% by mass in the detergent particles, more preferably 2 to 15% by mass, and still more preferably 5 to 10% by mass. As the surface coating agent, the same materials as those mentioned for the particles (II) can be used.
[0073]
The powder detergent composition of the present invention thus obtained is a detergent composition determined from the mass fraction according to the size of the sieve mesh after being vibrated for 5 minutes using a standard sieve of JIS Z8801 from the viewpoint of solubility. The average particle size is preferably 150 to 1000 μm, more preferably 150 to 800 μm, and still more preferably 180 to 600 μm.
[0074]
Further, the apparent density measured by the method defined by JIS K 3362: 1998 is preferably 1600 g / L or less, more preferably 1300 g / L or less, and still more preferably 1000 g / L or less from the viewpoint of solubility. . From the viewpoint of convenience and reduction of waste (such as boxes), the apparent density is preferably 300 g / L or more, more preferably 600 g / L or more, and further preferably 700 g / L or more.
[0075]
From the viewpoint of convenience, the cleaning composition of the present invention may be compressed into a tablet form, or a single use amount may be stored in a water-soluble or water-insoluble container.
[0076]
【Example】
Production Example 1
(1) Alkaline cellulase gene mutant preparation
Recombined into E. coli-Bacillus subtilis shuttle vector pHY300PLK as template DNABacillus sp. The alkaline cellulase gene derived from KSM-S237 strain was used.
[0077]
Site-specific displacement Leu10Gln, Ile16Asn, Ser22Pro, Ile76His, Gln242Ser, Lys466Leu for introducing mutagenesis primers Leu10Gln (SEQ ID NO: 2), Ile16Asn (SEQ ID NO: 3), Ser22Pro (SEQ ID NO: 4), Ile76His ), Gln242Ser (SEQ ID NO: 6) and Lys466Leu (SEQ ID NO: 7) were used to construct an appropriate counter primer present in the alkaline cellulase gene, and the mutation was introduced together with the template DNA.
[0078]
Namely, template DNA plasmid 0.5 μL (10 ng), mutagenesis primer 20 μL (1 μM), counter primer 20 μL (1 μM), 10-fold concentration of PCR buffer 10 μL, 10 mM deoxynucleotide triphosphate (dNTP) mixed solution 8 μL, After mixing 0.5 μL of Pyrobest DNA polymerase (2.5 units, manufactured by Takara) and 39.5 μL of deionized water, PCR was performed using gene amp PCR system 9700 (manufactured by Amersham Pharmacia). Reaction conditions were 94 ° C for 1 minute, 94 ° C for 1 minute, 56 ° C for 1 minute, 72 ° C for 30 seconds (30 cycles) and 72 ° C for 1 minute after heat denaturation at 94 ° C for 2 minutes. The obtained PCR product was purified with GFX PCR DNA and gel band purification kit (Amersham Pharmacia) (43.5 μL), 5.5 μL of 10-fold phosphorylation buffer and polynucleotide kinase 1 μL (10 units). In addition, phosphorylation reaction was performed at 37 ° C. for 1 hour for purification (50 μL). 25 μL of the phosphorylated PCR product was mixed with 2 μL (20 ng) of the template plasmid, 10 μL of 10-fold concentration buffer for PCR, 8 μL of 10 mM dNTP mixed solution, 1 μL of Pyrobest DNA polymerer (5 units), and 54 μL of deionized water. Went. The reaction conditions were 94 ° C for 2 minutes, followed by heat denaturation at 94 ° C for 1 minute, 60 ° C for 1 minute, 72 ° C for 6 minutes (30 cycles), and 72 ° C for 12 minutes.
After purification of the obtained PCR product (43.5 μL), 5.5 μL of 10-fold concentration phosphorylation buffer and 1 μL (10 units) of polynucleotide kinase were added, followed by phosphorylation at 37 ° C. for 1 hour. And ethanol precipitation (10 μL). The recovered 10 μL of DNA solution was ligated kit ver. 2 (manufactured by Takara) was subjected to a ligation reaction at 16 ° C. for 18 hours, self-cyclized, and then ethanol precipitated again to recover a DNA mixture.
[0079]
(2) Transformation method
Using 5 μL of the DNA mixture obtained in (1), the method of Chang et al. (Chang and Cohen, Mol. Gen. Gent., 168, 111-115, 1979)Bacillus subtilisA transformant was obtained by introducing the strain ISW1214. That is, the host fungus B. Subtilis ISW1214 strain was shaken and cultured in 50 mL of LB medium at 37 ° C. for about 2 hours (absorbance at 600 nm was 0.4) and then centrifuged at room temperature (7000 min)^-115 minutes), and the cells are collected and suspended in 5 mL of SMMP [0.5 M sucrose, 20 mM disodium maleate, 20 mM magnesium chloride hexahydrate, 35% (w / v) antibiotic medium 3 (Difco)]. Thereafter, 500 μL of lysozyme solution (30 mg / mL) dissolved in the SMMP solution was added, and the mixture was kept at 37 ° C. for 1 hour. After incubation, centrifuge at room temperature (2800 min^-115 minutes), and the protoplasts were collected and suspended in 5 mL of SMMP to prepare a protoplast solution. Add 10 μL of the plasmid solution and 1.5 mL of 40% (w / v) polyethylene glycol (PEG 8000, Sigma) to 0.5 mL of the protoplast solution, gently stir and leave at room temperature for 2 minutes, then immediately add 5 mL of Mix the SMMP solution and centrifuge at room temperature (2800 min^-1The protoplasts were collected and resuspended in 1 mL SMMP solution. Shake the protoplast suspension at 37 ° C for 90 minutes (120 min^-1) DM3 regeneration agar medium containing tetracycline (15 μg / mL, manufactured by Sigma) [0.8% (w / v) agar (manufactured by Wako Pure Chemical Industries), 0.5% disodium succinate hexahydrate, 0 .5% casamino acid technical (Difco), 0.5% yeast extract, 0.35% monopotassium phosphate, 0.155% dipotassium phosphate, 0.5% glucose, 0.4% magnesium chloride 6 water Salt, 0.01% bovine serum albumin (manufactured by Sigma), 0.5% carboxymethyl cellulose, 0.005% trypan blue (manufactured by Merck) and amino acid mixture (leucine, methionine 10 μg / mL)] And transformed for 72 hours. On a DM3 regenerated agar plate medium, halo-formed transformants were cultured in a polypeptone medium containing tetracycline (15 μg / mL) with shaking at 30 ° C. for 15 hours, and after collection, the micro prep plasmid purification kit ( The plasmid was recovered and purified by Amersham Pharmacia).
[0080]
(3) Determination of base sequence
Confirmation of the base sequence of the cellulase gene inserted into the plasmid obtained in (2) was performed using a 377 DNA sequencer (Applied Biosystems).
[0081]
Production Example 2 Production of enzyme granules
(1) Production of enzyme granulated product-1
Mutant alkaline cellulase (40000 U / g) obtained by substituting glutamine at position 242 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 with 2% by mass, nuclear material (sodium chloride having an average particle size of 250 μm) 45% by mass, binder (polyethylene glycol 6000) 15% by mass, 5% by mass of titanium oxide, 1% by mass of calcium chloride, and 32% by mass of sodium sulfate were granulated to obtain a granulated product having an average particle size of 350 μm.
The particles of 125 to 710 μm were 90% by mass or more, and the apparent density was 830 g / L.
[0082]
(2) Production of enzyme granulated product-2
Mutant alkaline cellulase (40000 U / g) obtained by substituting glutamine at position 242 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 with serine, 65 parts by mass of water-insoluble substance (zeolite), water-soluble binder (polyacrylic acid / martite = 1) / 1) A slurry having a water content of 55% by mass, which was 25 parts by mass and 4 parts by mass of sodium sulfate, was prepared. Next, this was spray-dried to obtain a granulated product having a water content of 4% by mass and an average particle size of 250 μm.
The particles of 125 to 710 μm were 90% by mass or more, and the apparent density was 810 g / L. Moreover, many water-soluble binders existed in the surface vicinity.
[0083]
(3) Production of enzyme granulated product-3
Granulation was carried out in the same manner except that the cellulase used in enzyme granulation-1 was replaced with a mutant alkaline cellulase in which the serine at position 22 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 was replaced with proline and glutamine at position 242 was replaced with serine. I got a thing.
The particles of 125 to 710 μm were 90% by mass or more, and the apparent density was 830 g / L.
[0084]
(4) Production of enzyme granule-4
Granulation was carried out in the same manner except that the cellulase used in enzyme granulation-2 was replaced with a mutant alkaline cellulase in which the serine at position 22 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 was replaced with proline and glutamine at position 242 was replaced with serine. I got a thing.
The particles of 125 to 710 μm were 90% by mass or more, and the apparent density was 810 g / L. Moreover, many water-soluble binders existed in the surface vicinity.
[0085]
(5) Production of enzyme granulated product-5
The cellulase used in Enzyme Granule-1 was replaced with a mutant alkaline cellulase in which leucine at position 10 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 was replaced with glutamine, serine at position 22 was replaced with proline, and glutamine at position 242 was replaced with serine. An enzyme granulated product was obtained in the same manner except that.
The particles of 125 to 710 μm were 90% by mass or more, and the apparent density was 820 g / L.
[0086]
(6) Production of enzyme granulated product-6
The cellulase used in Enzyme Granules-2 was replaced with a mutant alkaline cellulase in which leucine at position 10 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 was replaced with glutamine, serine at position 22 was replaced with proline, and glutamine at position 242 was replaced with serine. An enzyme granulated product was obtained in the same manner except that.
The particles of 125 to 710 μm were 90% by mass or more, and the apparent density was 800 g / L. Moreover, many water-soluble binders existed in the surface vicinity.
[0087]
(7) Production of enzyme granulated product-7
The cellulase used in the enzyme granule-1 was the leucine at position 10 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 as glutamine, the isoleucine at position 16 asparagine, the isoleucine at position 76 as histidine, and the glutamine at position 242 as serine. In addition, an enzyme granule was obtained in the same manner except that lysine at position 466 was replaced with a mutant alkaline cellulase in which leucine was replaced.
The particles of 125 to 710 μm were 90% by mass or more, and the apparent density was 820 g / L.
[0088]
(8) Production of enzyme granulated product-8
The cellulase used in the enzyme granulated product-2 was the leucine at position 10 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 as glutamine, isoleucine at position 16 asparagine, isoleucine at position 76 as histidine, and glutamine at position 242 as serine. In addition, an enzyme granule was obtained in the same manner except that lysine at position 466 was replaced with a mutant alkaline cellulase in which leucine was replaced.
The particles of 125 to 710 μm were 90% by mass or more, and the apparent density was 820 g / L. Moreover, many water-soluble binders existed in the surface vicinity.
[0089]
Production Example 3 Production of detergent base
(1) Manufacture of detergent base-1
Based on the weight of all detergent bases, linear alkyl (10 to 13 carbon atoms) sodium benzenesulfonate 20% by mass, sodium tripolyphosphate 17% by mass, sodium carbonate 10% by mass, sodium sulfate 22% by mass, No. 1 silicic acid Sodium 14 mass%, polyethylene glycol (MW = 13000) 0.3 mass%, acrylic acid-maleic acid copolymer (sodium salt (70 mol% neutralized), monomer ratio is acrylic acid / maleic acid = 3/7 (molar ratio) ), Average molecular weight 70000) 0.3% by mass, carboxymethylcellulose 0.2% by mass, Tinopearl CBS-X (manufactured by Ciba Specialty Chemicals) 0.05% by mass, Tinopearl AMS-GX (manufactured by Ciba Specialty Chemicals) 0. From a solid content of 50 mass% and sodium sulfite 0.5 mass% The amount% slurry to yield the spray-dried particles by spray drying. Next, 10% by mass of 4A zeolite (manufactured by Tosoh Corp.) and 0.3% by mass of a fragrance were mixed on the basis of mass in the total detergent base to obtain a detergent base. The average particle size of the detergent base was 300 μm, and the apparent density was 450 g / L.
[0090]
(2) Manufacture of detergent base-2
A slurry having a solid content of 48% by mass is spray-dried at a hot air temperature of 250 ° C., 8% by mass of sodium polyacrylate (average molecular weight 10,000), 30% by mass of sodium carbonate, 20% by mass of sodium sulfate, 5% by mass of sodium chloride, and fluorescence. Spray-dried particles of 0.5% by mass of dye and 35% by mass of zeolite were obtained. Next, 100 parts by mass of the spray-dried particles were put into a Redige mixer (Matsusaka Giken Co., Ltd., capacity 20 L, with jacket) and the main shaft (150 min.^-1), 18 parts by mass of a nonionic surfactant, 20 parts by mass of linear alkyl (carbon number 10 to 13) sodium benzenesulfonate, 5 parts by mass of sodium fatty acid (14 to 18 carbon atoms), polyethylene glycol (average molecular weight) 8500) A mixed solution of 3 parts by mass and 4 parts by mass of water was added in 3 minutes, and then stirred for 5 minutes. Further, 15 parts by mass of crystalline silicate, 15 parts by mass of zeolite, and 0.3 parts by mass of fragrance were added to this mixer, and surface coating was performed to obtain a detergent base. The resulting detergent base had an apparent density of 820 g / L and an average particle size of 320 μm.
[0091]
(3) Manufacture of detergent base-3
14% by mass of linear alkylbenzene sulfonate (C10-14), 12% by mass of α-olefin sulfonate (C14-14), polyoxyethylene alkyl ether (C12-14, EO12) based on the final detergent base 8% by weight, polyethylene glycol (average molecular weight = 8500) 1% by weight, zeolite 18% by weight, acrylic acid-maleic acid copolymer (average molecular weight = 70,000) 0.5% by weight, fatty acid potassium (derived from palm kernel oil) 4% by weight No. 1 silicate 4% by mass, potassium carbonate 8% by mass, sodium sulfate 2% by mass, sodium sulfite 1% by mass and a fluorescent dye 0.3% by mass (solid content 50% by mass) Spray-dried composition was obtained by spray-drying. This was mixed by adding 13% by mass of sodium carbonate into a ribbon mixer based on the weight of the final detergent base. The obtained mixture was extruded into a columnar shape having a diameter of 10 mm with a pre-extrusion type twin-screw type extrusion granulator (Peletter Double: manufactured by Fuji Powder Co., Ltd.) to be consolidated. The obtained pellet-like material was pulverized and granulated with 5% by mass of zeolite with a flash mill (produced by Fuji Powder Co., Ltd.) to perform surface coating. After removing the coarse product from this granulated product, it was transferred to a V blender and mixed with 5% by mass of zeolite to obtain a detergent base having a moisture content of 4.2% by mass. The resulting detergent base had an apparent density of 820 g / L and an average particle size of 390 μm.
[0092]
Examples 1-13
With the combinations shown in Table 1, the enzyme granulated product and the detergent base were mixed to obtain a powder cleaning composition.
[0093]
Comparative Examples 1-6
The enzyme granulations 1 to 4 were replaced with commercially available “Cellzyme 0.7T” or “Carezyme 4500T” (manufactured by Novozymes) to obtain a powder detergent composition having the same active amount (Table 2). ).
Each detergent composition was evaluated for solubility, detergency, odor, and anti-recontamination property. The results are shown in Table 1 and Table 2 together. In addition, the cellulase release rate was 60% or more in each of Examples 1 to 13, but less than 50% in the comparative example.
[0094]
[Table 1]

[0095]
[Table 2]

[0096]
<Solubility evaluation>
A 1 L beaker (inner diameter 105 mm) with 5 ° C. hard water (71.2 mg CaCO_Three/ L, Ca / Mg molar ratio 7/3) 1L is added, and the number of rotations of the stirrer (length 35 mm, diameter 8 mm) is 800 min.^-1Under stirring, 1 g of the enzyme granulated product or cleaning composition was added, stirred for 60 seconds, and passed through a standard sieve (mesh size 74 μm) defined in JIS Z8801. The state on the sieve at this time was visually determined according to the following criteria.
[0097]
Evaluation criteria:
○: No residue
×: Residue can be confirmed
[0098]
<Detergency evaluation>
First, an oil / carbon stain including the components shown in Table 3 was dyed on a cotton / gold cloth to prepare an artificially contaminated cloth (6 × 6 cm).
[0099]
[Table 3]

[0100]
Next, water used at 40 ° C. (CaCl₂: 55.42 mg / L, MgCl₂・ 6H₂167 mL of O: 43.51 mg / L) was placed in a 1 L beaker (inner diameter: 105 mm), 0.67 g of the detergent composition was dissolved, and 5 pieces of the artificially contaminated cloth were put in this, and the mixture was soaked at 40 ° C. for 1 hour. did. Next, 833 mL of water used at 40 ° C. (same as above) was added, and the entire amount was transferred to a sample cup of a stirring type detergency tester (targotometer), and the rotation speed was 100 min.^-1For 10 minutes. The artificially contaminated cloth was rinsed under running water, then iron-pressed, and subjected to reflectance measurement.
The reflectance at 550 nm of the raw cloth before contamination and the contaminated cloth before and after washing is measured with a self-recording color meter (manufactured by Shimadzu Corporation), and the washing rate (%) is obtained by the following formula, and the average of five sheets is measured. The value was evaluated according to the following criteria.
[0101]
[Expression 1]

[0102]
Evaluation criteria:
○: Cleaning rate is 75% or more
X: Cleaning rate is less than 75%
[0103]
<Odor evaluation>
Basis weight 550g / cm²The paper surface was laminated with polyethylene to prepare a container. As the adhesive, a commonly used acrylic emulsion type adhesive was used. The container dimensions are 14.8 cm wide x 8.7 cm deep x 16 cm high. This was filled with 1500 g of detergent composition. Thereafter, the opening was sealed and left in a constant temperature and humidity chamber at 30 ° C. and 80% RH for 90 days. After the test, the evaluation was made according to the following criteria.
[0104]
Evaluation criteria:
○: The enzyme's specific odor is hardly felt
X: A specific odor of the enzyme is felt
[0105]
<Recontamination preventing property of cleaning composition>
0.67 g of the obtained cleaning agent was used at 40 ° C in water (CaCl₂: 55.42 mg / L, MgCl₂・ 6H₂O: 43.51 mg / L) Dissolve in 1000 mL. Next, 0.25 g of carbon black selected by the Japan Oil Chemists' Society (made by Asahi Carbon Co., Ltd., suitable for Asahi cleaning carbon black) is added to this, and an ultrasonic wave of 26 ± 1.5 KHz is irradiated for 5 minutes. To disperse the carbon black uniformly. Next, this was transferred to a sample cup of a stirring type detergency tester (Targ-O-Tometer) at 40 ° C., and a 6 cm × 6 cm cotton white cloth (standard product selected by Japan Oil Chemists' Society, Laundry Science) # 2023 cloth sold by the association) Put 5 sheets and rotation speed 100 ± 5min^-1For 10 minutes. Next, the white cotton cloth is taken out and lightly squeezed by hand so that the water content is 200% by mass or less.₂: 55.42 mg / L, MgCl₂・ 6H₂O: 43.51 mg / L) Put into 1000 mL, stirring type detergency tester (rotating speed 100 ± 5 min)^-1) For 3 minutes, and this rinsing operation is performed twice. Next, after air drying, ironing was performed and the reflectance at 550 nm was determined.
[0106]
[Expression 2]

[0107]
Evaluation criteria:
○: Recontamination prevention rate is 65% or more
X: Recontamination prevention rate is less than 65%
[0108]
Production Example 4 Production of detergent particles
(1) Production of detergent particles-1
0.01 mass% mutant alkali cellulase in which glutamine at position 242 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 is substituted with serine, based on the mass in all detergent particles, linear alkyl (10 to 13 carbon atoms) sodium benzenesulfonate 20% by mass, sodium tripolyphosphate 17% by mass, sodium carbonate 10% by mass, sodium sulfate 22% by mass, No. 1 sodium silicate 14% by mass, polyethylene glycol (MW = 13000) 0.3% by mass, acrylic acid-maleic acid Copolymer (sodium salt (70 mol% neutralized), monomer ratio is acrylic acid / maleic acid = 3/7 (molar ratio), average molecular weight 70000) 0.3 mass%, carboxymethylcellulose 0.2 mass%, Tinopearl CBS- X (manufactured by Ciba Specialty Chemicals) 0.05% by mass, Chino Pearl MS-GX (manufactured by Ciba Specialty Chemicals, Inc.) 0.05 mass%, and the sodium sulfite 0.5% by mass, to prepare a solid content of 50 wt% of the slurry, to obtain a spray-dried particles by spray drying. Next, this was mixed with 10% by mass of 4A zeolite (manufactured by Tosoh Corporation) and 0.3% by mass of fragrance on the basis of the mass of all the detergent particles, and surface coating was performed to obtain detergent particles.
The average particle diameter of the detergent particles was 300 μm, and the apparent density was 450 g / L. An antifoaming agent 0.4 part by mass was mixed with 100 parts by mass of the cleaning agent particles to obtain a cleaning composition.
[0109]
(2) Production of detergent particles-2
A slurry having a solid content of 48% by mass was spray-dried at a hot air temperature of 200 ° C., and 0.02 mass of the mutant alkaline cellulase obtained by substituting serine at position 22 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 with proline and glutamine at position 242 with serine. %, Polyacrylic acid sodium (average molecular weight 10,000) 8% by mass, sodium carbonate 30% by mass, sodium sulfate 20% by mass, sodium chloride 5% by mass, fluorescent dye 0.5% by mass, zeolite 35% by mass Obtained. Next, 100 parts by mass of the spray-dried particles were put into a Redige mixer (Matsusaka Giken Co., Ltd., capacity 20 L, with jacket) and the main shaft (150 min.^-1), 18 parts by mass of a nonionic surfactant, 20 parts by mass of linear alkyl (carbon number 10 to 13) sodium benzenesulfonate, 5 parts by mass of sodium fatty acid (14 to 18 carbon atoms), polyethylene glycol (average molecular weight) 8500) A mixed solution of 3 parts by mass and 4 parts by mass of water was added in 3 minutes, and then stirred for 5 minutes. Furthermore, 15 parts by mass of crystalline silicate and 15 parts by mass of zeolite were put into this mixer, and surface coating was performed to obtain detergent particles.
The resulting detergent particles had an apparent density of 830 g / L and an average particle size of 310 μm.
[0110]
(3) Production of detergent particles-3
A slurry having a solid content of 48% by mass is spray-dried at a hot air temperature of 200 ° C., 8% by mass of sodium polyacrylate (average molecular weight 10,000), 30% by mass of sodium carbonate, 20% by mass of sodium sulfate, 5% by mass of sodium chloride, and fluorescence. Spray-dried particles of 0.5% by mass of dye and 35% by mass of zeolite were obtained. Next, 100 parts by mass of the spray-dried particles were put into a Redige mixer (Matsusaka Giken Co., Ltd., capacity 20 L, with jacket) and the main shaft (150 min.^-1), 18 parts by mass of a nonionic surfactant, 20 parts by mass of linear alkyl (carbon number 10 to 13) sodium benzenesulfonate, 5 parts by mass of sodium fatty acid (14 to 18 carbon atoms), polyethylene glycol (average molecular weight) 8500) 3 parts by mass, a mixture of 0.02 parts by mass of mutant alkaline cellulase in which serine at position 22 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 is replaced with proline and glutamine at position 242 with serine, and 4 parts by mass of water is 3 The mixture was added for 1 minute, and then stirred for 5 minutes. Furthermore, 15 parts by mass of crystalline silicate and 15 parts by mass of zeolite were put into this mixer, and surface coating was performed to obtain detergent particles.
The resulting detergent particles had an apparent density of 820 g / L and an average particle size of 320 μm.
[0111]
(4) Production of detergent particles-4
Sodium carbonate, sodium sulfite, and a fluorescent dye were mixed for 1 minute at a peripheral speed of 3.4 m / s and a shearing machine peripheral speed of 27 m / s using a Redige mixer FKM-130D (manufactured by Matsubo Co., Ltd.). The average particle size of the mixture was 98 μm. Next, while operating the mixer under the same conditions, a mixture of linear alkyl (carbon number 12 to 14) benzenesulfonic acid (water content 0.5%) and sulfuric acid was added over 4 minutes, and the operation was continued for another 5 minutes. A sum reaction was performed. Next, while operating the mixer under the same conditions, 15% by mass of the nonionic surfactant and zeolite in the detergent particles were added and granulated by operating for 2 minutes. Next, while operating the mixer under the same conditions, add 7% by mass of zeolite in the detergent particles, and substitute the serine at position 22 of the alkaline cellulase shown in SEQ ID NO: 1 with proline and the glutamine at position 242 with serine. An enzyme solution containing 4% by mass of the mutated alkaline cellulase was added in an amount of 0.5% by mass in the detergent particles, and a 40% by mass aqueous solution of polyethylene glycol (PEG 13000) and acrylic acid maleic acid copolymer (AA / MA copolymer) in 1 minute. In addition, granulation was carried out by operating for another 2 minutes. Subsequently, the remaining zeolite was added, and the surface modification treatment was performed by operating for another 2 minutes to obtain detergent particles shown in Table 4.
The resulting detergent particles had an apparent density of 780 g / L and an average particle size of 360 μm.
[0112]
[Table 4]

[0113]
(5) Comparative example
Cleaning agent particles were obtained in the same manner as in Production Examples 8, 9, and 11 except that the mutant alkali cellulase was not blended. The same amount of Cellzyme 0.7T or Carezyme 4500T (manufactured by Novozymes) particles was added thereto to obtain a detergent composition.
[0114]
Example 14
As in Examples 1 to 13, each detergent particle was evaluated for solubility, detergency, odor, and anti-recontamination property.
About solubility, as for detergent particle | grains -1-4, the cellulase residual amount on a sieve was all significantly lower than the residual amount of a comparative example. Further, the release rate of cellulase was 60% or more for all of the detergent particles -1 to 4, but less than 50% for the comparative example.
With regard to the evaluation of recontamination prevention and odor, all of the detergent particles -1 to 4 clearly outperformed the comparative example using cellzyme. In addition, regarding the evaluation of the cleaning power and the anti-recontamination property, all of the detergent particles -1 to 4 clearly outperformed the comparative example using the carezyme.
[0115]
【The invention's effect】
The powder detergent composition of the present invention is suitable for high-concentration immersion washing and washing with warm water, and exhibits excellent detergency against dirt and stains derived from sebum such as collars and cuffs. In addition, the cellulase in the composition of the present invention is highly active, and the amount of enzyme used is less than that of conventional detergents. Therefore, the enzyme-specific odor in the composition can also be reduced.
[0116]
[Sequence Listing]

[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a diagram in which the amino acid sequences of cellulases having 90% or more homology with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 are aligned.

Claims (16)

（ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するセルラーゼについて、配列番号１の２４２位又はこれに相当する位置のグルタミン残基をセリン残基に置換した変異アルカリセルラーゼを含有する粉末洗浄剤組成物。(A) For a cellulase having 90% or more homology with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a mutant alkaline cellulase in which a glutamine residue at position 242 of SEQ ID NO: 1 or a position corresponding thereto is substituted with a serine residue A powder cleaning composition containing. 更に、配列番号１の１０位のロイシン、１６位のイソロイシン、２２位のセリン、３３位のアスパラギン、３９位のフェニルアラニン、７６位のイソロイシン、１０９位のメチオニン、２６３位のフェニルアラニン、３０８位のスレオニン、４６２位のアスパラギン、４６６位のリジン、４６８位のバリン、５５２位のイソロイシン、５６４位のイソロイシン、及び６０８位のセリンからなる群から選ばれる少なくとも一つを他のアミノ酸残基に置換した変異アルカリセルラーゼである請求項１記載の粉末洗浄剤組成物。 Furthermore, leucine at position 10 of SEQ ID NO: 1, isoleucine at position 16, serine at position 22, asparagine at position 33, phenylalanine at position 39, isoleucine at position 76, methionine at position 109, phenylalanine at position 263, threonine at position 308 , 462 position asparagine, 466 position lysine, 468 position valine, 552 position isoleucine, 564 position isoleucine and 608 position serine The powder detergent composition according to claim 1, which is an alkaline cellulase . 変異アルカリセルラーゼが、Ｌｅｕ１０（Ｇｌｎ／Ａｌａ／Ｐｒｏ／Ｍｅｔ）＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ、Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ＋Ｐｈｅ２６３（Ｉｌｅ／Ｌｅｕ／Ｐｒｏ／Ｖａｌ）、Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒ＋Ｓｅｒ６０８（Ｉｌｅ／Ａｒｇ）、及びＳｅｒ２２Ｐｒｏ＋Ｇｌｎ２４２Ｓｅｒからなる群から選ばれる２重置換体である請求項１記載の粉末洗浄剤組成物。 Mutant alkaline cellulase is a substitution body selected from the group consisting of Leu10 (Gln / Ala / Pro / Met) + Gln242Ser, Gln242Ser + Phe263 (Ile / Leu / Pro / Val), Gln242Ser + Ser608 (Ile / Arg), and Ser22Pro + Gln242Ser. 1 Symbol placement of the powder detergent composition claim. 更に、（ｂ）界面活性剤及び（ｃ）ビルダーを含有する請求項１〜３のいずれか１項記載の粉末洗浄剤組成物。The powder cleaning composition according to any one of claims 1 to 3, further comprising (b) a surfactant and (c) a builder . （ａ）成分が、２０℃、１分後のセルラーゼ放出率が５０％以上の酵素造粒物である請求項１〜４のいずれか１項記載の粉末洗浄剤組成物。The powder cleaning composition according to any one of claims 1 to 4, wherein the component (a) is an enzyme granule having a cellulase release rate of 50% or more after 1 minute at 20 ° C. （ｂ）成分及び（ｃ）成分が、（ｂ）成分及び（ｃ）成分を含有し、２０℃、１分後の（ｂ）成分放出率が６０％以上の粒子である請求項４又は５記載の粉末洗浄剤組成物。 6. The component (b) and the component (c) are particles containing the component (b) and the component (c), and the release rate of the component (b) after 1 minute at 20 ° C. is 60% or more. The powder cleaning composition as described. 酵素造粒物が、（ａ）成分を平均粒径２００〜１２００μｍの水溶性粒子からなる核物質及び融点３５〜７０℃の水溶性有機バインダーと共に造粒して得られるものであり、その平均粒径が核物質の平均粒径の１〜２倍である請求項５又は６記載の粉末洗浄剤組成物。The enzyme granulated product is obtained by granulating the component (a) together with a core substance composed of water-soluble particles having an average particle diameter of 200 to 1200 μm and a water-soluble organic binder having a melting point of 35 to 70 ° C. The powder detergent composition according to claim 5 or 6, wherein the diameter is 1 to 2 times the average particle diameter of the nuclear material . 酵素造粒物が、（ａ）成分、水不溶性物質４５質量％以上、及び水溶性バインダー５〜４０質量％を含有し、かつ内部よりも表面近傍に水溶性バインダーが多く存在する構造を有するものである請求項５又は６記載の粉末洗浄剤組成物。 The enzyme granulated product has a structure containing (a) component, 45% by mass or more of a water-insoluble substance, and 5 to 40% by mass of a water-soluble binder, and more water-soluble binder is present near the surface than inside. The powder detergent composition according to claim 5 or 6 . （ｂ）成分及び（ｃ）成分を含有する粒子が、（ｂ）成分及び（ｃ）成分の少なくとも一部を混合した後に乾燥して得られ、粒子内に気孔を有するものである請求項６〜８のいずれか１項記載の粉末洗浄剤組成物。 The particles containing the component (b) and the component (c) are obtained by mixing at least a part of the component (b) and the component (c) and then dried, and have pores in the particles. The powder cleaning composition of any one of -8 . （ａ）成分、（ｂ）成分及び（ｃ）成分が洗浄剤粒子を形成する請求項４記載の粉末洗浄剤組成物。The powder cleaning composition according to claim 4, wherein the component (a), the component (b) and the component (c) form cleaning agent particles . 洗浄剤粒子が、（ａ）成分、（ｂ）成分及び（ｃ）成分の少なくとも一部を混合した後、乾燥工程を経て得られるものである請求項１０記載の粉末洗浄剤組成物。The powder detergent composition according to claim 10 , wherein the detergent particles are obtained through a drying step after mixing at least a part of the component (a), the component (b) and the component (c) . 洗浄剤粒子が、（ｂ）成分及び（ｃ）成分の少なくとも一部を混合した後に乾燥し、これに（ａ）成分を含有する液体を添加して（ａ）成分を担持させる工程を経て得られるものである請求項１０記載の粉末洗浄剤組成物。The detergent particles are obtained by mixing at least a part of the component (b) and the component (c) and then drying, and adding the liquid containing the component (a) to the component (a) to carry the component. The powder detergent composition according to claim 10 . 洗浄剤粒子が、（ｂ）成分として陰イオン界面活性剤を含有し、該陰イオン界面活性剤の液体酸前駆体と、該陰イオン界面活性剤を中和するのに必要な量以上の粒子状固体水溶性アルカリ無機物質を混合して中和する工程、及びこれに（ａ）成分を含有する液体を添加し（ａ）成分を担持させる工程を経て得られるものである請求項１０記載の粉末洗浄剤組成物。 The detergent particles contain an anionic surfactant as the component (b), and the liquid acid precursor of the anionic surfactant and the particles more than the amount necessary to neutralize the anionic surfactant step neutralized by mixing Jo solid water-soluble alkaline inorganic material, and to (a) adding a liquid containing the component (a) is obtained through the step of supporting the components of claim 10, wherein Powder cleaning composition. 平均粒子径が１５０〜１０００μｍである請求項４〜１２のいずれか１項記載の粉末洗浄剤組成物。The powder cleaning composition according to any one of claims 4 to 12, wherein the average particle size is 150 to 1000 µm. （ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するセルラーゼについて、配列番号１の２４２位又はこれに相当する位置のグルタミン残基をセリン残基に置換した変異アルカリセルラーゼの造粒物であって、２０℃、１分後のセルラーゼ放出率が５０％以上である酵素造粒物。 For cellulase having an amino acid sequence homology of 90% or more represented by (a) SEQ ID NO: 1, the 242-position or a glutamine residue at a position corresponding to the SEQ ID NO: 1 mutations alkaline cellulase which is substituted with serine residue An enzyme granulated product having a cellulase release rate of 50% or more after 1 minute at 20 ° C. （ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するセルラーゼについて、配列番号１の２４２位又はこれに相当する位置のグルタミン残基をセリン残基に置換した変異アルカリセルラーゼ、（ｂ）界面活性剤、及び（ｃ）ビルダーを含有する洗浄剤粒子(A) a mutant alkaline cellulase in which a glutamine residue at position 242 of SEQ ID NO: 1 or a position corresponding thereto is substituted with a serine residue for a cellulase having 90% or more homology with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, (B) Detergent particles containing a surfactant and (c) a builder 。.

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