JP3839502B2 - Eczema / dermatitis group treatment - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールを有効成分として含有する新規な痒疹及び脂漏性皮膚炎から選ばれる皮膚疾患の治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
湿疹・皮膚炎群は、湿疹・皮膚炎型反応（ｅｃｚｅｍａｔｏｕｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｃ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）を示す炎症性皮膚症（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｅｒｍａｔｏｓｅｓ）であり、表皮に海綿状態（ｓｐｏｎｇｉｏｓｉｓ）化、（表皮）肥厚不全角化、（表皮内）炎症細胞の浸潤等が認められる皮膚疾患を一括した呼称である。臨床的には、紅斑、丘疹、水疱、膿疱、結痂、鱗屑などの新旧の小病巣が混在し、掻痒を呈し、急性・亜急性・慢性の経過をとり、慢性化すると苔癬化を示すことが多い。
【０００３】
湿疹・皮膚炎群の分類については、普遍的な病理形態学的統一性はなく、因襲的概念が色濃いとされており、（斉藤脩「臨床医と病理医のための皮膚病理学」シュプリンガー．フェアラーク東京刊．１９９２年、９４頁〜）、若干の概念の重複を避けられないが、通常使用されているものを列挙すると急性、亜急性、又は慢性の湿疹、接触性皮膚炎、貨幣状湿疹、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、ビダール苔癬、異汗症性皮膚炎、剥離性皮膚炎、日光皮膚炎、口囲皮膚炎、おむつ皮膚炎、神経皮膚炎、脂漏性皮膚炎、主婦湿疹、皮脂欠乏性湿疹等があげられる。
【０００４】
これらの疾患の発症は例えばアトピー性皮膚炎の如く近年増加しつつあるが、その原因については多くの物理的・化学的因子やアレルギー機序が考えられているものの明らかでないものが多い。
【０００５】
これらの疾患の薬物療法には炎症性疾患であるため従来抗炎症剤が使用されており、例えばプロピオン酸クロベタゾール、酢酸ジフロラゾンジフルプレドナート、プロピオン酸デキサメタゾン等の副腎皮質ホルモン（ステロイド）剤や、イブプロフェンピコノール、ウフェナアート、グルチルレチン酸、クロタミトン、スピロフェン等の非ステロイド系薬剤が主に外用剤として使用されている。
【０００６】
しかし、これらの薬物療法が十分なものではないのが現状である。即ち、ステロイド系薬剤については、その対症療法的な有効性は認められているものの、副作用あるいは一時休止後の再発時の症状悪化など（リバウンド現象）が広く知られている。
【０００７】
上記の副作用としては皮膚の感染症、過敏症、下垂体・副腎皮質系機能の抑制、ステロイド褥瘡、眼瞼皮膚への使用による眼圧亢進、緑内障、後嚢白内障等があげられ、眼科については使用が禁じられているものが多い。叉、顔面、首等の疾患部位は該部位の皮膚の薬物の吸収性が高いためステロイド系薬剤の全身的副作用が発症しやすく、該部位へのステロイド系薬剤の塗布は極力避けられている。一方非ステロイド系薬剤については、ステロイド系薬剤と比較して有効性が低い、塗布部位にかぶれが生じやすい、眼科には使用できないものが多い等の欠点があり、治療薬としては不十分といえよう。
【０００８】
上記のような副作用、使用上の懸念等がある上に湿疹・皮膚炎群疾患が特に乳児、幼児、小児や女性あるいは他疾患併発者等の比較的皮膚が敏感な患者に多いことがこのような薬剤を一層使用しにくくしている。従って、湿疹・皮膚炎群患者に対し有効で安全であり、前述の湿疹・皮膚炎群疾患の複数が複合的に発症しているか、併発的に発症している湿疹・皮膚炎群患者や、他疾患併発の湿疹・皮膚炎群患者に対しても有効で安全であり、例えば顔面などの薬物吸収性の高い部位にも使用できる、使用しやすい薬剤が強く望まれている。
【０００９】
ところで、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールは活性型ビタミンＤ3 類に属する化合物である。１α−ヒドロキシコレカルシフェロール、１α，２４−ジヒドロキシコレカルシフェロール、１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールなどの活性型ビタミンＤ3 類は、生体内のカルシウムレベルを調節する作用を有し、骨粗鬆症、骨軟化症などのいわゆる骨減少症に有用であることが知られている〔ベイシック・リサーチ・アンド・イッツ・クリニカル・アプリケーション（Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、１０９９〜１１０６（１９７９）〕。
【００１０】
一方、近年において活性型ビタミンＤ3 類の新たな薬理作用、例えば増殖抑制作用、分化誘導作用等が見いだされ、骨減少症以外の他の患者の治療剤としての可能性が検討されている。例えば、関節リウマチ治療剤（特開昭５６−２６８２０号公報）、癌細胞の分化誘導剤（特開昭５７−１４９２２４号公報）等への活性型ビタミンＤ3 類の適用が検討されている。
【００１１】
本発明者らは既に、上記状況に鑑み、活性型ビタミンＤ3 類の新たな治療剤としての可能性について研究した結果、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールが皮膚疾患の一種である乾癬の治療剤として有効であること、更には１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールを乾癬治療剤として使用する場合には、特定の溶剤と特定の親油性基剤からなる軟膏剤が特に好適であること等を見い出し、既に、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールを有効成分として含有し、剤形が１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールを溶解する脂肪酸エステル類、高級アルコール類及び炭酸プロピレンからなる群から選ばれる一種あるいは二種以上の混合物である疎水性または無水性の溶剤と、白色ワセリン、黄色ワセリン、流動パラフィン及び流動パラフィンのポリエチレンゲルから選ばれる一種あるいは二種以上の混合物である親油性基剤とからなる軟膏剤であって、該疎水性または無水性の溶剤の量が、該軟膏剤の０．０１〜２５．０重量％である乾癬治療剤を提案した。（特公平３−６８００９号公報参照）。
【００１２】
上記の乾癬は組織学的には表皮層で表皮細胞の浸潤が認められるが、真皮層には異常な変化はないとされている。一方、湿疹・皮膚炎群疾患は表皮層では上記乾癬と同じ変化が認められる他に、真皮層でも好中球、リンパ球、単球等の浸潤、血管拡張浮腫、血管新生、弾性線維の消失、抗原呈示細胞の増加が認められ、その点で乾癬とは異なる病態である。
【００１３】
湿疹・皮膚炎群への活性型ビタミンＤ3 類の適用については従来報告はほとんどなく、唯一ＥＰ―Ａ―０１２９００３号明細書で１α−ヒドロキシコレカルシフェロールあるいは１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールを含有する外用剤が開示され、湿疹、乾癬、皮膚炎、乾皮症等への効果が示されている。
【００１４】
しかしながら、ＥＰ―Ａ―０１２９００３号に開示されている１α−ヒドロキシコレカルシフェロールは、活性型である１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールの前駆体であり、そのためその活性型ビタミンＤ3 作用（分化誘導、増殖抑制作用等）は弱く、皮膚局所疾患の湿疹・皮膚炎群の治療には実際には適当ではないと考えられるのである。即ち、１α−ヒドロキシコレカルシフェロールを疾患部位の皮膚局所に塗布しても、皮膚中には活性型ビタミンＤ3 である１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールへの転換酵素である２５−ヒドロキシラーゼが少なく、局所で薬効を呈する活性型ビタミンＤ3 への転換は望めない。叉、経口投与等により１α−ヒドロキシコレカルシフェロールを全身的に投与し、肝臓で活性型である１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールに転換させることが出来るが、その場合疾患部位の皮膚局所に分布される１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロール量は極めて少なく、その薬効は多くは期待出来ないと考えられる。
【００１５】
また、ＥＰＡ０１２９００３号に開示されている１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールは、その後の研究によって、その局所投与（外用）により高Ｃａ尿症が発生することが報告されている（例えば第７回ビタミンＤワークショッププロシーデイング、Ｗａｌｔｅｒ ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ社、ベルリン、ニューヨーク、１９８８年刊、Ａ．Ｌａｎｇｎｅｒ らの報告）。すなわち、同剤の安全性に疑問が投げかけられているのが現状である。
【００１６】
すなわち本発明の目的は、新規な１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールを有効成分として含有する痒疹及び脂漏性皮膚炎から選ばれる皮膚疾患の治療剤を提供することにある。
【００１７】
また、本発明の目的は、その有効性、安全性に優れた新規な痒疹及び脂漏性皮膚炎から選ばれる皮膚疾患の治療剤を提供することにある。
【００１８】
更に本発明の目的は、その有効性、安全性に優れ、かつ副作用又はリバウンド現象等の低減化された、新規な痒疹及び脂漏性皮膚炎から選ばれる皮膚疾患の治療剤を提供することにある。
【００１９】
また更に、本発明の目的は、その有効性、安全性に優れ、また副作用又はリバウンド現象等が低減化され、かつ、顔面等にも使用できる使用し易い剤形である、新規な痒疹及び脂漏性皮膚炎から選ばれる皮膚疾患の治療剤を提供することにある。
【００２０】
本発明者らはこのような従来技術及び湿疹・皮膚炎群への活性型ビタミンＤ3 類の薬理効果、臨床効果及び安全性を鋭意検討した結果、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールが痒疹及び脂漏性皮膚炎から選ばれる皮膚疾患に対して優れた薬理作用及び治療効果等を有することを初めて見い出し、且つ１α−ヒドロキシコレカルシフェロール、１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロール等の活性型ビタミンＤ3 類と比べて１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールが、有効性、安全性等の点でより優れていることを見い出して本発明に至った。
【００２１】
【課題を解決するための手段】
しかして、本発明は１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールを有効成分として含有する剤形が外用剤である痒疹および脂漏性皮膚炎から選ばれる皮膚疾患の治療剤である。
【００２２】
１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールは公知の化合物であり、例えばジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティー（Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ），９５，２７４８（１９７３）；ケミカル・ファーマコロジカル・ブレテイン（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．）、２１，２５６８（１９７８）；米国特許第４０２２８９１号明細書等に記載された方法によりより容易に合成し得るものである。また本発明の１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールとして、安定性に優れている点でその結晶状態にあるもの、例えば特公平３−５９０６３号公報に記載されている１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの１水塩を用いることも好ましい。
【００２３】
本発明の皮膚疾患は、例えば急性、亜急性、又は慢性の、脂漏性皮膚炎、痒疹をいう。
【００２６】
また、同様にアトピー性皮膚炎症状を繰り返しているうちに発症すると言われているアトピー性皮膚炎性痒疹、結節性痒疹、又は亜急性痒疹を好ましいものとして挙げられる。これらのなかでもアトピー性皮膚炎性痒疹をより好ましいものとして挙げられる。
【００２７】
本発明の１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールは局所的に投与される。局所的には外用剤として、軟膏・クリーム等の半固型剤、ローション等の液剤、あるいはテープ剤の剤型で皮膚の疾患部位に直接投与される。
【００２９】
外用剤でもその処方によって、安全性、治療効果等が異なり得るのが、例えば本発明者らが乾癬治療軟膏剤として提案した（特公平３−６８００９号公報）軟膏剤、あるいは乳剤性組成物として別個提案した（特願平５−２１７２６１号明細書、国際出願ＰＣＴ／ＪＰ９４／０１４４３号明細書）クリーム剤は、他の処方より治療効果等に優れており、有用である。
【００３０】
即ち、軟膏剤としては、（ａ）主薬としての１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールと、（ｂ）１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールを溶解する脂肪酸エステル類、高級アルコール類及び炭酸プロピレンからなる群から選ばれる一種あるいは二種以上の混合物である疎水性・無水性の溶剤と、（ｃ）白色ワセリン、黄色ワセリン、流動パラフィン及び流動パラフィンのポリエチレンゲルから選ばれる一種あるいは二種以上の混合物である親油性基剤とからなる軟膏剤であって、該疎水性・無水性の溶剤の量が、該軟膏剤の０．０１〜２５．０重量％であり、該脂肪酸エステル類が、アジピン酸ジイソプロピル、オレイン酸デシル、セバシン酸ジエチル、ミリスチン酸イソプロピル、トリアセチン、トリカプロン酸グリセリン、トリカプリル酸グリセリン、トリカプリン酸グリセリン、トリラウリン酸グリセリン、トリリノール酸グリセリン、ジカプリル酸プロピリングリコール、ジペラルゴン酸プロピレングリコール、ジカプリン酸プロピレングリコールからなる群から選ばれた一種叉は二種以上の混合物であり、該高級アルコール類がオクチルドデカノール、セチルアルコール、オレイルアルコールからなる群から選ばれた一種叉は二種以上の混合物である軟膏剤が有用である。
【００３１】
またクリーム剤としては、（ａ）主薬としての１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールと、（ｂ）（ア）５〜２０重量部の白色ワセリンおよび５〜１５重量部の高級アルコール類からなる固形油分、及び（イ）３〜１０重量部のスクワランからなる液状油分とからなる油相成分と、（Ｃ）水相成分と、及び（ｄ）２．５〜７．５重量部の２種以上からなる界面活性剤とを含んでなる１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールクリーム剤であって、該固形油分と該液状油分との重量比（該固形油分／該液状油分）が約２以上であり該高級アルコール類がステアリルアルコール及びセチルアルコールとからなり、該ステアリルアルコールと該高級アルコール類との重量比（該ステアリルアルコール／該高級アルコール類）が約０．６５〜約０．９であるクリーム剤が有用である。
【００３２】
本発明の治療剤の剤形が、例えば上記の軟膏剤であるとき、そのような軟膏剤は特公平３―６８００９号公報の記載に従って得ることができる。
【００３３】
具体的には、上記親油性基剤を単独で、あるいは２種以上を組み合わせ、これに疎水性・無水性の溶剤を添加した後処方して、あるいは基剤にあらかじめ主薬を溶解した疎水性・無水性の溶剤を添加した後処方して、軟膏剤とすることもできる。このような軟膏剤において、疎水性・無水性の溶剤の量は、より好ましくは、０．１〜１０．０重量％である。
【００３４】
また、本発明の治療剤の剤形が上記クリーム剤であるとき、このようなクリーム剤としては、例えば国際出願ＰＣＴ／ＪＰ９４／０１４４３号明細書に記載されたものを好ましいものとして挙げることができる。
【００３５】
より具体的には、
（ａ）主薬としての１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール
（ｂ）（ア）５〜２０重量部の白色ワセリンおよび５〜１５重量部の高級アルコール類からなる固形油分および
（イ）３〜１０重量部のスクワランからなる液状油分
とからなる油相成分、
（ｃ）水相成分、及び
（ｄ）２．５〜７．５重量部の２種以上からなる界面活性剤
とを含んでなる１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールクリーム剤であって、該固形油分と該液状油分との重量比（該固形油分／該液状油分）が約２以上であり、該高級アルコール類がステアリルアルコール及びセチルアルコールとからなり、該ステアリルアルコールと該高級アルコール類との重量比（該ステアリルアルコール／該高級アルコール類）が約０．６５〜約０．９であり、該界面活性剤の５０重量％以上がＨＬＢ値が約５以下の１種以上の界面活性剤であり、該界面活性剤全体のＨＬＢ値は約８〜約１８であるクリーム剤が好ましいものである。
【００３６】
かかるクリーム剤の白色ワセリンは石油から得られる炭化水素類の混合物を脱色して精製したものであり、その規格については例えば日本薬局方に定められるものが使用される。なかでも、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの安定性にとっては純度の高いものが望ましく、例えば過酸化物価が０．５以下のようなものが望ましい。また、高級アルコール類はセチルアルコールとステアリルアルコールとの混合物であり、混合物中のステアリルアルコールの全体に占める重量比は約０．６５から約０．９である。なかでも好ましくは約０．７〜約０．９、特に好ましくは約０．７０〜約０．８５の範囲を挙げることができる。セチルアルコール単品からステアリルアルコールを徐々に増加させるに従って皮膚浸透性は増加傾向にあり、ステアリルアルコールの重量比が約０．７をこえると急激に皮膚浸透性が増大しステアリルアルコール単品で最大になるが、その比率が約０．９をこえるとエマルジョンとしての物理的安定性、特に加熱時の物理的安定性が劣化する傾向がある。
【００３７】
一般に市販されているセチルアルコールやステアリルアルコールはそれぞれ純品でないものもある。例えば、セチルアルコールと称されていてもセチルアルコール約０．７とステアリルアルコール約０．３の混合物もあり、さらにはセトステアリルアルコールといわれるもののようにセチルアルコール約０．６〜約０．３とステアリルアルコール約０．４〜約０．７の混合物もある。本発明のセチルアルコールとステアリルアルコールとはそれぞれ純粋なものを指し、それらの混合比率はそれらを基に計算される。
【００３８】
また、かかるクリーム剤におけるスクワランは、例えば深海にすむサメ類の肝油から得られる炭化水素を還元して得られる飽和炭化水素であり、その規格については例えば化粧品原料基準に定められるものが使用される。
【００３９】
クリーム剤の油相成分には上述した白色ワセリン、高級アルコール類、スクワランの他に、他の固形油分、液状油分を添加してもよい。固形油分として固形パラフィンが挙げられ、その添加量は例えば物理的安定性が維持される範囲内であればよく、例えば固形油分の１／１０重量部以下であることがクリーム剤として適度の硬度を維持できるので好ましい。液状油分としては中鎖脂肪酸トリグリセリド、アシピン酸ジイソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル等のエステル類が挙げられる。これら液状油分の添加量は例えば１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの皮膚浸透性が維持される範囲内であればよく、スクワランの３／１０重量部以下であることが１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの良好な皮膚浸透性を維持できるので好ましい。
【００４０】
上記クリーム剤の界面活性剤は２種以上の界面活性剤からなり、それらの合計はクリーム剤全体の２．５〜７．５重量部であるのが好ましい。更に好ましくは、この界面活性剤の５０重量％以上はＨＬＢ値が約５以下の１種以上の界面活性剤であり、この界面活性剤全体のＨＬＢ値は約８〜約１８である。より好ましくは約８〜約１２である。
【００４１】
このような５０重量％以上を構成するＨＬＢ値が約５以下の１種以上の界面活性剤としては、例えばソルビタンモノオレート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンセスキオレート、ソルビタントリオレート、グリセリルモノステアレート、グリセリルモノオレート、プロピレングリコールモノステアレート等からなる群から選ばれる１種以上の界面活性剤があげられる。残りの界面活性剤としては全体のＨＬＢ値が約８〜約１８、より好ましくは約８〜約１２となるようなものであれば特に限定されないが、例えばポリオキシエチレン（３０あるいは４０あるいは６０）ソルビットテトラオレート、ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレート、ポリオキシエチレン（１０）モノラウレート、ポリオキシエチレン（２３あるいは２５あるいは３０）セチルエーテル等からなる群から選ばれる１種以上の界面活性剤があげられる。
【００４２】
以上説明したようなクリーム剤は、例えば常法どおり主薬としての１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの必要量を油相成分に界面活性剤とともに加熱溶解し、乳化機中で加熱された水相成分と混合し、ついで乳化し均一な乳化物とし、冷却して製造することができる。かくして得られたクリーム剤は、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの化学的安定性に優れ、しかも１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの皮膚浸透性が向上し、その結果十分な薬理効果を有し、同時に、物理的安定性及び塗布時のべとつき、ギラギラ感がない等のその感触に優れるという効果も備えた製剤である。
【００４３】
本発明の治療剤の剤形としては上述のような外用剤であるが、なかでも、その剤形が例えば軟膏剤、クリーム剤、ローション剤またはテープ剤の組み合わせが好ましい。
【００４４】
なかでも本発明の治療剤において皮膚疾患が急性亜急性、又は慢性の湿疹、前記のような脂漏性皮膚炎、前記のような痒疹である場合に、その剤形がそれぞれ、例えば軟膏剤、クリーム剤、またはローション剤等の外用剤、なかでも前記のような特定の組成の軟膏剤又はクリーム剤である場合を、より好ましい組み合わせとしてあげることができる。
【００４５】
本発明の製剤中には、必要に応じて適当量の保存剤、酸化防止剤、吸収促進剤、保湿剤等を添加してもよい。保存剤としては例えばパラオキシ安息香酸エステル、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、ホウ酸などが挙げられ、酸化防止剤としては例えばブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエンなどが挙げられる。吸収促進剤としては例えばアジピン酸ジイソプロピル、ジエチルセバケート、炭酸プロピレングリコール、ソルビトールなどが挙げられる。
【００４６】
また、クリーム剤の油相成分には酸化防止剤を添加することができる。酸化防止剤としてはブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、ｄｌ−α−トコフェロール等が、より好適にはｄｌ−α−トコフェロールが添加され、その添加量は通常０．００１〜５．０重量部であり、より好適には０．０１〜３．０重量部である。一方、水相成分には保湿剤、防腐剤、キレート剤、緩衝剤等を添加することができる。保湿剤としてはプロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール等が挙げられ、その添加量は１〜２０重量部、より好適には２〜１５重量部である。防腐剤としてはメチルパラベン、プロピルパラベン、それらの混合物等のパラベン類；クロロブタノール；モノチオグリセロール；ソルビン酸、ソルビン酸カリウム；ベンジルアルコール等が挙げられ、その添加量は０．００１〜１０．０重量部であり、より好適には０．０１〜５．０重量部である。キレート剤としてはクエン酸、クエン酸ナトリウム；エデト酸ナトリウム等が挙げられ、その添加量は０．００１〜５．０重量部であり、より好適には０．０１〜３．０重量部である。緩衝剤としてはリン酸水素２ナトリウム、リン酸２水素ナトリウム等が挙げられ、水相成分のｐＨを６．５〜８．０に調節するのに必要な量比で添加される。
【００４７】
本発明に必要な１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの量は治療有効必要量であり、投与法にもよるため一概には決められないが、通常１００μｇから０．０１μｇ，より好適には２０μｇ〜０．１μｇ／日であり、例えば錠剤の場合には１錠あたりにそれらの量を含有させれば良い。外用剤の場合、例えば、前記軟膏剤やクリーム剤における主薬としての１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの量は、０．０１μｇ〜１００μｇ／ｇ量となるように含有させれば良い。外用剤の場合、より好ましくは１μｇ／ｇ〜２０μｇ／ｇである。例えば、クリーム剤の場合、通常、クリーム剤中の濃度として約０．００００５〜約０．０１重量％の範囲である。そして、このような外用剤を、疾患の程度により異なるが、単純塗布等により１日２回〜数回投与するかあるいは密封法により１日１回投与するのが好ましい。
【００４８】
かくして本発明により１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールを有効成分とする新規な剤形が外用剤である痒疹及び脂漏性皮膚炎から選ばれる皮膚疾患の治療剤が提供される。
【００４９】
前記の従来の同疾患治療剤の課題を考慮すると、本発明の治療剤の有効成分である１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールは、表皮細胞に対する増殖抑制作用が１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールより極めて強いこと（実施例１）、皮下組織から真皮層にかけての炎症性細胞の浸潤を抑制し、また表皮層への炎症性細胞の浸潤等の抑制作用を持続したこと等の急性期及び慢性期の炎症を抑制したこと（実施例２）、また、本発明の治療剤は、具体的に、急性ないし慢性のアトピー性皮膚炎等の患者において優れた有効性を示しかつ格別の副作用等の認められなかったこと（実施例６〜実施例１２）、各種疾患に伴うそう痒症等も含め本発明の湿疹・皮膚炎群に有効であることを示す肥満細胞脱顆粒抑制作用が認められたこと（実施例１３）等、及び、特に前記特定の組成の軟膏剤又はクリーム剤を用いる場合には、優れた有効性、安全性を有し、かつ、クリーム剤の場合には、べとつき、ギラギラ感が著しく低減化されたという使用感にも優れた効果が得られた等、かかる治療剤が提供されたことによる治療上の意義は極めて大きい。
【００５０】
【実施例】
以下に実施例により、本発明の効果をより詳細に説明するが、本発明をこれにより限定するものではない。
【００５１】
なお、以下の実施例において１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールを例えば１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 、１α，２４Ｄ3 、１，２４Ｄ３と、１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールを例えば１，２５−（ＯＨ）2 Ｄ3 等と略記することがある。
【００５２】
［実施例１］
１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 の細胞増殖抑制作用
（ＴＰＡにより惹起されるヘアレス・マウス表皮の増殖亢進に対する作用…１，２５−（ＯＨ）2 Ｄ3 との比較試験）
ヘアレス・マウス（ＳＫＨ−１，♀，７〜８weeks old;Crl ）頸背部皮膚にＴＰＡ（12-O-Tetradecanoyl phorbol-13-acetate;Wako ）を塗布して表皮細胞の増殖を亢進させ、これに対する１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 の作用を、ＯＤＣ活性及びＤＮＡ合成を指標として、１，２５−（ＯＨ）2 Ｄ3 と比較検討した。
【００５３】
▲１▼ＴＰＡ投与方法：
１００ｎｍｏｌ／ｍｌのアセトン溶液としたＴＰＡを、エーテル麻酔下で固定したヘアレス・マウスの頸背部皮膚２×３ｃｍ2 に、１００μl 塗布した。
【００５４】
▲２▼被検物質投与方法：
所定の濃度のアセトン溶液とした被検物質を、エーテル麻酔下で固定したヘアレス・マウスの頸背部皮膚２×３ｃｍ2 に、ＴＰＡ塗布直後に１００μl 塗布した。
【００５５】
▲３▼ＯＤＣ活性測定
Ｉ）群構成
１．ＴＰＡ（−）
２．ＴＰＡ（＋）／１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 （−）
３．ＴＰＡ（＋）／１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 １．０μｇ／ｈｅａｄ
４．ＴＰＡ（＋）／１，２５−（ＯＨ）2 Ｄ3 １．０μｇ／ｈｅａｄ
各群５〜６例で実施。
II）活性測定方法
塗布４時間後にマウスを頚椎脱臼死させ、塗布部位の皮膚を切り取った。得られた皮膚を５５℃で３０秒加温後、メスで表皮を剥離した。表皮を氷冷下で５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）、０．１ｍＭピリドキサルリン酸、０．１ｍＭエチレンジアミン四酢酸を含む抽出液０．５ｍｌ中でソニケーションし、３００，０００ｇ×２０分、４℃の条件で遠心した。この遠心上清をＯＤＣ活性測定の酵素液とし、Ｃｈｉｄａ，Ｋ．等の方法１）に従って測定した。タンパク定量はプロテイン・アッセイ（バイオラド社）を用いて行った。
【００５６】
酵素活性は、ｍｇタンパク質当たり１時間に生成する14Ｃ−ＣＯ2 ｎｍｏｌ量として表記した。
（ｎｍｏｌ ＣＯ2 ／ｈｒ／ｍｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ）
【００５７】
▲４▼ＤＮＡ合成測定
Ｉ）群構成
１．ＴＰＡ（−）
２．ＴＰＡ（＋）／１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 （−）
３．ＴＰＡ（＋）／１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 １０μｇ／ｈｅａｄ
４．ＴＰＡ（＋）／１，２５−（ＯＨ）2 Ｄ3 １０μｇ／ｈｅａｄ
各群４〜５例で実施。
II）測定方法
ＴＰＡは初回のみ、１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 、１，２５−（ＯＨ）2 Ｄ3 、およびビークルであるアセトンは、ＴＰＡ塗布直後、及び１０時間間隔で２回（合計３回）塗布した。ＴＰＡ塗布後２３時間目で３Ｈ−チミジン（７４０ｋＢｑ／ｈｅａｄ）を腹腔内投与した。更に１時間後（ＴＰＡ塗布後２４時間後）、マウスを頚椎脱臼死させ、塗布部位の皮膚を切り取った。得られた皮膚を５５℃で３０秒加温後、メスで表皮を剥離した。表皮を氷冷下２ｍｌの０．２Ｎ過塩素酸で２回、２ｍｌのエタノール／エーテル（１／１）で１回洗った後、０．５Ｎ過塩素酸を１ｍ１加え９０℃で１０分間ＤＮＡを抽出した。ＤＮＡ溶液の一部を取り、液体シンチレーションカウンターで放射能を測定した。バートン法によりＤＮＡ量を定量し、単位ＤＮＡ量中の放射能（３Ｈ−チミジン（Ｔｈｙ））取込み量（ｄｐｍ／μｇ−ＤＮＡ）を算出した。
【００５８】
▲５▼結果
Ｉ）ＴＰＡ塗布により惹起される表皮ＯＤＣ活性の誘導に対する１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 の作用 (図１）
図１から、表皮ＯＤＣ活性はＴＰＡ塗布によりアセトン塗布群の約１５倍に誘導されたが、この誘導を１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 は塗布量０．１μｇ／ｈｅａｄ以上で抑制したことが判る。塗布量１．０μｇ／ｈｅａｄにおいて１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 はＯＤＣ活性をＴＰＡ単独塗布群の２７％に抑制し、１，２５−（ＯＨ）2 Ｄ3 の５４％よりも強い抑制作用を示した。
【００５９】
II）ＴＰＡ塗布による表皮ＤＮＡ合成の亢進に対する１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 の作用 （図２）
図２から、表皮細胞のＤＮＡ合成はＴＰＡ塗布によりアセトン塗布群の約２倍に亢進されたが、この亢進を１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 は塗布量１０μｇ／ｈｅａｄで有意に抑制したことが判る。この用量において１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 はＤＮＡ合成をＴＰＡ単独塗布群の５８％に抑制し、その抑制強度は同じ用量の１，２５−（ＯＨ）2 Ｄ3 の６２％より強力であった。
【００６０】
以上１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 は、ＴＰＡにより惹起されるヘアレス・マウス表皮の増殖亢進、即ち、ＯＤＣ活性の誘導、並びにＤＮＡ合成の亢進を、１，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 より強力に抑制することが明らかとなった。
【００６１】
なお：本実施例における参考文献は以下のものである。
1)Chida K et al. Inhibition of 1 α-25-dihydroxyvitamin D3 of induction of epidermal ornithine decarboxylase caused by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate and teleocidineB1, Cancer Res.,44:1378-1391,(1984)
【００６２】
［実施例２］
１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 の抗炎症作用を示す薬理実験
ヘアレス・マウス（SKH-1,♀，７〜８weeks old ; Crl ）頸背部皮膚にＴＰＡ（１２−０−Tetradecanoylphorbol−１３−acetate ; Wako）を塗布し、塗布部位皮膚に惹起される種々の炎症性変化に対する１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 作用を病理組織学的に評価した。
【００６３】
▲１▼ＴＰＡ投与方法：
１００ｎｍｏｌ／ｍｌのアセトン溶液としたＴＰＡを、エーテル麻酔下で固定したヘアレス・マウスの頸背部皮膚２×３ｃｍ2 に、１００μ１塗布した。
【００６４】
▲２▼１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 投与方法：
１μｇ／ｍｌのアセトン溶液とした１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 を、エーテル麻酔下で固定したヘアレス・マウスの頸背部皮膚２×３ｃｍ2 に、ＴＰＡ塗布直後に１００μ１塗布した。
【００６５】
▲３▼群構成
１）ＴＰＡ（−）
２）ＴＰＡ（＋）／１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 （−）
塗布後３，５，７，９，２４，７２時間後
３）ＴＰＡ（＋）／１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 （＋）
塗布後３，５，７，９，２４，７２時間後
各ポイント３例実施した。
【００６６】
▲４▼抗炎症効果の評価項目
・潰瘍
・びらん
・表皮層の菲薄化
・表皮細胞の萎縮・壊死・変性
・炎症性細胞の浸潤（表皮・真皮）
▲５▼上記項目の評価方法
Hematoxylin-Eosin 染色を施した組織切片を顕微鏡下で観察し、上記の項目について 以下に示した基準によるスコア付けを行った。
【００６７】
−；変化なし
±；軽微
＋；軽度
++；中等度
+++ ；高度
▲６▼結果
【００６８】
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
【表６】
【表７】
上記結果から、以下のことが明らかである。
【００７６】
ＴＰＡの塗布により、皮下組織から真皮層にかけての炎症性細胞の浸潤、表皮層への炎症性細胞の浸潤および表皮細胞の萎縮・壊死・変性、表皮層の菲薄化は経時的にその重篤度を増し、塗布後２４時間目に最大となった。さらに塗布後２４時間目には、びらん及び潰瘍も認められた。これらの変化は、塗布後７２時間目には減弱あるいは消失した。
【００７７】
ＴＰＡの塗布により惹起されるこれらの変化に対して１，２４（ＯＨ）2 Ｄ3 を塗布することにより、以下の効果が認められた。
【００７８】
1.ＴＰＡ塗布後５時間目で、皮下組織から真皮層にかけての炎症性細胞の浸潤を抑制した。（急性期の炎症抑制）
2.ＴＰＡ塗布後の変化が最も激しい２４時間目では、表皮層への炎症性細胞の浸潤、表皮細胞の萎縮・壊死・変性、表皮層の菲薄化、びらん及び潰瘍の程度あるいは出現頻度が低減した。皮下組織から真皮層にかけての炎症性細胞浸潤については明らかな効果を認めなかった。
【００７９】
3.表皮層への炎症性細胞の浸潤、表皮細胞の萎縮・壊死、表皮層の菲薄化、びらん及び潰瘍の程度あるいは出現頻度に対しては、塗布後７２時間目においてもその効果が持続していた。（慢性期の炎症抑制）
【００８０】
［実施例３］
１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール軟膏剤の調製
１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール０．２ｍｇをアジピン酸ジイソプロピル０．５ｇに溶解し、この溶液を５０℃に加温した白色ワセリン９９．５ｇ中に撹拌しつつ混合して、均一な組成物とし、放冷して無水性の軟膏剤（１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール濃度２μｇ／ｇ）を得た。同様にして１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール０．５ｍｇを用いて５μｇ／ｇの軟膏も得た。
【００８１】
［実施例４］
１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール軟膏剤の調製
１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール０．５ｍｇをアジピン酸ジイソプロピル１．５ｇに溶解し、この溶液を５０℃に加温した白色ワセリン９９．５ｇ中に撹拌しつつ混合して、均一な組成物とし、放冷して無水性の軟膏剤（１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール濃度１５μｇ／ｇ）を得た。
【００８２】
［実施例５］
下記表８に記載の各成分２〜９、１１及び１３をとり混合し８０℃に加熱して溶液とし、そこへ成分１を添加して均一な溶液（溶液Ａ）とした。一方、成分１６に１０、１２、１４、１５を添加して製した溶液（溶液Ｂ）を８０℃に加熱した。真空乳化機（みずほ製）内で溶液Ａと溶液Ｂとを混合して均一な乳化組成物とした後、室温まで冷却して白色のクリーム（実施例５）を得た。
【００８３】
【表８】
［実施例６］
アトピー性皮膚炎の患者（１９才，男性 罹病期間４年）の顔面に実施例３の１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール軟膏剤（５μｇ／ｇ）を２ｇ／回、２回／日で投与した結果を表９に記載する。
【００８５】
【表９】
皮膚所見及び総合判定の皮膚重症度の判定区分は高度、中等度、軽度、軽微、なしの５区分とした。なお、投与前後において血清カルシウム、リンなど臨床検査への影響はなかった。
【００８７】
［実施例７］
慢性湿疹の患者（１７才、女性 罹病期間１５年）の全身に実施例４の１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール軟膏剤（１５μｇ／ｇ）を１０ｇ／２回、２回／日、単純塗布で投与した結果を表１０に記載する。
【００８８】
【表１０】
皮膚所見及び総合判定の皮膚重症度の判定区分は高度、中等度、軽度、軽微、なしの５区分とした。なお、投与前後において血清カルシウム、リンなど臨床検査への影響はなかった。
【００９０】
［実施例８］
アトピー性皮膚炎性痒疹の患者に実施例３の１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール軟膏剤（２μｇ／ｇ）を投与した結果を以下に記載する。
【００９１】
２８才、女性 罹病期間２０年
投与部位 上、下肢
投与方法 ２ｇ／回、２回／日
【００９２】
【表１１】
皮膚所見及び総合判定の皮膚重症度の判定区分は高度、中等度、軽度、軽微、なしの５区分とした。なお、投与前後において血清カルシウム、リンなど臨床検査値への影響はなかった。
【００９４】
［実施例９］
結節性痒疹の患者に実施例３の１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール軟膏剤（２μｇ／ｇ）を投与した結果を以下に記載する。
【００９５】
２９才、男性 罹病期間３年
投与部位 上肢
投与方法 １ｇ／回、２回／日、単純塗布
【００９６】
【表１２】
皮膚所見及び総合判定の皮膚重症度の判定区分は高度、中等度、軽度、軽微、なしの５区分とした。なお、投与前後において血清カルシウム、リンなど臨床検査値への影響はなかった。
【００９８】
［実施例１０］
亜急性痒疹の患者に実施例３の１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール軟膏剤（２μｇ／ｇ）を投与した結果を以下に記載する。
【００９９】
５８才、男性 罹病期間５カ月
投与部位 上、下肢、躯幹
投与方法 １ｇ／回、２回／日、単純塗布
【０１００】
【表１３】
皮膚所見及び総合判定の皮膚重症度の判定区分は高度、中等度、軽度、軽微、なしの５区分とした。なお、投与前後において血清カルシウム、リンなど臨床検査値への影響はなかった。
【０１０２】
［実施例１１］
脂漏性皮膚炎の患者に実施例３の１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール軟膏剤（２μｇ／ｇ）を投与した結果を以下に記載する。
【０１０３】
５４才、男性
投与部位 顔面
投与方法 ２ｇ／回、２回／日
【０１０４】
【表１４】
［実施例１２］
脂漏性皮膚炎の患者に実施例３の１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロール軟膏剤（２μｇ／ｇ）を投与した結果を以下に記載する。
【０１０６】
８３才、女性
投与部位 顔面
投与方法 ２ｇ／回、２回／日
【０１０７】
【表１５】
なお、表１４及び表１５において皮膚所見、皮膚重症度の判定区分は高度、中等度、軽度、軽微、なしの５区分とした。また実施例１１及び実施例１２のいずれの場合も、投与前後において血清カルシウム、リンなどの臨床検査値への影響はなかった。
【０１０９】
なお、本患者に、実施例５のクリーム剤を用いた場合にも、軟膏剤の場合と同様の治療効果が得られ、副作用も格別なく、かつ、使用感も優れていた。
【０１１０】
［実施例１３］
１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの抗炎症作用、止痒作用を示唆する肥満細胞脱顆粒抑制作用（ＴＰＡにより惹起される肥満細胞の脱顆粒亢進に対する作用）
ヘアレスマウス（ＳＫＨ−１，♀，８weeks old; Crl）背部皮膚にＴＰＡ（12-O-Tetradecanoyl phorbol-13-acetate; Walco）を塗布して真皮における肥満細胞の脱顆粒を亢進させ、これに対する１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの作用を脱顆粒の程度毎の細胞数の割合で評価した。
【０１１１】
▲１▼ＴＰＡ投与方法：
１００ｎｍｏｌ／１００μｌのアセトン溶液としたＴＰＡをヘアレス・マウスの背部皮膚２×３ｃｍ2 に、１００μ１塗布した。
【０１１２】
▲２▼被験物質投与方法：
１００ｎｇ／１００μｌのアセトン溶液とした１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールをヘアレス・マウスの背部皮膚２×３ｃｍ2 に、ＴＰＡ塗布直後に１００μ１塗布した。
【０１１３】
▲３▼組織切片作製方法
塗布２４時間後にヘアレス・マウス背部塗布部位を採取し、ホルマリン緩衝液で固定後、パラフィン包埋し、厚さ約３μｍで切片を作製した。この切片を脱パラフィン処理後、ギムザ染色液にて染色し、水洗後アルコール／キシレンにて透徹し封入して試料とした。
【０１１４】
▲４▼肥満細胞の脱顆粒評価方法
１固体より１組織切片（各群３切片）を作製し、１切片より無作為に７部位（１群計２１部位）を決めて６ｍｍ幅で垂直方法にスキャンして計数した。肥満細胞は計数部位における総数及びその中の脱顆粒している数を数えた。また、脱顆粒した肥満細胞の中で５０％以上の顆粒が脱顆粒した肥満細胞を高度脱顆粒（Extensive）、１０〜５０％の顆粒が脱顆粒した肥満細胞を中等度脱顆粒（Moderate）と評価した。また、これら以外は脱顆粒しないものとした。
【０１１５】
▲５▼結果
無処置群、対照群〔ＴＰＡ（＋），１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 （−）〕、試験群〔ＴＰＡ（＋），１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 （＋）〕の３群について、肥満細胞中の高度脱顆粒したもの、中等度脱顆粒したもの、及び、脱顆粒しなかったものの割合（％）を表１６に記載した。なお、肥満細胞の総数は３群の間で大きな差はなかった。
【０１１６】
【表１６】
ＴＰＡ塗布により肥満細胞の脱顆粒が亢進し、特に５０％以上脱顆粒した群が増加した。これに対し１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 を投与することにより脱顆粒した肥満細胞の割合が低下し、特に５０％以上脱顆粒した群が有意に減少した。この結果は、著しく脱顆粒した肥満細胞がケミカルメディエーターの放出により炎症をひきおこすことを考慮すると、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレカルシフェロールの抗炎症作用、止痒作用等を示唆するものであり、本発明の治療剤が湿疹・皮膚炎群、アトピー性皮膚炎、痒疹型アトピー性皮膚炎、急性・慢心湿疹、脂漏性皮膚炎、痒疹、アトピー性皮膚炎性痒疹、及び各種疾患に伴うそう痒症等に有効であることを薬理学的に支持するものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、実施例１における１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 の細胞増殖抑制作用のうちＯＤＣ活性を指標として測定した結果を示す。
【図２】図２は、実施例１における１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）2 Ｄ3 の細胞増殖抑制作用のうちＤＮＡ合成を指標として測定した結果を示す。[0001]
[Industrial application fields]
The present inventionA novel compound containing 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol as an active ingredientSkin diseases selected from urticaria and seborrheic dermatitisIt relates to a therapeutic agent.
[0002]
[Prior art and problems to be solved by the invention]
The eczema / dermatitis group is an inflammatory dermatosis exhibiting eczema / dermatitis type reaction (inflammatory dermatoses), spongiosis in the epidermis, (epidermis) hyperkeratosis, (epidermis) Inner) A collective term for skin diseases in which infiltration of inflammatory cells is observed. Clinically, old and new small lesions such as erythema, papules, blisters, pustules, ligatures, scales are mixed, pruritus, acute / subacute / chronic course, and when it becomes chronic, it shows lichenification There are many cases.
[0003]
Regarding the classification of eczema / dermatitis group, there is no universal pathomorphological uniformity, and the causal concept is considered to be intense. (Satoshi Saito “Skin Pathology for Clinicians and Pathologists” Springer (Fairlark Tokyo, 1992, p. 94-), it is unavoidable to overlap some concepts, but the list of commonly used ones is acute, subacute, or chronic eczema, contact dermatitis, money Eczema, autosensitizing dermatitis, atopic dermatitis, vidar lichen, dyshidrosis dermatitis, exfoliative dermatitis, sun dermatitis, perioral dermatitis, diaper dermatitis, neurodermatitis, seborrhea Dermatitis, housewife eczema, sebum-deficient eczema and the like.
[0004]
The onset of these diseases has been increasing in recent years, such as atopic dermatitis, but there are many reasons why many physical and chemical factors and allergic mechanisms are considered but the cause is not clear.
[0005]
Anti-inflammatory agents are conventionally used for pharmacotherapy of these diseases because they are inflammatory diseases. For example, corticosteroids (steroids) such as clobetasol propionate, diflurazon acetate difluprednate, dexamethasone propionate, Non-steroidal drugs such as ibuprofen piconol, ufenate, glutyrrhetinic acid, crotamiton and spirophene are mainly used as external preparations.
[0006]
However, the current situation is that these drug therapies are not sufficient. That is, for steroidal drugs, although symptomatic efficacy is recognized, side effects or worsening of symptoms upon recurrence after a pause (rebound phenomenon) is widely known.
[0007]
Side effects include skin infections, hypersensitivity, suppression of pituitary / adrenocortical function, steroid pressure ulcers, increased intraocular pressure due to use on the eyelid skin, glaucoma, posterior capsule cataract, etc. There are many things that are forbidden. In addition, since the site of the disease such as the face and neck has high absorbability of the drug on the skin of the site, systemic side effects of the steroidal drug are likely to occur, and application of the steroidal drug to the site is avoided as much as possible. On the other hand, non-steroidal drugs have disadvantages such as low efficacy compared to steroidal drugs, rashes on the application site, and many drugs that cannot be used in ophthalmology. Like.
[0008]
In addition to the above-mentioned side effects and usage concerns, eczema / dermatitis group diseases are particularly common in patients with relatively sensitive skin, such as infants, infants, children, women, and other comorbidities. More difficult to use. Therefore, it is effective and safe for eczema / dermatitis group patients, or a plurality of the above-mentioned eczema / dermatitis group diseases have developed in combination, or patients with eczema / dermatitis group that have developed together, There is a strong demand for an easy-to-use drug that is effective and safe for patients with eczema / dermatitis complicated with other diseases, and that can be used even at sites with high drug absorbability such as the face.
[0009]
By the way, 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol is an active vitamin D.ThreeIt belongs to the class. Active vitamin D such as 1α-hydroxycholecalciferol, 1α, 24-dihydroxycholecalciferol, 1α, 25-dihydroxycholecalciferolThreeIs known to be useful for so-called osteopenia such as osteoporosis and osteomalacia [Basic Research and It's Clinical Application ( Basic Research and it's clinical Applications), 1099-1106 (1979)].
[0010]
On the other hand, active vitamin D in recent yearsThreeNew pharmacological actions such as growth-inhibiting action and differentiation-inducing action have been found, and the possibility as therapeutic agents for patients other than osteopenia is being investigated. For example, active vitamin D to a therapeutic agent for rheumatoid arthritis (JP-A-56-26820), an agent for inducing differentiation of cancer cells (JP-A-57-149224), and the like.ThreeThe application of a kind is being considered.
[0011]
The present inventors have already considered active vitamin D in view of the above situation.ThreeAs a result of research on the possibility of a new kind of therapeutic agent, 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol is effective as a therapeutic agent for psoriasis, which is a kind of skin disease, and further, 1α, 24 (R )-When dihydroxycholecalciferol is used as a therapeutic agent for psoriasis, it has been found that an ointment comprising a specific solvent and a specific lipophilic base is particularly suitable. One or two or more kinds selected from the group consisting of fatty acid esters, higher alcohols, and propylene carbonate, which contain dihydroxycholecalciferol as an active ingredient and whose dosage form dissolves 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol Hydrophobic or anhydrous solvent, white petrolatum, yellow petrolatum, liquid paraffin and liquid paraffin An ointment comprising a lipophilic base which is one or a mixture of two or more selected from polyethylene gel, wherein the amount of the hydrophobic or anhydrous solvent is 0.01 to 25.0 of the ointment. A therapeutic agent for psoriasis that was weight percent was proposed. (See Japanese Patent Publication No. 3-68009).
[0012]
In the above-mentioned psoriasis, infiltration of epidermis cells is observed in the epidermis layer, but there is no abnormal change in the dermis layer. On the other hand, eczema / dermatitis group diseases have the same changes in the epidermis as psoriasis, but also in the dermis, infiltration of neutrophils, lymphocytes, monocytes, etc., vasodilatation edema, angiogenesis, loss of elastic fibers Increased antigen-presenting cells are observed, which is a pathological condition different from psoriasis.
[0013]
Active vitamin D for eczema / dermatitis groupThreeThere have been few reports on the application of categoricals, and EP-A-0129003 discloses only an external preparation containing 1α-hydroxycholecalciferol or 1α, 25-dihydroxycholecalciferol, and eczema, psoriasis, skin It has been shown to be effective for inflammation, xeroderma.
[0014]
However, 1α-hydroxycholecalciferol disclosed in EP-A-0129003 is a precursor of the active form 1α, 25-dihydroxycholecalciferol, and therefore its active vitamin DThreeThe action (differentiation induction, growth inhibitory action, etc.) is weak, and it is considered that it is not actually suitable for the treatment of eczema / dermatitis group of local skin diseases. That is, even if 1α-hydroxycholecalciferol is applied to the skin area of the diseased site, active vitamin D is not present in the skin.ThreeActive vitamin D which has a small amount of 25-hydroxylase which is a convertase to 1α, 25-dihydroxycholecalciferol which is locally effectiveThreeI can't hope to switch to. In addition, 1α-hydroxycholecalciferol can be systemically administered by oral administration, etc., and converted into active 1α, 25-dihydroxycholecalciferol in the liver. The amount of 1α, 25-dihydroxycholecalciferol produced is extremely small, and it is considered that many of its medicinal effects cannot be expected.
[0015]
Further, 1α, 25-dihydroxycholecalciferol disclosed in EPA0129003 has been reported to cause hypercalciuria by local administration (external use) (for example, the 7th vitamin) D Workshop Proceeding, Walter de Gruyter, Berlin, New York, 1988, A. Langner et al.). In other words, the current situation is that there are questions about the safety of the drug.
[0016]
That is, the object of the present invention is to use novel 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol as an active ingredient.Skin diseases selected from wheal and seborrheic dermatitisIt is to provide a therapeutic agent.
[0017]
In addition, the object of the present invention is to provide a novel and excellent safety and safety.Skin diseases selected from urticaria and seborrheic dermatitisIt is to provide a therapeutic agent.
[0018]
Furthermore, the object of the present invention is to provide a novel, highly effective and safe and reduced side effect or rebound phenomenon.Skin diseases selected from urticaria and seborrheic dermatitisIt is to provide a therapeutic agent.
[0019]
Furthermore, the object of the present invention is a novel dosage form that is excellent in its effectiveness and safety, has reduced side effects or rebound phenomenon, and is easy to use and can be used on the face and the like.Skin diseases selected from urticaria and seborrheic dermatitisIt is to provide a therapeutic agent.
[0020]
As a result of intensive studies on the pharmacological effects, clinical effects and safety of active vitamin D3 in the conventional eczema / dermatitis group, the present inventors have found that 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol isSkin disease selected from urticaria and seborrheic dermatitis1α, 24 (R) compared to active vitamin D3 such as 1α-hydroxycholecalciferol, 1α-25-dihydroxycholecalciferol, etc. -It discovered that dihydroxycholecalciferol was more excellent in points, such as effectiveness and safety, and came to this invention.
[0021]
[Means for Solving the Problems]
Thus, the present invention contains 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol as an active ingredient.For skin diseases selected from eruptions and seborrheic dermatitis whose dosage form is an external preparationIt is a therapeutic agent.
[0022]
1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol is a known compound, for example, Journal of the American Chemical Society (J. Amer. Chem. Soc), 95, 2748 (1973); Chemical Pharma It can be synthesized more easily by the method described in Chem. Pharm. Bull., 21, 568 (1978); US Pat. No. 4,228,911, etc. In addition, the 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol of the present invention is in a crystalline state because of its excellent stability, for example, 1α, 24 (R) described in JP-B-3-59063. It is also preferred to use the monohydrate of) -dihydroxycholecalciferol.
[0023]
Of the present inventionSkin disease refers to, for example, acute, subacute, or chronic seborrheic dermatitis, prurigo.
[0026]
Similarly, atopic dermatitis rash, nodular rash, or subacute rash, which is said to develop during repeated atopic dermatitis symptomsTheIt is mentioned as preferable. Among these, atopic dermatitis rash is more preferable.
[0027]
1α, 24 (R) -Dihydroxycholecalciferol of the present inventionIs administered topically. As a topical preparation, it is administered directly to a skin disease site in a semi-solid preparation such as an ointment / cream, a liquid preparation such as a lotion, or a tape preparation.
[0029]
Even for external useDepending on the formulation, safety, therapeutic effect and the like may differ. For example, the present inventors have proposed as an ointment for treating psoriasis (Japanese Patent Publication No. 3-68009) and separately proposed as an ointment or an emulsion composition. (Japanese Patent Application No. 5-217261, International Application PCT / JP94 / 01443 Specification) Creams are more useful than other formulations and are useful.
[0030]
That is, as an ointment, (a) 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol as a main agent, (b) fatty acid esters and higher alcohols that dissolve 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol And a hydrophobic / anhydrous solvent which is one or a mixture of two or more selected from the group consisting of propylene carbonate, and (c) one or two selected from white petrolatum, yellow petrolatum, liquid paraffin and liquid paraffin polyethylene gel An ointment comprising a lipophilic base which is a mixture of seeds or more, wherein the amount of the hydrophobic / anhydrous solvent is 0.01-25.0% by weight of the ointment, and the fatty acid ester Are diisopropyl adipate, decyl oleate, diethyl sebacate, isopropyl myristate, triacetin, tricaprone Glycerin acid, glyceryl tricaprylate, glyceryl tricaprate, glyceryl trilaurate, glyceryl trilinoleate, propylene glycol dicaprylate, propylene glycol dipelargonate, propylene glycol dicaprate, or a mixture of two or more An ointment in which the higher alcohol is one or a mixture of two or more selected from the group consisting of octyldodecanol, cetyl alcohol, and oleyl alcohol is useful.
[0031]
As the cream, (a) 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol as the active ingredient, and (b) (a) 5 to 20 parts by weight of white petrolatum and 5 to 15 parts by weight of higher alcohols. An oil phase component consisting of a solid oil component and (a) a liquid oil component consisting of 3 to 10 parts by weight of squalane, (C) an aqueous phase component, and (d) 2.5 to 7.5 parts by weight of 2 A 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol cream comprising a surfactant comprising at least seeds, wherein the weight ratio of the solid oil to the liquid oil (the solid oil / the liquid oil) is The higher alcohol is composed of stearyl alcohol and cetyl alcohol, and the weight ratio of the stearyl alcohol to the higher alcohol (the stearyl alcohol / the higher alcohols). ) Is useful from about 0.65 to about 0.9.
[0032]
Of the present inventionTherapeutic agentWhen the dosage form is, for example, the above-mentioned ointment, such an ointment can be obtained according to the description in JP-B-3-68009.
[0033]
Specifically, the above lipophilic base is used alone or in combination of two or more, formulated after adding a hydrophobic / anhydrous solvent thereto, or hydrophobic / It can also be formulated after adding an anhydrous solvent to form an ointment. In such an ointment, the amount of the hydrophobic / anhydrous solvent is more preferably 0.1 to 10.0% by weight.
[0034]
In addition, the present inventionTherapeutic agentWhen the dosage form is the above-mentioned cream, examples of such a cream include those described in International Application PCT / JP94 / 01443, for example.
[0035]
More specifically,
(A) 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol as the active ingredient
(B) (a) a solid oil consisting of 5 to 20 parts by weight of white petrolatum and 5 to 15 parts by weight of higher alcohols;
(A) Liquid oil composed of 3 to 10 parts by weight of squalane
An oil phase component consisting of
(C) an aqueous phase component, and
(D) Surfactant comprising at least 2.5 to 7.5 parts by weight
1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol cream comprising: a weight ratio of the solid oil to the liquid oil (the solid oil / the liquid oil) of about 2 or more, The higher alcohol is composed of stearyl alcohol and cetyl alcohol, and the weight ratio of the stearyl alcohol to the higher alcohol (the stearyl alcohol / the higher alcohol) is about 0.65 to about 0.9, and the
[0036]
The white petrolatum of the cream is a product obtained by decolorizing and purifying a mixture of hydrocarbons obtained from petroleum, and for example, those specified in the Japanese Pharmacopoeia are used. Among them, high purity is desirable for the stability of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol, for example, a peroxide value of 0.5 or less is desirable. The higher alcohols are a mixture of cetyl alcohol and stearyl alcohol, and the weight ratio of stearyl alcohol in the mixture is about 0.65 to about 0.9. Among them, the range of about 0.7 to about 0.9, particularly preferably about 0.70 to about 0.85 can be mentioned. The skin permeability tends to increase as stearyl alcohol is gradually increased from cetyl alcohol alone, and when the weight ratio of stearyl alcohol exceeds about 0.7, the skin permeability increases rapidly and becomes maximum with stearyl alcohol alone. If the ratio exceeds about 0.9, the physical stability as an emulsion, particularly the physical stability during heating tends to deteriorate.
[0037]
Some commercially available cetyl alcohol and stearyl alcohol are not pure products. For example, even though it is called cetyl alcohol, there is a mixture of about 0.7 cetyl alcohol and about 0.3 stearyl alcohol, and further about 0.6 to about 0.3 cetyl alcohol, such as what is called cetostearyl alcohol. There are also mixtures of stearyl alcohol from about 0.4 to about 0.7. The cetyl alcohol and stearyl alcohol of the present invention refer to pure ones, and their mixing ratio is calculated based on them.
[0038]
In addition, squalane in such a cream is a saturated hydrocarbon obtained by reducing hydrocarbons obtained from, for example, liver oil of sharks that live in the deep sea, and, for example, those specified in the cosmetic raw material standards are used. .
[0039]
In addition to the white petrolatum, higher alcohols, and squalane described above, other solid oils and liquid oils may be added to the oil phase component of the cream. Solid paraffin can be used as the solid oil component, and the amount added thereof is, for example, within a range in which physical stability is maintained. For example, the solid oil has an appropriate hardness as a cream agent that is 1/10 parts by weight or less. It is preferable because it can be maintained. Examples of the liquid oil include esters such as medium-chain fatty acid triglycerides, diisopropyl adipate, and isopropyl myristate. The amount of these liquid oils added may be within a range in which the skin permeability of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol is maintained, for example, being 1/10, 24 parts by weight or less of squalane. R) -dihydroxycholecalciferol is preferable because it can maintain good skin permeability.
[0040]
The surfactant for the cream is composed of two or more surfactants, and the total thereof is preferably 2.5 to 7.5 parts by weight of the whole cream. More preferably, 50% by weight or more of the surfactant is one or more surfactants having an HLB value of about 5 or less, and the overall surfactant has an HLB value of about 8 to about 18. More preferably from about 8 to about 12.
[0041]
Examples of one or more surfactants having an HLB value of about 5 or less constituting 50% by weight or more include sorbitan monooleate, sorbitan monostearate, sorbitan sesquioleate, sorbitan trioleate, glyceryl monostearate, Examples thereof include one or more surfactants selected from the group consisting of glyceryl monooleate, propylene glycol monostearate and the like. The remaining surfactant is not particularly limited as long as it has an overall HLB value of about 8 to about 18, more preferably about 8 to about 12. For example, polyoxyethylene (30 or 40 or 60) Sorbit tetraoleate, polyoxyethylene (60) hydrogenated castor oil, sorbitan monolaurate, sorbitan monopalmitate, polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate, polyoxyethylene (20) sorbitan monopalmitate, polyoxyethylene ( 20) One or more interfaces selected from the group consisting of sorbitan monooleate, polyoxyethylene (20) sorbitan monooleate, polyoxyethylene (10) monolaurate, polyoxyethylene (23 or 25 or 30) cetyl ether, etc. An activator .
[0042]
The cream as described above was dissolved in a necessary amount of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol as a main ingredient together with a surfactant by heating in an emulsifier, for example, as usual. It can be mixed with the aqueous phase component and then emulsified to form a uniform emulsion, which can be cooled to produce. The cream thus obtained has excellent chemical stability of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol, and the skin permeability of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol is improved. As a result, sufficient It is a preparation that has excellent pharmacological effects and at the same time has excellent physical stability, stickiness at the time of application, and excellent feel such as no glare.
[0043]
Of the present inventionTherapeutic agentAs mentioned above, the dosage formAlthough it is an external preparation,The combination is preferably a combination of an ointment, cream, lotion or tape.
[0044]
Of these, the present inventionTherapeutic agentInSkin diseaseAcute subacute or chronic eczema, as aboveSeborrheic dermatitisAs aboveIt is a rashIf the dosage form is an external preparation such as an ointment, cream, or lotion, in particular, an ointment or cream having a specific composition as described above, a more preferable combination is given. Can do.
[0045]
In the preparation of the present invention, an appropriate amount of a preservative, an antioxidant, an absorption accelerator, a moisturizing agent and the like may be added as necessary. Examples of the preservative include paraoxybenzoic acid ester, sodium benzoate, sorbic acid, and boric acid. Examples of the antioxidant include butylhydroxyanisole and dibutylhydroxytoluene. Examples of the absorption accelerator include diisopropyl adipate, diethyl sebacate, propylene glycol carbonate, sorbitol and the like.
[0046]
An antioxidant can be added to the oil phase component of the cream. Antioxidants include butylhydroxytoluene, butylhydroxyanisole, dl-α-tocopherol, and more preferably dl-α-tocopherol, and the addition amount is usually 0.001 to 5.0 parts by weight. More preferably, it is 0.01 to 3.0 parts by weight. On the other hand, humectants, preservatives, chelating agents, buffering agents and the like can be added to the aqueous phase component. Examples of the humectant include propylene glycol, glycerin, sorbitol and the like, and the addition amount is 1 to 20 parts by weight, and more preferably 2 to 15 parts by weight. Examples of preservatives include parabens such as methylparaben, propylparaben, and mixtures thereof; chlorobutanol; monothioglycerol; sorbic acid, potassium sorbate; benzyl alcohol and the like. Part, more preferably 0.01 to 5.0 parts by weight. Examples of the chelating agent include citric acid, sodium citrate; sodium edetate, and the addition amount is 0.001 to 5.0 parts by weight, and more preferably 0.01 to 3.0 parts by weight. . Examples of the buffer include disodium hydrogen phosphate, sodium dihydrogen phosphate, and the like, which are added in an amount ratio required to adjust the pH of the aqueous phase component to 6.5 to 8.0.
[0047]
The amount of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol required for the present invention is a therapeutically effective amount and cannot be determined unconditionally because it depends on the administration method, but usually 100 μg to 0.01 μg, more preferably Is 20 μg to 0.1 μg / day. For example, in the case of tablets, these amounts may be contained per tablet. In the case of an external preparation, for example, the amount of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol as an active ingredient in the ointment or cream may be contained in an amount of 0.01 μg to 100 μg / g. In the case of an external preparation, it is more preferably 1 μg / g to 20 μg / g. For example, in the case of a cream, the concentration in the cream is usually in the range of about 0.00005 to about 0.01% by weight. Such external preparations are preferably administered twice to several times a day by simple application or the like, or once a day by a sealing method, depending on the degree of disease.
[0048]
Thus, according to the present invention, a novel compound containing 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol as an active ingredient is provided.Skin diseases selected from eruption and seborrheic dermatitis whose dosage form is an external preparationA therapeutic agent is provided.
[0049]
In view of the problems of the conventional therapeutic agent for the same disease, 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol, which is an active ingredient of the therapeutic agent of the present invention, has a growth inhibitory action on epidermal cells, 1α, 25-dihydroxycore Acute phase such as being extremely stronger than calciferol (Example 1), suppressing the infiltration of inflammatory cells from the subcutaneous tissue to the dermis layer, and maintaining the suppressive action such as the infiltration of inflammatory cells into the epidermis layer In addition, the inflammation of the chronic phase was suppressed (Example 2), and the therapeutic agent of the present invention specifically showed excellent efficacy in patients with acute to chronic atopic dermatitis and particular side effects. (Examples 6 to 12), and mast cell degranulation inhibitory action showing effectiveness in the eczema / dermatitis group of the present invention including pruritus associated with various diseases was observed. Et (Example 13) etc., and particularly when using an ointment or cream having the above-mentioned specific composition, it has excellent efficacy and safety, and in the case of a cream, it is sticky. The therapeutic significance of providing such a therapeutic agent is extremely large, such as an excellent effect in use feeling that the feeling of glare is significantly reduced.
[0050]
【Example】
The effects of the present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited thereby.
[0051]
In the following examples, 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol is converted to, for example, 1α, 24 (R)-(OH).2DThree1α, 24DThree1,24D3 and 1α, 25-dihydroxycholecalciferol, for example 1,25- (OH)2DThreeAnd so on.
[0052]
[Example 1]
1α, 24 (R)-(OH)2DThreeInhibits cell proliferation
(Effects of TPA-induced hairless mouse epidermal growth ... 1,25- (OH)2DThreeComparison test)
Hairless mice (SKH-1, ♀, 7-8 weeks old; Crl) TPA (12-O-Tetradecanoylphorbol-13-acetate; Wako) is applied to the dorsal skin of the neck to promote proliferation of epidermal cells. 1α, 24 (R)-(OH)2DThree1,25- (OH) with ODC activity and DNA synthesis as indicators2DThreeAnd compared.
[0053]
(1) TPA administration method:
Neck
[0054]
(2) Test substance administration method:
Neck
[0055]
(3) ODC activity measurement
I) Group composition
1. TPA (-)
2. TPA (+) / 1α, 24 (R)-(OH)2DThree(-)
3. TPA (+) / 1α, 24 (R)-(OH)2DThree1.0 μg / head
4). TPA (+) / 1,25- (OH)2DThree 1.0 μg / head
Implemented in 5-6 cases in each group.
II) Activity measurement method
After 4 hours of application, the mouse was killed by cervical dislocation, and the skin at the application site was cut off. The obtained skin was heated at 55 ° C. for 30 seconds, and then the epidermis was peeled off with a scalpel. The epidermis was sonicated in 0.5 ml of an extract containing 50 mM sodium phosphate buffer (pH 7.2), 0.1 mM pyridoxal phosphate, 0.1 mM ethylenediaminetetraacetic acid under ice cooling, 300,000 g × 20 minutes, Centrifugation was performed at 4 ° C. This centrifugal supernatant was used as an enzyme solution for ODC activity measurement. The measurement was performed according to the method 1). Protein quantification was performed using a protein assay (BioRad).
[0056]
Enzyme activity is generated in 1 hour per mg protein14C-CO2Expressed as nmol amount.
(Nmol CO2/ Hr / mg-protein)
[0057]
(4) DNA synthesis measurement
I) Group composition
1. TPA (-)
2. TPA (+) / 1α, 24 (R)-(OH)2DThree(-)
3. TPA (+) / 1α, 24 (R)-(OH)2
4). TPA (+) / 1,25- (OH)2
Implemented in 4-5 cases in each group.
II) Measurement method
TPA is the first time only, 1α, 24 (R)-(OH)2DThree1,25- (OH)2DThreeAcetone, which is a vehicle, was applied immediately after TPA application and twice at 10-hour intervals (total 3 times). At 23 hours after the application of TPA, 3H-thymidine (740 kBq / head) was intraperitoneally administered. After an additional hour (24 hours after TPA application), the mice were killed by cervical vertebra dislocation, and the skin at the application site was cut off. The obtained skin was heated at 55 ° C. for 30 seconds, and then the epidermis was peeled off with a scalpel. Wash the epidermis twice with 2 ml of 0.2N perchloric acid under ice-cooling and once with 2 ml of ethanol / ether (1/1), add 1 ml of 0.5N perchloric acid, and add DNA for 10 minutes at 90 ° C. Extracted. A part of the DNA solution was taken and the radioactivity was measured with a liquid scintillation counter. The amount of DNA was quantified by the Burton method, and the amount of radioactivity (3H-thymidine (Thy)) incorporated in the unit DNA amount (dpm / μg-DNA) was calculated.
[0058]
▲ 5 ▼ Result
I) 1α, 24 (R)-(OH) for induction of epidermal ODC activity induced by TPA application2DThree(Fig. 1)
From FIG. 1, epidermal ODC activity was induced to about 15 times that of the acetone application group by TPA application, but this induction was induced by 1α, 24 (R)-(OH).2DThreeIt can be seen that is suppressed at an application amount of 0.1 μg / head or more. 1α, 24 (R)-(OH) at a coating amount of 1.0 μg / head2DThreeSuppresses ODC activity to 27% of the TPA alone application group, 1,25- (OH)2DThreeThe inhibitory action was stronger than 54%.
[0059]
II) 1α, 24 (R)-(OH) for enhancement of epidermal DNA synthesis by TPA application2DThree(Fig. 2)
From FIG. 2, the DNA synthesis of epidermal cells was enhanced about twice as much as the acetone application group by TPA application, and this enhancement was expressed by 1α, 24 (R)-(OH).2DThreeIt can be seen that the coating was significantly suppressed at a coating amount of 10 μg / head. 1α, 24 (R)-(OH) at this dose2DThreeSuppresses DNA synthesis to 58% of the TPA alone application group, and the inhibition intensity is the same dose of 1,25- (OH)2DThreeIt was more powerful than 62%.
[0060]
1α, 24 (R)-(OH)2DThreeIncreases the proliferation of hairless mouse epidermis induced by TPA, that is, induces ODC activity and enhances DNA synthesis. 1,25 (OH)2DThreeIt became clear that it suppressed more strongly.
[0061]
Note: References in this example are as follows.
1) Chida K et al. Inhibition of 1 α-25-dihydroxyvitamin D3 of induction of epidermal ornithine decarboxylase caused by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate and teleocidineB1, Cancer Res., 44: 1378-1391, (1984)
[0062]
[Example 2]
1α, 24 (R)-(OH)2DThreePharmacological experiment showing anti-inflammatory activity
Hairless mice (SKH-1, ♀, 7-8 weeks old; Crl) TPA (12-0-Tetradecanoylphorbol-13-acetate; Wako) is applied to the dorsal skin of the neck, and various inflammatory effects caused on the skin of the application site 1α, 24 (R)-(OH) for change2DThreeThe effect was evaluated histopathologically.
[0063]
(1) TPA administration method:
Neck
[0064]
(2) 1α, 24 (R)-(OH)2DThreeAdministration method:
1α, 24 (R)-(OH) in 1 μg / ml acetone solution2DThree2 × 3 cm of neck and dorsal skin of hairless mouse fixed under ether anesthesia2In addition, 100 μl was applied immediately after the TPA application.
[0065]
(3) Group composition
1) TPA (-)
2) TPA (+) / 1α, 24 (R)-(OH)2DThree(-)
3, 5, 7, 9, 24, 72 hours after application
3) TPA (+) / 1α, 24 (R)-(OH)2DThree(+)
3, 5, 7, 9, 24, 72 hours after application
Three examples of each point were implemented.
[0066]
(4) Evaluation items for anti-inflammatory effect
・ Ulcer
・ Ero
・ Thinning of skin layer
・ Atrophy / necrosis / degeneration of epidermal cells
・ Infiltration of inflammatory cells (epidermis / dermis)
(5) Evaluation method for the above items
Tissue sections stained with Hematoxylin-Eosin were observed under a microscope, and the above items were scored according to the criteria shown below.
[0067]
-: No change
±: Minor
+; Mild
++; moderate
+++ Advanced
▲ 6 ▼ Result
[0068]
[Table 1]
[Table 2]
[Table 3]
[Table 4]
[Table 5]
[Table 6]
[Table 7]
From the above results, the following is clear.
[0076]
The severity of inflammatory cell infiltration from the subcutaneous tissue to the dermis layer, inflammatory cell infiltration and epidermal cell atrophy / necrosis / degeneration, and thinning of the epidermis layer over time by application of TPA And reached a maximum at 24 hours after application. Furthermore, erosion and ulcer were also observed 24 hours after application. These changes were attenuated or disappeared 72 hours after application.
[0077]
1,24 (OH) against these changes caused by application of TPA2DThreeThe following effects were recognized by applying.
[0078]
1. At 5 hours after application of TPA, infiltration of inflammatory cells from the subcutaneous tissue to the dermis layer was suppressed. (Acute inflammation suppression)
2. In the 24th hour after the most dramatic change after TPA application, infiltration of inflammatory cells into the epidermal layer, atrophy / necrosis / degeneration of epidermal cells, thinning of the epidermal layer, erosion and ulcers are reduced in degree or frequency did. There was no clear effect on inflammatory cell infiltration from the subcutaneous tissue to the dermis layer.
[0079]
3. Infiltration of inflammatory cells into the epidermis layer, epithelial cell atrophy / necrosis, thinning of the epidermis layer, erosion and ulcer, or the frequency of appearance, the effect persists even 72 hours after application It was. (Inhibition of inflammation in chronic phase)
[0080]
[Example 3]
Preparation of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol ointment
Dissolve 0.2 mg of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol in 0.5 g of diisopropyl adipate and mix this solution with stirring into 99.5 g of white petrolatum heated to 50 ° C. The composition was allowed to cool to obtain an anhydrous ointment (1α, 24 (R) -
[0081]
[Example 4]
Preparation of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol ointment
Dissolve 0.5 mg of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol in 1.5 g of diisopropyl adipate and mix this solution with stirring in 99.5 g of white petrolatum heated to 50 ° C. The composition was allowed to cool to obtain an anhydrous ointment (1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol concentration 15 μg / g).
[0082]
[Example 5]
[0083]
[Table 8]
[Example 6]
The 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol ointment (5 μg / g) of Example 3 was applied to the face of a patient with atopic dermatitis (19 years old, male disease duration 4 years) 2 g / dose, 2 times / day. Table 9 shows the results of administration.
[0085]
[Table 9]
The skin findings and comprehensive judgments for skin severity were classified into five categories: high, moderate, mild, minor, and none. There was no effect on clinical tests such as serum calcium and phosphorus before and after administration.
[0087]
[Example 7]
The whole body of a patient with chronic eczema (17 years old, female morbidity 15 years) was treated with 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol ointment (15 μg / g) of Example 4 10 g / 2 times, 2 times / day, The results of administration by simple application are listed in Table 10.
[0088]
[Table 10]
The skin findings and comprehensive judgments for skin severity were classified into five categories: high, moderate, mild, minor, and none. There was no effect on clinical tests such as serum calcium and phosphorus before and after administration.
[0090]
[Example 8]
The results of administering 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol ointment (2 μg / g) of Example 3 to a patient with atopic dermatitis rash are described below.
[0091]
28 years old, female 20 years
Administration site Upper and lower limbs
Administration method 2g / time, 2 times / day
[0092]
[Table 11]
The skin findings and comprehensive judgments for skin severity were classified into five categories: high, moderate, mild, minor, and none. There was no effect on clinical laboratory values such as serum calcium and phosphorus before and after administration.
[0094]
[Example 9]
The results of administering 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol ointment (2 μg / g) of Example 3 to patients with nodular rash are described below.
[0095]
29 years old, male 3 years
Administration site Upper limb
Administration method 1g / time, 2 times / day, simple application
[0096]
[Table 12]
The skin findings and comprehensive judgments for skin severity were classified into five categories: high, moderate, mild, minor, and none. There was no effect on clinical laboratory values such as serum calcium and phosphorus before and after administration.
[0098]
[Example 10]
The results of administering 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol ointment (2 μg / g) of Example 3 to patients with subacute rash are described below.
[0099]
58 years old, male 5 months sick
Administration site Upper, lower limbs, trunk
Administration method 1g / time, 2 times / day, simple application
[0100]
[Table 13]
The skin findings and comprehensive judgments for skin severity were classified into five categories: high, moderate, mild, minor, and none. There was no effect on clinical laboratory values such as serum calcium and phosphorus before and after administration.
[0102]
[Example 11]
The results of administering 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol ointment (2 μg / g) of Example 3 to patients with seborrheic dermatitis are described below.
[0103]
54 years old, male
Administration site Facial
Administration method 2g / time, 2 times / day
[0104]
[Table 14]
[Example 12]
The results of administering 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol ointment (2 μg / g) of Example 3 to patients with seborrheic dermatitis are described below.
[0106]
83 years old, female
Administration site Facial
Administration method 2g / time, 2 times / day
[0107]
[Table 15]
In Tables 14 and 15, the classification of skin findings and skin severity was classified into five categories: high, moderate, mild, minor, and none. In both cases of Example 11 and Example 12, there was no effect on clinical laboratory values such as serum calcium and phosphorus before and after administration.
[0109]
In addition, when the cream of Example 5 was used for this patient, the same therapeutic effect as in the case of the ointment was obtained, the side effects were not exceptional, and the feeling of use was excellent.
[0110]
[Example 13]
Mast cell degranulation inhibitory action suggesting anti-inflammatory action and antipruritic action of 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol (effect on mast cell degranulation enhancement induced by TPA)
Hairless mice (SKH-1, 8 weeks old; Crl) TPA (12-O-Tetradecanoylphorbol-13-acetate; Walco) is applied to the back skin to enhance degranulation of mast cells in the dermis. , 24 (R) -dihydroxycholecalciferol was evaluated by the ratio of the number of cells for each degree of degranulation.
[0111]
(1) TPA administration method:
TPA in 100 nmol / 100 μl acetone solution was applied to the back skin of
[0112]
(2) Test substance administration method:
1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol in 100 ng / 100 μl acetone solution was applied to the back skin of
[0113]
(3) Tissue section preparation method
24 hours after application, the hairless mouse back application site was collected, fixed with formalin buffer, embedded in paraffin, and sliced with a thickness of about 3 μm. This section was deparaffinized, dyed with Giemsa staining solution, washed with water, then permeated with alcohol / xylene and sealed to prepare a sample.
[0114]
(4) Mast cell degranulation evaluation method
One tissue section (3 sections for each group) was prepared from 1 solid, and 7 sites (21 sites in 1 group in total) were randomly determined from 1 section and counted by scanning in a vertical method with a width of 6 mm. Mast cells were counted at the total number at the counting site and the number of degranulation therein. Further, among degranulated mast cells, mast cells in which 50% or more of granules have been degranulated are highly degranulated (Extensive), and mast cells in which 10 to 50% of granules are degranulated are moderately degranulated (Moderate). evaluated. Other than these, no degranulation was performed.
[0115]
▲ 5 ▼ Result
Untreated group, control group [TPA (+), 1α, 24 (R)-(OH)2DThree(-)], Test group [TPA (+), 1α, 24 (R)-(OH)2DThreeFor the three groups (+)], the percentages (%) of those that were highly degranulated, moderately degranulated, and not degranulated in mast cells are shown in Table 16. The total number of mast cells was not significantly different among the three groups.
[0116]
[Table 16]
The degranulation of mast cells was enhanced by application of TPA, and in particular, the group of degranulation of 50% or more increased. In contrast, 1α, 24 (R)-(OH)2DThree, The proportion of mast cells degranulated decreased, and in particular, the group degranulated by 50% or more significantly decreased. This result suggests that 1α, 24 (R) -dihydroxycholecalciferol has anti-inflammatory action, anti-pruritic action, etc., considering that significantly degranulated mast cells cause inflammation by the release of chemical mediators. The therapeutic agent of the present invention is associated with eczema / dermatitis group, atopic dermatitis, eczema type atopic dermatitis, acute / caricative eczema, seborrheic dermatitis, prurigo, atopic dermatitis acne, and various diseases It is pharmacologically supported to be effective for pruritus and the like.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows 1α, 24 (R)-(OH) in Example 1. FIG.2DThree2 shows the results of measurement using the ODC activity as an index among the cell growth inhibitory effects of
FIG. 2 shows 1α, 24 (R)-(OH) in Example 1.2DThree1 shows the results of measurement of DNA synthesis using as an index among the cell growth inhibitory effects.
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