JP3704172B2 - キレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体及 びその用途 - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、新規なキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩、該化合物から誘導される放射性金属錯体、及びその錯体を含有してなるヒトを含む哺乳動物の脳及び心臓のイメージングに有用な新規な放射性診断剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
放射性同位元素により標識された化合物は、従来から画像診断を目的にイメージング剤として使用されてきている。これらの標識には、体内の組織や器官を透過する放射線を放出するものでなければならず、ガンマ線、Ｘ−線又はポジトロン放射線を放出する放射性同位元素が用いられている。
【０００３】
これらの条件を満たす好ましい放射性同位元素として、ヨウ素−１２３及びテクネチウム−９９ｍ（以下99m Ｔｃという）等をあげることができる。特に、99m Ｔｃは、放出するガンマ線のエネルギーが１４０ＫｅＶと汎用的に利用しうる放射線イメージング装置におけるシンチグラム像にも適し、特定臓器の描出、特定疾患の検出、及び動態検査を目的とした核医学領域において、その半減期が６時間と適当である上、ジェネレーターの普及により容易にしかも安価に入手できるという利点を有していることから、特に好ましい放射性同位元素ということができる。
【０００４】
99m Ｔｃ錯体を用いた脳を標的器官としたインビボイメージング用放射性診断剤としては、特開昭６１−１４３３５１号公報に記載されているプロピルアミンオキシムの99m Ｔｃ錯体、心臓を標的器官としたものについては、特開昭６２−２０１３６３号公報に記載されているエーテルイソニトリルの99m Ｔｃ錯体があげられるが、これらの錯体は、脳及び心臓の両方を標的器官とするものではなかった。
【０００５】
特開平４−９１０７３号公報には、フェニルジアミノジチオール誘導体の99m Ｔｃ錯体が記載され、これらの多くが高い脳集積と高い心臓集積を示すことが記載されている。しかし、J.Med.Chem. (B.J.Mcbride et al, 第 36 巻, 81-86 頁, 1993年) には、フェニルジアミノジチオール誘導体の99m Ｔｃ錯体のラットにおける体内分布について、脳及び心臓へは高い集積を認めるが、主たる集積臓器は肝臓であり、そのクリアランスが緩徐であったと記載されている。
【０００６】
即ち、該錯体の体内動態について、脳及び心臓に高い集積性を示しているが、肝臓への集積も４０％以上の値を示しており、心臓のイメージング用製剤としては肝臓への集積性が高いという問題点を有することを示している。更に、99m Ｔｃが有する優れた物理学的特性を生かすためにも、速やかに代謝されて体外に***されることは、患者の被曝の観点からも重要な課題であった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、かかる従来技術のキレート形成性化合物と99m Ｔｃ等の放射性同位元素からなる放射性金属錯体が、脳又は心臓のみを標的器官とする製剤であること、更に、脳及び心臓の両方を標的器官とする製剤でも心臓イメージング剤として必要な肝臓への低い集積が満たされていない状況に鑑み、投与後速やかに脳及び心臓に取り込まれ、イメージ撮像に適当な時間、脳内及び心臓内に保持され、錯体調製後の安定性も高く、生体内投与後における血液レベルが低く、更に肝臓からのクリアランスも良好であるヒトを含む哺乳動物の脳及び心臓をイメージングするのに有用なキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩、該化合物と放射性金属からなる放射性金属錯体、及びその錯体を含有してなる放射性診断剤を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
即ち、本発明は、
で示される構造を有するキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩（式１中、Ｒはヘテロ原子を含む基である。）であり、該化合物と放射性金属よりなる放射性金属錯体、及びその錯体を含有してなる放射性診断剤である。
【０００９】
式１中のＲとしては、例えば下記の式２〜５で示されるヘテロ原子を含む基があげられる。Ｒが、式２
（式２中、ｎは０〜５の整数、ｍは０〜４の整数ならびにｋは０〜１の整数である。）
で表される場合、好ましくはｎ＝１〜４、ｍ＝０〜４及びｋ＝０〜１であり、特に好ましくはｎ＝２〜３、ｍ＝０〜２及びｋ＝０〜１である。更に具体的には、１−（２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン）、１−（２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン）、１−（２−（２−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン）、１−（２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン）、１−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン）等のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩をあげることができる。
【００１０】
式１中のＲが、式３
（式３中、ｎは０〜５の整数である。）
で表される場合、好ましくはｎ＝１〜３であり、特に好ましくはｎ＝１である。更に具体的には、１−（２−シアノメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン又はその塩をあげることができる。
【００１１】
式１中のＲが、式４
（式４中、ｎは０〜５の整数、ｍならびにｌは０〜４の整数である。）
で表される場合、好ましくはｎ＝１〜３、ｍ＝０〜２及びｌ＝０〜２であり、特に好ましくはｎ＝２、ｍ及びｌ＝０である。更に具体的には、１−（２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン又はその塩をあげることができる。
【００１２】
式１中のＲが、式５
（式５中、ｎは０〜５の整数、ｍは０〜４の整数である。）
で表される場合、好ましくはｎ＝１〜３、ｍ＝１〜３であり、特に好ましくはｎ＝１、ｍ＝１である。更に具体的には、１−（２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−（２−メルカプト−２−メチルアミン）ベンゼン又はその塩をあげることができる。
【００１３】
式１のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体の塩としては、塩酸塩、酢酸塩等が含まれる。又、該化合物は、放射性金属と反応させ放射性金属標識錯体を得ることができる。特に、放射性医薬品として好ましい放射性同位元素である99m Ｔｃ錯体は、過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）溶液と式１で示されるキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩を塩化第一スズ等の還元剤との共存下、反応させることにより得ることが可能である。この99m Ｔｃ錯体は、
【００１４】
【化１１】
で示されると考えられる。
【００１５】
式６中、Ｒは前記の式２〜式５で表されるヘテロ原子を含む基である。
【００１６】
一般に脳イメージング製剤としての特徴は、中性の錯体であること、高脂溶性の錯体であること、分子量４００〜５００程度の錯体であること等があげられる。一方、心臓イメージング製剤としての99m Ｔｃ錯体の特徴は、従来技術の比較から、高い脂溶性を有する錯体であり、かつ主なバックグランドとなる肝臓への集積を抑え、肝臓からのクリアランスを促進させることを目的にアルコキシル基を含有することをあげることができる。
【００１７】
本発明は、先述した特開平４−９１０７３号公報のフェニルジアミノジチオール誘導体の99m Ｔｃ錯体のもつ脳及び心臓への高い集積性に加え、肝臓への集積を抑制し、かつ肝臓からのクリアランスを促進させるために、該フェニルジアミノジチオール誘導体の側鎖にアルコキシル基を含むヘテロ原子を有する官能基を導入したものである。
【００１８】
当該キレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体及びその塩は、放射性金属と容易に錯体を形成する性質を有するものであり、得られたその錯体は、実施例に示すように調製後２４時間まで安定であり、優れた安定性を有するものである。更にボーラス投与による静脈注射等の一般的に用いられる非経口投与における、生体内での安定性にも優れ、化合物自身の毒性も極めて低いという放射性診断剤としての目的を達成しうる優れた性質を有するものである。
【００１９】
更に、本発明の99m Ｔｃ錯体は局所的脳血流分布及び局所的心臓血流分布が一定し、シンチグラム撮像に適当な時間、脳内もしくは心臓内に保持される。又、血液中の放射能濃度が極めて低いうえ、肝臓への集積も低く、クリアランスも良好なことから、一投与当たり多量の放射能の適用が可能であるうえ、脳／血液比も従来技術と比べ数倍であるなど、高感度な血流を反映したイメージング用放射性診断剤として最も好ましい性質を有するものである。
【００２０】
以上述べた特性は、本発明のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩の薬学的に容認しえる99m Ｔｃ錯体が、脳及び心臓をイメージングするのに有用であることを意味している。式１のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体の典型的な合成経路及び調製方法を図１によって説明する。
【００２１】
式１のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体の合成は、出発物質である図１中化合物１の２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタール（（１）、以下化合物名に記した番号は、図１中の化合物に付した番号である。）をテトラヒドロフラン（以下、ＴＨＦという。）溶液に塩酸を加えて加水分解を行い、２−メルカプト−２−メチルプロパナール（２）を得た後、水素化シアノホウ素ナトリウムの存在下、Ｏ−フェニレンジアミンとの縮合反応によって、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（３）を得る。
【００２２】
次に、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタール（４）とナトリウムメトキシドの存在下、臭化アルキルエーテル等との縮合反応によって、図１中化合物（６）を得る。
【００２３】
このようにして得られた式１化合物の中間体２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（３）と化合物（６）を水素化シアノホウ素ナトリウムの存在下、縮合反応させることにより、目的の式１で表されるキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体を得る。
【００２４】
上記のようにして得られた式１のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩は、過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）溶液と塩化第一スズ又は亜ニチオン酸ナトリウムのような還元剤との共存下、反応させ式６で示される99m Ｔｃ錯体を得ることができる。この時、未反応の過テクネチウム酸及び不溶性の放射性不純物は、メンブランフィルター、あるいは液体クロマトグラフィー等により、取り除くことが可能である。
【００２５】
本発明のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩は、マクロゴールあるいは２−ヒドロキシ−β−シクロデキストリン（以下、ＨＰＣＤという。）等の可溶化剤を用いて水溶液にした後、薬学的に許容される適当なレドックス電位を有する通常の還元剤（例えば、塩化第一スズ、亜ニチオン酸ナトリウム及び水素化ホウ素ナトリウム）、安定剤（例えば、アスコルビン酸、ｐ−アミノ安息香酸）、賦形剤（例えば、Ｄ−マンニトール）、生成物の放射化学的純度を改良するのに役立つ促進剤（例えば、クエン酸、酒石酸、マロン酸）等とともに用時調製用キットの形態でも提供が可能である。
【００２６】
尚、本発明の放射性診断剤は、ボーラス投与による静脈注射等の一般的に用いられる非経口手段により投与することができ、その投与量は、患者の体重、年令及び適当な放射線イメージング装置等の諸条件を考慮し、イメージングが可能と考えられる放射能が決定される。ヒトを対象とする場合、通常は５〜３０ｍＣｉの範囲が好ましい。以下、実施例により、本発明を更に具体的に説述する。
【００２７】
【実施例】
（実施例１）
２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成
２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの３．０ｇ（２０．３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン５０．０ｍｌに溶解し、０．５Ｎの塩酸５０．０ｍｌを加え、一晩、加熱還流した。放冷後、水層をエーテルで抽出した後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を常圧で留去した。得られた２−メルカプト−２−メチルプロパナールは、未精製のまま次の反応に供した。
【００２８】
Ｏ−フェニレンジアミンの３．２９ｇ（３０．５ｍｍｏｌ）をメタノール１５０ｍｌに溶解し、上記で得られた２−メルカプト−２−メチルプロパナールを室温で滴下した。滴下終了後、酢酸６．０９ｇ（１０２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分攪拌後、水素化シアノほう素ナトリウム６．３８ｇ（１０２ｍｍｏｌ）を加え、更に室温で一晩攪拌を続けた。反応終了後、メタノールを減圧留去し、水を加えクロロホルムで抽出、飽和食塩水で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム）により精製し、目的物である２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの８９０ｍｇ（収率２２．４％）を淡褐色結晶として得た。
【００２９】
（実施例２）
２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）をメタノール５０．０ｍｌに溶解し、２−ブロモエチルメチルエーテルの１．３９ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及びナトリウムメトキシドの１．０８ｇ（２０．０ｍｍｏｌ）を加え、７．５時間加熱還流した。反応終了後、メタノールを減圧留去し、水を加えクロロホルムで抽出した後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）により精製し、目的物である２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．６２ｇ（収率７８．５％）を黄色油状物として得た。
【００３０】
（実施例３）
１−（２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例２で得た２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの２６２ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ１０．０ｍｌに溶解し、０．５Ｎの塩酸２．０ｍｌを加え、２時間加熱還流した。放冷後、水層をエーテルで抽出し、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナールは、未精製のまま次の反応に供した。
【００３１】
実施例１で得た２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン２５０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）をメタノール２０．０ｍｌに溶解し、前記で得られた２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナールを室温で滴下した。滴下終了後、酢酸０．３ｍｌ（５．２４ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分攪拌後、水素化シアノほう素ナトリウム４００ｍｇ（６．３７ｍｍｏｌ）を加え、室温でさらに一晩攪拌を続けた。反応終了後、メタノールを減圧留去し、水を加えクロロホルムで抽出した後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。粗生成物を分取用シリカゲル薄層クロマトグラフィー（薄層板：シリカゲル６０Ｆ254 、展開溶媒：クロロホルム）により精製し、目的物である１−（２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの３４８ｍｇ（収率８０．１％）を無色油状物として得た。
【００３２】
本化合物の２７０ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）の帰属は以下の通りである。
６．８１〜６．６５ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，ＰｈＨ）、４．１１ｐｐｍ，３．８９ｐｐｍ（各１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、３．４８ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＯＣＨ2 ）、３．３０ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3 ）、３．１２ｐｐｍ，３．０３ｐｐｍ（各２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2 ）、２．６７ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＳＣＨ2 ）、１．８４ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，ＳＨ）、１．５０ｐｐｍ，１．４３ｐｐｍ（各６Ｈ，ｓ，ＣＨ3 ）。
【００３３】
（実施例４）
２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
実施例２と同様の操作法により、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及び３−ブロモプロピルメチルエーテルの１．５３ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．９１ｇ（収率８６．７％）を無色油状物として得た。
【００３４】
（実施例５）
１−（２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例３と同様の操作法により、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの２５０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）、及び２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの２８０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である１−（２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの２８０ｍｇ（収率６１．８％）を無色油状物として得た。
【００３５】
本化合物の２７０ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）の帰属は以下の通りである。
６．８１〜６．６４ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，ＰｈＨ）、４．１１ｐｐｍ，３．８８ｐｐｍ（各１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、３．４１ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＯＣＨ2 ）、３．２８ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3 ）、３．１１ｐｐｍ，３．０２ｐｐｍ（各２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2 ）、２．５３ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＳＣＨ2 ）、１．８３ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，ＳＨ）、１．７８ｐｐｍ（２Ｈ，ｑｕｉ，ＳＣＨ2 ＣＨ 2 ＣＨ2 Ｏ）、１．５０ｐｐｍ，１．４２ｐｐｍ（各６Ｈ，ｓ，ＣＨ3 ）。
【００３６】
（実施例６）
２−（３−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
実施例２と同様の操作法により、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及び２−ブロモエチルエチルエーテルの１．５３ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である２−（３−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４２ｇ（収率６４．４％）を無色油状物として得た。
【００３７】
（実施例７）
１−（２−（２−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例３と同様の操作法により、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの２５０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）、及び２−（３−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの２８０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である１−（２−（２−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの２９７ｍｇ（収率６５．６％）を無色油状物として得た。
【００３８】
本化合物の２７０ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）の帰属は以下の通りである。
６．８２〜６．６３ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，ＰｈＨ）、４．１０ｐｐｍ，３．８８ｐｐｍ（各１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、３．５１ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＯＣＨ 2 ＣＨ2 ）、３．４５ｐｐｍ（２Ｈ，ｑ，ＯＣＨ 2 ＣＨ3 ）、３．１１ｐｐｍ，３．０３ｐｐｍ（各２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2 ）、２．６７ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＳＣＨ2 ）、１．８３ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，ＳＨ）、１．５０ｐｐｍ，１．４２ｐｐｍ（各６Ｈ，ｓ，ＣＨ3 ）、１．１５ｐｐｍ（３Ｈ，ｔ，ＯＣＨ2 ＣＨ 3 ）。
【００３９】
（実施例８）
２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
実施例２と同様の操作法により、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及び１−ブロモ−２−（２−メトキシエトキシ）エタンの１．８３ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの２．０５ｇ（収率８１．９％）を無色油状物として得た。
【００４０】
（実施例９）
１−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例３と同様の操作法により、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの２５０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）、及び２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの３１８ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である１−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン３９０ｍｇ（収率７９．４％）を無色油状物として得た。
【００４１】
本化合物の２７０ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）の帰属は以下の通りである。
６．８２〜６．６４ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，ＰｈＨ）、４．０ｐｐｍ（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、３．５９〜３．４６ｐｐｍ（６Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2 ）、３．３４ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3 ）、３．１１ｐｐｍ，３．０２ｐｐｍ（各２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2 ）、２．６９ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＳＣＨ2 ）、１．８３ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，ＳＨ）、１．５０ｐｐｍ，１．４２ｐｐｍ（各６Ｈ，ｓ，ＣＨ3 ）。
【００４２】
（実施例１０）
２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
実施例２と同様の操作法により、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及び４−クロロブチルメチルエーテル１．２３ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．８０ｇ（収率７６．８％）を無色油状物として得た。
【００４３】
（実施例１１）
１−（２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例３と同様の操作法により、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン２５０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）、及び実施例１０で得た２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタール３２３ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である１−（２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン３８７ｍｇ（収率８２．７％）を無色油状物として得た。
【００４４】
本化合物の２７０ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）の帰属は以下の通りである。
６．８０〜６．６４ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，ＰｈＨ）、４．３２ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，−ＣＨ 2 ＯＣＨ3 ）、３．２８ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ3 ）、３．１０ｐｐｍ，３．００ｐｐｍ（各２Ｈ，ｓ，−ＮＨＣＨ 2 −）、４．０９ｐｐｍ，３．８９ｐｐｍ（各１Ｈ，ｂｒｓ，−ＮＨＣＨ2 −）、２．４６ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，−ＳＣＨ2 −）、１．８３ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，−ＳＨ）、１．６５〜１．５６ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，−ＳＣＨ2 ＣＨ 2 ＣＨ 2 ＣＨ2 ＯＣＨ3 ）、１．５０ｐｐｍ，１．４１ｐｐｍ（各６Ｈ，ｓ，ＣＨ3 ）。
【００４５】
（実施例１２）
２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの２７０ｍｇ（１．８２ｍｍｏｌ）、及び１−ジメチルアミノ−２−クロロエタン塩酸塩２６３ｍｇ（１．８３ｍｍｏｌ）をエタノール２．０ｍｌと２Ｎの水酸化ナトリウム溶液２．０ｍｌの混合溶液に加え、４時間還流した。溶媒を留去した後、塩酸を加え未反応物をベンゼンで抽出し、除去した。塩酸液は、炭酸水素ナトリウムを加え液性をアルカリ性とした後、クロロホルムで目的物を抽出した。クロロホルム層は、硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を留去し、油状の目的物である２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロパナールエチレンアセタールの１６０ｍｇ（収率４０．０％）を得た。
【００４６】
（実施例１３）
１−（２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例３と同様の操作法により、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの７４．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）、及び２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロパナールの６５．９ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である１−（２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの４７．０ｍｇ（収率３８．０％）を油状物として得た。
【００４７】
（実施例１４）
２−シアノメチルチオ−２−メチルプロパナールの合成。
２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１３４ｍｇ（０．９１ｍｍｏｌ）を０．５Ｎの塩酸３．０ｍｌとＴＨＦの３．０ｍｌの混合液に加え、４時間還流した。反応後生成する２−メルカプト−２−メチルプロパナールは、クロロホルムで抽出し、これにシアノメチルブロマイド１０８ｍｇ（０．９０ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン９１．０ｍｇ（０．９０ｍｍｏｌ）を加え、室温下で５分間攪拌した。反応液は塩酸酸性とし、クロロホルムで目的物である２−シアノメチルチオ−２−メチルプロパナールを抽出した。この粗生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ベンゼン）により精製し、８４．０ｍｇ（収率６５．０％）の２−シアノメチルチオ−２−メチルプロパナールの精製物を得た。
【００４８】
（実施例１５）
１−（２−シアノメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例１４で得た２−シアノメチルチオ−２−メチルプロパナールの６７．０ｍｇ（０．４７ ｍｍｏｌ）、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの９２．０ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）、及び酢酸１６５ｍｇ（２．７５ｍｍｏｌ）相当をメタノール１０．０ｍｌに加え、室温で３０分間攪拌した。反応後、水素化シアノほう素ナトリウム８６．０ｍｇ（１．３７ｍｍｏｌ）を添加し、反応を停止させた。反応後の溶媒を留去した後、残渣に水を加え、更にこれをクロロホルムで抽出した。得られた粗生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム）で精製し、目的物である１−（２−シアノメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの１１３ｍｇ（収率７５．０％）を得た。
【００４９】
（実施例１６）
２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロパナールの合成。
実施例１４と同様の操作法により、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの９７３ｍｇ（６．５７ｍｍｏｌ）、及びエチルブロモアセテートの１１００ｍｇ（６．５９ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロパナールの７７８ｍｇ（収率６２．０％）を得た。
【００５０】
（実施例１７）
１−（２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例１５と同様の操作により、２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロパナールの７３．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）、及び２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの７５．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）から、目的物である１−（２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの９８．０ｍｇ（収率６９．０％）を得た。
【００５１】
（実施例１８）
１−（２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例３で得られた１−（２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチル−プロピルアミノ）ベンゼン（以下リガンド−１という。）をエタノールに溶解し、１．０ｍＭの濃度とした。この液０．５ｍｌに対し、市販のジェネレーターより溶出した３０ｍＣｉ／ｍｌの過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）注射液０．４５ｍｌ及び０．３ｍＭの塩化第一スズ溶液０．０５ｍｌを加え、混合し、室温で約３０分間放置した。その後、０．２２μｍのメンブランフィルターでこの調製液を濾過した。この調製液の純度は、メタノール／水＝９／１を展開溶媒としてＣ18ＯＤＳ薄層板を用いたＴＬＣで分析した。この時、標識錯体のＲｆ値は０．４１であり、その純度は９５％であった。又、この99m Ｔｃ標識調製液をＨＰＬＣ（ＯＤＳカラム：φ４．６×１５０ｍｍ，溶離液：８０％エタノール，流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ）で分析したところ、Ｒｔ４．４分にメインピーク（９９％）が認められた。
【００５２】
（実施例１９）
１−（２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例５で得られた１−（２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−２という。）をエタノールに溶解し、０．５ｍＭの濃度とした。以下、実施例１８と同様の操作法で、99m Ｔｃ標識調製液を得た。この標識錯体を実施例１８と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．３６にメイン成分が認められ、その純度は９５％であった。又、実施例１８と同様のＨＰＬＣによる分析では、Ｒｔ４．９分にメインピーク（９８％）が認められた。
【００５３】
（実施例２０）
１−（２−（２−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例７で得られた１−（２−（２−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−３という。）をエタノールに溶解し、０．５ｍＭの濃度とした。以下、実施例１８と同様の操作法で、99m Ｔｃ標識調製液を得た。この標識錯体を実施例１８と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．３５にメイン成分が認められ、その純度は９７％であった。又、実施例１８と同様のＨＰＬＣで分析したところ、Ｒｔ５．１分にメインピーク（９９％）が認められた。
【００５４】
（実施例２１）
１−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例９で得られた１−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−４という。）をエタノールに溶解し、０．５ｍＭの濃度とした。以下、実施例１８と同様の操作法で、99m Ｔｃ標識調製液を得た。この標識錯体を実施例１８と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．４１にメイン成分が認められ、その純度は９１％であった。又、実施例１８と同様のＨＰＬＣで分析したところ、Ｒｔ４．９分にメインピーク（１００％）が認められた。
【００５５】
（実施例２２）
１−（２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例１１で得られた１−（２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−５という。）をエタノールに溶解し、０．５ｍＭの濃度とした。以下、実施例１８と同様の操作法で、99m Ｔｃ標識調製液を得た。この標識錯体を実施例１８と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．４１にメイン成分が認められ、その純度は９５％であった。又、実施例１８と同様のＨＰＬＣで分析したところ、Ｒｔ４．９分にメインピーク（１００％）が認められた。
【００５６】
（実施例２３）
１−（２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例１３で得られた１−（２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−６という。）０．３ｍｇを１．５ｍｌのエタノールに溶解し（０．５６ｍＭ）、これに市販のジェネレーターより溶出した３０ｍＣｉ／ｍｌの過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）注射液１．５ｍｌ、及び１．０ｍＭの塩化第一スズ溶液０．１ｍｌを加え、混合し、室温で約３０分間静置した。更に、この調製液１容量を４容量の５．０％ヒト血清アルブミン溶液に添加し、最終調製液を得た。この調製液の純度は、酢酸エチル／メタノール／水／アンモニア水＝８６／１０／４／１を展開溶媒としてシリカゲル薄層板を用いたＴＬＣで分析した。この時、標識錯体のＲｆ値は０．５５で、その純度は９７％であった。
【００５７】
（実施例２４）
１−（２−シアノメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例１５で得られた１−（２−シアノメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−７という。）を実施例２３と同様の操作法で99m Ｔｃ標識調製液を得た。この標識錯体を実施例２３と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．９にメイン成分が認められ、その純度は９２％であった。
【００５８】
（実施例２５）
１−（２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例１７で得た１−（２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−８という。）０．３ｍｇを１．５ｍｌのエタノール溶解した。次にグルコヘプタネート１．０ｍｇを酢酸緩衝液（ｐＨ５．６）０．５ｍｌに溶解し、これに市販のジェネレーターから溶出した３０ｍＣｉ／ｍｌの過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）注射液１．０ｍｌ、及び１．０ｍＭの塩化第一スズ溶液０．０５ｍｌを加えた。この溶液に予め調製しておいたリガンド−８エタノール溶液全量を添加し、室温で約３０分間静置した。更に、この調製液１容量を４容量の５．０％ヒト血清アルブミン溶液に添加し、最終調製液を得た。この標識錯体を、実施例２３と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．９にメイン成分が認められ、その純度は、９５％であった。
【００５９】
（実施例２６）
99m Ｔｃ錯体のラットにおける体内動態。
実施例１８で調製したリガンド−１−99m Ｔｃ溶液、実施例１９で調製したリガンド−２−99m Ｔｃ溶液、実施例２０で調製したリガンド−３−99m Ｔｃ溶液、実施例２１で調製したリガンド−４−99m Ｔｃ溶液及び実施例２２で調製したリガンド−５−99m Ｔｃ溶液の投与後５分、３０分及び６０分のラットにおける体内動態の結果を下記の表１、表２、表３、表４及び表５に示した。
【００６０】
ラットは、ＳＤ系雌ラット（１７０〜２４０ｇ体重）を用い、チオペントバルビタールナトリウム注射液を腹腔内に投与して麻酔を施し、各調製液１００μｌを尾静脈より投与し、直ちに尿道口を鉗子でクランプして静置した。又、各測定点ごとにラットを開腹し、ヘパリン処理を施した注射筒及び注射針を用いて腹大動脈から採血（５〜９ｍｌ）することにより屠殺し、直ちに脳、心臓、肺臓、肝臓、腎臓、内容物を含む胃、小腸、大腸、膀胱、尿及び残全身に解剖した。摘出した臓器は、尿を除き重量を測定し、放射能を計数した。尚、尿と膀胱は一括して測定した。
【００６１】
99m Ｔｃ錯体は、いずれも投与直後から速やかに脳に集積し、高い脳移行性を示した。その後、放射能は緩やかに脳から洗い出されるが、その速度は緩徐であった。又、リガンド−２−99m Ｔｃ錯体を除き、全ての99m Ｔｃ錯体は、投与後５分には心臓へ１．０％／臓器以上集積し、好ましい心臓集積を示した。他の臓器では、投与後初期においては、肝臓への高い集積が認められたが、その値は経時的に減少し、代わって小腸の放射能が増加した。この事は、該錯体は体内には蓄積されず、肝胆道系を介し、糞中に***される事を示すものと判断された。更に、特徴的であるのは、リガンド−２−99m Ｔｃ錯体を除き、脳／血液比が投与直後から１．０以上を示しており、特にリガンド−１−99m Ｔｃ錯体は、投与後３０分において約４以上の値を示した。この結果より、脳を標的器官とした場合、主なバックグランドとなる血液の放射能が低く、良いコントラストの画像が得られることが示唆された。
【００６２】
【表１】
【００６３】
【表２】
【００６４】
【表３】
【００６５】
【表４】
【００６６】
【表５】
【００６７】
（実施例２７）
リガンド−１を用いた用時調製用キットの製造。
１００ｍｌの三角フラスコに実施例３で合成したリガンド−１の１４．７ｍｇ（０．０４３ｍｍｏｌ）を加え、０．５ｍｌのエタノールに溶解した。この中にＨＰＣＤの５．０ｇを溶解した水溶液５０ｍｌを添加し、ボルテックスミキサーで５分間攪拌した。次にＬ−アスコルビン酸４３．６ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）、及び１０ｍＭに調製した塩化第一スズ溶液を１．０ｍｌ加えた。この混合物をメンブランフィルターで濾過して、０．５ｍｌずつアルゴン置換した３．５ｍｌのバイアルに分注し、液体窒素を用いて急速凍結し、冷凍庫にて保存した。尚、水はアルゴン気流下、脱気した無菌水を用い、全ての操作はクリーンベンチ内アルゴン気流下で行った。
【００６８】
（実施例２８）
用時調製用キットを用いた99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例２７で製造した凍結キットを室温下で解凍した後、これに市販のジェネレーターより溶出した４０ｍＣｉ／ｍｌの過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）注射液０．５ｍｌを加え、攪拌した後、室温下で静置した。99m Ｔｃ錯体の純度は、メタノール／水＝９／１を展開溶媒としてＣ18ＯＤＳ薄層板を用い、分析した。この時、標識錯体のＲｆ値は約０．４で、調製後２４時間まで９５％以上の純度であった。
【００６９】
（実施例２９）
用時調製用キットを用いて調製した99m Ｔｃ錯体のラットにおける体内動態。市販されているジェネレーターより溶出した過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）注射液に適当量の生理食塩水を加え、放射能濃度が３ｍＣｉ／ｍｌ程度になるように調製した。その後の操作は、実施例２８に則って、99m Ｔｃ錯体を得、実施例２６に示した方法でラットに投与した。結果を表６に示した。表１に示した５０％エタノール溶液と比較して、脳への取り込み、及び他の臓器への分布に差は認められなかった。
【００７０】
【表６】
【００７１】
（実施例３０）
用時調製用キットを用いて調製した99m Ｔｃ錯体のラット脳のオートラジオグラフィー。
実施例２８記載の方法で調製した99m Ｔｃ錯体溶液２０ｍＣｉ／ｍｌを用い、予めチオペントバルビタールで麻酔を施したＳＤ系雌ラット（２００ｇ前後）の尾静脈より０．３ｍｌ投与した。投与後５分に脱血し、脳を摘出した。脳周辺部の血液を軽く拭き取り、粉状ドライアイスで凍結させた。この後、クリオスタット（Jung社, FRIGOCUT 2800E）にて、１０μｍの凍結切片を作製し、Ｘ線フィルム（コニカ, NewA）と接触させ、−２０℃で３日間露光させた。フィルムの現像は通常の方法で行った。得られた投与後５分点での画像は、鮮明であり脳血流を反映しているものと判断された。結果を図２に示した。
【００７２】
（実施例３１）
99m Ｔｃ錯体の血液脳関門透過性の比較。
物質の血液脳関門の透過性を評価できるインビトロ系として公知の初代培養牛脳毛細血管内皮細胞系を用い、実施例２８で調製した99m Ｔｃ錯体の血液脳関門透過性を一般的に脳血流診断剤として用いられている99m Ｔｃ−ヘキサメチルプロピレンアミンオキシムと比較評価した。その結果を表７に示した。
【００７３】
実施例２８で調製した標識体の血液から脳方向への透過速度は、該標識体よりも脂溶性の低い99m Ｔｃ−ヘキサメチルプロピレンアミンオキシムの１／６と低い値を示した。又、２０分間の細胞内蓄積量は、両者ともほぼ同程度の値を示した。以上の結果より、実施例２８で調製した99m Ｔｃ錯体は単純拡散で脳毛細血管管腔側膜を透過するが、内皮細胞内にとどまっている割合が、99m Ｔｃ−ヘキサメチルプロピレンアミンオキシムに比べ多いと考えられた。
【００７４】
一般に、化合物が血液脳関門を透過して脳細胞間液中に移行すれば脳内での拡散や代謝等といった脳内動態を考慮しなければならないが、実施例２８で調製した99m Ｔｃ錯体は、上記のように脳細胞間液中への移行量が少なく、内皮細胞内に蓄積される特性を有していることから、脳血流のイメージング用診断剤として有用であると考えられた。
【００７５】
【表７】
【００７６】
（実施例３２）
用時調製用キットを用いて調製した99m Ｔｃ錯体のジエチルエーテル麻酔下におけるラット体内動態。
予めジエチルエーテルを吸引させて麻酔を施したＳＤ系雌ラット（１８０〜２００ｇ体重）に、実施例２９に則って得られた99m Ｔｃ錯体の調製液１００μｌを尾静脈より投与し、直ちにラット用代謝ゲージに移動させた。この中で測定点まで飼料及び水を自由に与え、飼育し、尿及び糞を分別採取した。各測定点の直前に再びジエチルエーテル麻酔し、測定点でラットを開腹し、ヘパリン処理を施した注射筒及び注射針を用いて腹大動脈から採血することにより、屠殺し、脳、心臓、肺臓、肝臓、腎臓、内容物を含む胃、小腸、大腸、膀胱、尿、糞及び残全身に解剖した。摘出した臓器は、尿及び糞を除き重量を測定し、放射能を計数した。尚、尿と膀胱は一括して測定した。表８及び９に投与後６分、３０分、１時間、３時間、６時間、１５時間及び２４時間のラットにおける体内動態の結果を示した。
【００７７】
標識体は、投与直後から速やかに脳に集積し、高い脳移行性を示した。その後、放射能は速やかに脳から洗い出されるが、その速度は緩徐であった。又、肝臓からのクリアランスは速く、投与後２４時間には糞中へ７８．１％***された。このことから標識体は、投与後、体内に蓄積されることなく速やかに肝胆道系を介して糞中に***される性質を有することが示唆された。
【００７８】
【表８】
【００７９】
【表９】
【００８０】
（実施例３３）
99m Ｔｃ錯体のラットにおける体内動態。
実施例２３で調製したリガンド−６−99m Ｔｃ溶液、及び実施例２４で調製したリガンド−７−99m Ｔｃ溶液を実施例２６記載の方法でラットに投与した。投与後５分点及び３０分点における体内動態の結果を表１０及び１１に示した。
【００８１】
リガンド−６−99m Ｔｃ錯体は、投与直後から速やかに脳に集積し、高い脳移行性を示した。その後、放射能は緩やかに脳から洗い出されるが、その速度は緩徐であった。他の臓器では投与後初期において、肝臓への高い集積が認められたが、その値は経時的に減少し、代わって小腸の放射能が増加した。これは該標識体が、体内には蓄積されず、肝胆道系を介し、糞中に***されることを示すものと判断された。
【００８２】
リガンド−７−99m Ｔｃ錯体は、投与後速やかに心臓に集積し、集積した放射能が貯留する性質が認められた。
【００８３】
【表１０】
【００８４】
【表１１】
【００８５】
（実施例３４）
Ｔｃ錯体の安全性。
放射能的に減衰したＴｃを用いて実施例２８に示した方法に準じ、Ｔｃ錯体を調製した。この被験液をラットに１．０ｍｌ／ｋｇ体重（推定される臨床用量の６０倍）を静脈内に投与した。この結果、死亡例はなく、解剖所見、遅状所見とも以上は見られず、本錯体の高い安全性が確認された。
【００８６】
【発明の効果】
本発明のフェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩により、放射性金属錯体の調製後における高い安定性、投与後速やかな脳及び心臓への取り込み、取り込み後の適当な保持時間、投与直後の肝臓への３０％以下の低い集積性、生体内投与後における低い血液レベル及び肝胆道系を介し、速やかに糞中に***される性質等、ヒトを含む哺乳動物の脳及び心臓をイメージングするのに必要な要件を備えたキレート形成性化合物、該化合物と放射性同位元素からなる錯体、及び該錯体を含有してなる放射性診断剤の提供が可能となった。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明化合物の典型的な合成経路図。
【図２】リガンド−１−99m Ｔｃ錯体の投与後５分点でのラット脳（海馬部）におけるオートラジオグラフィー（生物の形態）。
【図３】リガンド−１−99m Ｔｃ錯体の投与後５分点でのラット脳（線状体部）におけるオートラジオグラフィー（生物の形態）。
【図４】リガンド−１−99m Ｔｃ錯体の投与後５分点でのラット脳（小脳）におけるオートラジオグラフィー（生物の形態）。
【産業上の利用分野】
本発明は、新規なキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩、該化合物から誘導される放射性金属錯体、及びその錯体を含有してなるヒトを含む哺乳動物の脳及び心臓のイメージングに有用な新規な放射性診断剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
放射性同位元素により標識された化合物は、従来から画像診断を目的にイメージング剤として使用されてきている。これらの標識には、体内の組織や器官を透過する放射線を放出するものでなければならず、ガンマ線、Ｘ−線又はポジトロン放射線を放出する放射性同位元素が用いられている。
【０００３】
これらの条件を満たす好ましい放射性同位元素として、ヨウ素−１２３及びテクネチウム−９９ｍ（以下99m Ｔｃという）等をあげることができる。特に、99m Ｔｃは、放出するガンマ線のエネルギーが１４０ＫｅＶと汎用的に利用しうる放射線イメージング装置におけるシンチグラム像にも適し、特定臓器の描出、特定疾患の検出、及び動態検査を目的とした核医学領域において、その半減期が６時間と適当である上、ジェネレーターの普及により容易にしかも安価に入手できるという利点を有していることから、特に好ましい放射性同位元素ということができる。
【０００４】
99m Ｔｃ錯体を用いた脳を標的器官としたインビボイメージング用放射性診断剤としては、特開昭６１−１４３３５１号公報に記載されているプロピルアミンオキシムの99m Ｔｃ錯体、心臓を標的器官としたものについては、特開昭６２−２０１３６３号公報に記載されているエーテルイソニトリルの99m Ｔｃ錯体があげられるが、これらの錯体は、脳及び心臓の両方を標的器官とするものではなかった。
【０００５】
特開平４−９１０７３号公報には、フェニルジアミノジチオール誘導体の99m Ｔｃ錯体が記載され、これらの多くが高い脳集積と高い心臓集積を示すことが記載されている。しかし、J.Med.Chem. (B.J.Mcbride et al, 第 36 巻, 81-86 頁, 1993年) には、フェニルジアミノジチオール誘導体の99m Ｔｃ錯体のラットにおける体内分布について、脳及び心臓へは高い集積を認めるが、主たる集積臓器は肝臓であり、そのクリアランスが緩徐であったと記載されている。
【０００６】
即ち、該錯体の体内動態について、脳及び心臓に高い集積性を示しているが、肝臓への集積も４０％以上の値を示しており、心臓のイメージング用製剤としては肝臓への集積性が高いという問題点を有することを示している。更に、99m Ｔｃが有する優れた物理学的特性を生かすためにも、速やかに代謝されて体外に***されることは、患者の被曝の観点からも重要な課題であった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、かかる従来技術のキレート形成性化合物と99m Ｔｃ等の放射性同位元素からなる放射性金属錯体が、脳又は心臓のみを標的器官とする製剤であること、更に、脳及び心臓の両方を標的器官とする製剤でも心臓イメージング剤として必要な肝臓への低い集積が満たされていない状況に鑑み、投与後速やかに脳及び心臓に取り込まれ、イメージ撮像に適当な時間、脳内及び心臓内に保持され、錯体調製後の安定性も高く、生体内投与後における血液レベルが低く、更に肝臓からのクリアランスも良好であるヒトを含む哺乳動物の脳及び心臓をイメージングするのに有用なキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩、該化合物と放射性金属からなる放射性金属錯体、及びその錯体を含有してなる放射性診断剤を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
即ち、本発明は、
【０００９】
式１中のＲとしては、例えば下記の式２〜５で示されるヘテロ原子を含む基があげられる。Ｒが、式２
で表される場合、好ましくはｎ＝１〜４、ｍ＝０〜４及びｋ＝０〜１であり、特に好ましくはｎ＝２〜３、ｍ＝０〜２及びｋ＝０〜１である。更に具体的には、１−（２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン）、１−（２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン）、１−（２−（２−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン）、１−（２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン）、１−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン）等のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩をあげることができる。
【００１０】
式１中のＲが、式３
で表される場合、好ましくはｎ＝１〜３であり、特に好ましくはｎ＝１である。更に具体的には、１−（２−シアノメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン又はその塩をあげることができる。
【００１１】
式１中のＲが、式４
で表される場合、好ましくはｎ＝１〜３、ｍ＝０〜２及びｌ＝０〜２であり、特に好ましくはｎ＝２、ｍ及びｌ＝０である。更に具体的には、１−（２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン又はその塩をあげることができる。
【００１２】
式１中のＲが、式５
で表される場合、好ましくはｎ＝１〜３、ｍ＝１〜３であり、特に好ましくはｎ＝１、ｍ＝１である。更に具体的には、１−（２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−（２−メルカプト−２−メチルアミン）ベンゼン又はその塩をあげることができる。
【００１３】
式１のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体の塩としては、塩酸塩、酢酸塩等が含まれる。又、該化合物は、放射性金属と反応させ放射性金属標識錯体を得ることができる。特に、放射性医薬品として好ましい放射性同位元素である99m Ｔｃ錯体は、過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）溶液と式１で示されるキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩を塩化第一スズ等の還元剤との共存下、反応させることにより得ることが可能である。この99m Ｔｃ錯体は、
【００１４】
【化１１】
【００１５】
式６中、Ｒは前記の式２〜式５で表されるヘテロ原子を含む基である。
【００１６】
一般に脳イメージング製剤としての特徴は、中性の錯体であること、高脂溶性の錯体であること、分子量４００〜５００程度の錯体であること等があげられる。一方、心臓イメージング製剤としての99m Ｔｃ錯体の特徴は、従来技術の比較から、高い脂溶性を有する錯体であり、かつ主なバックグランドとなる肝臓への集積を抑え、肝臓からのクリアランスを促進させることを目的にアルコキシル基を含有することをあげることができる。
【００１７】
本発明は、先述した特開平４−９１０７３号公報のフェニルジアミノジチオール誘導体の99m Ｔｃ錯体のもつ脳及び心臓への高い集積性に加え、肝臓への集積を抑制し、かつ肝臓からのクリアランスを促進させるために、該フェニルジアミノジチオール誘導体の側鎖にアルコキシル基を含むヘテロ原子を有する官能基を導入したものである。
【００１８】
当該キレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体及びその塩は、放射性金属と容易に錯体を形成する性質を有するものであり、得られたその錯体は、実施例に示すように調製後２４時間まで安定であり、優れた安定性を有するものである。更にボーラス投与による静脈注射等の一般的に用いられる非経口投与における、生体内での安定性にも優れ、化合物自身の毒性も極めて低いという放射性診断剤としての目的を達成しうる優れた性質を有するものである。
【００１９】
更に、本発明の99m Ｔｃ錯体は局所的脳血流分布及び局所的心臓血流分布が一定し、シンチグラム撮像に適当な時間、脳内もしくは心臓内に保持される。又、血液中の放射能濃度が極めて低いうえ、肝臓への集積も低く、クリアランスも良好なことから、一投与当たり多量の放射能の適用が可能であるうえ、脳／血液比も従来技術と比べ数倍であるなど、高感度な血流を反映したイメージング用放射性診断剤として最も好ましい性質を有するものである。
【００２０】
以上述べた特性は、本発明のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩の薬学的に容認しえる99m Ｔｃ錯体が、脳及び心臓をイメージングするのに有用であることを意味している。式１のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体の典型的な合成経路及び調製方法を図１によって説明する。
【００２１】
式１のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体の合成は、出発物質である図１中化合物１の２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタール（（１）、以下化合物名に記した番号は、図１中の化合物に付した番号である。）をテトラヒドロフラン（以下、ＴＨＦという。）溶液に塩酸を加えて加水分解を行い、２−メルカプト−２−メチルプロパナール（２）を得た後、水素化シアノホウ素ナトリウムの存在下、Ｏ−フェニレンジアミンとの縮合反応によって、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（３）を得る。
【００２２】
次に、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタール（４）とナトリウムメトキシドの存在下、臭化アルキルエーテル等との縮合反応によって、図１中化合物（６）を得る。
【００２３】
このようにして得られた式１化合物の中間体２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（３）と化合物（６）を水素化シアノホウ素ナトリウムの存在下、縮合反応させることにより、目的の式１で表されるキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体を得る。
【００２４】
上記のようにして得られた式１のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩は、過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）溶液と塩化第一スズ又は亜ニチオン酸ナトリウムのような還元剤との共存下、反応させ式６で示される99m Ｔｃ錯体を得ることができる。この時、未反応の過テクネチウム酸及び不溶性の放射性不純物は、メンブランフィルター、あるいは液体クロマトグラフィー等により、取り除くことが可能である。
【００２５】
本発明のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩は、マクロゴールあるいは２−ヒドロキシ−β−シクロデキストリン（以下、ＨＰＣＤという。）等の可溶化剤を用いて水溶液にした後、薬学的に許容される適当なレドックス電位を有する通常の還元剤（例えば、塩化第一スズ、亜ニチオン酸ナトリウム及び水素化ホウ素ナトリウム）、安定剤（例えば、アスコルビン酸、ｐ−アミノ安息香酸）、賦形剤（例えば、Ｄ−マンニトール）、生成物の放射化学的純度を改良するのに役立つ促進剤（例えば、クエン酸、酒石酸、マロン酸）等とともに用時調製用キットの形態でも提供が可能である。
【００２６】
尚、本発明の放射性診断剤は、ボーラス投与による静脈注射等の一般的に用いられる非経口手段により投与することができ、その投与量は、患者の体重、年令及び適当な放射線イメージング装置等の諸条件を考慮し、イメージングが可能と考えられる放射能が決定される。ヒトを対象とする場合、通常は５〜３０ｍＣｉの範囲が好ましい。以下、実施例により、本発明を更に具体的に説述する。
【００２７】
【実施例】
（実施例１）
２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成
２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの３．０ｇ（２０．３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン５０．０ｍｌに溶解し、０．５Ｎの塩酸５０．０ｍｌを加え、一晩、加熱還流した。放冷後、水層をエーテルで抽出した後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を常圧で留去した。得られた２−メルカプト−２−メチルプロパナールは、未精製のまま次の反応に供した。
【００２８】
Ｏ−フェニレンジアミンの３．２９ｇ（３０．５ｍｍｏｌ）をメタノール１５０ｍｌに溶解し、上記で得られた２−メルカプト−２−メチルプロパナールを室温で滴下した。滴下終了後、酢酸６．０９ｇ（１０２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分攪拌後、水素化シアノほう素ナトリウム６．３８ｇ（１０２ｍｍｏｌ）を加え、更に室温で一晩攪拌を続けた。反応終了後、メタノールを減圧留去し、水を加えクロロホルムで抽出、飽和食塩水で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム）により精製し、目的物である２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの８９０ｍｇ（収率２２．４％）を淡褐色結晶として得た。
【００２９】
（実施例２）
２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）をメタノール５０．０ｍｌに溶解し、２−ブロモエチルメチルエーテルの１．３９ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及びナトリウムメトキシドの１．０８ｇ（２０．０ｍｍｏｌ）を加え、７．５時間加熱還流した。反応終了後、メタノールを減圧留去し、水を加えクロロホルムで抽出した後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）により精製し、目的物である２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．６２ｇ（収率７８．５％）を黄色油状物として得た。
【００３０】
（実施例３）
１−（２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例２で得た２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの２６２ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ１０．０ｍｌに溶解し、０．５Ｎの塩酸２．０ｍｌを加え、２時間加熱還流した。放冷後、水層をエーテルで抽出し、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナールは、未精製のまま次の反応に供した。
【００３１】
実施例１で得た２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン２５０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）をメタノール２０．０ｍｌに溶解し、前記で得られた２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナールを室温で滴下した。滴下終了後、酢酸０．３ｍｌ（５．２４ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分攪拌後、水素化シアノほう素ナトリウム４００ｍｇ（６．３７ｍｍｏｌ）を加え、室温でさらに一晩攪拌を続けた。反応終了後、メタノールを減圧留去し、水を加えクロロホルムで抽出した後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。粗生成物を分取用シリカゲル薄層クロマトグラフィー（薄層板：シリカゲル６０Ｆ254 、展開溶媒：クロロホルム）により精製し、目的物である１−（２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの３４８ｍｇ（収率８０．１％）を無色油状物として得た。
【００３２】
本化合物の２７０ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）の帰属は以下の通りである。
６．８１〜６．６５ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，ＰｈＨ）、４．１１ｐｐｍ，３．８９ｐｐｍ（各１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、３．４８ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＯＣＨ2 ）、３．３０ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3 ）、３．１２ｐｐｍ，３．０３ｐｐｍ（各２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2 ）、２．６７ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＳＣＨ2 ）、１．８４ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，ＳＨ）、１．５０ｐｐｍ，１．４３ｐｐｍ（各６Ｈ，ｓ，ＣＨ3 ）。
【００３３】
（実施例４）
２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
実施例２と同様の操作法により、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及び３−ブロモプロピルメチルエーテルの１．５３ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．９１ｇ（収率８６．７％）を無色油状物として得た。
【００３４】
（実施例５）
１−（２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例３と同様の操作法により、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの２５０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）、及び２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの２８０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である１−（２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの２８０ｍｇ（収率６１．８％）を無色油状物として得た。
【００３５】
本化合物の２７０ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）の帰属は以下の通りである。
６．８１〜６．６４ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，ＰｈＨ）、４．１１ｐｐｍ，３．８８ｐｐｍ（各１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、３．４１ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＯＣＨ2 ）、３．２８ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3 ）、３．１１ｐｐｍ，３．０２ｐｐｍ（各２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2 ）、２．５３ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＳＣＨ2 ）、１．８３ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，ＳＨ）、１．７８ｐｐｍ（２Ｈ，ｑｕｉ，ＳＣＨ2 ＣＨ 2 ＣＨ2 Ｏ）、１．５０ｐｐｍ，１．４２ｐｐｍ（各６Ｈ，ｓ，ＣＨ3 ）。
【００３６】
（実施例６）
２−（３−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
実施例２と同様の操作法により、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及び２−ブロモエチルエチルエーテルの１．５３ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である２−（３−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４２ｇ（収率６４．４％）を無色油状物として得た。
【００３７】
（実施例７）
１−（２−（２−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例３と同様の操作法により、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの２５０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）、及び２−（３−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの２８０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である１−（２−（２−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの２９７ｍｇ（収率６５．６％）を無色油状物として得た。
【００３８】
本化合物の２７０ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）の帰属は以下の通りである。
６．８２〜６．６３ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，ＰｈＨ）、４．１０ｐｐｍ，３．８８ｐｐｍ（各１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、３．５１ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＯＣＨ 2 ＣＨ2 ）、３．４５ｐｐｍ（２Ｈ，ｑ，ＯＣＨ 2 ＣＨ3 ）、３．１１ｐｐｍ，３．０３ｐｐｍ（各２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2 ）、２．６７ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＳＣＨ2 ）、１．８３ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，ＳＨ）、１．５０ｐｐｍ，１．４２ｐｐｍ（各６Ｈ，ｓ，ＣＨ3 ）、１．１５ｐｐｍ（３Ｈ，ｔ，ＯＣＨ2 ＣＨ 3 ）。
【００３９】
（実施例８）
２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
実施例２と同様の操作法により、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及び１−ブロモ−２−（２−メトキシエトキシ）エタンの１．８３ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの２．０５ｇ（収率８１．９％）を無色油状物として得た。
【００４０】
（実施例９）
１−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例３と同様の操作法により、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの２５０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）、及び２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの３１８ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である１−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン３９０ｍｇ（収率７９．４％）を無色油状物として得た。
【００４１】
本化合物の２７０ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）の帰属は以下の通りである。
６．８２〜６．６４ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，ＰｈＨ）、４．０ｐｐｍ（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、３．５９〜３．４６ｐｐｍ（６Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2 ）、３．３４ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3 ）、３．１１ｐｐｍ，３．０２ｐｐｍ（各２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2 ）、２．６９ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，ＳＣＨ2 ）、１．８３ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，ＳＨ）、１．５０ｐｐｍ，１．４２ｐｐｍ（各６Ｈ，ｓ，ＣＨ3 ）。
【００４２】
（実施例１０）
２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
実施例２と同様の操作法により、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．４８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及び４−クロロブチルメチルエーテル１．２３ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１．８０ｇ（収率７６．８％）を無色油状物として得た。
【００４３】
（実施例１１）
１−（２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例３と同様の操作法により、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン２５０ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）、及び実施例１０で得た２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタール３２３ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である１−（２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン３８７ｍｇ（収率８２．７％）を無色油状物として得た。
【００４４】
本化合物の２７０ＭＨｚにおけるプロトンＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）の帰属は以下の通りである。
６．８０〜６．６４ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，ＰｈＨ）、４．３２ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，−ＣＨ 2 ＯＣＨ3 ）、３．２８ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ3 ）、３．１０ｐｐｍ，３．００ｐｐｍ（各２Ｈ，ｓ，−ＮＨＣＨ 2 −）、４．０９ｐｐｍ，３．８９ｐｐｍ（各１Ｈ，ｂｒｓ，−ＮＨＣＨ2 −）、２．４６ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，−ＳＣＨ2 −）、１．８３ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，−ＳＨ）、１．６５〜１．５６ｐｐｍ（４Ｈ，ｍ，−ＳＣＨ2 ＣＨ 2 ＣＨ 2 ＣＨ2 ＯＣＨ3 ）、１．５０ｐｐｍ，１．４１ｐｐｍ（各６Ｈ，ｓ，ＣＨ3 ）。
【００４５】
（実施例１２）
２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの合成。
２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの２７０ｍｇ（１．８２ｍｍｏｌ）、及び１−ジメチルアミノ−２−クロロエタン塩酸塩２６３ｍｇ（１．８３ｍｍｏｌ）をエタノール２．０ｍｌと２Ｎの水酸化ナトリウム溶液２．０ｍｌの混合溶液に加え、４時間還流した。溶媒を留去した後、塩酸を加え未反応物をベンゼンで抽出し、除去した。塩酸液は、炭酸水素ナトリウムを加え液性をアルカリ性とした後、クロロホルムで目的物を抽出した。クロロホルム層は、硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を留去し、油状の目的物である２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロパナールエチレンアセタールの１６０ｍｇ（収率４０．０％）を得た。
【００４６】
（実施例１３）
１−（２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例３と同様の操作法により、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの７４．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）、及び２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロパナールの６５．９ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である１−（２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの４７．０ｍｇ（収率３８．０％）を油状物として得た。
【００４７】
（実施例１４）
２−シアノメチルチオ−２−メチルプロパナールの合成。
２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの１３４ｍｇ（０．９１ｍｍｏｌ）を０．５Ｎの塩酸３．０ｍｌとＴＨＦの３．０ｍｌの混合液に加え、４時間還流した。反応後生成する２−メルカプト−２−メチルプロパナールは、クロロホルムで抽出し、これにシアノメチルブロマイド１０８ｍｇ（０．９０ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン９１．０ｍｇ（０．９０ｍｍｏｌ）を加え、室温下で５分間攪拌した。反応液は塩酸酸性とし、クロロホルムで目的物である２−シアノメチルチオ−２−メチルプロパナールを抽出した。この粗生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ベンゼン）により精製し、８４．０ｍｇ（収率６５．０％）の２−シアノメチルチオ−２−メチルプロパナールの精製物を得た。
【００４８】
（実施例１５）
１−（２−シアノメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例１４で得た２−シアノメチルチオ−２−メチルプロパナールの６７．０ｍｇ（０．４７ ｍｍｏｌ）、２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの９２．０ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）、及び酢酸１６５ｍｇ（２．７５ｍｍｏｌ）相当をメタノール１０．０ｍｌに加え、室温で３０分間攪拌した。反応後、水素化シアノほう素ナトリウム８６．０ｍｇ（１．３７ｍｍｏｌ）を添加し、反応を停止させた。反応後の溶媒を留去した後、残渣に水を加え、更にこれをクロロホルムで抽出した。得られた粗生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム）で精製し、目的物である１−（２−シアノメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの１１３ｍｇ（収率７５．０％）を得た。
【００４９】
（実施例１６）
２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロパナールの合成。
実施例１４と同様の操作法により、２−メルカプト−２−メチルプロパナール−エチレン−アセタールの９７３ｍｇ（６．５７ｍｍｏｌ）、及びエチルブロモアセテートの１１００ｍｇ（６．５９ｍｍｏｌ）から合成し、目的物である２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロパナールの７７８ｍｇ（収率６２．０％）を得た。
【００５０】
（実施例１７）
１−（２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの合成。
実施例１５と同様の操作により、２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロパナールの７３．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）、及び２−アミノ−１−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの７５．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）から、目的物である１−（２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの９８．０ｍｇ（収率６９．０％）を得た。
【００５１】
（実施例１８）
１−（２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例３で得られた１−（２−（２−メトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチル−プロピルアミノ）ベンゼン（以下リガンド−１という。）をエタノールに溶解し、１．０ｍＭの濃度とした。この液０．５ｍｌに対し、市販のジェネレーターより溶出した３０ｍＣｉ／ｍｌの過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）注射液０．４５ｍｌ及び０．３ｍＭの塩化第一スズ溶液０．０５ｍｌを加え、混合し、室温で約３０分間放置した。その後、０．２２μｍのメンブランフィルターでこの調製液を濾過した。この調製液の純度は、メタノール／水＝９／１を展開溶媒としてＣ18ＯＤＳ薄層板を用いたＴＬＣで分析した。この時、標識錯体のＲｆ値は０．４１であり、その純度は９５％であった。又、この99m Ｔｃ標識調製液をＨＰＬＣ（ＯＤＳカラム：φ４．６×１５０ｍｍ，溶離液：８０％エタノール，流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ）で分析したところ、Ｒｔ４．４分にメインピーク（９９％）が認められた。
【００５２】
（実施例１９）
１−（２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例５で得られた１−（２−（３−メトキシプロピル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−２という。）をエタノールに溶解し、０．５ｍＭの濃度とした。以下、実施例１８と同様の操作法で、99m Ｔｃ標識調製液を得た。この標識錯体を実施例１８と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．３６にメイン成分が認められ、その純度は９５％であった。又、実施例１８と同様のＨＰＬＣによる分析では、Ｒｔ４．９分にメインピーク（９８％）が認められた。
【００５３】
（実施例２０）
１−（２−（２−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例７で得られた１−（２−（２−エトキシエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−３という。）をエタノールに溶解し、０．５ｍＭの濃度とした。以下、実施例１８と同様の操作法で、99m Ｔｃ標識調製液を得た。この標識錯体を実施例１８と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．３５にメイン成分が認められ、その純度は９７％であった。又、実施例１８と同様のＨＰＬＣで分析したところ、Ｒｔ５．１分にメインピーク（９９％）が認められた。
【００５４】
（実施例２１）
１−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例９で得られた１−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−４という。）をエタノールに溶解し、０．５ｍＭの濃度とした。以下、実施例１８と同様の操作法で、99m Ｔｃ標識調製液を得た。この標識錯体を実施例１８と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．４１にメイン成分が認められ、その純度は９１％であった。又、実施例１８と同様のＨＰＬＣで分析したところ、Ｒｔ４．９分にメインピーク（１００％）が認められた。
【００５５】
（実施例２２）
１−（２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例１１で得られた１−（２−（４−メトキシブチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−５という。）をエタノールに溶解し、０．５ｍＭの濃度とした。以下、実施例１８と同様の操作法で、99m Ｔｃ標識調製液を得た。この標識錯体を実施例１８と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．４１にメイン成分が認められ、その純度は９５％であった。又、実施例１８と同様のＨＰＬＣで分析したところ、Ｒｔ４．９分にメインピーク（１００％）が認められた。
【００５６】
（実施例２３）
１−（２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例１３で得られた１−（２−（２−ジメチルアミノエチル）チオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−６という。）０．３ｍｇを１．５ｍｌのエタノールに溶解し（０．５６ｍＭ）、これに市販のジェネレーターより溶出した３０ｍＣｉ／ｍｌの過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）注射液１．５ｍｌ、及び１．０ｍＭの塩化第一スズ溶液０．１ｍｌを加え、混合し、室温で約３０分間静置した。更に、この調製液１容量を４容量の５．０％ヒト血清アルブミン溶液に添加し、最終調製液を得た。この調製液の純度は、酢酸エチル／メタノール／水／アンモニア水＝８６／１０／４／１を展開溶媒としてシリカゲル薄層板を用いたＴＬＣで分析した。この時、標識錯体のＲｆ値は０．５５で、その純度は９７％であった。
【００５７】
（実施例２４）
１−（２−シアノメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例１５で得られた１−（２−シアノメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−７という。）を実施例２３と同様の操作法で99m Ｔｃ標識調製液を得た。この標識錯体を実施例２３と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．９にメイン成分が認められ、その純度は９２％であった。
【００５８】
（実施例２５）
１−（２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼンの99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例１７で得た１−（２−エトキシカルボニルメチルチオ−２−メチルプロピルアミノ）−２−（２−メルカプト−２−メチルプロピルアミノ）ベンゼン（以下、リガンド−８という。）０．３ｍｇを１．５ｍｌのエタノール溶解した。次にグルコヘプタネート１．０ｍｇを酢酸緩衝液（ｐＨ５．６）０．５ｍｌに溶解し、これに市販のジェネレーターから溶出した３０ｍＣｉ／ｍｌの過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）注射液１．０ｍｌ、及び１．０ｍＭの塩化第一スズ溶液０．０５ｍｌを加えた。この溶液に予め調製しておいたリガンド−８エタノール溶液全量を添加し、室温で約３０分間静置した。更に、この調製液１容量を４容量の５．０％ヒト血清アルブミン溶液に添加し、最終調製液を得た。この標識錯体を、実施例２３と同様のＴＬＣで分析したところ、Ｒｆ値０．９にメイン成分が認められ、その純度は、９５％であった。
【００５９】
（実施例２６）
99m Ｔｃ錯体のラットにおける体内動態。
実施例１８で調製したリガンド−１−99m Ｔｃ溶液、実施例１９で調製したリガンド−２−99m Ｔｃ溶液、実施例２０で調製したリガンド−３−99m Ｔｃ溶液、実施例２１で調製したリガンド−４−99m Ｔｃ溶液及び実施例２２で調製したリガンド−５−99m Ｔｃ溶液の投与後５分、３０分及び６０分のラットにおける体内動態の結果を下記の表１、表２、表３、表４及び表５に示した。
【００６０】
ラットは、ＳＤ系雌ラット（１７０〜２４０ｇ体重）を用い、チオペントバルビタールナトリウム注射液を腹腔内に投与して麻酔を施し、各調製液１００μｌを尾静脈より投与し、直ちに尿道口を鉗子でクランプして静置した。又、各測定点ごとにラットを開腹し、ヘパリン処理を施した注射筒及び注射針を用いて腹大動脈から採血（５〜９ｍｌ）することにより屠殺し、直ちに脳、心臓、肺臓、肝臓、腎臓、内容物を含む胃、小腸、大腸、膀胱、尿及び残全身に解剖した。摘出した臓器は、尿を除き重量を測定し、放射能を計数した。尚、尿と膀胱は一括して測定した。
【００６１】
99m Ｔｃ錯体は、いずれも投与直後から速やかに脳に集積し、高い脳移行性を示した。その後、放射能は緩やかに脳から洗い出されるが、その速度は緩徐であった。又、リガンド−２−99m Ｔｃ錯体を除き、全ての99m Ｔｃ錯体は、投与後５分には心臓へ１．０％／臓器以上集積し、好ましい心臓集積を示した。他の臓器では、投与後初期においては、肝臓への高い集積が認められたが、その値は経時的に減少し、代わって小腸の放射能が増加した。この事は、該錯体は体内には蓄積されず、肝胆道系を介し、糞中に***される事を示すものと判断された。更に、特徴的であるのは、リガンド−２−99m Ｔｃ錯体を除き、脳／血液比が投与直後から１．０以上を示しており、特にリガンド−１−99m Ｔｃ錯体は、投与後３０分において約４以上の値を示した。この結果より、脳を標的器官とした場合、主なバックグランドとなる血液の放射能が低く、良いコントラストの画像が得られることが示唆された。
【００６２】
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
（実施例２７）
リガンド−１を用いた用時調製用キットの製造。
１００ｍｌの三角フラスコに実施例３で合成したリガンド−１の１４．７ｍｇ（０．０４３ｍｍｏｌ）を加え、０．５ｍｌのエタノールに溶解した。この中にＨＰＣＤの５．０ｇを溶解した水溶液５０ｍｌを添加し、ボルテックスミキサーで５分間攪拌した。次にＬ−アスコルビン酸４３．６ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）、及び１０ｍＭに調製した塩化第一スズ溶液を１．０ｍｌ加えた。この混合物をメンブランフィルターで濾過して、０．５ｍｌずつアルゴン置換した３．５ｍｌのバイアルに分注し、液体窒素を用いて急速凍結し、冷凍庫にて保存した。尚、水はアルゴン気流下、脱気した無菌水を用い、全ての操作はクリーンベンチ内アルゴン気流下で行った。
【００６８】
（実施例２８）
用時調製用キットを用いた99m Ｔｃ錯体の調製。
実施例２７で製造した凍結キットを室温下で解凍した後、これに市販のジェネレーターより溶出した４０ｍＣｉ／ｍｌの過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）注射液０．５ｍｌを加え、攪拌した後、室温下で静置した。99m Ｔｃ錯体の純度は、メタノール／水＝９／１を展開溶媒としてＣ18ＯＤＳ薄層板を用い、分析した。この時、標識錯体のＲｆ値は約０．４で、調製後２４時間まで９５％以上の純度であった。
【００６９】
（実施例２９）
用時調製用キットを用いて調製した99m Ｔｃ錯体のラットにおける体内動態。市販されているジェネレーターより溶出した過テクネチウム酸ナトリウム（99m Ｔｃ）注射液に適当量の生理食塩水を加え、放射能濃度が３ｍＣｉ／ｍｌ程度になるように調製した。その後の操作は、実施例２８に則って、99m Ｔｃ錯体を得、実施例２６に示した方法でラットに投与した。結果を表６に示した。表１に示した５０％エタノール溶液と比較して、脳への取り込み、及び他の臓器への分布に差は認められなかった。
【００７０】
【表６】
（実施例３０）
用時調製用キットを用いて調製した99m Ｔｃ錯体のラット脳のオートラジオグラフィー。
実施例２８記載の方法で調製した99m Ｔｃ錯体溶液２０ｍＣｉ／ｍｌを用い、予めチオペントバルビタールで麻酔を施したＳＤ系雌ラット（２００ｇ前後）の尾静脈より０．３ｍｌ投与した。投与後５分に脱血し、脳を摘出した。脳周辺部の血液を軽く拭き取り、粉状ドライアイスで凍結させた。この後、クリオスタット（Jung社, FRIGOCUT 2800E）にて、１０μｍの凍結切片を作製し、Ｘ線フィルム（コニカ, NewA）と接触させ、−２０℃で３日間露光させた。フィルムの現像は通常の方法で行った。得られた投与後５分点での画像は、鮮明であり脳血流を反映しているものと判断された。結果を図２に示した。
【００７２】
（実施例３１）
99m Ｔｃ錯体の血液脳関門透過性の比較。
物質の血液脳関門の透過性を評価できるインビトロ系として公知の初代培養牛脳毛細血管内皮細胞系を用い、実施例２８で調製した99m Ｔｃ錯体の血液脳関門透過性を一般的に脳血流診断剤として用いられている99m Ｔｃ−ヘキサメチルプロピレンアミンオキシムと比較評価した。その結果を表７に示した。
【００７３】
実施例２８で調製した標識体の血液から脳方向への透過速度は、該標識体よりも脂溶性の低い99m Ｔｃ−ヘキサメチルプロピレンアミンオキシムの１／６と低い値を示した。又、２０分間の細胞内蓄積量は、両者ともほぼ同程度の値を示した。以上の結果より、実施例２８で調製した99m Ｔｃ錯体は単純拡散で脳毛細血管管腔側膜を透過するが、内皮細胞内にとどまっている割合が、99m Ｔｃ−ヘキサメチルプロピレンアミンオキシムに比べ多いと考えられた。
【００７４】
一般に、化合物が血液脳関門を透過して脳細胞間液中に移行すれば脳内での拡散や代謝等といった脳内動態を考慮しなければならないが、実施例２８で調製した99m Ｔｃ錯体は、上記のように脳細胞間液中への移行量が少なく、内皮細胞内に蓄積される特性を有していることから、脳血流のイメージング用診断剤として有用であると考えられた。
【００７５】
【表７】
（実施例３２）
用時調製用キットを用いて調製した99m Ｔｃ錯体のジエチルエーテル麻酔下におけるラット体内動態。
予めジエチルエーテルを吸引させて麻酔を施したＳＤ系雌ラット（１８０〜２００ｇ体重）に、実施例２９に則って得られた99m Ｔｃ錯体の調製液１００μｌを尾静脈より投与し、直ちにラット用代謝ゲージに移動させた。この中で測定点まで飼料及び水を自由に与え、飼育し、尿及び糞を分別採取した。各測定点の直前に再びジエチルエーテル麻酔し、測定点でラットを開腹し、ヘパリン処理を施した注射筒及び注射針を用いて腹大動脈から採血することにより、屠殺し、脳、心臓、肺臓、肝臓、腎臓、内容物を含む胃、小腸、大腸、膀胱、尿、糞及び残全身に解剖した。摘出した臓器は、尿及び糞を除き重量を測定し、放射能を計数した。尚、尿と膀胱は一括して測定した。表８及び９に投与後６分、３０分、１時間、３時間、６時間、１５時間及び２４時間のラットにおける体内動態の結果を示した。
【００７７】
標識体は、投与直後から速やかに脳に集積し、高い脳移行性を示した。その後、放射能は速やかに脳から洗い出されるが、その速度は緩徐であった。又、肝臓からのクリアランスは速く、投与後２４時間には糞中へ７８．１％***された。このことから標識体は、投与後、体内に蓄積されることなく速やかに肝胆道系を介して糞中に***される性質を有することが示唆された。
【００７８】
【表８】
【表９】
（実施例３３）
99m Ｔｃ錯体のラットにおける体内動態。
実施例２３で調製したリガンド−６−99m Ｔｃ溶液、及び実施例２４で調製したリガンド−７−99m Ｔｃ溶液を実施例２６記載の方法でラットに投与した。投与後５分点及び３０分点における体内動態の結果を表１０及び１１に示した。
【００８１】
リガンド−６−99m Ｔｃ錯体は、投与直後から速やかに脳に集積し、高い脳移行性を示した。その後、放射能は緩やかに脳から洗い出されるが、その速度は緩徐であった。他の臓器では投与後初期において、肝臓への高い集積が認められたが、その値は経時的に減少し、代わって小腸の放射能が増加した。これは該標識体が、体内には蓄積されず、肝胆道系を介し、糞中に***されることを示すものと判断された。
【００８２】
リガンド−７−99m Ｔｃ錯体は、投与後速やかに心臓に集積し、集積した放射能が貯留する性質が認められた。
【００８３】
【表１０】
【表１１】
（実施例３４）
Ｔｃ錯体の安全性。
放射能的に減衰したＴｃを用いて実施例２８に示した方法に準じ、Ｔｃ錯体を調製した。この被験液をラットに１．０ｍｌ／ｋｇ体重（推定される臨床用量の６０倍）を静脈内に投与した。この結果、死亡例はなく、解剖所見、遅状所見とも以上は見られず、本錯体の高い安全性が確認された。
【００８６】
【発明の効果】
本発明のフェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩により、放射性金属錯体の調製後における高い安定性、投与後速やかな脳及び心臓への取り込み、取り込み後の適当な保持時間、投与直後の肝臓への３０％以下の低い集積性、生体内投与後における低い血液レベル及び肝胆道系を介し、速やかに糞中に***される性質等、ヒトを含む哺乳動物の脳及び心臓をイメージングするのに必要な要件を備えたキレート形成性化合物、該化合物と放射性同位元素からなる錯体、及び該錯体を含有してなる放射性診断剤の提供が可能となった。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明化合物の典型的な合成経路図。
【図２】リガンド−１−99m Ｔｃ錯体の投与後５分点でのラット脳（海馬部）におけるオートラジオグラフィー（生物の形態）。
【図３】リガンド−１−99m Ｔｃ錯体の投与後５分点でのラット脳（線状体部）におけるオートラジオグラフィー（生物の形態）。
【図４】リガンド−１−99m Ｔｃ錯体の投与後５分点でのラット脳（小脳）におけるオートラジオグラフィー（生物の形態）。
Claims (9)
- 下記、式１の構造を有するキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩。
（式１中、Ｒは下記の式２、式３、式 4 もしくは式５で表される基である。）
（式２中、ｎは１〜４の整数、ｍは０〜２の整数ならびにｋは０〜１の整数である。）
（式３中、ｎは１〜３の整数である。）
（式４中、ｎは１〜３の整数、ｍならびにｌは０〜２の整数である。）
（式５中、ｎは１〜３の整数、ｍは１〜３の整数である。） - 式２が、メトキシエチル、メトキシプロピル、エトキシエチル、メトキシブチル又はメトキシエトキシエチルのいずれかである請求項１記載のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩。
- 式３が、シアノメチルである請求項１記載のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩。
- 式４が、ジメチルアミノエチルである請求項１記載のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩。
- 式５が、エトキシカルボニルメチルである請求項１記載のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩。
- 請求項１〜５いずれかに記載のキレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体又はその塩と放射性金属からなる放射性金属錯体。
- 請求項６記載の放射性金属錯体を含有してなる放射性診断剤。
- 放射性金属がテクネチウム−９９ｍである請求項７記載の放射性診断剤。
- 放射性金属がテクネチウム−９９ｍである請求項６記載の放射性金属錯体。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP28280494A JP3704172B2 (ja) | 1993-10-25 | 1994-10-21 | キレート形成性フェニルジアミノジチオール誘導体及 びその用途 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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