JP3677656B2 - 有効微生物及び漢方薬を用いた養殖海産魚類の生理活性増大・成長発育促進用の飼料添加剤及びその製造方法 - Google Patents
有効微生物及び漢方薬を用いた養殖海産魚類の生理活性増大・成長発育促進用の飼料添加剤及びその製造方法 Download PDFInfo
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の飼料添加及びその製造方法に関する。より詳細には、液体糖類、生牛乳、サボテンの実の顆粒、キトサンオリゴ糖、クヌギの木草液、乳酸菌、バチルス（（Bacillus菌）、放線菌、及び、酵母を含む微生物による有効微生物の複合発酵液、光合成菌の発酵液、及び、漢方薬の抽出物を含む飼料添加剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
１９９７年現在、海産魚類養殖の韓国における生産量は３９，１２１トンに増加しており、海産魚類は、人類の蛋白質源としての重要な供給源をなしている。韓国のみならず、日本・中国を含め、最近は米国をはじめとするヨーロッパ等の国々においても、成人病の予防のために食生活の改善の試みがなされており、陸上動物の蛋白質より魚類の蛋白質の優秀性が認定されており、その結果、魚類養殖の生産量・需要量が急増しており、国際社会における魚類養殖の生産性向上が要請されており、その開発競争も激しくなっている。
【０００３】
また、韓国国民の食生活樣式の変化により、海産魚類の需要が急増しており、このような需要の増大に応えるため、養殖による海産魚類の供給が重要になっている。そこで、韓国政府の海洋水産部では、育てる漁業の長期発展計画の中で、魚類養殖のために重点的に投資する計画を立てゝおり、海産魚類の養殖は益々増加する傾向にある。
【０００４】
特に、最近、韓国においては、大規模の臨海工業団地の造成と生活排水の放出とによる沿岸漁場の環境汚染が深刻になり、大規模の赤潮の発生と養殖魚類の疾病の頻発とにより、その生産性は低下する一方である反面、国民経済の発展による高級魚類の需要は益々増加している。
【０００５】
したがって、最先端の養殖法による漁場の拡張と共に、生産性向上のための対策の確立・実行が一層必要になっている。最近、養殖魚類の生産性向上のために多くの研究がなされているが、生命工学的な側面での遺伝子操作法（染色体操作法）による３倍体の生産は未だ実用化の段階に入ってはおらず、成長ホルモンによる成長促進のみは一部商品化され使用されてはいるが、ホルモンの使用は食品としての安全性の問題、さらには、高コスト等の問題により、需要者の関心を得るに至ってはおらない。それ以外に、枸杞（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｉｌｌ）の実、高麗人蔘、五味子（Ｓｃｈｉｚａｎｄａｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓｉ Ｂａｉｌｌ）等の植物性の生藥剤及びカニの皮から抽出したキトサンの飼料添加を利用した生産性の向上等も報告されている。
【０００６】
しかし、養殖に使用されている飼料の殆んどは、未だに、天然から漁獲されたマアジ、サバなどの生飼料をそのまゝ使用したり、生飼料に配合飼料を混合したモイストペレット（ＭＰ）を使用したりしているので、飼料利用の効率性が低いこと及び環境汚染誘発の可能性等の多くの問題を内包しており、このような問題を解決する画期的な飼料の開発は未だに完成しておらない。
【０００７】
したがって、海水魚類の養殖費の５０％以上を占める飼料の量的な面と質的な面での改善を介して、安く高質の飼料の開発が要望されている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明に係る目的は、上記の要望に応えることにあり、液体糖蜜、生牛乳、サボテンの実の顆粒、キトサンオリゴ糖、クヌギの木草液、有効微生物の複合発酵液、光合成菌の発酵液、漢方薬の抽出物を含む養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤及びその製造方法を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、前記したような問題点に就いて、鋭意研究を行った結果、有効微生物及び漢方薬の抽出物を使用する添加剤を用いることにより、養殖魚の低酸素に対する耐性増大効果、環境ストレスに対する耐性増大効果、病原性微生物の減少効果、生理活性の増大による活力増大効果、体重増大効果等があることを発見し、本発明を完成した。
【００１０】
本発明の構成は、水、液体糖蜜、生牛乳、サボテンの実の顆粒、キトサンオリゴ糖、クヌギの木草液、有効微生物の複合発酵液、光合成菌の発酵液を、均一に混合攪拌した溶液と、高麗人蔘、当▼帰▲（Ａｎｇｅｌｉｃｅ ｇｉｇａｓ Ｎａｋａｉ）、川▼弓▲（Ｃａｉｄｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍａｋｉｎｏ）、芍薬（Ｐａｅｏｎｉａ ａｌｂｉｆｌｏｒａｐａｌｌａｓｖａｒ．ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ Ｂｕｎｇｅ）、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｌｉｂｏｓｃｈｉｔｚ ｖａｒ． ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｍａｋｉｎｏ）、白朮（Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｅ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ）、茯▼令▲（Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ Ｗｏｌｆ．）、黄▼氏▲（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ Ｂｕｎｇｅ）、肉桂（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｃａｓｓｉａ Ｂｌｕｍｅ）、甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ． Ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ）、乾薑（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）、大棗（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ ｊａｊｕｂａ Ｍｉｌｌｅｒ Ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｉｓ Ｒｅｈｄ．）、陳皮（Ｃｉｔｒｕｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｍａｋｉｎｏ）、決明子（Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ Ｌｉｎｎｅ）茶、羌活（Ａｎｇｅｌｉｃａ Ｋｏｒｅａｎａ Ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚ）を、水と混合して湯煎（煎ずること）して抽出した漢方薬の抽出物を混合攪拌した後、これを発酵・熟成させた養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤とその製造方法とである。
【００１１】
本発明の構成は、また、水分含有量１２％以下である通常の養殖海産魚類用の配合飼料と前記の養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤とが混合された養殖海産魚類用の粉末の飼料添加剤とである。
【００１２】
本発明の構成は、さらに、通常の養殖海産魚類用の配合飼料と前記の養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤を万遍なく混合攪拌した後、これを眞空包裝し、自動温度調節された発酵貯蔵室内において発酵・熟成し、攪拌しながら、赤外光を使用して、４０〜４５℃において加熱して乾燥して製造した、有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の粉末の飼料添加剤とその製造方法とである。
【００１３】
本発明に係る有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤及びその製造方法を、稍詳細に述べる。
【００１４】
本発明に係る液状の飼料添加剤は、水１５００部（ｖ／ｖ）に対し、液体糖蜜３０−５０部（ｖ／ｖ）、生牛乳３０−５０部（ｖ／ｖ）、サボテンの実の顆粒５−１５部（ｗ／ｖ）、キトサンオリゴ糖３−８部（ｖ／ｖ）、クヌギの木草液２−７部（ｖ／ｖ）、乳酸菌、バチルス（Bacillus）菌、酵母、放線菌を含む有効微生物の複合発酵液（比重１）３５−６５部（ｖ／ｖ）、光合成菌の発酵液（比重１）１０−３０部（ｖ／ｖ）、及び、漢方薬の抽出物８０−１３０部（ｖ／ｖ）の組成比率よりなる。
【００１５】
漢方薬の抽出物は、水２００部（ｖ／ｖ）に高麗人蔘１−３部（ｗ／ｖ）、当▼帰▲（Ａｎｇｅｌｉｃｅ ｇｉｇａｓ Ｎａｋａｉ）１−３部（ｗ／ｖ）、川▼弓▲（Ｃａｉｄｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、芍薬（Ｐａｅｏｎｉａ ａｌｂｉｆｌｏｒａｐａｌｌａｓｖａｒ．ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ Ｂｕｎｇｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｌｉｂｏｓｃｈｉｔｚ ｖａｒ． ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、白朮（Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｅ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、茯▼令▲（Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ Ｗｏｌｆ．）０．５−２部（ｗ／ｖ）、黄▼氏▲（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ Ｂｕｎｇｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、肉桂（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｃａｓｓｉａ Ｂｌｕｍｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ． Ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ）１−３部（ｗ／ｖ）、乾薑（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、大棗（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ ｊａｊｕｂａ Ｍｉｌｌｅｒ Ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｉｓ Ｒｅｈｄ．）１−３部（ｗ／ｖ）、陳皮（Ｃｉｔｒｕｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、決明子（Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ Ｌｉｎｎｅ）茶（実）１−４部（ｗ／ｖ）、羌活（Ａｎｇｅｌｉｃａ Ｋｏｒｅａｎａ Ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚ）０．５−２部（ｗ／ｖ）から、湯煎（煎ずること）して抽出して得たものである。
【００１６】
本発明に係る有効微生物の複合発酵液は、蒸溜水に２％の牛乳と２％の糖蜜とを添加し、８０℃において４０分間攪拌・加熱して殺菌した培地に、下記▲１▼〜▲４▼に示すように、純粹培養された乳酸菌の培養液０．３％、酵母の培養液０．１％、放線菌の培養液０．０１％、バチルス（Bacillus）菌の培養液０．１％を加え、空気に接しない状態において、３５℃において１５０時間培養したものである。
【００１７】
こゝで、上記した▲１▼〜▲４▼の工程は、▲１▼乳酸菌の培養液としては、牛乳に３％の糖蜜を添加し８０℃において４０分間攪拌加熱して殺菌した液体培地に乳酸菌を接種・密封し、４０℃において２０時間培養したものを使用した。こゝで、前記乳酸菌には特別の制限はないが、公知のストレプトコッカス ラクティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）またはラクトバチルス（Bacillus）ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）を用いることが適切である。▲２▼前記酵母の培養液としては、蒸溜水に１０％の糖蜜と１０％のビールとを添加して殺菌した液体培地に酵母を接種し密封した後、３５℃において２０時間培養したものを使用した。こゝで、酵母には特別の制限はないが、公知のサカロマイセス セレビジエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）またはカンヂダ セイク（Ｃａｎｄｉｄａ ｓａｋｅ）を用いることが適切である。▲３▼バチルス（Bacillus）菌の培養液としては、蒸溜水に５％の豆腐と１０％の玄米食酢とを加え、３時間放置して煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩を添加して、ｐＨ７．０〜７．４になるように調整して殺菌した液体培地にバチルス（Bacillus）菌を接種し３５℃において８０時間微好気条件下において攪拌培養したものを用いる。こゝで、バチルス（Bacillus）菌には特別の制限はないが、公知の枯草菌（バチルス（Bacillus）サブチルリス）（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）または納豆菌（バチルス（Bacillus）ナット）（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎａｔｔｏ）を用いることが適切である。▲４▼放線菌の培養液としては、蒸溜水に１０％のカニの皮と３％のジャガイモとを加えて煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩とを添加してｐＨ７．０〜７．２になるように調整して殺菌した液体培地に放線菌を接種し３５℃において１５０時間通気條件下において攪拌培養したものを用いる。こゝで、放線菌には特別の制限はないが、ストレプトマイセス グリシー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）を用いることが適切である。
【００１８】
本発明に用いられた前記微生物は、公知の微生物であり、通常の分離同定方法により分離同定されたものを使用するか、または、市販品を購買して使用することができる。
【００１９】
本発明に係る有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用液状の飼料添加剤の製造工程を下記に述べる。
【００２０】
水１５００部（ｖ／ｖ）に対し、液体糖蜜３０−５０部（ｖ／ｖ）、生牛乳３０−５０部（ｖ／ｖ）、サボテンの実の顆粒５−１５部（ｗ／ｖ）、キトサンオリゴ糖３−８部（ｖ／ｖ）、クヌギの木草液２−７部（ｖ／ｖ）、乳酸菌、バチルス（Bacillus）菌、酵母、放線菌を含む有効微生物の複合発酵液（比重１）３５−６５部（ｖ／ｖ）と、光合成菌（３．０×１０３ｃｆｕ／ｇ）の発酵液（比重１）１０−３０部（ｖ／ｖ）とを均一に混合攪拌して、有効微生物含有の原料混合溶液１６１５−１７２５部（ｖ／ｖ）を得た。
【００２１】
これとは別の漢方薬の抽出物を得るために、水２００部（ｖ／ｖ）に対し高麗人蔘１−３部（ｗ／ｖ）、当▼帰▲（Ａｎｇｅｌｉｃｅ ｇｉｇａｓ Ｎａｋａｉ）１−３部（ｗ／ｖ）、川▼弓▲（Ｃａｉｄｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、芍薬（Ｐａｅｏｎｉａ ａｌｂｉｆｌｏｒａｐａｌｌａｓｖａｒ．ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ Ｂｕｎｇｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｌｉｂｏｓｃｈｉｔｚ ｖａｒ． ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、白朮（Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｅ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、茯▼令▲（Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ Ｗｏｌｆ．）０．５−２部（ｗ／ｖ）、黄▼氏▲（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ Ｂｕｎｇｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、肉桂（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｃａｓｓｉａ Ｂｌｕｍｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ． Ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ）１−３部（ｗ／ｖ）、乾薑（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、大棗（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ ｊａｊｕｂａ Ｍｉｌｌｅｒ Ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｉｓ Ｒｅｈｄ．）１−３部（ｗ／ｖ）、陳皮（Ｃｉｔｒｕｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、決明子（Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ Ｌｉｎｎｅ）茶（実）１−４部（ｗ／ｖ）、羌活（Ａｎｇｅｌｉｃａ Ｋｏｒｅａｎａ Ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚ）０．５−２部（ｗ／ｖ）を加えて混合した後、１０時間以上湯煎（煎ずること）して８０−１３０部（ｖ／ｖ）になるようにした後、室温において冷却した。
【００２２】
こゝで、前記有効微生物の複合発酵液は、蒸溜水に２％の牛乳と２％の糖蜜とを加え、８０℃において４０分間攪拌・加熱し殺菌した培地に、▲１▼牛乳の中に３％の糖蜜を添加し８０℃において４０分間攪拌・加熱し殺菌した液体培地に乳酸菌、好ましくはストレプトコッカス ラクティスまたはラクトバチルス（Bacillus）ブルガリクスを接種し、密封した後４０℃において２０時間培養した乳酸菌の培養液０．３％と、▲２▼蒸溜水に１０％の糖蜜と１０％のビールとを添加して殺菌した液体培地に酵母、好ましくはサカロマイセス セレビジエまたはカンヂダセイクを接種して密封した後、３５℃において２０時間培養した酵母の培養液０．１％と、▲３▼蒸溜水に５％の豆腐と１０％の玄米食酢とを加え３時間放置して煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩とを添加しｐＨ７．０〜７．４になるように調整して殺菌した液体培地に、バチルス（Bacillus）菌、好ましくは枯草菌または納豆菌を接種し、３５℃において８０時間微好気條件下において攪拌培養したバチルス（Bacillus）菌の培養液０．０１％と、▲４▼蒸溜水に１０％のカニの皮と３％のジャガイモとを加えて煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩とを添加してｐＨ７．０〜７．２になるように調整して殺菌した液体培地に、放線菌、好ましくはストレプトマイセス グリシーを接種し３５℃において１５０時間通気の條件下で攪拌培養した放線菌の培養液０．０１％をそれぞれ添加して密封した後３５℃において１５０時間培養して製造した。
【００２３】
また、前記光合成菌の発酵液は、蒸溜水に５０％の魚の内臟と１０％の海草とを加えて煮沸した後、室温において冷却濾過したものをｐＨ６．８〜７．２になるように調整して殺菌した液体培地に光合成菌、好ましくはロドシュドモナス スペリオデスを加えて密封し４０℃において２００時間螢光照明條件下において培養して製造する。
【００２４】
このようにして得られた前記有効微生物含有の原料混合溶液１６１５−１７２５部（ｖ／ｖ）と前記漢方薬の抽出物８０−１３０部（ｖ／ｖ）とを２時間混合攪拌した後、これを２０〜３５℃において５日毎に１時間ずつ攪拌混合を実施しながら、３５〜４０日間保管し、薄い漢方薬香を発し、色が薄い朱紅黒褐色を呈する状態になるように発酵・熟成させて有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤を製造した。
【００２５】
このようにして製造された本発明に係る有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤は、密閉された容器に入れて直射光線を避けて日陰に保管する。密閉された容器に保管された本発明に係る養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤は約１２ヶ月間使用可能である。保管容器を開放した後は、なるべく早く使用することが望ましく、使用後殘った液状飼料添加剤は必ず密封して保管することが適切である。
【００２６】
本発明に係る有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用粉末の飼料添加剤の組成とその製造方法とについて下記する。
【００２７】
前記粉末の飼料添加剤は、水分含有量１２％以下である通常の養殖海産魚類用の配合飼料４００部（ｗ／ｖ）に対し本発明に係る液状の飼料添加剤７０−９０部（ｖ／ｖ）を含む組成比率よりなる。
【００２８】
本発明に係る有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用粉末の飼料添加剤の製造工程を下記する。
【００２９】
水分含有量１２％以下の通常の養殖海産魚類用配合飼料４００部（ｗ／ｖ）を攪拌し、
本発明に係る液状飼料添加剤７０−９０部（ｖ／ｖ）を、攪拌中の魚類養殖用の配合飼料に、万遍なく噴射して、配合飼料の水分含有量が２５〜２８％になるようにし、
得られた水分含有量２５〜２８％の魚類養殖用の配合飼料を眞空包裝した後、３５〜４５℃に調整された自動温度調整の発酵貯蔵室にいれて、
微生物の増殖と相互に発酵作用を促進し、物質間の生育を増進させるために５０〜５５日間一定の温度を維持し、煮干魚臭と酸芳臭と酒精臭とを発して、粉末の色が黒褐色を呈するように混合し、発酵・熟成させ、
発酵熟成された粉末を、水分含有量が１５％以下になるまで攪拌しながら赤外光を使用して４０〜４５℃に加熱して乾燥させて製造する。
【００３０】
このようにして製造した有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の粉末の飼料添加剤は、適当量に眞空包裝を行った後、通風の良い日陰に保管する。密閉保管された本発明に係る粉末の飼料添加剤は約１２ヶ月間使用可能である。袋を開封した後は、なるべく早く使用することが望ましく、使用後殘った本発明に係る粉末の飼料添加剤は密封して保管することが望ましく、寧ろ必要である。
【００３１】
【発明の実施の形態】
以下、実施例を参照して、本発明の実施の形態に係る飼料添加剤とその製造方法とを、詳細に説明する。しかし、本発明は、此処に述べる実施例の記載により、何等、制限を受けるものではない。
【００３２】
実施例１ 液状の飼料添加剤の製造
第１工程 有効微生物含有の原料混合溶液の製造工程
図１参照
１．直径が６０〜７０ｍｍであり蓋を有する容量２０００リットルのプラスチック容器に消毒藥品が添加されてない生水（飮める水）１５００リットルを入れる。
２．液体糖蜜４０リットルを加えて混合攪拌する。
３．新鮮な生牛乳４０リットルを加えて混合攪拌する。
４．サボテンの実の顆粒１０ｋｇを加えて混合攪拌する。
５．キトサンオリゴ糖の液状体６リットルを加えて混合攪拌する。
６．クヌギの木草液の液状体５リットルを加えて混合攪拌する。
７．乳酸菌（４．１×１０３ｃｆｕ／ｇ）、バチルス（Bacillus）菌（１．５×１０２ｃｆｕ／ｇ）、酵母（２．０×１０２ｃｆｕ／ｇ）、放線菌を含む微生物による有効微生物の複合発酵液（比重１）５０リットルを加えて混合攪拌する。
８．光合成菌の発酵液（３．０×１０３ｃｆｕ／ｇ）２０リットルを加えて混合攪拌し、有効微生物を含有する原料混合溶液１６７１リットルを製造した
【００３３】
前記有効微生物の複合発酵液は、蒸溜水に２％の牛乳と２％の糖蜜とを加えて８０℃において４０分間攪拌・加熱して殺菌した培地に、▲１▼牛乳に３％の糖蜜を添加して８０℃において４０分間攪拌・加熱して殺菌した液体培地にストレプトコッカス ラクティスまたはラクトバチルス（Bacillus）ブルガリクスを接種して密封した後４０℃において２０時間培養した乳酸菌の培養液０．３％と、▲２▼蒸溜水に１０％の糖蜜と１０％のビールとを添加して殺菌した液体培地にサカロマイセス セレビジエまたはカンヂダ セイクを接種して密封した後、３５℃において２０時間培養した酵母の培養液０．１％と、▲３▼蒸溜水に５％の豆腐と１０％の玄米食酢とを加えて３時間放置して煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩とを添加してｐＨ７．０〜７．４になるように調整して殺菌した液体培地に枯草菌または納豆菌を接種して３５℃において８０時間微好気條件下において攪拌培養したバチルス（Bacillus）菌の培養液０．０１％と、▲４▼蒸溜水に１０％のカニの皮と３％のジャガイモとを加えて煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩とを添加してｐＨ７．０〜７．２になるように調整して殺菌した液体培地にストレプトマイセスグリシーを接種し３５℃において１５０時間、通気條件下において攪拌培養した放線菌の培養液０．０１％を加えて密封し３５℃において１５０時間培養して製造した。
【００３４】
また、前記光合成菌の発酵液は、蒸溜水に５０％の魚の内臟と１０％の海草とを加えて煮沸した後、室温において冷却濾過したものをｐＨ６．８〜７．２になるように調整して殺菌した液体培地にロドシュドモナス スペリオデスを加えて密封し、４０℃において２００時間螢光照明條件下において培養し製造した。
【００３５】
第２工程 漢方薬の抽出物及び発酵熟成の工程
図２参照
１．乾燥された漢方薬として高麗人蔘２．１部（ｗ／ｖ）と、当▼帰▲（Ａｎｇｅｌｉｃｅ ｇｉｇａｓ Ｎａｋａｉ）２部（ｗ／ｖ）と、川▼弓▲（Ｃａｉｄｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍａｋｉｎｏ）１部（ｗ／ｖ）と、芍薬（Ｐａｅｏｎｉａ ａｌｂｉｆｌｏｒａｐａｌｌａｓｖａｒ．ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａＢｕｎｇｅ）１部（ｗ／ｖ）と、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｌｉｂｏｓｃｈｉｔｚ ｖａｒ． ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｍａｋｉｎｏ）１部（ｗ／ｖ）と、白朮（Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｅ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ）１部（ｗ／ｖ）と、茯▼令▲（Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓＷｏｌｆ．）１部（ｗ／ｖ）と、黄▼氏▲（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ Ｂｕｎｇｅ）１部（ｗ／ｖ）と、肉桂（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｃａｓｓｉａ Ｂｌｕｍｅ）１部（ｗ／ｖ）と、甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ． Ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ）２部（ｗ／ｖ）と、乾薑（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）１部（ｗ／ｖ）と、大棗（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ ｊａｊｕｂａ Ｍｉｌｌｅｒ Ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｉｓ Ｒｅｈｄ．）２部（ｗ／ｖ）と、陳皮（Ｃｉｔｒｕｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｍａｋｉｎｏ）１部（ｗ／ｖ）と、決明子（Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ Ｌｉｎｎｅ）茶（実）３部（ｗ／ｖ）と、羌活（Ａｎｇｅｌｉｃａ Ｋｏｒｅａｎａ Ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚ）１部（ｗ／ｖ）とを２００リットルの清水に注入して混合する。
２．製品を湯煎器（その中で物を煎ずる器）に入れて１０時間以上湯煎（煎ずること）して１００リットルになるように調整した後、室温において冷却して漢方薬の抽出物を製造する。
３．製造された漢方薬の抽出物１００リットルと第１工程において作られた有効微生物含有の原料混合液１６７１リットルとをプラスチック容器に入れて２時間混合攪拌する。
４．得られた原料混合液と漢方薬の抽出物の混合溶液１７７１リットルとを２０〜３５℃に保持された発酵室の中で５日毎に１時間ずつ攪拌混合を行いながら、３５〜４０日間保管し、薄い漢方薬香を発し、色が薄い朱紅黒褐色を呈する状態になるように発酵・熟成させ、有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤（「魚力泉」と命名し、以下、「魚力泉」と言う。）を製造した。
【００３６】
実施例２ 粉末の飼料添加剤の製造
図３参照
１．韓国の海水養殖水産業協同組合が製造販賣する魚類養殖用の配合飼料であるマリンピア（商品名であり、水分含有量は１２％以下である。）４００ｋｇを回転中の開放型の電動攪拌機（回転速度は７０〜８０／ｍｉｎであり、容量は６００リットルである。）に投入する。
２．プラスチックの貯蔵容器に満たされている魚力泉７０−９０リットルを、電動噴射機（ポンプ出力１Ｈｐ）を使用して、攪拌機中の魚類養殖用の配合飼料に万遍なく噴射し、水分含有量が２５〜２８％になるようにした後、混合攪拌する。
３．これを４０ｋｇ収容可能のビニール袋に入れて、シリング包裝機を使用して眞空包裝した後、３５〜４５℃に調整された自動温度調整の発酵貯蔵室に入れる。
４．微生物の増殖を促進し、複数の微生物相互の発酵作用を促進し、また、物質間の生育状態を増進させるために、５０〜５５日間一定の温度（例えば３５〜４５℃）を維持し、煮干魚臭と酸芳臭と酒精臭とが発し、粉末の色が黒黒褐色を呈する状態になるように混合発酵・熟成させる。
５．発酵・熟成させた粉末約３００〜４００ｋｇを、電動攪拌機に投入し、水分含有量１５％以下になるまで攪拌しながら赤外線電灯等を使用して、４０〜４５℃に加熱して乾燥し、有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の粉末の飼料添加剤（「韓方泉」と命名し、以下、「韓方泉」と言う。）を製造した。
【００３７】
試験例１ 魚力泉及び韓方泉の成分組成の試験
１．漢方薬の主要成分及び主要生理活性物質の分析
韓方泉に添加された漢方薬の主要成分を分析し、魚力泉と韓方泉との主要生理活性物質を分析し、その結果を表１と表２とに示した。分析は韓国の国家共認試験檢査機関である株式会社科学技術分析センターに依託した。韓方泉に添加された漢方薬の主要成分の分析結果を表１に示す。
【表１】
なお、魚力泉に含まれているグリシリジンは甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ． Ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ）の主成分であり、抗癌効果、解毒及び生理活性の作用を有する。フラボノイドは酸化作用を抑制すると共に肉質の着色に関する物質として濟州産サボテンの実のエキスから抽出した。キトサンは抗菌効果のような多樣な生理作用を示すことが知られている成分であり、酢酸はクヌギの木から抽出された木草液を添加した。韓方泉及び魚力泉の主要生理活性物質の分析結果を表２に示す。
【表２】
【００３８】
２．魚力泉、韓方泉及びマリンピアの構成々成分の比較試験
表３・４・５参照
韓方泉、魚力泉及びマリンピアの構成成分を比較するために、株式会社科学技術分析センターに成分分析を依託し、その分析結果を表３〜７に示した。
なお、韓方泉はマリンピアに魚力泉を添加して発酵させたものであり、総体的には、蛋白質、脂肪、灰分、炭水化物及び無機物に関しては、概ねマリンピア飼料と同一である。マリンピアが含まれていない魚力泉は、その殆んどが水分よりなり、炭水化物と鉄とが少量含まれている（表３参照）。韓方泉、魚力泉及びマリンピアの構成成分を表３に示す。
【表３】
アミノ酸の組成は、マリンピアが１００ｇ当たり３．７７ｇであり、韓方泉が１００ｇ当たり３．９７ｇであり、魚力泉が１００ｇ当たり１６７．４９ｐｐｍであり、マリンピアと韓方泉とのアミノ酸の成分には大きな差は見られなかった（表４参照）。しかし、韓方泉の遊離アミノ酸の成分はマリンピアに比べ、３倍以上の非常に高い値を示した（表５参照）。マリンピア、韓方泉、及び、魚力泉のアミノ酸組成を表４に示す。
【表４】
また、マリンピア、韓方泉及び魚力泉遊離アミノ酸の成分の組成を表５に示す。
【表５】
【００３９】
表６参照
ビタミン分析結果を表６に示した。その結果、ビタミンの全体量は減少した。しかし、代射エネルギ及び疾病に対する抵抗力に関与するビタミンＢ２の量が増加し、葉酸及びコリンも増加する傾向を示した。マリンピア、韓方泉及び魚力泉のビタミン組成を表６に示す。
【表６】
【００４０】
表７参照
脂肪酸の組成は魚力泉においては、殆んどが短い鎖の低級脂肪酸であった（表７参照）。このような魚力泉の脂肪酸は、生体膜での流動性を増進させ体内での生理的な機能に関与することができる。マリンピア、韓方泉及び魚力泉の脂肪酸
組成を表７に示す。
【表７】
【００４１】
３．韓方泉と魚力泉との微生物成分
韓方泉と魚力泉とに含まれている有効微生物の組成を調べるために、株式会社科学技術分析センターに分析を依託し、その結果を表８に示した。
【表８】
総細菌数は、韓方泉が５．６×１０８ｃｆｕ／ｇであり、魚力泉は３．０×１０８ｃｆｕ／ｇであった（表８参照）。
【００４２】
また、魚力泉及び韓方泉から単離された有効微生物の顕微鏡写真を図４〜１３に示した。
【００４３】
試験例２ 魚力泉及び韓方泉を添加したことによる海産魚類の生理活性に及ぼす影響の試験
図１４〜３０参照
１．魚力泉及び韓方泉を添加したことによるヒラメの成長変化の実験
成長変化の実験は、マアジ、サバが主な材料である生飼料に魚力泉及び韓方泉を添加しておらない対照区（比較例）と、生飼料に魚力泉及び韓方泉の混合剤を生飼料重量に対して、各々、０．３％、０．６％、及び、０．９％を添加した三つの実験区（実施例）とに分けて行った。評値項目は、月別に測定した魚の全長（体長）と体重との変化を採用した。その結果、魚の全長（体長）は魚力泉及び韓方泉混合剤を添加して６ヶ月飼育した後からの成長の差を示してある。１月では、０．６％添加区（実施例）が３１．３ｃｍと最も高い成長率を達成している。対照区（比較例）では２９．６ｃｍと最も低い成長を示してある。０．６％添加区（実施例）では、対照区（比較例）に比べ約６％の全長の増加の結果を示した（図１４参照）。
【００４４】
体重では、０．３％の添加区（実施例）で最も高い３７５．８ｇを達成している。そして、０．６％添加区（実施例）、０．９％添加区（実施例）、対照区（比較例）の順に低下している。０．３％添加区（実施例）では、対照区（比較例）に比べて約１５％の体重の増加を実現している（図１５参照）。肥満度は、添加区（実施例）と対照区（比較例）とで、有意な差はなかったが、魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加区（実施例）が対照区（比較例）に比べて高い値を示した（図１６参照）。
【００４５】
２．魚力泉及び韓方泉を添加したことによるヒラメの生存に及ぼす影響の実験
養殖の途中、１１月に、リンホシスチスの感染が発生した。この時期の生存率は図１７に示すとおりである。対照区（比較例）では、リンホシスチスによる大量の死亡が発生し、１ヶ月間に３７４尾の死亡が発生した。魚力泉及び韓方泉の混合剤を０．３％添加した０．３％添加区（実施例）では２４３尾が、０．６％添加した０．６％添加区（実施例）では１４８尾が、０．９％添加した０．９％添加区（実施例）では５５尾の死亡が、それぞれ、発生した。以上の結果に示すように、リンホシスチスの発生による死亡率は魚力泉及び韓方泉の混合剤の濃度が増加するほど死亡率が低くなる。
反面、疾病の発生が沈静した後の１ヶ月間の死亡数は、図１８に示すとおりである。対照区（比較例）では６７尾、０．３％添加区（実施例）及び０．６％添加区（実施例）では７２尾、０．９％添加区（実施例）では５７尾の死亡数が発生し、疾病の発生が沈静した後の安定した状態での死亡率は全ての実験区で有意な差は示されなかった。
【００４６】
３．魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによるヒラメの低酸素の環境に対する生理活性の変化の実験
魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与によるヒラメの肝重量指数は、０．３％添加区（実施例）で最も高い値を示し、０．６％添加区（実施例）でも、対照区（比較例）に比べ有意に高い値を表した（Ｐ＜０．０５、図１９参照）。この結果から、魚力泉及び韓方泉の混合剤の使用により肝重量が増加することが示され、肝臓活性の増大効果があることが推測される。
しかし、肝細胞内の蛋白質量は対照区（比較例）が最も高い値を表した（図２０参照）。これは魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加区（実施例）では対照区（比較例）とは別の肝臓内作用があることにより、肝臓から合成された蛋白質の分泌を促進していることを示唆している。
【００４７】
一方、魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加区（実施例）での赤血球数は０．６％添加区（実施例）で有意に高い値を示し、約４０％増加した（図２１参照）。赤血球の増加は魚類の活力増大と直結される調査項目であり、酸素運搬能力の上昇が期待される。酸素運搬能力の上昇は養殖魚類の輸送によるストレスを減少する効果を有し、魚体の活力を増大させる事ができる。
魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加により、赤血球数の増加と共に、赤血球の面積も増加する傾向を示した（図２２参照）。こゝで、注目すべきことは、赤血球数での差が見られなかった０．３％添加区（実施例）及び０．９％添加区（実施例）での赤血球面積が増加したという事実である。赤血球の容積比においても類似な傾向を示し魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加により増加する結果を示した（図２３参照）。
【００４８】
以上の結果により、魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加区（実施例）は対照区（比較例）に比べ、低酸素に対する耐性が大きいことが判る。したがって、本実験では、実際に空気中での魚類露出による生存時間を調べて低酸素に対する耐性を調査した。その結果は図２４に表したように、０．６％添加区（実施例）で最も長時間生存し、その次が０．３％添加区（実施例）であり、更に次が０．９％添加区（実施例）の順であった。このような結果で魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加は低酸素に対する耐性の増大を齎すことが言える。
【００４９】
４．魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによるヒラメの肝機能の変化の実験
肝機能は健康度の指標として人体でもよく利用される項目である。本実験では、基本的な血中の蛋白質、肝機能を測定する指標であるＧＯＴ及びＧＰＴを測定し肝機能の差を分析した。
その結果、血中の蛋白質は魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加区（実施例）において全ての対照区（比較例）に比べて高い値を示した（図２５参照）。血中蛋白質の増加は肝機能の活性が高いことを意味することであり、０．６％添加区（実施例）において最も高かった。
【００５０】
ＧＯＴはその逆であり、０．６％添加区（実施例）においては１４．２４カルメン（ｋａｒｍｅｎ）／ｍｌ（最も低い値）であり、０．３％添加区（実施例）においても対照区（比較例）に比べ有意に低い値を示した（図２６参照）。このような結果からも０．６％添加区（実施例）において最も高い肝機能を示していることが言える。
【００５１】
一方、ＧＰＴに就いては、対照区（比較例）と０．３％添加区（実施例）とでは活性の検出がなく、０．６％添加区（実施例）で０．３１カルメン／ｍｌを示した（図２７参照）。この結果は、極めて例外的な現象であり、このことは使用したＧＰＴ検出キット（ｋｉｔｓ）がヒト用であるための可能性があるため、より正確な生理活性の変化に就いては、さらに具体的で詳細な檢討が行われるべきであるが、以上の結果を綜合的に判断すると、全体に０．６％添加区（実施例）が他の実験区に比べ肝機能において高い活性を示していると思われる。
【００５２】
５．魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによるヒラメのＳＯＤ及びＣＡＴの活性変化の実験
活性酸素とは酸素を含む反応性が高い化學物質を意味する。狭義では、スーパーオキシド陰イオンラジカル（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ａｎｉｏｎ ｒａｄｉｃａｌ）（・Ｏ２ −またはＯ２ −）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、ヒドロキシルラジカル（ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ）（・ＯＨ）等を含んでいる。このような活性酸素はストレスにより生成され、遺伝子の変異など種々な生理的悪影響を及ぼすことが知られている。活性酸素の沮害作用を避けるために生体内では肝臓からＳＯＤ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）及びＣＡＴ（ｃａｔａｌａｓｅ）のような酵素を生成分泌する。したがって、本実験では生理的な防禦作用をなすＳＯＤ及びＣＡＴの活性を測定した。
その結果、ＳＯＤは０．６％添加区（実施例）において最も高い活性が見られた（図２８参照）。これは生体内で発生するスーパーオキシド陰イオンラジカル（・Ｏ２ −またはＯ２ −）を過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）に変える機能を有し、有害な化學物質を無毒化する一連の過程を促進することを示している。
また、ＣＡＴは０．３％添加区（実施例）及び０．６％添加区（実施例）において高い値を示し、ＳＯＤにより生成された過酸化水素を無毒な水に転換させる過程を促進することができることを示唆している（図２９参照）。
以上の結果を要約すると、魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加により有害な活性酸素から魚体を防禦する機能の向上が期待でき、このような防禦のメカニズムは環境からのストレスに対し、より強い魚類の生産を齎すことである。
【００５３】
６．魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによるヒラメ用生飼料の中の病原性微生物の変化実験
養殖場で使用されている生飼料の殆んどは輸入に依存しており、その管理状態により生産量及び魚体の健康に大きな影響を及ぼす。また、生飼料中にも病原性微生物が多量に含まれており、それ自体が疾病を誘発する原因と思われている。したがって、本実験では、魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加して製造したモイストペレット（ＭＰ）飼料での代表的な病原性微生物の３種の数を把握し汚染源の減少効果について調査した。
その結果、表９に示したように、一般の市販飼料を添加して作った生飼料（対照区）では多量のエドワドシエラ タルダ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ）、ビブリオ アンギィルラルム（Ｖｉｂｒｉｏ ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ）及びストレブトコクス スビ シ ス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）が検出された。こゝで、魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加した結果、０．３％添加区（実施例）では、各対照区（比較例）の２％、３５．９％及び５０％の水準まで減少する結果を得た。０．６％添加区（実施例）では１％、１３％及び３９．６％まで減少し、０．９％添加区（実施例）では３６．４％、３０．３％及び３１．０％まで減少した。以上の結果から、魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加は生理活性の増大だけでなく、飼料の質的な面での改善にも効果があることが判る。魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによる生飼料の中の病原性微生物相の変化を表９に示す。
【表９】
【００５４】
７．魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによる流水式及び循環濾過式の養殖水槽にての環境変化の実験
流水式の養殖場での魚力泉及び韓方泉の混合剤使用による水質変化は表１０と表１１とにそれぞれ示した。その結果、有効微生物が含まれている魚力泉及び韓方泉の混合剤使用による水質の変化はないと判断された。循環濾過式の水槽に魚力泉を１％添加して水質に及ぼす影響を觀察した結果は図３０に示した。その結果、飼育水内の窒素及びリンの組成は対照区（比較例）と有意の差を示さなかった。以上の事実から魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加による水質の大きな変化はないことが判る。但し、魚力泉及び韓方泉の混合剤には種々な嫌気性の、又は、好気性の細菌が多量に含まれており、循環濾過式の水質改善に効果を発揮する可能性はあると思われる。流水式の養殖水槽内での水質変化を表１０に示す。
【表１０】
また流水式の養殖場の排出水での水質変化を表１１に示す。
【表１１】
【００５５】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明に係る添加剤が添加された飼料（有効微生物及び漢方薬を用いた養殖海産魚類の生理活性増大・成長発育促進用の飼料添加剤）を用いて養殖することにより得られる効果は次のとおりである。
▲１▼養殖魚の運搬過程で発生する低酸素に対する耐性の増大効果があり、活魚運搬が容易であること
▲２▼生体内の抗酸化酵素の増大を齎し、環境ストレスに対する耐性増大効果があり、活魚運搬及び飼育時ストレスの減少を齎し、活力増大が期待できること
▲３▼モイストペレットに使用される生飼料の中に含まれている病原性の微生物の減少効果があり、養殖魚類の疾病感染原因の事前予防効果が得られること
▲４▼生理活性の増大を齎し、活力増大効果を得ること
▲５▼魚類の体重の増大効果を得ること
等である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施例１に係る魚力泉の製造方法の第１工程を示す製造工程図である。
【図２】本発明の実施例１に係る魚力泉の製造方法の第２工程を示す製造工程図である。
【図３】本発明の実施例２に係る韓方泉の製造方法を示す製造工程図である。
【図４】本発明の実施例２に係る韓方泉から分離した乳酸菌の顕微鏡写真である。
【図５】本発明の実施例２に係る韓方泉から分離したバチルス（Bacillus）菌の顕微鏡写真である。
【図６】本発明の実施例２に係る韓方泉から分離した酵母の顕微鏡写真である。
【図７】本発明の実施例２に係る韓方泉から分離した光合成菌の顕微鏡写真である。
【図８】本発明の実施例２に係る韓方泉から分離したアゾトバクタの顕微鏡写真である。
【図９】本発明の実施例１に係る魚力泉から分離された乳酸菌の顕微鏡写真である。
【図１０】本発明の実施例１に係る魚力泉から分離したバチルス（Bacillus）菌の顕微鏡写真である。
【図１１】本発明に係る実施例１においての魚力泉から分離された酵母の顕微鏡写真である。
【図１２】本発明の実施例１に係る魚力泉から分離した光合成菌の顕微鏡写真である。
【図１３】本発明の実施例１に係る魚力泉から分離しれたアゾトバクターの顕微鏡写真である。
【図１４】魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与によるヒラメの全長変化を示すグラフである。
【図１５】魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与によるヒラメの体重変化を示すグラフである。
【図１６】魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与によるヒラメの肥満度の変化を示すグラフである。
【図１７】魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与によるリンホシスチスの感染時期の生存率を示すグラフである。
【図１８】魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与による生存率の変化を示すグラフである。
【図１９】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月経過後のヒラメの肝重量指数を示すグラフである。
【図２０】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月経過後のヒラメの肝臓に含まれる蛋白質量を示すグラフである。
【図２１】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月経過後のヒラメの赤血球数を示すグラフである。
【図２２】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月経過後のヒラメの平均赤血球容積を示すグラフである。
【図２３】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメの赤血球容積比を示すグラフである。
【図２４】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメの空気中に露出した場合の生存時間を示すグラフである。
【図２５】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメの血液中の蛋白質を示すグラフである。
【図２６】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメの血清ＧＯＴ 活性を示すグラフである。
【図２７】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメの血清ＧＰＴ 活性を示すグラフである。
【図２８】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメのＳＯＤ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）活性を示すグラフである。
【図２９】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメのＣＡＴ（ｃａｔａｌａｓｅ）活性度を示すグラフである。
【図３０】魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加した後の循環濾過式水槽内の窒素及びリンの変化を表すグラフである。
【符号の説明】
なし
【発明の属する技術分野】
本発明は、有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の飼料添加及びその製造方法に関する。より詳細には、液体糖類、生牛乳、サボテンの実の顆粒、キトサンオリゴ糖、クヌギの木草液、乳酸菌、バチルス（（Bacillus菌）、放線菌、及び、酵母を含む微生物による有効微生物の複合発酵液、光合成菌の発酵液、及び、漢方薬の抽出物を含む飼料添加剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
１９９７年現在、海産魚類養殖の韓国における生産量は３９，１２１トンに増加しており、海産魚類は、人類の蛋白質源としての重要な供給源をなしている。韓国のみならず、日本・中国を含め、最近は米国をはじめとするヨーロッパ等の国々においても、成人病の予防のために食生活の改善の試みがなされており、陸上動物の蛋白質より魚類の蛋白質の優秀性が認定されており、その結果、魚類養殖の生産量・需要量が急増しており、国際社会における魚類養殖の生産性向上が要請されており、その開発競争も激しくなっている。
【０００３】
また、韓国国民の食生活樣式の変化により、海産魚類の需要が急増しており、このような需要の増大に応えるため、養殖による海産魚類の供給が重要になっている。そこで、韓国政府の海洋水産部では、育てる漁業の長期発展計画の中で、魚類養殖のために重点的に投資する計画を立てゝおり、海産魚類の養殖は益々増加する傾向にある。
【０００４】
特に、最近、韓国においては、大規模の臨海工業団地の造成と生活排水の放出とによる沿岸漁場の環境汚染が深刻になり、大規模の赤潮の発生と養殖魚類の疾病の頻発とにより、その生産性は低下する一方である反面、国民経済の発展による高級魚類の需要は益々増加している。
【０００５】
したがって、最先端の養殖法による漁場の拡張と共に、生産性向上のための対策の確立・実行が一層必要になっている。最近、養殖魚類の生産性向上のために多くの研究がなされているが、生命工学的な側面での遺伝子操作法（染色体操作法）による３倍体の生産は未だ実用化の段階に入ってはおらず、成長ホルモンによる成長促進のみは一部商品化され使用されてはいるが、ホルモンの使用は食品としての安全性の問題、さらには、高コスト等の問題により、需要者の関心を得るに至ってはおらない。それ以外に、枸杞（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｉｌｌ）の実、高麗人蔘、五味子（Ｓｃｈｉｚａｎｄａｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓｉ Ｂａｉｌｌ）等の植物性の生藥剤及びカニの皮から抽出したキトサンの飼料添加を利用した生産性の向上等も報告されている。
【０００６】
しかし、養殖に使用されている飼料の殆んどは、未だに、天然から漁獲されたマアジ、サバなどの生飼料をそのまゝ使用したり、生飼料に配合飼料を混合したモイストペレット（ＭＰ）を使用したりしているので、飼料利用の効率性が低いこと及び環境汚染誘発の可能性等の多くの問題を内包しており、このような問題を解決する画期的な飼料の開発は未だに完成しておらない。
【０００７】
したがって、海水魚類の養殖費の５０％以上を占める飼料の量的な面と質的な面での改善を介して、安く高質の飼料の開発が要望されている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明に係る目的は、上記の要望に応えることにあり、液体糖蜜、生牛乳、サボテンの実の顆粒、キトサンオリゴ糖、クヌギの木草液、有効微生物の複合発酵液、光合成菌の発酵液、漢方薬の抽出物を含む養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤及びその製造方法を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、前記したような問題点に就いて、鋭意研究を行った結果、有効微生物及び漢方薬の抽出物を使用する添加剤を用いることにより、養殖魚の低酸素に対する耐性増大効果、環境ストレスに対する耐性増大効果、病原性微生物の減少効果、生理活性の増大による活力増大効果、体重増大効果等があることを発見し、本発明を完成した。
【００１０】
本発明の構成は、水、液体糖蜜、生牛乳、サボテンの実の顆粒、キトサンオリゴ糖、クヌギの木草液、有効微生物の複合発酵液、光合成菌の発酵液を、均一に混合攪拌した溶液と、高麗人蔘、当▼帰▲（Ａｎｇｅｌｉｃｅ ｇｉｇａｓ Ｎａｋａｉ）、川▼弓▲（Ｃａｉｄｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍａｋｉｎｏ）、芍薬（Ｐａｅｏｎｉａ ａｌｂｉｆｌｏｒａｐａｌｌａｓｖａｒ．ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ Ｂｕｎｇｅ）、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｌｉｂｏｓｃｈｉｔｚ ｖａｒ． ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｍａｋｉｎｏ）、白朮（Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｅ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ）、茯▼令▲（Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ Ｗｏｌｆ．）、黄▼氏▲（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ Ｂｕｎｇｅ）、肉桂（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｃａｓｓｉａ Ｂｌｕｍｅ）、甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ． Ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ）、乾薑（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）、大棗（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ ｊａｊｕｂａ Ｍｉｌｌｅｒ Ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｉｓ Ｒｅｈｄ．）、陳皮（Ｃｉｔｒｕｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｍａｋｉｎｏ）、決明子（Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ Ｌｉｎｎｅ）茶、羌活（Ａｎｇｅｌｉｃａ Ｋｏｒｅａｎａ Ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚ）を、水と混合して湯煎（煎ずること）して抽出した漢方薬の抽出物を混合攪拌した後、これを発酵・熟成させた養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤とその製造方法とである。
【００１１】
本発明の構成は、また、水分含有量１２％以下である通常の養殖海産魚類用の配合飼料と前記の養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤とが混合された養殖海産魚類用の粉末の飼料添加剤とである。
【００１２】
本発明の構成は、さらに、通常の養殖海産魚類用の配合飼料と前記の養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤を万遍なく混合攪拌した後、これを眞空包裝し、自動温度調節された発酵貯蔵室内において発酵・熟成し、攪拌しながら、赤外光を使用して、４０〜４５℃において加熱して乾燥して製造した、有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の粉末の飼料添加剤とその製造方法とである。
【００１３】
本発明に係る有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤及びその製造方法を、稍詳細に述べる。
【００１４】
本発明に係る液状の飼料添加剤は、水１５００部（ｖ／ｖ）に対し、液体糖蜜３０−５０部（ｖ／ｖ）、生牛乳３０−５０部（ｖ／ｖ）、サボテンの実の顆粒５−１５部（ｗ／ｖ）、キトサンオリゴ糖３−８部（ｖ／ｖ）、クヌギの木草液２−７部（ｖ／ｖ）、乳酸菌、バチルス（Bacillus）菌、酵母、放線菌を含む有効微生物の複合発酵液（比重１）３５−６５部（ｖ／ｖ）、光合成菌の発酵液（比重１）１０−３０部（ｖ／ｖ）、及び、漢方薬の抽出物８０−１３０部（ｖ／ｖ）の組成比率よりなる。
【００１５】
漢方薬の抽出物は、水２００部（ｖ／ｖ）に高麗人蔘１−３部（ｗ／ｖ）、当▼帰▲（Ａｎｇｅｌｉｃｅ ｇｉｇａｓ Ｎａｋａｉ）１−３部（ｗ／ｖ）、川▼弓▲（Ｃａｉｄｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、芍薬（Ｐａｅｏｎｉａ ａｌｂｉｆｌｏｒａｐａｌｌａｓｖａｒ．ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ Ｂｕｎｇｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｌｉｂｏｓｃｈｉｔｚ ｖａｒ． ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、白朮（Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｅ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、茯▼令▲（Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ Ｗｏｌｆ．）０．５−２部（ｗ／ｖ）、黄▼氏▲（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ Ｂｕｎｇｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、肉桂（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｃａｓｓｉａ Ｂｌｕｍｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ． Ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ）１−３部（ｗ／ｖ）、乾薑（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、大棗（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ ｊａｊｕｂａ Ｍｉｌｌｅｒ Ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｉｓ Ｒｅｈｄ．）１−３部（ｗ／ｖ）、陳皮（Ｃｉｔｒｕｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、決明子（Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ Ｌｉｎｎｅ）茶（実）１−４部（ｗ／ｖ）、羌活（Ａｎｇｅｌｉｃａ Ｋｏｒｅａｎａ Ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚ）０．５−２部（ｗ／ｖ）から、湯煎（煎ずること）して抽出して得たものである。
【００１６】
本発明に係る有効微生物の複合発酵液は、蒸溜水に２％の牛乳と２％の糖蜜とを添加し、８０℃において４０分間攪拌・加熱して殺菌した培地に、下記▲１▼〜▲４▼に示すように、純粹培養された乳酸菌の培養液０．３％、酵母の培養液０．１％、放線菌の培養液０．０１％、バチルス（Bacillus）菌の培養液０．１％を加え、空気に接しない状態において、３５℃において１５０時間培養したものである。
【００１７】
こゝで、上記した▲１▼〜▲４▼の工程は、▲１▼乳酸菌の培養液としては、牛乳に３％の糖蜜を添加し８０℃において４０分間攪拌加熱して殺菌した液体培地に乳酸菌を接種・密封し、４０℃において２０時間培養したものを使用した。こゝで、前記乳酸菌には特別の制限はないが、公知のストレプトコッカス ラクティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）またはラクトバチルス（Bacillus）ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）を用いることが適切である。▲２▼前記酵母の培養液としては、蒸溜水に１０％の糖蜜と１０％のビールとを添加して殺菌した液体培地に酵母を接種し密封した後、３５℃において２０時間培養したものを使用した。こゝで、酵母には特別の制限はないが、公知のサカロマイセス セレビジエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）またはカンヂダ セイク（Ｃａｎｄｉｄａ ｓａｋｅ）を用いることが適切である。▲３▼バチルス（Bacillus）菌の培養液としては、蒸溜水に５％の豆腐と１０％の玄米食酢とを加え、３時間放置して煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩を添加して、ｐＨ７．０〜７．４になるように調整して殺菌した液体培地にバチルス（Bacillus）菌を接種し３５℃において８０時間微好気条件下において攪拌培養したものを用いる。こゝで、バチルス（Bacillus）菌には特別の制限はないが、公知の枯草菌（バチルス（Bacillus）サブチルリス）（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）または納豆菌（バチルス（Bacillus）ナット）（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎａｔｔｏ）を用いることが適切である。▲４▼放線菌の培養液としては、蒸溜水に１０％のカニの皮と３％のジャガイモとを加えて煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩とを添加してｐＨ７．０〜７．２になるように調整して殺菌した液体培地に放線菌を接種し３５℃において１５０時間通気條件下において攪拌培養したものを用いる。こゝで、放線菌には特別の制限はないが、ストレプトマイセス グリシー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）を用いることが適切である。
【００１８】
本発明に用いられた前記微生物は、公知の微生物であり、通常の分離同定方法により分離同定されたものを使用するか、または、市販品を購買して使用することができる。
【００１９】
本発明に係る有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用液状の飼料添加剤の製造工程を下記に述べる。
【００２０】
水１５００部（ｖ／ｖ）に対し、液体糖蜜３０−５０部（ｖ／ｖ）、生牛乳３０−５０部（ｖ／ｖ）、サボテンの実の顆粒５−１５部（ｗ／ｖ）、キトサンオリゴ糖３−８部（ｖ／ｖ）、クヌギの木草液２−７部（ｖ／ｖ）、乳酸菌、バチルス（Bacillus）菌、酵母、放線菌を含む有効微生物の複合発酵液（比重１）３５−６５部（ｖ／ｖ）と、光合成菌（３．０×１０３ｃｆｕ／ｇ）の発酵液（比重１）１０−３０部（ｖ／ｖ）とを均一に混合攪拌して、有効微生物含有の原料混合溶液１６１５−１７２５部（ｖ／ｖ）を得た。
【００２１】
これとは別の漢方薬の抽出物を得るために、水２００部（ｖ／ｖ）に対し高麗人蔘１−３部（ｗ／ｖ）、当▼帰▲（Ａｎｇｅｌｉｃｅ ｇｉｇａｓ Ｎａｋａｉ）１−３部（ｗ／ｖ）、川▼弓▲（Ｃａｉｄｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、芍薬（Ｐａｅｏｎｉａ ａｌｂｉｆｌｏｒａｐａｌｌａｓｖａｒ．ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ Ｂｕｎｇｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｌｉｂｏｓｃｈｉｔｚ ｖａｒ． ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、白朮（Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｅ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、茯▼令▲（Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ Ｗｏｌｆ．）０．５−２部（ｗ／ｖ）、黄▼氏▲（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ Ｂｕｎｇｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、肉桂（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｃａｓｓｉａ Ｂｌｕｍｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ． Ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ）１−３部（ｗ／ｖ）、乾薑（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、大棗（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ ｊａｊｕｂａ Ｍｉｌｌｅｒ Ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｉｓ Ｒｅｈｄ．）１−３部（ｗ／ｖ）、陳皮（Ｃｉｔｒｕｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｍａｋｉｎｏ）０．５−２部（ｗ／ｖ）、決明子（Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ Ｌｉｎｎｅ）茶（実）１−４部（ｗ／ｖ）、羌活（Ａｎｇｅｌｉｃａ Ｋｏｒｅａｎａ Ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚ）０．５−２部（ｗ／ｖ）を加えて混合した後、１０時間以上湯煎（煎ずること）して８０−１３０部（ｖ／ｖ）になるようにした後、室温において冷却した。
【００２２】
こゝで、前記有効微生物の複合発酵液は、蒸溜水に２％の牛乳と２％の糖蜜とを加え、８０℃において４０分間攪拌・加熱し殺菌した培地に、▲１▼牛乳の中に３％の糖蜜を添加し８０℃において４０分間攪拌・加熱し殺菌した液体培地に乳酸菌、好ましくはストレプトコッカス ラクティスまたはラクトバチルス（Bacillus）ブルガリクスを接種し、密封した後４０℃において２０時間培養した乳酸菌の培養液０．３％と、▲２▼蒸溜水に１０％の糖蜜と１０％のビールとを添加して殺菌した液体培地に酵母、好ましくはサカロマイセス セレビジエまたはカンヂダセイクを接種して密封した後、３５℃において２０時間培養した酵母の培養液０．１％と、▲３▼蒸溜水に５％の豆腐と１０％の玄米食酢とを加え３時間放置して煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩とを添加しｐＨ７．０〜７．４になるように調整して殺菌した液体培地に、バチルス（Bacillus）菌、好ましくは枯草菌または納豆菌を接種し、３５℃において８０時間微好気條件下において攪拌培養したバチルス（Bacillus）菌の培養液０．０１％と、▲４▼蒸溜水に１０％のカニの皮と３％のジャガイモとを加えて煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩とを添加してｐＨ７．０〜７．２になるように調整して殺菌した液体培地に、放線菌、好ましくはストレプトマイセス グリシーを接種し３５℃において１５０時間通気の條件下で攪拌培養した放線菌の培養液０．０１％をそれぞれ添加して密封した後３５℃において１５０時間培養して製造した。
【００２３】
また、前記光合成菌の発酵液は、蒸溜水に５０％の魚の内臟と１０％の海草とを加えて煮沸した後、室温において冷却濾過したものをｐＨ６．８〜７．２になるように調整して殺菌した液体培地に光合成菌、好ましくはロドシュドモナス スペリオデスを加えて密封し４０℃において２００時間螢光照明條件下において培養して製造する。
【００２４】
このようにして得られた前記有効微生物含有の原料混合溶液１６１５−１７２５部（ｖ／ｖ）と前記漢方薬の抽出物８０−１３０部（ｖ／ｖ）とを２時間混合攪拌した後、これを２０〜３５℃において５日毎に１時間ずつ攪拌混合を実施しながら、３５〜４０日間保管し、薄い漢方薬香を発し、色が薄い朱紅黒褐色を呈する状態になるように発酵・熟成させて有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤を製造した。
【００２５】
このようにして製造された本発明に係る有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤は、密閉された容器に入れて直射光線を避けて日陰に保管する。密閉された容器に保管された本発明に係る養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤は約１２ヶ月間使用可能である。保管容器を開放した後は、なるべく早く使用することが望ましく、使用後殘った液状飼料添加剤は必ず密封して保管することが適切である。
【００２６】
本発明に係る有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用粉末の飼料添加剤の組成とその製造方法とについて下記する。
【００２７】
前記粉末の飼料添加剤は、水分含有量１２％以下である通常の養殖海産魚類用の配合飼料４００部（ｗ／ｖ）に対し本発明に係る液状の飼料添加剤７０−９０部（ｖ／ｖ）を含む組成比率よりなる。
【００２８】
本発明に係る有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用粉末の飼料添加剤の製造工程を下記する。
【００２９】
水分含有量１２％以下の通常の養殖海産魚類用配合飼料４００部（ｗ／ｖ）を攪拌し、
本発明に係る液状飼料添加剤７０−９０部（ｖ／ｖ）を、攪拌中の魚類養殖用の配合飼料に、万遍なく噴射して、配合飼料の水分含有量が２５〜２８％になるようにし、
得られた水分含有量２５〜２８％の魚類養殖用の配合飼料を眞空包裝した後、３５〜４５℃に調整された自動温度調整の発酵貯蔵室にいれて、
微生物の増殖と相互に発酵作用を促進し、物質間の生育を増進させるために５０〜５５日間一定の温度を維持し、煮干魚臭と酸芳臭と酒精臭とを発して、粉末の色が黒褐色を呈するように混合し、発酵・熟成させ、
発酵熟成された粉末を、水分含有量が１５％以下になるまで攪拌しながら赤外光を使用して４０〜４５℃に加熱して乾燥させて製造する。
【００３０】
このようにして製造した有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の粉末の飼料添加剤は、適当量に眞空包裝を行った後、通風の良い日陰に保管する。密閉保管された本発明に係る粉末の飼料添加剤は約１２ヶ月間使用可能である。袋を開封した後は、なるべく早く使用することが望ましく、使用後殘った本発明に係る粉末の飼料添加剤は密封して保管することが望ましく、寧ろ必要である。
【００３１】
【発明の実施の形態】
以下、実施例を参照して、本発明の実施の形態に係る飼料添加剤とその製造方法とを、詳細に説明する。しかし、本発明は、此処に述べる実施例の記載により、何等、制限を受けるものではない。
【００３２】
実施例１ 液状の飼料添加剤の製造
第１工程 有効微生物含有の原料混合溶液の製造工程
図１参照
１．直径が６０〜７０ｍｍであり蓋を有する容量２０００リットルのプラスチック容器に消毒藥品が添加されてない生水（飮める水）１５００リットルを入れる。
２．液体糖蜜４０リットルを加えて混合攪拌する。
３．新鮮な生牛乳４０リットルを加えて混合攪拌する。
４．サボテンの実の顆粒１０ｋｇを加えて混合攪拌する。
５．キトサンオリゴ糖の液状体６リットルを加えて混合攪拌する。
６．クヌギの木草液の液状体５リットルを加えて混合攪拌する。
７．乳酸菌（４．１×１０３ｃｆｕ／ｇ）、バチルス（Bacillus）菌（１．５×１０２ｃｆｕ／ｇ）、酵母（２．０×１０２ｃｆｕ／ｇ）、放線菌を含む微生物による有効微生物の複合発酵液（比重１）５０リットルを加えて混合攪拌する。
８．光合成菌の発酵液（３．０×１０３ｃｆｕ／ｇ）２０リットルを加えて混合攪拌し、有効微生物を含有する原料混合溶液１６７１リットルを製造した
【００３３】
前記有効微生物の複合発酵液は、蒸溜水に２％の牛乳と２％の糖蜜とを加えて８０℃において４０分間攪拌・加熱して殺菌した培地に、▲１▼牛乳に３％の糖蜜を添加して８０℃において４０分間攪拌・加熱して殺菌した液体培地にストレプトコッカス ラクティスまたはラクトバチルス（Bacillus）ブルガリクスを接種して密封した後４０℃において２０時間培養した乳酸菌の培養液０．３％と、▲２▼蒸溜水に１０％の糖蜜と１０％のビールとを添加して殺菌した液体培地にサカロマイセス セレビジエまたはカンヂダ セイクを接種して密封した後、３５℃において２０時間培養した酵母の培養液０．１％と、▲３▼蒸溜水に５％の豆腐と１０％の玄米食酢とを加えて３時間放置して煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩とを添加してｐＨ７．０〜７．４になるように調整して殺菌した液体培地に枯草菌または納豆菌を接種して３５℃において８０時間微好気條件下において攪拌培養したバチルス（Bacillus）菌の培養液０．０１％と、▲４▼蒸溜水に１０％のカニの皮と３％のジャガイモとを加えて煮沸した後、室温において冷却濾過したものに１％の糖蜜と０．５％の食塩とを添加してｐＨ７．０〜７．２になるように調整して殺菌した液体培地にストレプトマイセスグリシーを接種し３５℃において１５０時間、通気條件下において攪拌培養した放線菌の培養液０．０１％を加えて密封し３５℃において１５０時間培養して製造した。
【００３４】
また、前記光合成菌の発酵液は、蒸溜水に５０％の魚の内臟と１０％の海草とを加えて煮沸した後、室温において冷却濾過したものをｐＨ６．８〜７．２になるように調整して殺菌した液体培地にロドシュドモナス スペリオデスを加えて密封し、４０℃において２００時間螢光照明條件下において培養し製造した。
【００３５】
第２工程 漢方薬の抽出物及び発酵熟成の工程
図２参照
１．乾燥された漢方薬として高麗人蔘２．１部（ｗ／ｖ）と、当▼帰▲（Ａｎｇｅｌｉｃｅ ｇｉｇａｓ Ｎａｋａｉ）２部（ｗ／ｖ）と、川▼弓▲（Ｃａｉｄｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍａｋｉｎｏ）１部（ｗ／ｖ）と、芍薬（Ｐａｅｏｎｉａ ａｌｂｉｆｌｏｒａｐａｌｌａｓｖａｒ．ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａＢｕｎｇｅ）１部（ｗ／ｖ）と、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｌｉｂｏｓｃｈｉｔｚ ｖａｒ． ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｍａｋｉｎｏ）１部（ｗ／ｖ）と、白朮（Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｅ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ）１部（ｗ／ｖ）と、茯▼令▲（Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓＷｏｌｆ．）１部（ｗ／ｖ）と、黄▼氏▲（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ Ｂｕｎｇｅ）１部（ｗ／ｖ）と、肉桂（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｃａｓｓｉａ Ｂｌｕｍｅ）１部（ｗ／ｖ）と、甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ． Ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ）２部（ｗ／ｖ）と、乾薑（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）１部（ｗ／ｖ）と、大棗（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ ｊａｊｕｂａ Ｍｉｌｌｅｒ Ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｉｓ Ｒｅｈｄ．）２部（ｗ／ｖ）と、陳皮（Ｃｉｔｒｕｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｍａｋｉｎｏ）１部（ｗ／ｖ）と、決明子（Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ Ｌｉｎｎｅ）茶（実）３部（ｗ／ｖ）と、羌活（Ａｎｇｅｌｉｃａ Ｋｏｒｅａｎａ Ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚ）１部（ｗ／ｖ）とを２００リットルの清水に注入して混合する。
２．製品を湯煎器（その中で物を煎ずる器）に入れて１０時間以上湯煎（煎ずること）して１００リットルになるように調整した後、室温において冷却して漢方薬の抽出物を製造する。
３．製造された漢方薬の抽出物１００リットルと第１工程において作られた有効微生物含有の原料混合液１６７１リットルとをプラスチック容器に入れて２時間混合攪拌する。
４．得られた原料混合液と漢方薬の抽出物の混合溶液１７７１リットルとを２０〜３５℃に保持された発酵室の中で５日毎に１時間ずつ攪拌混合を行いながら、３５〜４０日間保管し、薄い漢方薬香を発し、色が薄い朱紅黒褐色を呈する状態になるように発酵・熟成させ、有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の液状の飼料添加剤（「魚力泉」と命名し、以下、「魚力泉」と言う。）を製造した。
【００３６】
実施例２ 粉末の飼料添加剤の製造
図３参照
１．韓国の海水養殖水産業協同組合が製造販賣する魚類養殖用の配合飼料であるマリンピア（商品名であり、水分含有量は１２％以下である。）４００ｋｇを回転中の開放型の電動攪拌機（回転速度は７０〜８０／ｍｉｎであり、容量は６００リットルである。）に投入する。
２．プラスチックの貯蔵容器に満たされている魚力泉７０−９０リットルを、電動噴射機（ポンプ出力１Ｈｐ）を使用して、攪拌機中の魚類養殖用の配合飼料に万遍なく噴射し、水分含有量が２５〜２８％になるようにした後、混合攪拌する。
３．これを４０ｋｇ収容可能のビニール袋に入れて、シリング包裝機を使用して眞空包裝した後、３５〜４５℃に調整された自動温度調整の発酵貯蔵室に入れる。
４．微生物の増殖を促進し、複数の微生物相互の発酵作用を促進し、また、物質間の生育状態を増進させるために、５０〜５５日間一定の温度（例えば３５〜４５℃）を維持し、煮干魚臭と酸芳臭と酒精臭とが発し、粉末の色が黒黒褐色を呈する状態になるように混合発酵・熟成させる。
５．発酵・熟成させた粉末約３００〜４００ｋｇを、電動攪拌機に投入し、水分含有量１５％以下になるまで攪拌しながら赤外線電灯等を使用して、４０〜４５℃に加熱して乾燥し、有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の粉末の飼料添加剤（「韓方泉」と命名し、以下、「韓方泉」と言う。）を製造した。
【００３７】
試験例１ 魚力泉及び韓方泉の成分組成の試験
１．漢方薬の主要成分及び主要生理活性物質の分析
韓方泉に添加された漢方薬の主要成分を分析し、魚力泉と韓方泉との主要生理活性物質を分析し、その結果を表１と表２とに示した。分析は韓国の国家共認試験檢査機関である株式会社科学技術分析センターに依託した。韓方泉に添加された漢方薬の主要成分の分析結果を表１に示す。
【表１】
【表２】
２．魚力泉、韓方泉及びマリンピアの構成々成分の比較試験
表３・４・５参照
韓方泉、魚力泉及びマリンピアの構成成分を比較するために、株式会社科学技術分析センターに成分分析を依託し、その分析結果を表３〜７に示した。
なお、韓方泉はマリンピアに魚力泉を添加して発酵させたものであり、総体的には、蛋白質、脂肪、灰分、炭水化物及び無機物に関しては、概ねマリンピア飼料と同一である。マリンピアが含まれていない魚力泉は、その殆んどが水分よりなり、炭水化物と鉄とが少量含まれている（表３参照）。韓方泉、魚力泉及びマリンピアの構成成分を表３に示す。
【表３】
【表４】
【表５】
表６参照
ビタミン分析結果を表６に示した。その結果、ビタミンの全体量は減少した。しかし、代射エネルギ及び疾病に対する抵抗力に関与するビタミンＢ２の量が増加し、葉酸及びコリンも増加する傾向を示した。マリンピア、韓方泉及び魚力泉のビタミン組成を表６に示す。
【表６】
表７参照
脂肪酸の組成は魚力泉においては、殆んどが短い鎖の低級脂肪酸であった（表７参照）。このような魚力泉の脂肪酸は、生体膜での流動性を増進させ体内での生理的な機能に関与することができる。マリンピア、韓方泉及び魚力泉の脂肪酸
組成を表７に示す。
【表７】
３．韓方泉と魚力泉との微生物成分
韓方泉と魚力泉とに含まれている有効微生物の組成を調べるために、株式会社科学技術分析センターに分析を依託し、その結果を表８に示した。
【表８】
【００４２】
また、魚力泉及び韓方泉から単離された有効微生物の顕微鏡写真を図４〜１３に示した。
【００４３】
試験例２ 魚力泉及び韓方泉を添加したことによる海産魚類の生理活性に及ぼす影響の試験
図１４〜３０参照
１．魚力泉及び韓方泉を添加したことによるヒラメの成長変化の実験
成長変化の実験は、マアジ、サバが主な材料である生飼料に魚力泉及び韓方泉を添加しておらない対照区（比較例）と、生飼料に魚力泉及び韓方泉の混合剤を生飼料重量に対して、各々、０．３％、０．６％、及び、０．９％を添加した三つの実験区（実施例）とに分けて行った。評値項目は、月別に測定した魚の全長（体長）と体重との変化を採用した。その結果、魚の全長（体長）は魚力泉及び韓方泉混合剤を添加して６ヶ月飼育した後からの成長の差を示してある。１月では、０．６％添加区（実施例）が３１．３ｃｍと最も高い成長率を達成している。対照区（比較例）では２９．６ｃｍと最も低い成長を示してある。０．６％添加区（実施例）では、対照区（比較例）に比べ約６％の全長の増加の結果を示した（図１４参照）。
【００４４】
体重では、０．３％の添加区（実施例）で最も高い３７５．８ｇを達成している。そして、０．６％添加区（実施例）、０．９％添加区（実施例）、対照区（比較例）の順に低下している。０．３％添加区（実施例）では、対照区（比較例）に比べて約１５％の体重の増加を実現している（図１５参照）。肥満度は、添加区（実施例）と対照区（比較例）とで、有意な差はなかったが、魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加区（実施例）が対照区（比較例）に比べて高い値を示した（図１６参照）。
【００４５】
２．魚力泉及び韓方泉を添加したことによるヒラメの生存に及ぼす影響の実験
養殖の途中、１１月に、リンホシスチスの感染が発生した。この時期の生存率は図１７に示すとおりである。対照区（比較例）では、リンホシスチスによる大量の死亡が発生し、１ヶ月間に３７４尾の死亡が発生した。魚力泉及び韓方泉の混合剤を０．３％添加した０．３％添加区（実施例）では２４３尾が、０．６％添加した０．６％添加区（実施例）では１４８尾が、０．９％添加した０．９％添加区（実施例）では５５尾の死亡が、それぞれ、発生した。以上の結果に示すように、リンホシスチスの発生による死亡率は魚力泉及び韓方泉の混合剤の濃度が増加するほど死亡率が低くなる。
反面、疾病の発生が沈静した後の１ヶ月間の死亡数は、図１８に示すとおりである。対照区（比較例）では６７尾、０．３％添加区（実施例）及び０．６％添加区（実施例）では７２尾、０．９％添加区（実施例）では５７尾の死亡数が発生し、疾病の発生が沈静した後の安定した状態での死亡率は全ての実験区で有意な差は示されなかった。
【００４６】
３．魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによるヒラメの低酸素の環境に対する生理活性の変化の実験
魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与によるヒラメの肝重量指数は、０．３％添加区（実施例）で最も高い値を示し、０．６％添加区（実施例）でも、対照区（比較例）に比べ有意に高い値を表した（Ｐ＜０．０５、図１９参照）。この結果から、魚力泉及び韓方泉の混合剤の使用により肝重量が増加することが示され、肝臓活性の増大効果があることが推測される。
しかし、肝細胞内の蛋白質量は対照区（比較例）が最も高い値を表した（図２０参照）。これは魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加区（実施例）では対照区（比較例）とは別の肝臓内作用があることにより、肝臓から合成された蛋白質の分泌を促進していることを示唆している。
【００４７】
一方、魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加区（実施例）での赤血球数は０．６％添加区（実施例）で有意に高い値を示し、約４０％増加した（図２１参照）。赤血球の増加は魚類の活力増大と直結される調査項目であり、酸素運搬能力の上昇が期待される。酸素運搬能力の上昇は養殖魚類の輸送によるストレスを減少する効果を有し、魚体の活力を増大させる事ができる。
魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加により、赤血球数の増加と共に、赤血球の面積も増加する傾向を示した（図２２参照）。こゝで、注目すべきことは、赤血球数での差が見られなかった０．３％添加区（実施例）及び０．９％添加区（実施例）での赤血球面積が増加したという事実である。赤血球の容積比においても類似な傾向を示し魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加により増加する結果を示した（図２３参照）。
【００４８】
以上の結果により、魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加区（実施例）は対照区（比較例）に比べ、低酸素に対する耐性が大きいことが判る。したがって、本実験では、実際に空気中での魚類露出による生存時間を調べて低酸素に対する耐性を調査した。その結果は図２４に表したように、０．６％添加区（実施例）で最も長時間生存し、その次が０．３％添加区（実施例）であり、更に次が０．９％添加区（実施例）の順であった。このような結果で魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加は低酸素に対する耐性の増大を齎すことが言える。
【００４９】
４．魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによるヒラメの肝機能の変化の実験
肝機能は健康度の指標として人体でもよく利用される項目である。本実験では、基本的な血中の蛋白質、肝機能を測定する指標であるＧＯＴ及びＧＰＴを測定し肝機能の差を分析した。
その結果、血中の蛋白質は魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加区（実施例）において全ての対照区（比較例）に比べて高い値を示した（図２５参照）。血中蛋白質の増加は肝機能の活性が高いことを意味することであり、０．６％添加区（実施例）において最も高かった。
【００５０】
ＧＯＴはその逆であり、０．６％添加区（実施例）においては１４．２４カルメン（ｋａｒｍｅｎ）／ｍｌ（最も低い値）であり、０．３％添加区（実施例）においても対照区（比較例）に比べ有意に低い値を示した（図２６参照）。このような結果からも０．６％添加区（実施例）において最も高い肝機能を示していることが言える。
【００５１】
一方、ＧＰＴに就いては、対照区（比較例）と０．３％添加区（実施例）とでは活性の検出がなく、０．６％添加区（実施例）で０．３１カルメン／ｍｌを示した（図２７参照）。この結果は、極めて例外的な現象であり、このことは使用したＧＰＴ検出キット（ｋｉｔｓ）がヒト用であるための可能性があるため、より正確な生理活性の変化に就いては、さらに具体的で詳細な檢討が行われるべきであるが、以上の結果を綜合的に判断すると、全体に０．６％添加区（実施例）が他の実験区に比べ肝機能において高い活性を示していると思われる。
【００５２】
５．魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによるヒラメのＳＯＤ及びＣＡＴの活性変化の実験
活性酸素とは酸素を含む反応性が高い化學物質を意味する。狭義では、スーパーオキシド陰イオンラジカル（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ａｎｉｏｎ ｒａｄｉｃａｌ）（・Ｏ２ −またはＯ２ −）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、ヒドロキシルラジカル（ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ）（・ＯＨ）等を含んでいる。このような活性酸素はストレスにより生成され、遺伝子の変異など種々な生理的悪影響を及ぼすことが知られている。活性酸素の沮害作用を避けるために生体内では肝臓からＳＯＤ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）及びＣＡＴ（ｃａｔａｌａｓｅ）のような酵素を生成分泌する。したがって、本実験では生理的な防禦作用をなすＳＯＤ及びＣＡＴの活性を測定した。
その結果、ＳＯＤは０．６％添加区（実施例）において最も高い活性が見られた（図２８参照）。これは生体内で発生するスーパーオキシド陰イオンラジカル（・Ｏ２ −またはＯ２ −）を過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）に変える機能を有し、有害な化學物質を無毒化する一連の過程を促進することを示している。
また、ＣＡＴは０．３％添加区（実施例）及び０．６％添加区（実施例）において高い値を示し、ＳＯＤにより生成された過酸化水素を無毒な水に転換させる過程を促進することができることを示唆している（図２９参照）。
以上の結果を要約すると、魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加により有害な活性酸素から魚体を防禦する機能の向上が期待でき、このような防禦のメカニズムは環境からのストレスに対し、より強い魚類の生産を齎すことである。
【００５３】
６．魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによるヒラメ用生飼料の中の病原性微生物の変化実験
養殖場で使用されている生飼料の殆んどは輸入に依存しており、その管理状態により生産量及び魚体の健康に大きな影響を及ぼす。また、生飼料中にも病原性微生物が多量に含まれており、それ自体が疾病を誘発する原因と思われている。したがって、本実験では、魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加して製造したモイストペレット（ＭＰ）飼料での代表的な病原性微生物の３種の数を把握し汚染源の減少効果について調査した。
その結果、表９に示したように、一般の市販飼料を添加して作った生飼料（対照区）では多量のエドワドシエラ タルダ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ）、ビブリオ アンギィルラルム（Ｖｉｂｒｉｏ ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ）及びストレブトコクス スビ シ ス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）が検出された。こゝで、魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加した結果、０．３％添加区（実施例）では、各対照区（比較例）の２％、３５．９％及び５０％の水準まで減少する結果を得た。０．６％添加区（実施例）では１％、１３％及び３９．６％まで減少し、０．９％添加区（実施例）では３６．４％、３０．３％及び３１．０％まで減少した。以上の結果から、魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加は生理活性の増大だけでなく、飼料の質的な面での改善にも効果があることが判る。魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによる生飼料の中の病原性微生物相の変化を表９に示す。
【表９】
７．魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加したことによる流水式及び循環濾過式の養殖水槽にての環境変化の実験
流水式の養殖場での魚力泉及び韓方泉の混合剤使用による水質変化は表１０と表１１とにそれぞれ示した。その結果、有効微生物が含まれている魚力泉及び韓方泉の混合剤使用による水質の変化はないと判断された。循環濾過式の水槽に魚力泉を１％添加して水質に及ぼす影響を觀察した結果は図３０に示した。その結果、飼育水内の窒素及びリンの組成は対照区（比較例）と有意の差を示さなかった。以上の事実から魚力泉及び韓方泉の混合剤の添加による水質の大きな変化はないことが判る。但し、魚力泉及び韓方泉の混合剤には種々な嫌気性の、又は、好気性の細菌が多量に含まれており、循環濾過式の水質改善に効果を発揮する可能性はあると思われる。流水式の養殖水槽内での水質変化を表１０に示す。
【表１０】
【表１１】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明に係る添加剤が添加された飼料（有効微生物及び漢方薬を用いた養殖海産魚類の生理活性増大・成長発育促進用の飼料添加剤）を用いて養殖することにより得られる効果は次のとおりである。
▲１▼養殖魚の運搬過程で発生する低酸素に対する耐性の増大効果があり、活魚運搬が容易であること
▲２▼生体内の抗酸化酵素の増大を齎し、環境ストレスに対する耐性増大効果があり、活魚運搬及び飼育時ストレスの減少を齎し、活力増大が期待できること
▲３▼モイストペレットに使用される生飼料の中に含まれている病原性の微生物の減少効果があり、養殖魚類の疾病感染原因の事前予防効果が得られること
▲４▼生理活性の増大を齎し、活力増大効果を得ること
▲５▼魚類の体重の増大効果を得ること
等である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施例１に係る魚力泉の製造方法の第１工程を示す製造工程図である。
【図２】本発明の実施例１に係る魚力泉の製造方法の第２工程を示す製造工程図である。
【図３】本発明の実施例２に係る韓方泉の製造方法を示す製造工程図である。
【図４】本発明の実施例２に係る韓方泉から分離した乳酸菌の顕微鏡写真である。
【図５】本発明の実施例２に係る韓方泉から分離したバチルス（Bacillus）菌の顕微鏡写真である。
【図６】本発明の実施例２に係る韓方泉から分離した酵母の顕微鏡写真である。
【図７】本発明の実施例２に係る韓方泉から分離した光合成菌の顕微鏡写真である。
【図８】本発明の実施例２に係る韓方泉から分離したアゾトバクタの顕微鏡写真である。
【図９】本発明の実施例１に係る魚力泉から分離された乳酸菌の顕微鏡写真である。
【図１０】本発明の実施例１に係る魚力泉から分離したバチルス（Bacillus）菌の顕微鏡写真である。
【図１１】本発明に係る実施例１においての魚力泉から分離された酵母の顕微鏡写真である。
【図１２】本発明の実施例１に係る魚力泉から分離した光合成菌の顕微鏡写真である。
【図１３】本発明の実施例１に係る魚力泉から分離しれたアゾトバクターの顕微鏡写真である。
【図１４】魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与によるヒラメの全長変化を示すグラフである。
【図１５】魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与によるヒラメの体重変化を示すグラフである。
【図１６】魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与によるヒラメの肥満度の変化を示すグラフである。
【図１７】魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与によるリンホシスチスの感染時期の生存率を示すグラフである。
【図１８】魚力泉及び韓方泉の混合剤の投与による生存率の変化を示すグラフである。
【図１９】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月経過後のヒラメの肝重量指数を示すグラフである。
【図２０】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月経過後のヒラメの肝臓に含まれる蛋白質量を示すグラフである。
【図２１】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月経過後のヒラメの赤血球数を示すグラフである。
【図２２】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月経過後のヒラメの平均赤血球容積を示すグラフである。
【図２３】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメの赤血球容積比を示すグラフである。
【図２４】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメの空気中に露出した場合の生存時間を示すグラフである。
【図２５】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメの血液中の蛋白質を示すグラフである。
【図２６】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメの血清ＧＯＴ 活性を示すグラフである。
【図２７】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメの血清ＧＰＴ 活性を示すグラフである。
【図２８】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメのＳＯＤ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）活性を示すグラフである。
【図２９】魚力泉及び韓方泉の混合剤の飼料添加剤を投与した後、８ヶ月後のヒラメのＣＡＴ（ｃａｔａｌａｓｅ）活性度を示すグラフである。
【図３０】魚力泉及び韓方泉の混合剤を添加した後の循環濾過式水槽内の窒素及びリンの変化を表すグラフである。
【符号の説明】
なし
Claims (6)
- 水１５００部（ｖ／ｖ）に対し、液体糖蜜３０−５０部（ｖ／ｖ）、生牛乳３０−５０部（ｖ／ｖ）、サボテンの実の顆粒５−１５部（ｗ／ｖ）、キトサンオリゴ糖３−８部（ｖ／ｖ）、クヌギの木草液２−７部（ｖ／ｖ）、乳酸菌、バチルス（Bacillus）菌、酵母、及び、放線菌を含む有効微生物の複合発酵液３５−６５部（ｖ／ｖ）、光合成菌の発酵液１０−３０部（ｖ／ｖ）、及び、漢方薬の抽出物８０−１３０部（ｖ／ｖ）が、前記組成比率をもって、加えられており、
前記漢方薬の抽出物は、高麗人蔘１−３部（ｗ／ｖ）、 当▼帰▲（Angelice gigas Nakai）１−３部（ｗ／ｖ）、川▼弓▲（Caidium officinale Makino）０．５−２部（ｗ／ｖ）、芍藥（Paeonia albiflorapallasvar. trichocarpa Bunge）０．５−２部（ｗ／ｖ）、熟地黄（Rehmannia glutinosa Liboschitz var. purpurea Makino）０．５−２部（ｗ／ｖ）、白朮（Atractylodes macrocephale Koidzumi）０．５−２部（ｗ／ｖ）、茯▼令▲（Poria cocos Wolf.）０．５−２部（ｗ／ｖ）、黄▼氏▲（Astragalus membranaceus Bunge）０．５−２部（ｗ／ｖ）、肉桂（Cinnamomumcassia Blume）０．５−２部（ｗ／ｖ）、甘草（Glycyrrhiza uralensisFischer et. De Candolle）１−３部（ｗ／ｖ）、乾薑（Zingiber officinale Roscore）０．５−２部（ｗ／ｖ）、大棗（Zizyphus jajuba Miller Var. intermis Rehd.）１−３部（ｗ／ｖ）、陳皮（Citrus nobilis Makino）０．５−２部（ｗ／ｖ）、決明子（Cassia tora Linne）茶（実）１−４部（ｗ／ｖ）、羌活（Angelica Koreana Maximowicz）０．５−２部（ｗ／ｖ）で構成された乾燥薬剤を、水２００部（ｖ／ｖ）に加えて抽出したものである
ことを特徴とする
有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の飼料添加剤。 - 請求項１記載の飼料添加剤において、前記乳酸菌はストレプトコッカス ラクティスまたはラクトバチルス（Bacillus）ブルガリスの中から選択された１種または２種の乳酸菌であり、前記酵母はサカロマイセス セレビジエまたはカンヂダ セイクであり、バチルス（Bacillus）菌は枯草菌または納豆菌であり、前記放線菌はストレプトマイセス グリシーであり、前記光合成菌はロドシュドモナス スペリオデスである
ことを特徴とする
有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の飼料添加剤。 - 水１５００部（ｖ／ｖ）に対し、液体糖蜜３０−５０部（ｖ／ｖ）、生牛乳３０−５０部（ｖ／ｖ）、サボテンの実の顆粒５−１５部（ｗ／ｖ）、キトサンオリゴ糖３−８部（ｖ／ｖ）、クヌギの木草液２−７部（ｖ／ｖ）、乳酸菌、バチルス（Bacillus）菌、酵母、放線菌を含む有効微生物の複合発酵液３５−６５部（ｖ／ｖ）と、光合成菌（３．０×１０３ｃｆｕ／ｇ）の発酵液１０−３０部（ｖ／ｖ）とを均一に混合攪拌して、有効微生物含有の原料混合溶液を得、
高麗人蔘１−３部（ｗ／ｖ）、当▼帰▲（Angelice gigas Nakai）１−３部（ｗ／ｖ）、川▼弓▲（Caidium officinale Makino）０．５−２部（ｗ／ｖ）、芍藥（Paeonia albiflorapallasvar. trichocarpa Bunge）０．５−２部（ｗ／ｖ）、熟地黄（Rehmannia glutinosa Liboschitz var. purpurea Makino）０．５−２部（ｗ／ｖ）、白朮（Atractylodes macrocephale Koidzumi）０．５−２部（ｗ／ｖ）、茯▼令▲（Poria cocos Wolf.）０．５−２部（ｗ／ｖ）、黄▼氏▲（Astragalus membranaceus Bunge）０．５−２部（ｗ／ｖ）、肉桂（Cinnamomum cassia Blume）０．５−２部（ｗ／ｖ）、甘草（Glycyrrhiza uralensis Fischer et. De Candolle）１−３部（ｗ／ｖ）、乾薑（Zingiber officinale Roscoe）０．５−２部（ｗ／ｖ）、大棗（Zizyphus jajuba Miller Var. intermis Rehd.）１−３部（ｗ／ｖ）、陳皮（Citrus nobilis Makino）０．５−２部（ｗ／ｖ）、決明子（Cassia tora Linne）茶（実）１−４部（ｗ／ｖ）、羌活（Angelica Koreana Maximowicz）０．５−２部（ｗ／ｖ）が加えられている漢方薬の混合物を、水２００部（ｖ／ｖ）に加えて混合した後、１０時間以上湯煎して８０−１３０部（ｖ／ｖ）になるようにし、室温において冷却して漢方薬の抽出物８０−１３０部（ｖ／ｖ）を得、
前記有効微生物含有の原料混合溶液１６１５−１７２５部（ｖ／ｖ）と前記漢方薬の抽出物８０−１３０部（ｖ／ｖ）とを、２時間混合・攪拌した後、２０〜３５℃において、５日毎に１時間ずつ攪拌混合を行いながら３５〜４０日間保管し、薄い漢方薬香を発し、色が薄い朱紅黒褐色を呈する状態になるように発酵・熟成させる
ことを特徴とする
有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の飼料添加剤の製造方法。 - 請求項３記載の飼料添加剤の製造方法において、
前記乳酸菌は、ストレプトコッカス ラクティスまたはラクトバチルス（Bacillus）ブルガリスの中から選択された１種または２種であり、 前記酵母はサカロマイセス セレビジエまたはカンヂダ セイクであり、 バチルス（Bacillus）菌は枯草菌または納豆菌であり、
前記放線菌はストレプトマイセス グリシーであり、
前記光合成菌はロドシュドモナス スペリオデスである
ことを特徴とする
有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の飼料添加剤の製造方法。 - 水分含有量１２％以下の一般の養殖海産魚類用配合飼料４００部（ｗ／ｖ）に対し、前記請求項３記載の方法により製造した飼料添加剤７０−９０部（ｖ／ｖ）を含む
ことを特徴とする
有効微生物及び漢方薬を使用した養殖海産魚類用の飼料添加剤。 - 水分含有量１２％以下の一般の養殖海産魚類用の配合飼料４００部（ｗ／ｖ）を攪拌し、
請求項３記載の方法により製造された飼料添加剤７０−９０部（ｖ／ｖ）を、前記魚類養殖用の配合飼料中に万遍なく噴射し、配合飼料の水分含有量が２５〜２８％になるようにし、
得られた水分含有量２５〜２８％の前記魚類養殖用の配合飼料を眞空包裝した後、３５〜４５℃に設定された自動温度調整の発酵貯蔵室に入れて、
微生物の増殖との相互発酵作用を促進し、物質間の生育状態を増進させるために５０〜５５日間一定の温度を維持し、煮干魚臭と酸芳臭と酒精臭とを発して、粉末の色が黒褐色を呈するように混合発酵・熟成し、
発酵熟成された粉末の３００〜４００部（ｗ／ｖ）を、水分含有量１５％以下になるまで攪拌しながら、４０〜４５℃に加熱して乾燥して製造する
ことを特徴とする
有効微生物の漢方薬を用いた養殖海産魚類用の飼料添加剤の製造方法。
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