JP3620013B2 - 血液塗抹標本の染色方法および染色装置 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血液塗抹標本の染色方法および染色装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
病院や研究所では、血液を顕微鏡観察するために、スライドガラスに血液を塗抹し、これを染色した血液塗抹標本を用いる。より良い観察を行なうためには、血液は適切に染色されていなければならない。
【０００３】
しかし、従来の染色工程は、管理されておらず、温度や液の量など染色の条件がそのときどきで異なり、安定した染色結果を得ることはできなかった。このため試料血液中の細胞の大きさ、核の大きさ、色合いが染色によって大きく異なっていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
このように、従来の血液塗抹標本の染色は、その工程が管理されていなかったため、染色によって観察結果が大きく異なるという欠点があった。
【０００５】
本発明は、このような従来の欠点を解決するためになされたものである。本発明の目的は、血液塗抹標本の安定した染色が行なわれるようにすることである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明では、スライドガラスに試料血液を塗抹し、乾燥させ、固定液槽内の固定液に浸漬し、染色液槽内の染色液に浸漬し、洗浄液槽内の洗浄液に浸漬し、乾燥させる血液塗抹標本の染色処理において、塗抹後の乾燥における乾燥時間、その乾燥温度、固定液の浸漬時間、固定液の汚れ度、染色液の浸漬時間、染色液槽内の染色液の濃度、洗浄液の汚れ度、洗浄後の乾燥における乾燥時間およびその乾燥温度の管理のうち少なくとも塗抹後の乾燥における乾燥時間と乾燥温度の管理と、固定液に浸漬する時間の管理とを行うようにした。このように染色工程が管理されると安定した染色処理が行なわれる。
【０００７】
前記最初の乾燥における乾燥設定時間は１分以上１５分未満の時間とし、その乾燥設定温度は３５度以上４２度までの温度とすれば好適な染色結果が得られる。
【０００８】
前記固定液はメタノールとし、その固定液の浸漬設定時間は、１０〜３０秒の間の時間とすれば好適な染色結果が得られる。
【０００９】
前記固定液の汚れ度、前記染色液の濃度または前記洗浄液の汚れ度の管理において、それぞれの液の吸光度を検出するならば、正確に汚れや濃度を検出することができる。
【００１０】
前記染色はライト染色であり、染色液槽はライト液の原液を収容する第１の槽と、ライト液の希釈液を収容する第２の槽から成り、それぞれの槽での浸漬時間を管理する場合、設定時間は、前記第１の槽では２分以上とし、前記第２の槽では約５分とする。これにより好適なライト染色が行なわれる。
【００１１】
前記染色はメイギュルンワルドギムザ染色としても良い。
【００１２】
前記後の乾燥における乾燥時間と乾燥時間が管理される場合、設定時間は約５分とし、設定温度は約３７度とすれば好適な染色結果が得られる。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明の実施の形態の染色装置を説明する。図１はその全体構成を示す図である。以下に各部を説明する。
【００１４】
搬送部１０は、各所に搬送アームを備え、各ユニット間および各ユニットにおいてスライドガラスを搬送するものである。
【００１５】
塗抹ユニット１１は、試料血液をスライドガラスに塗抹するユニットである。第１乾燥ユニット１２は、スライドガラスに塗抹された血液を乾燥させるユニットである。図２に、塗抹ユニット１１と第１乾燥ユニット１２の構成を具体的に示す。塗抹ユニット１１は、容器３に収容された血液２を吸引し、これをスライドガラス１上に滴下する滴下装置４１と、引きガラス４３と、引きガラス４３を移動させる引きガラス移動装置４４を備えている。第１乾燥ユニット１２は、３７度の恒温板４５と、ファン４６と、第１乾燥ユニット１２内の温度を検出する温度センサー２１を備えている。ここで搬送部１０は、スライドガラス１を搬送する搬送アーム４２を備えている。
【００１６】
図１に示す固定ユニット１３は、血液２をスライドガラス１に固定するユニットであり、第１染色ユニット１４は、第１染色液による染色処理を行なうユニットであり、第２染色ユニット１５は、第２染色液による染色処理を行なうユニットであり、洗浄ユニット１６は、洗浄液による洗浄を行なうユニットであり、第２乾燥ユニット１７は、洗浄ユニット１６による洗浄後、乾燥処理を行なうユニットである。図３に、これらのユニットから成る装置の具体例を示す。図３を参照して各ユニットを説明する。
【００１７】
固定ユニット１３は固定液を収容する固定液槽５１を備え、固定液の量を検出する液面センサ２２と、固定液の汚れを検出する吸光度センサ２３を備えている。固定液にはメタノールが用いられている。吸光度センサ２３は例えば、発光素子と受光素子を備え、測定対象の液を透過した発光素子からの光を受光素子が受け取り、その出力信号の強弱により液の吸光度を検出するものである。
【００１８】
第１染色ユニット１４は第１染色液槽５２を備えている。第１染色槽５２にはライト液の原液が収容され、液面センサ２４が設けられている。
【００１９】
第２染色ユニット１５は第２染色液槽５３を備えている。第２染色槽５３にはライト液の希釈液が収容され、その液の濃度を検出するための吸光度センサ２６と、その液の量を検出する液面センサ２５を備えている。
【００２０】
洗浄ユニット１６は洗浄液槽５４を備えている。ここで、洗浄液槽５４には洗浄液として蒸留水とリン酸緩衝液の混合液が収容され、その洗浄液のｐＨを検出するｐＨセンサ２７と、洗浄液の汚れを検出する吸光度センサ２８とを備えている。
【００２１】
第２乾燥ユニット１７は、３７度の温風ファン５５と、このユニット内の温度を検出する温度センサー２９を備えている。
【００２２】
図１に示した制御部３１は、搬送部１０、塗抹ユニット１１、第１乾燥ユニット１２および第２乾燥ユニット１７を制御するものである。また制御部３１には、上記の各センサ２１〜２９が接続されており、これらの検出した値が１つでも異常値になると、アラーム発生部３２から、いずれが異常となったかを示すアラームを発生させるようになっている。制御部３１、搬送部１０、アラーム発生部３２およびセンサ２１〜２９が管理手段を構成する。
【００２３】
次にこのように構成された装置の動作を図４のフローチャートを参照して説明する。
【００２４】
まずステップＳ１では、血液２をスライドガラス１に塗抹する。具体的には次のようになる。塗抹ユニット１１において、操作者が、容器３に収容された試料血液２と、ライドガラス１とを所定位置にセットすると、滴下装置４１は試料血液２をスライドガラス１に滴下する。次に搬送アーム４２は、血液２を滴下されたスライドガラス１を所定の位置に設置する。そこで引きガラス４３は血液２を引き延ばす（図２中の括弧内参照）。
【００２５】
次のステップＳ２では、スライドガラス１に塗抹された血液２を乾燥させる。具体的には次のようになる。搬送アーム４２は、血液２を塗抹されたスライドガラス１（以下、説明を簡単にするため標本Ａと称する）を第１乾燥ユニット１２に搬送し、３７度の恒温板４５に載置し、１分経過後、恒温板４５から降ろす。次にファン４６を動作開始とし、標本Ａを送風により乾燥させる。
【００２６】
ここで、恒温板４５に載置する時間と恒温板４５の温度について説明する。夏場の湿度の高い時期や冬場の寒いときには乾燥するまでに時間がかかることがある。しかし、温度３７度で１分間の乾燥でそのような状況にも対応できる。３５度以上４２度までの範囲で、１分以上１５分未満であれば問題はない。３５度以下であれば１分での乾燥が不十分になる可能性があり、４２度以上であれば血球が壊れたり、青っぽくなるので良くない。また、乾燥時間を１５分以上にすれば染め上がりの色合いがばらつく原因となるので良くない。
【００２７】
次のステップＳ３では、スライドガラス１に塗抹された血液２をメタノール固定する。すなわち、固定ユニット１３において、標本Ａを、固定液槽５１の固定液に浸漬する。この浸漬時間は２０秒が最適であるが、１０秒から３０分の間であれば特に問題はない。なお、このステップ以降は図３に示すような搬送アーム５８により複数の標本Ａを一括して搬送する。
【００２８】
次のステップＳ４では、第１の染色処理を行なう。すなわち、第１染色ユニット１４において、標本Ａを第１染色液槽５２の染色液に２分間浸漬する。
【００２９】
次のステップＳ５では、第２の染色処理を行なう。すなわち、第２染色ユニット１５において、標本Ａを第２染色液槽５３の染色液に５分間浸漬する。
【００３０】
上記のように第１染色ユニット１４および第２染色ユニット１５において、それぞれ浸漬時間を２分、５分としたが、これらは第１染色液槽５２、第２染色液槽５３の各溶液の濃度に対応して決定される。本例では第１染色液は１００％のメタノールにライト色素が入ったライト原液であり、第２染色液はｐＨ７．０のリン酸緩衝液にライト原液を１０％の割合で加えたものである。この場合、第１染色液槽５２の浸漬時間を２分以上とすることにより、第２染色液槽５３での染色における染め上がり濃淡について個体差によるムラなどの影響がなくなる。第２染色液槽５３の浸漬時間は長いほど染まりが濃くなるものであり、浸漬時間は所望の濃淡に染色されるように実施者により決定される。なお、約５分の染まりが最も美しい。
【００３１】
次のステップＳ６では、標本Ａの洗浄を行なう。すなわち、洗浄ユニット１６において、標本Ａを洗浄液槽５４の洗浄液に浸漬する。この洗浄液として蒸留水に１０％の割合でリン酸緩衝液を加えたものを用いている。ここでリン酸緩衝液とは、リン酸水素２Ｎａ、リン酸２水素Ｋの水溶液である。上記第２染色液に用いるリン酸緩衝液も同様である。
【００３２】
次のステップＳ７では、標本Ａを乾燥させる。すなわち、標本Ａを、第２乾燥ユニット１７に搬送し、温風ファン５５により乾燥させる。ここで温風は約３７度、乾燥時間は約５分が最適である。
【００３３】
以上の処理の過程において、制御部３１は各センサ２１〜２８から送出される信号を監視しており、それらの信号値が各設定値から外れるとそれぞれの異常の旨を示す信号をアラーム発生部３２に送出する。すなわち、
第１乾燥ユニット１２の乾燥温度が設定温度から外れた場合、
固定ユニット１３の固定液の量が設定量から外れた場合、
固定ユニット１３の固定液の吸光度が設定吸光度から外れた場合、
第１染色ユニット１４の第１染色液の量が設定量から外れた場合、
第２染色ユニット１５の第２染色液の吸光度（濃度）が設定吸光度から外れた場合、
第２染色ユニット１５の第２染色液の量が設定量から外れた場合、
洗浄ユニット１６の洗浄液のｐＨが設定ｐＨ値から外れた場合、
洗浄ユニット１６の洗浄液の吸光度が設定吸光度から外れた場合、
第２乾燥ユニット１７の乾燥温度が設定乾燥温度から外れた場合、
の各場合に、アラーム発生部３２からそれぞれの旨を示すアラームを発生させる。
【００３４】
操作者はアラームが発生した場合、それぞれに応じた処理を行なう。上記センサ２２〜２８により検出される、液量、濃度、ｐＨ、吸光度のいずれかが異常であれば、異常が検出された全液を取り替えるようにする。各液についての管理について以下に述べる。
【００３５】
メタノール固定液については、液の汚れを管理する。ここでは固定液が次の槽へ持ち込まれるため液量が減る。この液量が設定値以下となると液面センサ２２でこれを検出し、汚れが生じていると見做してアラームを発生させ、操作者に報知する。また、何枚もの標本Ａを処理することにより固定液が汚れてくるとそれを吸光度センサ２３で監視し、透過率が設定値まで下がってきたとき、固定液が汚れたとしてアラームを発生させ、操作者に報知する。
【００３６】
第１染色液については、液量を管理する。この液は次の槽へ持ち込まれるためと、この液の溶媒が１００％メタノールであり揮発性が高いため、長時間使用していると大幅に減少する。これを液面センサ２４で検出し、設定値以下となったとき、アラームを発生させ、操作者に報知する。
【００３７】
第２染色液については、濃度と液量を管理する。この液は前の槽からの持ち込みで濃度が変化するので、それを吸光度センサ２６によって検出する。そして濃度が設定値を超えたときにアラームを発生させ、操作者に報知する。また、次の槽への持ち込みにより液量が設定量より減ると液面センサ２６によりそれを検出してアラームを発生させ、操作者に報知する。
【００３８】
洗浄液については、ｐＨと汚れを管理する。ｐＨを管理するのは次の理由による。染色にはｐＨが大きく影響する（ｐＨ６．４〜７．０が至適とされている）が、洗浄液のｐＨによっても色合いが変化する。蒸留水のｐＨはあまり安定していない。そこで蒸留水に緩衝液を加えることで蒸留水のｐＨを安定させて、染め上がりが一定になるようにした。ｐＨはｐＨセンサ２７により検出する。また染色液を洗い流す液であるので、長時間使用すると汚れて色が付く。これを吸光度センサ２８で検出し、吸光度が設定値を超えるとアラームを発生させ、操作者に報知する。
【００３９】
第１の乾燥ユニット１２、第２の乾燥ユニット１７のそれぞれにおいて乾燥温度が異常となる場合には、操作者はその異常原因を除く作業を行なう。
【００４０】
上記の実施の形態では、ライト液による染色を行なった。この染色処理は他の染色方法によっても良い。例えば、メイギュルンワルドギムザ染色法では、染色処理のユニットは図５に示すようになる。すなわち染色液は３種類となり、染色液槽は、メイギュルンワルド原液が収容された第１染色液槽６１と、１０％メイギュルンワルド液が収容された第２染色液槽６２と、３％ギムザ液が収容された第３染色液槽６３とから成る。本例では第２染色液槽６２と第３染色液槽６３にそれぞれ液の吸光度を検出する吸光度センサ７１、７２を設け、これによって各液の濃度を検出するようにしている。また、第１染色液槽６１、第２染色液槽６２および第３染色液槽６３の各槽に液面を検出する液面センサ７３、７４、７５を設け、これによって各液の量を検出するようにしている。他の構成は上述した実施の形態と同じである。
【００４１】
なお、上記の実施の形態において、塗抹ユニット１１は図６に示すように、遠心回転装置８１を用いて塗抹するものであっても良い。他の構成は上述した実施の形態と同じである。
【００４２】
【発明の効果】
本発明によれば、染色処理において処理の条件を管理するので、安定した染色処理が施された血液塗抹標本を得ることができる。このため血液中の細胞の大きさ、核の大きさ、色合いが染色によって大きく異なることがなくなり、正確な診断を行なうことができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の標本染色装置の全体構成を示す図。
【図２】図１に示した塗抹ユニットおよび第１乾燥ユニットの構成を示す図。
【図３】図１に示した固定ユニット、第１および第２染色ユニット、洗浄ユニットおよび第２乾燥ユニットからなる装置を示す図。
【図４】図１に示した標本染色装置による染色処理のフローを示す図。
【図５】メイギュルンワルドギムザ染色法を用いた場合の本発明装置を説明する図。
【図６】塗抹ユニットの他の例を示す図。
【符号の説明】
１０ 搬送部
１１ 塗抹ユニット
１２ 第１乾燥ユニット
１３ 固定ユニット
１４ 第１染色ユニット
１５ 第２染色ユニット
１６ 洗浄ユニット
１７ 第２乾燥ユニット
２１〜２９ センサ
３１ 制御部
３２ アラーム発生部

Claims (22)

1. スライドガラスに試料血液を塗抹する第１のステップ、
   前記スライドガラスに塗抹された前記試料血液を乾燥させる第２のステップ、
   前記スライドガラスに塗抹された前記試料血液を固定液槽内の固定液に浸漬する第３のステップ、
   前記スライドガラスに塗抹された前記試料血液を染色液槽内の染色液に浸漬する第４のステップ、
   前記スライドガラスに塗抹された前記試料血液を洗浄液槽内の洗浄液に浸漬する第５のステップ、
   前記スライドガラスに塗抹された前記試料血液を乾燥させる第６のステップ、の各処理を順次行なう血液塗抹標本の染色方法において、
   前記第２のステップにおける乾燥時間を１分以上１５分未満の時間に設定し、乾燥温度を３５度以上４２度までの温度に設定してそれぞれ管理し、
   前記第３のステップにおける浸漬時間を１０〜３０秒の間の時間に設定して管理することを特徴とする血液塗抹標本の染色方法。
2. 前記第４のステップにおける染色液の濃度を、前記染色液槽内に設けられた吸光度センサにより検出される吸光度に基づいて管理することを特徴とする請求項１に記載の血液塗抹標本の染色方法。
3. 前記第３のステップにおける固定液はメタノールであることを特徴とする請求項１または請求項２に記載の血液塗抹標本の染色方法。
4. 前記固定液の汚れ度を、前記固定液槽内に設けられた吸光度センサにより検出される吸光度に基づいて管理することを特徴とする請求項１乃至請求項３のいずれかに記載の血液塗抹標本の染色方法。
5. 前記第４のステップにおける染色はライト染色であることを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の血液塗抹標本の染色方法。
6. 染色液槽はライト液の原液が収容される第１の槽と、ライト液の希釈液が収容される第２の槽から成ることを特徴とする請求項５記載の血液塗抹標本の染色方法。
7. 前記第４のステップにおける浸漬時間を、前記第１の槽では２分以上に設定して管理することを特徴とする請求項６に記載の血液塗抹標本の染色方法。
8. 前記第４のステップにおける浸漬時間を、前記第２の槽では約５分間に設定して管理することを特徴とする請求項７に記載の血液塗抹標本の染色方法。
9. 前記第４のステップにおける染色はメイギュルンワルドギムザ染色であることを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の血液塗抹標本の染色方法。
10. 前記洗浄液の汚れ度を、前記洗浄液槽内に設けられた吸光度センサにより検出される吸光度に基づいて管理することを特徴とする請求項１乃至請求項９のいずれかに記載の血液塗抹標本の染色方法。
11. 前記第６のステップにおける乾燥時間を約５分に設定し、乾燥温度を約３７度に設定してそれぞれ管理することを特徴とする請求項１乃至請求項１０のいずれかに記載の血液塗抹標本の染色方法。
12. スライドガラスに試料血液を塗抹する塗抹手段と、
    前記塗抹手段により前記スライドガラスに塗抹された試料血液を乾燥させる第１の乾燥手段と、
    前記スライドガラスに塗抹された試料血液を固定液槽内の固定液に浸漬する固定手段と、
    前記スライドガラスに塗抹された前記試料血液を染色液槽内の染色液に浸漬する染色手段と、
    前記スライドガラスに塗抹された前記試料血液を洗浄液槽内の洗浄液に浸漬する洗浄手段と、
    前記スライドガラスに塗抹された前記試料血液を乾燥させる第２の乾燥手段と、を有する血液塗抹標本の染色装置において、
    前記第１の乾燥手段における乾燥時間および乾燥温度と、前記固定手段における浸漬時間を管理する管理手段を備え、
    この管理手段は、前記第１の乾燥手段における設定乾燥時間を１分以上１５分未満の時間とし、設定乾燥温度を３５度以上４２度までの温度としてそれぞれ管理し、前記固定手段における設定浸漬時間を１０〜３０秒の間の時間として管理することを特徴とする血液塗抹標本の染色装置。
13. 前記管理手段はさらに、前記染色液槽内に設けられた吸光度センサにより検出される吸光度に基づいて前記染色液の濃度を管理することを特徴とする請求項１２に記載の血液塗抹標本の染色装置。
14. 前記固定手段における前記固定液はメタノールであることを特徴とする請求項１２または請求項１３のいずれかにに記載の血液塗抹標本の染色装置。
15. 前記管理手段はさらに、前記固定液の汚れ度を、前記固定槽内に設けられた吸光度センサにより検出される吸光度に基づいて管理することを特徴とする請求項１２乃至請求項１４のいずれかに記載の血液塗抹標本の染色装置。
16. 前記染色液はライト染色液であることを特徴とする請求項１２乃至請求項１５のいずれかに記載の血液塗抹標本の染色装置。
17. 染色液槽はライト液の原液が収容される第１の槽と、ライト液の希釈液が収容される２の槽から成ることを特徴とする請求項１６記載の血液塗抹標本の染色装置。
18. 前記管理手段はさらに、前記第１の槽の浸漬時間を、２分以上に設定して管理することを特徴とする請求項１７に記載の血液塗抹標本の染色装置。
19. 前記管理手段はさらに、前記第２の槽の浸漬時間を、約５分間に設定して管理することを特徴とする請求項１８に記載の血液塗抹標本の染色装置。
20. 前記染色液はメイギュルンワルドギムザ染色を行なうための染色液であることを特徴とする請求項１２乃至請求項１５のいずれかに記載の血液塗抹標本の染色装置。
21. 前記管理手段はさらに、前記洗浄液の汚れ度を、前記洗浄液槽内に設けられた吸光度センサにより検出される吸光度に基づいて管理することを特徴とする請求項１２乃至請求項２０のいずれかに記載の血液塗抹標本の染色装置。
22. 前記管理手段はさらに、前記第２の乾燥手段における乾燥時間を約５分に設定し、乾燥温度を約３７度に設定してそれぞれ管理することを特徴とする請求項１２乃至請求項２１のいずれかに記載の血液塗抹標本の染色装置。

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