JP3567220B2 - Antioxidant and method for producing the same - Google Patents
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Description
【0001】
【技術分野】
本発明は、食品、化粧品や医薬品等の分野で使用され得る抗酸化剤に関するものであり、更に具体的には、山椒からの抽出物を有効成分とした新規な抗酸化剤とその製造方法に関するものである。
【0002】
【背景技術】
従来から、BHT(2,6 −ジ−t−ブチル−4−メチルフェノール)やBHA(ブチルヒドロキシアニソール)等の化学的に合成された物質が、極めて高い抗酸化性を有することが知られているが、近年では、人体への副作用や変異原性のおそれが問題視されていることから、食品や化粧品,医薬品等では、その使用を控える傾向にある。
【0003】
一方、天然物から工業的に得ることの出来る抗酸化剤としては、従来から、ヴィタミンEが知られており、食品や化粧品,医薬品等に使用されている。更に、近年では、特開昭64−31890号公報や特開2000−73057号公報等に記載されているように、ローズマリーや葉たばこの他、茶葉、胡麻等の植物由来の天然抗酸化剤も提案されており、人体への副作用等が低いことが予想されることから、各種分野への適用が検討されている。
【0004】
ところが、このような従来の天然抗酸化剤において、一つの植物から得られる抗酸化剤は、一般に、極端な油溶性乃至は水溶性を有しており、そのために、適用範囲が制限されてしまうという問題があった。即ち、対象物が水性である場合にも油性である場合にも有効な効果を発揮し得る天然抗酸化物を、一つの植物から得ることが極めて難しかったのである。
【0005】
また、ヴィタミンEは、極端な油溶性であるものの大きな抗酸化特性を発揮し得ることが、実験的および理論的に確認されているが、植物油等には、元来、高濃度のヴィタミンEが溶解していることが多いことから、現実的には、ヴィタミンEの新たな添加による抗酸化能力の増大への期待は、それ程大きくないことが多いのが実情である。
【0006】
【解決課題】
ここにおいて、本発明は、上述の如き事情を背景として為されたものであって、その解決課題とするところは、必要に応じて、親油性と親水性の何れの特性の抗酸化物質をも適宜に得ることが可能であって、ヴィタミンEとは異なる、天然物由来の新規な抗酸化剤と、その有利な製造方法を提供することにある。
【0007】
【解決手段】
以下、このような課題を解決するために為された本発明の態様を記載する。なお、以下に記載の各態様において採用される構成要素は、可能な限り任意の組み合わせで採用可能である。また、本発明の態様乃至は技術的特徴は、以下に記載のものに限定されることなく、明細書全体および図面に記載され、或いはそれらの記載から当業者が把握することの出来る発明思想に基づいて認識されるものであることが理解されるべきである。
【0008】
すなわち、上述の課題を解決するために、発明者等は、広く食用として用いられている多数の天然物を対象として、抗酸化能力を有する物質のスクリーニングを行った結果、山椒 (Zanthoxylum piperitum DC.)の抽出物に、従来の抗酸化剤の採取対象として公知の植物とは異なる新規な抗酸化能力の存在、特に、親油性と親水性の何れの特性の抗酸化物質をも含む天然物由来の新規な抗酸化剤を見い出し得たのであり、かかる知見に基づいて鋭意検討を重ねた結果、本発明を完成させるに至ったのである。
【0009】
ここにおいて、抗酸化剤に係る本発明の特徴とするところは、山椒抽出物を有効成分として含有する抗酸化剤にある。
【0010】
また、抗酸化剤の製造方法に係る本発明の特徴とするところは、山椒の種子,種皮および葉の少なくとも一つを含む材料を有機溶媒を用いて抽出することによって山椒抽出物を得た後、かかる山椒抽出物から植物油脂を抽出分離することによって抗酸化剤を得るようにしたことにある。
【0011】
【発明の実施形態】
本発明において採用される山椒は、従来から公知のミカン科サンショウ (Zanthoxylum piperitum DC.)及び、その同属植物である。同属植物としては、アサクラザンショウ(Zanthoxylum piperium DC. forma inerme Makino)、ヤマアサクラザンショウ(Zanthoxylum piperium DC. forma brevispinosum Makino )、カショウ(Zanthoxylum bungeanum Sieb. et Zucc.)、イヌザンショウ(Zanthoxylum schinifolium Sieb. et Zucc. )、フユザンショウ(Zanthoxylum avicennae DC., Zanthoxylum simulans Hance, Zanthoxylum planispinum Sieb. et Zucc. )等が例示される。特に、食用に用いられている山椒であれば、何れの種類でも好適に用いられ得る。
【0012】
また、本発明において抗酸化剤を得るために採用される山椒の部位、即ち抽出部位は、山椒の幹、枝、根、茎、表皮等、何れの部位も対象となり得るが、特に、山椒の種子や種皮、葉が好ましく、抗酸化剤の採取効率や作業性等の点から、山椒の種子と種皮が一層好ましい。
【0013】
さらに、山椒から抗酸化剤となり得る抽出物を得る手法としては、例えば搾取等を採用することも可能であるが、好ましくは、山椒の適当な部位からなる材料を、必要に応じて切断や破砕,粉砕等で前処理した後、有機溶媒、含水有機溶媒または水等で成分を抽出することによって、目的とする抽出物を有利に得ることが出来る。
【0014】
より具体的には、例えば、エタノール、メタノール、1−プロパノール,2−プロパノール、1−ブタノール、2−ブタノール等のアルコール類、エーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類、酢酸エチル等のエステル類、アセトン等のケトン類、アセトニトリル等のニトリル類、ベンゼントルエン等の芳香族炭化水素類、塩化メチレン、クロロフォルム等のハロゲン化脂肪族炭化水素類、n−ヘキサンおよび水等を、適宣選択して使用することによって、山椒から目的成分を抽出することが可能であり、特に好適には、抽出後の食品等への使用における安全性及び操作性、取扱性等の観点からメタノール、エタノール、1−プロパノール、2−プロパノール、1−ブタノール、2−ブタノール等のアルコール類、n−ヘキサン等が採用される。
【0015】
また、このようにして得られた山椒抽出物は、抽出物をそのまま用いることもでき、必要に応じて、水やアルコール等の溶媒を除去して抗酸化剤とされる。更に、かかる抽出物には、脱色や脱臭の処理を加えることも可能である。具体的には、脱色処理は、例えば、活性炭や漂白土を混合して加熱、濾過すること等によって行われる。また、脱臭処理は、例えば、真空蒸留等によって行われる。
【0016】
更にまた、得られた山椒抽出物は、凍結乾燥器や噴霧乾燥器を用いた凍結乾燥法やスプレードライ法によって溶媒を除去することで、乾燥物として提供することも可能である。また、適当な溶媒に可溶化した状態や、乳剤の形態で提供することも出来る。更にまた、必要に応じて、各種の界面活性剤を添加し、親油性または親水性の乳物に調製することによって、親油性乃至は親水性を適宜に調節し、以て、使用する特定の対象において抗酸化能力がより有効に持続発揮される抗酸化剤とすることもできる。
【0017】
さらに、例えば、逆相系やポリアミド系,疎水クロマト樹脂等を使用したクロマトグラフィーを用いて、得られた山椒抽出物を処理することによって得た分画物としても使用することができる。このような分画を行うことによって、山椒抽出物から、親油性乃至は親水性の程度を異にする特定の抗酸化物質だけを取り出すことが出来るのであり、例えば、使用する対象に応じて、特定の特性を有する抗酸化物質を選択的に提供したり、その特性を調節することも可能となる。
【0018】
なお、クロマトグラフィー等によって分画された抗酸化剤も、同様に、必要に応じて、脱臭、脱色処理等を施されることとなり、また、乾燥状態や乳剤、可溶化状態等の適当な形態で提供される。
【0019】
さらに、本発明に従う山椒抽出物は、抗酸化剤として用いられ得るが、ヒドロキシラジカル消去剤としても採用可能である。即ち、上述の如き山椒抽出物を添加することによって、酸化等に際してのラジカル反応を抑えたり、連鎖的に生ぜしめられるラジカル反応の速度を遅延させること等も出来るのであり、その範囲において、活性酸素消去剤等のように、抗酸化剤の範疇以外の分野への適用も可能である。
【0020】
【実施例】
以下、本発明を更に具体的に明らかにするために、本発明の実施例としての抗酸化剤を説明するが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【0021】
〔実施例1〕
山椒の種子の粉末100gに対して、有機溶媒として500mlのメタノールを加えて、遮光した室温下で24時間震盪した後、得られた処理液を、0.45μmのメンブランフィルターによって濾過することによって抽出液を得た。更に、濾過後の残滓に500mlのメタノールを加え、上述と同様な抽出作業を6回繰り返し、6回の抽出作業によって、合わせて3リットルの濾液(抽出液)を得た。
【0022】
続いて、得られた抽出液に蒸留水を加えて全体を80%メタノール溶液とし、2000mlの分液ロートに該メタノール溶液を500ml加え、更にn−ヘキサンを125ml添加して震盪した後、水層とn−ヘキサン層の境界を明瞭にするために飽和食塩水溶液を数ml添加して、n−ヘキサン層を除去した。同様の作業を2回繰り返した後、水層を回収して40℃以下で減圧乾固した。更に、得られた乾固物にメタノールを加えることによって脱塩し、0.45μmのメンブランフィルターで濾過した後、得られた濾液を40℃以下で減圧乾固することによって、目的とする約10gの山椒種子抽出物由来の抗酸化剤(実施例1)を得た。
【0023】
「試験1」
不飽和脂肪酸の自動酸化による過酸化脂質の蓄積を指標として、以下に記載の試験方法に従って、前記「実施例1」の抗酸化剤の添加による抗酸化能力を調べた。
【0024】
(試料の調製)
50ml共栓付三角フラスコにリノール酸を0.13ml加えて、エタノール10mlにより溶解した。続いて、50mMリン酸緩衝液(pH7.0)を10mlと、蒸留水を5ml加えた。これに、下記の実施例1および比較例1,2の如き抗酸化剤等を添加することによって、実施例および比較例としての試料を調製した。
実施例試料(a):実施例1で得た山椒抽出物100μgを添加
比較例試料(a):メタノール100μgを添加
比較例試料(b):天然ヴィタミンE100μgを添加
【0025】
上述の如くして得られた3つの試料を、それぞれ、暗所で40℃に保持してインキュベートした。そして、リノール酸の自動酸化によって、生成される過酸化脂質を、以下に示すチオシアン酸法によって分析した。なお、かかる分析のための測定は、抗酸化剤無添加の比較例試料(a)おけるAbs.500nmの値が略1.0となった時点まで行って終了した。
「チオシアン酸法」
リノール酸が酸化されて生成する過酸化脂質の蓄積を次の原理によって測定する。即ち、過酸化脂質が、発色試薬として加えた2価鉄の電子を奪って、3価鉄に酸化するが、かかる酸化鉄は、チオシアン酸アンモニウムと反応して赤色を呈することを利用して測定する。より具体的には、抗酸化能力試験試料を0.1mlだけ試験管にとり、75%エタノールを5ml加えて十分に攪拌する。その後、30%チオシアン酸アンモニウムを0.1mlと、0.02mMFeCl2(1N HCl溶液)を0.1mlを加えて、3分後にAbs.500nmにおける吸収を測定した。その結果を、図1に示す。
【0026】
図1で示すように、実施例試料(a)の山椒種子抽出物を添加した試料は、天然ヴィタミンEを添加した比較例試料(b)と比べて、全く遜色のない抗酸化能力が認められた。
【0027】
〔実施例2〜8〕
前記実施例1で得た抗酸化剤を、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で分離精製した。HPLC条件を下記「表1」に示すと共に、分離精製結果を図2に示す。なお、図2中の直線は、溶出溶液のメタノール濃度(質量%)を示す。
【0028】
【表1】
【0029】
そして、上述の如くして得た山椒抽出物の分画1〜7を、それぞれ、エバポレータによって減圧乾固することによって、実施例2〜8の抗酸化剤を得た。各分画ナンバーと実施例ナンバーの対応を、下記「表2」に示す。
【0030】
【表2】
【0031】
前記実施例2〜8を用いて、下記の実施例試料(b)〜(h)を調製し、それら各実施例試料について、前記試験法1と同様に抗酸化能力を測定した。その結果を、図3に示す。
実施例試料(b):実施例2で得た山椒抽出物100μgを添加
実施例試料(c):実施例3で得た山椒抽出物100μgを添加
実施例試料(d):実施例4で得た山椒抽出物100μgを添加
実施例試料(e):実施例5で得た山椒抽出物100μgを添加
実施例試料(f):実施例6で得た山椒抽出物100μgを添加
実施例試料(g):実施例7で得た山椒抽出物100μgを添加
実施例試料(h):実施例8で得た山椒抽出物100μgを添加
比較例試料(a):メタノール100μgを添加
比較例試料(b):天然ヴィタミンE100μgを添加
【0032】
図3で示されているように、前記実施例2〜8の抗酸化剤は、天然ヴィタミンEを添加した比較例試料(b)と同等の抗酸化能力を有することが認められる。即ち、山椒抽出物からなる抗酸化剤は、部分精製された複数の分画、それぞれに強い抗酸化能力を各別に有することが確認されたのである。なお、低メタノール濃度で溶出された分画は親水性が強く、一方、高メタノール濃度で溶出された分画は比較的親油性が強い。要するに、部分精製分画物は多様な極性を有する物質で、且つ、それぞれの抗酸化能力が強いので、食品等に応用する場合、対象が親水性、親油性それぞれに対応した分画物を使用することが可能である。
【0033】
〔実施例9〕
上述の実施例5で得た山椒抽出物を50mMリン酸緩衝液(pH 5.1)によって希釈し、1ml中に抽出物4.8ngを含む抗酸化剤を得た。
【0034】
〔実施例10〕
上述の実施例5で得た山椒抽出物を50mMリン酸緩衝液(pH 5.1)によって希釈し、1ml中に抽出物48ngを含む抗酸化剤を得た。
【0035】
〔実施例11〕
上述の実施例5で得た山椒抽出物を50mMリン酸緩衝液(pH 5.1)によって希釈し、1ml中に抽出物480ngを含む抗酸化剤を得た。
【0036】
「試験2」
ヒドロキシラジカル消去能を、エレクトロスピン共鳴装置(ESR)を用いたスピントラップ法(コーエン等、FEBS Lett.、Cohen G. et al.,、FEBS Lett.、138(2)巻、258〜260頁、1982年)によって測定した。かかる試験2に際しての測定条件を下記「表3」に示す。
【0037】
【表3】
【0038】
続いて、4.6mM 5,5− ジメチル−1−ピロリン−N− オキシド(DMPO)を20μgと、1.0mM 硫酸鉄−ジエチレントリアミンペンタ酢酸(DETAPAC )を75μリットル、前記実施例9〜11の何れかを50μリットル、9.8mM過酸化水素を75μリットル加えて、下記の各実施例試料(i)〜(k)を調製し、反応を開始した。そして、正確に45秒後、ESRの掃引を開始した。各溶液は、全て50mM リン酸緩衝液(pH 5.1)に溶解した。
実施例試料(i):前記実施例9の抽出液を添加
実施例試料(j):前記実施例10の抽出液を添加
実施例試料(k):前記実施例11の抽出液を添加
【0039】
そして、各実施例試料(i)〜(k)における活性酸素消去能の検討は、DMPO−OHに由来するシグナル高(H)とMn2+に由来するシグナル高(S)の比をとり、下式で活性酸素消去能力を求めた。
【0040】
【数1】
【0041】
但し、
Hstand:コントロール(抗酸化剤無添加)のシグナル高
Sstand:コントロール(抗酸化剤無添加)の内部標準のシグナル高
Hsamp:抗酸化剤添加時のシグナル高
Ssamp:抗酸化剤添加時の内部標準のシグナル高
【0042】
図4に示した実験測定結果から明らかなように、前記実施例9〜11の抗酸化剤を添加した実施例試料(i)〜(k)において、濃度依存的に活性酸素消去能力が確認された。特に、実施例試料(k)において、その効果が顕著であった。
【0043】
【発明の効果】
上述の説明から明らかなように、本発明に係る抗酸化剤は、広く食用に利用されている山椒から抽出された新規な物質であり、それ故、従来から公知の合成抗酸化剤に比べて副作用等の不安が少なく、食品、化粧品及び医薬の分野に使用して安全で、強い抗酸化効果を奏するものである。
【0044】
また、本発明方法に従えば、本発明に係る抗酸化剤を、特に優れた効率で容易に採取することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図1】山椒種子メタノール抽出物由来の抗酸化剤の実施例1における抗酸化能力の測定結果を、比較例と共に併せ示したグラフである。
【図2】実施例1の抗酸化剤を、HPLCによって部分精製した物の特性の測定結果を表すグラフである。
【図3】実施例2〜8における抗酸化能力の測定結果を、比較例と共に併せ示したグラフである。
【図4】実施例9〜11における活性酸素消去能力の測定結果を示したグラフである。[0001]
【Technical field】
The present invention relates to an antioxidant that can be used in the fields of foods, cosmetics, pharmaceuticals, and the like, and more specifically, to a novel antioxidant containing an extract from Sansho as an active ingredient and a method for producing the same. Things.
[0002]
[Background Art]
Conventionally, it is known that chemically synthesized substances such as BHT (2,6-di-t-butyl-4-methylphenol) and BHA (butylhydroxyanisole) have extremely high antioxidant properties. However, in recent years, side effects on humans and the possibility of mutagenicity have been regarded as a problem, and thus there is a tendency to refrain from using it in foods, cosmetics, pharmaceuticals, and the like.
[0003]
On the other hand, as an antioxidant that can be industrially obtained from natural products, vitamin E is conventionally known and used in foods, cosmetics, pharmaceuticals, and the like. Furthermore, in recent years, as described in JP-A-64-31890 and JP-A-2000-73057, natural antioxidants derived from plants such as rosemary and leaf tobacco, tea leaves and sesame are also used. Proposals have been made and it is expected that side effects and the like on the human body will be low. Therefore, application to various fields is being studied.
[0004]
However, among such conventional natural antioxidants, antioxidants obtained from one plant generally have extremely oil-soluble or water-soluble properties, which limits the application range. There was a problem. That is, it has been extremely difficult to obtain from a single plant a natural antioxidant that can exert an effective effect regardless of whether the target is aqueous or oily.
[0005]
In addition, it has been experimentally and theoretically confirmed that Vitamin E is extremely oil-soluble but can exert a large antioxidant property. However, a high concentration of Vitamin E is originally contained in vegetable oils and the like. In fact, since it is often dissolved, in reality, expectations for an increase in the antioxidant capacity by the new addition of vitamin E are often not so large.
[0006]
[Solution]
Here, the present invention has been made in the background of the above-mentioned circumstances, and the object of the present invention is to provide an antioxidant having both lipophilic and hydrophilic properties, if necessary. Another object of the present invention is to provide a novel antioxidant derived from natural products, which can be appropriately obtained and is different from vitamin E, and an advantageous production method thereof.
[0007]
[Solution]
Hereinafter, embodiments of the present invention made to solve such problems will be described. The components employed in each of the embodiments described below can be employed in any combination as much as possible. In addition, aspects or technical features of the present invention are not limited to those described below, but are described in the entire specification and drawings, or based on the invention ideas that can be understood by those skilled in the art from the descriptions. It should be understood that it is recognized on the basis of.
[0008]
That is, in order to solve the above-mentioned problems, the inventors screened a large number of natural products widely used as foods for a substance having an antioxidant ability, and as a result, sansho (Zanthoxylum piperitum DC. )), The extract has a novel antioxidant ability different from that of known plants from which conventional antioxidants are collected, especially natural products containing both lipophilic and hydrophilic antioxidants. Have been found, and as a result of intensive studies based on such findings, the present invention has been completed.
[0009]
Here, a feature of the present invention relating to the antioxidant is an antioxidant containing a pepper extract as an active ingredient.
[0010]
Further, the present invention according to the method for producing an antioxidant is characterized in that a material containing at least one of a seed, a seed coat and leaves of a pepper is extracted using an organic solvent to obtain a pepper extract. Another object of the present invention is to obtain an antioxidant by extracting and separating vegetable oils and fats from such a pepper extract.
[0011]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The Japanese pepper used in the present invention is a publicly known Rutaceae salamander (Zanthoxylum piperitum DC.) And a plant belonging to the same genus. The same genus plant, Asakura bungeanum (Zanthoxylum piperium DC. Forma inerme Makino), mountain Asakura bungeanum (Zanthoxylum piperium DC. Forma brevispinosum Makino), singing (Zanthoxylum bungeanum Sieb. Et Zucc.), Inuzanshou (Zanthoxylum schinifolium Sieb. Et Zuc.), Zanthoxylum avicennae DC., Zanthoxylum simulans Hance, Zanthoxylum planispinum Sieb. Et Zucc.) And the like. In particular, any kind of pepper that is used for food can be suitably used.
[0012]
In addition, the portion of the pepper used to obtain the antioxidant in the present invention, that is, the extraction portion, can be any portion such as the stem, branches, roots, stems, epidermis, etc. Seeds, seed coats and leaves are preferred, and from the viewpoints of antioxidant collection efficiency and workability, the seeds and seed coat of sansho are more preferred.
[0013]
Further, as a technique for obtaining an extract that can be an antioxidant from the pepper, for example, it is possible to employ exploitation or the like, but preferably, a material comprising an appropriate portion of the pepper is cut or crushed as necessary. After the pretreatment by pulverization or the like, the desired extract can be advantageously obtained by extracting the components with an organic solvent, a water-containing organic solvent or water.
[0014]
More specifically, for example, alcohols such as ethanol, methanol, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, and 2-butanol; ethers such as ether and tetrahydrofuran; esters such as ethyl acetate; By appropriately selecting and using ketones, nitriles such as acetonitrile, aromatic hydrocarbons such as benzenetoluene, halogenated aliphatic hydrocarbons such as methylene chloride and chloroform, n-hexane and water, etc. , It is possible to extract the target component from pepper, particularly preferably, methanol, ethanol, 1-propanol, 2- Alcohols such as propanol, 1-butanol and 2-butanol, and n-hexane are used. That.
[0015]
In addition, the pepper extract thus obtained can be used as it is, and if necessary, a solvent such as water or alcohol is removed to obtain an antioxidant. Furthermore, it is also possible to add a treatment of decolorization and deodorization to such an extract. Specifically, the decolorization treatment is performed by, for example, mixing activated carbon or bleached earth, heating and filtering the mixture. The deodorizing treatment is performed by, for example, vacuum distillation.
[0016]
Furthermore, the obtained pepper extract can be provided as a dried product by removing the solvent by a freeze drying method or a spray drying method using a freeze dryer or a spray dryer. Further, it can be provided in a state of being solubilized in an appropriate solvent or in the form of an emulsion. Furthermore, if necessary, various surfactants are added to prepare a lipophilic or hydrophilic milk, whereby the lipophilicity or hydrophilicity is appropriately adjusted, so that the specific An antioxidant that can more effectively and continuously exhibit antioxidant ability in a subject can also be used.
[0017]
Further, for example, it can be used as a fraction obtained by treating the obtained pepper extract using chromatography using a reversed phase system, a polyamide system, a hydrophobic chromatography resin, or the like. By performing such a fractionation, it is possible to extract only specific antioxidants having different degrees of lipophilicity or hydrophilicity from the pepper extract, for example, depending on the target to be used, It is also possible to selectively provide an antioxidant having a specific property or to adjust the property.
[0018]
The antioxidant fractionated by chromatography or the like is similarly subjected to deodorization, decolorization, etc., if necessary, and may be in an appropriate form such as a dried state, an emulsion, and a solubilized state. Provided by
[0019]
Furthermore, the pepper extract according to the present invention can be used as an antioxidant, but can also be employed as a hydroxy radical scavenger. That is, by adding the above-mentioned pepper extract, it is possible to suppress the radical reaction at the time of oxidation or the like, or to slow down the rate of the radical reaction generated in a chain, etc. Application to fields other than the category of antioxidants, such as erasing agents, is also possible.
[0020]
【Example】
Hereinafter, in order to clarify the present invention more specifically, an antioxidant as an example of the present invention will be described, but the present invention is not limited to only these examples.
[0021]
[Example 1]
To 100 g of pepper seed powder, 500 ml of methanol was added as an organic solvent, and the mixture was shaken for 24 hours at room temperature protected from light. Then, the obtained treated liquid was extracted by filtration through a 0.45 μm membrane filter. A liquid was obtained. Further, 500 ml of methanol was added to the residue after filtration, and the same extraction operation as described above was repeated six times, and a total of 3 liters of filtrate (extract) was obtained by the six extraction operations.
[0022]
Subsequently, distilled water was added to the obtained extract to make the whole an 80% methanol solution, 500 ml of the methanol solution was added to a 2,000 ml separatory funnel, 125 ml of n-hexane was further added, and the mixture was shaken. In order to clarify the boundary between the and n-hexane layer, several ml of a saturated saline solution was added to remove the n-hexane layer. After repeating the same operation twice, the aqueous layer was collected and dried under reduced pressure at 40 ° C. or lower. Further, the obtained dried product is desalted by adding methanol, filtered through a 0.45 μm membrane filter, and the obtained filtrate is dried under reduced pressure at 40 ° C. or lower to obtain about 10 g of the intended product. An antioxidant derived from Japanese pepper extract (Example 1) was obtained.
[0023]
"
Using the accumulation of lipid peroxide due to the autoxidation of unsaturated fatty acids as an index, the antioxidant ability of the “Example 1” by adding the antioxidant was examined according to the test method described below.
[0024]
(Sample preparation)
0.13 ml of linoleic acid was added to a 50 ml Erlenmeyer flask with a stopper and dissolved with 10 ml of ethanol. Subsequently, 10 ml of 50 mM phosphate buffer (pH 7.0) and 5 ml of distilled water were added. Samples were prepared as examples and comparative examples by adding antioxidants and the like as in the following example 1 and comparative examples 1 and 2.
Example sample (a): 100 μg of the pepper extract obtained in Example 1 was added. Comparative sample (a): 100 μg of methanol was added. Comparative sample (b): 100 μg of natural vitamin E was added.
Each of the three samples obtained as described above was incubated at 40 ° C. in the dark. Then, lipid peroxide produced by autoxidation of linoleic acid was analyzed by the thiocyanic acid method shown below. In addition, the measurement for such an analysis is based on the Abs. The process was performed until the value at 500 nm became approximately 1.0, and the process was completed.
"Thiocyanic acid method"
The accumulation of lipid peroxide produced by oxidizing linoleic acid is measured according to the following principle. That is, lipid peroxide deprives electrons of divalent iron added as a coloring reagent and oxidizes it to trivalent iron. The iron oxide reacts with ammonium thiocyanate to give a red color, and is measured by utilizing red. I do. More specifically, only 0.1 ml of the antioxidant ability test sample is placed in a test tube, and 5 ml of 75% ethanol is added thereto, followed by sufficient stirring. Thereafter, 0.1 ml of 30% ammonium thiocyanate and 0.1 ml of 0.02 mM FeCl 2 (1N HCl solution) were added, and after 3 minutes, Abs. The absorption at 500 nm was measured. The result is shown in FIG.
[0026]
As shown in FIG. 1, the sample to which the pepper extract of Example (a) was added had an antioxidant ability comparable to that of Comparative Example (b) to which natural vitamin E was added. Was.
[0027]
[Examples 2 to 8]
The antioxidant obtained in Example 1 was separated and purified by high performance liquid chromatography (HPLC). The HPLC conditions are shown in Table 1 below, and the results of separation and purification are shown in FIG. Note that the straight line in FIG. 2 shows the methanol concentration (% by mass) of the elution solution.
[0028]
[Table 1]
[0029]
The
[0030]
[Table 2]
[0031]
Using Examples 2 to 8, the following example samples (b) to (h) were prepared, and the antioxidant ability of each of the example samples was measured in the same manner as in
Example sample (b): 100 μg of the pepper extract obtained in Example 2 was added. Example sample (c): 100 μg of the pepper extract obtained in Example 3 was added. Example sample (d): obtained in Example 4. Example sample (e): 100 μg of the pepper extract obtained in Example 5 was added. Example sample (f): Example sample (g) to which 100 μg of the pepper extract obtained in Example 6 was added. ): 100 μg of the pepper extract obtained in Example 7 was added. Example sample (h): 100 μg of the pepper extract obtained in Example 8 was added. Comparative sample (a): Comparative sample (b) was added with 100 μg of methanol. : 100 μg of natural vitamin E was added.
As shown in FIG. 3, it is recognized that the antioxidants of Examples 2 to 8 have the same antioxidant ability as Comparative Example Sample (b) to which natural vitamin E was added. That is, it was confirmed that the antioxidant composed of the pepper extract had a plurality of partially purified fractions, each of which had a strong antioxidant ability. The fraction eluted at a low methanol concentration has a strong hydrophilicity, whereas the fraction eluted at a high methanol concentration has a relatively strong lipophilicity. In short, partially purified fractions are substances with various polarities and each have strong antioxidant ability, so when applying to foods, etc., use fractions corresponding to hydrophilic and lipophilic substances respectively. It is possible to do.
[0033]
[Example 9]
The pepper extract obtained in Example 5 described above was diluted with a 50 mM phosphate buffer (pH 5.1) to obtain an antioxidant containing 4.8 ng of the extract in 1 ml.
[0034]
[Example 10]
The pepper extract obtained in Example 5 was diluted with a 50 mM phosphate buffer (pH 5.1) to obtain an antioxidant containing 48 ng of the extract in 1 ml.
[0035]
[Example 11]
The pepper extract obtained in Example 5 described above was diluted with a 50 mM phosphate buffer (pH 5.1) to obtain an antioxidant containing 480 ng of the extract in 1 ml.
[0036]
"Test 2"
The hydroxy radical scavenging ability was measured by a spin trap method using an electrospin resonance apparatus (ESR) (Cohen et al., FEBS Lett., Cohen G. et al., FEBS Lett., 138 (2), 258-260, 1982). The measurement conditions for the test 2 are shown in Table 3 below.
[0037]
[Table 3]
[0038]
Subsequently, 20 μg of 4.6 mM 5,5-dimethyl-1-pyrroline-N-oxide (DMPO) and 75 μL of 1.0 mM iron sulfate-diethylenetriaminepentaacetic acid (DETAPAC) were added to any of Examples 9 to 11. Then, 50 μl of the mixture was added, and 75 μl of 9.8 mM hydrogen peroxide was added to prepare each of the following sample samples (i) to (k), and the reaction was started. Then, exactly 45 seconds later, the ESR sweep was started. All solutions were dissolved in 50 mM phosphate buffer (pH 5.1).
Example sample (i): The extract of Example 9 was added. Example sample (j): The extract of Example 10 was added. Example sample (k): The extract of Example 11 was added. ]
The active oxygen scavenging ability of each of the sample samples (i) to (k) was examined by taking the ratio of the signal height (H) derived from DMPO-OH to the signal height (S) derived from Mn 2+ , and The active oxygen scavenging ability was determined by the formula.
[0040]
(Equation 1)
[0041]
However,
Hstand: High signal of control (no antioxidant added) Sstand: High signal of internal standard of control (no antioxidant added) Hsamp: High signal of antioxidant added Ssamp: High signal of internal standard when added antioxidant Signal height [0042]
As is clear from the experimental measurement results shown in FIG. 4, in the example samples (i) to (k) to which the antioxidants of Examples 9 to 11 were added, the active oxygen scavenging ability was confirmed in a concentration-dependent manner. Was. In particular, the effect was remarkable in the example sample (k).
[0043]
【The invention's effect】
As is clear from the above description, the antioxidant according to the present invention is a novel substance extracted from the widely used edible sansho, and therefore, compared to conventionally known synthetic antioxidants. It has little anxiety such as side effects and is safe and has a strong antioxidant effect when used in the fields of food, cosmetics and medicine.
[0044]
Further, according to the method of the present invention, the antioxidant according to the present invention can be easily collected with particularly excellent efficiency.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a graph showing the measurement results of the antioxidant ability of an antioxidant derived from a pepper extract methanol extract in Example 1 together with Comparative Examples.
FIG. 2 is a graph showing measurement results of characteristics of a product obtained by partially purifying the antioxidant of Example 1 by HPLC.
FIG. 3 is a graph showing measurement results of antioxidant capacity in Examples 2 to 8 together with Comparative Examples.
FIG. 4 is a graph showing measurement results of active oxygen scavenging ability in Examples 9 to 11.
Claims (4)
(i)親油性の抗酸化物と、親水性の抗酸化物との、両方の抗酸化物を含む。
( ii )溶出溶液としてのメタノール溶液における濃度を直線勾配とした高速液体クロマトグラフィーで分離精製したものが、350nmの吸収スペクトル分析によるAbs値に関して7つの分画を示す。
( iii) 上記7つの分画を示す各分離精製物が、何れも、天然ビタミンEと同等の抗酸化能力を有する。 An antioxidant derived from a pepper having the following properties, which is obtained by adding alcohol to a material containing at least one of seed, seed coat and leaves of the pepper .
(I) Both antioxidants, lipophilic antioxidants and hydrophilic antioxidants, are included.
( Ii ) Separation and purification by high performance liquid chromatography with a linear gradient of the concentration in the methanol solution as the elution solution shows seven fractions with respect to the Abs value by absorption spectrum analysis at 350 nm.
( Iii) Each of the separated and purified products showing the above seven fractions has antioxidant ability equivalent to that of natural vitamin E.
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