JP3507856B2 - Dnaフラグメント、組み換えdna、形質転換植物 - Google Patents
Dnaフラグメント、組み換えdna、形質転換植物Info
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Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、トウモロコシ、イネ等
の耐冷性品種などを作出するのに好適なDNAフラグメ
ント、組み換えDNA、および形質転換植物に関するも
のである。
の耐冷性品種などを作出するのに好適なDNAフラグメ
ント、組み換えDNA、および形質転換植物に関するも
のである。
【0002】
【従来の技術】植物の耐冷性と、生体膜を構成する脂肪
酸の不飽和度との間には有為な相関があることが、これ
までの研究で指摘されてきた。本発明者は、形質転換タ
バコ植物体において、シロイヌナズナ由来の脂肪酸不飽
和化酵素遺伝子FAD7を高発現させることにより、低
温に対して一層耐性となることを、実験的に示した。
酸の不飽和度との間には有為な相関があることが、これ
までの研究で指摘されてきた。本発明者は、形質転換タ
バコ植物体において、シロイヌナズナ由来の脂肪酸不飽
和化酵素遺伝子FAD7を高発現させることにより、低
温に対して一層耐性となることを、実験的に示した。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】一方、植物細胞で、あ
る蛋白質を生産しようとする際には、従来は構成的に発
現し、かつプロモーター活性の強いものが使われてき
た。こうしたプロモーターは絶えず機能するため、植物
にとっての経済学上は不利益なことも起こっていた。
る蛋白質を生産しようとする際には、従来は構成的に発
現し、かつプロモーター活性の強いものが使われてき
た。こうしたプロモーターは絶えず機能するため、植物
にとっての経済学上は不利益なことも起こっていた。
【0004】例えば、植物に耐冷性を付与するようなタ
ンパク質を形質発現させる場合にも、構成的プロモータ
ーを用いているので、植物は、常温時においては不必要
な、耐冷性を付与するための遺伝子の発現を強いられる
結果となり、好ましいことではない。
ンパク質を形質発現させる場合にも、構成的プロモータ
ーを用いているので、植物は、常温時においては不必要
な、耐冷性を付与するための遺伝子の発現を強いられる
結果となり、好ましいことではない。
【0005】このような背景から、部位特異的、誘導的
プロモーターの開発が求められていた。特に、脂肪酸不
飽和化酸素遺伝子やその他の耐冷性に寄与するタンパク
質遺伝子等を低温誘導的に発現する育種中間母本を作出
するために、あるいは不安定機能タンパク質を、植物細
胞を用いて生産できるようにするために、特定遺伝子の
発現を低温時にのみ強化する必要がある。
プロモーターの開発が求められていた。特に、脂肪酸不
飽和化酸素遺伝子やその他の耐冷性に寄与するタンパク
質遺伝子等を低温誘導的に発現する育種中間母本を作出
するために、あるいは不安定機能タンパク質を、植物細
胞を用いて生産できるようにするために、特定遺伝子の
発現を低温時にのみ強化する必要がある。
【0006】本発明の課題は、脂肪酸不飽和化酸素遺伝
子、その他の耐冷性に寄与するタンパク質遺伝子の発現
を、低温に応答して強化できるようなプロモーターを提
供することである。
子、その他の耐冷性に寄与するタンパク質遺伝子の発現
を、低温に応答して強化できるようなプロモーターを提
供することである。
【0007】また、本発明の課題は、前記のプロモータ
ーを利用して、耐冷性品種を作出できるようにすること
である。また、本発明の課題は、植物細胞における低温
時特異的な機能タンパク質の誘導生産系に対して、本プ
ロモーターを利用することである。
ーを利用して、耐冷性品種を作出できるようにすること
である。また、本発明の課題は、植物細胞における低温
時特異的な機能タンパク質の誘導生産系に対して、本プ
ロモーターを利用することである。
【0008】
【課題を解決するための手段】本発明は、(a)または
(b)に示す塩基配列からなることを特徴とする、DN
Aフラグメントに係るものである。 (a)配列表の配列番号1に示す塩基配列のうち、塩基
番号1−3794で表される塩基配列 (b)(a)の塩基配列の1個または数個が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列
(b)に示す塩基配列からなることを特徴とする、DN
Aフラグメントに係るものである。 (a)配列表の配列番号1に示す塩基配列のうち、塩基
番号1−3794で表される塩基配列 (b)(a)の塩基配列の1個または数個が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列
【0009】また、本発明は、前記のDNAフラグメン
トを含む組み換えDNA、および、前記のDNAフラグ
メントを含む組み換えDNAが導入されている、耐冷性
を有する形質転換植物に係るものである。
トを含む組み換えDNA、および、前記のDNAフラグ
メントを含む組み換えDNAが導入されている、耐冷性
を有する形質転換植物に係るものである。
【0010】また、本発明は、低温応答性のプロモータ
ー活性を示す、(c)または(d)に示す塩基配列から
なることを特徴とする、DNAフラグメントに係るもの
である。 (c)配列表の配列番号1に示す塩基配列のうち、塩基
番号1−2797で表される塩基配列 (d)(c)の塩基配列の1個または数個が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列
ー活性を示す、(c)または(d)に示す塩基配列から
なることを特徴とする、DNAフラグメントに係るもの
である。 (c)配列表の配列番号1に示す塩基配列のうち、塩基
番号1−2797で表される塩基配列 (d)(c)の塩基配列の1個または数個が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列
【0011】また、本発明は、(c)または(d)に示
す塩基配列からなるDNAフラグメントを含む組み換え
DNA、および、この組み換えDNAが導入されてい
る、低温に応答して特定のタンパク質を形質発現する形
質転換植物に係るものである。
す塩基配列からなるDNAフラグメントを含む組み換え
DNA、および、この組み換えDNAが導入されてい
る、低温に応答して特定のタンパク質を形質発現する形
質転換植物に係るものである。
【0012】また、本発明は、低温応答性のプロモータ
ー活性を示す、以下の(e)または(f)に示す塩基配
列からなることを特徴とする、DNAフラグメントに係
るものである。 (e)配列表の配列番号1に示す塩基配列のうち、塩基
番号1−2271で表される塩基配列 (f)(e)の塩基配列の1個または数個が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列
ー活性を示す、以下の(e)または(f)に示す塩基配
列からなることを特徴とする、DNAフラグメントに係
るものである。 (e)配列表の配列番号1に示す塩基配列のうち、塩基
番号1−2271で表される塩基配列 (f)(e)の塩基配列の1個または数個が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列
【0013】イネ低温誘導性遺伝子lip19及びトウ
モロコシ低温誘導性遺伝子mlip15は、DNA結合
因子をコードすることから、低温ストレス時に誘導ある
いは抑制される他の遺伝子群の転写を左右する遺伝子で
はないかと考えられている。本発明者は、トウモロコシ
mlip15遺伝子の低温誘導性プロモーターの機能単
位を明らかにし、かつこの機能部分が形質転換植物にお
いても機能することを明らかにした。
モロコシ低温誘導性遺伝子mlip15は、DNA結合
因子をコードすることから、低温ストレス時に誘導ある
いは抑制される他の遺伝子群の転写を左右する遺伝子で
はないかと考えられている。本発明者は、トウモロコシ
mlip15遺伝子の低温誘導性プロモーターの機能単
位を明らかにし、かつこの機能部分が形質転換植物にお
いても機能することを明らかにした。
【0014】本発明者は、トウモロコシmlip15遺
伝子のゲノムクローンを、通常の方法により単離した。
塩基配列決定により、当該遺伝子は、イントロンを含ま
ないことが明かとなった(配列表の配列番号1を参
照)。
伝子のゲノムクローンを、通常の方法により単離した。
塩基配列決定により、当該遺伝子は、イントロンを含ま
ないことが明かとなった(配列表の配列番号1を参
照)。
【0015】mlip15ゲノム遺伝子の2.8kbの
ゲノム配列(mlip15cDNAの5′−非翻訳領域
0.6kbと左記配列に連なる上流の2.2kbのゲノ
ム配列)と、2.2kbの(2.8kbゲノム断片より
上述の0.6kbの5′−非翻訳領域を除いた)ゲノム
配列とを、レポーター遺伝子であるβ−グルクロニダー
ゼ遺伝子にそれぞれ連結し,各組み換えDNAを構築し
た。これらの各組み換えDNAを、イネはい盤に由来す
るカルスに対して、パーティクルガン装置を用いて導入
したところ、前者では低温に対する反応性が保持されて
いたが、0.6kbの5′−非翻訳領域を除いた2.2
kb断片のみでは、低温反応性が失われていた。従っ
て、5′−非翻訳領域0.6kbを含む2.8kb断片
に、低温応答性のプロモーター機能があることが明らか
となった。
ゲノム配列(mlip15cDNAの5′−非翻訳領域
0.6kbと左記配列に連なる上流の2.2kbのゲノ
ム配列)と、2.2kbの(2.8kbゲノム断片より
上述の0.6kbの5′−非翻訳領域を除いた)ゲノム
配列とを、レポーター遺伝子であるβ−グルクロニダー
ゼ遺伝子にそれぞれ連結し,各組み換えDNAを構築し
た。これらの各組み換えDNAを、イネはい盤に由来す
るカルスに対して、パーティクルガン装置を用いて導入
したところ、前者では低温に対する反応性が保持されて
いたが、0.6kbの5′−非翻訳領域を除いた2.2
kb断片のみでは、低温反応性が失われていた。従っ
て、5′−非翻訳領域0.6kbを含む2.8kb断片
に、低温応答性のプロモーター機能があることが明らか
となった。
【0016】本発明において、組み換えDNAを作製す
る際のベクターとしては、例えばプラスミドを使用でき
る。また、組み換えDNAを導入するための植物として
は、トウモロコシ、イネ、小麦、大麦、オート麦、粟、
ひえ等の単子葉有用栽培植物が好ましい。また、前記の
各DNAフラグメントの塩基配列においては、一個また
は数個の塩基について、欠失、置換、付加が行われて
も、本発明のプロモーター機能を損なうものでない限
り、本発明の範囲内である。また、本発明のプロモータ
ー機能によって生産が誘導されるタンパク質としては、
オメガ−3脂肪酸不飽和化酵素等かある。
る際のベクターとしては、例えばプラスミドを使用でき
る。また、組み換えDNAを導入するための植物として
は、トウモロコシ、イネ、小麦、大麦、オート麦、粟、
ひえ等の単子葉有用栽培植物が好ましい。また、前記の
各DNAフラグメントの塩基配列においては、一個また
は数個の塩基について、欠失、置換、付加が行われて
も、本発明のプロモーター機能を損なうものでない限
り、本発明の範囲内である。また、本発明のプロモータ
ー機能によって生産が誘導されるタンパク質としては、
オメガ−3脂肪酸不飽和化酵素等かある。
【0017】
【実施例】(mlip15ゲノムクローンの単離、およ
び、塩基配列の決定) トウモロコシ(品種;ハニーバンタム)より調製したゲ
ノムDNAを、制限酵素Sau3Aで部分消化した後、
ショ糖密度勾配遠心法により分離し、9.7−22kb
の鎖長のDNA分画を得た。このDNA画分を、ラムダ
EMBL3をBamHIで消化したものに連結した後、
Giga−packGoldIIkitを用いてファージ
粒子とした。大腸菌XL1−BlueMRA(P2)を
宿主として検定したところ、lx107pfu/mlの
ライブラリーを得た。mlip15cDNA全長をプロ
ーブとして、このライブラリーを選抜し、3つのポジテ
ィブクローンを得た。このうち、「ラムダH1」と名付
けたクローンは、mlip15cDNAと、その5′上
流側に5kbと、その3′下流側に5kbとを含む、1
1.5kbの断片を含んでいた。
び、塩基配列の決定) トウモロコシ(品種;ハニーバンタム)より調製したゲ
ノムDNAを、制限酵素Sau3Aで部分消化した後、
ショ糖密度勾配遠心法により分離し、9.7−22kb
の鎖長のDNA分画を得た。このDNA画分を、ラムダ
EMBL3をBamHIで消化したものに連結した後、
Giga−packGoldIIkitを用いてファージ
粒子とした。大腸菌XL1−BlueMRA(P2)を
宿主として検定したところ、lx107pfu/mlの
ライブラリーを得た。mlip15cDNA全長をプロ
ーブとして、このライブラリーを選抜し、3つのポジテ
ィブクローンを得た。このうち、「ラムダH1」と名付
けたクローンは、mlip15cDNAと、その5′上
流側に5kbと、その3′下流側に5kbとを含む、1
1.5kbの断片を含んでいた。
【0018】配列表1には、mlip15cDNAの全
長を含む、3,794bpからなるEcoRI−Bam
HI断片の塩基配列を示す。なお、mlip15タンパ
ク質をコードする領域の推定アミノ酸配列は、1文字表
記で遺伝子配列の下に記した。この推定アミノ酸配列に
対応する塩基番号は、2798−3204である。この
塩基配列の終止コドンは、「米」印で示した。予想され
た「TATA box」配列には下線を施し、併せて表
記した。mlip15の転写開始点は、白抜き文字
(T、塩基番号2272)で表わした。
長を含む、3,794bpからなるEcoRI−Bam
HI断片の塩基配列を示す。なお、mlip15タンパ
ク質をコードする領域の推定アミノ酸配列は、1文字表
記で遺伝子配列の下に記した。この推定アミノ酸配列に
対応する塩基番号は、2798−3204である。この
塩基配列の終止コドンは、「米」印で示した。予想され
た「TATA box」配列には下線を施し、併せて表
記した。mlip15の転写開始点は、白抜き文字
(T、塩基番号2272)で表わした。
【0019】(イネカルスへ導入するためのDNA組換
え体の構築) トウモロコシmlip15ゲノムクローンを鋳型とし、
配列番号1の塩基番号1−2797の断片と、1−22
71の断片とを、それぞれPCR法(ポリメラーゼ連鎖
反応法)で増幅した。塩基番号1−2797の断片は、
前述した2.8kbのゲノム配列であり、mlip15
cDNAの5′−非翻訳領域0.6kbと、5′−非翻
訳領域0.6kbに連なる上流の2.2kbのゲノム配
列とからなる。塩基番号2798−3204は、mli
p15タンパク質をコードする領域である。塩基番号1
−2271の断片は、前述した2.2kbのゲノム配列
であり、2.8kbゲノム断片から、5′−非翻訳領域
0.6kbを除いたものである。
え体の構築) トウモロコシmlip15ゲノムクローンを鋳型とし、
配列番号1の塩基番号1−2797の断片と、1−22
71の断片とを、それぞれPCR法(ポリメラーゼ連鎖
反応法)で増幅した。塩基番号1−2797の断片は、
前述した2.8kbのゲノム配列であり、mlip15
cDNAの5′−非翻訳領域0.6kbと、5′−非翻
訳領域0.6kbに連なる上流の2.2kbのゲノム配
列とからなる。塩基番号2798−3204は、mli
p15タンパク質をコードする領域である。塩基番号1
−2271の断片は、前述した2.2kbのゲノム配列
であり、2.8kbゲノム断片から、5′−非翻訳領域
0.6kbを除いたものである。
【0020】増幅の際の酵素は、校正活性を持つLAT
aqDNAポリメラーゼを用いた。なお、その際、各断
片において、塩基数1から6までがHind III部位
(AAGCTT)になるように、塩基数2792−27
97と、2266−2271とか、それぞれ、BamH
I部位(GGATCC)になるように、各プライマーを
設計した。
aqDNAポリメラーゼを用いた。なお、その際、各断
片において、塩基数1から6までがHind III部位
(AAGCTT)になるように、塩基数2792−27
97と、2266−2271とか、それぞれ、BamH
I部位(GGATCC)になるように、各プライマーを
設計した。
【0021】各増幅断片を、大腸菌用ベクターpUC1
8のBamHIとHind III部位との間に組み込み、
各塩基配列の確認を行った。各塩基配列を確認した各プ
ラスミドより、2797bpと2271bpからなる各
Hind III−BamHI断片を再度調製して、pBI
221のHind III−BamHI間に組み込んだ。得
られた各組換えプラスミドを、pBImp28(mli
p15 promoter 2.8kb領域を含むによ
る)とpBImp22(mlip15 promote
r 2.2kb領域を含むによる)と名付けた。
8のBamHIとHind III部位との間に組み込み、
各塩基配列の確認を行った。各塩基配列を確認した各プ
ラスミドより、2797bpと2271bpからなる各
Hind III−BamHI断片を再度調製して、pBI
221のHind III−BamHI間に組み込んだ。得
られた各組換えプラスミドを、pBImp28(mli
p15 promoter 2.8kb領域を含むによ
る)とpBImp22(mlip15 promote
r 2.2kb領域を含むによる)と名付けた。
【0022】図1に、mlip15プロモーター領域を
模式的に表わした。+1は転写開始点を表しており(塩
基番号2272)、鍵矢印は転写の向きを表しており、
「ATG」は翻訳開始コドンの位置を示す(塩基番号2
798)。上記した組換えプラスミドが含むmlip1
5プロモーターの部分を図示した。レポーター遺伝子と
して、ベータ・グルクロニダーゼ遺伝子(GUSと略
記)を用いているが、図1のGUS遺伝子の部分は、表
記が定規どおりではない。
模式的に表わした。+1は転写開始点を表しており(塩
基番号2272)、鍵矢印は転写の向きを表しており、
「ATG」は翻訳開始コドンの位置を示す(塩基番号2
798)。上記した組換えプラスミドが含むmlip1
5プロモーターの部分を図示した。レポーター遺伝子と
して、ベータ・グルクロニダーゼ遺伝子(GUSと略
記)を用いているが、図1のGUS遺伝子の部分は、表
記が定規どおりではない。
【0023】(導入プラスミドの低温反応性)
イネ(品種、ノトヒカリ)胚盤由来カルスに、パーティ
クル・ガン(BIO−RAD社製)を用いて、上記の各
プラスミドを導入した。導入後、摂氏25度暗所にてカ
ルスを24時間培養した後、均等に2分割した。一方を
25度で、他方を5度でさらに24時間培養し、GUS
検定を行った。GUS活性は、X−Glucを基質とし
て行い、胚盤あたりの青スポットの数の5度/25度の
比から低温反応性の有無を判定した(表1)。両プラス
ミドについて3度の繰り返し実験を行った。この結果を
表1に示す。
クル・ガン(BIO−RAD社製)を用いて、上記の各
プラスミドを導入した。導入後、摂氏25度暗所にてカ
ルスを24時間培養した後、均等に2分割した。一方を
25度で、他方を5度でさらに24時間培養し、GUS
検定を行った。GUS活性は、X−Glucを基質とし
て行い、胚盤あたりの青スポットの数の5度/25度の
比から低温反応性の有無を判定した(表1)。両プラス
ミドについて3度の繰り返し実験を行った。この結果を
表1に示す。
【0024】
【表1】
【0025】pBImp28を導入した場合には、高度
のGUS活性が得られた。これに比べると、pBImp
22を導入した場合には、GUS活性は劣っていた。こ
の結果から、次のことが分かる。 (a)トウモロコシmlip15ゲノムクローンの塩基
番号1−3794の塩基番号のDNAフラグメントが、
低温応答性のプロモーター領域を、mlip15タンパ
ク質をコードする領域の推定アミノ酸配列の上流側に有
している。 (b)塩基番号1−2797が低温応答性のプロモータ
ー領域を含んでいる。 (c)塩基番号1−2271がプローモーターとして作
用するはずであるが、これは単独では低温に対する応答
性が低く,塩基番号2272−2797の断片が低温に
対して応答性を有しており、プロモーターの発現に関与
している。
のGUS活性が得られた。これに比べると、pBImp
22を導入した場合には、GUS活性は劣っていた。こ
の結果から、次のことが分かる。 (a)トウモロコシmlip15ゲノムクローンの塩基
番号1−3794の塩基番号のDNAフラグメントが、
低温応答性のプロモーター領域を、mlip15タンパ
ク質をコードする領域の推定アミノ酸配列の上流側に有
している。 (b)塩基番号1−2797が低温応答性のプロモータ
ー領域を含んでいる。 (c)塩基番号1−2271がプローモーターとして作
用するはずであるが、これは単独では低温に対する応答
性が低く,塩基番号2272−2797の断片が低温に
対して応答性を有しており、プロモーターの発現に関与
している。
【0026】
【配列表】出願人氏名:九州大学長
発明の名称:DNAフラグメント、組み換えDNA、形
質転換植物 配列の数:1 配列番号:1 配列の長さ:3794 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直線状 起源:トウモロコシ ハニーバンタム種 mlip15遺伝子のゲノム 配列:mlip15のゲノム配列 1 GAATTCCGAATAACGCGCCCCGCATGCAACCAGATAGCGGATCTTTCGGCGCTAAACTCA 60 61 GAGGGAAGCAATTGCCGGAAGAGTCGGCGTGCAAGAATAACATAAGTAGATAAGATTTCA 120 121 CGATCTATAAAAGGATATCTCCCTAGTCGGCTATATAAGGCTAGGGAGGTACCCAAACAA 180 181 AACGAATCACTCTCTTTCACCACCATAACGCCCACTAGTAGACTAATATGAGATCTCATC 240 241 CACCGTCACCCGCGAATCATCTGTAACCCAAGCAAACTCAATACCCAACATCACACATGA 300 301 CTTAGGGTATTACGCATTTAGGCGACCCGAACCTGTATAATTTTCTTGTGTTTCAACGTG 360 361 CACCTGCACGTACCATCGAGTTGCGATTAACGTCGCCGTCCTCCCAAAAATACTGGTGGT 420 421 CCTCCCAAAAACTCGACCGGACGATAGAAATAGTGTATGGCTAAGTAGAGCAAGGTGGCG 480 481 TTTGGTCCGCGGCTATGATGAGAATCCAGTAGACTGAATCCACGTGCTAAACCAAACATC 540 541 ACTGGTTTTGGCTGCATCTTCTCGGATTACGTGTGTTGTGCAAATTCTCATAATCCACGG 600 601 CAACCAGACGGGGGCGCAACCAATTGGTGTTTCTTAGGAAGCCCCCGCGTTACATTGGAT 660 661 CATAGGATGATTCAAGGGTTATGATTTTTTAGCTACTAATTGGTTGTCATCATGGTTTAT 720 721 AGGTGAAGATTGTTATTCAATCAAAGGGCGACATATCCCTCCGCGTTTAGAGACTTGCGT 780 781 GTAGTGTAAACATGGATGTAATTGTGCTACCTTTAATAGAGTCCCTTAGCTCTTCAAAAA 840 841 CAAATCTTATTATATATTAATTACTAGTCCATCCATTTTATTCTAATTTAGTTTCGAAAT 900 901 TACTAAATATAGAAAATAAAATAGAGTTTTAGTAGCAATTATGAAAACTGAAATATAGTT 960 961 TTAATTTCCGTATTTAGTGATTTAAATACTAAAATATAATAAAATGGAGAGACTAAAAAC 1020 1021 TAGTCCCTATAAACCAAACATTCTTTAAATAAAGCCCCGTGGCTAGGACAATGACCTATT 1080 1081 TTTTTCTCGCAACCGGAAGAATAAAAAATTCACCGTAACTTTCTTTCTTTCTTCTTTTTA 1140 1141 TGCGAAAGAAGATAGTTGCAAGACGAATCCAGAGTTTATCTGGAAGAAGAAAGTTCCTAA 1200 1201 TCCTCCTCCTTCCCTGTAGATATTATCAGCAAGGCAAGCGTGTCACGGCTTCTTGCTTGA 1260 1261 GTAATCCGCTCCTATTTTTTTTTTTGGGAGGGCGCCTTCCTACCGGCTTCGCTTCTAAAC 1320 1321 GGTGGGCAAATTTGGTACGATAAAGAAAAAAGAGGAGGACGAGTGGGAGGGCACTTCTGG 1380 1381 AAAAAACTTTTTAATGAGCTGGACCAAGCAGCTGGGCAAGCTGTCACTAGGACTGGACAA 1440 1441 AATACTCGTGGCTCGATAACTCGCTCGACTCGGCTCGTTAGTAGCTCAGCTCGACTCGGC 1500 1501 TCGTTTTAATTTTGTAGCGAGCCAAGCTAGCATTCTAGCTCGATTCTCTAATGAGCCAGC 1560 1561 TCGGGTTAGCTCGTGAGCTAGCTCGCGAGCCAAACGAGCTAAGCCACAACACAAATTTGT 1620 1621 CTAGTCATTGATGTCGTCTCATCTCTCATAGTCTTGTTTTCTCGTAGTTATGATCTGTGA 1680 1681 TATGGACATGTGTGGATGTGCCATGTGCTTAAATATTTATATTATTGCATGGCTACATGT 1740 1741 TTGTAGTGTTAAATACTTAAAATATAATTTTTCGGTTATAAATATATTTATGTACATAGA 1800 1801 TATTTATATTTAGTTGTGTGGCTCACGAGCCTAACGAGCTGGCTCGAGCTTCCTAACGAG 1860 1861 CCGAGCCGAGCCAGCTATTTAGCTCGTTAGTATAACGAGCCGAGCCGAGCTGGCTCGTTA 1920 1921 TAGTAACGAGCCATAACGAGCCGAGCCATAACGAGCCAAGCTGGTTCGATATCCACCCCT 1980 1981 AGCTGTCACCGTCGCCCAGTCCGCTTCGTTCGGTCAGCGGGCCCCACCTCATCTGCATTC 2040 2041 TTCCATTCTCGTCCTCCGACCTCATCTGCATTTTCCCAGCCAAGTAGTAGGTAAACTAGT 2100 2101 GGCGGTCCCGTGGCCGTGGCATCAGGAAAAGAATATGCCGTCCCAGCCCACCATCCCCCC 2160 2161 ACCGTCCCGAAATTCCAGAACTACCCTCGGCTCCAGCTATAAATAGCCGCCCCCGGGAGA 2220 putative TATA box 2221 CGTTCGAAACCTTCCCCATCTCCGGATAAAAGATAAGGAGTGTCTCTCCTCTCTTTCAGC 2280 cDNA start site 2281 TAAGTCCCTGCTCCCTCTCTTTTTCTTACATTCAGGTCCTCGCAGCTCCTCTCTTTTTTC 2340 2341 TTGTTTCTTTCTTTCGATCTGCGAGCCGTCCAGGTCCAGTACTCTCCTTTCCGTGAAGGA 2400 2401 ACTCTTGCAGCCGGCCCCTCTGGTTTCCTCGAATTCTTGTTCCCCGGTCCCTCCTCCTGT 2460 2461 CCCCGCGTAGATCCGTCCGTCCGAGGAGCACACCGTCCCCACCCCCATGTTTACCCACCA 2520 2521 GTTCCTCTGACGGCCGCCGTGCTCCGATGAAGCTGAGCGTGCTCCGTATCCGCCGCTCCC 2580 2581 ACTCCTTCTCCGTCGCCTTCCTCTACTGGTTCTACGTCTTCTCATGAACGCATCGCCCCT 2640 2641 CTCCACCTGCTGATCCTTCGCCATCTCTCCATCTCTCTTTCTCTCTGAGATAGTCTTTCG 2700 2701 AATCCATCTCTAGGGCTCTTGTTTCTCCCCATCCTCCCCCCACCCCACCCCCCACCAAAC 2760 2761 ACAAGTCCCCTTGTTCAATCCGACAAGACAAGCATCCATGTCGTCGTCACGCCGGAGCTC 2820 M S S S R R S S 2821 GAGCCCCGACAGCAACGACACGACGGACGAGCGCAAGCGGAAGCGGATGCTGTCCAACAG 2880 S P D S N D T T D E R K R K R M L S N R 2881 GGAGTCGGCGCGGCGGTCGCGCGCGCGGAAGCAGCAGCGGCTGGAGGAGCTGGTGGCGGA 2940 E S A R R S R A R K Q Q R L E E L V A E 2941 GGTGGCCCGCCTGCAGGCGGAGAACGCGGCGACGCAGGCCCGCACCGCGGCGCTGGAGCG 3000 V A R L Q A E N A A T Q A R T A A L E R 3001 CGACCTGGGCAGGGTGGACGGCGACAACGCGGTCGTGCGCGCCCGCCACGCCGAGCTGGC 3060 D L G R V D G D N A V V R A R H A E L A 3061 CGGCCGCCTGCAGTCGCTGGGCGGCGTCCTCGAGGTGCTCCAGATGGCCGGCGCCGCCGT 3120 G R L Q S L G G V L E V L Q M A G A A V 3121 CGACATCCCGGAGATGGTCACCGACGACCCCATGCTCCGCCCCTGGCAGCCGTCCTTCCC 3180 D I P E M V T D D P M L R P W Q P S F P 3181 CCCGATGCAGCCCATCGGGTTCTGAGAATCTGAGCCTCAGCCGGCGGGAGAGAGCCAATT 3240 P M Q P I G F * 3241 TCTGTCGTCGTGCCGCTGTCTATCTCGTATTGGTATATCTATTCATAAATCATCCTTGTC 3300 3301 ATGGTTTGCTCTTCTTGTTCAGTGTTATAAATTTGCTTCTTGTTAGTGTTATAAATTTGG 3360 3361 CCATCGGAAAGGATGTGTTTGTAGTTGTAATATCTTGTTTGGAGTTGTAATATCTTATCT 3420 3421 TGCTTATGAAATCGAATATGCCTATATATATATGTTATGCTGTACGAGTATGTGGCTCCA 3480 polyA additional site 3481 AATTTGTGAGCCTTCTGTCTGTTATGGTGAGGCGATGAATCCAATTTGTGAGCACACATG 3540 3541 AATCAATTTCGAGATTCGACATGTCAAGTTGATCGTTGCAGGAAGGACGGTTTTTGTATG 3600 3601 GACGGACATACCAAGTTACTGCATTTTACTTAAAATATCTCACTTATTTTTTAGATCGGC 3660 3661 ATTTCTCCACTCGTTAGATTTCTTGTTCTTGAGTCAGAAGATAACTACAGCATGTCATAT 3720 3721 CTCAATTGGAATACCATTAGGGTCCCTCATCTTAACCTATTTCATCTCTTTTAATACGTA 3780 3781 GATTTTTTGGATCC 3794
質転換植物 配列の数:1 配列番号:1 配列の長さ:3794 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直線状 起源:トウモロコシ ハニーバンタム種 mlip15遺伝子のゲノム 配列:mlip15のゲノム配列 1 GAATTCCGAATAACGCGCCCCGCATGCAACCAGATAGCGGATCTTTCGGCGCTAAACTCA 60 61 GAGGGAAGCAATTGCCGGAAGAGTCGGCGTGCAAGAATAACATAAGTAGATAAGATTTCA 120 121 CGATCTATAAAAGGATATCTCCCTAGTCGGCTATATAAGGCTAGGGAGGTACCCAAACAA 180 181 AACGAATCACTCTCTTTCACCACCATAACGCCCACTAGTAGACTAATATGAGATCTCATC 240 241 CACCGTCACCCGCGAATCATCTGTAACCCAAGCAAACTCAATACCCAACATCACACATGA 300 301 CTTAGGGTATTACGCATTTAGGCGACCCGAACCTGTATAATTTTCTTGTGTTTCAACGTG 360 361 CACCTGCACGTACCATCGAGTTGCGATTAACGTCGCCGTCCTCCCAAAAATACTGGTGGT 420 421 CCTCCCAAAAACTCGACCGGACGATAGAAATAGTGTATGGCTAAGTAGAGCAAGGTGGCG 480 481 TTTGGTCCGCGGCTATGATGAGAATCCAGTAGACTGAATCCACGTGCTAAACCAAACATC 540 541 ACTGGTTTTGGCTGCATCTTCTCGGATTACGTGTGTTGTGCAAATTCTCATAATCCACGG 600 601 CAACCAGACGGGGGCGCAACCAATTGGTGTTTCTTAGGAAGCCCCCGCGTTACATTGGAT 660 661 CATAGGATGATTCAAGGGTTATGATTTTTTAGCTACTAATTGGTTGTCATCATGGTTTAT 720 721 AGGTGAAGATTGTTATTCAATCAAAGGGCGACATATCCCTCCGCGTTTAGAGACTTGCGT 780 781 GTAGTGTAAACATGGATGTAATTGTGCTACCTTTAATAGAGTCCCTTAGCTCTTCAAAAA 840 841 CAAATCTTATTATATATTAATTACTAGTCCATCCATTTTATTCTAATTTAGTTTCGAAAT 900 901 TACTAAATATAGAAAATAAAATAGAGTTTTAGTAGCAATTATGAAAACTGAAATATAGTT 960 961 TTAATTTCCGTATTTAGTGATTTAAATACTAAAATATAATAAAATGGAGAGACTAAAAAC 1020 1021 TAGTCCCTATAAACCAAACATTCTTTAAATAAAGCCCCGTGGCTAGGACAATGACCTATT 1080 1081 TTTTTCTCGCAACCGGAAGAATAAAAAATTCACCGTAACTTTCTTTCTTTCTTCTTTTTA 1140 1141 TGCGAAAGAAGATAGTTGCAAGACGAATCCAGAGTTTATCTGGAAGAAGAAAGTTCCTAA 1200 1201 TCCTCCTCCTTCCCTGTAGATATTATCAGCAAGGCAAGCGTGTCACGGCTTCTTGCTTGA 1260 1261 GTAATCCGCTCCTATTTTTTTTTTTGGGAGGGCGCCTTCCTACCGGCTTCGCTTCTAAAC 1320 1321 GGTGGGCAAATTTGGTACGATAAAGAAAAAAGAGGAGGACGAGTGGGAGGGCACTTCTGG 1380 1381 AAAAAACTTTTTAATGAGCTGGACCAAGCAGCTGGGCAAGCTGTCACTAGGACTGGACAA 1440 1441 AATACTCGTGGCTCGATAACTCGCTCGACTCGGCTCGTTAGTAGCTCAGCTCGACTCGGC 1500 1501 TCGTTTTAATTTTGTAGCGAGCCAAGCTAGCATTCTAGCTCGATTCTCTAATGAGCCAGC 1560 1561 TCGGGTTAGCTCGTGAGCTAGCTCGCGAGCCAAACGAGCTAAGCCACAACACAAATTTGT 1620 1621 CTAGTCATTGATGTCGTCTCATCTCTCATAGTCTTGTTTTCTCGTAGTTATGATCTGTGA 1680 1681 TATGGACATGTGTGGATGTGCCATGTGCTTAAATATTTATATTATTGCATGGCTACATGT 1740 1741 TTGTAGTGTTAAATACTTAAAATATAATTTTTCGGTTATAAATATATTTATGTACATAGA 1800 1801 TATTTATATTTAGTTGTGTGGCTCACGAGCCTAACGAGCTGGCTCGAGCTTCCTAACGAG 1860 1861 CCGAGCCGAGCCAGCTATTTAGCTCGTTAGTATAACGAGCCGAGCCGAGCTGGCTCGTTA 1920 1921 TAGTAACGAGCCATAACGAGCCGAGCCATAACGAGCCAAGCTGGTTCGATATCCACCCCT 1980 1981 AGCTGTCACCGTCGCCCAGTCCGCTTCGTTCGGTCAGCGGGCCCCACCTCATCTGCATTC 2040 2041 TTCCATTCTCGTCCTCCGACCTCATCTGCATTTTCCCAGCCAAGTAGTAGGTAAACTAGT 2100 2101 GGCGGTCCCGTGGCCGTGGCATCAGGAAAAGAATATGCCGTCCCAGCCCACCATCCCCCC 2160 2161 ACCGTCCCGAAATTCCAGAACTACCCTCGGCTCCAGCTATAAATAGCCGCCCCCGGGAGA 2220 putative TATA box 2221 CGTTCGAAACCTTCCCCATCTCCGGATAAAAGATAAGGAGTGTCTCTCCTCTCTTTCAGC 2280 cDNA start site 2281 TAAGTCCCTGCTCCCTCTCTTTTTCTTACATTCAGGTCCTCGCAGCTCCTCTCTTTTTTC 2340 2341 TTGTTTCTTTCTTTCGATCTGCGAGCCGTCCAGGTCCAGTACTCTCCTTTCCGTGAAGGA 2400 2401 ACTCTTGCAGCCGGCCCCTCTGGTTTCCTCGAATTCTTGTTCCCCGGTCCCTCCTCCTGT 2460 2461 CCCCGCGTAGATCCGTCCGTCCGAGGAGCACACCGTCCCCACCCCCATGTTTACCCACCA 2520 2521 GTTCCTCTGACGGCCGCCGTGCTCCGATGAAGCTGAGCGTGCTCCGTATCCGCCGCTCCC 2580 2581 ACTCCTTCTCCGTCGCCTTCCTCTACTGGTTCTACGTCTTCTCATGAACGCATCGCCCCT 2640 2641 CTCCACCTGCTGATCCTTCGCCATCTCTCCATCTCTCTTTCTCTCTGAGATAGTCTTTCG 2700 2701 AATCCATCTCTAGGGCTCTTGTTTCTCCCCATCCTCCCCCCACCCCACCCCCCACCAAAC 2760 2761 ACAAGTCCCCTTGTTCAATCCGACAAGACAAGCATCCATGTCGTCGTCACGCCGGAGCTC 2820 M S S S R R S S 2821 GAGCCCCGACAGCAACGACACGACGGACGAGCGCAAGCGGAAGCGGATGCTGTCCAACAG 2880 S P D S N D T T D E R K R K R M L S N R 2881 GGAGTCGGCGCGGCGGTCGCGCGCGCGGAAGCAGCAGCGGCTGGAGGAGCTGGTGGCGGA 2940 E S A R R S R A R K Q Q R L E E L V A E 2941 GGTGGCCCGCCTGCAGGCGGAGAACGCGGCGACGCAGGCCCGCACCGCGGCGCTGGAGCG 3000 V A R L Q A E N A A T Q A R T A A L E R 3001 CGACCTGGGCAGGGTGGACGGCGACAACGCGGTCGTGCGCGCCCGCCACGCCGAGCTGGC 3060 D L G R V D G D N A V V R A R H A E L A 3061 CGGCCGCCTGCAGTCGCTGGGCGGCGTCCTCGAGGTGCTCCAGATGGCCGGCGCCGCCGT 3120 G R L Q S L G G V L E V L Q M A G A A V 3121 CGACATCCCGGAGATGGTCACCGACGACCCCATGCTCCGCCCCTGGCAGCCGTCCTTCCC 3180 D I P E M V T D D P M L R P W Q P S F P 3181 CCCGATGCAGCCCATCGGGTTCTGAGAATCTGAGCCTCAGCCGGCGGGAGAGAGCCAATT 3240 P M Q P I G F * 3241 TCTGTCGTCGTGCCGCTGTCTATCTCGTATTGGTATATCTATTCATAAATCATCCTTGTC 3300 3301 ATGGTTTGCTCTTCTTGTTCAGTGTTATAAATTTGCTTCTTGTTAGTGTTATAAATTTGG 3360 3361 CCATCGGAAAGGATGTGTTTGTAGTTGTAATATCTTGTTTGGAGTTGTAATATCTTATCT 3420 3421 TGCTTATGAAATCGAATATGCCTATATATATATGTTATGCTGTACGAGTATGTGGCTCCA 3480 polyA additional site 3481 AATTTGTGAGCCTTCTGTCTGTTATGGTGAGGCGATGAATCCAATTTGTGAGCACACATG 3540 3541 AATCAATTTCGAGATTCGACATGTCAAGTTGATCGTTGCAGGAAGGACGGTTTTTGTATG 3600 3601 GACGGACATACCAAGTTACTGCATTTTACTTAAAATATCTCACTTATTTTTTAGATCGGC 3660 3661 ATTTCTCCACTCGTTAGATTTCTTGTTCTTGAGTCAGAAGATAACTACAGCATGTCATAT 3720 3721 CTCAATTGGAATACCATTAGGGTCCCTCATCTTAACCTATTTCATCTCTTTTAATACGTA 3780 3781 GATTTTTTGGATCC 3794
【図1】 mlip15プロモーター領域を模式的に表
す図である。
す図である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(56)参考文献 Mol.Gen.Denet
(1995),Vol.248,No.5,p.
507−517
Mol.Gen.Denet
(1993),Vol.240,No.1,p.
1−8
(58)調査した分野(Int.Cl.7,DB名)
C12N 15/00
GenBank/EMBL/DDBJ/G
eneSeq
MEDLINE(STN)
Claims (8)
- 【請求項1】 以下の(a)または(b)に示す塩基配
列からなることを特徴とする、DNAフラグメント。 (a)配列表の配列番号1に示す塩基配列のうち、塩基
番号1−3794で表される塩基配列 (b)(a)の塩基配列の1個または数個が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列 - 【請求項2】 トウモロコシの低温誘導性遺伝子mli
p15を含むことを特徴とする、請求項1記載のDNA
フラグメント。 - 【請求項3】 低温応答性のプロモーター活性を示す、
以下の(c)または(d)に示す塩基配列からなること
を特徴とする、DNAフラグメント。 (c)配列表の配列番号1に示す塩基配列のうち、塩基
番号1−2797で表される塩基配列 (d)(c)の塩基配列の1個または数個が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列 - 【請求項4】 低温応答性のプロモーター活性を示す、
以下の(e)または(f)に示す塩基配列からなること
を特徴とする、DNAフラグメント。 (e)配列表の配列番号1に示す塩基配列のうち、塩基
番号1−2271で表される塩基配列 (f)(e)の塩基配列の1個または数個が欠失、置換
若しくは付加された塩基配列 - 【請求項5】 請求項1に記載のDNAフラグメントを
含む組み換えDNA。 - 【請求項6】 請求項3に記載のDNAフラグメントを
含む組み換えDNA。 - 【請求項7】 請求項1に記載のDNAフラグメントを
含む組み換えDNAが導入されている、耐冷性を有する
形質転換植物。 - 【請求項8】 請求項3に記載のDNAフラグメントを
含む組み換えDNAが導入されている、低温に応答して
特定のタンパク質を形質発現する形質転換植物。
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1998
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Non-Patent Citations (2)
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Mol.Gen.Denet(1993),Vol.240,No.1,p.1−8 |
Mol.Gen.Denet(1995),Vol.248,No.5,p.507−517 |
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