JP3489789B2 - Novel laminarinase and method for producing the same - Google Patents
Novel laminarinase and method for producing the sameInfo
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【0001】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、新規なラミナリナーゼ
及びその製造方法に関する。詳しくは本発明は南極オキ
アミ(Euphasia superba)由来の新規
なラミナリナーゼ及びその製造方法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel laminarinase and a method for producing the same. More particularly, the present invention relates to a novel laminarinase derived from Antarctic krill (Eupasia superba) and a method for producing the same.
【0002】[0002]
【従来の技術】糖質分解酵素の開発は、従来、バイオマ
ス資源の利用目的に、例えば、未利用農林産廃棄物の利
用として、セルラーゼを利用した、木材の脱リグニン
化、セルロース系(木材等)からのアルコール生産を可
能にしたり、あるいは海藻多糖類はこうした分解酵素に
より生じた各種オリゴ糖を食品へ利用することが期待で
きる。ラミナリナーゼもセルラーゼ酵素の一つである。
オキアミ中にラミナリナーゼ酵素が存在することは既に
報告されている〔鈴木ら,日水誌,53(2)、311
−317(1987)〕が、南極オキアミの酵素分子は
単一成分として特定されていないし、構造、生化学的性
状については未だ、不明な点が多く、その解明が待たれ
ている。BACKGROUND OF THE INVENTION Conventionally, the development of glycolytic enzymes has been carried out for the purpose of utilizing biomass resources, for example, as a utilization of unused agricultural and forestry wastes, using cellulase, delignification of wood, cellulosic materials (wood etc.). It is expected that the seaweed polysaccharide can be used for food production of various oligosaccharides produced by such degrading enzymes. Laminarinase is also one of the cellulase enzymes.
The existence of the laminarinase enzyme in krill has already been reported [Suzuki et al., Nisui, 53 (2), 311].
-317 (1987)], the enzyme molecule of Antarctic krill has not been identified as a single component, and there are still many unclear points regarding the structure and biochemical properties, and its clarification is awaited.
【0003】[0003]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、南極オキア
ミ(Euphasia superba)から、単一成
分として単離した酵素ラミナリナーゼ及びその製造方法
を提供することを目的とする。SUMMARY OF THE INVENTION It is an object of the present invention to provide an enzyme laminarinase isolated as a single component from Antarctic krill (Euphasia superba) and a method for producing the same.
【0004】[0004]
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記の課題
を解決するために、南極オキアミのラミナリナーゼの抽
出、精製及び性状についての研究を鋭意行い、ラミナリ
ナーゼを単離精製することに成功し、さらに性状を見い
だし、本発明を完成した。本発明の南極オキアミラミナ
リナーゼは、β−1,3−グルカンを含む多糖類に作用
させると、グルコース並びに各種オリゴ糖を生成させる
ものである。[Means for Solving the Problems] In order to solve the above-mentioned problems, the present inventor diligently conducted research on extraction, purification and properties of laminarinase from Antarctic krill, and succeeded in isolating and purifying laminarinase. The inventors have further found the properties and completed the present invention. The Antarctic krill laminarinase of the present invention produces glucose and various oligosaccharides when it acts on a polysaccharide containing β-1,3-glucan.
【0005】天然界に再生可能な資源として大量に存在
するβ−1,3−グルカンの有効利用、特に該物質の酵
素的加水分解によるグルコース、ラミナリビオース、ラ
ミナリトリオースなどの糖類を効率良く回収利用するた
めに使用することができる。また、ラミナリナーゼ以外
の多糖類分解酵素との併用で、様々なオリゴ糖を生成さ
せることが可能である。Effective use of a large amount of β-1,3-glucan existing as a renewable resource in the natural world, particularly efficient use of sugars such as glucose, laminaribiose and laminaritriose by enzymatic hydrolysis of the substance. It can be used for recovery and utilization. Further, various oligosaccharides can be produced by using in combination with a polysaccharide degrading enzyme other than laminarinase.
【0006】得られた有用なオリゴ糖を食品添加物とし
て利用する以外に、効率よく摂取でき、かつ現在の多様
化したライフスタイルに良くあった食品の形態の一つ
に、他の栄養素を交ぜてオリゴ糖を配合したカプセルや
顆粒、タブレット等として提供できる。また、このよう
な形態とすることにより、オリゴ糖の劣化を防ぎ、他の
栄養剤成分と配合することにより、バランス良く体に必
要な栄養成分を摂取することができる。カプセルは他の
栄養素を交ぜて油状、乳化物、粒状物の内容物を硬質、
あるいは軟質カプセルに充填する。In addition to utilizing the obtained useful oligosaccharide as a food additive, other nutrients are mixed with one of the forms of food which can be efficiently ingested and which is well suited to the current diversified lifestyles. Can be provided as capsules, granules, tablets, etc. containing oligosaccharides. Further, by adopting such a form, deterioration of oligosaccharides can be prevented, and by blending with other nutrient components, the nutrient components necessary for the body can be taken in a well-balanced manner. Capsules combine other nutrients to harden the contents of oils, emulsions and granules,
Alternatively, it is filled in a soft capsule.
【0007】本発明において、ラミナリン分解活性の測
定は、Somogyi Nelson法にて還元糖の定
量により行った。酵素力価は、一定の条件下で1分間に
1μmolのグルコースに相当する還元糖を生成する酵
素量を1Unitとした。In the present invention, the laminarin degrading activity was measured by quantifying reducing sugars by the Somogyi Nelson method. Regarding the enzyme titer, 1 Unit was defined as the amount of enzyme that produced a reducing sugar corresponding to 1 μmol of glucose per minute under constant conditions.
【0008】本発明の新規ラミナリナーゼは、以下のよ
うな物理化学的性質を有する。
(イ)作用
ラミナリン(β−1,3−グルカン)によく作用し、こ
れを分解せしめ還元糖を生成する。endo型分解酵素
である。
(ロ)基質特異性
ラミナリンを基質とする。グルコースが β−1,3結
合したラミナリテトラオース以上のオリゴ糖を基質とす
る。The novel laminarinase of the present invention has the following physicochemical properties. (A) Action It often acts on laminarin (β-1,3-glucan) and decomposes it to produce reducing sugar. It is an endo-type degrading enzyme. (B) Substrate specificity Laminarin is used as a substrate. The substrate is an oligosaccharide having a β-1,3 bond of glucose and a laminaritetraose or higher.
【0009】(ハ)作用pH及び至適pH
作用pHは4〜9と広範囲であり、至適pHは5.0で
ある。
(ニ)pH安定性
種々のpHで4℃に1時間保持した場合、pH4〜9の
範囲で安定である。(C) Working pH and optimum pH The working pH is in a wide range of 4 to 9, and the optimum pH is 5.0. (D) pH stability When kept at 4 ° C for 1 hour at various pHs, it is stable in the range of pH 4-9.
【0010】(ホ)作用温度及び至適温度
作用温度は5〜60℃であり、その至適温度は40℃で
ある。
(ヘ)温度安定性
40℃、10分間では安定しており、50℃、10分間
でも90%以上の残存活性を有する。(E) Working temperature and optimum temperature The working temperature is 5 to 60 ° C., and the optimum temperature is 40 ° C. (F) Temperature stability It is stable at 40 ° C. for 10 minutes and has a residual activity of 90% or more even at 50 ° C. for 10 minutes.
【0011】(ト)キレート剤の影響
キレート剤であるEDTA,EGTAを活性測定時に共
存させても、ほとんど活性は阻害されない。
(チ)金属イオンの影響
Hg2+,Cu2+及びFe3+により阻害される。
(リ)SDS−PAGE法による分子量
約27,000(G) Effect of chelating agent Even if EDTA and EGTA which are chelating agents are made to coexist during the activity measurement, the activity is hardly inhibited. (H) Effect of metal ion It is inhibited by Hg 2+ , Cu 2+ and Fe 3+ . (I) Molecular weight of about 27,000 by SDS-PAGE method
【0012】オキアミラミナリナーゼの分離、精製法と
しては、DEAE−,MonoQクロマトグラフィーな
どの各種陰イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、
各種アフィティークロマトグラフィー、などの各種クロ
マトグラフィー、硫安分画法などの塩析、エタノール分
画法などの有機溶剤による分画法など、抗体を用いた各
種分画法などのタンパク質の分画法を組み合わせること
により単一な酵素として得られる。Separation and purification methods for krill laminarinase include various anion exchange chromatography such as DEAE- and MonoQ chromatography, gel filtration,
Various chromatography methods such as various affinity chromatography methods, various chromatography methods such as ammonium sulfate fractionation method, salting out methods such as ammonium sulfate fractionation method, and organic solvent fractionation methods such as ethanol fractionation method. Can be obtained as a single enzyme.
【0013】[0013]
【実施例】本発明の詳細を実施例で説明する。本発明は
これらの実施例によっては何ら限定されない。The details of the present invention will be described with reference to examples. The invention is in no way limited by these examples.
【0014】実施例1
以下、南極オキアミラミナリナーゼの精製法を示す。
(1)−30℃で冷凍保存されている南極オキアミ10
0gを50mM酢酸ナトリウム(pH5.0)、1mM
PMSF、5mM 2−メルカプトエタノールを含む
溶液を5倍容量加え、氷冷下で1分間ホモジナイズし
た。さらに4℃で1時間攪拌して酵素の、抽出を行っ
た。1時間後、10,000×g 20分間の遠心分離
を行い、粗酵素液である上清400mlを得た。
(2)この上清に対して固形硫安を40%飽和になるよ
うに加えた。10,000×g 20分間の遠心分離を
行い沈殿を除去し、得られた上清420mlに対してさ
らに固形硫安を60%飽和になるように加え、10,0
00×g 20分間の遠心分離を行った。Example 1 Hereinafter, a method for purifying Antarctic krill laminarinase will be described. (1) Antarctic krill 10 stored frozen at -30 ° C
0 g to 50 mM sodium acetate (pH 5.0), 1 mM
A 5 times volume of a solution containing PMSF and 5 mM 2-mercaptoethanol was added, and the mixture was homogenized under ice cooling for 1 minute. Further, the mixture was stirred at 4 ° C. for 1 hour to extract the enzyme. After 1 hour, centrifugation was performed at 10,000 × g for 20 minutes to obtain 400 ml of a crude enzyme solution as a supernatant. (2) Solid ammonium sulfate was added to this supernatant so as to be 40% saturated. After centrifugation at 10,000 × g for 20 minutes to remove the precipitate, solid ammonium sulfate was further added to 420 ml of the obtained supernatant so as to be 60% saturation,
Centrifugation was performed at 00 × g for 20 minutes.
【0015】(3)得られた沈殿を上記(1)に示した
緩衝溶液20mlにけん濁し、セファデックス G−2
5カラム(20mm×250mm)処理により脱塩を行
った。
(4)上記(3)で得られた画分をあらかじめ50mM
酢酸ナトリウム(pH5.0)緩衝液で平衡化しておい
たDEAE−Toyopearl 650Mカラム(2
0mm×300mm 東ソー社製)に負荷し、0−0.
6M NaClの直線濃度勾配でタンパク質の抽出を行
った。その結果、0.4−0.5M付近で1本の活性画
分のピークが得られた(3) The obtained precipitate was suspended in 20 ml of the buffer solution shown in (1) above to obtain Sephadex G-2.
Desalination was performed by treatment with 5 columns (20 mm × 250 mm). (4) The fraction obtained in (3) above was previously added to 50 mM.
DEAE-Toyopearl 650M column (2) equilibrated with sodium acetate (pH 5.0) buffer
0 mm × 300 mm (manufactured by Tosoh Corporation), 0-0.
Protein extraction was performed with a linear gradient of 6M NaCl. As a result, one active fraction peak was obtained at around 0.4-0.5M.
【0016】(5)この活性画分を限外濾過(フィルト
ロン社製 分画分子量10,000)により濃縮と脱塩
を行った。
(6)上記(5)で得られた酵素液をあらかじめ50m
M酢酸ナトリウム(pH5.0)溶液で平衡化しておい
たラミナリン−Sepharose 6Bアフィニティ
ーカラム(10mm×30mm Epoxy−acti
vated Sepharose 6B ファルマシア
社製にラミナリンを固定化)に負荷し、非吸着画分を5
0mM酢酸ナトリウム(pH5.0)溶液で、吸着画分
を0.1あるいは0.5MNacl,50mM酢酸ナト
リウム(pH5.0)溶液でそれぞれ溶出させた。その
結果、0.5M NaCl溶出画分に一本の活性画分の
ピークが得られた。(5) The active fraction was concentrated and desalted by ultrafiltration (fraction molecular weight 10,000, manufactured by Filtron). (6) 50m of the enzyme solution obtained in (5) above
Laminarin-Sepharose 6B affinity column (10 mm × 30 mm Epoxy-acti) equilibrated with M sodium acetate (pH 5.0) solution
loaded Sepharose 6B (made by Pharmacia, with laminarin immobilized), and the non-adsorbed fraction was added to 5
The adsorbed fraction was eluted with 0 mM sodium acetate (pH 5.0) solution and 0.1 or 0.5 M Nacl, 50 mM sodium acetate (pH 5.0) solution, respectively. As a result, a peak of one active fraction was obtained in the 0.5 M NaCl elution fraction.
【0017】(7)次に、上記(6)で得られた酵素液
をSuperose12ゲル濾過カラム(ファルマシア
社製)に負荷し、50mM酢酸ナトリウム(pH5.
0)溶液で溶出させた。その結果、一本の活性画分のピ
ークを確認した。
(8)上記(7)で得られた画分をSDS−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動に供与し、泳動後、クマシー・ブ
リリアント・ブルー染色を行い、図1に示すように、単
一であることを確認した。また、分子量は約27,00
0であることが示された。ラミナリンを基質とした場
合、pH5.0、30℃における活性はmg当たり25
0Unitであった。(7) Next, the enzyme solution obtained in (6) above was loaded on a Superose 12 gel filtration column (Pharmacia) to obtain 50 mM sodium acetate (pH 5.
0) Elute with solution. As a result, a peak of one active fraction was confirmed. (8) The fraction obtained in (7) above was applied to SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, and after electrophoresis, stained with Coomassie Brilliant Blue. As shown in FIG. confirmed. The molecular weight is about 27,000.
It was shown to be 0. When laminarin is used as a substrate, the activity at pH 5.0 and 30 ° C is 25 per mg.
It was 0 Unit.
【0018】実施例2
実施例1で単離回収した南極オキアミラミナリナーゼの
物理化学的性質を測定した。
(1)ラミナリン分解活性
ラミナリン分解活性の測定は以下の方法に従って行っ
た。1%ラミナリン(ナカライテスク社製)溶液0.2
ml、50mM酢酸ナトリウム溶液(pH5.0)0.
2ml、そして酵素溶液0.1mlを加え、37℃で1
時間反応した。反応の停止は100℃で10分間加熱し
て行った。反応停止後、Somogyi Nelson
法にて還元糖の定量を行った。Example 2 The physicochemical properties of the Antarctic krill laminarinase isolated and recovered in Example 1 were measured. (1) Laminarinolytic activity The laminarinolytic activity was measured according to the following method. 0.2% 1% laminarin (Nacalai Tesque)
ml, 50 mM sodium acetate solution (pH 5.0)
Add 2 ml and 0.1 ml of enzyme solution to 1 at 37 ° C.
Reacted for hours. The reaction was stopped by heating at 100 ° C. for 10 minutes. After stopping the reaction, Somogyi Nelson
The reducing sugar was quantified by the method.
【0019】すなわち、反応後、0.5mlに銅試薬
0.5ml加え、100℃で10分間加熱し、これを冷
却後、Nelson試薬0.5ml加え、さらに12.
5mlに蒸留水で希釈した。15分後、波長660nm
で比色定量した。酵素力価は、上記の条件下で1分間に
1μmolのグルコースに相当する還元糖を生成する酵
素量を1Unitとした。That is, after the reaction, 0.5 ml of the copper reagent was added to 0.5 ml, heated at 100 ° C. for 10 minutes, cooled, then 0.5 ml of the Nelson reagent was added, and 12.
It was diluted to 5 ml with distilled water. After 15 minutes, wavelength 660nm
Colorimetrically determined by. Regarding the enzyme titer, 1 Unit was defined as the amount of enzyme that produced a reducing sugar equivalent to 1 μmol of glucose per minute under the above conditions.
【0020】ラミナリン、ラミナリビオース、ラミナリ
トリオース、ラミナリテトラオース、ラミナリペンタオ
ース、ラミナリヘキサオース、ラミナリヘプタオース、
CM−セルロース、リケラン、バーレイβ−グルカン、
ベーカーズイーストグルカン及びゲンチオビオースに対
する分解活性を調べた。表1に各基質に対する反応を示
す。ラミナリンのみに作用し、カルボキシメチルセルロ
ース、セロビオースリケラン、バーレイβグルカンに対
する分解活性は有していない。Laminalin, Laminaribiose, Laminaritriose, Laminaritetraose, Laminaripentaose, Laminarihexaose, Laminariheptaose,
CM-cellulose, liqueran, Burley β-glucan,
The decomposition activity against Baker's yeast glucan and gentiobiose was examined. Table 1 shows the reaction for each substrate. It acts only on laminarin and has no degradative activity against carboxymethylcellulose, cellobiose liqueran, and Burley β-glucan.
【0021】[0021]
【表1】 [Table 1]
【0022】(2)作用pH及び至適pH
図2に示すとおり、作用pHは4〜9と広範囲であり、
至適pHは5.0である。
(3)pH安定性
図3に示すとおり、種々のpHで4℃に1時間保持した
場合、pH4〜9の範囲で安定である。(2) Working pH and optimum pH As shown in FIG. 2, the working pH is in a wide range of 4 to 9,
The optimum pH is 5.0. (3) pH stability As shown in FIG. 3, when various pH values were kept at 4 ° C. for 1 hour, they were stable in the pH range of 4 to 9.
【0023】(4)作用温度及び至適温度
50mM酢酸ナトリウム(pH5.0)緩衝液中で作用
温度を測定した結果、図4に示すとおり、10−60℃
の広範囲にわたり、その至適温度は40℃であった。
(5)温度安定性
50mM酢酸ナトリウム(pH5.0)緩衝液中で、1
0分間各温度で処理した後、残存活性を測定した結果、
図5に示すとおり、40℃では安定しており、50℃で
も90%以上の残存活性を有していた。(4) Working temperature and optimum temperature As a result of measuring the working temperature in a 50 mM sodium acetate (pH 5.0) buffer solution, as shown in FIG.
Over a wide range, the optimum temperature was 40 ° C. (5) Temperature stability 1 in 50 mM sodium acetate (pH 5.0) buffer
After treatment for 0 minutes at each temperature, the residual activity was measured,
As shown in FIG. 5, it was stable at 40 ° C. and had a residual activity of 90% or more even at 50 ° C.
【0024】(6)キレート剤の影響
キレート剤であるEDTA、EGTAを活性測定時に終
濃度で1mM共存させ、その影響を検討した結果、ほと
んど活性を阻害しなかった。
(7)金属イオンの影響
各種金属イオン(Mn2+,Ca2+,Co2+,Hg
2+,Cu2+,Fe2+;1mM)を活性測定時に共
存させ、その影響を検討した。その結果、Hg2+,C
u2+及びFe3+により阻害された。(6) Effect of chelating agent As a result of examining the effect of chelating agents, EDTA and EGTA, which were coexisting at a final concentration of 1 mM when measuring the activity, the activity was hardly inhibited. (7) Effects of metal ions Various metal ions (Mn 2+ , Ca 2+ , Co 2+ , Hg
2+ , Cu 2+ , Fe 2+ ; 1 mM) were made to coexist during the activity measurement, and the effect was examined. As a result, Hg 2+ , C
It was inhibited by u 2+ and Fe 3+ .
【0025】(8)アミノ酸組成
本酵素のアミノ酸組成を測定した。その結果は表2に示
すとおりである。(8) Amino acid composition The amino acid composition of the enzyme was measured. The results are shown in Table 2.
【0026】[0026]
【表2】 [Table 2]
【0027】(9)プロテアーゼ耐性
ラミナリナーゼに対してトリプシン1/100(w/
w)加え、15℃で0〜60分保持し、0,5,10,
30,60分で活性を測定した(40℃)。その結果、
いずれの時点でも90%以上の活性を保持していた。(9) Trypsin 1/100 (w /
w) Add and hold at 15 ° C for 0 to 60 minutes to give 0, 5, 10,
The activity was measured at 30 and 60 minutes (40 ° C.). as a result,
90% or more of the activity was retained at any time point.
【0028】[0028]
【発明の効果】糖質分解酵素として種々のラミナリナー
ゼを単一分子の形で提供することができる。β−1,3
−グルカンを含む多糖類に作用させて、グルコース並び
に各種オリゴ糖を生成させる分野、ラミナリナーゼ以外
の多糖類分解酵素との併用で、様々なオリゴ糖を生成さ
せる分野へ利用が可能である。Various laminarinases can be provided in the form of a single molecule as a glycolytic enzyme. β-1,3
It can be used in the field of producing glucose and various oligosaccharides by acting on a polysaccharide containing glucan, and in the field of producing various oligosaccharides in combination with a polysaccharide degrading enzyme other than laminarinase.
【図1】ラミナリナーゼのSDS−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動の結果を示す。FIG. 1 shows the results of SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of laminarinase.
【図2】同酵素の酵素反応pHと相対残存活性の関係を
示す。FIG. 2 shows the relationship between the enzyme reaction pH and the relative residual activity of the same enzyme.
【図3】同酵素の処理pHと相対残存活性の関係を示
す。FIG. 3 shows the relationship between the treatment pH of the enzyme and the relative residual activity.
【図4】同酵素の反応温度と相対残存活性の関係を示
す。FIG. 4 shows the relationship between reaction temperature and relative residual activity of the same enzyme.
【図5】同酵素の処理温度と相対残存活性の関係を示
す。FIG. 5 shows the relationship between the treatment temperature and the relative residual activity of the same enzyme.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7,DB名) C12N 9/14 - 9/46 BIOSIS(DIALOG) WPI(DIALOG) JSTPlus(JOIS)─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (58) Fields surveyed (Int.Cl. 7 , DB name) C12N 9/14-9/46 BIOSIS (DIALOG) WPI (DIALOG) JSTPlus (JOIS)
Claims (4)
のラミナリナーゼであって、以下の物理化学的性質を有
する新規ラミナリナーゼ (イ)作用 ラミナリン(β-1,3−グルカン)によく作用し、これ
を分解せしめ還元糖を生成する。endo型分解酵素であ
る。 (ロ)基質特異性 ラミナリンを基質とする。グルコースがβ-1,3結合し
たラミナリテトラオース以上のオリゴ糖を基質とする。 (ハ) 作用pH及び至適pH 作用pHは4〜9と広範囲であり、至適pHは5.0で
ある。 (ニ)pH安定性 種々のpHで4℃に1時間保持した場合、pH4〜9の
範囲で安定である。 (ホ)作用温度及び至適温度 作用温度は5〜60℃であり、その至適温度は40℃で
ある。 (ヘ)温度安定性 40℃、10分間では安定しており、50℃、10分間
でも90%以上の残存活性を有する。 (ト)キレート剤の影響 キレート剤であるEDTA,EGTAを活性測定時に共
存させても、ほとんど活性は阻害されない。 (チ)金属イオンの影響 Hg2+,Cu2+及びFe3+により阻害される。 (リ)SDS−PAGE法による分子量 約27,0001. A laminarinase derived from Antarctic krill (Euphasia superba), which has a physicochemical property as follows: New laminarinase (a) action Laminalin (β-1,3-glucan) acts well and decomposes it. It produces a reducing sugar. It is an endo-type degrading enzyme. (B) Substrate specificity Laminarin is used as a substrate. An oligosaccharide having a β-1,3 bond of glucose and a laminaritetraose or higher is used as a substrate. (C) Working pH and optimum pH The working pH is in a wide range of 4 to 9, and the optimum pH is 5.0. (D) pH stability When kept at 4 ° C for 1 hour at various pHs, it is stable in the range of pH 4-9. (E) Working temperature and optimum temperature The working temperature is 5 to 60 ° C, and the optimum temperature is 40 ° C. (F) Temperature stability It is stable at 40 ° C. for 10 minutes and has a residual activity of 90% or more even at 50 ° C. for 10 minutes. (G) Effect of chelating agent Even if EDTA and EGTA, which are chelating agents, coexist during the activity measurement, the activity is hardly inhibited. (H) Effect of metal ion It is inhibited by Hg 2+ , Cu 2+ and Fe 3+ . (I) Molecular weight of about 27,000 by SDS-PAGE method
法において、南極オキアミ(Euphasia superba)又はそ
の冷凍品から抽出した粗酵素液を、少なくともラミナリ
ンを固定化したアフィニティーカラム及びゲル濾過に供
与して精製しラミナリナーゼを単離回収することを特徴
とする新規ラミナリナーゼの製造方法。2. The method for producing laminarinase according to claim 1 , wherein the crude enzyme solution extracted from Antarctic krill (Euphasia superba) or a frozen product thereof is supplied to an affinity column on which at least laminarin is immobilized and purified by gel filtration. A process for producing a novel laminarinase, which comprises isolating and recovering the laminarinase.
解酵素である請求項1記載の新規ラミナリナーゼ。3. Glucose and novel laminarinase of claim 1, wherein the enzyme for various oligosaccharide production.
記載の新規ラミナリナーゼ。According to claim 4 is a health food production for degrading enzyme according to claim 1,
The novel laminarinase described.
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