JP3477512B2 - 微生物を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法 - Google Patents
微生物を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法Info
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、微生物を用いた高
度不飽和脂肪酸の製造方法に関する。
度不飽和脂肪酸の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ある種の海洋性細菌が、ドコサヘキサエ
ン酸（ＤＨＡ）やエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）など
の高度不飽和脂肪酸を生産することは古くから報告され
ている。本発明者らは、培養時間が短く培養制御が容易
であり、遺伝子の取得も容易な細菌を利用した高度不飽
和脂肪酸含有脂質の生産法を見出す目的で研究を開始し
た。しかしながら、これまで高度不飽和脂肪酸生産細菌
における高度不飽和脂肪酸生産の至適化は、高度不飽和
脂肪酸生産細菌の中からとりわけ高度に高度不飽和脂肪
酸を蓄積する株を選択することから始まり、培養温度、
培地の組成、ｐＨ等の培養条件の検討に終始してきた。
ン酸（ＤＨＡ）やエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）など
の高度不飽和脂肪酸を生産することは古くから報告され
ている。本発明者らは、培養時間が短く培養制御が容易
であり、遺伝子の取得も容易な細菌を利用した高度不飽
和脂肪酸含有脂質の生産法を見出す目的で研究を開始し
た。しかしながら、これまで高度不飽和脂肪酸生産細菌
における高度不飽和脂肪酸生産の至適化は、高度不飽和
脂肪酸生産細菌の中からとりわけ高度に高度不飽和脂肪
酸を蓄積する株を選択することから始まり、培養温度、
培地の組成、ｐＨ等の培養条件の検討に終始してきた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、脂肪
酸合成阻害剤を用いた培地で高度不飽和脂肪酸合成細菌
を培養することにより高度不飽和脂肪酸の生産量を増加
させる方法を提供することにある。
酸合成阻害剤を用いた培地で高度不飽和脂肪酸合成細菌
を培養することにより高度不飽和脂肪酸の生産量を増加
させる方法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、高度不飽
和脂肪酸生産細菌の脂肪酸合成機構に付いて種々の研究
を行っている過程で、従来知られていない脂肪酸合成阻
害剤セルレニンを用いた培地で高度不飽和脂肪酸生産細
菌を培養することにより高度不飽和脂肪酸の生産量が増
加することを見出し本発明を完成するに至った。
和脂肪酸生産細菌の脂肪酸合成機構に付いて種々の研究
を行っている過程で、従来知られていない脂肪酸合成阻
害剤セルレニンを用いた培地で高度不飽和脂肪酸生産細
菌を培養することにより高度不飽和脂肪酸の生産量が増
加することを見出し本発明を完成するに至った。
【０００５】すなわち本発明は、高度不飽和脂肪酸生産
能を有する微生物を脂肪酸合成阻害剤セルレニンを含む
培地中で培養することを特徴とする高度不飽和脂肪酸の
製造方法である。そして、脂肪酸合成阻害剤としては、
セルレニンが挙げられる。また、セルレニンの培地への
添加量は0.5〜7.5μｇ/ｍｌが望ましい。さらに、本発
明は上記培養方法により得られる高度不飽和脂肪酸含有
微生物である。この方法により、高度不飽和脂肪酸生産
能を有する微生物であれば何れの菌株を用いていも高度
不飽和脂肪酸の生産量を増加させることができる。
能を有する微生物を脂肪酸合成阻害剤セルレニンを含む
培地中で培養することを特徴とする高度不飽和脂肪酸の
製造方法である。そして、脂肪酸合成阻害剤としては、
セルレニンが挙げられる。また、セルレニンの培地への
添加量は0.5〜7.5μｇ/ｍｌが望ましい。さらに、本発
明は上記培養方法により得られる高度不飽和脂肪酸含有
微生物である。この方法により、高度不飽和脂肪酸生産
能を有する微生物であれば何れの菌株を用いていも高度
不飽和脂肪酸の生産量を増加させることができる。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明で使用する高度不飽和脂肪酸生産能を有する微生
物としては特に属、種あるいは株などを限定するもので
はなく、ＤＨＡやＥＰＡ生産能を有する微生物であれば
何れ用いることができる。その例としては、例えばモリ
テラ・マリナ（Moritella marina）（ＡＴＣＣ１５３８
１）等が挙げられる。脂肪酸合成阻害剤としてはセルレ
ニンを使用することができる。このセルレニンは、セフ
ァロスポリウム・カエルレンス (Cephalosuporium caer
ulens)が生産する抗生物質であって、次の構造式を有す
る化合物である。このセルレニンとしては市販品（例え
ば、シグマ社製）を使用することができる。
本発明で使用する高度不飽和脂肪酸生産能を有する微生
物としては特に属、種あるいは株などを限定するもので
はなく、ＤＨＡやＥＰＡ生産能を有する微生物であれば
何れ用いることができる。その例としては、例えばモリ
テラ・マリナ（Moritella marina）（ＡＴＣＣ１５３８
１）等が挙げられる。脂肪酸合成阻害剤としてはセルレ
ニンを使用することができる。このセルレニンは、セフ
ァロスポリウム・カエルレンス (Cephalosuporium caer
ulens)が生産する抗生物質であって、次の構造式を有す
る化合物である。このセルレニンとしては市販品（例え
ば、シグマ社製）を使用することができる。
【０００７】
【化１】
【０００８】本発明で使用する培地としては、高度不飽
和脂肪酸生産能を有する微生物を培養し得るものであれ
ば特に限定されない。例えば、ＬＢ+ＮａＣｌ培地（１
％トリプトン、０．５％ 酵母抽出物、３％ 塩化ナト
リウム）、マリン・ブロス２２１６培地（Ｄｉｆｃｏ社
製）を使用することができる。培地に加えるセルレニン
の濃度は、微生物の生長を阻害しない程度であれば良
く、好ましい範囲は0.5〜7.5μｇ/ｍｌである。培養条
件は、ｐＨ6.5〜7.5、温度４〜25℃、培養期間２〜４日
間である。培養後、定常期の細胞を集菌し、この菌体か
ら有機溶剤抽出等の常法により、高度不飽和脂質を抽
出、回収する。
和脂肪酸生産能を有する微生物を培養し得るものであれ
ば特に限定されない。例えば、ＬＢ+ＮａＣｌ培地（１
％トリプトン、０．５％ 酵母抽出物、３％ 塩化ナト
リウム）、マリン・ブロス２２１６培地（Ｄｉｆｃｏ社
製）を使用することができる。培地に加えるセルレニン
の濃度は、微生物の生長を阻害しない程度であれば良
く、好ましい範囲は0.5〜7.5μｇ/ｍｌである。培養条
件は、ｐＨ6.5〜7.5、温度４〜25℃、培養期間２〜４日
間である。培養後、定常期の細胞を集菌し、この菌体か
ら有機溶剤抽出等の常法により、高度不飽和脂質を抽
出、回収する。
【０００９】
【実施例】以下の実施例により、本発明を理解するため
にさらに詳細に説明する。これらの実施例は本発明の技
術範囲を限定するものではない。
にさらに詳細に説明する。これらの実施例は本発明の技
術範囲を限定するものではない。
【００１０】〔実施例１〕ＤＨＡ生産能を有するモリテ
ラ・マリナ（Moritella marina）（ＡＴＣＣ１５３８
１）を用いた。培地は、ＬＢ+ＮａＣｌ培地（１％ ト
リプトン、０．５％酵母抽出物、３％ 塩化ナトリウ
ム）を用いた。モリテラ・マリナの前培養液３ｍｌを、
セルレニンを５μｇ/ｍｌ含む培地１００ｍｌに摂取
し、４℃で培養した。７２時間後の菌体を遠心分離によ
って集菌した。菌体を凍結乾燥した後、公知の方法（Bl
igh, E.G. & Dyer, W.J. Can.J.Microbiol. 37:911-917
(1959)）によって脂質抽出を行い、続いてこの脂質を１
０％メタノール性塩化アセチルで処理して、脂肪酸メチ
ルエステルを調製し、ガスクロマトグラフィーによって
それぞれの脂肪酸メチルエステル試料を分析した。
ラ・マリナ（Moritella marina）（ＡＴＣＣ１５３８
１）を用いた。培地は、ＬＢ+ＮａＣｌ培地（１％ ト
リプトン、０．５％酵母抽出物、３％ 塩化ナトリウ
ム）を用いた。モリテラ・マリナの前培養液３ｍｌを、
セルレニンを５μｇ/ｍｌ含む培地１００ｍｌに摂取
し、４℃で培養した。７２時間後の菌体を遠心分離によ
って集菌した。菌体を凍結乾燥した後、公知の方法（Bl
igh, E.G. & Dyer, W.J. Can.J.Microbiol. 37:911-917
(1959)）によって脂質抽出を行い、続いてこの脂質を１
０％メタノール性塩化アセチルで処理して、脂肪酸メチ
ルエステルを調製し、ガスクロマトグラフィーによって
それぞれの脂肪酸メチルエステル試料を分析した。
【００１１】表１にセルレニンを含む培地でモリテラ・
マリナを培養した際の菌体内ＥＰＡ及びＤＨＡの割合を
示す。この表からセルレニンを添加することによって、
細胞内のＥＰＡ、ＤＨＡの割合が増すことがわかる。
マリナを培養した際の菌体内ＥＰＡ及びＤＨＡの割合を
示す。この表からセルレニンを添加することによって、
細胞内のＥＰＡ、ＤＨＡの割合が増すことがわかる。
【００１２】表１
【００１３】表２にセルレニンを含む培地でモリテラ・
マリナを培養した際の菌体内ＥＰＡ及びＤＨＡの絶対量
を示す。ＥＰＡ及びＤＨＡの絶対量は、セルレニン添加
によって増加し、５μｇ/ｍｌ添加時にはセルレニンを
添加しないときのそれぞれ２．０倍、４．７倍増加して
いた。
マリナを培養した際の菌体内ＥＰＡ及びＤＨＡの絶対量
を示す。ＥＰＡ及びＤＨＡの絶対量は、セルレニン添加
によって増加し、５μｇ/ｍｌ添加時にはセルレニンを
添加しないときのそれぞれ２．０倍、４．７倍増加して
いた。
【００１４】表２
【００１５】以上の結果が示すように、セルレニンを適
量添加することによって高度不飽和脂肪酸生産微生物内
の高度不飽和脂肪酸の割合及びその絶対量を増加させる
ことができる。
量添加することによって高度不飽和脂肪酸生産微生物内
の高度不飽和脂肪酸の割合及びその絶対量を増加させる
ことができる。
【００１６】
【発明の効果】本発明により、高度不飽和脂肪酸生産微
生物による高度不飽和脂肪酸の生産量を増加させること
ができた。
生物による高度不飽和脂肪酸の生産量を増加させること
ができた。
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フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ｃ１２Ｒ 1:01） Ｃ１２Ｒ 1:01
(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｎ 1/20
Ｃ１２Ｒ 1:01）
(Ｃ１２Ｐ 7/64
Ｃ１２Ｒ 1:01）
(56)参考文献 特開 平８−242867（ＪＰ，Ａ)
国際公開98／01565（ＷＯ，Ａ１)
Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒ
ｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
ｏｇｙ（1999），Ｖｏｌ．65，Ｎｏ.
４，ｐ．1710−1720
ＪＡＯＣＳ（1989），Ｖｏｌ．66，Ｎ
ｏ．３，ｐ．342−347
ＪＡＯＣＳ（1988），Ｖｏｌ．65，Ｎ
ｏ．９，ｐ．1455−1459
ＪＡＭＳＴＥＣ深海研究１生物学編
（1999），Ｎｏ．15，ｐ．59−69
Ｎｉｐｐｏｎ Ｓｕｉｓａｎ Ｇａｋ
ｋａｉｓｈｉ（1995），Ｖｏｌ．61，Ｎ
ｏ．２，ｐ．205−210
Ｊ．Ａｍ，Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ． Ｓｏ
ｃ．（1989），Ｖｏｌ．66，Ｎｏ．３,
ｐ．342−347
Ｊ．Ａｍ，Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ． Ｓｏ
ｃ．（1988），Ｖｏｌ．65，Ｎｏ．９,
ｐ．1455−1459
Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．（2001）,
Ｖｏｌ．183，Ｎｏ．20，ｐ．5982−
5920
脂質生物学研究（1993），Ｖｏｌ.
35，ｐ．379−382
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅ
ｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ
（2000），Ｖｏｌ．28，ｐａｒｔ６,
ｐ．943−945
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12P 3/00 - 11/00
C12N 1/00
C11C 3/00
ＣＡ／ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／Ｗ
ＰＩＤＳ（ＳＴＮ)
ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (6)
- 【請求項１】 ＥＰＡおよび／またはＤＨＡの生産能を
有するＭｏｒｉｔｅｌｌａ属微生物を脂肪酸合成阻害剤
セルレニンを含む培地中で培養することを特徴とするＥ
ＰＡおよび／またはＤＨＡの製造方法。 - 【請求項２】 ＥＰＡおよび／またはＤＨＡの生産能を
有するモリテラ・マリナ（ＡＴＣＣ１５３８１）を脂肪
酸合成阻害剤セルレニンを含む培地中で培養することを
特徴とする、請求項１記載のＥＰＡおよび／またはＤＨ
Ａの製造方法。 - 【請求項３】 セルレニンの添加量が０．５〜７．５μ
ｇ／ｍｌである請求項１または２に記載のＥＰＡおよび
／またはＤＨＡの製造法。 - 【請求項４】 ＤＨＡの生産能を有するＭｏｒｉｔｅｌ
ｌａ属微生物を脂肪酸合成阻害剤セルレニンを含む培地
中で培養することを特徴とするＤＨＡの製造方法。 - 【請求項５】 ＤＨＡの生産能を有するモリテラ・マリ
ナ（ＡＴＣＣ１５３８１）を脂肪酸合成阻害剤セルレニ
ンを含む培地中で培養することを特徴とする、請求項４
記載のＤＨＡの製造方法。 - 【請求項６】 セルレニンの添加量が０．５〜７．５μ
ｇ／ｍｌである請求項４または５に記載のＤＨＡの製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000133977A JP3477512B2 (ja) | 2000-05-02 | 2000-05-02 | 微生物を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000133977A JP3477512B2 (ja) | 2000-05-02 | 2000-05-02 | 微生物を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001309797A JP2001309797A (ja) | 2001-11-06 |
| JP3477512B2 true JP3477512B2 (ja) | 2003-12-10 |
Family
ID=18642342
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000133977A Expired - Lifetime JP3477512B2 (ja) | 2000-05-02 | 2000-05-02 | 微生物を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3477512B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2015225158A1 (en) | 2014-03-03 | 2016-09-08 | Kao Corporation | Lipid production method using beta-ketoacyl-apc synthase |
-
2000
- 2000-05-02 JP JP2000133977A patent/JP3477512B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (10)
| Title |
|---|
| Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（１９９９），Ｖｏｌ．６５，Ｎｏ．４，ｐ．１７１０−１７２０ |
| Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２０００），Ｖｏｌ．２８，ｐａｒｔ６，ｐ．９４３−９４５ |
| Ｊ．Ａｍ，Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．（１９８８），Ｖｏｌ．６５，Ｎｏ．９，ｐ．１４５５−１４５９ |
| Ｊ．Ａｍ，Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．（１９８９），Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．３，ｐ．３４２−３４７ |
| Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．（２００１），Ｖｏｌ．１８３，Ｎｏ．２０，ｐ．５９８２−５９２０ |
| ＪＡＭＳＴＥＣ深海研究１生物学編（１９９９），Ｎｏ．１５，ｐ．５９−６９ |
| ＪＡＯＣＳ（１９８８），Ｖｏｌ．６５，Ｎｏ．９，ｐ．１４５５−１４５９ |
| ＪＡＯＣＳ（１９８９），Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．３，ｐ．３４２−３４７ |
| Ｎｉｐｐｏｎ Ｓｕｉｓａｎ Ｇａｋｋａｉｓｈｉ（１９９５），Ｖｏｌ．６１，Ｎｏ．２，ｐ．２０５−２１０ |
| 脂質生物学研究（１９９３），Ｖｏｌ．３５，ｐ．３７９−３８２ |
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| JP2001309797A (ja) | 2001-11-06 |
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