JP3426030B2 - ウロビリノーゲン試験具を有効化する方法及び試験具 - Google Patents
ウロビリノーゲン試験具を有効化する方法及び試験具Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ウロビリノーゲンの診
断試験に用いられるエールリッヒ試薬に対する対照試験
の方法における、特定のスルホン酸インドールの用途に
関する。
断試験に用いられるエールリッヒ試薬に対する対照試験
の方法における、特定のスルホン酸インドールの用途に
関する。
【０００２】
【従来の技術】各種の病的状態、例えば溶血性疾患、肝
臓疾患、胆管閉塞およびその他の胆管機能不全によっ
て、尿中のウロビリノーゲンの異常に高いレベルが生じ
ることが知られている。
臓疾患、胆管閉塞およびその他の胆管機能不全によっ
て、尿中のウロビリノーゲンの異常に高いレベルが生じ
ることが知られている。
【０００３】尿中のウロビリノーゲンを検出するための
標準的方法は、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド又
はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒド及び塩酸の水性
溶液（しばしばエールリッヒ試薬と呼ばれる）を用いる
エールリッヒ反応を利用している。ウロビリノーゲンの
存在下では、エールリッヒ試薬との錯体が形成され、こ
れが可視スペクトルでの吸収を示す。生じた色は、尿試
料中のｐ−アミノサリチル酸、ポルホビリノーゲン及び
尿素などの干渉物質の存在に応じて、様々な色調の赤褐
色のうちの一つとなり得る。
標準的方法は、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド又
はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒド及び塩酸の水性
溶液（しばしばエールリッヒ試薬と呼ばれる）を用いる
エールリッヒ反応を利用している。ウロビリノーゲンの
存在下では、エールリッヒ試薬との錯体が形成され、こ
れが可視スペクトルでの吸収を示す。生じた色は、尿試
料中のｐ−アミノサリチル酸、ポルホビリノーゲン及び
尿素などの干渉物質の存在に応じて、様々な色調の赤褐
色のうちの一つとなり得る。
【０００４】現在利用できる「浸漬して読み取る(dip-a
nd-read)」方式の試薬片には、エールリッヒ試薬、すな
わちｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド及び塩酸を組
み込むことができる。そのような小片を尿中に浸漬し、
その際に発色した色を、該試薬片と併用するために作成
された標準色チャートと比較して、ウロビリノーゲンの
存在及び近似的濃度を判定する。
nd-read)」方式の試薬片には、エールリッヒ試薬、すな
わちｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド及び塩酸を組
み込むことができる。そのような小片を尿中に浸漬し、
その際に発色した色を、該試薬片と併用するために作成
された標準色チャートと比較して、ウロビリノーゲンの
存在及び近似的濃度を判定する。
【０００５】試験片の読み取りに用いられる器具を検査
するために、または、試験が肉眼での観察を必要とする
ならば技術者の技量を検査する際に、ウロビリノーゲン
の存在によって生じるのと同じ色反応を生じることがで
きる対照溶液を用いることが慣用的である。そのような
対照は、ウロビリノーゲン試験を実施する最良の方法を
技術者に教えることなどの教育目的にも役立つ。
するために、または、試験が肉眼での観察を必要とする
ならば技術者の技量を検査する際に、ウロビリノーゲン
の存在によって生じるのと同じ色反応を生じることがで
きる対照溶液を用いることが慣用的である。そのような
対照は、ウロビリノーゲン試験を実施する最良の方法を
技術者に教えることなどの教育目的にも役立つ。
【０００６】Analytical Biochemistry 、第８巻（1964
年）７５〜８１ページには、インドール及びトリプトフ
ァンは、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドとの反応
によって有色生成物を形成できることが記載されてい
る。この参考文献に開示されたインドールは、エールリ
ッヒ試薬と反応して、尿中のウロビリノーゲンとエール
リッヒ試薬との反応によって形成される色に酷似した赤
褐色を生じることから、ウロビリノーゲン用対照試薬と
して用いられてきた。改良された水溶性を有するインド
ールが望ましいと思われ、それは、より溶け易いインド
ールは、より濃縮された含浸液の調製を可能にして、吸
収性試薬片への充分量のインドールの取り込みを可能に
するからである。その上、より溶け易いインドールは、
試薬片から好適な濃度の試験液へのその再構成を容易に
する。
年）７５〜８１ページには、インドール及びトリプトフ
ァンは、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドとの反応
によって有色生成物を形成できることが記載されてい
る。この参考文献に開示されたインドールは、エールリ
ッヒ試薬と反応して、尿中のウロビリノーゲンとエール
リッヒ試薬との反応によって形成される色に酷似した赤
褐色を生じることから、ウロビリノーゲン用対照試薬と
して用いられてきた。改良された水溶性を有するインド
ールが望ましいと思われ、それは、より溶け易いインド
ールは、より濃縮された含浸液の調製を可能にして、吸
収性試薬片への充分量のインドールの取り込みを可能に
するからである。その上、より溶け易いインドールは、
試薬片から好適な濃度の試験液へのその再構成を容易に
する。
【０００７】米国特許第4,405,718 号明細書は、一般式
（II）：
（II）：
【０００８】
【化３】
【０００９】〔式中、Ｒ1 及びＲ2 はＨ又は非置換Ｃ
1-4 アルキル、Ｒ3 はＨ、非置換Ｃ1-4アルキル、非置
換Ｃ1-4 アルコキシ又はハロゲンである〕によって特徴
付けられるインドールの、ウロビリノーゲン用対照標準
としての非イオン洗剤中での用途を開示している。
1-4 アルキル、Ｒ3 はＨ、非置換Ｃ1-4アルキル、非置
換Ｃ1-4 アルコキシ又はハロゲンである〕によって特徴
付けられるインドールの、ウロビリノーゲン用対照標準
としての非イオン洗剤中での用途を開示している。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】上記配合物は所望の色
応答を与えはするものの、該インドールは、対照試薬と
しての用途に充分な程に水溶性ではなく、それゆえ、非
イオン界面活性剤と混合しなければ用いることができな
い。インドール／非イオン界面活性剤という配合物は、
水性環境中に置かれて、ウロビリノーゲン試験片中のエ
ールリッヒ溶液を試験するのに必要な量のインドールを
与える吸湿性物質の小片に対照試薬が単に吸収されるだ
けのタイプのフォーマットで用いるには不適当である。
応答を与えはするものの、該インドールは、対照試薬と
しての用途に充分な程に水溶性ではなく、それゆえ、非
イオン界面活性剤と混合しなければ用いることができな
い。インドール／非イオン界面活性剤という配合物は、
水性環境中に置かれて、ウロビリノーゲン試験片中のエ
ールリッヒ溶液を試験するのに必要な量のインドールを
与える吸湿性物質の小片に対照試薬が単に吸収されるだ
けのタイプのフォーマットで用いるには不適当である。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明は、ｐ−ジメチル
アミノベンズアルデヒドを含有する試薬系に対する対照
試験の方法に関する。この方法は、水溶液中で、試薬を
一般式（Ｉ）：
アミノベンズアルデヒドを含有する試薬系に対する対照
試験の方法に関する。この方法は、水溶液中で、試薬を
一般式（Ｉ）：
【００１２】
【化４】
【００１３】〔式中、Ｒは、ｎが２〜６（好ましくは２
〜４）である、−（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 -、又はｘが２若し
くは３であってｍが１若しくは２である、−〔ＯＣＨ2
−（ＣＨ2 ）x 〕m ＳＯ3 -で示される基である〕で示さ
れるインドールといっしょにする工程を含む。ｐ−ジメ
チルアミノベンズアルデヒド又はｐ−ジエチルアミノベ
ンズアルデヒドの存在は、検出し得る変色によって確認
される。
〜４）である、−（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 -、又はｘが２若し
くは３であってｍが１若しくは２である、−〔ＯＣＨ2
−（ＣＨ2 ）x 〕m ＳＯ3 -で示される基である〕で示さ
れるインドールといっしょにする工程を含む。ｐ−ジメ
チルアミノベンズアルデヒド又はｐ−ジエチルアミノベ
ンズアルデヒドの存在は、検出し得る変色によって確認
される。
【００１４】代表的には、スルホン化されたインドール
が、適当量のインドールを担持する吸湿性又は非吸湿性
物質のマトリックスの小片の形態で提供される。
が、適当量のインドールを担持する吸湿性又は非吸湿性
物質のマトリックスの小片の形態で提供される。
【００１５】本発明のウロビリノーゲン用対照標準は、
その水性溶液の形態で、ｐ−ジメチルアミノベンズアル
デヒド又はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒド及び塩
酸を含有する試薬片を、インドールを含有する溶液に単
に浸漬し、そして予測された変色が起こるか否かを判定
するだけで用いることができる。代表的には、本発明の
インドールは、従来の担体物質及びインドールを含有す
る圧縮又は成形された錠剤の形態で担体中に包含させる
ことができる。好ましい実施態様においては、担体マト
リックスにインドールを包含させ、小片フォーマットで
用いることができる。担体マトリックスという用語は、
水又は生理学的流体に接触したときに、それらに不溶で
あり、かつその構造的完全性を維持する、吸湿性若しく
は非吸湿性のマトリックスを指すものとする。用い得る
好適な吸湿性マトリックスとしては、紙、セルロース、
木材及び合成樹脂のフリース（毛状繊維）並びに織布及
び不織布が挙げられる。このように、本発明の１種類又
はそれ以上のスルホン化インドールで含浸した担体マト
リックスを選ぶことにより、インドールを含有する小片
を水に単に浸すだけで、インドールを試験溶液に導入す
るための簡便な方法が与えられる。本発明に有用なスル
ホン化インドールの独自の溶解度特性は、それらが担体
マトリックスから容易に溶け出して、試験片中のエール
リッヒ組成物を試験するのに適した水性溶液を与えるこ
とから、このフォーマットでのそれらの使用を容易にす
る。
その水性溶液の形態で、ｐ−ジメチルアミノベンズアル
デヒド又はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒド及び塩
酸を含有する試薬片を、インドールを含有する溶液に単
に浸漬し、そして予測された変色が起こるか否かを判定
するだけで用いることができる。代表的には、本発明の
インドールは、従来の担体物質及びインドールを含有す
る圧縮又は成形された錠剤の形態で担体中に包含させる
ことができる。好ましい実施態様においては、担体マト
リックスにインドールを包含させ、小片フォーマットで
用いることができる。担体マトリックスという用語は、
水又は生理学的流体に接触したときに、それらに不溶で
あり、かつその構造的完全性を維持する、吸湿性若しく
は非吸湿性のマトリックスを指すものとする。用い得る
好適な吸湿性マトリックスとしては、紙、セルロース、
木材及び合成樹脂のフリース（毛状繊維）並びに織布及
び不織布が挙げられる。このように、本発明の１種類又
はそれ以上のスルホン化インドールで含浸した担体マト
リックスを選ぶことにより、インドールを含有する小片
を水に単に浸すだけで、インドールを試験溶液に導入す
るための簡便な方法が与えられる。本発明に有用なスル
ホン化インドールの独自の溶解度特性は、それらが担体
マトリックスから容易に溶け出して、試験片中のエール
リッヒ組成物を試験するのに適した水性溶液を与えるこ
とから、このフォーマットでのそれらの使用を容易にす
る。
【００１６】本発明のスルホン化インドールは、一般式
（Ｉ）：
（Ｉ）：
【００１７】
【化５】
【００１８】〔式中、Ｒは、−（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 -（ｎ
は２〜６である）、又は−〔ＯＣＨ2−（ＣＨ2 ）x 〕m
ＳＯ3 -（ｘは２又は３、ｍは１又は２である）で示さ
れる基である〕で示される。これらのスルホン化アルキ
ル及びスルホン化アルキルエーテルは、所望の溶解度特
性を示しながらも、エールリッヒ試薬のｐ−ジメチルア
ミノベンズアルデヒド又はｐ−ジエチルアミノベンズア
ルデヒドとの有色錯体を形成できるというそれらの前駆
体の能力を保持している。
は２〜６である）、又は−〔ＯＣＨ2−（ＣＨ2 ）x 〕m
ＳＯ3 -（ｘは２又は３、ｍは１又は２である）で示さ
れる基である〕で示される。これらのスルホン化アルキ
ル及びスルホン化アルキルエーテルは、所望の溶解度特
性を示しながらも、エールリッヒ試薬のｐ−ジメチルア
ミノベンズアルデヒド又はｐ−ジエチルアミノベンズア
ルデヒドとの有色錯体を形成できるというそれらの前駆
体の能力を保持している。
【００１９】
【実施例】下記の実施例を用いて、本発明を更に説明す
る。
る。
【００２０】実施例１
２−メチル−５−（４−スルホナトブトキシ）インドー
ルの製造 （ａ）５−ヒドロキシ−２−メチルインドール ５−メトキシ−２−メチルインドール８．６ｇ（５３．
４mmol）をＣＨ2 Ｃｌ2 １１０mlに溶解した−６５℃の
溶液に、三臭化ホウ素３０．４ｇ（１１７mmol）を滴下
した。反応混合物を室温まで暖め、３０分間攪拌した。
混合物を５℃まで冷却した後、水／クロロホルム５０％
溶液２００mlを注意深く加えた。水層を分離し、水酸化
ナトリウム水溶液でpHを５．８に調整した。酢酸エチル
１００mlで混合物を２回抽出し、次いで乾燥し（Ｎａ2
ＳＯ4 ）、濾過して濃縮することによって、生成物５．
３ｇが黄色固体として得られた。融点：１２４〜１２６
℃。1 H NMR（60MHz 、20％DMSO d6/CDCl3)δ：8.05（s 、1
H、NH）、7.05（d 、J=8Hz 、1H）、6.80（d 、J=2Hz
、1H）、6.55（dd、J=2、 8Hz、1H）、5.90（幅広いs
、1H、インドールのCH）、2.40（s 、3H）。
ルの製造 （ａ）５−ヒドロキシ−２−メチルインドール ５−メトキシ−２−メチルインドール８．６ｇ（５３．
４mmol）をＣＨ2 Ｃｌ2 １１０mlに溶解した−６５℃の
溶液に、三臭化ホウ素３０．４ｇ（１１７mmol）を滴下
した。反応混合物を室温まで暖め、３０分間攪拌した。
混合物を５℃まで冷却した後、水／クロロホルム５０％
溶液２００mlを注意深く加えた。水層を分離し、水酸化
ナトリウム水溶液でpHを５．８に調整した。酢酸エチル
１００mlで混合物を２回抽出し、次いで乾燥し（Ｎａ2
ＳＯ4 ）、濾過して濃縮することによって、生成物５．
３ｇが黄色固体として得られた。融点：１２４〜１２６
℃。1 H NMR（60MHz 、20％DMSO d6/CDCl3)δ：8.05（s 、1
H、NH）、7.05（d 、J=8Hz 、1H）、6.80（d 、J=2Hz
、1H）、6.55（dd、J=2、 8Hz、1H）、5.90（幅広いs
、1H、インドールのCH）、2.40（s 、3H）。
【００２１】（ｂ）２−メチル−５−（４−スルホナト
ブトキシ）インドール ２５％水素化カリウムで洗浄したトルエン２．７２ｇ
（１６．２mmol）とＤＭＳＯ３０mlとの混合物に、５−
ヒドロキシ−２−メチルインドール２．０ｇ（１３．６
mmol）を加えた。ジブロモブタン１１．５ｇ（５４．５
mmol）をＤＭＳＯ３０mlに溶解した溶液を、１５分間に
わたって滴下した。反応混合物を３０分間攪拌し、次い
でＣＨＣｌ3 ／水５０％溶液２００mlで希釈した。水層
をＣＨＣｌ3 １００mlで更に２回抽出し、そうして有機
抽出物を併合し、Ｎａ2 ＳＯ4 で乾燥して濃縮した。残
渣を１５０ｇのシリカゲル６０によるクロマトグラフィ
ーにかけ、ＣＨＣｌ3 で溶出させて、５−（４−ブロモ
ブトキシ）−２−メチルインドール１．１ｇを白色固体
として生成させた。融点：７７〜７９℃。
ブトキシ）インドール ２５％水素化カリウムで洗浄したトルエン２．７２ｇ
（１６．２mmol）とＤＭＳＯ３０mlとの混合物に、５−
ヒドロキシ−２−メチルインドール２．０ｇ（１３．６
mmol）を加えた。ジブロモブタン１１．５ｇ（５４．５
mmol）をＤＭＳＯ３０mlに溶解した溶液を、１５分間に
わたって滴下した。反応混合物を３０分間攪拌し、次い
でＣＨＣｌ3 ／水５０％溶液２００mlで希釈した。水層
をＣＨＣｌ3 １００mlで更に２回抽出し、そうして有機
抽出物を併合し、Ｎａ2 ＳＯ4 で乾燥して濃縮した。残
渣を１５０ｇのシリカゲル６０によるクロマトグラフィ
ーにかけ、ＣＨＣｌ3 で溶出させて、５−（４−ブロモ
ブトキシ）−２−メチルインドール１．１ｇを白色固体
として生成させた。融点：７７〜７９℃。
【００２２】５−（４−ブロモブトキシ）−２−メチル
インドール５．３ｇ（１８．７mmol）、及び水５０mlに
溶解した亜硫酸ナトリウム２．６ｇ（２０．６mmol）の
混合物を一晩還流し、上清液を熱いうちに傾瀉（デカン
テーション）した。溶液が室温まで冷えた後、沈澱が観
察される時点までＮａＣｌを加えた。混合物を濾過して
白色固体を得たが、依然として多少の塩を含有していた
ので、熱エタノール７０mlにてスラリー化し、熱いうち
にスラリーを濾過した。冷却すると、ゼラチン状塊体が
エタノールから分離した。これが溶解するまで水を加
え、溶液を濃縮して薄膜（フィルム）にした。残渣を強
減圧下で結晶させて、５重量％の塩を含有する生成物
２．１ｇを得た。1 H NMR（300MHz、DMSO-d6 ）δ：7.2 （d 、J=8.5Hz 、
1H）、6.88（d 、J=2.3Hz 、1H）、6.60（dd、J=2.3 、
8.5Hz 、1H）、6.00（t 、J=1Hz 、1H）、3.89（t 、J=
6Hz 、2H）、2.5 （t 、J=7Hz 、2H）、1.75（m 、4
H）。13 C NMR （DMSO-d6 ）δ：152.59、136.11、131.31、12
9.19、111.00、102.47、99.05 、67.98 、51.32 、28.5
0 、22.15 、13.55 。
インドール５．３ｇ（１８．７mmol）、及び水５０mlに
溶解した亜硫酸ナトリウム２．６ｇ（２０．６mmol）の
混合物を一晩還流し、上清液を熱いうちに傾瀉（デカン
テーション）した。溶液が室温まで冷えた後、沈澱が観
察される時点までＮａＣｌを加えた。混合物を濾過して
白色固体を得たが、依然として多少の塩を含有していた
ので、熱エタノール７０mlにてスラリー化し、熱いうち
にスラリーを濾過した。冷却すると、ゼラチン状塊体が
エタノールから分離した。これが溶解するまで水を加
え、溶液を濃縮して薄膜（フィルム）にした。残渣を強
減圧下で結晶させて、５重量％の塩を含有する生成物
２．１ｇを得た。1 H NMR（300MHz、DMSO-d6 ）δ：7.2 （d 、J=8.5Hz 、
1H）、6.88（d 、J=2.3Hz 、1H）、6.60（dd、J=2.3 、
8.5Hz 、1H）、6.00（t 、J=1Hz 、1H）、3.89（t 、J=
6Hz 、2H）、2.5 （t 、J=7Hz 、2H）、1.75（m 、4
H）。13 C NMR （DMSO-d6 ）δ：152.59、136.11、131.31、12
9.19、111.00、102.47、99.05 、67.98 、51.32 、28.5
0 、22.15 、13.55 。
【００２３】実施例２
２−メチル−５−（２−スルホナトエチル）インドール
の製造 （ａ）塩酸４−（２−ヒドロキシエチル）フェニルヒド
ラジン ４−ニトロフェネチルアルコール５ｇ、及び無水エタノ
ール５０ml中で炭素に１０％付加したＰｄ０．５８ｇの
スラリーを、５０psi のＨ2 下で一晩振盪した。混合物
を濾過し、濃縮して、４−（２−ヒドロキシエチル）ア
ニリン３．６ｇを得た。融点：１０１〜１０２℃。
の製造 （ａ）塩酸４−（２−ヒドロキシエチル）フェニルヒド
ラジン ４−ニトロフェネチルアルコール５ｇ、及び無水エタノ
ール５０ml中で炭素に１０％付加したＰｄ０．５８ｇの
スラリーを、５０psi のＨ2 下で一晩振盪した。混合物
を濾過し、濃縮して、４−（２−ヒドロキシエチル）ア
ニリン３．６ｇを得た。融点：１０１〜１０２℃。
【００２４】このヒドロキシエチルアニリン７．０６ｇ
（５６．３mmol）、濃ＨＣｌ１６．９ml及び水１５０ml
の溶液を調製し、５℃に冷却した。水２５mlに溶解した
硝酸ナトリウム（４．０８ｇ、５９mmol）を滴下した。
１５分間攪拌した後、少量のスルファミン酸の添加によ
って過剰なＮａＮＯ3 を分解し、これをヨード澱粉紙を
用いて決定した。次いで、濃ＨＣｌ４８mlに加えた塩化
第二スズ二水和物４８ｇ（２１８mmol）の５℃の混合物
に、これを滴下した。室温まで暖め、１時間攪拌した
後、ＮａＯＨ水溶液でpHを５に調整し、そうして溶液を
濾過し、ＨＣｌ水溶液でpHを１．５まで下げた。この時
点で、混合物を濃縮し、濃縮の間定期的に濾過して、沈
澱したＮａＣｌを除去した。更に濃縮すると、ヒドラジ
ン塩酸塩３．６ｇが白色の結晶性固体として析出した。
融点：１９４〜１９５℃（分解）。1 H NMR（60MHz 、DMSO-d6 ）δ：7.1 （d 、2H、J=8Hz
）、6.9 （d 、2H、J=8Hz ）、3.70（大きく幅広いt
、12H 、水、NH及びOCH2）、2.70（t 、2H、J=8Hz）。
（５６．３mmol）、濃ＨＣｌ１６．９ml及び水１５０ml
の溶液を調製し、５℃に冷却した。水２５mlに溶解した
硝酸ナトリウム（４．０８ｇ、５９mmol）を滴下した。
１５分間攪拌した後、少量のスルファミン酸の添加によ
って過剰なＮａＮＯ3 を分解し、これをヨード澱粉紙を
用いて決定した。次いで、濃ＨＣｌ４８mlに加えた塩化
第二スズ二水和物４８ｇ（２１８mmol）の５℃の混合物
に、これを滴下した。室温まで暖め、１時間攪拌した
後、ＮａＯＨ水溶液でpHを５に調整し、そうして溶液を
濾過し、ＨＣｌ水溶液でpHを１．５まで下げた。この時
点で、混合物を濃縮し、濃縮の間定期的に濾過して、沈
澱したＮａＣｌを除去した。更に濃縮すると、ヒドラジ
ン塩酸塩３．６ｇが白色の結晶性固体として析出した。
融点：１９４〜１９５℃（分解）。1 H NMR（60MHz 、DMSO-d6 ）δ：7.1 （d 、2H、J=8Hz
）、6.9 （d 、2H、J=8Hz ）、3.70（大きく幅広いt
、12H 、水、NH及びOCH2）、2.70（t 、2H、J=8Hz）。
【００２５】（ｂ）５−ヒドロキシエチル−２−メチル
インドール 塩酸４−（２−ヒドロキシエチル）フェニルヒドラジン
３．３５ｇ、２，２−ジメトキシプロパン２．５ｇ、ア
セトン５ml及びアセトニトリル２mlの混合物を調製し、
室温で２時間攪拌した。濾過によって、ヒドラゾン３．
３ｇが白色固体として生成した。融点：１２２〜１２４
℃。それ以上精製することなく、ヒドラゾン２ｇを濃Ｈ
Ｃｌ５０ml中で２時間還流した。混合物を１０mlの体積
にまで濃縮し、次いでＮａＨＣＯ3 水溶液で中和した。
混合物をＥｔＯＡｃ１００mlで抽出し、乾燥し（Ｎａ2
ＳＯ4 ）、濾取して、蒸発させた。残渣を、１００％の
シリカゲル６０でのクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ3
ＯＨ／ＣＨＣｌ3 ５％溶液で溶出した。適切な画分の蒸
発によって、生成物１．３ｇが淡黄色の油として生成し
た。1 H NMR（60MHz 、CDCl3 ）δ：8.2 （幅広いs 、1H、N
H）、7.3 〜6.6 （m 、3H、芳香環のCH）、6.1 （幅広
いs 、1H、インドール環のCH）、3.8 （t 、J=8Hz、2
H、CH2 ）、2.9 （t 、J=8Hz 、2H、CH2 ）、2.3 （s
、3H、CH3 ）。
インドール 塩酸４−（２−ヒドロキシエチル）フェニルヒドラジン
３．３５ｇ、２，２−ジメトキシプロパン２．５ｇ、ア
セトン５ml及びアセトニトリル２mlの混合物を調製し、
室温で２時間攪拌した。濾過によって、ヒドラゾン３．
３ｇが白色固体として生成した。融点：１２２〜１２４
℃。それ以上精製することなく、ヒドラゾン２ｇを濃Ｈ
Ｃｌ５０ml中で２時間還流した。混合物を１０mlの体積
にまで濃縮し、次いでＮａＨＣＯ3 水溶液で中和した。
混合物をＥｔＯＡｃ１００mlで抽出し、乾燥し（Ｎａ2
ＳＯ4 ）、濾取して、蒸発させた。残渣を、１００％の
シリカゲル６０でのクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ3
ＯＨ／ＣＨＣｌ3 ５％溶液で溶出した。適切な画分の蒸
発によって、生成物１．３ｇが淡黄色の油として生成し
た。1 H NMR（60MHz 、CDCl3 ）δ：8.2 （幅広いs 、1H、N
H）、7.3 〜6.6 （m 、3H、芳香環のCH）、6.1 （幅広
いs 、1H、インドール環のCH）、3.8 （t 、J=8Hz、2
H、CH2 ）、2.9 （t 、J=8Hz 、2H、CH2 ）、2.3 （s
、3H、CH3 ）。
【００２６】（ｃ）２−メチル−５−（２−スルホナト
エチル）インドール ヒドロキシエチルインドール０．４８ｇ（２．７５mmo
l）、ＰＢｒ3 ０．３７ｇ（１．３mmol）、及びＣＨ2
Ｃｌ2 １０mlに溶解したピリジン０．０７５mlの混合物
を、室温で６時間攪拌した。反応混合物をＣＨ2 Ｃｌ2
５０mlで希釈し、重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。
混合物を乾燥し（Ｎａ2 ＳＯ4 ）、濾過して濃縮した。
１００ｇのシリカゲル６０での残渣のクロマトグラフィ
ーによって、５−（２−ブロモエチル）−２−メチルイ
ンドール０．２ｇが白色固体として生成した。融点：１
００〜１０２℃。これを、Ｎａ2 ＳＯ3 ０．１３ｇ
（１．０３mmol）及び３：１の水−ＤＭＦ１．４mlの混
合物に加えた。１００℃で７時間の加熱後、混合物を濃
縮乾固し、水５mlを加えた。混合物をＣＨＣｌ3 で１回
抽出し、水層を約２mlの体積にまで濃縮した。少量のＮ
ａＣｌの添加によって生成物を塩析した後、５−スルホ
ナトエチルインドール０．０５ｇが白色固体として得ら
れた。1 H NMR（300MHz、DMSO-d6 ）δ：10.8（幅広いs 、1H、
NH）、7.16（s 、1H、芳香族のH ）、7.14（d 、J=8Hz
、芳香族のH ）、6.8 （dd、J=1.5 、8Hz 、1H、芳香
族のH ）、6.01（s 、1H、インドールのCH）、2.89（m
、2H、-O3SCH2 ）、2.66（m 、2H、ベンジルのCH
2 ）、2.35（s 、3H、CH3 ）。13 C NMR （DMSO-d6 ）δ：135.48、134.65、130.95、12
8.87、120.48、117.85、110.30、98.70 、54.19 、31.7
0 、13.40 。
エチル）インドール ヒドロキシエチルインドール０．４８ｇ（２．７５mmo
l）、ＰＢｒ3 ０．３７ｇ（１．３mmol）、及びＣＨ2
Ｃｌ2 １０mlに溶解したピリジン０．０７５mlの混合物
を、室温で６時間攪拌した。反応混合物をＣＨ2 Ｃｌ2
５０mlで希釈し、重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。
混合物を乾燥し（Ｎａ2 ＳＯ4 ）、濾過して濃縮した。
１００ｇのシリカゲル６０での残渣のクロマトグラフィ
ーによって、５−（２−ブロモエチル）−２−メチルイ
ンドール０．２ｇが白色固体として生成した。融点：１
００〜１０２℃。これを、Ｎａ2 ＳＯ3 ０．１３ｇ
（１．０３mmol）及び３：１の水−ＤＭＦ１．４mlの混
合物に加えた。１００℃で７時間の加熱後、混合物を濃
縮乾固し、水５mlを加えた。混合物をＣＨＣｌ3 で１回
抽出し、水層を約２mlの体積にまで濃縮した。少量のＮ
ａＣｌの添加によって生成物を塩析した後、５−スルホ
ナトエチルインドール０．０５ｇが白色固体として得ら
れた。1 H NMR（300MHz、DMSO-d6 ）δ：10.8（幅広いs 、1H、
NH）、7.16（s 、1H、芳香族のH ）、7.14（d 、J=8Hz
、芳香族のH ）、6.8 （dd、J=1.5 、8Hz 、1H、芳香
族のH ）、6.01（s 、1H、インドールのCH）、2.89（m
、2H、-O3SCH2 ）、2.66（m 、2H、ベンジルのCH
2 ）、2.35（s 、3H、CH3 ）。13 C NMR （DMSO-d6 ）δ：135.48、134.65、130.95、12
8.87、120.48、117.85、110.30、98.70 、54.19 、31.7
0 、13.40 。
【００２７】実施例３
２−メチル−５−（４−スルホナトブトキシ）インドー
ルのナトリウム塩２５ｇを水１L に溶解した溶液を調製
し、１５cm×８cmの濾紙のウェブを飽和させた。濾紙を
１００℃で６分間空気乾燥させた。この濾紙の約１．０
cm×約１．０cm（２／５インチ×２／５インチ）の部分
を蒸留水に浸漬し、２分間振盪した。この溶液を更に２
８分間放置し、その後、濾紙を除去した。「浸漬して読
み取る」試薬片〔Multistix （商品名）１０ＳＧ〕を溶
液に浸漬し、飽和後直ちに取り出し、６０秒後に読み取
った。試薬片のウロビリノーゲンパッドは変色し、これ
を更に２５秒後に肉眼及びClinitek（商品名）２００＋
という反射率分光光度計によって読み取った。インドー
ル試験の対照は、Multistix のウロビリノーゲンパッド
が１mg/dL(１エールリッヒ単位/dL)の読みを示すなら
ば、充分であると思われた。Clinitek２００＋により下
記のアルゴリズムを用いて解読結果(decodes)を算出し
た： 解読結果＝（５５０nmでの反射率／６３０nmでの反射
率）×１０００
ルのナトリウム塩２５ｇを水１L に溶解した溶液を調製
し、１５cm×８cmの濾紙のウェブを飽和させた。濾紙を
１００℃で６分間空気乾燥させた。この濾紙の約１．０
cm×約１．０cm（２／５インチ×２／５インチ）の部分
を蒸留水に浸漬し、２分間振盪した。この溶液を更に２
８分間放置し、その後、濾紙を除去した。「浸漬して読
み取る」試薬片〔Multistix （商品名）１０ＳＧ〕を溶
液に浸漬し、飽和後直ちに取り出し、６０秒後に読み取
った。試薬片のウロビリノーゲンパッドは変色し、これ
を更に２５秒後に肉眼及びClinitek（商品名）２００＋
という反射率分光光度計によって読み取った。インドー
ル試験の対照は、Multistix のウロビリノーゲンパッド
が１mg/dL(１エールリッヒ単位/dL)の読みを示すなら
ば、充分であると思われた。Clinitek２００＋により下
記のアルゴリズムを用いて解読結果(decodes)を算出し
た： 解読結果＝（５５０nmでの反射率／６３０nmでの反射
率）×１０００
【００２８】最初の解読結果の値と６時間後のそれとの
間の相関関係は、再構成された対照溶液はこの期間にわ
たって安定的であることを示した。
間の相関関係は、再構成された対照溶液はこの期間にわ
たって安定的であることを示した。
【００２９】表１を参照すると、mg/dL の欄は、観測さ
れた解読結果の値に対応するウロビリノーゲンの濃度を
表す。ウロビリノーゲンのそれぞれの濃度についての解
読結果の範囲は、標準分析法を用いて機器により評価し
た人為的研究及び臨床的研究を通じて判定した。
れた解読結果の値に対応するウロビリノーゲンの濃度を
表す。ウロビリノーゲンのそれぞれの濃度についての解
読結果の範囲は、標準分析法を用いて機器により評価し
た人為的研究及び臨床的研究を通じて判定した。
【００３０】
【表１】
【００３１】上記のデータから、本発明の方法は、水中
に置いたときに、固有のウロビリノーゲン濃度に対応す
る反射率の読みを与えるインドール溶液を提供する対照
用試験片を作成するのに用い得ると判定できる。
に置いたときに、固有のウロビリノーゲン濃度に対応す
る反射率の読みを与えるインドール溶液を提供する対照
用試験片を作成するのに用い得ると判定できる。
【００３２】本発明のインドールは、水に非常に溶け易
く、濾紙を含浸するのに充分な高濃度で溶解することが
でき、そして水中で再構成されて、ウロビリノーゲン試
薬片に対する陽性対照を与えることができる。試験片に
おいてエールリッヒ試薬と反応したその他のインドール
は、水に充分溶解し得ないか〔例えば２，５−ジメチル
インドール、５−メトキシ−２−メチルインドール、イ
ンドール−２−カルボン酸、インドール−３−酢酸及び
５−メトキシインドール−３−酢酸〕、機器で読み取る
には反応が遅過ぎるか〔例えば１−（４−スルホブチ
ル）−２−メチルインドール〕、または対照溶液中の他
の分析対象物の反応に干渉されるか〔例えばトルエンに
含浸した２−メチルインドール〕のいずれかであった。
く、濾紙を含浸するのに充分な高濃度で溶解することが
でき、そして水中で再構成されて、ウロビリノーゲン試
薬片に対する陽性対照を与えることができる。試験片に
おいてエールリッヒ試薬と反応したその他のインドール
は、水に充分溶解し得ないか〔例えば２，５−ジメチル
インドール、５−メトキシ−２−メチルインドール、イ
ンドール−２−カルボン酸、インドール−３−酢酸及び
５−メトキシインドール−３−酢酸〕、機器で読み取る
には反応が遅過ぎるか〔例えば１−（４−スルホブチ
ル）−２−メチルインドール〕、または対照溶液中の他
の分析対象物の反応に干渉されるか〔例えばトルエンに
含浸した２−メチルインドール〕のいずれかであった。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(56)参考文献 特開 昭58−26267（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
G01N 33/50
G01N 33/52
Claims (10)
- 【請求項１】 ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド又
はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒドを含有する試薬
に対する対照試験の方法において、（ａ）該試薬を、一
般式（Ｉ）： 【化１】 〔式中、Ｒは、ｎが２〜６である、−（ＣＨ2 ）n ＳＯ
3 -、又はｘが２若しくは３であってｍが１若しくは２で
ある、−〔ＯＣＨ2 −（ＣＨ2 ）x 〕m ＳＯ3 -で示され
る基である〕で示されるインドールの水性溶液といっし
ょにする工程、及び（ｂ）該水性溶液における色の形成
を測定する工程を含むことを特徴とする方法。 - 【請求項２】 Ｒが−（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 -であり、ｎが
２〜４である、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 ｎが４である、請求項２記載の方法。
- 【請求項４】 インドールが、適当量の該インドールを
担持するマトリックス物質の小片の形態で与えられ、そ
して水性媒体中に置かれて、溶解によって水性溶液を与
える、請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 マトリックスが濾紙である、請求項４記
載の方法。 - 【請求項６】 ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド又
はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒドを含有する組成
物の効力を試験するための試験片であって、一般式
（Ｉ）： 【化２】 〔式中、Ｒは、ｎが２〜６である、−（ＣＨ2 ）n ＳＯ
3 -、又はｘが２若しくは３であってｍが１若しくは２で
ある、−〔ＯＣＨ2 −（ＣＨ2 ）x 〕m ＳＯ3 -で示され
る基である〕で示されるインドールを含有する担体マト
リックスからなることを特徴とする試験片。 - 【請求項７】 ｎが２〜４である、請求項６記載の試験
片。 - 【請求項８】 ｎが４である、請求項７記載の試験片。
- 【請求項９】 担体マトリックスが吸湿性物質で構成さ
れる、請求項６記載の試験片。 - 【請求項１０】 吸湿性物質が濾紙である、請求項９記
載の試験片。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US7244193A | 1993-06-07 | 1993-06-07 | |
| US072441 | 1993-06-07 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0712810A JPH0712810A (ja) | 1995-01-17 |
| JP3426030B2 true JP3426030B2 (ja) | 2003-07-14 |
Family
ID=22107594
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12370094A Expired - Fee Related JP3426030B2 (ja) | 1993-06-07 | 1994-06-06 | ウロビリノーゲン試験具を有効化する方法及び試験具 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5468641A (ja) |
| EP (1) | EP0628821A3 (ja) |
| JP (1) | JP3426030B2 (ja) |
| KR (1) | KR100289853B1 (ja) |
| AU (1) | AU670371B2 (ja) |
| CA (1) | CA2114764A1 (ja) |
| TW (1) | TW290641B (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5076876A (en) * | 1989-06-21 | 1991-12-31 | Diemat, Inc. | Method of attaching an electronic device to a substrate |
| US5866424A (en) * | 1995-07-10 | 1999-02-02 | Bayer Corporation | Stable liquid urobilinogen control composition |
| KR100498590B1 (ko) * | 1998-06-30 | 2005-09-30 | 주식회사 하이닉스반도체 | 반도체 소자의 소자분리막 형성 방법 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4405718A (en) * | 1981-07-20 | 1983-09-20 | Miles Laboratories, Inc. | Method and composition for urobilinogen control standard |
-
1994
- 1994-01-31 TW TW083100775A patent/TW290641B/zh active
- 1994-02-02 CA CA002114764A patent/CA2114764A1/en not_active Abandoned
- 1994-05-03 US US08/238,003 patent/US5468641A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-25 EP EP94108036A patent/EP0628821A3/en not_active Withdrawn
- 1994-06-03 KR KR1019940012496A patent/KR100289853B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-06-03 AU AU64529/94A patent/AU670371B2/en not_active Ceased
- 1994-06-06 JP JP12370094A patent/JP3426030B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU670371B2 (en) | 1996-07-11 |
| TW290641B (ja) | 1996-11-11 |
| EP0628821A3 (en) | 1995-09-20 |
| US5468641A (en) | 1995-11-21 |
| EP0628821A2 (en) | 1994-12-14 |
| CA2114764A1 (en) | 1994-12-08 |
| AU6452994A (en) | 1994-12-08 |
| KR950001304A (ko) | 1995-01-03 |
| KR100289853B1 (ko) | 2001-05-15 |
| JPH0712810A (ja) | 1995-01-17 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |