JP3424255B2 - Method for producing packing material for liquid chromatography - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【産業上の利用分野】本発明は、液体クロマトグラフィ
ー用充填剤の製造方法に関し、特に、ゲル浸透クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィー等の各種ク
ロマトグラフィーに適した充填剤基材として高度に親水
化された多孔質有機重合体粒子の製造方法に関するもの
である。 【０００２】 【従来の技術】液体クロマトグラフィーは、各種物質の
分離、分析に極めて有効な手段である。その液体クロマ
トグラフィー用充填剤は、その用途に応じて種々のもの
が提案されてきた。例えば、タンパク質等の分離にはデ
キストランゲル、アガロースゲル等の天然多糖類系の架
橋ゲルがある。 【０００３】一方、高速分析用充填剤として、多孔性シ
リカゲルのシラン処理により得られる無機系充填剤があ
る。これら天然多糖類系の架橋ゲルは軟質であり、充填
剤として液体クロマトグラフィーに使用した場合耐圧性
が劣るため、高速通液が不可能である。また、多孔質シ
リカゲル等の無機系担体は酸、およびアルカリで溶解す
るため、これを使用した無機径充填剤は使用する溶離液
のｐＨが３〜８に限定されるという問題点がある。 【０００４】これらの天然多糖類系の架橋ゲル及び無機
系充填剤の問題点を改善した充填剤として、有機重合体
粒子からなる充填剤がある。中でも、特にタンパク質分
離等の液体クロマトグラフィーを高速かつ、タンパク質
の非特異的吸着なく実施することを目的とした充填剤が
提案されている（特開平３−７３８４８号公報、特開平
３−１７９２５８号公報、特開平３−１７９２５９号公
報）。これらは、重合開始剤を含浸させた疎水性重合体
粒子を分散させた分散液に、例えば加水分解により水酸
基を生成し得る官能基を有する単量体を添加して溶解
し、粒子表面で該単量体を重合したのち、加水分解して
粒子表面に水酸基を有する被覆重合体粒子を得る方法に
関するものである。 【０００５】一方、特開平４−３１７７４０号公報に
は、分散重合で得られた重合体粒子を種粒子とし、主と
して加水分解により水酸基を生成し得る官能基を有する
単量体であるグリシジルメタクリレートを含浸させ重合
させるシード重合により得られた液体クロマトグラフィ
ー用充填剤が記載されている。疎水性重合体粒子の表面
部分が、水酸基を有する重合体で被覆された液体クロマ
トグラフィー用充填剤は、骨格が疎水性であるために、
水性溶離液中での膨潤収縮が少なく、高速処理性に優れ
ているが、細孔を含む粒子表面部分を完全に親水化する
ことが困難であり、タンパク質回収率が不十分である問
題点や、分析試料に混在する低分子の疎水性物質による
汚染の問題がある。また、その製造方法は、粒子を分散
させた分散液に、単量体を添加して溶解させ重合させる
方法であり、単量体が水溶性でない場合は、溶解させる
ために、メタノール等の有機溶媒を多量に添加するため
に、単量体の分散液中濃度が非常に低く重合反応が進行
しにくく、また再現性も低い。更に、疎水性重合体粒子
の調製に引き続いて単量体を反応させる方法（連続法）
についても、同様の問題があり、また、有機溶媒添加に
よる未反応疎水性単量体の溶出や、粒子表面のみならず
分散液中で重合が進行するために、分散液中で生成した
重合体が粒子の凝集や融着を引き起こす問題点がある。 【０００６】また、分散重合で得られた重合体粒子を種
粒子とし、主として加水分解により水酸基を生成し得る
官能基を有する単量体であるグリシジルメタクリレート
を含浸させ重合させるシード重合により得られた液体ク
ロマトグラフィー用充填剤は、粒子径の均一性が高く、
優れた分離特性が得られるが、親水性が未だ低く、十分
なタンパク質の回収率が得られない。 【０００７】 【発明が解決しようとする課題】本発明は、この問題点
を解決した分離剤を提供することを目的とし、同時に該
分離剤を従来に無く簡便に製造できる方法を提供するこ
とを目的とする。 【０００８】 【課題を解決するための手段】即ち、本発明は、有機重
合体粒子に、親水性ビニル単量体および／または親水基
を生成し得る官能基を有するビニル単量体を３０〜９０
重量％と架橋性ポリビニル単量体を１０〜７０重量％含
むビニル単量体混合物、ラジカル重合開始剤並びに多孔
質化溶媒を含浸後、該粒子を水性媒体に懸濁し、該懸濁
液を重合温度に昇温後、重合反応の継続中に親水性ビニ
ル単量体および／または親水基を生成し得る官能基を有
するビニル単量体を該懸濁液に添加することを特徴とす
る液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法に関する
ものである。 【０００９】本発明の分離用樹脂の製造方法は、粒子径
分布が狭い種粒子を用いるシード重合法により製造する
ものである。該シード重合で用いられる有機重合体粒子
（種粒子）は乳化重合、ソープフリー乳化重合、分散重
合、懸濁重合等の一般に良く知られた造球重合により製
造できる。中でも、乳化重合、ソープフリー乳化重合、
分散重合等で得られる重合体粒子は懸濁重合により製造
されたものに比較しその粒子径分布が狭く好ましい。特
に、分散重合で得られた重合体粒子は、乳化重合で得ら
れた粒子よりも粒子径が大きく、シード重合に用いる重
合体粒子として好ましい。 【００１０】種粒子の組成としては、芳香族モノビニル
単量体および／または脂肪族モノビニル単量体からなる
重合体が好適である。これらは単独重合体もしくは２種
以上の単量体の共重合体の何れでも良く、１重量％以下
の架橋性ポリビニル単量体との共重合体であっても良
い。代表的には、ポリスチレンもしくはポリグリシジル
メタクリレート等のポリメタクリル酸エステルからなる
粒子が好ましい。種粒子の大きさは０．１〜１００μｍ
の範囲で、目的に応じ任意に選ぶことができる。 【００１１】本発明において、有機重合体粒子からなる
種粒子に親水性ビニル単量体および／または親水基を生
成し得る官能基を有するビニル単量体および架橋性ポリ
ビニル単量体を含むビニル単量体混合物を含浸させる。
この場合、親水性ビニル単量体および／または親水基を
生成し得る官能基を有するビニル単量体はモノビニル単
量体を示す。 【００１２】この親水性ビニル単量体としては、（メ
タ）アクリル酸、イタコン酸、マレイン酸等の不飽和カ
ルボン酸類；ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、
ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、ジエチレン
グリコール（メタ）アクリレート、トリエチレングリコ
ール（メタ）アクリレート、テトラエチレングリコール
（メタ）アクリレート、２，３−ジヒドロキシプロピル
（メタ）アクリレート、ジメチルアミノエチル（メタ）
アクリレート、ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレ
ート、テトラヒドロフルフリル（メタ）アクリレート等
のヒドロキシル基、アミノ基等の親水性基を有する（メ
タ）アクリル酸エステル類；（メタ）アクリルアミド、
Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプ
ロピルアクリルアミド等の（メタ）アクリルアミド誘導
体；メチルビニルエーテル、エチルビニルエーテル等の
ビニルエーテル類；アリルアルコール、ビニルピロリド
ン等が挙げられるが、親水性ビニル単量体であれば特に
限定されない。これらの親水性ビニル単量体は単独でも
二種類以上の混合でも用いることが出来る。 【００１３】また、親水基を生成し得る官能基を有する
ビニル単量体としては、メチルアクリレート、エチルア
クリレート等のアクリル酸アルキルエステル、３−クロ
ロ−２−ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、２
−クロロエチル（メタ）アクリレート、グリシジル（メ
タ）アクリレート等の（メタ）アクリル酸エステル類；
Ｎ−ブチル（メタ）アクリルアミド等の（メタ）アクリ
ルアミド誘導体；酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル等の
ビニルエステル類；アリルアルコールのエステルまたは
エーテル類；（メタ）アクリロニトリル等、その他のビ
ニル化合物；等が挙げられ、これらのビニル単量体は単
独でも二種類以上の混合においても用いることが出来る
が、その中でも加水分解により水酸基を生成し得る官能
基を有するビニル単量体が好ましい。 【００１４】これら親水性ビニル単量体および／または
親水基を生成し得る官能基を有するビニル単量体の使用
量としては３０〜９０重量％の範囲である。また、架橋
性ポリビニル単量体としては、芳香族ポリビニル単量
体、脂肪族ポリビニル単量体が好適であり、芳香族ポリ
ビニル単量体としては、ジビニルベンゼンが、また、脂
肪族ポリビニル単量体としては多価アルコールのポリ
（メタ）アクリレートやアルキレンポリ（メタ）アクリ
ルアミドが好ましい。その一例として、グリセロールト
リ（メタ）アクリレート、アリルアシレート、トリメチ
ロールプロパントリ（メタ）アクリレート、テトラヒド
ロキシブタンジ（メタ）アクリレート、１，４−シクロ
ヘキサンジオールジ（メタ）アクリレート、メチレンビ
スアクリルアミド等が挙げられるが、グリセロールジ
（メタ）アクリレート、ペンタエリスリトールジ（メ
タ）アクリレート、エチレングリコールジ（メタ）アク
リレート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレ
ート等の親水性架橋性ポリビニル単量体を使用してもよ
い。これらビニル単量体の量は使用する種粒子の大きさ
と目的とする粒子の大きさを考慮して適宜決定される。 【００１５】種粒子に含浸させるビニル単量体混合物中
の架橋性ポリビニル単量体の量は１０〜７０重量％であ
り、好ましくは２０重量％から５０重量％である。種粒
子に含浸させる多孔質化溶媒としては、シード重合時に
相分離剤として作用し、粒子の多孔質化を促進する有機
溶媒である脂肪族あるいは芳香族炭化水素類、エステル
類、ケトン類、アルコール類、エーテル類が挙げられ
る。このような有機溶媒としては、例えばトルエン、キ
シレン、シクロヘキサン、オクタン、イソオクタン、酢
酸ブチル、フタル酸ジメチル、メチルエチルケトン、メ
チルイソブチルケトン、ジブチルエーテル、１−ヘキサ
ノール、２−オクタノール、デカノール、ラウリルアル
コール、シクロヘキサノール等が挙げられ、これらは単
独もしくは混合して使用する。 【００１６】ラジカル重合開始剤としては過酸化ベンゾ
イル、ブチルパーオキシヘキサノエート等の過酸化物系
開始剤、アゾビスイソブチロニトリル、アゾビスイソバ
レロニトリル等のアゾ系開始剤が好ましい。これら重合
開始剤は、ビニル単量体混合物或いは多孔質化溶媒に溶
解し、ビニル単量体混合物の含浸と同時に、またはその
前後で種粒子に含浸される。 【００１７】また、ビニル単量体混合物、多孔質化溶
媒、ラジカル重合開始剤等を種粒子に含浸させる際に、
場合により種粒子に対して親和性が高い溶媒で希釈し含
浸させることも好ましく、必要に応じて重合開始剤をこ
の溶媒に溶解し添加することもできる。このような溶媒
としては、アルコール、アセトン、テトラヒドロフラ
ン、ジオキサン等の水混和性低沸点溶媒やジクロロエタ
ン、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素等が挙げられ
る。これらはビニル単量体混合物等の含浸を促進する溶
媒として機能するが、重合温度に昇温してシード重合を
開始する前に減圧留去することが好ましい。 【００１８】本発明では有機重合体粒子からなる種粒子
に親水性ビニル単量体および／または親水基を生成し得
る官能基を有するビニル単量体および架橋性ポリビニル
単量体を含むビニル単量体混合物、ラジカル重合開始剤
並びに多孔質化溶媒を含浸後、該粒子を水性媒体に懸濁
し、該懸濁液を重合温度に昇温することによって行う所
謂シード重合を利用するものである。 【００１９】また、ビニル単量体、多孔質化溶媒、重合
開始剤等が含浸され肥大化した種粒子が、シード重合中
に凝集、変形、融着することを防止し、その分散安定性
を増す為に、該粒子を懸濁分散させている水性媒体中に
分散安定剤を添加する。該分散安定剤としては公知のア
ニオン系、ノニオン系の界面活性剤、およびポリビニル
ピロリドン、ポリエチレンイミン、ビニルアルコール−
酢酸ビニルコポリマー等の合成高分子が好適であり、特
にビニルアルコール−酢酸ビニルコポリマーが好まし
い。中でも、その重合度が５００前後である比較的低分
子量のビニルアルコール−酢酸ビニルコポリマーが特に
好ましい。 【００２０】本発明において、シード重合開始後、重合
反応継続中に添加される親水性ビニル単量体および親水
基を生成し得る官能基を有するビニル単量体としては、
前記種粒子に含浸されるビニル単量体と同じものが挙げ
られる。また、親水性基を生成し得る官能基を有するビ
ニル単量体としては、アミノ基、４級アンモニウム基、
カルボキシル基、スルホン酸基等のイオン性親水性基を
導入できる官能基を有するビニル単量体も好ましい。更
に親水基を生成し得る官能基を有するビニル単量体は懸
濁液の水性媒体と完全に混和しなくても良い。特に、該
ビニル単量体が水性媒体よりも多孔質化溶媒の方に分配
し易い場合は、細孔形成部分に添加した該ビニル単量体
が濃縮され、細孔表面が効率よく修飾されるため好まし
い。 【００２１】また、上記親水性ビニル単量体と親水基を
生成し得る官能基を有するビニル単量体の両者を添加す
ることは、シード重合粒子の外表面と粒子内細孔表面の
両者が同時に修飾されるため好ましい。また、添加され
る親水性ビニル単量体および／又は親水基を生成し得る
官能基を有するビニル単量体の一部にグリセロールジ
（メタ）アクリレート、ペンタエリスリトールジ（メ
タ）アクリレート、エチレングリコールジ（メタ）アク
リレート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレ
ート等の親水性であり、かつ架橋性のポリビニル単量体
を使用することも可能である。該架橋性ポリビニル単量
体の使用量は、水性媒体に添加するビニル単量体の１０
重量％以下であることが好ましい。 【００２２】添加される親水性ビニル単量体および／又
は親水基を生成し得る官能基を有するビニル単量体の添
加量は、シード重合に先立ち予め含浸させるビニル単量
体に対し１〜３０重量％が好ましく、更に好ましくは２
〜２０重量％である。これら添加されるビニル単量体の
水性媒体への添加時期は、所定の重合温度に昇温し、シ
ード重合を開始した後、０．５〜１２時間の間、好まし
くは１〜６時間の間に、一括もしくは分割して添加す
る。分割して添加する場合は、例えば１０〜６０分毎に
添加する方法が好ましい。ビニル単量体は、そのまま添
加するか、もしくは溶媒で希釈または溶解して添加す
る。シード重合の重合温度は使用する重合開始剤の種類
にもよるが、５０℃〜８０℃が好ましい。シード重合の
重合時間は、重合開始剤の半減期前後またはそれ以上が
好ましく、例えば、３時間〜４８時間が好ましい。 【００２３】これらビニル単量体を添加するに際し、重
合開始剤、特に過硫酸カリウム等の水溶性開始剤を同時
に添加することも好ましい。シード重合開始後に水性媒
体に対し重合開始剤を添加しない場合には、亜硝酸ナト
リウム等の水中重合禁止剤を添加することが好ましい。
このように本発明においては公知の一般的なシード重合
方法を用いて製造されるが、種粒子として乳化重合法ま
たはソープフリー乳化重合法で製造された０．１〜１．
５μｍの重合体粒子使用する場合には、まず膨潤助剤に
よる一次膨潤の後、シード重合することにより１００μ
ｍ程度までの粒子径が均一な多孔質粒子が製造できる方
法（Ｊ．Ｕｇｅｌｓｔａｄら、Ｍａｋｒｏｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒｅＣｈｅｍｉｅ、第８０巻、７３７頁、１９７９
年）が好適に用いられる。 【００２４】また、分散重合により製造された１〜１０
μｍの重合体粒子を種粒子とする場合には、例えば特開
昭６４−２６６１７号公報等に記載されたシード重合方
法が利用できる。本発明においては、重合完結後、種粒
子として用いた有機重合体粒子の良溶媒を用いて洗浄す
ることにより、種粒子由来の重合体の一部または全部を
除去することによっても、所望の多孔度の樹脂が得られ
る。 【００２５】また、本発明において、親水基を生成し得
る官能基を有するビニル単量体を使用した場合は、重合
後親水基を生成し得る官能基を加水分解等による親水性
基の生成或いはアミノ基、４級アンモニウム基、カルボ
キシル基、スルホン酸基等のイオン性親水性基の導入工
程が必要である。例えば、加水分解により水酸基を生成
し得る基を有する単量体を使用した場合は、酸又はアル
カリ等の水溶液中、必要に応じて水混和性の有機溶媒の
存在下加水分解を行うか又はグリセリン等のジオール以
上のポリオールと反応させることにより加水分解を行
う。また、アルカノールアミン等を反応させれば、加水
分解による水酸基が生成する他、アミノ基等のイオン性
親水性基も付与される。 【００２６】本発明方法で得られる多孔性重合体粒子の
ＢＥＴ法で測定した乾燥状態での好ましい細孔物性とし
ては、平均細孔半径として、１０〜２０００オングスト
ローム、好ましくは７５〜１５００オングストロームで
あり、細孔容積として０．２〜１．８ｍｌ／ｇ、好まし
くは０．４〜１．２ｍｌ／ｇであり、細孔表面積として
１〜１０００ｍ²／ｇ、好ましくは５〜５００ｍ²／ｇで
ある。特に、タンパク質の分離では、平均細孔半径が７
５オングストローム以下では、タンパク質が細孔内部ま
で拡散しなくなり、吸着量が低下して好ましくない。 【００２７】本発明方法では、シード重合途中で添加し
たビニル単量体により、粒子外表面および／または細孔
表面が修飾されたことは、簡便には重量の増加や明らか
な物性の変化により検証できるが、更に分析的には元素
分析や赤外吸収スペクトルの測定により確認できる。ま
た、実用的には液体クロマトグラフィーにより、血清ア
ルブミンの回収率を得られたクロマトグラムのピーク面
積より算出することによっても確認できる。該方法によ
り定量した本発明の液体クロマトグラフィー用充填剤の
血清アルブミン回収率は５０％以上であり、好ましくは
７５％以上である。 【００２８】又、本発明で製造される充填剤に更にアミ
ノ基、アンモニウム基、カルボキシル基ネスルホン酸基
等のイオン性親水性基を導入すれば、更に好ましいタン
パク質吸脱着用の樹脂等にも使用できる。 【００２９】 【実施例】以下、本発明を実施例により説明するが、本
発明はこれら実施例により何ら限定されるものではな
い。 実施例１ 攪拌器、コンデンサー、温度計及び窒素ガス導入管を備
えた反応器中にエタノール１３５．２重量部を入れ、ポ
リビニルピロリドン（平均分子量４０，０００）３．６
重量部を添加し溶解させた。この溶液にグリシジルメタ
クリレート６０重量部、２，２−アゾビスイソブチロニ
トリル０．６重量部及びビス（ジエチルチオカルバモイ
ル）ジスルフィド０．６重量部を添加し、窒素雰囲気下
にて７０℃に加熱して３時間重合を行った。放冷後、メ
タノール洗浄を行い単離した球状重合体粒子はその平均
粒子径が１．６３μｍであった。 【００３０】上記の球状重合体粒子（種粒子）５重量部
にドデシル硫酸ナトリウム０．０２重量部とイオン交換
水４５重量部を加えて種粒子の水性分散液を調製した。
グリシジルメタクリレート４４．９４重量部、エチレン
グリコールジメタクリレート１８．９０重量部、１，２
−ジクロロエタン４２．５３重量部、トルエン４８．９
４重量部、２，２’−アゾビスイソブチロニトリル０．
６０重量部、ドデシル硫酸ナトリウム１．１３重量部及
びイオン交換水４５０重量部から成る重合性ビニル単量
体混合物の微分散液を前記種粒子の水性分散液に攪拌
下、室温にて添加し１６時間保持することにより油滴を
種粒子に吸収させた。 【００３１】次いでこれに１．１１重量％ポリビニルア
ルコール水溶液４０５重量部を添加し、７０℃に昇温
後、１時間経過した時点でグリシジルメタクリレート１
２．８４重量部を３０分間で滴下し、更に６．５時間、
重合を行うことにより重合体粒子を得た。この重合体粒
子を単離後、３２５ｍｌのアセトンを加え６０℃にて４
時間抽出操作を行い、種粒子由来の重合体を除去した
後、乾燥することにより重合体粒子粉末６９．５５重量
部を得た。 【００３２】得られた重合体粒子の平均粒子径は４．８
１μｍであった。また、水銀ポロシメーターにより測定
した細孔容積は０．５０ｍｌ／ｇ、最頻度半径は２５４
オングストロームであり、ＢＥＴ法にて測定した比表面
積は３５．３ｍ² ／ｇであった。この重合体粒子３０重
量部に１０重量％硫酸水溶液３００重量部を加え、５０
℃にて５時間加熱することによりグリシジルメタクリレ
ート由来のエポキシ基の加水分解を行った。反応終了
後、粒子をイオン交換水にて充分に洗浄し、単離後乾燥
することにより粒子粉末を得た。 【００３３】この重合体粒子の水酸基量をアセチル化法
により求めたところ、９．６ｍｅｑ／ｇであった。 応用例１ 実施例１にて得られた水酸基を有する重合体粒子２０重
量部に５Ｎ−ＮａＯＨ水溶液９６重量部を加え、室温に
おいて超音波分散下で３０分間攪拌した。 【００３４】次いで、これに５１％β−ジエチルアミノ
エチルクロリド塩酸塩水溶液１１７．６重量部を加え、
５０℃にて６時間反応することによりジエチルアミノエ
チル基を導入した。得られた粒子のジエチルアミノエチ
ル基の導入量を滴定法により測定したところ０．４５ｍ
ｅｑ／ｇであった。この粒子を内径８．０ｍｍ、長さ１
００ｍｍのガラスカラム中に充填し、蛋白質吸脱着容量
の測定を行った。 【００３５】 【表１】 測定条件： 測定装置：ＬＣ−６Ａシステム（島津製作所製） 吸着液 ：１４ｍＭトリスヒドロキシメチルアミノメタ
ン・塩酸緩衝液（ｐＨ８．０） 脱着液 ：１４ｍＭトリスヒドロキシメチルアミノメタ
ン・塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）＋０．５Ｍ塩化ナトリウ
ム 流速 ：１．０ｍｌ／ｍｉｎ 圧力 ：１２ｋｇ／ｃｍ² 検出 ：ＵＶ２８０ｎｍ 温度 ：２５℃ 試料 ：牛血清アルブミン（シグマ社製） 上記の条件にて吸着液を通液し、吸着液に溶解した牛血
清アルブミンをカラムに注入し、吸着させた。飽和吸着
後、吸着されずに溶出する牛血清アルブミンをＵＶ２８
０ｎｍの検出から確認することによりカラムに吸着され
た牛血清アルブミン量を求めたところ、粒子１ｍｌあた
りの牛血清アルブミン吸着容量は８５ｍｇであった。 【００３６】次に、脱着液を通液することによりカラム
に吸着した牛血清アルブミンを溶離させ、回収した牛血
清アルブミン量をＵＶ２８０ｎｍの吸光度より求めたと
ころ、粒子１ｍｌあたりの脱着容量は７７ｍｇであり、
回収率は９０％であった。 比較例１ シード重合途中にグリシジルメタクリレートを滴下する
ことを行わなず、７０℃で８時間重合を行うこと以外は
実施例１と同様の操作を行い、重合体粒子粉末５４．７
５重量部を得た。 【００３７】得られた重合体粒子の平均粒子径は４．５
２μｍであった。また、水銀ポロシメーターにより測定
した細孔容積は０．５９ｍｌ／ｇ、最頻度半径は２９８
オングストロームであり、ＢＥＴ法にて測定した比表面
積は４４．２ｍ² ／ｇであった。 【００３８】この重合体粒子について実施例１と同様に
エポキシ基の加水分解を行い、アセチル化法により水酸
基量を求めたところ、８．９ｍｅｑ／ｇであった。更
に、応用例１と同様にしてジメチルアミノエチル基を導
入し、牛血清アルブミンの吸脱着容量測定を行ったとこ
ろ、粒子１ｍｌあたりの牛血清アルブミン吸着容量は７
０ｍｇ、脱着容量は３６ｍｇであり、回収率は５１％で
あった。 【００３９】 【発明の効果】本発明は、多孔質有機重合体粒子からな
る粒子表面が親水化された分離用樹脂の簡便な方法によ
り製造する方法に関するものであり、特に、タンパク質
を分離する用途に好適な液体クロマトグラフィー用充填
剤を与えるものである。また、シード重合中に添加する
単量体の水性媒体と多孔質化溶媒間の分配を適宜考慮す
ることで、修飾部位を比較的自由に制御でき、各種液体
クロマトグラフィー用充填剤に適した多孔性有機重合体
粒子を製造でき、製造工程での粒子の凝集や融着が無い
優れた方法を提供するものである。Description: BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for producing a packing material for liquid chromatography, and is particularly suitable for various types of chromatography such as gel permeation chromatography and ion exchange chromatography. The present invention relates to a method for producing highly hydrophilic porous organic polymer particles as a filler base material. [0002] Liquid chromatography is an extremely effective means for separating and analyzing various substances. Various packing materials for liquid chromatography have been proposed depending on the use. For example, for separation of proteins and the like, there are crosslinked gels of natural polysaccharides such as dextran gel and agarose gel. On the other hand, as a filler for high-speed analysis, there is an inorganic filler obtained by silane treatment of porous silica gel. These natural polysaccharide-based crosslinked gels are soft, and when used as a filler in liquid chromatography, have poor pressure resistance, so that high-speed liquid passage is impossible. In addition, since an inorganic carrier such as porous silica gel is dissolved with an acid and an alkali, the inorganic diameter filler using the same has a problem that the pH of the eluent used is limited to 3 to 8. [0004] As a filler which has solved the problems of these natural polysaccharide-based crosslinked gels and inorganic fillers, there is a filler comprising organic polymer particles. Above all, there have been proposed fillers intended to carry out liquid chromatography such as protein separation at high speed and without nonspecific adsorption of proteins (JP-A-3-73848, JP-A-3-179258). Gazette, JP-A-3-179259). These are dissolved in a dispersion liquid in which hydrophobic polymer particles impregnated with a polymerization initiator are dispersed, for example, by adding a monomer having a functional group capable of generating a hydroxyl group by hydrolysis to a particle surface. The present invention relates to a method for obtaining a coated polymer particle having a hydroxyl group on the particle surface by polymerizing a monomer and then hydrolyzing the monomer. On the other hand, Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 4-317740 discloses that glycidyl methacrylate, which is a monomer having a functional group capable of generating a hydroxyl group by hydrolysis, is used as a seed particle with polymer particles obtained by dispersion polymerization. Fillers for liquid chromatography obtained by seed polymerization of impregnating and polymerizing are described. The surface portion of the hydrophobic polymer particles, the filler for liquid chromatography coated with a polymer having a hydroxyl group, because the skeleton is hydrophobic,
It has little swelling and shrinkage in aqueous eluent, and is excellent in high-speed processing.However, it is difficult to completely hydrophilize the surface of particles including pores, and the protein recovery rate is insufficient. In addition, there is a problem of contamination by low-molecular hydrophobic substances mixed in the analysis sample. Further, the production method is a method in which a monomer is added to a dispersion liquid in which particles are dispersed, and the monomer is dissolved and polymerized.If the monomer is not water-soluble, an organic solvent such as methanol is used to dissolve the monomer. Since a large amount of a solvent is added, the concentration of the monomer in the dispersion is extremely low, so that the polymerization reaction does not easily proceed, and the reproducibility is low. Further, a method (continuous method) of reacting monomers subsequent to the preparation of hydrophobic polymer particles
Also have the same problem, the unreacted hydrophobic monomer is dissolved by the addition of an organic solvent, and the polymerization proceeds not only on the particle surface but also in the dispersion, so that the polymer formed in the dispersion is However, there is a problem that causes aggregation and fusion of particles. Further, the polymer particles obtained by dispersion polymerization are used as seed particles, and glycidyl methacrylate, which is a monomer having a functional group capable of forming a hydroxyl group by hydrolysis, is impregnated and polymerized by seed polymerization. The packing material for liquid chromatography has high particle size uniformity,
Although excellent separation characteristics can be obtained, the hydrophilicity is still low, and a sufficient protein recovery cannot be obtained. An object of the present invention is to provide a separating agent which solves this problem, and at the same time, to provide a method for producing the separating agent which is simpler than ever before. Aim. [0008] That is, the present invention relates to a method for preparing a hydrophilic vinyl monomer and / or a vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group in an organic polymer particle by 30 to 30 minutes. 90
After impregnating a vinyl monomer mixture containing 10 to 70% by weight of a crosslinkable polyvinyl monomer and a radical polymerization initiator and a porous solvent, the particles are suspended in an aqueous medium, and the suspension is polymerized. A liquid chromatograph characterized by adding a hydrophilic vinyl monomer and / or a vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group to the suspension after the temperature is raised to a temperature while the polymerization reaction is continued. The present invention relates to a method for producing a photographic filler. The method for producing a resin for separation according to the present invention is produced by a seed polymerization method using seed particles having a narrow particle size distribution. The organic polymer particles (seed particles) used in the seed polymerization can be produced by generally well-known ball-forming polymerization such as emulsion polymerization, soap-free emulsion polymerization, dispersion polymerization, and suspension polymerization. Among them, emulsion polymerization, soap-free emulsion polymerization,
Polymer particles obtained by dispersion polymerization or the like have a narrower particle size distribution than those produced by suspension polymerization, and are therefore preferable. In particular, polymer particles obtained by dispersion polymerization have a larger particle diameter than particles obtained by emulsion polymerization, and are preferred as polymer particles used for seed polymerization. As the composition of the seed particles, a polymer comprising an aromatic monovinyl monomer and / or an aliphatic monovinyl monomer is preferable. These may be either a homopolymer or a copolymer of two or more monomers, and may be a copolymer with 1% by weight or less of a crosslinkable polyvinyl monomer. Typically, particles made of polymethacrylate such as polystyrene or polyglycidyl methacrylate are preferred. The size of the seed particles is 0.1-100 μm
Can be arbitrarily selected according to the purpose within the range described above. In the present invention, the seed particles composed of organic polymer particles may contain a hydrophilic vinyl monomer and / or a vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group and a vinyl monomer containing a crosslinkable polyvinyl monomer. Impregnated with the monomer mixture.
In this case, a hydrophilic vinyl monomer and / or a vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group are monovinyl monomers. The hydrophilic vinyl monomer includes unsaturated carboxylic acids such as (meth) acrylic acid, itaconic acid and maleic acid; hydroxyethyl (meth) acrylate;
Hydroxypropyl (meth) acrylate, diethylene glycol (meth) acrylate, triethylene glycol (meth) acrylate, tetraethylene glycol (meth) acrylate, 2,3-dihydroxypropyl (meth) acrylate, dimethylaminoethyl (meth)
(Meth) acrylic acid esters having a hydrophilic group such as a hydroxyl group or an amino group such as acrylate, diethylaminoethyl (meth) acrylate, and tetrahydrofurfuryl (meth) acrylate; (meth) acrylamide;
(Meth) acrylamide derivatives such as N, N-dimethyl (meth) acrylamide and N-isopropylacrylamide; vinyl ethers such as methyl vinyl ether and ethyl vinyl ether; allyl alcohol and vinyl pyrrolidone; There is no particular limitation as long as it exists. These hydrophilic vinyl monomers can be used alone or in combination of two or more. Examples of the vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group include alkyl acrylates such as methyl acrylate and ethyl acrylate, 3-chloro-2-hydroxypropyl (meth) acrylate,
-(Meth) acrylates such as chloroethyl (meth) acrylate and glycidyl (meth) acrylate;
(Meth) acrylamide derivatives such as N-butyl (meth) acrylamide; vinyl esters such as vinyl acetate and vinyl propionate; esters or ethers of allyl alcohol; and other vinyl compounds such as (meth) acrylonitrile. These vinyl monomers can be used alone or in a mixture of two or more kinds. Among them, vinyl monomers having a functional group capable of generating a hydroxyl group by hydrolysis are preferable. The amount of the hydrophilic vinyl monomer and / or the vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group is in the range of 30 to 90% by weight. Further, as the crosslinkable polyvinyl monomer, an aromatic polyvinyl monomer and an aliphatic polyvinyl monomer are preferable, and as the aromatic polyvinyl monomer, divinylbenzene is used. Preferred are polyhydric alcohol poly (meth) acrylate and alkylene poly (meth) acrylamide. Examples thereof include glycerol tri (meth) acrylate, allyl acylate, trimethylolpropane tri (meth) acrylate, tetrahydroxybutanedi (meth) acrylate, 1,4-cyclohexanediol di (meth) acrylate, and methylenebisacrylamide. Examples thereof include hydrophilic crosslinkable polyvinyl monomers such as glycerol di (meth) acrylate, pentaerythritol di (meth) acrylate, ethylene glycol di (meth) acrylate, and polyethylene glycol di (meth) acrylate. . The amount of these vinyl monomers is appropriately determined in consideration of the size of seed particles to be used and the size of target particles. The amount of the crosslinkable polyvinyl monomer in the vinyl monomer mixture to be impregnated into the seed particles is 10 to 70% by weight, preferably 20 to 50% by weight. As a porous solvent to be impregnated into the seed particles, an aliphatic or aromatic hydrocarbon, an ester, a ketone, an alcohol, which is an organic solvent that acts as a phase separator during seed polymerization and promotes the porosity of the particles. And ethers. Such organic solvents include, for example, toluene, xylene, cyclohexane, octane, isooctane, butyl acetate, dimethyl phthalate, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, dibutyl ether, 1-hexanol, 2-octanol, decanol, lauryl alcohol, cyclohexanol And these are used alone or in combination. As the radical polymerization initiator, peroxide initiators such as benzoyl peroxide and butylperoxyhexanoate, and azo initiators such as azobisisobutyronitrile and azobisisovaleronitrile are preferred. These polymerization initiators are dissolved in a vinyl monomer mixture or a porous solvent, and are impregnated into the seed particles simultaneously with or before and after the impregnation of the vinyl monomer mixture. When impregnating the seed particles with a vinyl monomer mixture, a porous solvent, a radical polymerization initiator, and the like,
In some cases, it is preferable to dilute and impregnate with a solvent having a high affinity for the seed particles. If necessary, a polymerization initiator can be dissolved in this solvent and added. Examples of such a solvent include water-miscible low-boiling solvents such as alcohol, acetone, tetrahydrofuran and dioxane, and halogenated hydrocarbons such as dichloroethane and methylene chloride. These functions as a solvent for promoting the impregnation of the vinyl monomer mixture and the like, but it is preferable to evaporate under reduced pressure before starting the seed polymerization by raising the temperature to the polymerization temperature. In the present invention, a vinyl monomer containing a hydrophilic vinyl monomer and / or a vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group and a crosslinkable polyvinyl monomer is added to the seed particles composed of organic polymer particles. After impregnation with a body mixture, a radical polymerization initiator and a porous solvent, the particles are suspended in an aqueous medium, and the suspension is heated to a polymerization temperature, so-called seed polymerization is used. Further, the seed particles which have been impregnated with a vinyl monomer, a porous solvent, a polymerization initiator and the like and are enlarged are prevented from agglomerating, deforming and fusing during seed polymerization, and their dispersion stability is improved. To increase the dispersion, a dispersion stabilizer is added to the aqueous medium in which the particles are suspended and dispersed. Examples of the dispersion stabilizer include known anionic and nonionic surfactants, and polyvinylpyrrolidone, polyethyleneimine, and vinyl alcohol.
A synthetic polymer such as a vinyl acetate copolymer is preferred, and a vinyl alcohol-vinyl acetate copolymer is particularly preferred. Among them, a relatively low molecular weight vinyl alcohol-vinyl acetate copolymer having a polymerization degree of about 500 is particularly preferable. In the present invention, the hydrophilic vinyl monomer and the vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group are added during the polymerization reaction after the initiation of the seed polymerization.
The same as the vinyl monomer impregnated in the seed particles can be used. Examples of the vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group include an amino group, a quaternary ammonium group,
Vinyl monomers having a functional group capable of introducing an ionic hydrophilic group such as a carboxyl group and a sulfonic acid group are also preferable. Further, the vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group may not be completely miscible with the aqueous medium of the suspension. In particular, when the vinyl monomer is easier to distribute toward the porous solvent than the aqueous medium, the vinyl monomer added to the pore forming portion is concentrated, and the pore surface is efficiently modified. Therefore, it is preferable. The addition of both the above-mentioned hydrophilic vinyl monomer and a vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group can result in both the outer surface of the seed polymer particles and the inner pore surface of the seed polymer particles. It is preferable because it is modified simultaneously. In addition, glycerol di (meth) acrylate, pentaerythritol di (meth) acrylate, and ethylene glycol di (meth) acrylate may be added to a part of the added hydrophilic vinyl monomer and / or a vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group. It is also possible to use hydrophilic and crosslinkable polyvinyl monomers such as (meth) acrylate and polyethylene glycol di (meth) acrylate. The amount of the crosslinkable polyvinyl monomer used is 10% of the amount of the vinyl monomer added to the aqueous medium.
It is preferable that the content be not more than weight%. The amount of the hydrophilic vinyl monomer and / or the vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group to be added is 1 to 30 with respect to the vinyl monomer to be impregnated before seed polymerization. % By weight, more preferably 2% by weight.
-20% by weight. The timing of adding these added vinyl monomers to the aqueous medium is from 0.5 to 12 hours, preferably from 1 to 6 hours, after the temperature is raised to a predetermined polymerization temperature and seed polymerization is started. To the mixture at once or in portions. In the case of divisional addition, for example, a method of adding every 10 to 60 minutes is preferable. The vinyl monomer is added as it is, or diluted or dissolved with a solvent and added. The polymerization temperature of the seed polymerization depends on the type of polymerization initiator used, but is preferably from 50C to 80C. The polymerization time of the seed polymerization is preferably around the half-life of the polymerization initiator or longer, and for example, is preferably 3 hours to 48 hours. When adding these vinyl monomers, it is also preferable to simultaneously add a polymerization initiator, particularly a water-soluble initiator such as potassium persulfate. When the polymerization initiator is not added to the aqueous medium after the start of the seed polymerization, it is preferable to add a polymerization inhibitor in water such as sodium nitrite.
As described above, in the present invention, it is produced by using a known general seed polymerization method, and 0.1 to 1.0.1 produced by an emulsion polymerization method or a soap-free emulsion polymerization method as seed particles.
When 5 μm polymer particles are used, the primary swelling with a swelling aid is followed by seed polymerization to obtain 100 μm.
A method that can produce porous particles having a uniform particle size of up to about m (J. Ugelstad et al., Makromolecu).
lareChemie, 80, 737, 1979
Year) is preferably used. Also, 1 to 10 produced by dispersion polymerization
When polymer particles of μm are used as seed particles, a seed polymerization method described in, for example, JP-A-64-26617 can be used. In the present invention, after the polymerization is completed, by washing the organic polymer particles used as the seed particles with a good solvent to remove a part or all of the polymer derived from the seed particles, the desired porosity can be obtained. Degree of resin is obtained. In the present invention, when a vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group is used, the functional group capable of forming a hydrophilic group after polymerization is converted into a hydrophilic group by hydrolysis or the like. A step of introducing an ionic hydrophilic group such as an amino group, a quaternary ammonium group, a carboxyl group, and a sulfonic acid group is required. For example, when a monomer having a group capable of generating a hydroxyl group by hydrolysis is used, hydrolysis is performed in an aqueous solution of an acid or an alkali in the presence of a water-miscible organic solvent, if necessary, or glycerin. Hydrolysis is carried out by reacting with a polyol such as a diol or the like. In addition, when an alkanolamine or the like is reacted, a hydroxyl group is generated by hydrolysis, and an ionic hydrophilic group such as an amino group is also provided. The preferred porous physical properties of the porous polymer particles obtained by the method of the present invention in a dry state as measured by the BET method are 10 to 2000 angstroms, preferably 75 to 1500 angstroms as an average pore radius. The pore volume is 0.2 to 1.8 ml / g, preferably 0.4 to 1.2 ml / g, and the pore surface area is 1 to 1000 m ² / g, preferably 5 to 500 m ² / g. . In particular, in protein separation, the average pore radius is 7
If it is less than 5 angstroms, the protein does not diffuse into the pores, and the amount of adsorption is undesirably reduced. In the method of the present invention, the fact that the outer surface of the particles and / or the surface of the pores were modified by the vinyl monomer added during the seed polymerization was verified by simply increasing the weight and clearly changing the physical properties. However, it can be confirmed analytically by elemental analysis or measurement of infrared absorption spectrum. Further, practically, it can also be confirmed by calculating the recovery rate of serum albumin from the peak area of the obtained chromatogram by liquid chromatography. The serum albumin recovery of the packing material for liquid chromatography of the present invention determined by the method is 50% or more, preferably 75% or more. Further, if an ionic hydrophilic group such as an amino group, an ammonium group, a carboxyl group or a sulfonic acid group is further introduced into the filler produced in the present invention, it is more preferable to use the resin for resin adsorption and desorption. it can. EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples. Example 1 135.2 parts by weight of ethanol was placed in a reactor equipped with a stirrer, a condenser, a thermometer and a nitrogen gas inlet tube, and polyvinylpyrrolidone (average molecular weight: 40,000) 3.6.
Parts by weight were added and dissolved. 60 parts by weight of glycidyl methacrylate, 0.6 parts by weight of 2,2-azobisisobutyronitrile and 0.6 parts by weight of bis (diethylthiocarbamoyl) disulfide are added to this solution, and heated to 70 ° C. under a nitrogen atmosphere. And polymerized for 3 hours. After cooling and washing with methanol, the isolated spherical polymer particles had an average particle size of 1.63 μm. To 5 parts by weight of the above spherical polymer particles (seed particles) were added 0.02 parts by weight of sodium dodecyl sulfate and 45 parts by weight of ion-exchanged water to prepare an aqueous dispersion of seed particles.
Glycidyl methacrylate 44.94 parts by weight, ethylene glycol dimethacrylate 18.90 parts by weight, 1,2
42.53 parts by weight of dichloroethane, 48.9 parts of toluene
4 parts by weight, 2,2'-azobisisobutyronitrile 0.
A fine dispersion of a polymerizable vinyl monomer mixture consisting of 60 parts by weight, 1.13 parts by weight of sodium dodecyl sulfate and 450 parts by weight of ion-exchanged water was added to the aqueous dispersion of the seed particles at room temperature with stirring. By holding for a time, the oil droplets were absorbed by the seed particles. Next, 405 parts by weight of a 1.11% by weight aqueous solution of polyvinyl alcohol was added thereto, and the temperature was raised to 70 ° C., and after 1 hour, glycidyl methacrylate 1 was added.
2.84 parts by weight were added dropwise over 30 minutes, and a further 6.5 hours
Polymer particles were obtained by performing polymerization. After isolating the polymer particles, 325 ml of acetone was added, and
After performing a time extraction operation to remove the polymer derived from the seed particles, the polymer was dried to obtain 69.55 parts by weight of polymer particle powder. The average particle size of the obtained polymer particles is 4.8.
It was 1 μm. The pore volume measured by a mercury porosimeter was 0.50 ml / g, and the most frequent radius was 254.
Angstrom, and the specific surface area measured by the BET method was 35.3 m ² / g. To 30 parts by weight of the polymer particles, 300 parts by weight of a 10% by weight aqueous sulfuric acid solution were added, and 50 parts by weight were added.
The epoxy group derived from glycidyl methacrylate was hydrolyzed by heating at 5 ° C. for 5 hours. After completion of the reaction, the particles were sufficiently washed with ion-exchanged water, isolated and dried to obtain a particle powder. When the amount of hydroxyl groups in the polymer particles was determined by the acetylation method, it was 9.6 meq / g. Application Example 1 To 20 parts by weight of the polymer particles having a hydroxyl group obtained in Example 1, 96 parts by weight of a 5N-NaOH aqueous solution was added, and the mixture was stirred at room temperature under ultrasonic dispersion for 30 minutes. Then, 117.6 parts by weight of a 51% aqueous solution of β-diethylaminoethyl chloride hydrochloride was added thereto.
By reacting at 50 ° C. for 6 hours, a diethylaminoethyl group was introduced. The amount of the introduced diethylaminoethyl group in the obtained particles was measured by a titration method to be 0.45 m.
eq / g. The particles have an inner diameter of 8.0 mm and a length of 1.
The mixture was packed in a 00 mm glass column, and the protein adsorption / desorption capacity was measured. Table 1 Measurement conditions: Measurement device: LC-6A system (manufactured by Shimadzu Corporation) Adsorbent: 14 mM trishydroxymethylaminomethane / hydrochloric acid buffer (pH 8.0) Desorption solution: 14 mM trishydroxymethylaminomethane Hydrochloric acid buffer (pH 8.0) +0.5 M sodium chloride Flow rate: 1.0 ml / min Pressure: 12 kg / cm ² Detection: UV 280 nm Temperature: 25 ° C. Sample: Bovine serum albumin (manufactured by Sigma) Absorbent under the above conditions Then, bovine serum albumin dissolved in the adsorbent was injected into the column and adsorbed. Bovine serum albumin eluted without adsorption after saturation adsorption
When the amount of bovine serum albumin adsorbed on the column was determined by confirming from the detection at 0 nm, the adsorbing capacity of bovine serum albumin per 1 ml of the particles was 85 mg. Next, the bovine serum albumin adsorbed on the column was eluted by passing the desorbing solution through the column, and the amount of bovine serum albumin recovered was determined from the absorbance at UV 280 nm. ,
The recovery was 90%. Comparative Example 1 The same operation as in Example 1 was carried out except that the glycidyl methacrylate was not added dropwise during the seed polymerization, and the polymerization was carried out at 70 ° C. for 8 hours.
5 parts by weight were obtained. The average particle size of the obtained polymer particles is 4.5.
It was 2 μm. The pore volume measured by a mercury porosimeter was 0.59 ml / g, and the most frequent radius was 298.
Angstrom, and the specific surface area measured by the BET method was 44.2 m ² / g. The polymer particles were hydrolyzed in the same manner as in Example 1, and the amount of hydroxyl groups was determined by the acetylation method. The result was 8.9 meq / g. Furthermore, a dimethylaminoethyl group was introduced in the same manner as in Application Example 1, and the adsorption / desorption capacity of bovine serum albumin was measured. The adsorbing capacity of bovine serum albumin per 1 ml of particles was 7%.
0 mg, the desorption capacity was 36 mg, and the recovery was 51%. The present invention relates to a method for producing a separation resin comprising porous organic polymer particles whose surface has been hydrophilized by a simple method, and particularly to a use for separating proteins. To provide a packing material for liquid chromatography suitable for In addition, by appropriately considering the distribution of the monomer added during the seed polymerization between the aqueous medium and the porous solvent, the modification site can be relatively freely controlled, and a porous material suitable for various liquid chromatography fillers can be used. An object of the present invention is to provide an excellent method capable of producing conductive organic polymer particles and preventing aggregation and fusion of particles in the production process.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 30/00 - 30/95 B01D 15/08 C08F 2/00 C08J 5/24 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (58) Field surveyed (Int. Cl. ⁷ , DB name) G01N 30/00-30/95 B01D 15/08 C08F 2/00 C08J 5/24

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】 【請求項１】 有機重合体粒子に、親水性ビニル単量体
および／または親水基を生成し得る官能基を有するビニ
ル単量体を３０〜９０重量％と架橋性ポリビニル単量体
を１０〜７０重量％含むビニル単量体混合物、ラジカル
重合開始剤並びに多孔質化溶媒を含浸後、該粒子を水性
媒体に懸濁し、該懸濁液を重合温度に昇温後、重合反応
の継続中に親水性ビニル単量体および／または親水基を
生成し得る官能基を有するビニル単量体を該懸濁液に添
加することを特徴とする液体クロマトグラフィー用充填
剤の製造方法。(57) [Claim 1] The organic polymer particles contain 30 to 90% by weight of a hydrophilic vinyl monomer and / or a vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group. After impregnating a vinyl monomer mixture containing a crosslinkable polyvinyl monomer in an amount of 10 to 70% by weight, a radical polymerization initiator, and a porosifying solvent, the particles are suspended in an aqueous medium, and the suspension is heated to a polymerization temperature. Adding a hydrophilic vinyl monomer and / or a vinyl monomer having a functional group capable of forming a hydrophilic group to the suspension during the polymerization reaction after the warming. Method of manufacturing the agent.