JP3385377B2 - Immunoassay - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、液状の試料に含有
されている検体をイムノクロマトグラフ法により検出す
るために使用される免疫測定具に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to an immunoassay instrument used for detecting a sample contained in a liquid sample by immunochromatography.

【０００２】[0002]

【従来の技術】イムノクロマトグラフ法は免疫測定法の
一種である。このイムノクロマトグラフ法に用いられる
免疫測定具は、試料採取部、試薬相、判定表示相がクロ
マトグラフ材上に形成されることにより構成されてい
る。2. Description of the Related Art Immunochromatography is a type of immunoassay. The immunoassay tool used in the immunochromatography method is configured by forming a sample collecting portion, a reagent phase, and a determination display phase on a chromatographic material.

【０００３】図３はイムノクロマトグラフ法に一般的に
用いられている免疫測定具を示し、厚紙等の帯状の支持
材１上に、試料採取部２，試薬相３，判定表示相４が順
に設けられている。試料採取部２，試薬相３，判定表示
相４は、毛管現象によって試料が展開できるクロマトグ
ラフ材が使用されており、上流側の部位が下流側の部位
の一部の上に重なるように並べられている。FIG. 3 shows an immunoassay instrument generally used for immunochromatography, in which a sample collecting section 2, a reagent phase 3, and a judgment display phase 4 are sequentially provided on a belt-shaped support 1 such as a cardboard. Has been. The sample collection part 2, the reagent phase 3, and the judgment display phase 4 are made of a chromatographic material that allows the sample to be developed by capillary action, and are arranged so that the upstream side part overlaps a part of the downstream side part. Has been.

【０００４】試料採取部２は液状の試料を吸収して展開
させるものである。試薬相３は試料中に含まれる検体
（抗原）を酵素、蛍光、ラジオアイソトープ、金コロイ
ド、ラテックス等の第１抗体により標識化する部位であ
る。判定表示相４は標識化された検体を捕捉する反応を
行う部位である。このため、判定表示相４では、試料採
取部よりクロマトグラフ材を通過し、試薬相３で第１抗
体により標識化が行われた検体を第２抗体とサンドイッ
チ複合体を形成させ、これにより試料中に含まれる検体
を検出するようになっている。The sample collecting section 2 absorbs and develops a liquid sample. The reagent phase 3 is a site for labeling a specimen (antigen) contained in the sample with a first antibody such as an enzyme, fluorescence, radioisotope, colloidal gold, or latex. The judgment display phase 4 is a site for carrying out a reaction for capturing the labeled sample. Therefore, in the judgment display phase 4, the sample that has passed through the chromatographic material from the sampling portion and is labeled with the first antibody in the reagent phase 3 forms a sandwich complex with the second antibody. It is designed to detect the sample contained therein.

【０００５】これらに用いられる抗体は、液体試料中に
含まれる抗原に対して特異性が高いため、様々な夾雑物
が混在する試料から微量の抗原を鋭敏、且つ簡易に検出
して同定することができる。従って、免疫測定具は、臨
床診断や、環境化学的分析、食品衛生管理等を中心とし
た様々な分野で利用されている。Since the antibodies used for these have high specificity to the antigens contained in the liquid sample, it is necessary to detect a small amount of the antigen sensitively and easily from a sample containing various contaminants for identification. You can Therefore, the immunoassay tool is used in various fields such as clinical diagnosis, environmental chemical analysis, and food hygiene control.

【０００６】このような免疫測定具では、判定表示部４
で的確に免疫反応が行われたことを試験者に示す必要が
あり、このため、判定表示部４には反応終了表示部５が
連続するように設けられている。この反応終了表示部５
としては、判定表示相４と同様に抗原抗体反応を利用し
たものが多く用いられていた。しかしながら、抗原抗体
反応による判定終了の表示は、試料中に含まれる抗原の
量や、夾雑物の種類、ｐＨ、その他の要因に影響される
ことために明確でなく、判定終了合図をより安定して表
示できる免疫測定具が必要となっている。In such an immunoassay tool, the judgment display section 4
Therefore, it is necessary to accurately indicate to the tester that the immune reaction has been performed. Therefore, the determination display section 4 is provided with the reaction end display section 5 so as to be continuous. This reaction end display section 5
As the determination display phase 4, those utilizing the antigen-antibody reaction were often used. However, the indication of the end of determination by the antigen-antibody reaction is not clear because it is affected by the amount of antigen contained in the sample, the type of contaminants, pH, and other factors, and the determination end signal is more stable. There is a need for an immunoassay device that can be displayed.

【０００７】特開平４−３５３７６４号公報及び特許第
２９４２０８７号公報には、以上のように要求されてい
る判定終了を表示するための従来の免疫測定具が開示さ
れている。Japanese Unexamined Patent Publication No. 4-353764 and Japanese Patent No. 2942087 disclose conventional immunoassay devices for displaying the completion of the required judgment as described above.

【０００８】特開平４−３５３７６４号公報では、ブロ
モクレゾールグリーン、２，５ジニトロフェノール、ブ
ロムフェノールブルーを用い、これらの発色剤を濾紙に
吸収、乾燥させて反応終了表示部としている。これらの
発色剤は水に濡れたときに発色するため、反応の終了を
表示するものである。In Japanese Unexamined Patent Publication No. 4-353764, bromocresol green, 2,5 dinitrophenol, and bromphenol blue are used, and these coloring agents are absorbed in a filter paper and dried to form a reaction end indicator. Since these color formers develop color when wet with water, they indicate the end of the reaction.

【０００９】一方、特許第２９４２０８７号公報では、
指示薬として直接染料であるペンゾパープリン４Ｂ或い
はコンゴーレッドを用いている。この直接染料を濾紙に
吸収させて染色することにより反応終了表示部としてい
る。On the other hand, in Japanese Patent No. 2942087,
As the indicator, Penzopurine 4B or Congo Red, which is a direct dye, is used. This direct dye is absorbed in a filter paper and dyed to form a reaction end indicator.

【００１０】[0010]

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の従来技術では、いずれも指示薬を保持するために濾紙
を用いているため、濾紙を免疫測定具に組み込む必要が
あり、免疫測定具の構成部品が多くなり、組立が面倒と
なっている。又、免疫測定具では、正確な判定結果を得
る目的でコーティング剤（ブロッキング剤）が塗布され
るが、上述した指示薬はコーティング剤のｐＨによる影
響を受けて変色する。このため、コーティング後には、
変色した状態から変色前の色調に戻す必要があり、その
操作が面倒となっている。However, in each of these conventional techniques, since the filter paper is used to hold the indicator, it is necessary to incorporate the filter paper into the immunoassay tool, and the components of the immunoassay tool are It has become more and more complicated to assemble. Further, in the immunoassay tool, a coating agent (blocking agent) is applied for the purpose of obtaining an accurate determination result, but the above-mentioned indicator is discolored by being influenced by the pH of the coating agent. Therefore, after coating,
It is necessary to return from the discolored state to the color tone before the discoloration, and the operation is troublesome.

【００１１】以上に加えて、特開平４−３５３７６４号
公報では、試料のｐＨにより発色剤の発色が正常に行わ
れない場合があるばかりでなく、発色剤が発色しても液
状の試料の通過に伴って試料と共に流失するため、試験
者は絶えず指示薬を目視する必要があり、反応の終了を
確認する場合の利便性に欠けている。In addition to the above, according to Japanese Patent Laid-Open No. 4-353746, not only the color development of the color-developing agent is not normally performed due to the pH of the sample, but also the liquid sample passes through even if the color-developing agent develops color. Since it is washed away together with the sample, the tester must constantly visually check the indicator, which is not convenient for confirming the completion of the reaction.

【００１２】本発明はこのような従来の問題点を考慮し
てなされたものであり、反応の終了を確実に、しかも長
時間表示することができる免疫測定具を提供することを
目的とする。The present invention has been made in consideration of such conventional problems, and an object of the present invention is to provide an immunoassay device capable of displaying the completion of the reaction reliably and for a long time.

【００１３】[0013]

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、請求項１の発明は、液状の試料を吸収して展開し、
試料中の検体を標識化した後、標識化された検体を捕捉
して判定表示を行うイムノクロマトグラフ法に用いる免
疫測定具において、前記判定表示を行う部位に反応終了
表示部が連続しており、この反応終了表示部が、酸含有
の低級アルコール溶液に溶解した酸性染料からなる指示
薬をニトロセルロース繊維からなるクロマトグラフ材に
吸収させて乾燥することにより構成されていることを特
徴とする。In order to achieve the above object, the invention of claim 1 absorbs and develops a liquid sample,
After labeling the specimen in the sample, in the immunoassay instrument used in the immunochromatographic method to capture the labeled specimen and perform the determination display, the reaction completion display unit is continuous at the portion for performing the determination display, This reaction completion display part is constituted by absorbing an indicator consisting of an acid dye dissolved in an acid-containing lower alcohol solution into a chromatographic material consisting of nitrocellulose fiber and drying it. And

【００１４】この発明では、指示薬が溶解している酸性
のアルコール溶液をニトロセルロース繊維に吸収させ、
乾燥させることにより、指示薬がニトロセルロース繊維
からなるクロマトグラフ材に直接に固定される。この指
示薬は酸性側の色調でクロマトグラフ材に固定されてお
り、免疫測定具にコーティング剤（ブロッキング剤）を
塗布しても、酸性側の色調が保持されるため一定時間変
色することがない。このため、変色を戻す操作が不要と
なる。又、指示薬を固定するための濾紙が不要となるた
め、簡単な構造とすることができる。In the present invention, the nitrocellulose fiber is made to absorb an acidic alcohol solution in which the indicator is dissolved,
By drying, the indicator is directly fixed to the chromatographic material composed of nitrocellulose fibers. This indicator is fixed to the chromatographic material in an acidic color tone, and even if a coating agent (blocking agent) is applied to the immunoassay tool, the acidic color tone is retained and thus the color does not change for a certain period of time. Therefore, the operation of returning the discoloration is unnecessary. Further, a filter paper for fixing the indicator is not required, so that the structure can be simple.

【００１５】この発明の免疫測定具では、試料を吸収
し、展開することにより、検体が標識化されて検体の判
定表示を行う。反応終了表示部では、試料が通過するこ
とにより、指示薬が変色するため、反応の終了を表示す
る。このとき、指示薬として酸性染料を用いており、こ
の酸性染料がニトロセルロース繊維を染色して固定され
るため、試料の通過と共に流失することがない。従っ
て、判定の終了を確実に、しかも長時間表示することが
できる。In the immunoassay device of the present invention, the sample is labeled by absorbing and developing the sample, and the sample is displayed for determination. The reaction completion display section displays the completion of the reaction because the indicator changes color as the sample passes. At this time, an acid dye is used as an indicator,
Acid dyes are dyed and fixed on nitrocellulose fibers
Therefore , the sample does not flow away as it passes. Therefore, the end of the determination can be displayed reliably and for a long time.

【００１６】[0016]

【００１７】[0017]

【００１８】請求項２の発明は、請求項１記載の免疫測
定具であって、前記酸性染料は、エオシンＢ、エオシン
Ｙ、フロキシンＢ、ブロムフェノールブルーの内の少な
くとも一種であることを特徴とする。 The invention of claim 2 is the immunoassay of claim 1.
The acid dyes are Eosin B and Eosin
Y, Phloxine B, Bromphenol Blue
Characterized by being at least one.

【００１９】これらの酸性染料は、いずれもニトロセル
ロース繊維を良好に染色するため、ニトロセルロース繊
維に確実に固定化される。Since all of these acid dyes dye the nitrocellulose fiber satisfactorily, they are reliably immobilized on the nitrocellulose fiber.

【００２０】[0020]

【発明の実施の形態】図１は本発明の一実施の形態の免
疫測定具１０であり、支持材１１上に試料採取部１２，
試薬相１３，判定表示相１４，反応終了表示部１５が連
続するように順に並べられている。支持材１１は上述し
た各部位を支持するものであり、厚紙、プラスチック片
等の適宜の硬質材を帯状に成形して使用される。試料採
取部１２，試薬相１３，判定表示相１４及び反応終了表
示部１５は、この支持材１１上に接着、溶着、係着等に
よって接合されている。この接合によって試料採取部１
２，試薬相１３，判定表示相１４及び反応終了表示部１
５に剛性が付与されるため、これらの部位が撓んだり、
変形することがなくなる。DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS FIG. 1 shows an immunoassay tool 10 according to an embodiment of the present invention.
The reagent phase 13, the judgment display phase 14, and the reaction end display section 15 are arranged in order so as to be continuous. The support material 11 supports the above-mentioned parts, and is formed by molding a suitable hard material such as cardboard and plastic pieces into a strip shape. The sample collecting section 12, the reagent phase 13, the judgment display phase 14, and the reaction completion display section 15 are bonded to the support material 11 by adhesion, welding, engagement, or the like. By this joining, the sampling section 1
2, reagent phase 13, judgment display phase 14 and reaction end display section 1
Since rigidity is given to 5, these parts may bend,
It will not deform.

【００２１】なお、検査に供される液状の試料として
は、尿、血液、血清等の体液や、液体に懸濁した菌体等
を選択することができる。尿に用いる場合には、妊娠の
有無を早期に判定することもできる。As the liquid sample to be tested, body fluids such as urine, blood and serum, and bacterial cells suspended in the liquid can be selected. When used for urine, the presence or absence of pregnancy can be determined early.

【００２２】試料採取部１２，試薬相１３，判定表示相
１４及び反応終了表示部１５は、いずれも液状の試料が
展開可能なクロマトグラフ材によって形成されている。
クロマトグラフ材としては、濾紙等のセルロース系繊
維、不織布、棉系繊維、ナイロン、ウレタン等のプラス
チック系繊維或いはこれらの混合繊維、その他のものを
使用することができる。試料採取部１２，試薬相１３，
判定表示相１４及び反応終了表示部１５としては、同じ
クロマトグラフ材であっても良く、異なったクロマトグ
ラフ材であっても良く、それぞれの部分が一体化しても
良い。この場合において、反応終了表示部１５のクロマ
トグラフ材としては、ニトロセルロース繊維を用いるも
のである。The sample collecting section 12, the reagent phase 13, the judgment display phase 14, and the reaction completion display section 15 are all formed of a chromatographic material capable of developing a liquid sample.
As the chromatographic material, cellulosic fibers such as filter paper, non-woven fabrics, cotton fibers, plastic fibers such as nylon and urethane, or mixed fibers thereof, and others can be used. Sampling section 12, reagent phase 13,
The determination display phase 14 and the reaction completion display portion 15 may be the same chromatograph material or different chromatograph materials, and respective portions may be integrated. In this case, nitrocellulose fiber is used as the chromatographic material of the reaction completion display portion 15.

【００２３】並べられている試料採取部１２，試薬相１
３，判定表示相１４及び反応終了表示部１５は、その一
部が隣接した部位に部分的に重ねられている。この実施
の形態において、試料採取部１２はその下流側の部分が
試薬相１３の上に重ねられており、試薬相１３の下流側
の部分が判定表示相１４の上に重ねられている。一方、
反応終了表示部１５は、その上流側の部分が判定表示相
１４の上に重ねられている。このように隣接した部位が
重ねられることにより、液状の試料を試料採取部１２か
ら反応終了表示部１５に円滑に展開させることができ
る。Sampling section 12 and reagent phase 1 arranged side by side
3. The judgment display phase 14 and the reaction completion display portion 15 are partially overlapped with the adjacent portions. In the present embodiment, the downstream side portion of the sample collecting unit 12 is overlaid on the reagent phase 13, and the downstream side portion of the reagent phase 13 is overlaid on the determination display phase 14. on the other hand,
The reaction end display portion 15 has an upstream portion thereof superimposed on the determination display phase 14. By overlapping the adjacent portions in this manner, the liquid sample can be smoothly spread from the sample collecting unit 12 to the reaction completion display unit 15.

【００２４】試料採取部１２は液状の試料に浸漬される
或いは液状の試料が滴下や塗布される部位であり、これ
らの操作により試料は試料採取部１２から試薬相１３，
判定表示相１４，反応終了表示部１５５に順に展開され
る。The sample collecting part 12 is a part which is immersed in the liquid sample or where the liquid sample is dropped or applied. By these operations, the sample is collected from the sample collecting part 12 to the reagent phase 13,
The judgment display phase 14 and the reaction end display portion 155 are sequentially developed.

【００２５】試薬相１３は第１抗体によって試料中の検
体を標識化する部位である。このため、第１抗体は試料
中に含まれている検体（抗原）に特異的に結合する物質
が使用される。第１抗体は、金コロイド、酵素、蛍光、
ラジオアイソトープ、着色ラテックス等によって検体を
標識化するものであり、試薬相１３のクロマトグラフ材
に含浸されている。The reagent phase 13 is a site for labeling the sample in the sample with the first antibody. Therefore, as the first antibody, a substance that specifically binds to a specimen (antigen) contained in the sample is used. The first antibody is colloidal gold, enzyme, fluorescence,
The sample is labeled with a radioisotope, colored latex, etc., and is impregnated in the chromatographic material of the reagent phase 13.

【００２６】判定表示相１４は試薬相１３で標識化され
た検体を捕捉する第２抗体が含浸されている。判定表示
相１４では、第２抗体が標識化された検体と反応してサ
ンドイッチ複合体を形成することにより、着色或いは発
色するため、試料中における検体の有無を判定すること
ができる。The determination display phase 14 is impregnated with a second antibody that captures the sample labeled with the reagent phase 13. In the determination display phase 14, the second antibody reacts with the labeled sample to form a sandwich complex, which is colored or develops color, so that the presence or absence of the sample in the sample can be determined.

【００２７】反応終了表示部１５は判定表示相１４に連
続するように配置されており、判定表示相１４を通過し
た試料が展開される。反応終了表示部１５は上述したよ
うにクロマトグラフ材としてニトロセルロース繊維が使
用されており、このニトロセルロース繊維に指示薬を固
定化することにより構成されている。The reaction completion display portion 15 is arranged so as to be continuous with the judgment display phase 14, and the sample which has passed through the judgment display phase 14 is developed. As described above, the reaction completion display portion 15 uses nitrocellulose fiber as a chromatographic material, and is constituted by immobilizing an indicator on the nitrocellulose fiber.

【００２８】反応終了表示部１５の指示薬としては、酸
性染料が用いられる。この酸性染料としては、エオシン
Ｂ、エオシンＹ、フロキシンＢ、ブロムフェノールブル
ーの内の一種を選択することができる。An acid dye is used as an indicator of the reaction completion display section 15. As this acid dye, eosin
B, eosin Y, phloxine B, bromphenol bull
It can be selected one of a chromatography.

【００２９】エオシンＢ及びフロキシンＢは共に、陰イ
オン性キサンテン染料であり、酸性側で無色、アルカリ
性側の鮮明な桃色に発色する。具体的には、エオシンＢ
は約２．５以上のｐＨで桃色に発色し、フロキシンＢは
約３．３以上のｐＨで桃色に発色する。Both eosin B and phloxine B are anionic xanthene dyes, which are colorless on the acidic side and develop a bright pink color on the alkaline side. Specifically, Eosin B
Develops a pink color at a pH of about 2.5 or higher, and phloxine B develops a pink color at a pH of about 3.3 or higher.

【００３０】ブロムフェノールブルーは酸性指示薬とし
て使用されているスルホフタレイン系染料である。ブロ
ムフェノールブルーは酸性色が黄色、アルカリ性色が青
色であり、約３．０〜４．６のｐＨがその変色点となっ
ている。Bromphenol blue is a sulfophthalein dye used as an acid indicator. Bromphenol blue has an acidic color of yellow and an alkaline color of blue, and its discoloration point is at a pH of about 3.0 to 4.6.

【００３１】これらの酸性染料は、所定のｐＨの液状の
試料と接触することによって変色し、この変色によって
試薬相１３及び判定表示相１４を液状の試料が通過して
反応が終了したことを表示する。ここで、酸性染料はニ
トロセルロース繊維からなるクロマトグラフ材を染色
し、染色後はニトロセルロース繊維に固定化されて移動
することがない。このため、液状の試料がクロマトグラ
フ材を通過しても、酸性染料が流失することがなく、反
応の終了を長時間表示することができる。These acidic dyes change color when they come into contact with a liquid sample having a predetermined pH, and this color change indicates that the liquid sample has passed through the reagent phase 13 and the judgment display phase 14 and the reaction has ended. To do. Here, the acid dye stains the chromatographic material made of nitrocellulose fiber, and after dyeing, it is fixed to the nitrocellulose fiber and does not move. Therefore, even if the liquid sample passes through the chromatographic material, the acid dye is not washed away, and the end of the reaction can be displayed for a long time.

【００３２】酸性染料としては、以上の化合物の関連物
質を用いることができる。関連物質としては、例えば、
キサンテン染料であるエオシンＹを使用することができ
る。エオシンＹは上述した指示薬と同様にニトロセルロ
ース繊維を染色することにより固定化される。この固定
化状態で、エオシンＹは酸性領域で黄色から桃色に変色
するため、反応の終了を長時間表示することができる。As the acid dye, related substances of the above compounds can be used. As the related substance, for example,
The xanthene dye Eosin Y can be used. Eosin Y is immobilized by dyeing nitrocellulose fibers in the same manner as the above-mentioned indicator. In this immobilized state, Eosin Y changes color from yellow to pink in the acidic region, so that the end of the reaction can be displayed for a long time.

【００３３】以上の指示薬のニトロセルロース繊維への
固定化は、酸含有のアルコール溶液に指示薬を溶解して
ニトロセルロース繊維に吸収させ、乾燥させることによ
り簡単に行うことができる。すなわち、指示薬は酸性側
の色調でニトロセルロース繊維に固定されるものであ
る。The above-mentioned immobilization of the indicator on the nitrocellulose fiber can be easily carried out by dissolving the indicator in an acid-containing alcohol solution, allowing the nitrocellulose fiber to absorb the indicator, and drying. That is, the indicator is fixed to the nitrocellulose fiber with an acidic color tone.

【００３４】用いる酸としては、クエン酸、サリチル
酸、その他の有機酸を選択することができる。アルコー
ルとしては、エチルアルコール、液状のプロピルアルコ
ール等を使用することができる。このアルコールに対
し、指示薬が酸性色を保持できる酸性側のｐＨとなるよ
うに酸が添加される。As the acid to be used, citric acid, salicylic acid and other organic acids can be selected. As the alcohol, ethyl alcohol, liquid propyl alcohol and the like can be used. An acid is added to this alcohol so that the indicator has a pH on the acidic side that can maintain the acidic color.

【００３５】このように指示薬が酸性側の色調で固定化
されることにより、免疫測定具にコーティング剤（ブロ
ッキング剤）を塗布して指示薬と接触させても、酸性側
の色調が保持されるため、指示薬が一定時間変色するこ
とがない。このため、変色を戻す操作が不要となる。
又、指示薬はニトロセルロース繊維へ塗布後、乾燥する
ことにより、支持体１０に容易に固定することができ
る。Since the indicator is thus fixed in the acidic tone, the acidic tone is retained even when a coating agent (blocking agent) is applied to the immunoassay tool and brought into contact with the indicator. , The indicator does not discolor for a certain period of time. Therefore, the operation of returning the discoloration is unnecessary.
Further, the indicator can be easily fixed to the support 10 by coating the nitrocellulose fiber and then drying it.

【００３６】図２は別の実施の形態の免疫測定具２０を
示し、上述した実施の形態と同一の要素は同一の符号を
付して対応させてある。この形態の免疫測定具２０で
は、判定表示相１４及び反応終了表示部１５が同一のク
ロマトグラフ材２１に設けられている。このクロマトグ
ラフ材２１としては、反応終了表示部１５における指示
薬に染色される必要があるため、ニトロセルロース繊維
が使用される。FIG. 2 shows an immunoassay device 20 of another embodiment, in which the same elements as those in the above-mentioned embodiment are designated by the same reference numerals and correspond to each other. In the immunoassay device 20 of this aspect, the determination display phase 14 and the reaction end display portion 15 are provided on the same chromatographic material 21. As the chromatographic material 21, nitrocellulose fiber is used because it needs to be dyed with the indicator in the reaction completion display portion 15.

【００３７】又、反応終了表示部１５の下流側には、吸
収用クロマトグラフ材２２が反応終了表示部１５の下流
側に部分的に重なった状態で配置されている。吸収用ク
ロマトグラフ材２２は液状の試料が使用採取部１２から
反応終了表示部１５に円滑に展開できる毛細管力を付与
するために配置されるものであり、このため、濾紙等が
使用されている。従って、この形態では、液状の試料を
円滑且つ迅速に展開させることができる。On the downstream side of the reaction completion display section 15, an absorption chromatograph material 22 is arranged in a state of partially overlapping with the downstream side of the reaction completion display section 15. The absorption chromatographic material 22 is arranged in order to give a capillary force by which a liquid sample can be smoothly developed from the use sampling section 12 to the reaction completion display section 15, and for this reason, a filter paper or the like is used. . Therefore, in this form, the liquid sample can be smoothly and quickly developed.

【００３８】[0038]

【実施例】（実施例１）０．３Ｍのクエン酸を含有した
濃度６０％のエチルアルコール水溶液を調整し、このア
ルコール水溶液にエオシンＢを０．０２５重量％の濃度
となるように溶解した。一方、図１に示す免疫測定具１
０を妊娠検査用に調整した。そして、この免疫測定具１
０のニトロセルロース繊維からなる反応終了表示部１５
に上述したエオシンＢ溶解液を塗布し、乾燥することに
より反応終了表示部１５に固定した。エオシンＢは、反
応終了表示部１５のニトロセルロース繊維を染色して固
定化されるが、酸性側では無色のため、外見的にはニト
ロセルロース繊維の地色のままであった。Example 1 An aqueous 60% ethyl alcohol solution containing 0.3 M citric acid was prepared, and eosin B was dissolved in the aqueous alcohol solution to a concentration of 0.025% by weight. On the other hand, the immunoassay tool 1 shown in FIG.
0 was adjusted for pregnancy testing. And this immunoassay tool 1
End-of-reaction indicator 15 made of 0 nitrocellulose fiber
The above-mentioned eosin B solution was applied to the above and dried to fix it to the reaction completion display portion 15. Eosin B was dyed and fixed on the nitrocellulose fiber of the reaction completion indicating portion 15, but it was colorless on the acidic side, and therefore, the ground color of the nitrocellulose fiber was visually maintained.

【００３９】その後、免疫測定具１０をコーティング剤
に浸漬した。コーティング剤としては、１％ＢＳＡを含
む１０ｍＭ濃度のリン酸緩衝液を用い、このコーティン
グ剤に免疫測定具１０を３０秒間浸漬してコーティング
処理を行った。このコーティング処理によって、免疫測
定具１１の表面は、ｐＨ７．０に曝されたが、反応終了
表示部１５におけるエオシンＢ塗布部位は変色せず、乾
燥後はニトロセルロース繊維の地色のままであった。After that, the immunoassay tool 10 was dipped in a coating agent. As the coating agent, a 10 mM phosphate buffer solution containing 1% BSA was used, and the immunoassay tool 10 was dipped in the coating agent for 30 seconds for coating treatment. By this coating treatment, the surface of the immunoassay tool 11 was exposed to pH 7.0, but the Eosin B application site in the reaction completion display portion 15 did not discolor, and the ground color of the nitrocellulose fiber remained after drying. It was

【００４０】次に、この免疫測定具１０の試料採取部１
２に尿を滴下し、妊娠の有無を検査した。尿が反応終了
表示部１５に達したとき、反応終了表示部１５における
エオシンＢの塗布部位が鮮やかな桃色に変色し、尿が試
薬相１３、判定表示相１４を通過し、反応が行われたこ
とが明確に確認できた。Next, the sample collecting section 1 of this immunoassay tool 10
The urine was dropped on 2 and examined for pregnancy. When the urine reaches the reaction end display section 15, the Eosin B application site in the reaction end display section 15 changes to a bright pink color, and the urine passes through the reagent phase 13 and the judgment display phase 14 to cause the reaction. It was confirmed clearly.

【００４１】その後、免疫測定具１０を室温に放置して
反応終了表示部１５の変化を観察したが、４８時間経過
してもエオシンＢの桃色が退色したり、変色することが
なかった。これにより、反応の終了を長時間、表示でき
ることが実証された。After that, the immunoassay tool 10 was left at room temperature and the change in the reaction completion display portion 15 was observed. However, the pink color of Eosin B did not fade or discolor even after 48 hours. This proves that the end of the reaction can be displayed for a long time.

【００４２】（実施例２）フロキシンＢ、ブロムフェノ
ールブルーを妊娠検査用の免疫測定具にそれぞれ別個に
固定化した。固定化は実施例１と同様な条件及び操作で
行った。なお、フロキシンＢは０，０２５重量％の濃
度、ブロムフェノールブルーは０．８重量％の濃度とな
るように調整した。(Example 2) Phloxine B and bromphenol blue were separately immobilized on an immunoassay tool for pregnancy test. Immobilization was carried out under the same conditions and operations as in Example 1. Phloxine B was adjusted to a concentration of 0.025% by weight, and bromphenol blue was adjusted to a concentration of 0.8% by weight.

【００４３】これらの免疫測定具の試料採取部１２に対
し、実施例１と同様に尿を滴下した。これにより、フロ
キシンＢを用いた実施例では、桃色に変色し、ブロムフ
ェノールブルーを用いた実施例では、青色に変色し、反
応の終了をそれぞれ明確に確認できた。その後、実施例
１と同様に室温に放置して経時的に観察したが、４８時
間経過しても変色や退色がなかった。Urine was dropped on the sample collecting portion 12 of these immunoassay devices in the same manner as in Example 1. As a result, in the example using Phloxine B, the color was changed to pink, and in the example using bromphenol blue, the color was changed to blue, and the end of the reaction was clearly confirmed. Then, the sample was left at room temperature and observed with time in the same manner as in Example 1, but no discoloration or fading was observed even after 48 hours.

【００４４】[0044]

【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
エオシンＢ、フロキシンＢ、ブロムフェノールブルー等
の酸性染料をニトロセルロース繊維に固定化して反応終
了表示部１５としているため、コーティング剤（ブロッ
キング剤）を塗布しても変色することがなく、しかも、
試料の通過と共に流失することがないため、判定の終了
を確実に、しかも長時間表示することができる。As described above, according to the present invention,
Acid reaction dyes such as eosin B, phloxine B, and bromphenol blue are immobilized on the nitrocellulose fiber to form the reaction end indicator portion 15. Therefore, even if a coating agent (blocking agent) is applied, discoloration does not occur, and moreover,
Since the sample does not flow away as it passes, it is possible to reliably display the end of the determination and display it for a long time.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】本発明の一実施の形態の免疫測定具の断面図で
ある。FIG. 1 is a cross-sectional view of an immunoassay device according to an embodiment of the present invention.

【図２】別の実施の形態の免疫測定具の断面図である。FIG. 2 is a sectional view of an immunoassay device according to another embodiment.

【図３】イムノクロマトグラフ法に一般的に用いられて
いる免疫測定具の断面図である。FIG. 3 is a cross-sectional view of an immunoassay tool generally used in immunochromatography.

【符号の説明】[Explanation of symbols]

１０、２０ 免疫測定具 １１ 支持体 １２ 試料採取部 １３ 試薬相 １４ 判定表示部 １５ 反応終了表示部 10, 20 Immunoassay tool 11 Support 12 Sampling section 13 Reagent phase 14 Judgment display section 15 Reaction end display

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 中川 かおる 富山県富山市荒川１−１−25 株式会社 ニッポンジーン免疫研究所内 (56)参考文献 特開 平４−353764（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−83911（ＪＰ，Ａ) 特開 平11−94819（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−201689（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−35751（ＪＰ，Ａ) 特許2942087（ＪＰ，Ｂ２) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 33/543 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Kaoru Nakagawa 1-1-25 Arakawa, Toyama City, Toyama Prefecture Nippon Gene Immunology Institute (56) Reference JP-A-4-353764 (JP, A) JP-A-7 -83911 (JP, A) JP 11-94819 (JP, A) JP 6-201689 (JP, A) JP 7-35751 (JP, A) JP 2942087 (JP, B2) (58) Fields investigated (Int.Cl. ⁷ , DB name) G01N 33/543

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】 液状の試料を吸収して展開し、試料中の
検体を標識化した後、標識化された検体を捕捉して判定
表示を行うイムノクロマトグラフ法に用いる免疫測定具
において、 前記判定表示を行う部位に反応終了表示部が連続してお
り、この反応終了表示部が、酸含有の低級アルコール溶
液に溶解した酸性染料からなる指示薬をニトロセルロー
ス繊維からなるクロマトグラフ材に吸収させて乾燥する
ことにより構成されていることを特徴とする免疫測定
具。1. An immunoassay instrument for use in an immunochromatographic method, wherein a liquid sample is absorbed and developed, a sample in the sample is labeled, and then the labeled sample is captured and displayed for determination. The reaction completion display part is continuous to the area where the display is made, and the reaction completion display part absorbs the indicator consisting of the acid dye dissolved in the acid-containing lower alcohol solution into the chromatograph material composed of nitrocellulose fiber and is dried. An immunoassay device characterized by being configured by: 【請求項２】 前記酸性染料は、エオシンＢ、エオシン
Ｙ、フロキシンＢ、ブロムフェノールブルーの内の少な
くとも一種であることを特徴とする請求項１記載の免疫
測定具。 2. The acid dyes are eosin B and eosin.
Y, Phloxine B, Bromphenol Blue
Immunity according to claim 1, characterized in that it is at least one
Measuring tool.