JP3376859B2 - Method for producing ribitol - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、リビトールの製造
方法に関し、より詳細には微生物を用いて糖からリビト
ールを製造する方法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for producing ribitol, and more particularly to a method for producing ribitol from sugar using a microorganism.

【０００２】[0002]

【従来の技術】近年、リビトールは生物の構成糖として
のみならず、医薬および農薬の中間原料として注目され
ている。従来、微生物を用いてリビトールを製造する方
法としてはＤ−リボースを原料として酵素反応により製
造する方法、グルコースなどの発酵により製造する方
法、および藻類の炭酸固定による方法が知られている。
Ｄ−リボースを原料とする方法としては、キャンデ#ィ
ダ ポリモルファ（Candidapolymorpha）あるいはトル
ロプシス ファマタ（Torulopsis famata）を用いる方
法（特公昭４５−２０７１号公報）、およびコリネバク
タテリウム エスピー（Corynebacterium sp.）を用い
る方法（特公昭４９−１２７１８号公報）が、グルコー
スなどの糖の発酵による方法としては、ピキア ギリエ
ルモンディ（Pichia guilliermondii）を用いる方法（B
iochem.Physiol.Pflanz 175(8/9)732(1980))およびモニ
リエラ トメントーサ バー ポリニス（Moniliella t
omentosavar pollinis）を用いる方法（特公平６−３０
５９１号公報、特公平６−３０５９２号公報、特公平６
−３０５９３号公報、特公平６−３０５９４号公報）
が、藻類による方法としてはトレボウキシア（Trebouxi
a）属を用いる方法（特公昭４４−１６３５０号公報）
がそれぞれ報告されている。2. Description of the Related Art In recent years, ribitol has been attracting attention as an intermediate raw material for pharmaceuticals and agricultural chemicals as well as a constituent sugar of organisms. Conventionally, as a method of producing ribitol using a microorganism, a method of producing D-ribose as a raw material by an enzymatic reaction, a method of producing by fermentation of glucose or the like, and a method of carbon dioxide fixation of algae are known.
The D- ribose as a method for the raw material, candy # I da polymorpha (Candidapolymorpha) or Torulopsis Famata (Torulopsis Famata) method (JP-B 45-2071 Patent Publication) using, and Corynebacterium Bac vertical Corynebacterium sp (Corynebacterium sp.) As a method of fermenting sugars such as glucose, a method of using Pichia guilliermondii (B).
iochem.Physiol.Pflanz 175 (8/9) 732 (1980)) and Moniliella Tormentosa Bar Polynis ( Moniliella t
Method using omentosavar pollinis (Japanese Patent Publication No. 6-30)
591, Japanese Patent Publication 6-30592, Japanese Patent Publication 6
-30593, Japanese Patent Publication No. 6-30594)
However, the method using algae is Trebouxia
a ) Method using genus (Japanese Patent Publication No. 44-16350)
Are reported respectively.

【０００３】[0003]

【発明が解決しようとする課題】実際に従来の方法を用
いて工業的規模でリビトールの製造を行う場合、種々の
問題点が生じる。具体的には、藻類を用いた生産設備は
複雑になりがちであり、また微生物を用いた従来法では
菌体の培養と反応の二段階の行程が必要であるためコス
トがかかるという難点がある。加えてＤ−リボースは原
料として必ずしも安価ではないため、従来法の中では安
価な原料であるグルコースなどの糖の発酵によりリビト
ールを製造する方法が最も好ましいが、従来のモニリエ
ラ トメントーサ バー ポリニス（Moniliella tomen
tosa var pollinis）などを用いる方法ではエリスリト
ールなどの他の糖アルコールは効率的に製造できるもの
の、リビトールに関しては必ずしも満足のいく生産性を
得られていない。そこで、安価な糖類を用いて一段階の
発酵でリビトールを製造する方法、リビトールを効率よ
く製造する方法の開発が求められていた。When actually producing ribitol on an industrial scale by using the conventional method, various problems occur. Specifically, the production equipment using algae tends to be complicated, and the conventional method using microorganisms has a disadvantage that it requires a two-step process of culturing and reaction of the bacterial cells, which is costly. . In addition, since D-ribose is not always cheap as a raw material, among the conventional methods, the method of producing ribitol by fermentation of sugar such as glucose, which is an inexpensive raw material, is the most preferable, but the conventional Moniliella tomentosapor polynis ( Moniliella tomen)
Although other sugar alcohols such as erythritol can be efficiently produced by the method using tosa var pollinis ), ribitol does not always have satisfactory productivity. Therefore, there has been a demand for development of a method for producing ribitol by one-step fermentation using inexpensive saccharides, and a method for efficiently producing ribitol.

【０００４】[0004]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上述の問
題を解決すべく鋭意検討した結果、トリコスポロノイデ
ス（Trichosporonoides）属に属するある種の微生物が
グルコースからリビトールを効率的に製造する能力を有
することを見いだし、本発明を完成するに至った。即
ち、本発明の要旨は、リビトールの対糖収率が５％以上
である、および／または、リビトールのエリスリトール
に対する生産比率が０．２以上であるトリコスポロノイ
デス（Trichosporonoides）属に属する微生物と糖を接
触させ、好気的発酵によりリビトールを産生することを
特徴とするリビトールの製造方法に存し、更には、トリ
コスポロノイデス（Trichosporonoides）属に属する微
生物が、トリコスポロノイデス マディダ（Trichospor
onoides madida）、トリコスポロノイデス ニグレスセ
ンス（Trichosporonoides nigrescens）、トリコスポロ
ノイデス エドセファリス（Trichosporonoides oedoce
phalis）および／または、トリコスポロノイデス メガ
チリエンシス（Trichosporonoides megachillensis）に
属する微生物であることに存する。[Means for Solving the Problems] As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that certain microorganisms belonging to the genus Trichosporonoides efficiently produce ribitol from glucose. It has been found that the present invention has the ability to do so, and completed the present invention. That is, the gist of the present invention is a microorganism belonging to the genus Trichosporonoides, which has a ribitol yield of 5% or more of sugar and / or a production ratio of ribitol to erythritol of 0.2 or more. There is a method for producing ribitol, which comprises contacting sugar and producing ribitol by aerobic fermentation. Furthermore, a microorganism belonging to the genus Trichosporonoides is Trichosporonoides Madida.
onoides madida), Trichosporonoides nigrescens, Trichosporonoides edocepharis
phalis) and / or Trichosporonoides megachillensis.

【０００５】本発明で使用するトリコスポロノイデス属
に属する微生物としては、グルコースからリビトールを
製造する能力を有する微生物であれば特に限定されない
が、好ましくは、トリコスポロノイデス マディダ（Tr
ichosporonoides madida）、トリコスポロノイデス ニ
グレスセンス（Trichosporonoides nigrescens）、トリ
コスポロノイデス エドセファリス（Trichosporonoide
s oedocephalis）、トリコスポロノイデス メガチリエ
ンシス（Trichosporonoides megachillensis）の種に属
する微生物が挙げられ、さらに好ましくは、トリコスポ
ロノイデス エドセファリス（Trichosporonoides oedo
cephalis）とトリコスポロノイデス メガチリエンシス
（Trichosporonoides megachillensis）の種に属する微
生物が挙げられる。なお、上記微生物は、変異株、ある
いは細胞融合もしくは遺伝子組み換え法などの遺伝的手
法により誘導される組み換え株などいずれの株であって
もよい。本微生物はリビトール以外にエリスリトールと
グリセロールを副生する場合があるが、例えば、紫外線
照射やＮ-メチル-Ｎ'-ニトロ-Ｎ-ニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）処理、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）
処理、亜硝酸処理、アクリジン処理等通常知られた方法
により、リビトールの生産比率がよく、逆にエリスリト
ールやグリセロールの生産性の低い変異株を取得するこ
とは有効である。これらの変異株を用いることによりグ
ルコースを効率的にリビトールに変換できるのみなら
ず、その後のリビトールの分離・精製工程における負荷
を著しく軽減することが出来る。またさらに同様の変異
処理により、培養時の発泡の少ない変異株を取得するこ
とも、リビトール生産性向上に大変有効である。The microorganism belonging to the genus Trichosporonoides used in the present invention is not particularly limited as long as it is a microorganism having an ability to produce ribitol from glucose, but it is preferable to use Trichosporonoides madida (Tr
ichosporonoides madida), Trichosporonoides nigrescens, Trichosporonoides edcephalis
s oedocephalis), a microorganism belonging to the species of Trichosporonoides megachillensis (Trichosporonoides megachillensis), and more preferably, Trichosporonoides edsephalis (Trichosporonoides oedo).
cephalis) and trichosporonoides megachillensis (Trichosporonoides megachillensis). The above microorganism may be any strain such as a mutant strain or a recombinant strain derived by a genetic technique such as cell fusion or gene recombination. This microorganism may produce erythritol and glycerol as byproducts in addition to ribitol. For example, ultraviolet irradiation, N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG) treatment, ethyl methanesulfonate (EMS)
It is effective to obtain a mutant strain having a high ribitol production ratio and a low erythritol or glycerol productivity by a commonly known method such as treatment, nitrite treatment, or acridine treatment. By using these mutants, not only glucose can be efficiently converted into ribitol, but also the load in the subsequent separation and purification step of ribitol can be significantly reduced. Furthermore, it is also very effective for improving ribitol productivity to obtain a mutant strain with less foaming during culture by the same mutation treatment.

【０００６】[0006]

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明で使用する上記トリコスポロノイデス属に属する
微生物菌株の具体例としては、例えばトリコスポロノイ
デス マディダ（Trichosporonoides madida）に属する
微生物としてＣＢＳ２４０．７９が、トリコスポロノイ
デス ニグレスセンス（Trichosporonoides nigrescen
s）に属する微生物としてＣＢＳ２６８．８１、２６
９．８１が、トリコスポロノイデスエドセファリス（Tr
ichosporonoides oedocephalis）に属する微生物として
ＣＢＳ６４９．６６、ＣＢＳ５６８．８５が、トリコス
ポロノイデス メガチリエンシス（Trichosporonoides
megachillensis）に属する微生物としてＣＢＳ５６７．
８５が挙げられる。また上記微生物は、ＵＶ照射、Ｎ−
メチル−Ｎ’−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）処理、エ
チルメタンスルホネート（ＥＭＳ）処理、亜硝酸処理、
アクリジン処理等による変異株、あるいは細胞融合もし
くは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法により誘導され
る組換え株などのいずれの株であってもよい。変異株の
具体例としてはＭＣＩ３４４２株が挙げられる。ＭＣＩ
３４４２株は、トリコスポロノデス メガチリエンジス
（Trichosporonoides megachiliensis）ＣＢＳ５６７．
８５をＮＴＧ変異処理した後、紫外線照射処理を２度行
って得られた変異株である。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The present invention will be described in detail below.
Specific examples of the microbial strain belonging to the genus Trichosporonoides used in the present invention include, for example, CBS240.79 as a microorganism belonging to Trichosporonoides madida, and Trichosporonoides nigrescen.
s) as microorganisms belonging to CBS268.81, 26
9.81 is Trichosporonoides Ed Cephalis (Tr
CBS649.66 and CBS568.85 are microorganisms belonging to ichosporonoides oedocephalis, and Trichosporonoides trichosporonoides
megachillensis) as a microorganism belonging to CBS567.
85 is mentioned. Further, the above-mentioned microorganisms are UV-irradiated, N-
Methyl-N'-nitrosoguanidine (NTG) treatment, ethyl methanesulfonate (EMS) treatment, nitrous acid treatment,
It may be any strain such as a mutant strain treated with acridine or the like, or a recombinant strain induced by a genetic technique such as cell fusion or gene recombination. A specific example of the mutant strain is MCI3442 strain. MCI
The strain 3442 is Trichosporonoides megachiliensis CBS567.
This is a mutant strain obtained by subjecting 85 to NTG mutation treatment and then performing ultraviolet irradiation treatment twice.

【０００７】上記の菌株のうち、ＭＣＩ３４４２株以外
の菌株は全て公知の菌株であり、セントラルビューロー
フォーシュメルカルチャーズ（ＣＢＳ）から容易に入手
することができる。またＭＣＩ３４４２株は、通産省工
業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１６
２５４として寄託されている。変異株ＭＣＩ３４４２に
ついての菌学的性状は以下の通りである。Of the above strains, all strains other than the MCI3442 strain are known strains, and can be easily obtained from Central Bureau Foschmer Cultures (CBS). In addition, MCI3442 strain was sent to the Ministry of International Trade and Industry, Agency of Industrial Science and Technology, Biotechnology Research Institute, and FERM P-16.
Deposited as 254. The mycological properties of the mutant strain MCI3442 are as follows.

【０００８】形態学的特徴：ＬＣＡ上、２４℃培養で初
め白色〜黄味白色、培養１週間後に黄褐色、２週間以上
の古い培養では暗い黄茶色に変色する。菌の生育は中程
度、コウボ様の出芽により増殖する。出芽細胞は初め、
無色、後にやや厚膜化して、淡褐色を呈する、楕円形、
卵形あるいは亜球形、3.8-6.3×3.0-5.0μm。１回から
３〜４回出芽して増殖する、多極出芽。コウボ様の出芽
と同時に基底菌糸が伸張する。基底菌糸は隔壁を有し、
分枝する、幅1.3-2.5μm、初め無色、後に褐色になる。
菌糸は断片状に切れて分節型の分生子になる、菌糸の側
面あるいは先端部より出芽型の分生子を形成する。分節
型分生子は円筒形〜樽型、長さは変化に富む、幅は1.5-
5.0μm、初め無色、後に褐色になる。出芽型分生子は基
底菌糸の側面及び先端に形成される、単一あるいは２、
３個の連鎖となって形成される、亜球形〜楕円形、4.4-
9.4×2.8-4.4μm、初め無色、後に褐色、やや厚膜化す
る。Morphological characteristics: on LCA, it initially turns white to yellowish white at 24 ° C., yellowish brown after 1 week of culture, and dark yellowish brown at 2 weeks or more old culture. The growth of the fungus is moderate, and it grows by sprouting like a yeast. The budding cells are
Colorless, slightly thicker film later, light brown color, oval shape,
Oval or subspherical, 3.8-6.3 × 3.0-5.0 μm. Multipolar budding, which buds and grows once to 3 to 4 times. The basal hyphae grow at the same time as the yeast-like germination. Basal hypha has a septum,
Branching, width 1.3-2.5 μm, initially colorless, then brown.
The hyphae are cut into fragments to form segmental conidia, and budding-type conidia are formed from the side or tip of the hyphae. Segmental conidia are cylindrical to barrel-shaped, variable in length, width 1.5-
5.0 μm, initially colorless, then brown. Budding conidia are single or two, which are formed on the sides and tips of the basal hyphae.
Subspherical to elliptical, 4.4- formed by three chains
9.4 × 2.8-4.4 μm, initially colorless, then brown, and slightly thickened.

【０００９】 生理学的特徴： 生育温度 ： ９℃〜３７℃（ＰＤＡ上、１０日間培養） 最適生育温度：２７℃〜３０℃ 生育ｐＨ ：４〜９（ＬＣＡ液体培地上、１０日間培養） 最適生育ｐＨ：５〜６[0009]   Physiological features:       Growth temperature: 9 ° C to 37 ° C (10 days culture on PDA)       Optimal growth temperature: 27 ° C to 30 ° C       Growth pH: 4 to 9 (cultured on LCA liquid medium for 10 days)       Optimal growth pH: 5-6

【００１０】本菌株（ＭＣＩ３４４２）は１）コウボ状
の出芽型細胞を有する、２）分節型分生子と出芽型分生
子の二形性を有する、３）出芽型分生子は求頂的に形成
され、同調的に形成されない、特徴を有す。これらの特
徴に基づいて、Trichosporonoides megachiliensis（Ｃ
ＢＳ５６７．８５）の親株と対比すると共に、G.D.Ingl
is et al.G.（１９９２）のモノグラフ（Mycologia ８
４：５５５ー５７０）の原記載と照合した結果、本変異
株の性状はTrichosporonoides megachiliensisの親株の
性状及び原記載によく合致した。従って本変異株はTric
hosporonoides megachiliensisと同定した。本発明の製
造方法においては、上記微生物を１種あるいは２種以上
が用いられる。The present strain (MCI3442) has 1) yeast-like budding-type cells, 2) dimorphism of segmental conidia and budding-type conidia, and 3) budding-type conidia formed atopically. And is not synchronously formed. Based on these characteristics, Trichosporonoides megachiliensis (C
BS567.85) and the parent strain of GDIngl
is et al. G. (1992) monograph (Mycologia 8
4: 555-570) , the properties of this mutant strain were in good agreement with those of the parent strain of Trichosporonoides megachiliensis . Therefore, this mutant strain is Tric
It was identified as hosporonoides megachiliensis . In the production method of the present invention, one kind or two or more kinds of the above microorganisms are used.

【００１１】次に、本発明の製造方法について具体的に
説明する。本発明の製造方法において、微生物はグルコ
ースを炭素源として定法通り培養される。つまり、微生
物は６０％（W/v）以下、好ましくは２０〜４５％のグ
ルコースを含む培地に植菌される。炭素源としては本微
生物が資化しうるフルクトースなどの炭水化物、グリセ
ロールなどのアルコール類、有機酸などを適宜加えるこ
とができる。さらにこの培地には本微生物が資化しうる
窒素源が含まれる。窒素源としては、酵母エキス、コー
ンスティープリカー、ＮＺアミン、トリプトース、ペプ
トン、ポリペプトン、肉エキス、魚肉エキス、その他の
有機窒素源、あるいは硝酸ナトリウム、その他の無機窒
素源、好ましくは、酵母エキスやコーンスティープリカ
ー、魚肉エキス、大豆粉、大豆タンパク質、更に好まし
くは酵母エキスや魚肉エキス、大豆由来物質が適宜使用
される。培地中に含まれる窒素源の初発濃度は、好まし
くは酵母エキスの場合０．５〜４．０％、コーンスティ
ープリカーや魚肉エキス、大豆由来物質の場合、１．０
〜８．０％である。好ましい窒素源の濃度はグルコース
の濃度に影響される。上述の炭素源、窒素源のほかに、
無機イオンやビタミン類を必要に応じ添加することは有
効である。無機イオンとしては、リン酸イオン、マグネ
シウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、モリブデン
イオン、その他が用いられる。ビタミン類としては、チ
アミン、イノシトール、パントテン酸、ニコチン酸アミ
ドなどが挙げられる。また、上述のグルコースその他の
炭素源、窒素源、無機イオン、ビタミン類は、必要に応
じて培養中の適当な時点で追補添加してもよい。Next, the manufacturing method of the present invention will be specifically described. In the production method of the present invention, the microorganism is cultivated by a conventional method using glucose as a carbon source. That is, the microorganism is inoculated into a medium containing 60% (W / v) or less, preferably 20 to 45% of glucose. As the carbon source, carbohydrates such as fructose which can be assimilated by the microorganism, alcohols such as glycerol, organic acids and the like can be appropriately added. Further, this medium contains a nitrogen source which can be assimilated by the microorganism. As the nitrogen source, yeast extract, corn steep liquor, NZ amine, tryptose, peptone, polypeptone, meat extract, fish meat extract, other organic nitrogen sources, sodium nitrate, other inorganic nitrogen sources, preferably yeast extract or corn Steep liquor, fish meat extract, soybean powder, soybean protein, more preferably yeast extract, fish meat extract, and soybean-derived substance are appropriately used. The initial concentration of the nitrogen source contained in the medium is preferably 0.5 to 4.0% in the case of yeast extract, and 1.0 in the case of corn steep liquor, fish meat extract and soybean-derived substance.
~ 8.0%. The preferred concentration of nitrogen source is influenced by the concentration of glucose. In addition to the carbon and nitrogen sources mentioned above,
It is effective to add inorganic ions and vitamins as needed. As the inorganic ions, phosphate ions, magnesium ions, iron ions, manganese ions, molybdenum ions, and the like are used. Examples of vitamins include thiamine, inositol, pantothenic acid, nicotinic acid amide, and the like. In addition, the above-mentioned glucose and other carbon sources, nitrogen sources, inorganic ions, and vitamins may be supplementarily added at appropriate points during the culture, if necessary.

【００１２】培養は好気的条件下で行う。本発明におい
て、本微生物はリビトール以外にエリスリトールとグリ
セロールを副生する場合があるが、リビトールの生成比
率を効率よくするためには十分な通気を行うことが重要
である。培養温度は２０〜３７℃、好ましくは２７〜３
２℃で、２４時間から２週間行う。The culture is carried out under aerobic conditions. In the present invention, the present microorganism may produce erythritol and glycerol as a by-product in addition to ribitol, but it is important to perform sufficient aeration in order to improve the production ratio of ribitol. The culture temperature is 20 to 37 ° C, preferably 27 to 3
Perform at 24C for 2 weeks at 2 ° C.

【００１３】培養により得られたリビトールは、培養終
了液から公知の方法により分離精製できる。即ち、培養
終了後まず微生物菌体を遠心分離等の既存の方法で除去
する。除菌に先立ち、培養終了液に熱を加え、殺菌を行
ってもよい。除菌された液はリビトール以外に、場合に
よりエリスリトール、グリセロール、さらには残存グル
コースが含まれるが、これらも通常の方法、即ちクロマ
トグラフィーや晶析技術を用いることで容易に除去でき
る。工業的には、イオン交換樹脂を用いた疑似移動相型
クロマトグラフィーにより分離することも可能である。
分離精製の工程においては、必要に応じて脱塩、脱色な
ど、通常の糖の精製における操作を加えることもでき
る。The ribitol obtained by the culture can be separated and purified from the culture-finished solution by a known method. That is, after completion of the culture, the microbial cells are first removed by an existing method such as centrifugation. Prior to sterilization, heat may be applied to the culture-finished solution for sterilization. The sterilized liquid contains erythritol, glycerol, and residual glucose in addition to ribitol in some cases, but these can also be easily removed by an ordinary method, that is, chromatography or crystallization technique. Industrially, it is also possible to separate by pseudo mobile phase type chromatography using an ion exchange resin.
In the separation and purification step, operations such as desalting and decoloring, which are common in sugar purification, can be added if necessary.

【００１４】[0014]

【実施例１】以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体
的に説明するが、その要旨を越えない限り本発明の技術
分野における通常の変更をすることができる。 実施例１ ａ）使用微生物 菌株Ａ Trichosporonoides madida ＣＢＳ２４０．７９ 菌株Ｂ Trichosporonoides nigrescens ＣＢＳ２６８．８１ 菌株Ｃ Trichosporonoides nigrescens ＣＢＳ２６９．８１ 菌株Ｄ Trichosporonoides oedocephalis ＣＢＳ５６８．８５ 菌株Ｅ Trichosporonoides megachillensis ＣＢＳ５６７．８５Example 1 The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but ordinary modifications in the technical field of the present invention can be made without departing from the scope of the invention. Example 1 a) Microorganisms used Strain A Trichosporonoides madida CBS240.79 Strain B Trichosporonoides nigrescens CBS268.81 Strain C Trichosporonoides nigrescens CBS269.81 Strain D Trichosporonoides oedocephalis CBS568.85 CBS568.85 CBS567.

【００１５】ｂ）培養方法 ３０％グルコース、１．０％酵母エキスよりなる培地２
０ｍｌを入れた２００ｍｌバッフル付きフラスコに、上
記ａ）記載の菌株Ａ〜Ｈをそれぞれ接種した。これらの
バッフル付きフラスコは１６０ｒｐｍで回転する振とう
培養機にセットされ、３０℃で７日間培養が行われた。B) Culture method Medium 2 consisting of 30% glucose and 1.0% yeast extract
A 200 ml baffled flask containing 0 ml was inoculated with each of the strains A to H described in a) above. These baffled flasks were set in a shaking culture machine rotating at 160 rpm, and culturing was carried out at 30 ° C. for 7 days.

【００１６】ｃ）リビトールの生産確認 まず上記ｂ）記載の培養にて得られた培養終了液を各々
遠心分離し、微生物菌体を除去した。得られた培養上清
に含まれるリビトールなどの糖類含量を高速液体クロマ
トグラフィーにより下記の条件で測定した。各糖質の保
持時間は下記分析条件において、それぞれグルコース１
０．５７分、リビトール１２．２２分、エリスリトール
１３．３６分、グリセロール１５．０９分である。また
上記菌株Ａ〜Ｈいずれにおいても、リビトールおよびエ
リスリトール、グリセロール以外の糖質の生産は確認さ
れなかった。C) Confirmation of ribitol production First, the culture-finished liquids obtained by the culture described in b) above were centrifuged to remove microbial cells. The content of sugars such as ribitol contained in the obtained culture supernatant was measured by high performance liquid chromatography under the following conditions. The retention time of each carbohydrate is glucose 1 under the following analysis conditions.
0.57 minutes, ribitol 12.22 minutes, erythritol 13.36 minutes, and glycerol 15.09 minutes. In addition, production of sugars other than ribitol, erythritol, and glycerol was not confirmed in any of the above strains A to H.

【００１７】高速液体クロマトグラフィー分析条件 カ ラ ム： ＭＣＩ ＧＥＬ ＣＫ０８ＥＨ ８mmI.D.×３００mm （三菱化学株式会社製） 溶 離 液： １Ｎ リン酸水溶液 流 速： ０．６ｍｌ／分 カラム温度： ５０℃ 検 出 器： ＲＩ ｄ）結果 各菌株の生産結果は次表に示す通りである。High performance liquid chromatography analysis conditions Column: MCI GEL CK08EH 8mm I.D. × 300mm (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) Dissolution liquid: 1N phosphoric acid aqueous solution Flow rate: 0.6 ml / min Column temperature: 50 ℃ Detector: RI d) Results The production results of each strain are shown in the following table.

【００１８】[0018]

【表１】 ──────────────────────────────────── 菌株 残存グルコース リビトール エリスリトール グリセロール g/l g/l g/l g/l ──────────────────────────────────── Ａ ０ １２．９ ５１．３ ５８．６ Ｂ ０ １５．０ １３５．９ ３０．８ Ｃ ０ １９．９ ８３．２ ３１．１ Ｄ ０ ５４．０ ７１．３ ２３．５ Ｅ ０ ７３．１ ４６．２ ２９．３ ────────────────────────────────────[Table 1] ────────────────────────────────────  Strain Residual glucose Ribitol Erythritol Glycerol             g / l g / l g / l g / l ────────────────────────────────────  A 0 12.9 51.3 58.6  B 0 15.0 135.9 30.8  C 0 19.9 83.2 31.1  D 0 54.0 71.3 23.5  E 0 73.1 46.2 29.3 ────────────────────────────────────

【００１９】実施例２ 実施例１における菌株Ｅ（Trichosporonoides.megachil
lensis ＣＢＳ５６７．８５）を親株とした変異株ＭＣ
Ｉ３４４２と菌株Ｅを各々、３０％グルコース、２．０
％魚肉エキスよりなる培地２０ｍｌを入れた２００ｍｌ
バッフル付きフラスコに接種した。これらのバッフル付
きフラスコは１６０ｒｐｍで回転する振とう培養機にセ
ットされ、３０℃で７日間培養が行われた。得られた培
養液中のリビトールその他の糖質生産量を実施例１と同
様の方法で測定した。両菌株の生産結果は次表に示す通
りである。Example 2 Strain E ( Trichosporonoides.megachil in Example 1
lensis CBS567.85) as a parent strain MC
I3442 and strain E, 30% glucose, 2.0
200 ml containing 20 ml of medium consisting of% fish meat extract
Baffled flasks were inoculated. These baffled flasks were set in a shaking culture machine rotating at 160 rpm, and culturing was carried out at 30 ° C. for 7 days. The amount of ribitol and other sugars produced in the obtained culture broth was measured by the same method as in Example 1. The production results of both strains are shown in the following table.

【００２０】[0020]

【表２】 ────────────────────────────── 菌株 残存ク゛ルコース リヒ゛トール エリスリトール ク゛リセロール g/l g/l g/l g/l ────────────────────────────── Ｅ ０ ８０．８ ６１．６ ２４．１ MCI3442 ０ １０６．３ ３．５ ４７．０ ──────────────────────────────[Table 2]       ──────────────────────────────           Strain Remaining glucose Lithitol Erythritol Glycerol                      g / l g / l g / l g / l       ──────────────────────────────         E 0 80.8 61.6 24.1        MCI3442 0 106.3 3.5 47.0       ──────────────────────────────

【００２１】[0021]

【発明の効果】本発明の製造方法により、安価な糖類を
用いて一段階の発酵で、かつ効率よくリビトールを製造
することができる。EFFECT OF THE INVENTION According to the production method of the present invention, ribitol can be efficiently produced in a one-step fermentation using an inexpensive saccharide.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 長 洋 神奈川県横浜市青葉区鴨志田町1000番地 三菱化学株式会社横浜総合研究所内 (56)参考文献 特開 平９−252765（ＪＰ，Ａ) 特開 平11−32754（ＪＰ，Ａ) 特開 平10−94398（ＪＰ，Ａ) 特開 平11−4699（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12P 3/00 - 11/00 ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＩＤ Ｓ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ)─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Hiroshi Cho, 1000 Kamoshida-cho, Aoba-ku, Yokohama-shi, Kanagawa Mitsubishi Chemical Corporation Yokohama Research Institute (56) Reference JP-A-9-252765 (JP, A) JP HEI 11-32754 (JP, A) JP HEI 10-94398 (JP, A) HEI 11-4699 (JP, A) (58) Fields investigated (Int.Cl. ⁷ , DB name) C12P 3 / 00-11/00 BIOSIS / MEDLINE / WPID S (STN) CA (STN)

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】 リビトールの対糖収率が５％以上であ
る、および／または、リビトールのエリスリトールに対
する生産比率が０．２以上であるトリコスポロノイデス
（Trichosporonoides）属に属する微生物と糖を接触さ
せ、好気的発酵によりリビトールを産生することを特徴
とするリビトールの製造方法。 1. The yield of ribitol with respect to sugar is 5% or more.
And / or against erythritol of ribitol
A method for producing ribitol, which comprises contacting a sugar with a microorganism belonging to the genus Trichosporonoides having a production ratio of 0.2 or more to produce ribitol by aerobic fermentation. 【請求項２】 トリコスポロノイデス（Trichosporonoi
des）属に属する微生物が、トリコスポロノイデス マ
ディダ（Trichosporonoides madida）、トリコスポロノ
イデス ニグレスセンス（Trichosporonoides nigresce
ns）、トリコスポロノイデス エドセファリス（Tricho
sporonoides oedocephalis）、および／またはトリコス
ポロノイデス メガチリエンシス（Trichosporonoides
megachillensis）の種に属する微生物であることを特徴
とする請求項１に記載の製造方法。2. Trichosporonoi
the microorganism belonging to the des) genus, Trichosporonoides Madida (Trichosporonoides madida), Trichosporonoides Niguresusensu (Trichosporonoides nigresce
ns), Trichosporonoides Ed Cephalis (Tricho
sporonoides oedocephalis) and / or Trichosporonoides (Trichosporonoides)
The method according to claim 1, which is a microorganism belonging to the species Megachillensis. 【請求項３】 トリコスポロノイデス（Trichosporonoi
des）属に属する微生物が、トリコスポロノイデス エ
ドセファリス（Trichosporonoides oedocephalis）およ
び／またはトリコスポロノイデス メガチリエンシス
（Trichosporonoides megachillensis）の種に属する微
生物であることを特徴とする請求項１に記載の製造方
法。3. Trichosporonoi
microorganisms belonging to des) genus, manufactured according to claim 1, characterized in that a microorganism belonging to the species of Trichosporonoides Edosefarisu (Trichosporonoides oedocephalis) and / or Trichosporonoides megachiliensis (Trichosporonoides megachillensis) Method. 【請求項４】 トリコスポロノイデス（Trichosporonoi
des）属に属する微生物が、トリコスポロノイデス マ
ディダ（Trichosporonoides madida） ＣＢＳ２４０．
７９、トリコスポロノイデス ニグレスセンス（Tricho
sporonoides nigrescens） ＣＢＳ２６８．８１、トリ
コスポロノイデス ニグレスセンス（Trichosporonoide
s nigrescens） ＣＢＳ２６９．８１、トリコスポロノ
イデスエドセファリス（Trichosporonoides oedocephal
is） ＣＢＳ６４９．６６、トリコスポロノイデス エ
ドセファリス（Trichosporonoides oedocephalis） Ｃ
ＢＳ５６８．８５、トリコスポロノイデス メガチリエ
ンシス（Trichosporonoides megachillensis） ＣＢＳ
５６７．８５および／またはそれらの変異株であること
を特徴とする請求項１に記載の製造方法。4. Trichosporonoi
des) microorganism belonging to the genus, Trichosporonoides Ma
Dida (Trichosporonoides madida) CBS240.
79, Trichosporonoides Nigressence (Tricho
sporonoides nigrescens) CBS268.81, bird
Cosporonoides Nigrescense (Trichosporonoide
s nigrescens) CBS 269.81 , Tricosporono
Ides Ed Cephalis (Trichosporonoides oedocephal)
is) CBS 649.66, Tricospolonoides
Docephalis (Trichosporonoides oedocephalis) C
BS568.85, Tricosporonoides Megachilier
Trichosporonoides megachillensis CBS
567.8 5 Contact and / or method according to claim 1, characterized in that their mutants. 【請求項５】 トリコスポロノイデス エドセファリス
（Trichosporonoidesoedocephalis） ＣＢＳ５６８．
８５、トリコスポロノイデス メガチリエンシ ス（Tric
hosporonoides megachillensis） ＣＢＳ５６７．８５
および／またはそれらの変異株である微生物と糖を接触
させ、好気的発酵によりリビトールを産生することを特
徴とするリビトールの製造方法。 5. Trichosporonoides Ed Sepharis
(Trichosporonoidesoedocephalis) CBS568.
85, Trichosporonoides Megachirienshi scan (Tric
hosporonoides megachillensis) CBS567.85
And / or contacting the sugar with a microorganism that is a mutant thereof
And produce ribitol by aerobic fermentation.
A method for producing ribitol to collect. 【請求項６】 トリコスポロノイデス（Trichosporonoi
des）属に属する微生物が、Ｎ-メチル-Ｎ'-ニトロ-Ｎ-
ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）処理および紫外線照射に
より得られた変異株であることを特徴とする請求項１に
記載の製造方法。6. Trichosporonoi
a microorganism belonging to the genus des) is N-methyl-N'-nitro-N-
The method according to claim 1, which is a mutant strain obtained by nitrosoguanidine (NTG) treatment and ultraviolet irradiation. 【請求項７】 糖がグルコースであることを特徴とする
請求項１〜６のいずれかに記載の製造方法。7. The manufacturing method according to claim 1, wherein the sugar is glucose.